中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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压力性尿失禁动物模型:正确选择与研究目的相关实验动物模型的构建方法
背景:压力性尿失禁动物模型可模拟女性压力性尿失禁的盆底解剖结构和病理状态,成熟稳定的动物模型对压力性尿失禁的发病机制和治疗疗效研究有重要意义.目的:概括和归纳压力性尿失禁建模方法及研究思路,揭示压力性尿失禁动物模型建立的现状和进展,比较各种建模方法的利弊,为进一步完善动物模型提供基础,也对临床研究提供有利的借鉴意义.方法:使用计算机检索中国知网/PubMed数据库,检索时间设定为2000年1月至2017年8月,以"压力性尿失禁;动物模型"和"Stress Urinary Incontinence;animal model"为检索词,排除动物模型仅作为研究手段未涉及机制讨论的文章,对目前常见压力性尿失禁动物模型病理特征、造模方法、模型特点等几个方面进行概况与归纳.结果与结论:共检索出128篇与主题相关的文献,排除重复性及陈旧性文献,共选用37篇符合标准的文献纳入综述.结果表明,压力性尿失禁动物模型的建模原理主要依靠机械性损伤盆底支撑组织,各种压力性尿失禁动物模型只能侧重表现该疾病的某些发病原因、某一阶段的病理生理变化,且模型维持时间及优缺点也各不相同,研究者必须根据研究目的,选择恰当的实验动物和造模方法.
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Wnt信号通路与神经发生、神经退行性变过程中的表述及作用
背景:Wnt信号通路作为一条多环节、多作用位点的开放通路,在神经系统中发挥着非常重要的作用,因此,了解其与神经系统疾病的病理生理机制和治疗的关系有重要意义.目的:分析Wnt信号通路在神经系统疾病中的作用机制.方法:应用计算机检索PubMed、SinoMed等数据库有关Wnt信号通路、神经系统疾病相关的文献,检索词为"Wnt signaling pathway,Nervous system disease,阿尔茨海默病,帕金森病;Wnt信号通路,神经系统疾病",终筛选出具有代表性的62篇作为研究对象.结果与结论:无论是在阿尔茨海默病、帕金森病、还是在脑血管病等神经系统疾病中均有Wnt信号通路的参与.但Wnt信号通路在各神经系统疾病中发挥的作用并不相同,比如Wnt信号通路功能的缺失使得神经元形成能力下降,直接导致阿尔茨海默病病程加快.Wnt信号通路调控多巴胺能神经元新生、细胞存活、突触发生,从而影响帕金森病发生发展.因此,了解Wnt信号中各配体、受体及基因在神经系统疾病存在的互作关系,有利于Wnt信号通路在神经系统疾病的基础研究的开展,同时对于发现治疗神经系统疾病靶点有重要的临床意义.
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深静脉血栓形成模型小鼠沉默信息调节因子1和氧化应激损伤标志物的表达
背景:研究表明,沉默信息调节因子1(silent information regulator 1,SIRT1)对氧化应激有抑制作用,降低动脉血栓形成.而SIRT1和氧化应激损伤在静脉血栓中的变化仍不清楚.目的:进一步分析SIRT1和氧化应激损伤与小鼠深静脉血栓形成的关系.方法:把90只的C57型小鼠按体质量随机分为3组:空白组(n=30),假手术组(n=30),深静脉血栓形成组(n=30).深静脉血栓形成组用下腔静脉狭窄法制备深静脉血栓形成动物模型,24 h后获取小鼠下腔静脉组织.苏木精-伊红染色法观察血栓情况;DCFH-DA荧光探针捕获、流式细胞仪检测静脉组织中活性氧的含量.并测得超氧化物歧化酶和丙二醛的量;用Western blot法检测SIRT1蛋白的表达.结果与结论:①在深静脉血栓形成组里静脉壁中活性氧含量显著多于空白组和假手术组(P<0.05);②深静脉血栓形成组静脉壁组织超氧化物歧化酶的量显著低于空白组和假手术组,而丙二醛含量显著高于空白组和假手术组(P<0.05);③深静脉血栓形成组SIRT1表达显著低于空白组和假手术组(P<0.05);④结果提示:氧化应激损伤能促进深静脉血栓形成的发生发展,深静脉血栓形成中SIRT1的活性被抑制.
