中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
CPT-Ⅱ基因4号外显子质粒构建与变异分析
背景:肉毒碱棕榈酰转移酶Ⅱ(Carnitine palmitoyltransferase-Ⅱ,CPT-Ⅱ)位于细胞线粒体内膜上,是脂肪酸氧化过程中起关键作用的酶之一.目前关于流感病毒感染与CPT-Ⅱ基因变异尚未见报道.目的:构建CPT-Ⅱ第4号外显子(E4)表达质粒及其核苷酸变异分析.方法:从流感病毒感染2例患者外周血中提取DNA,以PCR法扩增CPT-Ⅱ基因的第4号外显子,将其片段插入pGEM-T载体,以T4 DNA连接酶,构建T-CPT-Ⅱ E4,转化大肠杆菌DH5α细胞,增菌,制备质粒,EcoR I酶切、测序和变异分析.结果与结论:成功构建重组表达质粒pGEM-T-CPT-ⅡE4,经DNA测序,证实质粒中插入CPT-Ⅱ第4号外显子完整序列,全长1 305个核苷酸,编码435个氨基酸;与Genebank源序列对照比较,发现含有两个变异位点:1 618(GTC→ATC)和1 858 (TTT→TCT),对应氨基酸为V368I和F448L.
-
Ad-EGFP-MCP-1腺病毒表达载体的构建与表达
背景:单核细胞趋化因子(monocyte chemotactic protein,MCP)可促进新生血管的动脉化,形成功能性微动脉,进而实现血管新生.目的:构建Ad-EGFP-MCP-1腺病毒表达载体,包装、纯化并检测病毒滴度,观察其在体表达.方法:PCR法钓取目的基因MCP-1,将其亚克隆入pDC315-EGFP载体,利用辅助包装质粒pBHG lox ΔE1,3 Cre进行病毒包装得到Ad-EGFP-MCP-1,经呼吸道途径转染至肺动脉高压大鼠.结果与结论:通过PCR获得MCP-1全长cDNA,与GenBank比对,序列完全一致.荧光显微镜下可见所包装的Ad-EGFP-MCP-1腺病毒表达载体可在大鼠肺组织中稳定表达,1周时达高峰,持续约4周.证实实验成功构建并包装了Ad-EGFP-MCP-1,其在肺组织中可有效表达.
-
重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体的构建与鉴定
背景:有研究表明骨形成蛋白(bone morphogenetic protein,BMP)异源二聚体比同源二聚体的活性高20倍,但相关BMP 4/7融合基因的相关病毒载体的构建至今少有报道.目的:构建重组人BMP-4/7 融合基因腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)载体并检测其表达.方法:扩增BMP-4、7成熟肽基因;分别构建质粒pGEM-BMP-4和pGEM-BMP-7;采用DNA连接法获取BMP-4/7融合基因,克隆获得pGEM-BMP-4/7质粒,进行基因测序.AAV颗粒转染HEK293细胞,收获病毒载体AAV-BMP-4/7.用SDS-PAGE电泳检测BMP-4/7融合基因蛋白在大肠杆菌的表达.用不同感染复数的AAV-BMP-4/7转染骨髓间充质干细胞3 d,提取细胞总RNA和总蛋白,进行RT-PCR和ELISA法检测融合基因BMP-4/7在骨髓间充质干细胞中的表达.结果与结论:PCR 电泳,酶切鉴定及测序结果表明,装入pSNAV质粒中的BMP-4/7 基因正确,pSNAV-BMP-4/7重组成功.RT-PCR检测到骨髓间充质干细胞BMP-4/7融合基因的转录条带,ELISA检测显示经AAV转染的骨髓间充质干细胞中BMP-4/7蛋白随着感染复数的增加表达逐渐增高(P < 0.01).结果证实,实验成功构建重组骨形成蛋白4/7融合基因腺相关病毒载体.
-
重组人表皮生长因子联合前列地尔作用于糖尿病溃疡创面
背景:人内源性表皮生长因子的缺乏以及血流动力学的改变会导致创面不愈合的发生.目的:观察重组人表皮生长因子联合前列地尔作用于糖尿病溃疡动物模型创面的疗效.方法:Wistar大鼠40只建立糖尿病溃疡动物模型,随机等分为模型组、重组人表皮生长因子组、前列地尔组和重组人表皮生长因子+前列地尔组,分别予以1%碘伏清创、重组人表皮生长因子凝胶外敷、前列地尔静脉滴注、重组人表皮生长因子凝胶外敷和前列地尔静脉滴注联合治疗.结果与结论:干预后3,7,10,14 d观察发现,相比于模型组,重组人表皮生长因子和/或前列地尔治疗后,糖尿病皮肤溃疡大鼠溃疡面积减小、愈合时间缩短、创面动态愈合率上升(P < 0.01),且两者联合治疗的效果优于重组人表皮生长因子和前列地尔单独治疗(P < 0.01),而重组人表皮生长因子或前列地尔单独治疗的效果接近,提示重组人表皮生长因子与前列地尔联合使用比单纯使用前列地尔或单纯使用重组人表皮生长因子更能显著促进糖尿病溃疡创面的愈合.
-
基于F-Scan三维动态足底压力分析系统的动静态足底压力分析
背景:有研究表明足的部分解剖区域支撑着人体大部分质量,并调节着人体的平衡,测量这些区域的压强峰值及分布即可获取足、下肢乃至全身的生理、结构及功能等方面的大量信息.目的:观察健康青少年足球运动员自然行走时左右足峰力值、负荷冲量等的动态足底压力分布.方法:采用三维动态足底压力步态分析系统对16~19岁适龄青少年足球运动员进行动态足底压力测试.结果与结论:受试者足底应力-时间曲线呈明显的双峰型,足底10个分析区域峰力均值在足跟外侧大(P < 0.01),右足习惯者第1 趾、第1,2 跖骨、足跟内外侧区域平均峰力值右足大于左足(P < 0.05),而第5跖骨、足弓2个区域平均峰力值左足大于右足(P < 0.05).受试者行走时整足接触阶段、离地阶段负荷中心在第1、2跖骨、足跟内外侧区域,足部大负荷部位在第1、2跖骨、足跟内外侧区域,男女左右足分布规律基本一致.结果证实,健康青少年足球运动员左右足动态与静态足底压力分布规律存在一致性特征.
