中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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制作兔腰椎终板下缺血模型MRI与病理学变化验证的可行性
背景:目前的椎间盘退变动物模型主要通过改变椎间盘生物力学环境、损伤椎间盘自身结构以及应用基因技术改变动物的遗传性状等诱发退变,但这些方法均为外界人为因素直接作用于椎间盘,与椎间盘退变的自然病程差别较大.目的:评价经皮穿刺兔腰椎终板下椎体注射平阳霉素制作椎体终板下缺血模型的可行性.方法:选取新西兰大白兔46只,每兔设L_5为实验组、L_4为对照组.穿刺腰椎终板下椎体,k注射平阳霉素(2 g/L)1 mL,L_4注射生理盐水1 mL.其中4只兔子术前行腰动脉造影.术后第1,2,3,4,5周,2个月及3个月随机选取6只行MRI检查,并取病理送检.测量对比第4周实验组MRI与病理切片的缺血面积.结果与结论:对照组MRI和病理学检查均无特异性变化,实验组MRI第1,2周变化不明显,第3周出现FST1WI低信号,T2WI及FST2WI呈稍高信号,第4周信号变化更明显;实验组病理第1,2周无特异性变化;第3,4周骨小梁排列杂乱,骨细胞逐渐减少,椎体骨髓内血细胞减少,脂肪细胞增多融合,终板软骨细胞减少、结构紊乱,纤维环及髓核无明显变化;第5周出现椎间盘退变表现;第2,3个月终板下椎体缺血持续存在、椎间盘退变更加明显.实验组第4周MRI与病理切片缺血面积之间有显著正相关性(r=0.965,P<0.001).结果证实,采用经皮穿刺终板下椎体注射平阳霉素的方法可成功制作兔腰椎终板下缺血动物模型,具有创伤小、操作简便、重复性好和成功率高的特点.该模型是研究腰椎及椎间盘退变较理想的一种动物模型.
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构建腭中缝牵张实验大鼠动物模型
背景:以往曾采用猴、犬、猪、兔等大动物作为腭中缝牵张动物模型,但存在费用高,样本量小,检测抗体难获得等缺点.Wistar大鼠头部较宽阔,便于腔方面的操作,且成本低,繁殖率高,作为腭中缝牵张模型,有可能克服以上缺陷.目的:建立大鼠腭中缝牵张实验动物模型,为进一步进行腭中缝牵张的实验动物研究提供基础. 方法:5周龄Wistar雄性大鼠20只,平均体质量65 g,随机分成实验组与对照组,每组10只.实验组采用0.014澳丝弯制双眼圈簧样扩弓装置,插入第一、二磨牙牙间隙,用光固化树脂粘结在大鼠磨牙舌侧进行固位;对照组安装未加力的同型扩弓装置.主动加力1周.在扩弓结束后分别对大鼠腭中缝进行X射线片,组织学观察.结果与结论:上颌骨X射线片发现实验组腭中缝明显扩宽,磨牙明显颊向倾斜.经光镜观察发现,实验组腭中缝偏口腔侧明显增宽,间充质细胞呈梭性,与牵张力方向一致.在其下方出现创伤性炎症反应,有明显的出血区.结果证实,实验大鼠腭中缝牵张动物模型满足实验研究的需要,具有操作简单、设计科学、可重复性强的特点.
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正常孕妇步行时骨盆与胸廓在水平面上的运动协调模式
背景:妊娠期间,女性发生了一系列的生理的和身体的变化,人们常认为妊娠引起肌肉骨骼系统的一定程度的变化,会影响孕妇的姿势或步态运动.目的:观测妊娠步行时水平面上骨盆和胸廓的旋转运动,并进行量化研究,比较正常孕妇和正常女性的差异.方法:选择怀孕20～34周的孕妇志愿者12人,未怀孕妇女13人为对照组.比较孕妇组和对照组的舒适步行速度、骨盆和胸廓在水平方向上旋转运动的幅度及两者间运动协调性的差异.分别测定孕妇组和对照组的舒适步行速度和大的步行速度,分别计算骨盆和胸廓运动的和谐指数,应用相对傅里叶相和偶合力来描述骨盆与胸廓旋转的运动协调特征.结果与结论:孕妇的舒适的步行速度呈显著性下降,孕妇组和对照组的Tempa评分、骨盆和胸廓的旋转运动的和谐指数、相对傅里叶相和偶合力差异无显著性意义.实验未发现妊娠对骨盆和胸廓运动的协调有影响.在运动步态方面,孕妇能够适应怀孕引起的变化.减少舒适步行速度可以使孕妇节约能量消耗.
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双分离法记录Wistar大鼠神经元的全细胞电流
背景:细胞培养与通道电流记录是全细胞膜片钳实验的主要难点.目的:介绍一种简单可行的降低全细胞膜片钳实验方法,将细胞急性分离与电流的分离技术结合起来,以提高工作效率,缩短实验的时间,从根本上降低膜片钳实验的难度.方法:SPF级出生4～7 d的wistar大鼠40只,雌雄不限.采用改良的急性分离的方法制备Wistar大鼠脑皮质细胞,将大鼠脑皮质切成400～600μm厚度的薄片,在人工脑脊液中通混合气静止1 h,并通以氧气.将脑组织块放入含有16 u/mL(typeX)和2 u/mL(type XIV)蛋白水解酶的人工脑脊液中,孵育60 min,清除消化酶.在全细胞电压钳制模式下,保持电位～80 mV,给予-60 mV到60 mV的去极化脉冲刺激,步阶为+10 mV,刺激波宽160 ms.记录到跨膜总电流,在全细胞电极液里面加入70 mmol/LCsCl,70 mmol/L CsF;在外液中先后加入11 μmol/L阻断剂河豚毒素、30 mmol/L的氯化四乙胺、1 mmol/L的4-AP.分别记录内向钠电流,瞬时外向钾电流和延迟整流钾电流,结果用clampfit分析处理.主要观察:①细胞的形态学观察.②全细胞电流的记录.③内向钠电流的记录.④外向钾电流的记录.结果与结论:细胞空间立体结构强,表面光滑,有完整的树突或者轴突,且细胞的活性可以在25℃室温下维持8-10 h.在外液中加入1 μmol/L的河豚毒素基本上可以阻断钠电流;30 mmol/L的氯化四乙胺和1 mmol/L的4-AP可以阻断外向钾电流.结果表明,改良的细胞急性分离方法细胞功能完好.通过电流分离技术,不改变细胞外液和电极液,仅需添加特异阻断剂,可记录到内向钠电流,瞬时外向钾电流以及延迟整流钾电流,较之传统方法可显著提高工作效率.