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早期股骨髋臼撞击症模型兔的建立及其形态学特征
背景:股骨髋臼撞击症是近年逐渐被重视的引起年轻运动人群髋关节疼痛及功能障碍的一种疾病,现有研究尚无法阐明其发病机制及治疗中的诸多问题.目的:观察兔早期股骨髋臼撞击症模型形态学变化,并探讨其用于股骨髋臼撞击症研究的可行性.方法:12只新西兰兔,随机选取一侧行单侧股骨中上段内翻30°外旋45°截骨术,建立早期股骨髋臼撞击症模型,于术后4-16周分批行安乐死.拍摄髋关节X射线片进行对比后,取髋关节标本,行大体观察后,再行苏木精-伊红染色及甲苯胺蓝染色,对比观察股骨髋臼撞击区域软骨形态结构,并以Mankin评分评价软骨退变.结果与结论:①X射线片显示部分实验兔术侧股骨头颈交界区域软骨下骨出现类圆形骨质密度减低区;②大体标本观察则见术侧股骨髋臼撞击区域软骨损伤迹象;③组织学观察亦显示术侧股骨头颈交界区及髋臼盂唇软骨退变,Mankin评分显著高于对侧;④结果表明,新西兰兔早期股骨髋臼撞击症动物模型成功建立,依此可展开与股骨髋臼撞击症发病机制与治疗相关的研究工作.
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独活寄生汤干预膝骨关节炎模型大鼠软骨PERK/Bip信号通路的表达
背景:前期研究表明独活寄生汤可有效抑制软骨细胞凋亡,但其具体机制尚不明确.目的:观察独活寄生汤对膝骨关节炎大鼠软骨PERK/Bip信号通路关键调节因子PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3的影响,探讨独活寄生汤防治骨关节炎的作用机制.方法:80只SD大鼠适应性喂养1周后,随机分为正常组(20只)和造模组(60只).造模组应用膝关节注射木瓜蛋白酶法制备膝骨关节炎模型.造模成功后随机分为3组,即模型组(n=20)、治疗组(n=20)和阳性对照组(n=20).正常组和模型组给予生理盐水;治疗组给予独活寄生汤,按照9.3 g/(kg·d)的药量进行灌胃;阳性对照组给予盐酸氨基葡萄糖胶囊0.15 g/(kg?d).2周为1个疗程,共4个疗程.分别于2,4个疗程后切取右侧胫骨平台,免疫组化法和RT-PCR法检测PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白和mRNA表达情况.结果与结论:①RT-PCR结果显示,独活寄生汤和盐酸氨基葡萄糖均能抑制PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3 mRNA表达(P<0.05或0.01),干预时间越长,效果越明显,但2组间无显著差异(P>0.05);②免疫组化结果与RT-PCR结果趋势一致,即独活寄生汤和盐酸氨基葡萄糖均能抑制PERK、Bip、eIF-2α、ATF-4、GADD153、Caspase-9、Caspase-3蛋白表达(P<0.05或0.01),干预时间越长,效果越明显,但2组间无显著性差异(P>0.05);③结果提示,独活寄生汤可能是通过调控PERK/Bip信号通路,进而抑制因内质网应激反应引起的软骨细胞凋亡.
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脑死亡模型兔炎症因子表达和肺损伤性变化
背景:脑死亡供体器官质量是影响移植成功率的关键.对脑死亡诱发器官损伤的机制和保护方面的研究,将为临床上供体器官的合理利用提供实验依据.目的:观察兔脑死亡后不同时间点肺脏形态学和炎症因子的变化,探究脑死亡状态致肺损伤过程中的作用机制.方法:40只健康家兔,随机分成2组,假手术组(n=20):行气管、股动脉插管及颅骨钻孔术;脑死亡组(n=20):建立兔缓慢间断颅内加压脑死亡模型.各组在术后2,6及8 h记录动脉血压和心率变化,苏木精-伊红染色观察肺组织病理改变,RT-PCR检测各组肺脏热休克蛋白27的mRNA表达,免疫组织化学法检测肺组织核因子κB和细胞间黏附分子1的表达,并用ELISA法检测白细胞介素1β及白细胞介素6,8的水平.结果与结论:①脑死亡后2,6,8 h家兔动脉血压、心率差异无显著性意义(P>0.05);②血清中白细胞介素1β及白细胞介素6、8的水平随着脑死亡时间延长有上升趋势(P<0.05);③脑死亡组各时间点热休克蛋白27 mRNA水平较假手术组明显升高(P<0.05);④光镜下可见脑死亡后2 h肺泡腔完整,6 h时肺泡间隔增宽并有水肿,炎症细胞浸润增多,8 h损伤为严重,炎症细胞几乎浸润整个肺脏组织,该形态学变化与脑死亡组炎症相关因子细胞间黏附分子1和核因子κB表达逐渐升高的趋势一致;⑤结果表明,脑死亡状态下肺脏出现损伤性变化且呈进行性加重,该表现与炎症因子的释放有关;脑死亡状态维持8 h以上,肺脏的形态和功能将发生明显改变.
