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超声空化逆转K562/A02细胞对阿霉素的耐药性研究
本研究观察低频低功率超声联合阿霉素(adriamycin,A02)对白血病耐药细胞株K562/A02的影响,寻找合适的干预参数,探讨耐药细胞耐药逆转的可能机制.取对数生长期的白血病K562/A02细胞株,将研究对象分为空白组、单纯阿霉素组(A02)、单纯超声组(US)、阿霉素加超声组(A02+US)共4组.细胞在24孔培养板上受低频低功率超声作用,用台盼蓝拒染法、MTT法检测细胞活性,应用瑞氏染色法和流式细胞术分别检测细胞凋亡和药物浓度,扫描电子显微镜观察细胞表面变化.结果显示,频率20 kHz、声强0.25 W/cm2、作用时间60秒的超声,可显著降低阿霉素的LC50;当声强0.50 W/cm2、作用时间大于30秒的超声,对细胞有急性杀伤作用.细胞经低频超声作用后细胞膜表面出现直径大约1-2μm的小孔,细胞内阿霉素的药物浓度增加,细胞凋亡增强.结论:适当参数的超声辐射通过超声空化导致肿瘤细胞产生声孔效应,使阿霉素对耐药细胞株的抑制作用增强,从而逆转耐药细胞株的耐药性.
关键词： 超声空化 阿霉素 耐药逆转 K562/A02细胞株 -
雷公藤甲素对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响
本研究旨在探讨雷公藤甲素(TPL)对K562/A02细胞阿霉素敏感性的影响.采用MTT法检测TPL细胞毒性和阿霉素药物敏感性；流式细胞术检测P-糖蛋白表达和细胞内阿霉素浓度；双荧光素酶报告基因系统检测MDR1启动子活性.结果表明:TPL增强K562/A02细胞阿霉素敏感性.TPL作用后,K562/A02细胞P-糖蛋白表达相关平均荧光强度(MFI)由123±13下降到39±13(P＜0.05)；K562/A02细胞内阿霉素相关MFI由18±5上升到34±6(P＜0.05),TPL能够有效抑制K562/A02细胞的药物外排.TPL降低MDR1启动子转录活性约75％.结论:TPL通过下调P-糖蛋白表达增强K562/A02细胞对阿霉素的敏感性,其有可能成为一种耐药逆转剂.
关键词： 雷公藤甲素 K562/A02细胞株 阿霉素 多药耐药 -
汉防己甲素对K562/A02细胞株SORCIN基因表达的影响
本研究旨在探讨汉防己甲素(Tet)在逆转K562/A02细胞耐药与耐药相关的可溶性钙结合蛋白(SORCIN)基因表达之间的关系,为Tet的临床应用提供新的理论基础.通过MTT法筛选出所需浓度Tet,与K562/A02细胞株孵育培养48小时后,通过MIT检测Tet对柔红霉素(DNR)细胞毒性的影响,用RT-PCR方法检测SORCIN基因表达的变化,用Western blot方法检测sorcin表达蛋白的变化.结果表明:在所选浓度范围内,Tet可以增强DNR对K562/A02的细胞毒作用,(Tet浓度为0,0.5,1.0,2.0 mg/L时DNR和Tet的IC50分别为11.3±0.17,5.15±0.10,3.91±0.06,2.52±0.04 mg/L,p＜0.01);K562/A02细胞中SORCIN基因高表达,且随着Tet浓度的增加SORCIN的表达先增强后减弱(Tet浓度为0.5 mg/L时增强,1.0和2.0 mg/L时减弱,p＜0.05);K652细胞中sorcin蛋白低表达,K562/A02细胞中sorcin蛋白高表达,且随着Tet浓度的增加先增强后减弱(Tet浓度为0.5 mg/L时增强、1.0和2.0 mg/L时减弱,p＜0.05).结论:MqT检测显示Tet对K562/A02耐药逆转呈浓度依赖性,Tet可能通过调整SORCIN基因及蛋白的表达参与逆转K562/A02的耐药性,但并不与其耐药逆转作用完全相关.
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p16基因在K562/A02细胞株表达情况的研究
目的:研究p16基因在K562/A02细胞株的表达情况及其与耐药的关系.方法:用PCR法对慢性髓系白血病细胞株K562及其耐药细胞株K562/A02进行p16基因缺失检测.结果:K562及K562/A02细胞株经PCR扩增后,均未扩出相应条带.结论:K562/A02细胞株与K562细胞株一样,均表现为p16基因缺失.
关键词： p16基因 K562细胞株 K562/A02细胞株 表达 缺失 -
恶性造血细胞中P-gp 170表达的比较研究
目的:通过研究恶性造血细胞中P-糖蛋白(P-gp)170的表达,为骨髓增生异常综合征(MDS)治疗提供P-gp 170低表达的体外细胞株模型.方法:用含0.1 mmol·L-1阿霉素的RPMI 1640 分别培养MDS细胞株MUTZ-1和多药耐药(MDR)红白血病细胞株K562/A02.用MTT法检测细胞的增殖抑制作用,光镜和电镜技术分别观察与阿霉素共同培养后的MUTZ-1细胞和K562/A02细胞形态和超微结构,流式细胞仪分别测定MUTZ-1细胞和K562/A02细胞P-gp 170表达水平.结果:0.1 mmol·L-1阿霉素对MUTZ-1细胞增殖呈时间依赖性抑制作用,而对K562/A02细胞的增殖没有影响;MUTZ-1细胞出现典型的凋亡形态学改变,K562/A02细胞表面呈现出许多长的微绒毛和许多微孔;K562/A02细胞与MUTZ-1细胞相比高表达P-gp 170.结论:P-gp 170在恶性造血细胞中表达有显著性差异, P-gp 170低表达的MUTZ-1细胞株可用于MDS治疗的体外研究模型, P-gp 170高表达的K562/A02细胞株可用于MDR逆转的体外研究模型.