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Wnt3a转染小鼠胸腺激酶缺陷细胞及对β-连环素蛋白亚细胞分布的影响
背景:Wnt信号通路是动物胚胎发育过程中重要的调控通路,建立Wnt信号通路细胞模型对于研究该通路有重要意义.目的:以Wnt3a真核表达质粒转染小鼠胸腺激酶缺陷细胞,构建能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型,观察经典Wnt信号通路对β-1连环素蛋白亚细胞分布的影响.方法:将扩增真核表达质粒pgk-Wnt3a-pcDNA3.0进行酶切鉴定.应用脂质体转染技术将真核表达质粒pgk-Wnt3a-pcDNA3.0和对照质粒pgk-neo-pcDNA3.0转染入胸腺激酶缺陷细胞,经过G418筛选后挑出细胞克隆,扩大培养.应用RT-PCR技术检测表达产物,应用间接免疫荧光技术检测Wnt3a对鼠胸腺激酶缺陷细胞β-catenin亚细胞分布的影响.结果与结论:Wnt3a质粒经过酶切鉴定证明所扩增的质粒为目的质粒.经过G418筛选3周后,挑选10个稳定转染的细胞克隆,进行RT-PCR检测,可见在L-Wnt3a细胞的cDNA产生1条长度为320 bp亮带,表明扩增产物为所需要的目的片段,Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞后有Wnt3a在mRNA转录水平表达.转染对照质粒的胸腺激酶缺陷细胞cDNA未扩增出目的条带.免疫荧光检测可见Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞后细胞浆中有Wnt3a蛋白表达,转染对照质粒组无表达.Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞核中可见明亮的红色荧光,提示β-连环素蛋白在胸腺激酶缺陷细胞-Wnt3a细胞聚集并进入细胞核中.转染对照质粒的胸腺激酶缺陷细胞浆未见有明显β-连环素蛋白着色,细胞核中无β-连环素蛋白的聚集.构建了能够持续激活Wnt信号通路的体外细胞模型,真核表达Wnt3a质粒转染胸腺激酶缺陷细胞能够获得稳定表达,促进胸腺激酶缺陷细胞浆中β-连环素蛋白向细胞核转移.
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周围神经联合生长因子移植治疗急性脊髓损伤
背景:目前促进神经再生与修复的策略也主要是通过促进神经内在的再生能力和改善再生的微环境两大途径,已有的研究表明联合应用一些治疗手段能更好地促进神经轴突的再生生长.目的:探讨周围神经联合生长因子移植治疗大鼠脊髓损伤的可行性及效果.方法:健康成年雌性SD大鼠60只,随机数字表法分为4组;神经移植组、神经移植联合生长因子组、脊髓横断组、椎板切除组.以T_9为中心纵行切开大鼠皮肤,显露硬膜囊,水平切断脊髓并切除3mm,神经移植组、神经移植联合生长因子组取双侧第8～10对肋间神经各2 cm,将自体肋间神经修剪成合适长度后交叉移植入脊髓缺损处(近端白质与远端灰质、远端白质与近端灰质),神经移植组用纤维蛋白凝胶固定植入的肋间神经,神经移植联合生长因子组用含有2.1 mg/L酸性成纤维细胞生长因子的纤维蛋白凝胶固定植入的肋间神经,缝合硬膜.脊髓横断组断端间旷置,椎板切除组仅行椎板切除术.术后90 d进行体感及运动诱发电位检测,术后70 d进行Basso.Beattie.Bresnahan(BBB)后肢运动功能评分.结果与结论:椎板切除组均引出了体感及运动诱发电位;脊髓横断组未引出体感及运动诱发电位波形;神经移植组3只引出双侧体感诱发电位,4只引出单侧体感诱发电位,4只引出双侧运动诱发电位,3只引出单侧运动诱发电位,神经移植联合生长因子组5只引出双侧体感诱发电位,2只引出单侧体感诱发电位,神经移植联合生长因子组5只引出双侧运动诱发电位,2只引出单侧运动诱发电位.神经移植组、神经移植联合生长因子组大鼠体感及运动诱发电位潜伏期及波幅明显优于脊髓横断组(P<0.01),自体肋神经移植联合生长因子组优于神经移植组(P<0.01).椎板切除组大鼠麻醉清醒后运动恢复正常,脊髓横断组在3个月的生存期内后肢持续伸展、旋转,神经移植组和神经移植联合生长因子组大鼠后肢功能术后3周开始明显恢复,并在整个观察期内逐渐恢复.神经移植组和神经移植联合生长因子组BBB后肢运动功能评分较脊髓横断组明显提高(P<0.01),并且神经移植联合生长因子组较神经移植组高(P<0.01).提示单纯周围神经移植能部分恢复脊髓功能,联合生长因子则能更好地恢复脊髓功能.
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液氮冷冻法制作免股骨头坏死模型:可行,理想与可信
背景:目前缺乏一种理想股骨头坏死动物模型,从而制约了对其进一步的研究.目的:验证以液氮冷冻法制作兔股骨头坏死修复模型的可行行,为后续研究奠定基础.方法:取成年新西兰大白兔20只,双侧进行实验,在不切断股骨头圆韧带、髋关节不脱位的基础上,以液氮棉签连续快速冷冻股骨头25次,约10 s/次.分别于术后第3,7天,2,4,6,8周拍双侧髋关节正位片X射线片、MRI,并进行股骨头标本的大体解剖学观察和组织学观察.结果与结论:在造模3 d时的股骨头组织切片上,冷冻区和周围部的软骨细胞、骨细胞和骨髓组织呈现坏死.2周,可见坏死的骨小粱周围开始出现修复表现.4周,部分出现剥脱,6周,软骨剥脱更加明显,8周,呈骨性关节炎改变,关节软骨剥脱严重,有2例股骨头正常外形改变.证实非髋关节脱位情况下液氮冷冻股骨头,可以成功建立的兔股骨头坏死模型,简便易行成功率高,可作为其后续研究的理想模型.
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力生长因子对免桡骨骨折愈合的作用
背景:目前对力生长因子的研究主要集中在肌肉、神经损伤修复方面,并证实其可明显促进肌肉细胞肥大和神经修复.关于其对骨折愈合的作用还不清楚.目的:观察力生长因子对兔桡骨骨折愈合的作用.方法:随机数字表法将新西兰大白兔分为空白对照组、力生长因子低、高剂量组.通过手术造成大白兔左侧桡骨中段5 mm完全缺损的骨折模型,术后第3天开始,各组分别予以PBS液及质量浓度为0.36,0.72 g/L的力生长因子各0.2 mL,经皮注射至骨折断端,连续注射5 d,1次/d.术后第4,6,8周X射线观察骨折愈合情况.于术后第8周组织学观察各组骨折部位细胞形态学变化.结果与结论:术后第1天活动少,饮食量略减少,2 d后基本恢复正常活动与饮食.3 d内手术切口部位略有肿胀,少量渗血,无明显感染征象,12只兔全部进入结果分析.X射线显示,力生长因子高剂量组第4周时两骨折断端已基本结合在一起,骨皮质基本连续,骨折线模糊,第6周时骨髓腔己基本贯通,第8周时完全贯通,愈合时间较空白对照组、力生长因子低剂量组明显提前,愈合质量高.术后8周,空白对照组出现大量类骨组织,有少量编织骨形成,处于纤维性骨痂向骨性骨痂过度期;力生长因子低剂量组可见大量编织骨形成,处于骨性骨痂期;力生长因子高剂量组大量编织骨已改建为成熟的板层骨,已正处于骨痂改建期,与影像学结果一致.提示力生长因子具有明显促进骨折愈合的作用,并且在一定范围内随剂量的增大效果越明显.