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骨形态发生蛋白2联合突变型低氧诱导因子1α修复激素性股骨头缺血性坏死
背景:骨形态发生蛋白2是目前发现的唯一的一种可单独诱导骨形成的生长因子,但是研究发现骨形态发生蛋白2单一基因的促血管生成作用较弱,无法在新生骨组织处产生足量的毛细血管,所以在诱导骨形成过程中还需要与其他诱导因子协同作用.低氧诱导因子1α在促进新生血管的形成方面有重要作用.目的:观察腺病毒介导的人骨形态发生蛋白2联合突变型低氧诱导因子1α(Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu)转染骨髓间充质干细胞对激素性股骨头缺血性坏死的修复作用.方法:①转染Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu到骨髓间充质干细胞,检测碱性磷酸酶活性、钙结节茜素红染色检测其成骨能力;②建立激素性股骨头缺血性坏死兔模型,随机分为3组:实验组股骨坏死部位移植转染Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu的骨髓间充质干细胞;对照组移植未转染的骨髓间充质干细胞;空白组移植细胞培养液.移植8周后,Westen blot法检测骨形态发生蛋白2和低氧诱导因子1α蛋白表达;苏木精-伊红染色组织学观察股骨头缺血性坏死修复情况;墨汁灌注透明切片血管形态学观察股骨头缺损区域血管生成情况.结果与结论:①转染Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu的骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶活性和钙结节数量均高于未转染的细胞,说明转染Ad-BMP-2-IRES-HIF-1αmu能促进骨髓间充质干细胞的成骨分化;②实验组骨形态发生蛋白2和低氧诱导因子1α蛋白表达高于对照组与空白组(P<0.05);移植8周后,实验组缺损区周边观察到明显的成骨反应,与对照组及空白组相比,实验组空骨陷窝率低(P<0.05),骨小梁面积百分比高(P<0.05);墨汁灌注实验显示:实验组出现血管化现象,并出现骨陷窝结构,血管间有清晰的连通脉络相互间构成网络,股骨头下血管分布及血管网的形成基本正常,实验组墨汁灌注血管面积为114.22±3.78,高于对照组(63.78±2.61)和空白组(21.39±3.52),差异有显著性意义(P<0.05);③提示:骨形态发生蛋白2联合突变型低氧诱导因子1α可以促进激素性股骨头缺血性坏死的修复.
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构建靶向Runx2基因成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体
背景:研究表明成骨细胞特异性转录因子(Runx2)的杂合突变、基因插入、缺失等是造成颅骨锁骨发育不全的重要原因.目前关于Runx2基因沉默后成骨细胞功能会发生怎样的变化,及如何沉默成骨细胞Runx2基因表达的相关研究未见报道.目的:构建靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体,为颅骨锁骨发育不全的研究提供实验依据.方法:根据预实验结果在含5 mg/L Polybrene的ENi.S培养液中,病毒按MOI=40进行感染,按病毒序号分为4组:NC组:pFU-GW-016PSC53349-1;KD1组:LVpFU-GW-016PSC60107-1;KD2组:LVpFU-GW-016PSC60108-1;KD3组:LVpFU-GW-016PSC60109-1.转染后16 h换液,72 h后,Celigo全视野细胞扫描分析仪观察检测基因的表达情况;两步法进行Real-Time PCR检测Runx2基因的沉默效果.结果与结论:①病毒转染后72 h,NC组未见荧光表达;KD1组可见少量荧光表达;KD2组荧光表达增强;KD3组可见强绿色荧光;②Real-Time PCR结果提示KD3组获得较好Runx2基因沉默效果;③实验成功构建靶向Runx2基因的MC3T3-E1细胞慢病毒载体,筛选出特异性抑制成骨细胞Runx2基因的病毒,并初步确定其作用的时间、相应的计量.
