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健脾消癌方抑制结肠癌增殖的作用机制
目的:观察健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21),第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)表达的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制.方法:10％,15％,20％健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞后,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测miR-21,PTEN mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN蛋白的表达水平.结果:与空白组比较,健脾消癌方低剂量组miR-21 mRNA相对表达量降低,PTEN mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;健脾消癌方中剂量组miR-21mRNA相对表达明显降低,PTEN mRNA相对表达明显升高(P＜0.05);健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量显著降低,PTEN mRNA相对表达量显著升高(P＜0.01);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量明显降低,PTEN mRNA相对表达量明显升高(P＜0.05).与空白组比较,健脾消癌方中、低剂量组PTEN蛋白相对表达量升高,差异无统计学意义;与空白组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显上升(P＜0.05);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显升高(P＜0.05).结论:健脾消癌方可能通过降低miR-21的表达,上调miR-21靶基因PTEN蛋白表达抑制结肠癌的增殖.
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靶向抑制微小RNA-21提高白血病细胞对三氧化二砷的敏感性研究
目的 探讨以微小RNA-21(microRNA-21,miRNA-21)为靶标的反义核酸(AMO-miR-21)提高白血病K562细胞对三氧化二砷(As_2O_3)的敏感性及可能的作用机制.方法 利用LipofectamineTM 2000将化学合成的反义核酸转染K562细胞.MTT法检测单独使用AMO-miR-21、As_2O_3以及两者联合使用对细胞增殖的抑制作用,并计算抑制率和IC_(50);PI单染检测细胞周期及凋亡;实时定量PCR检测miRNA-21表达水平的改变;免疫荧光法检测miRNA-21候选靶基因PDCD_4蛋白表达的改变.结果 AMO-miR-21与As_2O_3联合使用后,IC_(50)从2.10 μmol/L降低到1.23 μmol/L,敏感性提高到单用As_2O_3的1.78倍;AMO-miR-21联合As_2O_3组细胞凋亡明显增加(P<0.05);单独转染AMO-miR-21可显著抑制K562细胞中miRNA-21的表达水平(P<0.01),同时抑癌基因PDCD_4蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 AMO-miR-21与As_2O_3联合使用可提高K562细胞对As_2O_3的敏感性,为白血病的治疗提供了新的方法.AMO-miR-21通过靶向抑制miRNA-21,进而上调抑癌基因PDCD_4的表达而发挥抗肿瘤作用.
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microRNA-21在食管鳞癌患者血清中的表达及临床意义
目的 探讨血清microRNA-21在食管鳞癌患者及正常人群中的表达差异,分析血清microRNA-21的表达与食管鳞癌患者临床病理特征的关系.方法 前瞻性研究,入组首都医科大学附属北京友谊医院及中国医学科学院肿瘤医院收治的50例食管鳞癌患者及50例年龄性别匹配的正常人群,用Trizol试剂提取血清总RNA,用茎环引物将microRNA-21及microRNA-16(内参基因)分别逆转录成相应cDNA,用SYBR Green荧光定量PCR对cDNA进行扩增、检测.比较microRNA-21在食管鳞癌患者及正常人群血清中的表达;观察microRNA-21的相对表达量表达与临床病理特征的关系;分析血清microRNA-21相对表达量对食管鳞癌的诊断价值.结果 食管鳞癌患者血清microRNA-21相对表达量(5.60 ± 4.41)明显高于正常人群(2.12 ± 1.53),差异具有统计学意义(t =5.166,P ＜0.001).microRNA-21的表达与患者性别、年龄、分化程度以及淋巴结转移无关(t =0.110,-0.978,-1.246,1.780,P ＞0.05),与肿瘤T分期及远处转移明显相关(t = -2.226,3.275,P =0.031,0.007).以血清microRNA-21相对表达量为2.5507为临界值,其诊断食管鳞癌的敏感度和特异度分别为78%和76% .结论 microRNA-21在食管鳞癌患者血清中的表达高于正常人群,检测microRNA-21在患者血清中的表达情况可能作为食管鳞癌诊断的一项新的标志物.
