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壁虎醇提物体外诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及机制研究
目的:研究壁虎醇提物(GAE)体外诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡作用及其可能机制,为激素非依赖性前列腺癌的治疗提供理论依据.方法:以前列腺癌PC-3细胞为研究对象,MTT法检测3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L-1GAE作用细胞24,48,72 h后对激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞增殖抑制作用;3.5,4.0,5.0 g·L-1的GAE作用48 h后,另设空白组,Hoeehst33342荧光染色法,AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,SP免疫组化法检测细胞内半胱氨酸蛋白酶3(Caspase 3)和Fas的表达情况并做统计学处理.结果:3.5,4.0,4.5,5.0,5.5 g·L-1 GAE作用细胞24,48,72 h后能显著抑制PC-3细胞的生长且呈剂量和时间依赖性;与空白组比较,3.5,4.0,5.0 g·L-1的GAE作用48 h后Hoeehst33342荧光染色发现部分PC-3细胞发生典型的凋亡形态学改变;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测显示3.5,4.0,5.0 g·L-1的GAE作用48 h后,早期凋亡细胞分别占6.51％,12.48％和22.81％,且免疫组化显示细胞内蛋白Caspase-3和Fas的表达均上调且呈浓度依赖性(P＜0.05).结论:GAE能够诱导激素非依赖性前列腺癌PC-3细胞凋亡,其作用机制可能与死亡受体介导的信号通路有关.
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壁虎醇提物对H22肝癌血管新生的抑制作用
目的 研究壁虎醇提物(GEE)对H22小鼠肿瘤组织血管新生的抑制作用及其机制.方法 建立腋下移植H22肝癌模型,按照体重随机分为5组:模型组(0.9％ NaCl)、对照组(2 mg· kg-1阿霉素)和高、中、低3个剂量实验组(GEE:80,40,20 mg·kg-1),连续腹腔注射10 d,计算抑瘤率;用免疫组化法观察血管内皮细胞标记物(Cm4)表达水平,计算新生微血管密度(MVD);以免疫印迹法检测血管内皮生长因子A(VEGF-A)、基质金属蛋白酶(MMP-2)、细胞外信号调节激酶(ERK)、磷酸化的细胞外信号调节激酶(P-ERK)的表达.结果 高、中、低3个剂量实验组的抑瘤率分别为63.18％,50.91％,44.68％,说明GEE对H22小鼠移植瘤的抑瘤作用较明显.模型组小鼠肿瘤组织MVD为平均每个视野(24.7±4.1)个,与模型组比较,对照组、高、中、低3个剂量实验组的MVD分别为平均每个视野(13.6±3.6),(8.0±1.6),(11.0±1.1),(13.9±1.7)个,其中3个剂量实验组差异有统计学意义(均P ＜0.01).模型组、对照组、低中高3个剂量实验组的VEGF-A与β-actin灰度比值平均分别为0.17,0.10,0.01,0.03,0.04;这5组的MMP-2与β-actin灰度比值平均分别为1.68,1.27,0.48,1.15,1.50,而P-ERK与ERK灰度比值平均分别为0.10,0.07,0.06,0.07,0.08,与模型组相比,这4组差异均有统计学意义(均P ＜0.01),说明GEE组和对照组的VEGF-A、MMP-2、P-ERK蛋白水平均明显减弱.结论 GEE可抑制小鼠H22肝癌移植瘤的生长,其抗肿瘤作用机制可能与降低肿瘤组织血管生成相关因子VEGF-A、MMP-2、P-ERK的表达及降低微血管密度有关.
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壁虎醇提物抑制C6胶质瘤细胞增殖作用的研究
目的 研究壁虎醇提物( GEE)对胶质瘤 C6细胞生长的抑制作用并探讨其分子机制. 方法 设置空白组、对照组(0.01 mg·mL-1 5-氟尿嘧啶)和实验组(0.1, 0.15, 0.2, 0.3, 0.4 mg·mL-1 GEE). 噻唑蓝(MTT)法检测GEE对C6细胞增殖的影响;GEE作用于C6细胞24 h后,倒置显微镜观察C6细胞的形态学变化;Hoechst 33258染色法检测C6细胞核凋亡的变化;Western blot检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(caspase-9)、凋亡诱导因子(AIF)蛋白的表达.结果 GEE作用于C6细胞48 h后, MTT结果显示GEE可抑制C6细胞的增殖,5个剂量实验组的抑制率分别为19.9%, 28.7%, 63.1%, 75.4%, 76.3%,与空白组比较差异均有统计学意义( P<0.05). 显微镜下可见典型的凋亡形态学变化. GEE可诱导caspase-9、AIF蛋白表达增加. 结论 GEE可抑制C6细胞增殖,可能是通过增加caspase-9、AIF蛋白表达而引起凋亡.
