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人Tumstatin功能区基因原核表达载体的构建

王瑞珉;王玮;史娜;谢红;陈立军

摘要: [目的]构建人肿瘤抑素(Tumstatin)功能区Tum-5原核融合表达载体pET42a-Tum5.[方法]根据人Tumstatin基因序列以及大肠杆菌密码子的偏爱性设计合成多个寡核苷酸,经PCR拼接获得Tum-5基因;酶切目的基因与pET42a载体,回收纯化后做定向克隆连接,转化E.coli DH5α;重组质粒通过PCR、Bgl Ⅱ与Xho Ⅰ的双酶切、DNA测序加以鉴定.[结果]重组质粒PCR扩增出的产物与目的基因大小相同;重组质粒双酶切电泳分析,插入片段大小约320 bp,与预期结果一致;对连接点两端进行测序,结果显示接头两端序列连接正确,插入序列与载体读码框架相匹配.[结论]成功构建人Tum-5基因表达载体,该研究为抗血管药物治疗实体瘤奠定了基础.

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