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远端肢体缺血预适应对冠心病患者血浆miRNA-21的影响和意义
目的 探讨远端肢体缺血预适应对冠心病患者血浆微小RNA-21(miRNA-21)的影响,进一步阐述缺血预适应的作用机制和临床应用价值. 方法 连续选择2015年6月至2017年2月在粤北人民医院心内科住院的冠心病心绞痛患者共165例作为研究对象,均行择期经皮冠状动脉介入治疗(PCI),采用随机数字表法分为试验组85例和对照组80例.试验组患者在入院后第2、3和4天的每天上、下午分别进行一轮无创肢体缺血预适应治疗,然后在第5天进行冠状动脉支架置入术;对照组则直接在入院后第5天进行冠状动脉支架置入术.所有患者于入院后第2和5天早晨空腹抽血,检测血浆miRNA-21水平.同时在手术当天早晨及术后12 h抽血检测高敏肌钙蛋白T(hs-cTnT),以观察手术对其影响.记录手术情况、常规实验室检查结果及6个月内所有不良心血管事件(MACE),并对两组结果进行统计分析. 结果 (1)试验组与对照组入院后第2天的血浆miRNA-21水平比较差异无统计学意义(50.82±9.15比51.10±9.56,P＞0.05),而第5天的血浆miRNA-21水平比较差异有统计学意义(86.25±12.24比60.52±10.29,t=3.216,P＜0.01);试验组第5天的血浆miRNA-21水平较第2天明显上升(=4.113,P＜0.01),而对照组第5天的血浆miRNA-21水平较前无明显变化.(2)试验组PCI术后12 h的hs-cTnT的变化值明显低于对照组水平[(25.27±21.88)pg/ml比(38.79±32.46) pg/ml,=2.162,P=0.01],此外试验组术中TIMI 3级血流发生率较对照组高(92.9％比85.0％,P=0.04).(3)试验组共有6例患者在半年内出现MACE,而对照组有9例,差异无统计学意义,但所有出现MACE的患者基线血浆miRNA-21水平明显低于未出现MACE的患者(46.73±10.03比52.12±11.26,t=1.624,P=0.04).(4)多因素logistic回归分析危险因素对预后的影响,发现基线miRNA-21、左心室射血分数、心功能NYHA分级、冠状动脉病变支数是冠心病患者PCI术后6个月内MACE的独立危险因素. 结论 远端肢体缺血预适应能上调冠心病患者的血浆miRNA-21水平,减轻冠状动脉再灌注损伤程度,而且血浆miRNA-21水平可能是评估冠心病患者预后的重要标志物.
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微小RNA-21在小鼠慢性病毒性心肌炎心肌纤维化中的作用
目的 研究微小RNA-21(miR-21)对小鼠慢性病毒性心肌炎(CVMC)心肌纤维化的影响及其可能机制.方法 雄性4周龄Balb/c小鼠40只按照随机数字表法分为磷酸盐缓冲液(PBS)组、CVMC组、CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组,每组各10只.首次注射柯萨奇B3病毒(CVB3)液或PBS定为第0天,研究总时间为42 d.CVMC组、CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组的小鼠均于第0、14和28天经腹腔注射100TCID50的CVB3液0.1、0.15和0.2 ml/只,同时点PBS组小鼠注射相同剂量的PBS.CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组小鼠在第14和28天注射病毒液后分别经尾静脉注射miR-21抑制剂0.1 ml/只或同型对照0.1 ml/只.42 d后行超声心动图检查评估小鼠心功能,然后无菌留取小鼠心脏,观察心肌绿色荧光蛋白(GFP)的表达,同时行苏木素伊红及Masson染色观察心肌病理学特征,并计算心肌病理积分(PS)及胶原容积积分(CVF),实时荧光定量逆转录聚合酶链反应测定小鼠心肌中miR-21、Ⅰ型胶原(COL1-A1)及Ⅲ型胶原(COL3-A1)mRNA的表达,Western blot法测定心肌中转化生长因子-β1(TGF-β1)和母亲DPP同源物7(Smad7)蛋白的表达.结果 (1)超声心动图检查结果:CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)均明显高于PBS组(P均<0.05),左心室射血分数(LVEF)明显低于PBS组(P<0.05).CVMC+miR-21抑制剂组小鼠LVESD、LVEDD均低于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05),LVEF明显高于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05).