首页 > 文献资料
-
T-7-RGD肽对人非小细胞肺癌(A549)和人脐静脉内皮细胞(ECV304)的影响
目的:研究改造后肿瘤抑素7肽(T-7-RGD肽)对人非小细胞肺癌(A549)和人脐静脉内皮细胞(ECV304)活性的影响.方法:采用生物合成技术合成了T-7-RGD肽,高效液相和质谱分析显示纯度为98.67％;通过MTT法、生长曲线法、HE染色等实验初步观察T-7-RGD肤对人非小细胞肺癌(A549)和人脐静脉内皮细胞(ECV304)增殖抑制作用和形态影响.结果:由MTT实验和生长曲线实验得出,人非小细胞肺癌细胞A549和人脐静脉内皮细胞ECV304半数抑制率IC50分别为150.34μg/ml和420.81 μg/ml,且呈剂量、时间依赖牲.T-7-RGD肽对A549作用明显,改变了其生长曲线的基本走势,而对人脐静脉内皮细胞只是产生了数量上的改变,生长曲线基本走势没有改变.HE染色后人非小细胞肺癌A549实验组与对照组相比形态学发生了明显的变化,而人脐静脉内皮细胞ECV304变化不明显.结论:T-7-RGD肤可抑制人非小细胞肺癌细胞A549生长,促进其凋亡,而对内皮细胞的作用不明显.
-
细菌双杂交系统筛选与tumstatin45-132相互作用蛋白质
目的 筛选与新生血管抑制剂肿瘤抑素功能性片段tumstatin45-132相互作用的蛋白质分子.方法 构建诱饵蛋白载体pBT-tumstatin45-132,通过细菌双杂交系统筛选人肝细胞cDNA文库;克隆表达MBP-tumstatin45-132及候选蛋白His-MMP-2,利用MBP pull-down assay和蛋白质印迹方法验证pBT-tumstatin45-132与候选蛋白MMP-2间的相互作用.结果 pBT-tumstatin45-132无自身转录激活活性,筛选人肝细胞cDNA文库,获得25个双阳性克隆,序列分析和同源检索表明所获其中之一候选蛋白为基质金属蛋白酶MMP-2;MBP pull-down assay和蛋白质印迹方法验证了pBT-tumstatin45-132与候选蛋白MMP-2间确实存在相互作用.结论 这些结果为进一步研究tumstatin45-132新的功能和机制创造了条件.
-
肿瘤抑素影响血管瘤内皮细胞凋亡的相关机制分析
目的 研究肿瘤抑素对血管瘤内皮细胞的增殖与凋亡过程的调节作用,为临床婴幼儿血管瘤的治疗提供参考.方法 血管瘤内皮细胞培养后随机分为5组:对照组、PD98059组、肿瘤抑制素低剂量、中剂量和高剂量组.除对照组给予生理盐水外,其余各组给予PD98059(10 μM)处理2h,肿瘤抑制素低剂量、中剂量和高剂量组分别给予1 μM、10 μM、100 μM的肿瘤抑制素处理2h.免疫印迹法或荧光定量法分析各组细胞凋亡相关蛋白Caspase3/9、ERK信号通路关键蛋白ERK1/2和MEK及氧化应激蛋白NOX4的表达,DHE染色法分析各组细胞的氧化应激状态.结果 与对照组相比,PD98059组血管瘤内皮细胞内ROS水平明显降低、细胞凋亡蛋白Caspase3/9的表达明显升高;同时ERK信号通路关键蛋白的表达明显增强,而肿瘤抑制素低剂量、中剂量和高剂量组作用与PD98059作用一致,且具有剂量依从性.结论 肿瘤抑制素通过激活氧化应激状态、ERK信号及抑制细胞凋亡蛋白通过发挥对血管瘤内皮细胞增殖的抑制作用.