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硬膜外移植自体髓核大鼠背根神经节的非压迫性损伤
背景:新的研究表明,髓核所致的炎性反应是导致坐骨神经痛的重要原因之一,在此过程中背根神经节可能起重要作用,但是其病理生理变化目前尚不完全清楚.目的:探讨在无机械压迫情况下,腰椎间盘髓核突出引起坐骨神经痛的发病机制.方法:10月龄雄性SD大鼠24只,随机分成实验组和对照组,每组12只.切开大鼠尾椎椎间盘,髓核呈胶冻样,取5个髓核并加入50 μL生理盐水,充分搅拌稀释成混悬液备用.实验组大鼠行硬膜外穿刺,注射混悬液到腰椎硬膜外腔制作动物模型.对照组硬膜外腔注射生理盐水.测定大鼠后肢机械刺激缩爪阈值并对疼痛相关行为和背根神经节组织形态学进行观察.结果与结论:在无机械压迫情况下,硬膜外移植自体髓核能使大鼠后肢产生明显的痛觉过敏,背根神经节会出现节细胞肿胀、核膜不清晰、核仁变淡或消失、胞浆出现空泡、尼氏小体颜色变浅分布不均匀、内膜间质增宽、充血和水肿等形态学改变.结果表明,移植自体髓核所致的炎性反应是引起大鼠背根神经节损伤和坐骨神经痛的重要原因之一.
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前交叉韧带切断兔外侧半月板中白细胞介素1β的表达
背景:研究证明,膝关节前交叉韧带切断后,白细胞介素1β是关节软骨退变中一个重要的调控因子,然而白细胞介素1β在外侧半月板退变中有何作用,未见文献报道.目的:观察兔前交叉韧带切断后外侧半月板中白细胞介素1β阳性表达率的变化并探讨其意义.方法:6月龄雄性新西兰大白兔48只,将兔膝关节配对为实验侧和对照侧造模.实验侧行前交叉韧带切断手术,制作兔前交叉韧带断裂模型;对照侧显露前交叉韧带但不行切断.造模后第1,3,6,8周,分别麻醉下随机处死兔12只.进行大体观察和外侧半月板组织学退变评分,免疫组织化学检测白细胞介素1β阳性表达率.结果与结论:前交叉韧带切断后,随时间延长,实验侧外侧半月板组织学退变评分逐渐增高,实验侧各时间组织学退变评分显著高于对照组(P<0.05).各时间点实验侧白细胞介素1β阳性表达率均较对照组增高(P<0.05);第3,6周实验侧白细胞介素1β表达阳性率高于第1,8周(P<0.05),第8周高于第1周(P< 0.05).结果表明,兔前交叉韧带切断后实验侧白细胞介素1β阳性表达率增高,提示自细胞介素1β参与了外侧半月板组织的退变.白细胞介素1β阳性表达率降低并不表示外侧半月板组织退变结束.
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盐酸小檗碱对实验性牙周炎牙周组织及相关细胞因子的影响
背景:盐酸小檗碱的广谱抗菌作用在口腔科主要用于治疗复发性口疮、根尖周炎、放射性口腔黏膜炎和冠周炎等,但其治疗牙周炎的作用机制尚待研究.目的:实验希望通过观察盐酸小檗碱对大鼠实验性牙周炎模型牙周组织及相关细胞因子表达的影响,揭示和认识盐酸小檗碱在口腔组织修复中的作用途径.方法:3月龄健康160～200 g Wistar大鼠60只,采用局部钢丝结扎结合全身肌注醋酸波尼松龙方法,成功建立大鼠实验性牙周炎模型.将造模成功的40只大鼠随机分为模型组(8只)和治疗组(32只),同时取10只正常大鼠作对照.治疗组每日每只大鼠灌服盐酸小檗碱0.06 g/kg,模型组灌服等剂量生理盐水.治疗组动物分别于灌药后第1,2,3,4周末处死(每次8只),模型组和正常对照组第4周末处死.主要观察:①口腔大体观察及X射线检查.②牙周组织病理学检查.③采用免疫组织化学SABC法检测肿瘤坏死因子α、骨钙素、白细胞介素1β、白细胞介素6水平.结果与结论:①模型组大鼠在注射激素后牙龈组织糜烂溢脓;治疗组上述症状缓解;正常组牙周组织无异常.X射线观察模型组牙槽嵴吸收,根间阴影明显.②牙周炎模型组牙周组织出现明显的病理改变,其肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6表达明显高于正常组,骨钙素表达明显低于正常组(P<0.05);治疗组的牙周组织显示炎症修复期的病理改变,其肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6表达明显低于模型组,骨钙素明显高于模型组(P<0.05).结果提示,盐酸小檗碱能促进大鼠实验性牙周炎模型牙周组织的修复和骨钙素的表达,同时抑制肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6的表达.
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雷公藤、人参与芳维甲酸乙酯对培养光老化真皮成纤维细胞的影响
背景:基质金属蛋白酶在衰老皮肤真皮成纤维细胞的表达增强,雷公藤红素及人参皂甙具有免疫抑制、抗抗衰老等作用.维甲酸对光老化皮肤有治疗作用,但还存在较多的毒副作用.目的:对比观察人参皂甙Rd、雷公藤红素与芳维甲酸乙酯对体外培养的人类成纤维细胞基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3表达的调节作用.方法:标本取之于四川省泸州医学院附属医院普外科健康新生儿包皮环切术后真皮,家属知情同意.分离及体外培养人体皮肤成纤维细胞.实验分为①正常对照组:不作任何处理.②阳性对照组:给予紫外线照射(80 kJ/m~2)、8-甲氧补骨脂素(100 mg/L).⑨芳维甲酸乙酯实验组:紫外线照射+8-甲氧补骨脂素+芳维甲酸乙酯.④雷公藤红素组:紫外线照射+8-甲氧补骨脂素+雷公藤红素.⑤人参皂甙Rd组:紫外线照射+8-甲氧补骨脂素+人参皂甙Rd.雷公藤红素组;按雷公藤红素剂量分为10,20,40 mg/L3组;人参皂甙Rd组:按人参皂甙Rd剂量分为20,50,100 mg/L 3组.观察各组成纤维细胞基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3免疫组织化学染色结果.结果与结论:阳性对照组基质金属蛋白酶1和基质金属蛋白酶3表达明显增强,与对照组之间差异有显著性(P<0.05);芳维甲酸乙酯实验组、雷公藤红素组各组、人参皂甙Rd组各组,与阳性对照组比较,表达明显减弱(P<0.05);芳维甲酸乙酯实验组、雷公藤红素组各组、人参皂甙Rd组各组之间比较,差异无显著性(P>0.05).结果表明,①人参皂甙Rd、雷公藤红素可以达到芳维甲酸乙酯一样治疗和预防皮肤光老化的作用.②人参、雷公藤等中药的毒副作用小的可能原因是其对机体作用的有效浓度范围较大.⑨人参皂甙Rd、雷公藤红素和芳维甲酸乙酯治疗和预防皮肤光老化的机制主要是通过调节基质金属蛋白酶1、基质金属蛋白酶3的表达.