(2)心肌病理学检测结果:CVMC+miR-21抑制剂组和CVMC+同型对照组小鼠心肌切片在荧光显微镜下可见GFP表达.CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心脏肿大僵硬,镜下可见心肌散在坏死灶,周围少量炎性细胞浸润,间质成纤维细胞增生明显,胶原纤维堆积.CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心肌PS分别为(1.14±0.69)和(1.00±0.63)分,CVF分别为(17.86±2.61)%和(16.78±2.58)%,均明显高于PBS组[PS为0分,CVF为(5.70±1.42)%,P均<0.05].CVMC+miR-21抑制剂组小鼠心肌周围少量炎性细胞浸润,间质纤维化的程度较轻,CVF为(11.01±2.55)%,明显低于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05),PS为(0.89±0.60)分,虽低于CVMC组和CVMC+同型对照组,但差异无统计学意义(P均>0.05).(3)心肌组织miR-21、COL1-A1和COL3-A1 mRNA的表达量:CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心肌组织中miR-21、COL1-A1和COL3-A1 mRNA的表达量均明显高于PBS组(P均<0.05),而CVMC+miR-21抑制剂组小鼠心肌中上述因子的mRNA表达量则均明显低于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05).(4)心肌组织TGF-β1和Smad7蛋白的表达量:CVMC组和CVMC+同型对照组小鼠心肌中TGF-β1蛋白表达量均明显高于PBS组,而Smad7蛋白表达量则均明显低于PBS组(P均<0.05).CVMC+miR-21抑制剂组小鼠心肌中TGF-β1蛋白表达量明显低于CVMC组和CVMC+同型对照组,而Smad7蛋白表达量则明显高于CVMC组和CVMC+同型对照组(P均<0.05).结论 miR-21可促进CVMC小鼠心肌纤维化,这一作用可能是通过TGF-β1/Smad7信号通路介导的.
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microRNA-21对体外培养血管平滑肌细胞迁移能力的调控
目的 探讨调控体外培养大鼠血管平滑肌中微小RNA-21(microRNA-21,miRNA-21)的表达水平对该类细胞迁移和侵袭能力的影响.方法 0.1%Ⅱ型胶原酶消化分离血管平滑肌细胞并进行培养.用免疫组化染色法检测细胞胞浆内α-肌动蛋白的表达.试验分为6组:空白对照组(加DEPC水)、单纯转染试剂组(仅加lipofeetaminenTM2000)、阴性对照组(转染阴性对照序列)、上调miRNA-21组(转染miRNA-21拟似物)、下调miRNA-21组(转染miRNA-21阻遏物)、无关序列组(转染无关序列).利用lipofeetaminenTM2000将miRNA-21转染到培养的血管平滑肌细胞中,采用real-time PCR分别检测各组细胞miRNA-21的表达水平.采用细胞划痕实验分别检测各组细胞体外迁移能力的变化和transwell侵袭小室模型分别检测各组细胞侵袭能力的变化.结果 原代血管平滑肌细胞在相差显微镜下呈现‘谷和峰'的生长特点,胞浆内α-肌动蛋白染色阳性的细胞数占总细胞数的98%以上.与对照组相比,上调miRNA-21组的血管平滑肌细胞体外迁移和侵袭能力明显增强(P<0.05),下调miRNA-21组的血管平滑肌细胞体外迁移和侵袭能力明显降低(P<0.05).结论 miRNA-21可以促进血管平滑肌细胞迁移和侵袭.
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慢病毒介导的microRNA-21-siRNA对肝癌细胞系HepG2生物学行为的影响
目的 通过构建慢病毒介导( lentivirus,LV)的microRNA-21-siRNA,探讨下调microRNA-21对肝癌细胞系HepG2生物学行为的影响.方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体pGCSIL-GFP,将重组microRNA-21-RNAi-LV转染肝细胞癌HepG2.体外设为干扰组(microRNA-21 -siRNA,SI组)、阴性对照组(negative control,NC组)和正常组(normal,N组)；分别采用聚合酶链反应方法检测microRNA-21目的基因的表达的情况；用噻唑蓝比色法检测增殖情况、transwell小室迁移实验检测迁移情况、Hochest33258凋亡实验检测凋亡情况.体内实验设为SI组和NC组,观察反义microRNA-21对裸鼠移植瘤生长的影响.结果 (1)micmRNA-21 -RNAi-LV可显著降低microRNA-21的表达.(2) MTT实验96h后SI组增殖能力显著低于NC组和N组(P=0.0031,P＜0.05).(3)迁移能力减弱(P =0.0004,P＜0.05).(4)SI组细胞凋亡明显增加,促凋亡基因caspase3基因表达上调(P =0.0002,P＜0.05).(5)各组裸鼠皮下肿瘤生长比较差异无统计学意义(P=0.0624,P＞0.05).结论 microRNA-21 -siRNA通过抑制microRNA-21的表达抑制细胞增殖,促进细胞凋亡,降低其迁移能力.