-
兔桡骨临界骨缺损模型的制备
背景:各种原因造成的骨折和骨缺损导致的骨不连一直是临床骨科修复的一大难题,相关产品质量的检验需要标准的骨缺损模型,然而骨缺损的临界长度至今仍无定论.目的:建立兔桡骨骨缺损模型,以确定兔桡骨临界骨缺损长度.方法:将18只雄性新西兰大白兔,随机分为6组,在双侧桡骨中段分别做12,13,14,15,16,17 mm的缺损,伤口缝合包扎但不固定.结果与结论:大体标本和放射学观察显示,3个月内12,13,14,15,16 mm组的缺损均有修复完整的情况,但17 mm组无一例修复.组织学结果显示12,13,14,15,16 mm组缺损修复区有骨小梁与骨基质的形成、骨再生和再血管化、髓腔不同程度再通以及成骨细胞,17 mm组可见成骨细胞,破骨细胞,但未见骨再血管化和髓腔再通.故兔桡骨临界骨缺损长度为17 mm.
-
持续静水压对细胞增殖的影响
背景:血管平滑肌细胞在静水压替代血清培养的条件下能良好生长.目的:探讨无血清水平状态下,持续性静水压对细胞增殖的影响.方法:采用自行研制的压力可调细胞培养箱在0,12,16,20,24和28 kPa条件下培养血管平滑肌细胞A10与血管内皮细胞HUVEC-12.结果与结论:A10细胞在16 kPa压力的条件下增殖明显,活性强;HUVEC-12细胞在20 kPa压力的条件下增殖明显,活性强.说明一定范围内的静水压可促进体外培养的A10与HUVEC-12细胞增殖、使其活性增加.
-
胫骨骨癌痛模型大鼠鞘内注射舒芬太尼后脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体及降钙素基因相关肽的表达
背景:临床和动物实验证实舒芬太尼鞘内注射有明显的镇痛效果,但其机制尚不明确.目的:观察鞘内注射舒芬太尼对骨癌痛大鼠痛阈及脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体、降钙素基因相关肽表达的影响.方法:健康SD大鼠36只随机等分为对照组、假手术组、模型组和舒芬太尼组.后2组利用乳腺癌细胞腹水制备胫骨骨癌痛模型,假手术组注射加热灭活后的死细胞.模型组和舒芬太尼组在建模后15 d内每天鞘内注射生理盐水和舒芬太尼.结果与结论:与对照组和假手术组比较,模型组大鼠在建模后第12和14天脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体和降钙素基因相关肽表达增加(P < 0.01),且出现机械性异常疼痛痛阈降低,热刺激后爪退缩潜伏时间缩短(P < 0.01);而与模型组比较,舒芬太尼组大鼠,在注药后第12和14天脊髓背角浅层N-甲基-D-天冬氨酸受体和降钙素基因相关肽的表达降低(P < 0.01),且机械刺激痛阈提高以及热刺激后爪潜伏期延长(P < 0.01).提示鞘内注射舒芬太尼对骨癌痛大鼠具有明显的抗伤害效应,其机制与抑制大鼠脊髓背角N-甲基-D-天冬氨酸受体和降钙素基因相关肽表达有关.
-
线栓法制备SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型
背景:线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型的方法尚无统一标准,寻找一种操作简单,稳定性好,成功率高的局灶性脑缺血再灌注模型方法在缺血性脑病研究中有重要意义.目的:采用线栓法制备SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,分析模型制作的成功率和稳定性.方法:对传统Zea Longa模型制作方法进行改进,选用鱼线作为栓线,结扎颈外动脉及颈总动脉近心端,不剪断颈外动脉,不结扎翼腭动脉,栓线通过颈总动脉进入大脑中动脉造成缺血,拔出线栓形成再灌注.结果与结论:建模型时间均在20 min内完成,建模后大鼠神经功能缺损明显,红四氮唑染色示脑梗死区苍白,病理学检查有典型的病理表现,模型成功率为75%,在制作过程中易出现蛛网膜下腔出血、脑缺血不完全等问题.结果表明,线栓法制备SD大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型的方法成功率高,缺血效果明确,时间短,是一种简单方便的制作局灶性脑缺血再灌注损伤模型的方法.
-
角膜穿通损伤合并海水浸泡模型兔角膜组织病理学及房水白细胞介素6的变化
背景:由于海水特殊的理化性质,海上创伤后细胞的病理改变常有特殊性.目的:观察兔角膜爆炸穿通伤合并海水浸泡角膜组织病理学改变及房水白细胞介素6水平变化.方法:取成年健康灰兔16只,单支鞭炮致兔角膜爆炸伤,于角膜中周部做长3 mm全层切口.右眼为实验侧,左眼为对照侧.实验侧将海水通过角膜切口注入前房,海水持续冲洗眼表30 min.对照侧使用生理盐水.结果与结论:光镜观察显示实验侧造模后1、2和3 d角膜上皮细胞大片坏死脱落,基质层水肿明显伴大量炎细胞浸润.对照侧1、2 d角膜病理改变同实验组,但程度较轻,造模后3、5 d局部病理改变明显减轻.实验组造模后第1、2、3 d房水中白细胞介素6水平明显高于对照侧(P < 0.05).表明海水组伤情较对照组明显加重,提示海水可能是重要的致伤因素之一.
