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小叶女贞对免疫功能损伤小鼠B淋巴细胞和NK细胞的影响
目的 探讨小叶女贞对免疫功能损伤小鼠B淋巴细胞、NK细胞免疫功能的影响。方法 以环磷酰胺致免疫功能损伤小鼠为研究对象，将BALB/C实验小鼠60只按随机数字表法随机分为5组，每组12只，分别为生理盐水(NS)对照组、环磷酰胺(Cy)对照组、Cy+小叶女贞水煎液小剂量组（小叶女贞小剂量组）、Cy+小叶女贞水煎液大剂量组（小叶女贞大剂量组）、Cy+女贞子水煎液组（女贞子组）。NS对照组给予生理盐水0.2 ml/d皮下注射10d，其余各组给予环磷酰胺0.8 ml/d皮下注射(20 mg/kg·d-1)10 d，建立免疫功能损伤小鼠模型。自第11天起各组分别给予生理盐水、环磷酰胺、小叶女贞水煎液小剂量、小叶女贞水煎液大剂量、女贞子水煎液共7天处死。用流式细胞仪检测实验鼠外周血B淋巴细胞（CD3-CD19+）和NK细胞(CD3-CD16+CD56+)的百分率。结果 CD3-CD 19+、CD3-CD16+CD56+细胞小叶女贞小剂量组[分别为（11.54±0.98）、(12.46±0.08)]，明显低于小叶女贞大剂量组[分别为(20.44±1.78)、(19.12±1.70)]、女贞子组[分别为（19.90±1.42）、(20.17±1.66)]]，明显高于环磷酰胺组[分别为(4.53±1.70)、（5.03±1.22）]，差异均有统计学意义(P均＜0.01);与NS对照组[分别为(11.84±0.99)、(12.90±0.28)]比较无明显改变(P＞0.05)。结论 小叶女贞能提高小鼠B淋巴细胞和NK细胞细胞的数量，使小鼠受损伤的免疫功能得到改善，对免疫功能的调节作用与剂量成正相关。
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小叶女贞糖基转移酶基因的克隆和原核表达研究
根据前期小叶女贞转录组研究的结果,利用cDNA末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA ends,RACE)从叶片中克隆到1条编码糖基转移酶的基因(xynzUGT).该基因cDNA全长1598 bp,由66 bp 5'-UTR,1440 bp ORF,92 bp 3'-UTR组成,其中ORF编码1条含480个氨基酸残基的酶蛋白(xynzUGT),其相对分子质量和等电点分别为54826.67 Da和5.82.利用生物信息学方法分析酶蛋白的结构,结果表明在一级结构中含有一段糖基转移酶高度保守的PSPG盒,在二级结构中含有α螺旋(38％)、β折叠片(12.1％)和无规蜷曲(49.9％),在三级结构中由肽链折叠形成2个正对的α/β/α类Rossmann折叠区域,并且两者之间夹着一个底物结合口袋.通过系统进化树分析发现,xynzUGT有可能催化酪醇等苯丙素类物质发生糖基化,进一步开展酶蛋白与酪醇的分子对接模拟实验,结果显示位于结合口袋的Gly138和Ser285通过氢键与酪醇发生相互作用.SDS-PAGE电泳分析表明,原核表达系统成功表达出相对分子质量为58370.57 Da的xynzUGT重组蛋白,但它以非可溶性的包涵体形式存在.利用分子伴侣和酶蛋白共表达的方法,在一定程度上可促进酶蛋白的可溶性表达.以上研究结果为进一步开展体外酶促反应研究,并阐明酶的功能机制奠定了基础.
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小叶女贞果实的生药学研究
本文对小叶女贞的植物来源、药材性状及显微特征进行了实验研究,为充分利用这一资源和评价其质量提供方法和依据.