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肾癌患者血清微小RNA-21手术前后表达变化及临床意义分析
目的 微小RNA(micro RNA,miRNA)-21在肾癌组织中高表达,充当癌基因,而大量研究发现血清中特异miRNA与相应的癌组织中表达量趋向一致,而血清标本安全易取.本研究旨在验证血清中miR-21在肾透明细胞癌(renalclear cell carcinoma,cRCC)血清中的表达,术后的变化并探讨其临床应用价值.方法 新疆医科大学第一附属医院2013-02-01-2014-07-30收集30例cRCC患者术前血清作为肾癌术前组,平均年龄(52±11)岁.肿瘤直径≤4 cm17例,＞4 cm 13例.Fuhrman分级:Ⅰ～Ⅱ级18例,Ⅲ级12例.对应术后1个月血清作为肾癌术后组.另收集同期该院30例健康体检者血清作为对照组,平均年龄(47±9)岁.利用Real-time PCR技术检测miR-21在肾癌术前组、术后组、对照组血清中的表达量,并分析其临床应用价值.结果 对照组血清中miR-21相对表达量为0.70(0.52～3.60),肾癌术前组表达量为8.34(3.66～17.27),肾癌术后组表达量为0.68(0.47～1.07).与对照组比较,肾癌术前组miR-21表达量显著上调,差异有统计学意义,Z=-4.778,P=0.001;肾癌术后组表达量差异无统计学意义,Z=-1.135,P=0.256.与术前组比较,术后组表达量明显下调,差异有统计学意义,Z=-3.124,P=0.002.依据miR-21在cRCC患者与健康人血清中表达量不同,利用受试者工作特征受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线法分析,曲线下面积(area under the curve,AUC)=0.865 (95％ CI:0.766～0.965,P=0.001),敏感性为77.3％,特异性为96.4％.结论 在cRCC患者血清中miR-21呈现高表达,根据ROC分析结果已达到临床应用价值,是cRCC可选的诊断分子标志物.miR-21在切除肿瘤组织后表达量下降,有望用于疗效评估.
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微小RNA-21对肝癌患者的HepG2细胞增殖的调控作用
目的 研究微小RNA-21(miR-21)在肝癌HepG2细胞中对增殖的作用并探讨相关的机制.方法 收集2012年至2015年本院收治的98例肝癌患者,分离其肝癌组织和癌旁组织,用免疫组化法检测丝裂原激活蛋白激酶激酶3(MAP2K3)的表达情况;肝癌细胞系HepG分为mimic-miR-21组与miR-21抑制药组,分别转染mimic-miR-21与miR-21抑制药.转染48 h后,以3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑法检测在24,48,72 h的HepG2细胞的增殖情况,用实时定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测HepG2细胞中miR-21和MAP2K3 mRNA的表达水平,以免疫印迹法检测MAP2K3的表达水平.结果 MAP2K3在肝癌组织与癌旁组织中的表达强度分别为1382±105,5872±289;HepG2细胞转入mimic-miR-21与miR-21抑制药24 h后,mimic-miR-21组与miR-21抑制药组的miR-21 mRNA表达量分别为6.45±1.21,0.43±0.12.mimic-miR-21与miR-21抑制药组的增殖活性在24,48,72 h分别是(100±12)％,(60±l8)％;(138±12)％,(45±8)％;(146±9)％,(38±6)％,以上指标组间差异均有统计学意义(均P ＜0.05).HepG2细胞转入mimic-miR-21与miR-21抑制药24h后,mimic-miR-21组与miR-21抑制药组的MAP2K3在RNA表达水平分别为0.17±0.03,0.97±0.09,组间比较差异均有统计学意义(均P＜0.05).结论miR-21可通过抑制MAP2K3的表达从而促进肝癌HepG2细胞增殖.