-
人胸腺组织原代培养细胞与人类免疫缺陷病毒间的相互作用
背景:人类免疫缺陷病毒能够结合人胸腺的细胞CD4受体,从而导致CD4细胞活性降低.目的:观察人胚胎胸腺组织原代培养与人类免疫缺陷病毒相互作用关系.方法:取人胎胸腺组织进行原代细胞培养,取胸腺的细胞与人类免疫缺陷病毒1 ⅢB混合培养设为实验组,设置不加人类免疫缺陷病毒培养的胸腺的细胞为对照组.结果与结论:透射电镜观察显示,培养40 h,人类免疫缺陷病毒诱导的胸腺的细胞内即可发现大量艾滋病病毒颗粒.MTT法和免疫组织化学染色检测结果显示,培养40 h~22 d,HIV诱导胸腺的细胞吸光度值均显著低于对照组(r=0.9733,P < 0.05),人类免疫缺陷病毒诱导胸腺的细胞膜上和细胞浆Fas-L阳性表达率均升高(P < 0.05).说明人类免疫缺陷病毒可致原代培养的人胚胎胸腺的细胞活性降低.
-
皮质脊髓束半横断损伤模型大鼠皮质脊髓束的超微结构改变
背景:有关皮质脊髓束受损后损伤附近及远处超微结构的整体变化的报道甚少.目的:观察大鼠皮质脊髓束半横断损伤后皮质脊髓束超微结构的变化.方法:选择性切割SD大鼠延髓左侧锥体,建立皮质脊髓束半横断损伤模型,于造模后4,14,28 d取受损皮质脊髓束,制备电镜标本.结果与结论:透射电镜观察发现受损皮质脊髓束髓鞘和轴索发生肿胀,形态不规则.随着时间的延长,溃变进行性加重,受损皮质脊髓束主要表现为髓鞘破坏、溶解及轴索脱髓鞘病变、胞浆浓缩、细胞器增多及空泡样变性.脊髓颈、胸、腰段受损皮质脊髓束的溃变比损伤部位严重.
-
长针透刺膝骨关节炎模型大鼠滑膜组织中基质金属蛋白酶3的变化
背景:研究表明基质金属蛋白酶3在关节软骨退变和破坏中有重要意义.目的:观察长针透刺与透明质酸钠治疗大鼠膝骨关节炎后,大鼠化膜组织中基质金属蛋白酶3含量变化.方法:SD大鼠通过膝关节腔内注射1.6%木瓜蛋白酶溶液并驱赶大鼠活动建立膝骨关节炎模型.造模2周后随机分为3组,长针透刺组用直径0.30 mm、长125 mm规格的毫针透刺大鼠犊鼻穴和膝眼穴;药物治疗组关节腔内注射透明质酸钠;模型组不干预.并设立不造模的正常组.结果与结论:治疗4周后,模型组大鼠滑膜组织基质金属蛋白酶3含量较正常组显著升高(P < 0.05),长针透刺组、药物治疗组基质金属蛋白酶3含量较模型组显著降低(P < 0.05),长针透刺组与药物组相近(P > 0.05).证实长针透刺疗法能有效纠正膝骨关节炎模型大鼠化膜组织中基质金属蛋白酶3的异常表达,这也可能是长针透刺治疗膝骨关节炎的作用原理之一.
-
局灶脑缺血再灌注成年模型大鼠大脑髓鞘相关蛋白的基因表达
背景:髓鞘蛋白是少突胶质细胞的主要成分,研究脑缺血再灌注后大脑髓鞘相关蛋白基因表达的变化有助于探讨少突胶质前体细胞在缺血性脑损伤和修复中的作用.目的:观察脑缺血再灌注后成年模型大鼠大脑髓鞘蛋白相关基因,在脑缺血后不同时间及部位表达变化和差异.方法:以线栓法制作成年SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,采用5′末端标记地高辛的寡核苷酸探针荧光原位核酸分子杂交检测模型大鼠再灌注后早期大脑梗死中心区、梗死周边区和梗死对侧区皮质髓鞘蛋白脂质蛋白mRNA、髓鞘碱性蛋白mRNA和髓鞘转录因子1 mRNA表达变化.结果与结论:在梗死中心区,脑缺血再灌注后早期3种髓鞘相关蛋白基因表达均明显减少;在梗死周边区,再灌注后1 d时3种髓鞘相关蛋白基因表达与对照组比较无明显变化,之后逐渐增加,至14 d时均高于对照组(P < 0.05,0.01),以髓鞘转录因子1 mRNA阳性细胞数升高早(7 d)为显著(P < 0.01).因此,成年SD大鼠脑缺血再灌注后急性期梗死周边区皮质髓鞘相关蛋白的基因表达增加,提示少突胶质前体细胞对脑缺血性损伤敏感,其可能参与了脑缺血后损伤的修复过程.
-
人支气管上皮细胞的体外培养
背景:人支气管上皮细胞培养在呼吸系统疾病研究中应用越来越广泛.目的:探索美国典型培养物保藏中心人支气管上皮细胞体外培养方法的可行性.方法:对人支气管上皮细胞培养条件进行反复摸索,终确定应用含体积分数20%胎牛血清的DMEM/F12培养基进行培养.结果与结论:实验培养的人支气管上皮细胞扁平,呈多边形,长满后呈"铺路石"样分布,经免疫组化检测发现培养的细胞表达上皮细胞标志物细胞角蛋白.在支气管扩张症患者痰液上清刺激下,细胞表达的核因子κB、肿瘤坏死因子α和白细胞介素8明显增强,证实培养的人支气管上皮细胞获得成功.提示不必拘泥于美国典型培养物保藏中心推荐的培养条件,改进的培养方法简便易行,有应用价值.