关键词： C6细胞 壁虎醇提物 凋亡 半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9 凋亡诱导因子 -
壁虎醇提物抑制人宫颈癌SiHa细胞迁移及侵袭的研究
目的 研究壁虎醇提物(GEE)对宫颈癌SiHa细胞侵袭、迁移能力的影响及其潜在的分子机制.方法 实验分为对照组(不加药)和3个浓度(0.02,0.05,0.10 mg·mL-1 GEE)实验组.GEE作用于SiHa细胞24 h后,通过划痕实验、Transwell小室实验分别观察其迁移及侵袭能力的改变;通过MTT法检测GEE对SiHa细胞增殖能力的影响.免疫印迹法检测GEE对SiHa细胞E钙黏蛋白、血管内皮生长因子(VEGF)及Rac1蛋白表达的影响.结果 GEE处理24h后,3个浓度实验组SiHa细胞的增殖抑制率分别为1.5％,5.5％,7.3％.SiHa细胞迁移及侵袭能力均减弱.GEE处理后的SiHa细胞内E钙黏蛋白表达上调,而VEGF和Rac1蛋白表达下调.结论 GEE可抑制SiHa细胞侵袭和迁移,其机制可能与E钙黏蛋白表达的上调、VEGF和Rac1表达的下调有关.
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壁虎醇提物急性毒性研究
目的 观察壁虎醇提物对小白鼠的急性毒性作用.方法 运用急性毒性的实验进行半数致死量(LD50)的计算.预实验用较大范围壁虎醇提物试液少量动物进行实验求出致死范围,然后在全数致死量和零致死量之间将实验用小白鼠分为5组,计算各组剂量公比,每组10只雄性小白鼠,进行正式实验,将实验结果记录后运用改良寇氏法进行计算.结果 灌胃给予壁虎醇提物,小鼠无死亡出现,但活动减少,反应迟钝,1h后恢复正常,小白鼠每日灌胃的大耐受量(MTD)为48.0g·kg-1.经腹腔注射给药的LD50为6.475g·kg-1,95%可信限为6.862~6.088g·kg-1.结论 壁虎醇提物毒性极小,临床应用相对较安全.
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壁虎醇提物抗小鼠H22移植瘤作用的研究
目的 研究壁虎醇提物抗小鼠H22移植瘤作用.方法 采用小鼠H22肝癌移植模型,分模型组、阳性组、壁虎醇提物高、中、低剂量(0.4,0.8,1.6g/kg)组共五组,采用腹腔注射,观察壁虎醇提物对肿瘤生长的抑制作用及对胸腺和脾脏的影响.结果 壁虎醇提物各剂量组均对H22荷瘤小鼠均具有明显的抑制作用,抑制率分别为55.25％,47.89％,15.16％,与模型组相比差异显著.高、中、低剂量的荷瘤小鼠脾脏、胸腺质量及其指数同阳性组相比差异均非常显著.结论 壁虎醇提物抑制鼠移植瘤的生长,并保护荷瘤小鼠免疫功能.其机制可能与其胸腺、脾产生抑瘤因子有关.
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壁虎醇提物对人食管癌EC-109细胞增殖抑制作用及其机制研究
目的:研究壁虎醇提物(Gecko alcohol extract,GAE)对人食管癌EC-109细胞的增殖抑制作用及其机制.方法:MTT法检测GAE对细胞增殖抑制作用；Hoechest 33342荧光染色观察细胞形态学的改变；流式细胞术检测凋亡率；SP免疫组化法检测Fas和Caspase-3蛋白的表达.结果:GAE具有抑制食管癌EC-109细胞增殖的作用；3.0mg/mL、4.0 mg/mL GAE作用细胞48 h后凋亡率分别为20.60％和37.93％；与正常对照组相比GAE组Fas蛋白和Caspase-3蛋白的表达显著增加(P＜0.05).结论:GAE能够抑制EC-109细胞增殖并诱导其凋亡,其作用机制可能与增加Fas蛋白和Caspase3蛋白的表达有关.