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微小RNA-21对干细胞增殖与分化的调控作用研究进展
微小RNA(miRNA)作为一种新发现的非编码单链小分子RNA,通过转录后调控,参与细胞的各种生命活动.其中的miR-21不仅是重要的癌基因,而且在干细胞的增殖与分化方面也发挥重要的调控作用.过表达miR-21对干细胞增殖与自我更新具有明显的抑制作用.MiR-21可通过靶向调控不同信号通路中的关键分子,影响干细胞的多向分化.MiR-21能促进干细胞向脂肪细胞、成骨细胞、血管内皮细胞、雪旺细胞及胰腺细胞等方向分化.为此本文对miRNA-21对干细胞增殖与分化的影响及机制做一综述.
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微小RNA-21在早期胃癌诊断中的价值评价
目的：探讨外周血微小RNA-21表达水平在早期胃癌诊断中的价值。方法应用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）技术对52例原位癌患者及40例健康对照者的外周血微小RNA-21表达水平进行相对定量检测，采用受试者工作特征（ROC）曲线对外周血微小RNA-21表达水平在早期胃癌中的诊断价值进行评价。结果胃癌患者外周血微小RNA-21表达水平明显高于健康对照者（2.286±0.592比1.318±0.357），差异有统计学意义（U＝136.500，P＝0.000）。ROC曲线分析结果显示，外周血微小RNA-21表达水平诊断胃癌的ROC曲线下面积为0.934（95%CI 0.887～0.982， P＝0.000），佳诊断界点值为1.912，此时外周血微小RNA-21表达水平诊断胃癌的敏感度为86.5%，特异度为95.0%。结论外周血微小RNA-21表达水平对早期胃癌诊断具有重要的价值。
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微小RNA-21在乳腺癌细胞中的作用
目的：探讨微小RNA（miR）-21在乳腺癌细胞（MCF7）中的作用。方法：对MCF7细胞转染miR-21，采用免疫组织化学法检测转染后程序性细胞凋亡4（PDCD4）表达；用噻唑蓝（MTT）比色法测转染miR-21后MCF7细胞增殖；流式细胞术检测转染后MCF7细胞凋亡。结果：经免疫组织化学检测，转染组未见染色，对照组细胞胞质呈棕褐色，转染组PDCD4的表达明显低于对照组，MTT法检测转染组细胞活力增加（P<0.05）。转染组的凋亡率为（3.14±0.24）%，明显低于空白组、空质粒组的（8.04±0.02）%、（9.41±0.53）%，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论：PDCD4是miR-21的靶基因之一，miR-21的高表达可促进乳腺癌的发展。
关键词： 乳腺癌 微小RNA-21 程序性细胞死亡因子4 -
微小RNA-21在胰岛素抵抗和糖尿病伴发非酒精性脂肪肝发病中的作用
目的 应用高脂喂养分别诱导胰岛素抵抗(IR)和糖尿病(DM)伴发非酒精性脂肪肝(NAFLD)小鼠模型,探讨肝脏微小RNA-21 (miR-21)表达改变在NAFLD发病中的作用.方法 实验分3组:对照组、IR组和DM组;记录小鼠体质量,腹腔糖耐量实验确定糖代谢异常,行肝脏病理切片检查,检测空腹血糖、血清胰岛素、血脂、肿瘤坏死因子α含量的变化,检测肝脏miR-21表达和肝脏过氧化物酶体增殖物激活受体亚型(PPAR-γ、PPAR-α)和脂肪型脂肪酸结合蛋白(aP2)基因和蛋白表达改变.结果 IR组体质量、血清胰岛素水平和稳态模型胰岛素抵抗指数较对照组明显上升(P＜0.01,P＜0.05),DM组空腹血糖浓度上升,而血清胰岛素水平明显下降(P＜0.05),其他指标较对照组差异无统计学意义(P＞0.05);IR组血清胰岛素水平较对照组增加而DM组明显降低(P＜0.01,P＜0.05);IR组和DM组葡萄糖曲线下面积较对照组显著增加(P＜0.01).IR组和DM组血清肿瘤坏死因子-α水平呈明显上升趋势(P＜0.05,P＜0.01).IR组和DM组伴随着NAFLD加重,肝脏组织miR-21表达水平进一步下调(P＜0.05),与IR组PPAR-α、aP2和PPAR-γ基因表达上调呈负相关(r值分别为-0.696、-0.664和-0.766,P＜0.05),与DM组PPAR-α和PPAR-γ基因表达上调也呈负相关(r值分别为-0.676和-0.550,P＜0.05);蛋白表达改变仅IR组PPAR-γ和aP2较对照组明显上调(P＜0.05,P＜0.01).结论 IR和DM伴发NAFLD时肝组织均出现miR-21表达降低,可能通过调节PPAR-α和PPAR-γ的基因表达参与NAFLD发病.