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小叶女贞叶片转录组研究
目的 探讨小叶女贞中化学成分生物合成的遗传基础.方法 采用Illumina/Solexa Hiseq 2000测序平台在转录水平上对小叶女贞叶片进行高通量测序,结合生物信息学方法开展基因功能注释和SSR位点搜索.结果 共获得4 907 020 800个clean reads,含4.90 Gb的有效数据.利用生物信息学对clean reads进行拼接和组装共获得157 450条Unigene,总长度、平均长度和N5o分别为115.49 Mb,734 bp和1510bp.进一步进行基因功能预测,在GO数据库中共有17 756条Unigene可被分别注释到细胞组分、分子功能和生物学过程3大类别中,将Unigene与COG数据库进行比对,可获得25个功能类别,其中大部分Unigene与叶片中物质的合成与转运相关.在KEGG数据库中进行搜索比对,Unigene可定位到21类代谢途径中,涉及重要次生代谢产物苯丙素类、黄酮类和萜类生成的Unigene数目分别为860,216和806条.利用SSR分析软件,在所有的Unigene中共搜索到17 593个SSR位点,重复类型以二核苷酸为主.结论 本研究首次对小叶女贞转录组进行测序分析,获得的参与次生代谢的关键基因可为研究小叶女贞药用成分的生物合成和调控机制研究奠定基础.
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小叶女贞对免疫功能损伤小鼠T淋巴细胞免疫功能的调节作用
目的 研究小叶女贞对免疫功能损伤小鼠T淋巴细胞免疫功能的调节作用.方法 以免疫功能损伤小鼠为研究对象,将实验鼠随机分为5组,每组12只,分别为生理盐水(NS)对照组、环磷酰胺(cy)对照组、Cy+小叶女贞水煎液(小剂量)组、Cy+小叶女贞水煎液(大剂量)组、Cy+女贞子水煎液组.利用流式细胞仪检测实验鼠外周血T淋巴细胞(CD4+、CD8+)的百分率,计算CD4+/CD8+比值,用全自动酶标仪检测外周血IL-2的含量.结果 小叶女贞小剂量组和大剂量组CD4+T细胞、CD4+/CD8+、IL-2的含量分别与环磷酰胺组比较均明显增高,有显著性差异(P＜0.01);与生理盐水对照组比较,小剂量组无显著性差异(P＞0.05)、大剂量组明显增高,有显著性差异(P＜0.01);与女贞子对照组比较,小剂量组结果低,有显著性差异(P＜0.01)、大剂量组无显著性差异(P＞0.05).结论 小叶女贞能使小鼠受损伤的免疫功能得到改善,能提高CD4+T细胞的数量和IL-2含量,对免疫功能的调节作用与剂量成正相关.小叶女贞对T淋巴细胞免疫功能的调节机制是促进T淋巴细胞分化、发育为成熟的CD4+T细胞,达到调节机体细胞免疫功能的作用.
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小叶女贞对小鼠淋巴细胞增殖和IL-2产生的影响
目的:探讨小叶女贞对小鼠淋巴细胞增殖反应和IL-2产生的免疫学作用.方法:用100%小叶女贞水浸出液定期给小鼠灌胃,然后检测小鼠淋巴细胞增殖和IL-2的产生.结果:用药组对以上两项免疫学指标均有显著增强作用,与对照组相比差异均有极显著性(P＜0.01).结论:小叶女贞可明显增强机体免疫功能.
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小叶女贞挥发油化学成分GC-MS分析
目的:分析木犀科女贞属植物小叶女贞挥发油的化学组成.方法:采用水蒸气蒸馏提取挥发油,用GC-MS进行成分分析.结果:利用GC-MS法对小叶女贞挥发油进行了化学组分的定性和定量分析,共分离出76个色谱峰,并且确认了其中35个化合物,占挥发油总量的72.62％.主要成分为十六烷酸(17.28％),其次为(Z,Z,Z)-9,12,15-十八烷三烯酸乙酯(12.13％)、叶绿醇(5.80％).结论:该方法简便、可靠、重现性好.
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前体喷施对小叶女贞叶中红景天苷含量累积的影响
目的:探寻喷施酪醇等前体后红景天苷在小叶女贞叶中累积的规律.方法:采用叶面施肥方式,将酪醇溶液喷施于小叶女贞叶片上.在喷施不同浓度的酪醇溶液和不同的喷施时间间隔后,采用HPLC法对叶中红景天苷含量每天变化的情况进行检测,并测定喷施酪氨酸等前体后小叶女贞叶片中红景天苷含量的变化.结果:喷施酪醇后,小叶女贞叶中红景天苷含量高可增加6.5倍,喷施酪氨酸和对羟基苯丙酮酸均能显著增加红景天苷含量,但喷施酪胺不能.结论:小叶女贞中红景天苷的生物合成很可能是通过酪氨酸转氨代谢途径.通过喷施前体,可有效增加小叶女贞叶中红景天苷的含量,从而使其具有良好的开发利用价值.