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小干扰RNA靶向血管内皮生长因子基因抑制胆囊癌细胞的增殖体内外实验
背景:已有研究发现RNA干扰可通过抑制血管内皮生长因子基因表达抑制肿瘤细胞增殖,但目前关于应用RNA干扰胆囊癌血管内皮生长表达的研究国内外尚无相关报道.目的:构建并筛选靶向血管内皮生长因子的shRNA,观察RNA干扰血管内皮生长因子的效果及对胆囊癌细胞增殖的影响.方法:设计VEGF-shRNA片段,连接到pCYU6/GFPINeo-shRNA质粒载体上.shRNA转染胆囊癌细胞.建立裸鼠胆囊癌模型,随机分成空白组、阴性对照组、实验组(干扰pShRNA-VEGF2),每组6只.瘤内注射shRNA.荧光显微镜观察细胞生长状态,半定量反转录-聚合酶链反应法与实时荧光定量聚合酶链反应检测RNA干扰效果,观察胆囊癌裸鼠模型肿瘤体积变化. 结果与结论:RNA干扰血管内皮生长因子后,胆囊癌细胞细胞变圆,皱缩,部分细胞死亡脱落.ShRNA片段血管内皮生长因子2、血管内皮生长因子1均可抑制VEGF mRNA表达,抑制率可达86%,82%.裸鼠肿瘤模型中实验组肿瘤与对照组、阴性组相比明显变小,且生长缓慢(P<0.05),而对照组和阴性组在肿瘤大小及生长趋势上没有明显的差别.实验构建的hVEGF-shRNA质粒表达载体通过抑制血管内皮生长因子的表达,抑制胆囊癌细胞增殖,从而达到间接治疗肿瘤的目的.
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杜仲对大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素表达的影响水提液与醇提液有区别吗?
背景:以往实验证实杜仲能促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,但对促进成骨分化的分子机制报道很少.目的;观察中药杜仲水,醇提取物对大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素表达的影响方法:盐杜仲2 g,分别加蒸馏水或甲醇至15 mL,室温振荡1 h,静置过夜后,15 000r/min离心10 min,弃沉淀.水浸上清不经处理即得水提取物;甲醇浸上清经真空浓缩,再加水至15 mL溶解剩余物后,得醇提取物水、醇提取物,用0.22 μm滤膜过滤后于-20℃保存.取2月龄SD大鼠6只,体外培养至第3代SD大鼠骨髓基质细胞进行杜仲水,醇提取物诱导,诱导物分为1×10~(-2),1 ×10~(-3),1×10~(-4)和1 ×10~(-5)4个稀释度:阴性对照组加入PBS;诱导培养6 d.以免疫细胞化学法测定诱导6 d的骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素表达.应用反转录一聚合酶链反应方法测定1×10~(-3),1×10~(-4)稀释度诱导3 d的骨髓基质细胞骨桥蛋白和骨保护素的基因表达.结果与结论:细胞免疫化学显示,杜仲水,醇提取物对大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白的表达均有显著的刺激作用,以1×10~(-4)的稀释度作用强,且醇提取物的作用大于水提取物;骨保护素的表达却无显著变化.反转录-聚合酶链反应显示,水提取物对诱导3 d后大鼠骨髓基质细胞骨桥蛋白的基因表达量显著高于醇提取物,骨保护素未检测出表达.证实杜仲水,醇提取物诱导骨髓基质细胞成骨分化与刺激骨桥蛋白表达相关,与骨保护素无关;水提取物促进骨髓基质细胞骨桥蛋白表达早于醇提取物.
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碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素致肾小管上皮损伤的拮抗效应
背景:体内实验证实成纤维细胞生长因子能有效保护庆大霉素致肾小管上皮细胞的损伤,但对体外培养细胞的作用如何不多见.目的:在建立庆大霉素肾毒性体外细胞模型的基础上,观察不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对庆大霉素肾毒性的保护作用.方法:采用酶加网筛方法分离纯化昆明小鼠肾小管上皮细胞,调整细胞浓度为1×10~8L~(-1),将细胞悬液移入96孔细胞培养板,分组培养:空白对照组:正常培养:庆大霉素组:10,30,50 μL/孔(即400,1 200,2 000 U/孔)记为G1、G2、G3:碱性成纤维细胞生长因子组:20,50,80μL/孔(HP 90,225,360 ng/孔)记为B1、B2、B3:庆大霉素加碱性成纤维细胞生长因子干预组:先加碱性成纤维细胞生长因子12 h后,再加庆大霉素12 h培养,分9个剂量组,即G1B1、G1B2、G1B3、G2B1、G2B2、G2B3、G3B1、G3B2、G3B3,每组4复孔.观察细胞形态及数量变化.结果与结论:庆大霉素对肾小管上皮细胞的损伤呈剂量依赖性,中、高浓度组的上皮细胞皱缩,变圆,肿胀,贴壁差,内部胞质破坏严重,结构紊乱,低浓度组细胞数量改变不明显,并且开始有成纤维细胞出现;碱性成纤维细胞生长因子各组细胞饱满、折光性强,数量明显增多,50 μL/孔浓度以上效果显著,与80 μL/孔差异无显著性意义;庆大霉素加碱性成纤维细胞生长因子干预组中低浓度庆大霉素组细胞未见明显损害,细胞数量反而增多,中浓度庆大霉素组损害的细胞崩解减少、细胞皱缩和贴壁差的程度有所减轻,高浓度碱性成纤维细胞生长因子干预后细胞形态良好,但高浓度庆大霉素所致细胞肿胀、坏死损伤任何浓度的碱性成纤维细胞生长因子干预都无法改善.50 μL/孔碱性成纤维细胞生长因子对中、低浓度庆大霉素所致肾毒性有拮抗作用,对高浓度庆大霉素所致肾毒性无保护作用.
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巨噬细胞集落刺激因子/核因子kB受体激活物配体体外诱导培养高纯度破骨细胞:佳剂量探讨
背景:巨噬细胞集落刺激因子(macrophage colony-stlimulating factor,M-CSF)/核因子_kB受体激活物配体(receptor activatorof nuclear kappa B ligand,RANKL)两种细胞因子协同诱导骨髓干细胞形成破骨细胞是一种较新的,可以获取较高纯度和数量破骨细胞的诱导培养法,但尚缺乏统一的培养标准.目的:建立有效的M-CSF/RANKL诱导小鼠骨髓干细胞诱导分化破骨细胞的培养体系.方法:分离小鼠四肢骨获取骨髓干细胞.将小鼠骨髓干细胞在含有M-CSF的α-MEM培养基中培养24 h,调整细胞浓度为10~7,10~8,10~9L~(-1).然后在培养基中同时加入10μg/LM-CSF和不同质量浓度(20,50,100μg/L)RANKL.行抗酒石酸酸性磷酸酶染色观察干细胞向破骨细胞的转变过程及细胞形态和染色情况,并对各组染色阳性的破骨细胞进行计数,比较不同诱导条件对破骨样细胞数量的影响. 结果与结论:培养3 d后可见少量破骨样细胞,胞质内含许多红色抗酒石酸酸性磷酸酶染色阳性颗粒,细胞内可见淡染的双核;培养6 d后可见大量染色阳性破骨样细胞;培养9 d后出现多核巨型染色阳性破骨样细胞,细胞明显增大,细胞核可达到3个以上.在固定细胞接种浓度条件下,RANKL质量浓度为100 μg/L时诱导分化形成的破骨样细胞数量较另两质量浓度增多(P<0.05);在固定RANKL质量浓度条件下,细胞浓度为10~5 L~(-1)时诱导分化形成的破骨样细胞数量较另两细胞接种浓度增多(P<0.05):细胞接种浓度为10~8L~(-1),RANKL质量浓度为100 μg/L时诱导分化形成的破骨样细胞数量高于其他条件组合(P<0.05).说明在M-CSF/RANKL诱导小鼠骨髓干细胞分化培养破骨细胞的体系中,RANKL佳质量浓度为100 μg/L,佳细胞接种浓度为10~8L~(-1).