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miR-21对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间质转分化的影响
目的:观察miR-21在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞)上皮间质转分化(EMT)中的作用,并探讨miR-21参与调控HK-2细胞EMT的可能靶点.方法:体外培养的HK-2细胞分为6组:正常对照组、转化生长因子β1(TGF-βl)模型组、miR-21 mimic阴性组、miR-21 mimic组、miR-21 inhibitor阴性组和miR-21inhibitor组.细胞经4 ng/ml TGF-β1处理建立EMT模型,检测miR-21和EMT相关指标的表达变化,利用基因转染技术,将miR-21 mimic质粒或miR-21 inhibitor质粒转染经TGF-β1处理的HK-2细胞,使细胞过表达或抑制表达miR-21,在此基础上观察细胞EMT相关指标的变化以及磷酸酯酶(PTEN)基因的影响.结果:①与正常组相比,模型组的miR-21含量显著升高(P＜0.05),上皮表型标志物E-cadherin的mRNA和蛋白表达水平均显著降低(P＜0.01),间质表型标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白水平也显著升高(P＜ 0.05,P＜0.01);②转染miR-21 mimic后,与miR-21 mimic阴性对照组相比,miR-21含量显著升高(P＜0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白水平显著降低(P＜ 0.05,P＜0.01),α-SMA mRNA和蛋白水平显著升高(P＜0.05,P＜0.01);转染miR-21 inhibitor后,与miR-21inhibitor阴性对照组相比,miR-21含量显著降低(P＜0.01),PTEN、E-cadherin的mRNA和蛋白含量显著升高(P＜0.05,P＜0.01),α-SMA mRNA、蛋白水平显著降低(P＜ 0.05,P＜0.01).结论:miR-21在TGF-β1诱导的HK-2细胞EMT发生中具有重要作用,并且可能通过靶基因PTEN参与EMT相关分子的表达调控.
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微小RNA-21抑制剂对高氧性急性肺损伤大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞凋亡的影响
目的 观察微小RNA-21(miR-21)抑制剂对高氧性急性肺损伤(HALI)大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)凋亡的影响.方法 将80只SD大鼠按随机数字表法分为空气对照组、高氧损伤组、空病毒对照组(经鼻腔滴入200μL慢病毒液)及miR-21抑制剂预处理组(经鼻腔滴入200 μL含miR-21抑制剂的慢病毒液),每组20只;各组大鼠给予相应处理后立即置于氧浓度＞90％的高氧箱中饲养以建立HALI模型;空气对照组正常饲养且不予任何处理.各组分别于高氧暴露0、24、48、72 h随机取10只大鼠,观察双肺组织大体变化,光镜下观察病理学改变.另于48 h取10只大鼠肺组织,采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)检测miR-21表达,采用蛋白质免疫印迹试验(Western Bolt)检测天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(caspase-3)蛋白表达,采用原位末端缺刻标记试验(TUNEL)检测AECⅡ凋亡情况.结果 ①空气对照组各时间点肺组织无异常表现.随高氧暴露时间延长,高氧损伤组肺组织损伤逐渐加重,72 h肺组织呈暗红色,多处斑片状出血,肺组织结构紊乱,出现肺泡壁断裂,肺泡间隔明显水肿、增宽,大量炎性细胞浸润,肺泡腔内出现水肿液.miR-21抑制剂预处理组肺组织损伤程度较高氧损伤组进一步加重;而空病毒对照组无明显变化.②与空气对照组比较,高氧损伤组肺组织miR-21表达明显下调(2-△△Ct:0.021±0.005比0.037±0.006),caspase-3蛋白表达明显上调(A值:0.423±0.081比0.123±0.023,均P＜ 0.05).给予miR-21抑制剂预处理后,miR-21表达进一步下调(2-△△Ct:0.014±0.003比0.021 ±0.005),caspase-3蛋白表达进一步上调(A值:0.691±0.085比0.423±0.081,均P＜ 0.05);空病毒对照组miR-21(2-△△Ct:0.025±0.007比0.021±0.005)和caspase-3表达(A值:0.475±0.062比0.423±0.081)与高氧损伤组差异无统计学意义(均P＞0.05).③与空气对照组比较,高氧损伤组凋亡细胞增多.给予miR-21抑制剂预处理后,凋亡细胞较高氧损伤组进一步增多;而空病毒对照组则无明显变化.结论 抑制体内miR-21表达可以加重HALI大鼠肺组织损伤,增加AECⅡ凋亡.