-
外源性酸性成纤维细胞生长因子干预肠缺血-再灌注损伤中p38MAPK和成纤维细胞生长因子受体2的表达
背景:酸性成纤维细胞生长因子可以促进多种创面愈合,在内脏损伤修复中起重要促进作用.目的:观察外源性酸性成纤维细胞生长因子干预肠缺血-再灌注损伤大鼠后p38MAPK和成纤维细胞生长因子受体2的表达.方法:以大鼠肠系膜上动脉夹闭45 min造成肠缺血-再灌注损伤模型,于再灌注即刻应用改构体酸性成纤维细胞生长因子进行干预.分别于再灌注2,6,12,24 h取大鼠小肠组织标本,用于实验.结果与结论:在正常大鼠,成纤维细胞生长因子受体2主要分布在小肠绒毛上皮细胞的肠腔侧、侧壁和小肠隐窝朝向隐窝腔的一侧细胞膜上.缺血-再灌注初期,p38MAPK蛋白及成纤维细胞生长因子受体2蛋白和mRNA的表达未发生明显变化,随着再灌注时间的延长其逐渐增强,并于再灌注后6~12 h达高峰.经酸性成纤维细胞生长因子治疗后,大鼠小肠组织p38MAPK蛋白及成纤维细胞生长因子受体2蛋白和mRNA的表达进一步增强,小肠黏膜损伤程度减轻.说明酸性成纤维细胞生长因子可通过上调成纤维细胞生长因子受体2和p38MAPK的表达促进肠缺血-再灌注损伤的修复.
-
小鼠热休克转录因子1真核表达载体的构建
背景:研究表明,热休克转录因子1具有热休克应答效应.目的:构建小鼠热休克转录因子1(heat shock transcription factor 1,HSF1)真核表达载体.方法:克隆小鼠HSF1 cDNA,将其插入载体pcDNA3.1,构建热休克转录因子1真核表达载体pcDNA3.1-HSF1.结果与结论:构建的pcDNA3.1-HSF1重组体双酶切电泳后出现大小约5.5 kb与1.5 kb的2个片段,测序结果显示克隆的小鼠HSF1序列与Genbank中的一致,采用Western blot法可检测到一条相对分子质量约72 000的重组HSF1蛋白条带,说明成功构建小鼠HSF1真核表达载体pcDNA3.1-HSF1.
-
复发性阿弗他溃疡模型大鼠细胞免疫状态与黄芪多糖的干预
背景:复发性阿弗他溃疡病因复杂,可能与免疫调节失衡有关.目的:探讨细胞免疫异常与复发性阿弗他溃疡发病的关系及黄芪多糖对复发性阿弗他溃疡模型大鼠的免疫调节作用.方法:采用免疫法建立SD大鼠复发性阿弗他溃疡模型,造模成功后分别给予100,200,300 mg/kg黄芪多糖或生理盐水灌胃,以正常饲养的大鼠作为对照.用流式细胞仪检测各组SD大鼠外周血T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+细胞数量及比值.结果与结论:流式细胞仪检测结果显示复发性阿弗他溃疡大鼠外周血CD4+细胞数量、CD4+/CD8+比值显著降低,而CD8+细胞数量明显升高(P < 0.05).连续灌胃100,200,300 mg/kg黄芪多糖20 d后,复发性阿弗他溃疡大鼠外周血CD4+细胞数量及CD4+/CD8+比值均有所回升,CD8+细胞数量降低,以300 mg/kg黄芪多糖效果明显.说明复发性阿弗他溃疡发生与T淋巴细胞亚群不平衡有关,黄芪多糖可剂量依赖性改善复发性阿弗他溃疡大鼠的异常免疫状态.
-
南极大磷虾胰蛋白酶可促进创面的愈合
背景:胰蛋白酶已被证实具有较好的清创、促进创伤愈合作用.目的:探讨南极大磷虾胰蛋白酶对创面的修复效果.方法:采用全层皮肤缺损法制成新西兰大白兔背部创伤模型,将创面分为4组,分别给予从南极大磷虾中提取的粗酶液或纯化的胰蛋白酶、木瓜蛋白酶和生理盐水,每天早晚两次给药,直至伤口愈合.结果与结论:给药5,10和15 d测量伤口愈合面积,从南极大磷虾中提取的粗酶和纯化胰蛋白酶均具有良好的促进愈合效果,但粗酶的效果更好,其各时段残余创面面积小于生理盐水组和木瓜蛋白酶组(P < 0.05);皮肤羟脯氨酸含量测定结果显示粗酶能显著促进创伤组织中胶原的合成和积累;组织学切片观察显示粗酶组愈合效果佳.证明南极大磷虾胰蛋白酶能显著促进新西兰大白兔创口的愈合,粗酶具有优效果.
-
运动过程中人体工作肌体表皮肤及鼓膜温度的变化
背景:运动过程中体温的变化可为推算人体能量代谢提供新的方法和思路.目的:通过对人体有氧运动过程中体表温度和核温变化的即时检测,来探讨一种能量代谢测试方法的新思路,以适应现代竞技体育运动对体能即时检测的要求.方法:对未经训练的18~23周岁在校生共34名(男女各17名)进行研究,在有氧运动的条件下,分别即时测试运动过程中体核温度、体表温度和鼓膜温度的变化.结果与结论:结果表明,运动过程中人体核温度、鼓膜温度变化不显著,而工作肌的体表皮肤温度在运动0~2 min下降,2~4 min变化平缓,4~6 min上升,第6分钟时出现峰值,6~8 min再次下降,8~10 min趋于平缓,10 min至结束再次上升.而且所有工作肌的体表皮肤温度几乎都在运动的第6分钟到达高值.说明运动过程中工作肌的表面温度有明显的规律性变化.
-
早期注射丹参酮ⅡA磺酸钠可抑制兔耳增生性瘢痕
背景:丹参酮ⅡA磺酸钠具有抗氧化、抑制纤维化等作用.目的:观察丹参酮ⅡA磺酸钠早期局部注射对兔耳增生性瘢痕的影响.方法:于兔耳腹侧面切除全层皮肤及软骨膜建立瘢痕模型,造模后28 d,分别在创面瘢痕内注射0.05,0.1,0.2 mg的丹参酮ⅡA磺酸钠或生理盐水,每周注射1次,共3周.结果与结论:丹参酮ⅡA磺酸钠注射3周,兔耳瘢痕增生较轻,瘢痕厚度变薄;苏木精-伊红染色见瘢痕组织中胶原纤维减少,血管数目减少;Masson染色检测见瘢痕组织胶原纤维分布面积减少;电镜下瘢痕组织成纤维细胞数量减少,体积相对变小.说明早期注射丹参酮ⅡA磺酸钠对兔耳瘢痕增生有抑制作用.