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不同冷冻方法对人卵巢组织血管内皮生长因子表达及血管生成的影响
背景:人卵巢组织冷冻已成为一种保存生育能力的手段,卵巢组织移植后必须经过血管重建过程才能恢复血供,冷冻保存和复苏技术是影响移植后卵巢组织血管重建的关键.目的:比较新型玻璃化冷冻和慢速冷冻后人卵巢组织血管内皮生长因子表达情况及微血管密度,探讨不同冷冻方法对人卵巢组织血管重建的影响.方法:8份卵巢组织标本取自子宫内膜癌患者手术切除的正常卵巢组织,将每份卵巢皮质切成1.5 mm×1.5 mm×1.0 mm大小的组织块共12块后,随机数字表法分为3组:对照组(新鲜组)、新型玻璃化冷冻组和慢速冷冻组.将新型玻璃化冷冻组卵巢组织块依次在含体积分数7.5%乙二醇+体积分数7.5%二甲基亚砜+体积分数20%胎牛血清的TCM-199培养液和含体积分数15%乙二醇+体积分数15%二甲基亚砜+0.5 mol/L蔗糖的TCM-199培养液中平衡脱水,然后直接浸入液氮并装入冷冻管保存,解冻时按浓度梯度1.0,0.5,0.25 mol/L蔗糖和含体积分数20%牛血清的TCM-199培养液依次洗脱冷冻保护剂.将慢速冷冻组人卵巢组织块放入盛有1 mL冷冻液(含1.5 mol/L二甲基亚砜+体积分数20%牛血清+0.1mol/L蔗糖的TCM-199培养液)的1.8 mL冷冻管内平衡,然后放入程序冷冻仪中按设定程序进行冷冻.解冻时按浓度梯度1.0 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.5 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖、0.25 mol/L二甲基亚砜+0.1 mol/L蔗糖和0.1 mol/L蔗糖依次洗脱冷冻保护剂.冻融组及对照组均进行体外培养.免疫组织化学观察培养0,2,4,6 d各组人卵巢组织血管内皮生长因子和CD34表达情况,并进行微血管计数.结果与结论:3组人卵巢组织培养前后间质细胞中均见血管内皮生长因子成斑片状弱表达,培养2 d血管内皮生长因子表达均增加并达到峰值,培养4 d均开始减弱,6 d时进一步减弱;与慢速冷冻组相比,新型玻璃化冷冻组血管内皮生长因子表达更接近对照组.3组人卵巢组织培养2 d微血管密度均增加并达到峰值,对照组和新型玻璃化冷冻组明显高于慢速冷冻组(P<0.05):慢速冷冻组培养4 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05);3组培养6 d时微血管密度较培养2 d时显著下降(P<0.05).与慢速冷冻法相比,新型玻璃化冷冻法能更好地保存人卵巢组织间质细胞和细胞外基质,对卵巢组织血管内皮生长因子表达及微血管生成的影响更少.
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成骨细胞对葡萄糖水平的感知作用
背景:新近研究表明,骨钙素可提高胰岛素分泌水平、胰岛素敏感性,并且可阻止脂肪的积累,参与糖脂代谢,发挥此作用的主要是羧化不全骨钙素.目的:观察不同浓度葡萄糖对成骨细胞羧化不全骨钙素分泌水平的影响.方法:切下人肋骨骨小梁剪碎,胰酶消化后以PBS彻底冲洗直至于倒置显微镜下观察骨片表面及清洗液中无粘着及漂浮的细胞,以DMEM完全培养液清洗骨小梁1次,移入培养瓶内培养,每周更换培养液1次,1周后可见成骨细胞自骨片移出,4～6周细胞融合成单层可作传代培养.取生长活跃的传二三代细胞接种于6孔板中分成5组,待细胞融合至80%以含5.6,7.6,9.6,12.6,20.6 mmol/L葡萄糖的培养基刺激成骨细胞,同时加入维生素K_2使其在培养液中终浓度为10~(-5)mol/L.培养半小时后收集上清液,以放免法检测成骨细胞培养上清液中羧化不全骨钙素水平,并以上清液中总骨钙素进行校正,计算羧化不全骨钙素率.结果与结论:在不同葡萄糖浓度下成骨细胞羧化不全骨钙素分泌水平不同,7.6,9.6,20.6 mmol/L葡萄糖浓度组羧化不全骨钙素率高于5.6 mmol/L葡萄糖浓度组[(0.27±0.02),(0.29±0.04),(0.12±0.02)%,P<0.05].提示成骨细胞可感知葡萄糖浓度变化,在5.6～9.6mmol/L葡萄糖刺激下成骨细胞可呈剂量依赖性地提高自身羧化不全骨钙素分泌水平,进一步提高葡萄糖浓度时羧化不全骨钙素水平反而降低.
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不同浓度凝血酶对富血小板血浆修复颅骨缺损的影响
背景:富血小板血浆生物功能的发挥受多种因素的控制,如个体差异、富血小板血浆的使用浓度、富血小板血浆载体、富血小板血浆激活方式等均可影响富血小板血浆的作用.目的:观察不同浓度凝血酶对富血小板血浆修复颅骨缺损的影响.方法:抽取兔耳中央动脉全血制备富血小板血浆,稀释富血小板血浆,使其中血小板终计凝数约为全血的5倍.在16只新西兰兔颅骨顶部分别制备4个直径为8 mm的全厚层骨缺损,按随机数字表法将60 U/mL凝血酶+富血小板血浆+β-磷酸三钙、1 000 U/mL凝血酶+富血小板血浆+β-磷酸三钙、富血小板血浆+β-磷酸三钙与单纯β-磷酸三钙植入4个缺损区域内.术后1,3个月X射线、光镜观察颅骨修复情况,计算各组新骨生成面积百分数.结果与结论:术后1个月,各组缺损边缘较清晰,缺损周边有不同程度新骨生成,β-磷酸三钙颗粒部分降解,降解处由新骨代替,仅见少量骨陷窝,缺损中心β-磷酸三钙周围可见纤维包绕,仅少数标本可见新骨生成;X射线显示边界清晰,缺损区密度较为均一:各富血小板血浆组新骨生成百分数均高于β-磷酸三钙组(P<0.05),但富血小板血浆各组间差异无显著性意义(P>0.05).术后3个月,各组缺损边界不清,新骨生成量增加,缺损周边β-磷酸三钙颗粒部分或全部降解并由新生骨所代替,部分区域出现骨小梁,新生骨中骨陷窝增多,多数标本缺损中央有新骨生成;X射线显示各组缺损边缘模糊不清,缺损周边部分密度高于缺损中心部位,与其他正常部位骨密度相当;各富血小板血浆组新骨生成百分数亦明显高于β-磷酸三钙组(P<0.05),富血小板血浆+β-磷酸三钙组高于其他3组(P<0.05),两凝血酶组差异无显著性意义(P>0.05).提示富血小板血浆可促进新西兰兔颅骨缺损修复,60,1 000 U/mL凝血酶对富血小板血浆修复新西兰兔颅骨缺损的作用无影响,可能与并未找到凝血酶的佳浓度有关.