-
重组肿瘤抑素血管生成抑制相关肽对裸鼠移植性卵巢癌的抑制作用
目的 观察肿瘤抑素改造后所得血管生成抑制相关肽(21肽)的抗血管生成活性及对裸鼠移植卵巢癌的抑制作用.方法 用亲和层析法纯化21肽.观察接种SKOV3细胞系的裸鼠经21肽治疗后的肿瘤生长情况,检测21肽对肿瘤组织的微血管密度和免疫组织化学指标的影响.结果 经21 d的治疗后,21肽组平均抑瘤率可达53.17%.21肽组肿瘤组织微血管密度(CD34表达)为6.324±1.643,与对照组(16.127±2.535)比较明显降低(P＜0.05).21肽组肿瘤组织的增殖细胞核抗原(PCNA)、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)呈低表达(P＜0.01),而基质金属蛋白酶抑制因子2(TIMP-2)呈高表达(P＜0.01).结论 21肽具有显著的抗血管生成活性,对卵巢癌具有较好的抑制作用,其抑制卵巢癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关.
-
人类端粒酶反转录酶-肿瘤抑素联合人类端粒酶反转录酶-胸苷激酶/丙氧鸟苷系统对肝癌HepG2细胞的作用
目的 观察人类端粒酶反转录酶-胸苷激酶/丙氧鸟苷(phTERT-TK/GCV)联合人类端粒酶反转录酶-肿瘤抑素(phTERT-tumstatin)对肝癌细胞HepG2凋亡以及肝癌相关基因甲胎蛋白(AFP)、RhoC的mRNA及蛋白表达情况的影响.方法 细胞分为未转染组、转染空质粒hTERT-EGFP组(空质粒组)、转染phTERT-tumstatin组(TM组)、转染phTERT-TK后加50 μg/ml GCV组(TK/GCV组)、共转染phTERT-tumstatin和phTERT-TK后加50μg/ml GCV组(MK组).荧光显微镜观察转染肝癌细胞HepG2和肝细胞L-02中EGFP与MCHERRY的表达;采用实时荧光定量PCR与Western blot检测各组AFP与RhoC在mRNA及蛋白水平表达的变化,流式细胞术检测各组转染后HepG2凋亡状况.结果 phTERT-tumstatin、phTERT-TK/GCV转染后两基因在肝癌细胞HepG2特异性表达;TK/GCV组、TM组及MK组AFPmRNA相对表达量分别为0.76±0.09、0.62±0.09、0.49±0.07,RhoC mRNA相对表达量分别为0.80±0.04、0.40±0.02、0.54±0.03,与空质粒组(0.94±0.04、0.94±0.02)比较差异均有统计学意义(P＜0.05),且MK组较TK/GCV组、TM组AFP、RhoC mRNA相对表达差别显著.TK/GCV组、TM组、MK组、空质粒组和未转染组的AFP蛋白相对表达水平分别为0.97±0.02、0.83±0.02、0.69±0.01、1.19±0.03、1.15±0.05,RhoC蛋白相对表达水平分别为1.17±0.01、0.99±0.02、0.77±0.02、1.32±0.05、1.29±0.30(均P＜ 0.01).phTERT-tumstatin、phTERT-TK/GCV共同转染HepG2细胞的凋亡率较二者单独转染组显著升高,二者单独及共转染组凋亡率较转染空质粒组及未转染组差异有统计学意义(P＜0.01).结论 phTERT-TK/GCV及phTERT-tumstatin对肝癌细胞HepG2有显著促凋亡的作用,二者联合作用更强.
关键词： 单纯疱疹病毒胸苷激酶 肿瘤抑素 肝肿瘤 hTERT启动子 -
肿瘤抑素7肽对小鼠黑色素瘤细胞B16生长和凋亡的影响
目的 研究肿瘤抑素7肽(CNYYSNS)对小鼠黑色素瘤细胞B16增殖和凋亡活性的影响.方法 四甲基偶氮唑蓝法、生长曲线法观察7肽对小鼠黑色素瘤B16细胞增殖抑制作用;TUNEL法、HE染色和透射电镜观察7肽对小鼠黑色素瘤细胞B16形态影响,并以人脐静脉内皮细胞(ECV304)为对照细胞,观察7肽对非肿瘤细胞增殖的抑制作用.结果 7肽可显著抑制小鼠黑色素瘤细胞B16增殖,且呈剂量、时间依赖性,其半数抑制浓度(IC50)为8.53×10-5 mol·L-1;TUNEL法测定细胞凋亡率为68.45％;电镜观察证实实验组可见明显凋亡细胞,核仁固缩.而7肽对人脐静脉内皮细胞ECV304作用较弱,IC50为5.78×10-4 mol·L-1,细胞形态变化不明显.结论 肿瘤抑素7肽可抑制小鼠黑色素瘤B16细胞生长,促进其凋亡,对黑色素瘤的治疗具有潜在价值,而对增殖速度较快的内皮细胞影响较小,说明7肽对肿瘤的抑制作用具有一定特异性.