-
人类膀胱移行上皮细胞的体外培养与鉴定
背景:移行上皮细胞的分离方法有酶消化法、组织块法及刮削法3种.目的:探讨培养人类膀胱移行上皮细胞和其传代的佳方法.方法:培养人类膀胱移行上皮细胞,观察细胞在MEM-F12和KSFM培养基中的生长增殖以及形态变化.免疫荧光染色观察上皮细胞特异性蛋白标记AE1及仅在尿路上皮组织中特异表达的尿空斑蛋白Uroplakin III,以鉴定膀胱移行上皮细胞.分别利用4步胰蛋白酶消化法和组织块再植法对细胞进行传代培养.结果与结论:①细胞在MEM-F12培养基中较KSFM培养基中爬出及融合均快,生长状态良好.②细胞免疫荧光鉴定证实为移行上皮细胞.③胰蛋白酶消化传代细胞,传代第18~24 h贴壁,贴壁后无法继续生长,60~72 h后细胞开始凋亡;组织块再种传代细胞生长稳定迅速,24~48 h细胞开始爬出,第10~16天达到80%融合,传至第4代后开始出现衰退.说明以DMEM-F12培养基进行组织块培养法和组织块再种法是人类膀胱移行上皮细胞原代培养和传代培养经济有效的方法.
-
ShRNA对大鼠心肌细胞ROCK1和ROCK2表达的沉默作用
背景:已有研究发现,ROCK1和ROCK2参与了细胞的凋亡过程,由此假设下调ROCK1和ROCK2表达能抑制心肌细胞凋亡.目的:验证ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能否有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选沉默效率高的shRNA.方法:以ROCK1和ROCK2为靶基因,分别构建了3个特异性shRNA重组质粒,转染这些shRNA后观察其对SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的沉默作用,并筛选出沉默效率佳的shRNA.结果与结论:Western Blot结果显示,与对照组相比,3个重组质粒ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA的转染均能明显降低SD大鼠心肌细胞中ROCK1和ROCK2的表达(P < 0.05或P < 0.01),其中ROCK1-shRNA1和ROCK2-shRNA2的沉默效率高(P < 0.05),分别为(82.15±7.53)%和(89.42±5.81)%.这表明ROCK1-shRNA和ROCK2-shRNA转染能有效沉默大鼠心肌细胞内ROCK1和ROCK2基因的表达,并筛选出了沉默效率高的shRNA.
-
慢性肺动脉血栓栓塞动物模型的建立
背景:目前国内外接近人体生理学的慢性肺动脉血栓栓塞的动物模型较少见.目的:采用自体血栓反复注射法建立慢性肺动脉血栓栓塞的动物模型.方法:将家兔随机分为栓塞组和假栓塞组,栓塞组家兔肺动脉多次注入自体血栓,假栓塞组用生理盐水替代血栓.结果与结论:栓塞组干预4周后解剖肺动脉并经病理检测可发现有血栓机化,肺动脉CT造影均可见局部肺动脉截断征,以及炎症、梗死、胸膜增厚等间接征象,肺动脉解剖及病理均可发现实验兔肺动脉血栓形成机化及慢性炎症改变.结果证实,采用兔自体血栓反复注射法可成功建立慢性肺血栓栓塞动物模型.
-
电针抑制骨性关节炎的炎症反应及延缓关节软骨退变
背景:研究表明电针能有效缓解骨性关节炎的临床症状.目的:观察电针抑制骨性关节炎的炎症反应及保护关节软骨的作用机制.方法:采用木瓜蛋白酶双膝关节腔注射复制SD大鼠骨性关节炎模型,建模成功后分别电针内、外膝眼(EX-LE4,EX-LE5)治疗5,15,30 min/d.结果与结论:与模型组比较,经电针15,30 min/d治疗的骨性关节炎模型大鼠血液中P物质及关节液中白细胞介素1、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α和基质金属蛋白酶3的质量浓度明显减少(P < 0.05),血液中瘦素及关节液中基质金属蛋白酶抑制因子1的水平明显增加(P < 0.05),同时软骨退变的程度明显减轻(P < 0.05,P < 0.01).证实电针能有效减轻大鼠膝骨性关节炎的炎症反应,延缓关节软骨的退变.
-
伴有脊髓损伤先天性脊柱侧凸实验模型的稳定性评估
背景:稳定、有效的先天性脊柱侧弯实验动物模型的建立是深入研究脊柱侧弯继发脊髓损伤的前提和研究分析脊髓损伤机制的有效路径.目的:评估伴有复杂脊髓损伤的先天性脊柱侧弯大白鼠动物模型的稳定性.方法:15只无明显脊髓神经症状的模型大白鼠被置入直径6 cm的专用玻璃管中直立状态生活6~10 d,建立脊髓损伤合并先天性脊柱侧弯大鼠模型.结果与结论:13只大鼠均表现为双侧后肢瘫,后肢及尾部无活动,对针刺亦无反应,排尿障碍,排便未见明显障碍;所有大鼠都出现双侧后肢及尾部的皮毛枯萎,无光泽,部分开始脱毛.BBB评分平均为7.3±2.2.改良Tarlov评分:0级5只;1级2只;2级4只;3级1只;4级1只;5级0只.影像学观察示:先天性的缺陷遍布脊柱的所有节段;在部分实验动物身上,还发现在侧弯顶点的楔形半椎体和间盘一起向椎管方向移位.组织化学观察示:骨与脊髓滋养血管破坏的先天性缺陷,与脊柱的骨性结构破坏部分对脊髓相应节段造成的压迫是一一对应的;畸形顶点水平,可见血管分布缺失区域,在侧弯顶点水平脊柱静脉丛血管组织的凋亡现象.提示动物模型伴随的复杂脊髓损伤症状与先天性脊柱侧弯患儿临床症状的发展过程相近似,动物模型的可重复率在87%(13/15).