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硝酸镓对雌激素缺乏性骨质疏松大鼠胶原和骨钙蛋白的影响
背景:镓是一种人体内非必需微量元素.体内实验已证实,镓可直接抑制骨溶解,阻止骨钙释放,增加骨中钙含量,作为一种新的治疗代谢性骨病的药物,其抗骨转化机制尚不清楚.目的:观察硝酸镓对骨质疏松大鼠胶原和骨钙蛋白的影响.方法:雌性SD大鼠90只随机数字表法分为2组:对照组(n=20),显露双侧卵巢后缝合关闭腹腔;骨质疏松组(n=70),切除双侧卵巢建立骨质疏松大鼠模型.两组各随机取8只采集血、骨标本观察雌激素缺乏性骨质疏松模型复制情况.造模后骨质疏松组(n=62)随机数字表法分为4组:骨质疏松对照组(n=16)生理盐水腹腔注射,3次/周;低剂量镓盐组(n=16)腹腔注射硝酸镓,3次/周;高剂量镓盐组(n=15)按2 mg/kg腹腔注射硝酸镓,3次/周;雌激素组(n=15)腹腔注射雌二醇,3次/周.治疗12周后,检测骨标本中骨胶原、骨钙蛋白和羟脯氨酸水平.结果与结论:与对照组比较,骨质疏松对照组胶原含量降低(P<0.05),氨基己糖和羟脯氨酸含量升高(P<0.05),硫酸基差异无显著性意义.经镓盐及雌激素治疗后,胶原含量升高(P<0.05),氨基己糖和羟脯氨酸含量降低(P<0.05).高剂量镓盐组较低剂量镓盐组效果明显(P<0.05),与雌激素组效果相当(P>0.05).证实硝酸镓通过提高胶原含量,降低羟脯氨酸含量改善骨质疏松症骨代谢状态,2 mg/kg硝酸镓可取得类似雌激素治疗效果.
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永生化人前软骨干细胞株的构建
背景:前软骨干细胞体外培养增殖能力有限,但永生化细胞株可以提供大量性状稳定的永生化细胞,并且猿肾病毒40大T抗原基因(simian virus 40 large tumor antigen,SV40Tag)是较为常用且有效的体外永生化细胞的基因片段之一.目的:以SV40Tag转染的人前软骨干细胞构建永生化人前软骨干细胞株.方法:采用酶消化法及免疫磁珠筛选技术分离纯化人胚胎前软骨干细胞.利用脂质体介导基因转染技术将含有SV40Tag的质粒pCMVSV40T/PUR转染原代胚胎前软骨干细胞,以未转染细胞作阴性对照.阳性克隆扩大培养,观察细胞形态学以及传代复苏情况,计算细胞存活率和群体倍增时间,绘制细胞生长曲线.以免疫荧光细胞化学技术检测永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3,以RT-PCR检测永生化人前软骨干细胞及人前软骨干细胞中SV40Tag和成纤维生长因子受体3表达.结果与结论:贴壁培养的永生化人前软骨干细胞形态与原代人前软骨干细胞形态无明显差别.传代、冻存、复苏对人永生化前软骨干细胞的存活率无影响,第6,10代人前软骨干细胞的存活率降低(P<0.01).与第6,10代人前软骨干细胞相比,永生化人前软骨干细胞增殖较旺盛,群体倍增时间短、增殖率高(P<0.01).第2代永生化人前软骨干细胞成纤维生长因子受体3染色阳性.成纤维生长因子受体3的RT-PCR结果显示在约400 bp处有一特异形扩增条带,SV40Tag的RT-PCR结果显示在约560 bp处有一特异形扩增条带,未转染的原代细胞未见条带.提示以免疫磁珠筛选技术及脂质体转染技术成功构建了SV40Tag永生化人前软骨干细胞株.
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复合振动对卵巢切除大鼠骨质量的作用
背景:目前所使用的全身振动防治骨质疏松所需振动强度较大,人体不适感较强.作者设计了复合振动,前期实验发现复合振动可在更低强度下有效预防卵巢切除大鼠的骨密度下降. 目的:课题创新性提出低强度复合振动可维持生长期卵巢切除SD大鼠骨质量的理论假设,并期望实验结果加以验证.方法:SPF级4月龄雌性未育SD大鼠32只,随机分为正常对照组、卵巢切除组以及振动1、振动2组,每组大鼠均为8只.振动1组接振45～55Hz,0.05～0.1 g;振动2组接振45～55Hz,0.12～0.21 g.振动20min/次,1次/d,5次/周,休息间隔不大于2d.实验时间13周.观察振动干预前后大鼠活体骨密度,体外标本骨微结构以及生物力学性能. 结果与结论:卵巢切除组腰椎骨密度下降(P<0.05),而正常对照组与两振动组有显著性增加,股骨骨密度均增加,组间差异无显著性意义;卵巢切除各组骨微结构参数均明显下降,但振动2组骨小梁数量、骨小梁厚度、骨小梁间距、骨体积分数相对于卵巢切除组有显著改善:腰椎骨强度值两振动组较卵巢切除组显著增加(P=0.025、0.006),与正常对照组比较差异无显著性意义.实验结果证明,特定的复合振动舒适感较好的低强度下可以有效预防卵巢切除SD大鼠骨密度下降,减轻骨微结构破坏程度,维持骨强度,具有改善卵巢切除大鼠骨质量的作用和潜在的预防骨质疏松作用.
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反转录病毒载体介导转化生长因子β_1基因体外转染兔膝关节软骨细胞的表达
背景:将功能基因片段整合到基因载体内,再将基因载体转染入靶细胞中或转染入关节腔内,通过转基因的靶细胞持续大量分泌功能基因产物,在一个较长的时期内保持局部治疗浓度,可修复关节软骨损伤.目的:以重组反转录病毒载体介导转化生长因子β_1体外转染兔膝关节软骨细胞,观察其表达情况及其对软骨细胞生物学性状的影响.方法:采用胰酶消化法分离培养兔软骨细胞.载体经PLNCX_2 Hind Ⅲ/Not Ⅰ双酶切、去磷酸化后,与载体pDsRed_2双酶切得到大的部分多克隆位点和RFP基因连接,构建PLNCX_2-RFP.转化生长因子β_1基因从PGEMT-TGF中扩增,经双酶切后与PLNCX_2-RFP连接,构建PLNCX_2-TGFβ_1-RFP.包装反转录病毒载体,并检测病毒上清滴度.将培养的兔膝关节软骨细胞分组转染:对照组(不做任何转染)、转染PLNCX_2组、转染PLNCX_2-TGFβ_1-RFP组,持续筛选2周,观察细胞变化.收集稳定转染的细胞上清液,以NO检测试剂盒检测基因转染对软骨细胞的影响,以ELISA法检测细胞培养上清液中人转化生长因子β_1表达.结果与结论:重组基因PLNCX_2-TGFβ_1-RFP经酶切鉴定测序TGFβ_1、RFP、序列均正确,表明构建成功预期的真核表达载体PLNCX_2-TGFβ_1-RFP.转染到包装细胞并筛选培养后,病毒滴度为1×10~6CFU.稳定转染软骨细胞后可观察到红色荧光,证明转染成功.持续筛选2周,散在贴壁细胞形成阳性克隆,逐渐弥漫融合,并有细胞簇出现,双核多见,细胞增生活跃.转染PLNCX_2-TGFβ_1-RFP组NO浓度高于对照组、转染PLNCX_2组(P<0.05),对照组、转染PLNCX_2组间差异无显著性意义.对照组与转染PLNCX_2组均无转化生长因子β_1表达,转染PLNCX_2-TGFβ_1-RFP组转化生长因子β_1质量浓度为(28.08±3.73)ng/L.提示反转录病毒载体PLNCX_2介导的人转化生长因子β_1能有效转染到兔膝关节软骨细胞并获得稳定表达,同时转染后的软骨细胞增生活跃.