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糖尿病合并肺癌癌组织及正常肺组织中miRNA-21的差异性表达
[目的]研究微小RNA(microRNA,miRNA)-21(miR-21)在Ⅱ型糖尿病合并肺癌患者癌组织及正常肺组织中的表达,探讨其在Ⅱ型糖尿病并发肺癌中的作用和意义.[方法]应用实时定量逆转录-聚合酶链反应方法检测miR-21在糖尿病合并肺癌手术患者癌组织、正常肺组织及单纯肺癌手术患者癌组织中的表达并分析其意义.[结果]miR-21在糖尿病并肺癌癌组织中表达显著高于正常组织及单纯肺癌组织,分别为2.236±1.175、0.056±0.032、1.132±0.043,组间及两两比较差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]miR-21在糖尿病合并肺癌患者癌组织中的高表达,可能与肺癌发生和发展密切相关,为下一步确定糖尿病合并肺癌患者致病基因提供理论依据.
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远程缺血后适应干预对急性脑梗死患者血清miR-21、miR-24水平和神经功能的影响
目的 观察远程缺血后适应(RIPC)对急性脑梗死(ACI)患者溶栓前后外周血miR-21、miR-24水平和神经功能的影响.方法 连续性纳入2015年1月-2017年1月于常熟市第一人民医院住院治疗的急性脑梗死患者64例,随机数字表法分为RIPC组和对照组,每组32例.对照组给予静脉溶栓和常规脑梗死治疗,RIPC组在溶栓后给予RIPC治疗,其他方案同对照组.分别于溶栓前(T0),溶栓后24 h(T1)、1周(T2)和2周(T3)4个时间点检测血清miR-21和miR-24浓度,并进行NIHSS和Barthel评分.结果 治疗后2组患者血清miR-21均下降(RIPC组:F=3.178,P=0.019;对照组:F=3.519,P=0.012),而miR-24均上升(RIPC组:F=4.288,P=0.004;对照组:F=4.161,P=0.005),RIPC组T2和T3时间点miR-21水平低于对照组(T2:t =2.446,P=0.020;T3:t=2.557,P=0.016),而miR-24高于对照组(T2:t =2.394,P=0.002;T3:t =2.597,P=0.014);2组NIHSS评分下降(RIPC组:F =3.947,P=0.006;对照组:F =3.095,P=0.022),而Barthel评分上升(RIPC组:F=2.669,P=0.040;对照组:F=3.521,P=0.012),RIPC组于T2和T3时间点NIHSS评分明显低于对照组(T2:t=2.754,P=0.010;T3:t=2.865,P=0.007),而Barthel分高于对照组(T2:t =2.643,P=0.013;T3:t =2.976,P=0.006).溶栓与miR-21水平(△4和△5)和NIHSS评分(△4和△5)呈负相关,与miR-24(△4和△5)和Barthel分值(△4和△5)呈正相关(P＜0.05).溶栓+ RIPC与miR-21(△4和△5)和NIHSS评分(△4和△5)呈负相关,与miR-24.(△4和△5)和Barthel分值(△4和△5)呈正相关(P＜0.05),且相关性均明显高于单纯溶栓患者.结论 RIPC有助于提高ACI患者溶栓后神经功能恢复,可能与调控miR-21和miR-24有关.