-
稳定表达人热休克蛋白22内皮细胞株的构建和鉴定
背景:热休克蛋白22的应激表达可能对缺氧复氧内皮具有一定的保护作用.目的:建立稳定表达人热休克蛋白22基因的内皮细胞株.方法:EcoRⅠ/kpnⅠ双酶切鉴定真核表达重组质粒pEGFP-N1-HSP22.脂质体法以重组质粒pEGFP-N1-HSP22转染人脐静脉内皮细胞,G418筛选,获得G418抗性单克隆细胞.用荧光显微镜、RT-PCR及Western-blot检测热休克蛋白22在人脐静脉内皮细胞中的表达.结果与结论:经双酶切电泳检测重组质粒pEGFP-N1-HSP22符合预期大小片段.稳定转染的单克隆人脐静脉内皮细胞中,荧光显微镜观察到每个细胞均有绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和Western-blot检测到热休克蛋白22mRNA和蛋白表达.说明成功获得稳定表达人热休克蛋白22基因的内皮细胞株.
-
脉冲电场联合野生型p53基因诱导人宫颈癌Hela细胞凋亡
背景:在前期研究基础上,设想将基因电转染作为脉冲电场治疗恶性肿瘤的辅助方法.目的:探讨脉冲电场联合抑癌基因野生型p53基因诱导人宫颈癌hela细胞发生凋亡及相互作用.方法:采用空质粒及含有野生型p53的质粒转染Hela细胞得到Hela-vector、Hela-p53细胞,将Hela细胞、Hela-vector和Hela-p53细胞分别施加固定脉宽100 μs、频率1 Hz、脉冲数8个、电场强度为1 500 V/cm的脉冲电场处理.结果与结论:相同参数脉冲电场作用于各组细胞12 h后,MTT结果显示Hela-p53组细胞吸光度明显低于Hela组(P < 0.05);流式细胞仪及RT-PCR检测结果显示Hela-p53组的早期凋亡率和p53 mRNA表达较Hela组明显增加;Western bolt及激光共聚焦显微镜结果显示与Hela组比较,Hela-p53组细胞Bax蛋白表达明显上升,而Bcl-2蛋白则明显下降,Casepase-3相对荧光强度明显增强.表明野生型p53基因对宫颈癌Hela细胞生长有明显的抑制作用,野生型p53基因可以提高脉冲电场诱导宫颈癌Hela细胞凋亡的作用.
-
大鼠正畸牙移动中Toll样受体4在牙周组织中的表达
背景:学者们对正畸力作用下牙周组织的改建做了大量的研究,但对于在大鼠牙齿移动过程中Toll样受体4在牙周组织中表达的研究尚未涉及.目的:研究在正畸牙移动过程中,大鼠牙周组织中Toll样受体4的表达.方法:采用NiTi拉簧建立大鼠正畸牙移动模型,力值50 g.分别于加力后1,3,5,7,10,14 d取正畸牙周组织,检测Toll样受体4的表达.结果与结论:免疫荧光染色显示,正畸加力1 d,牙周组织中Toll样受体4的表达量增强,至加力后5 d时表达量大,之后逐渐降低,第14天时回落至初始水平.可见正畸力可以刺激牙周组织中Toll样受体4的表达,Toll样受体4可能参与了牙周组织的改建.
-
邻苯二甲酸二丁酯诱导孕鼠尿道下裂模型后仔鼠睾丸细胞过氧化物酶6的表达
背景:前期实验发现在邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露诱导的仔鼠睾丸发育中蛋白过氧化物酶6表达显著增高.目的:进一步验证邻苯二甲酸二丁酯胚胎期暴露对胎鼠睾丸蛋白过氧化物酶6表达的影响.方法:妊娠14~18 d按800 mg/(kg?d) 邻苯二甲酸二丁酯染毒孕鼠,妊娠21 d取出胚胎大鼠睾丸,提取蛋白,通过Western blotting及免疫组织化学方法检测睾丸细胞过氧化物酶6的表达,以正常雄性仔鼠睾丸为对照.结果与结论:Western blotting检测显示,实验组过氧化物酶6的相对表达量为0.205±0.020,对照组为0.110±0.020,实验组明显高于对照组(P < 0.05).免疫组织化学方法发现过氧化物酶6主要定位于胎鼠睾丸Leydig细胞中.说明过氧化物酶6可能通过发挥抗氧化作用及刺激Leydig细胞增殖功能抵抗邻苯二甲酸二丁酯的毒性作用,其功能有待进一步研究.
-
改良型混合酶消化法培养小鼠乳腺上皮细胞
背景:目前采用的A型胶原酶和胰蛋白酶混合酶分离乳腺细胞团的方法操作复杂,实验条件要求高.目的:观察改良型混合酶消化法能否成功进行乳腺上皮细胞的体外培养.方法:采用Ⅰ型、Ⅱ型胶原酶和胰蛋白酶(1∶1∶1)混合消化直接用眼科剪剪碎的小鼠乳腺组织,37 ℃振荡消化获取乳腺细胞团,并采用差速贴壁法去除成纤维细胞,将细胞团接种于细胞培养瓶进行培养.结果与结论:倒置显微镜下观察显示,改良型混合酶消化法能获得较多的细胞团,且培养12 h后细胞团绝大多数贴在细胞瓶壁,培养72 h后细胞团完全铺开融合成片,细胞呈典型的铺路石样.免疫荧光细胞化学染色结果显示,培养细胞角蛋白18呈阳性反应.说明应用改良型混合酶消化法能在短时间内获得大量较纯的乳腺上皮细胞.