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葛根素促进成骨细胞复合β-磷酸三钙的成骨
背景:葛根素提取自豆科植物野葛的根部,根据其化学结构可归类为异黄酮类化合物,据报道异黄酮具有促进成骨细胞增殖分化功能.目的:观察不同浓度葛根素对β-磷酸三钙成骨细胞复合物的影响,探讨葛根素对体内成骨作用的影响.方法:①取新生兔颅盖骨进行成骨细胞培养,应用碱性磷酸酶试剂盒及茜素红染色方法观察不同浓度葛根素对体外培养成骨细胞碱性磷酸酶活性及矿化结节形成影响;②选促进成骨细胞活性佳浓度葛根素组作为A组,无葛根素培养的细胞为B组,2组培养的成骨细胞复合于β-磷酸三钙,使用MTT法检测支架材料中成骨细胞活性;③将2组细胞支架复合物植入兔背阔肌中,通过组织学方法分析葛根素在体内对新骨生成的作用.结果与结论:葛根素可提高成骨细胞碱性磷酸酶活性及矿化结节形成数量,1×10-6 mol/L葛根素能明显提高支架材料中成骨细胞活性,将1×10-6 mol/L葛根素干预的细胞制成的细胞支架复合物植入兔背阔肌后,新骨生成量明显增加.提示葛根素具有促进 β-磷酸三钙成骨细胞复合物体内新骨生成作用,可作为促进成骨治疗的选择药物.
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白细胞介素23受体基因多态性与广西壮族人群骨关节结核的易感性
背景:广西壮族自治区是结核病的高发地域,大量研究证实结核病存在易感基因.目的:分析白细胞介素23受体基因多态性及其与广西壮族人群骨关节结核易感性之间的关系.方法:选取2014年7月到2017年3月右江民族医学院附属医院住院的125例骨关节结核患者及150例健康体检者作为研究对象,利用PCR扩增技术和DNA测序方法分别对骨关节结核患者及健康体检者白细胞介素23受体rs10489628G/A、rs10489629T/C、rs10889675A/C、rs10889677C/T、rs7530511C/A位点进行多态性检测,比较2组基因型以及等位基因的频率分布差异,探讨各基因型与骨关节结核易感性的关系.结果与结论:白细胞介素23受体基因rs10489629 T/C位点骨关节结核组C等位基因频率29.2％,高于对照组(21.3％);rs10889675 C/A位点骨关节结核组A等位基因频率26.0％,高于对照组(18.0％),骨关节结核组CA频率37.6％高于对照组(25.3％);差异均有显著性意义(P<0.05).骨关节结核组单倍型GTCAC频率69.6％低于对照组(77.3％)、ACACC频率26.0％高于对照组(17.7％).提示白细胞介素23受体rs10489629T/C、rs10889675C/A位点多态性可能与广西壮族人群骨关节结核易感性有关.
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骨密度与运动能力的相关性
背景:研究表明,运动对骨密度的影响与运动项目、运动强度和运动时间等因素有关.目的:了解运动与骨密度指标尤其是桡骨骨密度及运动能力的相关关系.方法:共招募受试者共计173人,其中优秀篮球运动员共计93人,分别为运动健将21人,一级运动员32人,二级运动员40人;普通组是80名普通大二学生.采用美国GE公司生产的Prodigy Advance型双能X射线骨密度仪对受试者左右桡骨、髋骨、股骨和跟骨以及腰椎的具体部位进行骨密度测定.运用SPSS20.0统计软件对所得数据进行独立样本的t检验、单因素方差分析和皮尔逊相关分析.结果与结论:①除腰椎骨密度外,所有观察指标在篮球运动员和普通大学生之间都存在显著性差异(P<0.05),尤其是桡骨骨密度达到了非常显著性差异(P<0.01);②桡骨骨密度除男性左侧和女性左右侧在运动健将和一级运动员之间无显著性差异外,所有指标在其他运动水平之间都达到了统计学意义(P<0.05);③篮球运动能力与桡骨骨密度相关性分析结果:男性比女性显著,右侧比左侧显著;④结果表明,长期从事篮球运动对人体的附肢骨骨密度有着积极影响;桡骨骨密度与篮球运动能力有关,且与运动能力呈正相关关系,该指标可为篮球运动员选材指标的优化提供理论依据.