-
人Tumstatin功能区基因原核表达载体的构建
[目的]构建人肿瘤抑素(Tumstatin)功能区Tum-5原核融合表达载体pET42a-Tum5.[方法]根据人Tumstatin基因序列以及大肠杆菌密码子的偏爱性设计合成多个寡核苷酸,经PCR拼接获得Tum-5基因;酶切目的基因与pET42a载体,回收纯化后做定向克隆连接,转化E.coli DH5α;重组质粒通过PCR、Bgl Ⅱ与Xho Ⅰ的双酶切、DNA测序加以鉴定.[结果]重组质粒PCR扩增出的产物与目的基因大小相同;重组质粒双酶切电泳分析,插入片段大小约320 bp,与预期结果一致;对连接点两端进行测序,结果显示接头两端序列连接正确,插入序列与载体读码框架相匹配.[结论]成功构建人Tum-5基因表达载体,该研究为抗血管药物治疗实体瘤奠定了基础.
-
一种新型抗乳腺癌双重靶向性融合蛋白的诱导表达和纯化
目的：将已构建好的新型抗乳腺癌双重靶向性融合蛋白Del1-9-G129R-T3的原核表达载体转化入原核表达宿主，诱导融合蛋白的表达，对之进行鉴定后进行分离纯化。方法：将融合蛋白重组表达质粒pET22b-Del1-9-G129R-T3转化入大肠杆菌BL21（DE3），IPTG诱导融合蛋白表达，收集菌体进行超声破碎，高速离心分离沉淀和上清。通过SDS-PAGE和Western blot对目的蛋白的表达进行检测和鉴定，利用亲和层析纯化融合蛋白。结果：SDS-PAGE结果显示，在诱导表达菌超声破碎后的沉淀物中出现一与预期分子量约24.7 kD大小相吻合的新蛋白区带，表明融合蛋白可能主要存在于细胞质中，形成不溶性包涵体。Western blot分析显示，蛋白在预期分子量处出现印迹。结论：融合蛋白Del1-9-G129R-T3已经在大肠杆菌中高效表达，为下一步融合蛋白的功能研究奠定基础。
-
肿瘤抑素抗血管活性相关肽对宫颈癌Hela细胞生长和转移抑制作用的实验研究
目的 研究改造后的血管生成抑制相关肽(21肽)抗血管生成活性及对人宫颈癌Hela细胞皮下移植裸鼠模型的抑制作用,探讨其抑瘤作用机制.方法 2005年8月至2006年2月哈尔滨医科大学第一临床医学院进行Hela细胞株皮下接种裸鼠造模,21肽治疗3周后,处死动物剥离肿瘤,称重并计算抑瘤率.免疫组化方法检测21肽对肿瘤组织的微血管密度(MVD)、增殖细胞核抗原(PCNA)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响.结果 21肽组平均抑瘤率可达51.89%,肿瘤组织微血管密度明显降低,与对照组比较差异有统计学意义(P《0.05);21肽组肿瘤组织的PCNA、VEGF呈低表达,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 21肽具有显著的抗血管生成活性,可明显地抑制裸鼠宫颈癌细胞的生长,其抑制宫颈癌的作用机制可能与其降低新生血管形成和调解血管生成相关因子的表达有关.
