中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子: 1.38
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 2095-4344
- 国内刊号: 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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软骨组织工程研究中的干细胞
近来,干细胞作为一种自体软骨细胞的替代物,在软骨组织工程中日益得到重视.骨髓源性干细胞在多种条件下均能表现出软骨形成的潜能.脂肪源性十细胞是一种从脂肪组织中分离获得成的纤维细胞样干细胞群,经体外一段时间培养后,获得稳定的扩增,其衰老的水平较低,在三维培养环境下可分化为软骨细胞.肌肉、滑膜和骨膜是骨髓和脂肪组织之外的用于软骨修复的其他干细胞源.人类胚胎干细胞和原代软骨细胞共培养,可以诱导软骨形成,但对其选择纯化较为困难,且胚胎十细胞具有致瘤性,临床使用尚存在伦理学问题.
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基因干扰机制及其在细胞信号转导中的应用
基因干扰是一种新兴的基因阻断技术,是外源和内源性双链RNA在细胞内使特异性序列的基因表达受抑.基因干扰技术能高效特异的阻断基因的表达,可以确定复杂的信号传导途径中不同基因的上下游关系,是研究信号转导通路的有力工具.基因干扰技术可有效抑制目的基因表达mRNA以及蛋白质产物,其可以简便、特异、高效、稳定地下调目的基因的表达,亦可在不影响其他物质的情况下,剔除目的基因.基凼下扰技术比以前用于基因功能研究和应用的各种方法更优秀,但基因十扰技术对于哺乳动物细胞株的转染效率低;哺乳动物细胞中对双链RNA或小干扰RNA的导入会产生拮抗作用等方面亦有待改进.将有效且具高度安伞性的小干扰RNA用于医疗,前景令人期待.
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蛋白激酶C在细胞及肿瘤细胞凋亡中的作用
蛋白激酶C属于丝/苏氨酸蛋白激酶家族,在介导细胞的增殖、分化和凋亡等信号传导中发挥重要作用,并与肿瘤的发生、发展和侵袭转移等过程密切相关.蛋白激酶C是信号转导通路中发挥关键作用的蛋白激酶之一,做为信号分子,它的活化足一系列细胞级联信号传导途径的关键环节,既介导多种细胞信息的传递,又参与调节基因的表达与功能,影响细胞周期,对肿瘤细胞的生长、分化、增殖与凋亡起调节作用.因此,采用抗细胞信息传递药物可能为抗肿瘤治疗提供更加广阔的前景.
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血管内皮生长因子治疗性血管生成作用与缺血性脑血管病
血管内皮生长因子是血管特异性生长因子,能特异性地作用于血管内皮细胞,诱导血管生成,在血管发生和血管形成过程中起重要作用.传统观念认为,成年脑部血管内皮细胞是不能增殖的,但近期的动物实验发现局灶性脑缺血后可诱导缺血半暗带区的新生血管形成.这种脑血管生成是通过血管生长因了与内皮细胞上表达的酪氨酸受体结合而调控的.但是这种血管形成数量有限,并不足以挽救血液灌注不足引起的损害.新近的研究已经证实,外源性给予血管牛长因子能刺激侧枝循环形成和增加局部血流,并且已在外周动脉闭塞性疾病和心肌缺血中成功应用,这种新的刺激和诱导新生血管形成新颖方法一治疗性血管生成,为治疗缺血件脑血管病提供了一条全新的思路.
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骨组织电学特性及其临床应用
对骨组织而言,正常的生理活动可导致骨骼的局部变形(应变)、微观损伤、压电电位、骨小管内液体流动和流动电位.骨内电现象主要包括压电效应、动电效应和生物电,这些电生理特性被广泛的应用于骨的治疗.文章对骨组织电学特性的临床应用进行了综述,包括电(电磁)刺激成骨和压电膜成骨.