-
木瓜蛋白酶诱导膝关节骨关节炎模型兔滑膜病理变化与药物注射时间的关系
背景:木瓜蛋白酶诱导兔膝关节骨性关节炎的造模方法可获得稳定的退行性关节炎模型.目的:观察兔膝关节腔内注射木瓜蛋白酶诱导骨关节炎后,滑膜炎性病理改变与药物注射时间的关系.方法:将木瓜蛋白酶水溶液分别在实验开始的第1,4,7天分别注射入15只西兰大白兔右膝关节腔内,建立膝关节骨性关节炎兔模型,于首次注射后第2,4,6周分别观察膝关节滑膜大体及组织病理学变化,每个时间点5只.结果与结论:木瓜蛋白酶首次注射后第2周,兔膝关节滑膜炎性反应严重,表现为滑膜细胞增生明显,下层疏松纤维及血管组织明显增生,可见较多淋巴浆细胞浸润,第4,6周时炎性反应逐渐减轻.说明兔膝关节首次注射木瓜蛋白酶后2周时滑膜炎性反应严重.
-
激素性股骨头坏死模型兔骨组织病理及功能变化
背景:目前对激素性股骨头坏死的研究均未涉及成骨细胞、破骨细胞变化所引起的细胞功能改变.目的:观察激素性股骨头坏死模型兔骨代谢指标及骨组织病理学变化.方法:将32只新西兰大白兔随机等分为正常组和模型组.模型组臀肌注射醋酸氢化可的松注射液8.0 mg/kg,每周2次,持续8周,建立激素性股骨头坏死兔模型;正常组注射等量的生理盐水.结果与结论:与正常组比较,模型组从第2周开始血清钙、磷显著降低(P < 0.05),而抗酒石酸酸性磷酸酶活性显著升高 (P < 0.05);从第4周开始,模型组骨特异性碱性磷酸酶水平升高,骨钙素水平降低(P < 0.05);模型组骨特异性碱性磷酸酶水平至第8周有所下降.与正常组比较,模型组股骨转子骨密度从第2周开始降低(P < 0.05),股骨头骨密度从第4周开始降低(P < 0.05);成骨细胞数从第4周开始明显降低,破骨细胞数从第4周开始明显升高(P < 0.05).提示激素可通过损伤骨组织细胞引起骨塑形及骨重建的破坏,造成骨矿物盐的丢失,引起激素性股骨头坏死的发生.
-
超声破坏微泡法介导增强型绿色荧光蛋白质粒转染兔股骨头组织的安全性及可行性
背景:超声微泡转染系统已尝试于体内多部位的基因转染,但尚未见有用于骨部位基因转染的报告.目的:观察超声破坏微泡法介导增强型绿色荧光蛋白质粒转染兔股骨头组织的效率及可行性.方法:将日本大耳白兔按随机均分为裸转染组,预照射+裸转染组,超声定位转染组,预照射+超声定位转染,重复定位转染组.其中前2组不给予超声定向转染照射,后3组利用超声微泡破裂法介导增强型绿色荧光蛋白质粒,定向基因转染兔股骨头.各组转染1周后,于荧光显微镜下观察增强型绿色荧光蛋白在股骨头组织中的表达情况.结果与结论:超声定位转染组,预照射+超声定位转染,重复定位转染组均有增强型绿色荧光蛋白表达,且复定位转染组增强型绿色荧光蛋白质粒在兔股骨头内的转染效率明显高于其他组(P < 0.01).超声定位转染组,预照射+超声定位转染,重复定位转染组兔超声照射部位软组织和骨组织切片未观察到明显损伤病灶.结果证实,超声微泡破裂法能安全、有效实现增强型绿色荧光蛋白质粒在兔股骨头组织的转染.
-
Ⅱ型胶原酶消化法可短时间获得大量纯化大鼠关节软骨细胞
背景:建立一种经济、快捷、切实可行的软骨细胞分离培养体系对于软骨体外实验研究有着重要的意义.目的:探讨与改进大鼠关节软骨细胞的培养方法.方法:无菌条件下取新生1周龄SD雄性大鼠双侧髋及膝关节软骨,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离软骨细胞并进行原代、传代培养及鉴定.结果与结论:倒置相差显微镜下见原代培养的软骨细胞12 h后开始贴壁,3 d左右可形成单层,4 d左右即可传代.传至第6代后,部分细胞变为梭形;第7代后,绝大部分细胞变为长梭形和不规则形状,增殖能力减弱.甲苯胺蓝染色显示培养的软骨细胞核呈异染性,免疫荧光染色显示培养的软骨细胞Ⅱ型胶原呈阳性表达.说明采用此方法可在短时间内获得大量纯化的大鼠软骨细胞.
-
维药买朱尼含药血清影响大鼠关节软骨细胞基质金属蛋白酶1及其组织抑制因子1的表达
背景:基质金属蛋白酶1及其组织抑制因子1的失衡是骨关节炎软骨降解的关键.目的:观察维药买朱尼对白细胞介素1β诱导的大鼠关节软骨细胞基质金属蛋白酶1及其组织抑制因子1表达的影响.方法:从1周龄SD大鼠关节中分离培养原代软骨细胞,鉴定后选用第2代细胞随机分为正常对照组、模型组、买朱尼组.模型组和买朱尼组用10 μg/L的白细胞介素1β干预24 h后,买朱尼组在此基础上加入体积分数10%的买朱尼含药血清,模型组加入正常大鼠血清,继续培养12,24,48 h进行实验.结果与结论:各组细胞培养48 h,RT-PCR检测发现体积分数10%的买朱尼含药血清可上调软骨细胞基质金属蛋白酶组织抑制因子1 mRNA的表达同时抑制基质金属蛋白酶1 mRNA的表达,但此作用在细胞培养的24,36 h时不明显.同时免疫荧光细胞化学染色也显示买朱尼含药血清可促进软骨细胞基质金属蛋白酶组织抑制因子1的表达.说明买朱尼可以调节白细胞介素1β诱导的大鼠关节软骨细胞基质金属蛋白酶1及其组织抑制因子1的表达,且此作用具有时间依赖性.