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软组织侧貌修复过程中拔牙与非拔牙矫治影响的Meta分析
目的:分析面部软组织侧貌修复过程中拔牙与非拔牙矫治的影响效应.方法:以正畸矫治,拔牙矫治,软组织侧貌,orthodontics.corrective,tooth extraction,soft tissue profile为检索关键词,应用计算机检索近10年中国期刊网全文数据库、万方数据库、中文科技期刊全文数据库、CBM文章库、Medline(ovid)、Sciencedirect以及手工检索并辅以文章追溯的方法收集国内、国外学者10年内公开发表的有关拔牙与非拔牙矫治软组织侧貌比较的文献.运用meta分析技术对拔牙与非拔牙矫治前后上下唇与审美平面及软组织平面的距离进行综合定量分析,根据资料异质性检验,采用固定效应模型及随机效应模型,计算合并加权均数差及其95%Cl.使用Revman 5.0进行数据处理.结果:共纳入文献5篇,共纳入患者356例.资料异质性检验显示,下唇与审美平面及软组织平面距离变化的异质性检验Ⅰ~2<50%,没有异质性,采用固定效应模型.上唇与审美平面及软组织平面距离>50%,具有异质性,采用随机效应模型.Meta分析结果显示,除上唇与审美平面距离外,上唇与软组织平面、下唇与审美平面及软组织平面距离合并加权均数差及95%Cl均具有显著性意义.结论:拔牙矫治明显减小了下唇与审美平面、软组织平面的距离以及上唇与软组织平面的距离.
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骨髓间充质干细胞向纤维软骨细胞表型的诱导分化
背景:半月板损伤后自行修复能力有限,组织工程技术为半月板损伤后修复开辟了一条新的途径.骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能,有可能成为半月板组织工程理想的种子细胞.目的:观察体外培养的猪骨髓间充质干细胞在诱导培养液作用下向纤维软骨细胞表型分化的可行性.方法:采用全骨髓培养法分离培养猪骨髓间充质干细胞.取第3代的骨髓间充质干细胞,实验组以2.0×10~4/cm~2细胞密度接种于24孔板,在含有转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ、地塞米松及抗坏血酸的DMEM-LG完全培养液中诱导分化,对照组以2.0×10~4/cm~2细胞密度接种于24孔板,加入不含诱导因子的DMEM-LG完全培养液.在诱导第7,14,21天分别行甲苯胺蓝染色、免疫细胞化学染色检测其分化结果.结果与结论:①第2代骨髓间充质干细胞的群体倍增时间短约为2 d,第4代以后相对延长,为5～9 d.②诱导后的骨髓间充质干细胞由梭形向多角形、多边形转变.③实验组可见胞浆呈明显的紫蓝色,尤其细胞密集生长的区域蓝染较深,染色强度随诱导时间延长而增强.对照组的骨髓间充质干细胞只有核蓝染.④实验组和对照组Ⅰ型胶原免疫细胞化学染色均阳性,各期染色无明显差异.对照组未见Ⅱ型胶原表达,实验组诱导14 d后可见Ⅱ型胶原能稳定的表达.提示骨髓间充质干细胞在体外诱导培养下可分泌纤维软骨细胞特征性细胞外基质,作为半月板组织工程种子细胞来源可行.
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实时荧光定量PCR技术的理论研究及其医学应用
背景:实时荧光定量PCR是指在PCR反应体系中加入荧光基团,利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程,后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法.目的:对实时荧光定量PCR的理论进行研究并探讨其在医学方面的应用和进展.方法:以real.time fluorescence quota PCR,theorem,application为检索词,检索PubMed数据库(2000-01/2008-12).以实时荧光定量PCR,原理,应用为检索词,检索万方数据库(2000-0112008-12),清华同方中文系列数据库(2000-01/2008-12).文献检索语种限制为英文和中文.以细胞因子和肿瘤耐药基因的表达为评价指标.纳入实时荧光定量PCR技术的方法学研究和实时荧光定量PCR技术的医学应用研究.排除重复性研究和Meta分析.结果与结论:实时荧光定量PCR技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃,而且与常规PCR相比,它具有特异性更强、灵敏度高、重复性好、定量准确、自动化程度高、全封闭反应等优点,成为分子生物学研究中的重要工具.实时荧光定量PCR的应用范围非常广泛,包括mRNA表达的研究、DNA拷贝数的检测、单核苷酸多态性的测定等,已广泛应用于医学临床,它能对结核分枝杆菌、乙型、丙型肝炎、爱滋病病毒、淋球菌、沙眼衣原体等病原体进行准确的定量检测.其定量范围极宽,无需做梯度稀释,特异性更强,克服了假阳性.由于传统的PCR技术不能准确定量,使其在实际应用方面受到很大限制.因此,对PCR产物进行准确定量,尤其是病毒性病原的动态监控,成为迫切需要.
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组织工程皮肤的生物学特性及其临床应用评价
背景:尽管组织工程皮肤已应用于皮肤缺损的修复治疗,但远未达到完全代替永久性皮肤的程度.目的:探讨不同类型组织工程皮肤的生物学特性及其临床应用评价.方法:应用计算机检索Pubmed数据库(1990-01/2005-12),检索词为"tissue-engineered skin";应用计算机检索CNKI数据库(2002-01/2007-12),检索词为"组织工程皮肤". 结果与结论:计算机初检得到226篇文献,阅读标题和摘要进行初筛,排除因研究目的与此文无关或内容重复性的研究,共保留11篇文献进行分析.皮肤组织工程学目的是创建出组织学及功能特性上接近人类皮肤组织的皮肤替代物,尽管目前已经有多种较为成熟的组织工程皮肤产品应用于临床,并且又研制了多种人工皮肤类型,但是它们大多数只是在结构上与人体皮肤类似,只具有皮肤的屏障功能,由于缺乏皮肤附件,所以它们并不具备完整的皮肤功能,并没有达到真正的皮肤重建.理想的皮肤替代物应具有表皮层和真皮层,真皮层可以快速的血管化和神经再分布,可促进快速的生理性的伤13修复;表皮层可以快速地获得充分的屏障和保护功能,与伤口创面充分一体化.一种良好的真皮载体除了应具备较好的组织相容性外,还必须具有一定的理化性能,如强度、柔软度、弹性、透气、透湿性能,才能保证真皮和创面贴附良好,为细胞生长提供理想的纤维支架,从而促进自体皮生长.组织工程皮肤应用前景良好,但目前在生物相容性、皮肤功能重建等方面仍存在各种问题需要解决.