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心钠素对多发性骨髓瘤细胞增殖及微小RNA-21表达的影响
目的：探讨心钠素(ANP)对多发性骨髓瘤(MM)细胞增殖的影响及其抗癌机制。方法以MM1. S细胞为研究对象,观察不同浓度ANP对MM细胞增殖与周期的影响,检测A型利钠肽受体( NPR-A)与C型利钠肽受体( NPR-C)蛋白表达,并分析ANP对MM细胞miRNA-21表达的影响。结果1~100μmol/L ANP以浓度依赖性抑制MM细胞增殖；其中,在24h时间点ANP对MM1. S细胞增殖抑制作用强；随着时间延长,ANP 抑制作用呈减弱趋势。 ANP作用MM1. S细胞24h后,与对照组比较,各组G1期细胞比例均增加,S期与 G2期细胞比例下降,PI及miRNA-21表达均低于对照组(P <0．01,P <0．05)。 MM1. S 细胞上存在 NPR-A 与 NPR-C 受体。结论 ANP 与NPR-A/C受体结合,通过阻滞细胞周期于G1期与抑制miR-21表达,发挥抗MM细胞增殖作用。
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两种荧光定量聚合酶链反应法检测乳腺癌组织中微小RNA-21的应用分析
目的 比较两种荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测乳腺癌组织中微小RNA(miR)-21的表达,选择更适用于临床的检测方法.方法 选取遵义医学院附属医院普外科2010年度住院的手术治疗的乳腺癌患者,手术切除的乳腺组织标本,包括乳腺癌组织和癌旁组织(距肿瘤边缘＞5 cm)14对.分别用SYBR GreenⅠ染料和TaqMan探针作为荧光指示剂,FQ-PCR法检测乳腺癌组织和癌旁组织中miR-21的相对表达水平,应用SPSS 15.0统计软件分析两种检测模式的差异.后用Northern Blot法进行实验验证.结果 SYBR GreenⅠ染料法检测乳腺癌组织与癌旁组织中miR-21的表达,差异有统计学意义(t=6.704,P=0.000);TaqMan探针法检测乳腺癌组织与癌旁组中miR-21的表达,差异有统计学意义(t=7.238,P=0.000).SYBR GreenⅠ染料法与TaqMan探针法检测乳腺癌组织中miR-21的表达,差异无统计学意义(t=2.33,P=0.053);SYBR Green Ⅰ染料法与TaqMan探针法检测癌旁组织中miR-21的表达,差异无统计学意义(t=0.07,P=0.95).Northern Blot法检测乳腺癌组织和癌旁组织中miR-21的表达,探针分别为miR-21和U6的反义链,由32P标记.用Image Quant软件测定灰度值评定信号表达强弱,结果表明,乳腺癌组织中miR-21高表达,而癌旁组织中miR-21低表达.结论 SYBR GreenⅠ染料法和TaqMan探针法检测乳腺癌组织miR-21表达均较癌旁组织中明显升高,与Northern Blot法检测结果一致,但SYBR GreenⅠ染料法简单、有效、成本较低,更适用于临床miR-21的检测.
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miR-21与JNK在间歇性低氧大鼠心肌损害中的作用
目的 通过建立间歇性低氧大鼠模型,观察间歇性低氧大鼠心肌组织细胞形态学变化,并检测心肌组织中miR-21、JNK含量的变化,探讨间歇性低氧对大鼠心肌损害的影响.方法 选取健康雄性SD大鼠18只,随机分3组.A组:常氧组(NC),B组:间歇性低氧4周组(CIH4),C组:间歇性低氧8周组(CIH8),每组6只.将B组、C两组大鼠放入间歇低氧舱中,分别于4周、8周时处死,对大鼠心肌组织进行HE染色,观察各组心肌组织细胞形态学变化;用PCR法测定各组心肌组织中miR 21的表达,用2-△△CT公式计算miR-21实验组相对于正常对照组的变化倍数,CT (cycle threshold)值表示其表达量,Western法测定各组大鼠心肌组织中JNK蛋白的表达,用灰度值表示其表达量.结果 对大鼠心肌组织细胞进行形态学观察,发现B组、C组心肌细胞排列紊乱,部分心肌纤维化,且C组更为明显.B组、C组miR-21表达较A组增加,且C组较B组更明显有统计学意义(P＜0.05);B组、C组JNK表达较A组增加,且C组较B组更明显有统计学意义(P＜0.05);将miR-21与JNK两个指标采用Spearman相关分析,表明二者具有明显相关性.结论 间歇性低氧引起的心肌损害可能是导致大鼠心肌重构的诱因之一;miR-21与JNK在间歇性低氧大鼠心肌组织中表达增加,且随着低氧时间的延长其表达量显著增加,二者可能在间歇性低氧大鼠心肌重构的发生、发展中起到重要作用.
