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健脾消癌方抑制结肠癌增殖的作用机制
目的:观察健脾消癌方对结肠癌HCT116细胞中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21),第10号染色体丢失的磷酸酶基因(phasphatase and tensin homo-log deleted in chromosome 10,PTEN)表达的影响,探讨健脾消癌方抑制结肠癌转移的可能作用机制.方法:10％,15％,20％健脾消癌方含药血清处理HCT116细胞后,实时荧光定量PCR(Real-timePCR)检测miR-21,PTEN mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测PTEN蛋白的表达水平.结果:与空白组比较,健脾消癌方低剂量组miR-21 mRNA相对表达量降低,PTEN mRNA相对表达量升高,但差异无统计学意义;健脾消癌方中剂量组miR-21mRNA相对表达明显降低,PTEN mRNA相对表达明显升高(P＜0.05);健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量显著降低,PTEN mRNA相对表达量显著升高(P＜0.01);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组miR-21 mRNA相对表达量明显降低,PTEN mRNA相对表达量明显升高(P＜0.05).与空白组比较,健脾消癌方中、低剂量组PTEN蛋白相对表达量升高,差异无统计学意义;与空白组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显上升(P＜0.05);与健脾消癌方中、低剂量组比较,健脾消癌方高剂量组PTEN蛋白相对表达量明显升高(P＜0.05).结论:健脾消癌方可能通过降低miR-21的表达,上调miR-21靶基因PTEN蛋白表达抑制结肠癌的增殖.
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PTEN基因过表达抑制血管平滑肌细胞增殖的研究
目的:初步研究第10号染色体丢失的磷酸酶(PTEN)基因的过表达对血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖和凋亡的影响,为冠状动脉支架内再狭窄的治疗提供新思路.方法:培养大鼠胸主动脉VSMCs,通过双酶切将目的基因克隆至带有强绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因的质粒中,构建重组质粒.再将细胞分为3组:转染pEGFP-PTEN质粒组、转染空载体pEGFP组、正常对照组.荧光显微镜观察转染效果.通过细胞计数法及四唑盐(MTT)比色实验检测各组VSMCs的增殖.RT-PCR检测各组细胞PTENmRNA的表达.流式细胞仪测定各组细胞的凋亡.结果:①经PCR和测序鉴定表明,携目的基因PTEN的重组穿梭质粒pEGFP-PTEN构建正确.②荧光显微镜下可见转染阳性细胞发绿色荧光,表明质粒成功转染VSMCs.③通过细胞计数、MTT法检测显示,PTEN基因抑制VSMCs生长.空载体组和对照组之间未见明显差异.⑤RT-PCR同时扩增pEGFP-PTEN转染组、pEGFP转染组和对照组PTENmRNA,结果显示pEGFP-PTEN转染组PTENmRNA的表达比pEGFP转染组及对照组PTENmRNA的表达显著增加(P＜0.05).⑥流式细胞仪检测显示转染pEGFP-PTEN基因的VSMCs凋亡率约为25.10％,显著高于对照组.结论:pEGFP-PTEN成功转染体外培养的VSMCs后,PTEN在mRNA水平表达增加.通过VSMCs内PTEN过度表达能够抑制其增殖,促进其凋亡.
关键词： 再狭窄 血管平滑肌细胞 转染 第10号染色体丢失的磷酸酶基因 增殖