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织构复合水化体系的假说第四报:水复合方式初探
背景:人体组织中的水分子和生物大分子结合形成水复合物.不同类型的大分子与水分子复合的方式也不同.目的:讨论水分子和生物大分子进行复合的基本方式.方法:提出了织构复合水化体系(TCHS)的理论假说.通过计算机检索相关文献,对这些问题展开讨论.结果与结论:根据水在水复合体中的作用特点,可以分类为如下4种复合方式.①表面复合:球状蛋白质分子或DNA分子表面形成水复合膜层.水膜层显示水分子运动速度和水化密度由表及里逐渐减弱.水复合膜确保大分子的几何形态和物理状态稳定,而且在TCHS形成中发挥重要作用.②溶胀复合:由于糖胺聚糖的强烈水合作用,水复合的蛋白聚糖发生溶胀,显示高黏度和水凝胶特性.它在结缔组织中发挥重要的力学贡献,如赋予软骨以强大的抗变形能力.③疏水复合:在疏水作用下磷脂分子经结构重排形成脂双分子层结构(生物膜).该亲水-疏水-亲水的"三明治"结构,有助于自身的力学稳定、与膜蛋白的结合、跨膜运输等.④缝隙复合:细胞内外大量存在着纳米尺度的狭窄空间,位于其中的水溶液因水分子发生重排而物性异常,如黏度增高、冰点下降等.缝隙复合和表面复合两者具有某些共性,前者可以看作是后者的一种特例.上述的分类方法不具有绝对的涵义.但是合理运用这些水复合方式将有助于研究织构复合水化体系的理论.
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绝经妇女体成分与代谢综合征组分的相关性
目的:了解绝经妇女代谢综合征各组分异常的发生现状,以期得到预测绝经妇女代谢综合征各组分异常的体成分敏感指标.方法:选取2006-07/2007-08在北京妇产医院体检并被确诊为自然绝经的妇女181名.年龄41～60岁,绝经年限1～9年.测量181名绝经妇女身高、体质量、腰围、臀围、血压及腹部矢状径,测定其卵泡刺激素、黄体生成素、雌二醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、空腹血糖及体脂含量.观察绝经妇女代谢综合征各组分异常的发生情况.消除年龄、绝经年限及雌二醇水平的影响,对绝经妇女体成分指标与代谢综合征各组分进行偏相关分析.预测绝经妇女代谢综合征各组分发生异常的体成分敏感指标的选取.结果:①绝经妇女中心型肥胖(腰围≥80 cm)、高三酰甘油(三酰甘油≥1.7mmol/L)、低高密度脂蛋白胆固醇(高密度脂蛋白胆固醇<1.29 mmol/L)、高血压(收缩压≥130 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)或舒张压≥85 mm Hg)、高血糖(空腹血糖≥5.6 mmol/L)的患病率分别为48.1%,31.5%,16.6%,38.7%,50.3%.②消除年龄、绝经年限及雌二醇水平的影响,体成分指标(体质指数、腰围、腰臀比、腹部矢状径、体脂含量)与三酰甘油、收缩压、舒张压、空腹血糖呈正相关,与高密度脂蛋白胆固醇呈负相关.③预测绝经妇女代谢综合征各组分发生异常的敏感指标及其临界值分别为:高三酰甘油:体质指数≥24.845 kg/m~2;低高密度脂蛋白胆固醇:腹部矢状径≥18.85 cm;高血压:体质指数≥23.33 kg/m~2;高血糖:腹部矢状径≥18.10 cm或体脂含量≥36.515%.结论:中心型肥胖及高血糖是绝经妇女常见的代谢紊乱.肥胖是绝经妇女代谢综合征各组分发生异常的独立危险因素.初步发现预测绝经妇女代谢综合征各组分发生异常的体成分敏感指标及其临界值.
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在糖尿病肾病过程中血清骨保护素及骨密度的变化
背景:目前人们对糖尿病肾病过程中所致肾性骨病骨保护素的关系仍不清楚.目的:探索2型糖尿病肾病过程中患者骨密度、血清骨保护素水平的变化及其间的相关性.方法:选择2型糖尿病患者104例,根据肾小球滤过率将患者分为5组:单纯糖尿病组、肾脏轻,中,重度损伤组、肾衰竭组.选择健康体检者20名为对照组.采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测定受试者血清骨保护素水平.采用全自动生化分析仪检测血清钙、磷、碱性磷酸酶、肌酐、尿素氮及糖化血红蛋白.采用双能X射线骨密度仪测定正位L_(2～4)的骨密度.观察受试者骨密度、骨保护素水平及其与各指标的多元回归相关分析.结果与结论:糖尿病肾病患者血清骨保护素水平明显高于健康对照人群(P<0.05),肾脏轻,中,重度损伤组、肾衰竭组患者骨密度明显低于健康对照人群(P<0.05,P<0.01,P<0.001).总体来说,肾功能越差,骨保护素水平越高,骨密度越低.糖尿病肾病患者骨保护素水平与骨密度呈负相关(R=-0.497,P<0.01),与糖尿病病程(r=0.566,P<0.01)、血清肌酐水平(r=0.772,P<0.01)、尿素氮水平(r=0.708,P<0.01)、磷水平(r=0.329,P<0.01)、全段甲状旁腺激素水平(r=0.702,P<0.01)呈正相关,与血清钙水平呈负相关(r=-0.505,P<0.01).提示糖尿病肾病过程中随肾脏功能的恶化,骨保护素水平升高,骨密度降低,骨保护素水平与骨密度呈负相关,与糖尿病病程、血清肌酐水平、尿素氮水平、磷水平、全段甲状旁腺激素水平呈正相关,与血清钙水平呈负相关.
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上海、北京、广东3地成年男性体质变化的比较
目的:依据上海、北京和广东地区第2次国民体质监测的数据,对3地成年男性身体形态、身体功能和身体素质相关指标特征进行比较分析.方法:查阅国家体育总局和上海、北京、广东体育局公布的"第二次国民体质监测公报"获取体质指标数据,以年龄20～24,25～29,30～34,35～39,40～44,45～49,50～54,55～59岁分组,运用Microsoft Excel软件对数据进行统计处理和对比分析.结果:身体形态:①上海、北京成年男性身高均高于广东.②体质量、克托莱指数、胸围、腰围4项指标比较结果均为北京>上海>广东.③体质量指数各年龄组均为:北京>上海>广东.身体功能:①舒张压和肺活量:均为北京>上海>广东.②台阶指数:30～34岁年龄组以前广东成年男性高,之后上海高.身体素质:①坐位体前屈指标:上海成年男性各年龄段均高于北京、广东.②选择反应时指标各年龄组均为上海优.结论:①上海、北京和广东男性身高均处于长期快速增长期,但广州增长较慢.②北京、上海成年男性体质量超重现象出现年龄早,且超重幅度有随年龄增长有加大趋势.⑧上海成年男性除体质量超重外,其他体质指标均优于北京、广东两地.