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在INS-1细胞中构建胰腺组织硫氧还蛋白相互作用蛋白过表达模型:两种腺病毒感染方法的差异
背景:目前,通过腺病毒感染方法在细胞中构建蛋白质过表达模型的方法主要有2种,一是在腺病毒感染细胞4 h后补充1640完全培养基,24 h后换为完全培养基,再继续培养到48 h(方法Ⅰ);另一种是在腺病毒感染细胞4 h后用PBS洗去含有腺病毒的1640培养基,更换4 mL完全培养基培养到48 h,中间不做任何处理(方法Ⅱ).前者病毒的作用时间较长,感染效果较好,但病毒本身对细胞的损害程度较大,对实验模型的稳定性产生干扰.而后者病毒的作用时间短,对细胞的毒性低,但有时病毒感染效率较低,目的蛋白的表达效果欠佳.目的:在大鼠INS-1胰岛β细胞中,通过比较相同腺病毒载体介导的不同感染细胞的方法而寻找一种更加稳定而高效的硫氧还蛋白相互作用蛋白(Thioredoxin-interacting protein,TXNIP)过表达模型.方法:构建含有绿色荧光蛋白的腺病毒载体(Ad-GFP)和TXNIP过表达腺病毒载体(Ad-TXNIP-GFP).分别设立正常组、空病毒组和TXNIP过表达组,按照上述2种不同的方法进行病毒转染.结果与结论:①方法Ⅱ中的绿色荧光蛋白荧光强度和阳性效率高于方法Ⅰ;②方法Ⅱ中的细胞形态更好且细胞存活率更高;③方法Ⅱ中,目的基因TXNIP在mRNA水平和蛋白质水平的表达情况明显高于方法Ⅰ.由以上结果得出结论,腺病毒感染INS-1细胞4 h后,使用PBS将旧培养基洗去并更换新培养基,继续培养到48 h的方法更有利于在INS-1细胞中构建TXNIP过表达模型.
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阿尔茨海默病细胞模型中β淀粉样蛋白介导ERK信号通路的STEP61负性调控
背景:研究表明纹状体富集的酪氨酸磷酸酶61(striatal-enriched phosphatase,STEP61)在突触可塑性方面发挥重要作用.STEP位于后突触末端,影响突触增强的形成,可能的机制是使关键性信号蛋白如MAPK激酶ERK1/2去磷酸化并失活.目的:探讨STEP61负性调控阿尔茨海默病细胞模型中β淀粉样蛋白介导的ERK信号通路的机制.方法:实验分3组,正常组为C57BL/6小鼠原代皮质神经元细胞;阿尔茨海默病细胞模型组是利用1μmol/L凝聚态的β淀粉样蛋白1-42加入皮质神经元细胞中1 h作为阿尔茨海默病细胞模型;β淀粉样蛋白1-42+RNAi组为在阿尔茨海默病细胞模型基础上,利用sRNAi技术制作STEP61基因沉默组.应用Western Blot技术检测STEP61的RNAi对ERK信号通路的影响.结果与结论:Western blot结果显示,阿尔茨海默病细胞模型组与正常组相比STEP61蛋白表达增加了223％(P<0.05),使磷酸化STEP61的比例减少到(75.6±4.6)％(P<0.05).β淀粉样蛋白1-42+RNAi组STEP61磷酸化的比例与阿尔茨海默病细胞模型组相比差异无显著性意义.同时阿尔茨海默病细胞模型组pERK1/2的蛋白表达量较对照组减少(P<0.05),而β淀粉样蛋白1-42+RNAi组pERK1/2的蛋白表达量较阿尔茨海默病细胞模型组显著增加(P<0.05).结果说明:在阿尔茨海默细胞模型中证实了STEP61调控β淀粉样蛋白介导的ERKs活性,并且很可能是通过脱磷酸化使他们失活而实现的.