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雷公藤红素逆转K562/A02细胞多药耐药的实验研究
目的 探讨雷公藤红素逆转人慢性粒细胞白血病红白血病急变细胞株K562/A02多药耐药的效果.方法 采用CCK-8法测定细胞的药敏性及耐药逆转性,应用流式细胞术检测细胞内ADM浓度、P-gp蛋白表达.结果 雷公藤红素对K562/A02、K562的半数抑制率浓度(IC50)分别为(295.58±23.288)μmol/L、(411.59±26.551)μmol/L.K562/A02细胞对ADM的耐药性是K562细胞的79.78倍.细胞毒剂量的雷公藤红素作用后,ADM对K562/A02细胞的IC50显著下降(P＜0.05),逆转倍数为117.860倍.细胞毒剂量(IC50)和非细胞毒剂量(IC10)的雷公藤红素处理后的K562/A02细胞内的ADM浓度显著增加(P＜0.05),增加倍数分别为1.537倍和1.102倍.雷公藤红素能明显下调K562/A02细胞的P-gp表达.结论 雷公藤红素对逆转K562/A02细胞的耐药性有一定的作用,其机制可能与下调P-gp表达有关.
关键词： K562/A02细胞株 多药耐药 雷公藤红素 -
环孢素通过抑制H2AX表达减少DNA损伤后修复逆转K562/A02细胞对多柔比星的耐药性
目的 探讨环孢素(CsA)通过减少DNA损伤后修复而逆转K562/A02对多柔比星(ADM)耐药性的可能性及其机制.方法 K562或K562/A02与不同水平ADM和CsA共培养后,采用四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法计算半数抑制水平(IC50)、耐药倍数及增敏倍数.K562/A02细胞经CsA处理后,应用反转录(RT)-PCR检测细胞mdrl mRNA及H2AX mRNA表达水平;应用流式细胞仪测定细胞P-糖蛋白(P-gp)及H2AX蛋白表达水平;中性彗星实验法检测经兔抗ΥH2AX抗体处理后K562/A02细胞双链DNA损伤情况.结果 2×10-3g/L CsA即可增加K562/A02细胞对ADM的敏感性,增敏倍数达5.28倍.RT-PCR结果显示CsA下调K562/A02细胞mdrl mRNA和H2AXmRNA的表达(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示CsA作用K562/A02细胞72 h后使P-gp表达下降(17.8±1.5)%(P＜0.05),H2AX蛋白表达下降(13.3±1.7)%(P＜0.05);0.3×10-6g/L的抗体即可加剧ADM造成的双链DNA损伤,代表性的指标尾矩和尾DNA%明显增高.结论 抗ΥH2AX抗体阻止双链DNA损伤后修复;CsA可抑制H2AX的表达而减少DNA损伤后修复,从而增加K562/A02细胞对ADM的敏感性起逆转耐药的作用;此外,CsA尚可下调mdrlmRNA、P-gP表达减少、细胞内药物溢出而逆转耐药.
关键词： 环孢素 双链脱氧核糖核酸断裂 K562/A02细胞株 多柔比星 耐药 白血病 -
K562/A02细胞株核因子-κB活性与P糖蛋白的表达
目的 探讨K562/A02细胞株NF-κB活性与P-gp表达的关系.方法 在K562/A02白血病耐药细胞株培养中加入NF-κB抑制剂PDTC,观察在不同浓度、不同时间下,细胞株NF-κB活性的变化与P-gp表达的关系.结果 在不同浓度、不同时间的PDTC作用下,K562/A02细胞株NF-κB活性与P-gp表达呈正相关的关系,随干预浓度、时间的不断变化,二者均逐渐下降.结论 NF-κB调控的白血病细胞抗凋亡机制中有MDR1的参与.
关键词： K562/A02细胞株 核因子-κB P糖蛋白 -
NF-κB信号通路的激活对白血病细胞K562/A02多药耐药的影响
目的 研究K562细胞株及其耐药细胞株K562/A02 NF-κ B活性的差异性表达,探讨白血病多药耐药(MDR)发病机制.方法 用MTT法检测K562/A02的耐药倍数,观察细胞生长的形态学变化,PI单染法检测K562/S、K562/A02细胞周期分布,并用RT-PCR方法榆测mRNA的表达、流式细胞仪检测P糖蛋白(P-gp)表达及其功能,Western blotting方法检测细胞核NF-κB p65表达,比较K562与K562/A02白血病耐药细胞株之间的差异性.结果 与K562细胞不同,耐药细胞株K562/A02细胞生长特性发生改变,旱半贴壁生长,与K562/S细胞相比,K562/A02细胞的G0/G1期、S期比例增高,G2/M期细胞比例减低,差异有统计学意义(P＜0.05),凋亡细胞比例差异无统计学意义(P＞0.05),且检测到mdrl mRNA及细胞膜P-gp表达增高以及细胞核内NF-κB p65表达明显增加.结论 NF-κ B信号通路的激活即NF-κ B p65细胞核内转位可能参与了白血病MDR的形成.
关键词： K562细胞 K562/A02细胞株 核转求因子-κB P-糖蛋白 聚合酶链反应