-
rAV-Tumstatin病毒载体对裸鼠膀胱移植癌治疗作用的初探
目的:探讨重组腺病毒携带肿瘤抑素(rAV-Tumstatin)对裸鼠膀胱移植癌的治疗效果.方法:构建裸鼠膀胱移植癌模型,随机分为治疗组和对照组,记录肿瘤重量和体积,流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞周期和凋亡.结果:裸鼠膀胱移植癌模型构建成功,rAV-Tumstatin病毒载体治疗组移植性膀胱癌生长受到明显抑制,肿瘤重量和体积明显小于对照组(P＜0.01),FCM检测治疗组肿瘤细胞G1-S期进程受阻,增殖率下降,凋亡率上升,与对照组相比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论:携带rAV-Tumstatin载体通过抑制肿瘤细胞增殖和诱导其凋亡,发挥对裸鼠移植性膀胱癌的治疗作用.
-
新的肿瘤抑素对C6脑神经胶质瘤体外实验研究
神经胶质瘤是颅内常见的原发肿瘤，呈浸润性生长，且术后复发率高，严重威胁患者的生命健康。目前神经胶质瘤的发病机制尚未十分清楚，据文献报道，神经胶质瘤的发生、发展与细胞凋亡密切相关［1-3］。其传统的治疗原则是术后先放疗后化疗，或单独放疗／化疗，但都难以提高其临床疗效［4］，治愈率仍较低。近年来，研究者们通过大量的基础研究正在寻求治疗脑神经胶质瘤的新策略。目前国内外已研究出的抗肿瘤药物众多，但多数价格昂贵且不良反应大，同时也存在耐药性问题，使其临床应用受到一定限制［5-7］。为此，寻找高效、低毒、价廉的新的治疗药物成为近年来研究的热点。本实验旨在研究一种新的肿瘤抑素对 C6脑神经胶质瘤细胞作用的影响，并通过检测神经胶质瘤细胞侵袭及细胞周期蛋白 D1表达变化，初步探讨其抑制神经胶质瘤细胞的可能作用机制，为进一步研究新的肿瘤抑素在临床上治疗神经胶质瘤提供了新的理论依据。
-
4T42肽腺病毒载体的构建包装及抗SKBR3乳腺癌细胞的效果
目的 构建携带有肿瘤抑素相关T42肽(以下简称T42肽)基因的重组腺病毒载体,并转染HEK293细胞中进行病毒包装,终感染SKBR3乳腺癌细胞,体外四倍体T42肽(4T42)抗SKBR3乳腺癌细胞的效果.方法 利用同尾酶连接技术将T42肽进行两次克隆形成4T42,并将其亚克隆至穿梭质粒pEC3.1(+)-EGFP中,获得重组质粒pEC3.1(+)-EGFP-4T42.体外重组至骨架载体pAd/BLOCK-iTTM-Dest (pAd-BL-Dest),获得重组质粒pAd-EGFP-4T42.将该重组骨架质粒转染HEK293细胞,利用RT-PCR方法和荧光显微镜观察标志蛋白-绿色荧光蛋白的表达情况以判断T42转染成功与否.利用病毒倍比稀释法利用荧光显微镜检测病毒滴度,用重组腺病毒感染SKBR3乳腺癌细胞.采用流式细胞仪检测感染重组腺病毒的SKBR3胞凋亡率,MTT实验检测感染重组腺病毒的MCF细胞的生长情况.结果 重组腺病毒载体经酶切鉴定证明构建正确,重组腺病毒获得成功包装,纯化的病毒滴度为4* 108 DRP/ml.重组腺病毒rAd-EGFP-4T42感染MCF细胞后较对照组未转染空白组细胞凋亡率高(P＜0.05)；Ad-EGFP-4T42质粒转染组与对照组相比,明显抑制MCF细胞生长(P＜0.05).结论 体外4T42肽具有显著促进SKBR3乳腺癌细胞凋亡和抑制SKBR3乳腺癌细胞生长的作用.