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关于针刺治疗脑缺血疾病机制中血管新生途径的新思路
在针刺治疗脑缺血疾病临床疗效机制的研究中,内皮祖细胞等存在于成体内的干细胞参与机体损伤修复的作用已成为当前组织工程研究的热点之一.资料显示,针刺可以从多种途径缓解和改善脑缺血带来的损伤且具有明显的治疗效果,而血管新生町能是其中的重要途径之一.缺血性损伤会导致内皮祖细胞参与血管新生修复,多种细胞因子在这一过程中发挥作用,它们可动员并诱导内皮祖细胞归巢.现有研究表明,针刺可以影响其中部分因子的表达,这种内在联系为针刺治疗脑缺血机制的认识开辟了新的思路.
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运动人体科学研究方法的现状及展望
以统计学分类研究对第八届全国体育科学大会414篇运动人体科学方向论文的研究方法进行分析.认识目前运动人体科学类论文研究方法及测试手段的应用现状及发展趋势.结果显示:运动人体科学研究方法具有自身专业特点;多种研究方法联合运用将成为未来方法学发展的趋势;运动生物力学测试于段将在录像解析、足底压力测试及运动医学方向上有所发展;多学科方向、偏重定量化的测试手段及分子生物学技术的应用推动了运动人体医学研究的发展.
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大白鼠大剂量静脉血心脏快速采血方法的改进
背景:随着实验的深入,对动物血液样本的采集速度和质量有了更高的要求,采血技术也亟需改进.目的:对运动医学实验中普遍采用的白鼠心脏穿刺采血技术进行改进,解决从心脏快速采集大剂量静脉血的问题.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-10在曲阜师范大学运动生化实验室完成.材料:选用17周龄Wistar雄性大白鼠96只,体质量350-450 g.方法:96只大白鼠随机区组法分为安静组,游泳40 min组和力竭即刻组,每组32只.各组白鼠在实验条件施加后分别于相应时刻,依次用乙醚麻醉,进行心脏采血.首先暴露皮下胸骨剑突.然后从胸骨剑突左侧斜行入针,入针的路线在胸骨左侧缘矢状面上,深度人约2 cm为敏感采血深度,当见到针管有血液进入后,缓慢回抽针管,速度尽量保持均匀,5 mL血液一般用25-35 s的时间采完为宜.主要观察指标:记录各组白鼠采血时间、采血及静脉血成功率.结果:纳入Wistar大白鼠96只,实验中安静组、游泳40 min组和力竭即刻组第1次入针末采集到4 mL以上血液的动物分别为1只、2只和2只,主要原因包括白鼠未同定好,体位不正;未麻醉完全,白鼠在同定板上乱动;入针后实验者回抽针管过急导致针头堵塞等.在对上述因素消除后,第2次入针均采血成功.采血时间各组间相比,差异无显著性意义(P>0.05).采血成功率安静组96.9%、游泳40 min组93.7%、力竭即刻组93.7%.静脉血成功率各组均为100%.结论:从胸骨剑突左侧斜行入针的心脏穿刺采血新技术能更好地满足时间和采血数量、质量有更高要求的实验需要,有效减少时间因素的影响.
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SD大鼠白细胞介素10复制缺陷型重组腺病毒的构建及鉴定术
背景:重组腺病毒质粒的构建是重组腺病毒制备过程中的中枢环节,传统的细胞内同源重组法步骤多、成功率低、实验周期长.目的:构建含有大鼠白细胞介素10(rlL-10)基因的重组复制缺陷型腺病毒Ad.rlL-10,为真核表达及其动物模型的研究提供实验基础.设计、时间及地点:开放性实验,于2005-07/2006-04在中山大学附属第一医院完成.材料:SD大鼠1只.AdEasy系统由美国John Hopkins肿瘤研究中心惠赠.ThermoscriptTMRT kit 和Trizol 为Invitrogen产品;HEK-293保存于中山大学动物实验中心细胞库;克隆大鼠白细胞介素10基因引物合成及测序由上海博亚生物技术有限公司完成.方法:采用反转录聚合酶链反应的方法从健康SD大鼠脾脏新鲜组织中提取的总RNA中克隆rIL-10基因,采用AdEasy-1腺病毒载体系统经E.CoilBJ5183细菌内同源重组及HEK.293包装而获得重组腺病毒Ad.rlL-10.主要观察指标:用Western blot和RT-PCR的方法鉴定Ad.rlL-10并进行滴度测定.结果:自健康SD大鼠脾脏组织中克隆rIL-10基因,构建出重组腺病毒Ad.rlL-10.经PCR扩增、酶切鉴定、DNA 测序终确定插入序列为rlL-1 0,Western blot和RT-PCR均检测出细胞内rlL-10基因及其蛋白表达.再通过扩增、纯化后获得滴度为1.0x1014pfu/mL的重组腺病毒.结论:采用AdEasy-1系统,经细HEK-293细胞包装、扩增,纯化后获得足够数量和质量的病毒,方法简便易行,结果稳定可靠.