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抑制高迁移率族蛋白1减轻大鼠脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后的损伤
背景:既往对于抑制大鼠体内高迁移率族蛋白1(high mobility group protein,HMGB1)的释放改善脊髓功能的恢复较多,但对于体外培养脊髓星形胶质细胞,抑制HMGB1改善细胞氧糖剥夺/复氧的损伤研究尚少.目的:探讨抑制大鼠脊髓星形胶质细胞HMGB1后减轻细胞氧糖剥夺/复氧的损伤作用.方法:星形胶质细胞从新生SD大鼠脊髓提取,分离,培养鉴定.实验分两部分:第一部分实验,体外培养大鼠脊髓原代星形胶质细胞,对细胞行氧糖剥夺/复氧处理,实验分组:对照组,正常培养;氧糖剥夺6 h/复氧6,12,24 h组.第二部分实验,星形胶质细胞分组:对照组,正常培养;氧糖剥夺6 h/复氧24 h组;特异性RNA干扰组;非特异性RNA干扰组;丙酮酸乙酯组.利用Western blot和ELISA法检测各部分实验各组星形胶质细胞HMGB1的表达和释放量,利用乳酸脱氢酶的漏出率和MTT法检测细胞的损伤和存活率,光镜下观察细胞损伤后细胞形态结构的变化.结果与结论:①脊髓星形胶质细胞氧糖剥夺/复氧后,HMGB1蛋白表达及分泌升高(P<0.01),且复氧至24 h时达到高值(P<0.01);特异性RNA干扰组及丙酮酸乙酯组HMGB1的表达量明显降低,提示特异的HMGB1 shRNA和丙酮酸乙酯能有效抑制HMGB1表达;②细胞氧糖剥夺/复氧后,乳酸脱氢酶漏出率均明显增加,细胞存活率降低(P<0.01),复氧至24 h时损伤为严重(P<0.01).与氧糖剥夺6 h/复氧24 h组相比,特异性RNA干扰组及丙酮酸乙酯组细胞的乳酸脱氢酶漏出率明显下降;③光镜下观察细胞在氧糖剥夺/复氧后,细胞出现肿胀,分解等损伤变化,而特异RNA干扰和丙酮酸乙酯组细胞损伤明显减轻;④结果提示,HMGB1在脊髓星形胶质细胞损伤发生与发展中起到关键性的作用,且抑制HMGB1后能减轻氧糖剥夺/复氧对大鼠脊髓星形胶质细胞的损伤作用.
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成年关节软骨碎块化后MT1-MMP表达与软骨细胞迁移的关系
背景:许多课题研究已基本证实,关节软骨碎块化处理后,软骨损伤区域的修复效应增强,但对于其具体机制仍不清楚.目的:研究成年关节软骨经碎块化处理后,MT1-MMP表达与软骨细胞迁移的关系,进一步探讨软骨经碎块化后,修复效应增强的机制.方法:通过无菌操作从78只成年家兔双后腿膝关节(156膝)获取碎块关节软骨颗粒(约1 mm×1 mm×1 mm)和块状软骨(直径约5 mm,厚度约2 mm),复合明胶海绵碎屑及纤维蛋白胶制作体外培养模型.分组:碎块组和整块组均采用普通细胞培养液进行培养;MT1-MMP抑制剂组:采用添加外源性MT1-MMP抑制剂进行干预培养;各组经体外培养2,4,6周进行激光共聚焦显微镜观察细胞迁移,苏木精-伊红染色切片并进行组织半定量评分、碎块组与整块组标本进行MT1-MMP免疫组织化学检测并计算MT1-MMP阳性细胞百分率.结果与结论:①激光共聚焦显微镜观察见碎块组、整块组经体外培养2,4周均可见软骨细胞边集现象,碎块组显著,且4,6周时可见大量软骨细胞释放;MT1-MMP抑制剂组在各时间观察点均未见边集及细胞释放;②组织半定量评分与MT1-MMP阳性细胞表达率在碎块组、整块组中随体外培养时间延长而增长,相同培养时间,碎块组得分及MT1-MMP阳性细胞百分率高于整块组;MT1-MMP抑制剂组均未见细胞边缘聚集及碎块愈合现象;③结果表明,成年家兔关节软骨经碎块化处理后其修复效应增强;同时成年家兔关节软骨经碎块处理后,MT1-MMP表达增高,软骨细胞迁移能力增强;抑制MT1-MMP功能,能有效抑制软骨细胞迁移及阻碍碎块愈合,在一定程度上可推测,MT1-MMP的表达增强是碎块化软骨损伤修复效应增强的可能机制.