-
微小RNA-21和肿瘤抑素与膀胱肿瘤的关系
微小RNA(miRNA) 是一种普遍存在的内源性单链小分子非编码蛋白质的RNA,长度约为21～25个核苷酸,可特异性识别靶mRNA的3'-非翻译区(3'-UTR)并与之结合,引起靶mRNA的降解或翻译抑制,从而负调控基因表达~([1]),并调节许多重要的细胞活动,与个体发育、干细胞分化和疾病发生密切相关.
-
rAV-Tumstatin病毒载体构建及其生物活性检测
目的: 探讨腺病毒携带肿瘤抑素(rAV-Tumstatin)对人膀胱癌T24细胞株的影响与作用,为进一步研究其作用机制提供实验依据.方法: 构建rAV-Tumstatin并感染人膀胱癌T24细胞株,将细胞分为rAV-Tumstatin组、rAV-MCS空病毒组和空白对照组,采用噻唑蓝(MTT)比色法和原位末端标记(TUNEL)法分别检测感染细胞的增殖和凋亡情况.结果: rAV-Tumstatin既可以稳定感染T24细胞也可以在该细胞内表达携带的外源基因EGFP.TUNEL法检测,rAV-Tumstatin组细胞凋亡率为32.9%,rAV-MCS空病毒组和空白对照组分别为13.5%和6.7%,3组间比较差异均有显著性(P<0.01).MTT比色法检测T24细胞株的增殖生长能力, rAV-Tumstatin组G0/G1期60.3%,S期17.4%,G2/M期21.5%;空病毒组G0/G1期45.2%,S期29.5%,G2/M期24.8%;对照组G0/G1期43.7%,S期32.8%,G2/M期23.7%.3组间各细胞周期细胞增殖率比较差异有显著性(P<0.05).结论: rAV-Tumstatin能抑制膀胱癌T24细胞株增殖并诱导其凋亡,对膀胱癌基因治疗的研究具有一定的价值.
-
Tum-5基因对肝细胞癌生长的抑制作用和对血管生成的影响
目的:探讨肿瘤抑素5 (Tum-5)基因对肝细胞癌的抑制作用及对血管生成的影响,阐明其参与抗肿瘤生成的作用机制.方法:体外实验选择人肝癌HepG-2细胞,采用不同感染复数(MOI)(0、1、5、10、25和50)的pLXSN和pLXSN-Tum-5病毒颗粒感染72 h,MTT法检测各组细胞增殖率.体内构建肝癌H22荷瘤小鼠模型,分为saline组、pLXSN组和pLXSN-Tum-5组,每组5只.saline组小鼠瘤内注射生理盐水,pLXSN组和pLXSN-Tum-5组小鼠瘤内分别注射相应的病毒颗粒(MOI=5),隔日注射,共注射5次.测定各组小鼠移植瘤体积、质量和小鼠体质量,免疫组织化学法检测CD31蛋白在各组小鼠移植瘤组织中的表达,计算微血管密度(MVD).结果:与pLXSN组比较,不同MOI pLXSN-Tum-5组的细胞增殖率差异无统计学意义(P＞0.05);荷瘤鼠瘤内注射结束后,pLXSN-Tum-5组小鼠移植瘤体积和质量均明显小于pLXSN组和saline组(P＜0.05或P＜0.01);免疫组织化学检测,各组小鼠移植瘤内均有形态不规则的新生血管生成,与saline组和pLXSN组比较,pLXSN-Tum-5组小鼠移植瘤组织MVD平均值明显降低(P＜0.05).结论:Tum-5可通过抑制肝癌组织内新生血管的生成发挥抑瘤作用.
-
人肿瘤抑素相关T21RGD肽的表达与纯化
目的 构建引入RGD序列人肿瘤抑素相关21肽(T21RGD)-内含肽-几丁质结合蛋白融合表达载体,实现目的肽的几丁质珠亲和层析一步纯化.方法 人工设计合成T21RGD肽基因,经重组定向克隆插入到原核表达载体pTYB2,酶切和测序鉴定正确后转化入大肠杆菌B121(DE3),IPTG诱导其融合表达,对表达蛋白进行几丁质珠亲和层析,DTT诱导柱上裂解以获得T21RGD肽.经Trcine-SDS-PAGE和反相高效液相色谱(RP-HPLC)对纯化产物进行鉴定.结果 质粒酶切和测序结果显示,含T21RGD肽基因按正确方向和序列插入质粒,融合蛋白表达量达菌体蛋白总量的50%以上,Trcine-SDS-PAGE显示了T21RGD肽目的条带与预期相符,反相高效液相色谱测定峰纯度达97%.结论 成功构建T21RGD肽融合表达载体,实现了融合蛋白在大肠杆菌中高效表达和T21RGD肽几丁质珠亲和层析一步纯化,为进一步研究T21RGD肽抗肿瘤活性和作用机制奠定基础.