关键词: 白细胞介素10.腺病毒载体 基因疗法 -
正常和退变腰椎间盘蛋白质的双向电泳和质谱鉴定
背景:近年来对于退变腰椎间盘组织蛋白质成分改变的研究取得了很大进展,但是对于正常和退变腰椎间盘整体蛋白质成分改变的分离和差异鉴定却鲜见报道.目的:建立正常和退变腰椎问盘蛋白质的双向电泳图谱,鉴定差异表达蛋白,探讨腰椎间盘退变的生物学机制.设计、时间及地点:对比观察,于2007-06/2008-12在南方医科大学病理生理实验室完成.材料:由自愿者提供的正常和退变腰椎间盘组织各6例,年龄21~45岁,其中男9例,女3例;取材范围L3-L5.方法:氯化铯梯度离心去除正常和退变腰椎间盘组织蛋白多糖,通过崮相pH梯度(IPG)等电聚焦和梯度聚丙烯酰胺双向电泳分离蛋白质,分析电泳图像,使用基质辅助激光解吸附飞行时间质谱仪对差异蛋白质点进行分析鉴定.主要观察指标:正常腰椎间盘及退变腰椎间盘组织IPG等电聚焦双向凝胶电泳结果.结果:双向电泳显示正常和退变腰椎间盘蛋白质图谱差异显著,从中选取16个差异明显的位点进行质谱仪分析,确定了6种具有显著性意义的差异蛋白质.结论:双向电泳可有效地分离正常和退变腰椎问盘组织蛋白质,通过质谱仪鉴定可以确定其之间差异蛋白质的性质.
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D-半乳糖诱导衰老小鼠模型的建立与评价
背景:目前构建衰老动物模型的方法主要有注射D-半乳糖,臭氧损伤,去胸腺,采用老龄动物等.因D-半乳糖造模简单、试验周期相对较短,故目前广泛应用于衰老试验研究.目的:使用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,并对其进行行为学、生化以及免疫等方面的评价.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-03/08在南通大学医学院完成.材料:ICR小鼠35只,体质量(18±2)g,雌雄兼用.随机分为正常对照组15只,衰老模型组20只.方法:衰老模型组小鼠用D-半乳糖按120 mg/kg背部皮下注射6周,1次/d,造成亚急性衰老模型:正常对照组不予药物.主要观察指标:使用Y型电迷宫检测小鼠的学习、记忆功能;使用相关试剂盒测定血清中丙二醛浓度、超氧化物歧化酶活力和脑中脂褐质含量、单胺氧化酶-B活性以及肝中谷胱廿肽过氧化物酶活性等生化指标;单向琼脂扩散法测定血清中IgG含量;四甲基偶氮唑盐法测定小鼠脾淋巴细胞转化刺激指数;ELISA检测血清中细胞因子白细胞介素2,γ干扰素的浓度.结果:与正常对照组相比,γ迷宫显示衰老模型组小鼠记忆功能明显下降,表现为不同时间的正确反应率降低,潜伏期延长;生化指标显示模型小鼠血清中丙二醛及脑中脂褐质含量增加、血清中超氧化物歧化酶与肝中谷胱甘肽过氧化物酶活力下降,而脑中单胺氧化酶B活力没有明显改变:免疫相关指标显示模型小鼠血清IgG水平下降、脾淋巴细胞转化刺激指数降低、血清中细胞因子γ干扰素的浓度减少,白细胞介素2变化不明显.结论:D-半乳糖建立亚急性衰老模型小鼠记忆功能下降、氧自由基产物增加和抗氧化能力下降、免疫功能降低,可用于行为学、抗氧化、以及免疫等方面的抗衰老药效研究.