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Foxp3,IDO在小鼠角膜移植免疫排斥反应的表达
背景:移植免疫反应是导致角膜移植术后失败的主要原因,但其具体发病机制不明确.有研究报道,Foxp3和吲哚胺2,3-二氧化酶(indoleamine 2,3-dioxygenase,IDO)与移植免疫有关.目的:研究Foxp3,IDO在小鼠角膜移植免疫排斥反应中的作用.方法:以C57BL/6小鼠为供体,BALB/c小鼠为受体建立角膜移植实验模型.将30只BALB/c小鼠随机分为3组,正常组6只;角膜移植组12只;地塞米松治疗组12只.角膜移植组:给予生理盐水;地塞米松治疗组:给予地塞米松注射液10 mg/kg,分别于角膜移植术后0,2,4,6,8,10 d经腹腔注射给药.用裂隙灯观察移植排斥情况,免疫组织化学检测植片γ-干扰素表达,Real-time PCR检测植片内Foxp3 mRNA,IDO mRNA的表达.结果与结论:①地塞米松治疗组发生排斥反应时间(20.667±1.033)d,较角膜移植组(14.833±1.472)d明显延迟(P<0.05);②角膜移植组术后第14天角膜植片内γ-干扰素及Foxp3 mRNA,IDO mRNA的表达较地塞米松治疗组明显增强(P<0.05);③结果提示,γ-干扰素及Foxp3,IDO在角膜移植免疫排斥反应过程中发挥重要的作用,降低角膜植片γ-干扰素及Foxp3,IDO表达可能有助于诱导耐受.
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烟酰胺N-甲基转移酶基因多态性与手球运动能力的关联性
背景:研究证实,烟酰胺N-甲基转移酶基因(nieotinamideN-methyl-transferase,NNMT)多态性与人体有氧运动能力相关.手球是一种混氧运动,比赛或平时训练中无氧运动占一定比例,主要进行有氧运动.目的:探讨NNMT基因单核苷酸多态性位点rs2256292与手球运动能力的关联.方法:采用PCR-LDR方法检测28名中国国家青年男子手球队运动员(实验组)和53名普通男学生(对照组)NNMT基因单核苷酸多态性位点rs2256292,测试相对大摄氧量VO2 max和骨骼肌百分比、体脂百分比身体成分指标.结果与结论:①实验组G等位基因和GG基因型频率显著高于对照组(P<0.05);②在28名运动员中,基因型GG组相对VO2 max明显高于基因型CG组(P<0.05);在53名普通学生中,基因型GG组、基因型CG组及基因型CC组间相对VO2 max无差异;③在28名运动员中,基因型GG组骨骼肌百分比高于基因型CC组、基因型CG组(P<0.05);在53名普通学生中,基因型GG组骨骼肌百分比高于基因型CG组(P<0.05);④在28名运动员中,基因型GG组、基因型CG组及基因型CC组间体脂百分比无差异;在53名普通学生中,基因型GG组、基因型CG组及基因型CC组间体脂百分比无差异;⑤结果表明,NNMT基因单核苷酸多态性位点rs2256292与手球运动能力明显相关,运动员更倾向于G等位基因,基因型GG携带者运动能力较强.
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电针对面神经损伤后面神经元中神经型钙黏素、上皮型钙黏素和胎盘型钙黏素表达的影响
背景:作者所在课题组前期研究发现周围性面神经损伤能引起神经元中黏附分子的表达变化,而电针穴位治疗周围性面神经损伤的机制尚不清楚.目的:探讨电针穴位在面神经外周部受损后对中枢面神经元的形态学变化及面神经元中神经型钙黏素、上皮型钙黏素及胎盘型钙黏素表达的影响.方法:将新西兰大白兔随机分为正常对照组(n=4)、面神经损伤组(n=24)和电针组(n=24).面神经损伤组与电针组均建立右侧面神经上颊支压榨损伤模型.造模成功后每天对电针组实验兔颊车、地仓、翳风、颧缪、四白、阳白电刺激,选择频率为18-20 Hz、电压为1.5 V的疏密波,另外埋针合谷穴不予以电刺激,针灸每次30 min,1次/d.结果与结论:①原位杂交结果显示各组兔面神经元中均未见上皮型钙黏素和胎盘型钙黏素mRNA表达,且正常对照组兔面神经元中未见神经型钙黏素mRNA表达,而面神经损伤组和电针组兔面神经元中出现神经型钙黏素mRNA的阳性表达,电针组兔面神经元中神经型钙黏素mRNA阳性细胞数均多于面神经损伤组(P<0.05);②免疫组化染色可见正常对照组兔面神经元中神经型钙黏素、上皮型钙黏素和胎盘型钙黏素蛋白表达;损伤后1 d时三者表达下降(电针组神经型钙黏素蛋白除外);损伤后1,4,14 d时电针组兔面神经元中神经型钙黏素和胎盘型钙黏素蛋白表达高于面神经损伤组(P<0.05);损伤后各时间点,电针组上皮型钙黏素蛋白表达均高于面神经损伤组(1 d时除外)(P<0.05);③苏木精-伊红染色可见面神经损伤组逐渐出现面神经元变性及类似神经元死亡表现,21 d时神经元开始恢复.电针组变性及类似死亡表现的神经元较面神经损伤组少,且14 d时神经元开始恢复,28 d时2组神经元形态均基本恢复;④提示面神经损伤引起了钙黏素的表达变化,电针治疗减轻了面神经元的变性并促进神经元恢复,这可能与电针促进面神经元中经典钙黏素的高表达密切相关.