-
自噬对骨骼肌体积维持的研究现状
背景:骨骼肌体积的维持无论在疾病防治还是个体机能维持和发展方面都具有关键作用.研究自噬通路的调节作用对骨骼肌蛋白的影响,可为肌体积的维持打开了新的思路.目的:探讨骨骼肌中自噬系统传导通路在肌肉蛋白的分解代谢过程中的利弊.方法:用计算机检索ISI Web of knowledge数据库(1970/2010)和Science Direct数据库(2000/2010),检索关键词为"autophagy,skeletal muscle,protein,muscle atrophy",语言设定为英文.对自噬机制对骨骼肌丢失、肌肉体积维持以及在代谢中的调节作用方面进行总结,并分析自噬-溶酶体系统的研究进展.结果与结论:按纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入64篇文章.结果表明骨骼肌细胞自噬的活化在蛋白的破坏和肌肉萎缩过程中非常关键,过度的自噬与遍在蛋白-蛋白酶体系统相似,会对肌肉含量产生不良的影响.同时自噬系统在肌细胞稳态的维持上也发挥着重要的作用.并且骨骼肌内的自噬过程与其他代谢组织不同,存在着长期和短期两种自噬过程,由2种不同的信号通路进行控制,因而还需要对骨骼肌自噬通路分子机制进行进一步的研究.
-
肌肉力量神经调控与停止训练的关系
背景:当运动员遇到疾病、受伤、旅行等情况时往往会停止训练,这对机体骨骼肌的神经调控的可能产生影响.目的:全面了解停止训练对机体肌肉力量神经调控能力的影响及其机制.方法:检索Medline数据库1983/2006收录的停止训练与肌肉力量神经调控的相关综述和论文报告,并根据检索到的文献中所列出的相关参考文献进行追溯查找.结果与结论:共纳入停止训练与肌肉力量神经调控的相关文献48篇.发现一定持续时间的停止训练可引起大随意收缩力下降,但可能受到骨骼肌本身、脊髓及脊髓以上中枢的影响;同时,由于运动训练模式、肌肉收缩形式、测试部位、停止训练的状况等不同,可能会使大随意收缩力及相关神经学适应在停止训练期间被不同程度地保留下来.
-
肌肉组织工程研究现状及对运动性肌肉损伤的作用
背景:高水平快节奏的体育运动比赛中容易造成肌肉运动损伤,肌肉组织工程为其修复带来希望.目的:综述肌肉组织工程研究的现状,为运动性肌肉损伤组织工程学研究提供理论基础.方法:以"tissue engineering,anterior cruciate ligament repair,biological material scaffold,cytokines,seed cells"为关键词,采用计算机检索Pubmed数据库中1994-01/2010-12的相关文章.纳入与运动性肌肉损伤及肌肉组织工程相关的文章;排除重复研究或Meta分析类文章.结果与结论:共纳入15篇文献,目前的研究重点包括肌肉组织工程重建、细胞外基质复合材料、肌肉组织工程种子细胞的来源、基质支架4个方面.目前的研究表明肌肉组织工程对运动性肌肉损伤的治疗有良好的应用前景.但在实际应用中,肌肉组织工程的种子细胞的选择、支架材料的构建、细胞外基质复合材料研究和组织的相容性等仍是肌肉组织工程学方面的难点问题.
-
内脏脂肪组织FOXC2mRNA表达水平与2型糖尿病的关系
背景:FOXC2在能量代谢等方面发挥重要作用,与脂肪细胞分化密切相关,且FOXC2基因在抵御2型糖尿病及代谢综合征相关因素方面有重要作用.目的:检测云南地区人群大网膜脂肪组织中FOXC2 mRNA表达水平,探讨其与2型糖尿病的关系.方法:随机抽取在昆明医学院附属医院行腹部外科手术的2型糖尿病患者及非2型糖尿病患者各50例,RT-PCR检测其大网膜脂肪组织中FOXC2 mRNA的表达水平,并分析两组受试者的临床资料与FOXC2 mRNA水平的相关性.结果与结论:2型糖尿病患者腹部大网膜脂肪组织FOXC2 mRNA表达水平下降;FOXC2 mRNA表达水平在2型糖尿病组与空腹血糖、血压呈负相关,在非2型糖尿病组与空腹血糖呈负相关(P < 0.01).提示FOXC2与2型糖尿病的关系主要在于可以减轻胰岛素抵抗,改善胰岛素对糖代谢的调节,此外它的表达下降在糖尿病患者血压升高中起到一定的协同作用.
-
牡丹江地区汉族及朝鲜族高血压人群中G蛋白β3亚单位825C/T的多态性
背景:G蛋白β3亚单位825C/T基因多态性与朝鲜族人群原发性高血压是否存在关系尚无报道.目的:研究牡丹江地区朝鲜族、汉族高血压患者C825T基因的多态性.方法:纳入2008-09/2010-08在牡丹江市朝鲜民族医院内科就诊的原发性高血压患者224例作为病例组,同时选取同时期的门诊体检的健康者196例作为对照.用PCR-RFLP检测G蛋白β3亚单位基因C825T多态性,观察TT,CT,CC基因型频率及等位基因频率.结果与结论:PCR-RFLP检测结果显示牡丹江地区朝鲜族高血压患者与朝鲜族健康人TT,CT,CC基因型频率差异无显著性意义(P > 0.05);T,C等位基因频率差异有显著性意义(P < 0.05).而牡丹江地区汉族人群中TT,CT,CC基因型分布在高血压人群和正常人群差异有显著性意义(P < 0.05),而T,C等位基因频率差异无显著性意义(P > 0.05).朝鲜族高血压组等位基因C的比例较高,而汉族高血压组等位基因T的比例较高,存在民族异质性.提示G蛋白β3亚单位基因C825T多态性与牡丹江地区朝鲜族高血压无关联,但其是牡丹江地区汉族高血压的危险因素.