-
小分子肽-肿瘤抑素19肽纯化及抗肿瘤活性研究
目的:利用已构建好的肿瘤抑素抗肿瘤活性肽-19肽高效表达基因重组菌纯化19肽,并进行抗肿瘤活性检测.方法:经几丁质亲和层析柱纯化出19肽,SDS-PAGE聚丙烯酰胺电泳后用Bradford法测其浓度,进行体内活性检测.结果:19肽可促进H22小鼠肝癌细胞死亡,血管数量减少,抑瘤率达48.46%.结论:得到了具有抗肿瘤活性的肿瘤抑素相关肽-19肽,为肿瘤抑素的作用机制研究和肿瘤的临床治疗奠定了基础.
-
肿瘤抑素的应用及研究进展
肿瘤的生长需要新生血管来为其提供充足的营养物质和氧气，因此通过抑制血管的生成能够抑制肿瘤的生长。在所有来源于Ⅳ型胶原的内源性血管生成抑制剂中，肿瘤抑素的研究广泛。肿瘤抑素具有抑制血管内皮细胞增殖、诱导内皮细胞凋亡、直接抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡等多种功能。本文就肿瘤抑素的研究现状进行综述。
-
肿瘤抑素活性肽-YSNSG环肽研究新进展
肿瘤抑素作为肺-肾出血综合征的抗原,被发现具有抗肿瘤血管生成的作用.但是,由于它的抗原特性,短期应用或长期应用将引发肾小球肾炎和肺出血.因此,不能应用于临床.后经改造确定了T19肽(C端的185～203位氨基酸),具有促进肿瘤细胞凋亡、抑制内皮细胞增长的作用,但是以凋亡作用为主;T21肽(75～95位氨基酸)具有抑制内皮细胞增殖的作用.
关键词： 肿瘤抑素 活性肽-YSNSG环肽 进展 -
hTERT启动子驱动的肿瘤抑素靶向肝癌细胞表达及其抗血管形成的作用
目的:观察人端粒酶逆转录酶基因(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)启动子驱动的肿瘤抑素(tamstatin)基因在肝癌细胞HepG2内特异性表达及其体外抗血管形成的作用.方法:构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin(阳性对照)、phTERT-EGFP(阴性对照)质粒,脂质体介导转染HepG2肝癌细胞、L-02正常肝细胞,荧光显微镜检测EGFP的表达.Western blotting检测tumstatin在HepG2细胞内的表达,MTS法检测稳定转染后HepG2细胞的增殖以及含或不含tumstatin蛋白的条件培养基对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cell,HUVEC)增殖的影响.通过计数管样分支数检测tumstatin蛋白对HUVEC管道结构形成的影响.结果:成功构建phTERT-tumstatin、pCMV-tumstatin和phTERT-EGFP质粒,质粒转染后tumstatin基因在肝癌细胞HepG2中特异地表达,在正常肝细胞L-02中无表达.phTERT-tumstatin和phTERT-EGFP转染均不影响HepG2细胞的增殖.含tumstatin蛋白的条件培养基CM-T抑制HUVEC的增殖[抑制率为(56.49±0.33)%];CM-T与不含tumstatin蛋白的条件培养基CM-N、CM-NT相比显著抑制了HUVEC血管结构的形成[(3.33±1.53)%vs(24.44±3.11)%、(23.94±2.92)%,P＜0.01)].结论:phTERT基因启动子可驱动tumstatin靶向表达于肝癌细胞,并抑制HUVEC血管管道结构形成.