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不同体积分数富血小板血浆对血管内皮细胞增殖和迁移的影响
背景:富血小板血浆富含多种促进血管形成的重要因子,不同体积分数的富血小板血浆均能促进血管内皮细胞增殖、分化及迁移,但是何种体积分数为显著,目前还没有形成统一的认识.目的:观察不同体积分数富血小板血浆对血管内皮细胞增殖活性及迁移能力的影响.方法:采用酶消化法分离SD大鼠心脏微血管内皮细胞,分别用含体积分数为10％,20％,50％富血小板血浆的DMEM培养液进行培养.倒置显微镜下观察细胞形态,MTT比色法检测血管内皮细胞增殖情况,细胞划痕实验观察血管内皮细胞的迁移能力,终筛选出佳富血小板血浆体积分数.结果与结论:①加入富血小板血浆干预后内皮细胞形态规则,生长旺盛,随培养时间延长大部分细胞变成多角形,细胞较大;②不同体积分数的富血小板血浆均对血管内皮细胞增殖具有促进作用,其中以培养72 h体积分数为20％富血小板血浆组对细胞的增殖促进作用为明显;③体积分数为20％,50％富血小板血浆明显促进细胞迁移,其中体积分数为20％富血小板血浆组细胞相对迁移距离高;④结果表明,富血小板血浆可促进体外培养的血管内皮细胞增殖和迁移,且体积分数为20％富血小板血浆的作用效果佳.
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家兔静脉冲压拉伸实验:动静脉的力学参数差异
背景:目前国内冠状动脉旁路移植术后血管桥通畅性与生物力学相关的研究较少.目的:从血管生物力学的角度出发,对比分析静脉和动脉的力学参数差异.方法:家兔20只,对照组10只,实验组10只.游离实验组家兔一侧颈外静脉,对照组家兔一侧颈总动脉置入保存液,随后立即将血管标本进行冲压拉伸实验,测量不同压力(0-26.6 kPa)、主动状态(高K+溶液)和被动状态(无Ca2+溶液)下兔动静脉血管外径变化,行苏木精-伊红染色观察血管形态学特点,并对冲压拉伸力学实验数据进行分析.结果与结论:①不论在主动力学或是被动力学的实验中,血管外径(内径)-压力曲线,血管壁厚度-压力曲线,周向拉伸比-压力曲线均呈现先变化后趋于稳定值的规律;②对比静脉和动脉的力学参数发现:静脉的弹性明显不如动脉(P<0.05),开始冲压后,静脉的外径迅速增大,终趋于恒定值时接近动脉的外径的2倍,体式显微镜下看到的静脉管壁明显更薄,随着血管内压力的上升,动脉血管外径在接近13.3 kPa时才趋于稳定值,而同等拉伸比条件下的静脉血管则冲压至约5.32 kPa后,其外径变化就已经基本趋于恒定值;③血管组织形态学显示:对于横截面下的静脉和动脉,静脉管壁厚度明显小于动脉;④结果说明,随着管腔内压力的上升,静脉更早地达到弹性极值,顺应性更差,在高压的环境中更容易受到损伤,符合静脉管壁弹力层较薄这一组织学特性.