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制备神经细胞实验性缺氧缺糖模型的简易方法
背景:在神经细胞培养中实验性缺氧缺糖在一定程度上模拟缺血性卒中,对于研究缺血性神经元损伤的进程和病理生理学机制有非常重要的用处.目的:在神经元培养时制作实验性缺氧缺糖模型.设计、时间及地点:分组对照观察,实验于2007-01/2008-03在北京大学第三医院中心实验室完成. 材料:17-19 d胎龄的Wistar大鼠.方法:细胞培养取17~19 d胎龄的Wistar大鼠的皮质神经元做原代细胞培养,并且去掉污染的非神经原细胞.缺氧缺糖的诱导分为3组:实验组将第7天的皮质神经元置于无糖甲衡盐溶液和2%去氧酶中,在37℃的潮湿保温箱中培育.空白对照组培养基为含20 mmol/L葡萄糖的无去氧酶平衡盐溶液.假性实验组培养基为含20 mmol/L葡萄糖和失活的去氧酶平衡盐溶液.主要观察指标:以血气分析进行氧浓度的测定;以相差显微镜观察实验组培养细胞神经元死亡状况;以用乳酸脱氢酶检测盒检测乳酸脱氢酶活性;以锥虫蓝染色观察缺氧缺糖对神经元存活力的影响.结果:氧浓度测定显示在加入去氧酶后培养基迅速产生缺氧状态;乳酸脱氢酶检测显示在用去氧酶和无糖平衡盐处理后,培养基中乳酸脱氢酶释放显著增加;锥虫蓝染色和相差显微镜检查显示经去氧酶和无糖平衡盐处理后实验组的细胞活力明显下降,大部分神经元在6 h死亡.结论:实验结果显示去氧酶与无精平衡盐液可联合用于神经元培养时产生缺氧缺糖状态,其在体外模拟脑缺血的相关研究中有重要作用.
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喉罩替代气管插管实验猪的可行性
背景:气管内插管是机械通气的金标准,但是气管插管技术有难度,而喉罩被公认为对于急诊或非急诊插管困难的患者有很大的应用潜力,而且在其多年的应用中已逐渐形成了一套对普通和困难气道行之有效的方法.目的:探讨实验猪应用喉罩代替气管插管的可行性. 设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-03/2008-07在青岛大学医学院附属医院动物实验室完成.材料:家猪26只,体质量22~46 kg,雌雄不拘;内径为7.0~7.5 mm的气管导管,3号,4号经典喉罩,由青岛大学医学院附属医院麻醉科提供. 方法:26只家猪随机区组法分为2组,气管插管组(n=16):在基础麻醉下慢诱导,应用长喉镜片经猪口行气管内插管;喉罩组(n=10):在基础麻醉下不用喉镜直接用手指辅助置入喉罩. 主要观察指标:比较两组实验猪诱导期所用时间、诱导期脉搏血氧饱和度变化、机械控制呼吸气道峰压变化、术毕动脉血气变化. 结果:家猪26只全部进入结果分析.两组实验猪气管插管及喉罩置入均顺利,喉罩组诱导时间明显短于气管插管组(P<0.01):拔管时间及气道峰压变化两组相比,差异无显著性意义(P>0.05).气管插管组插管过程中6只脉搏血氧饱和度一过性下降<95%,2只脉搏血氧饱和度一过性下降<90%;而喉罩组脉搏血氧饱和度均>95%.两组动物实验结束后动脉血气各指标相比,差异无显著件意义(P>0.05).结论:对于困难气道的猪来说,喉罩置入简单、快捷,完全可以取代气管插管,有效地简化了麻醉操作,但置入过程中应加强气道压监测,确保喉罩位置合适.
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不同剂量博莱霉素致小鼠肺纤维化模型的比较
背景:经气管注射博莱霉素是制作动物肺纤维化模型常用的方法,但博莱霉索佳造模剂量目前国内外尚无统一定论.目的:对比观察不同剂量的博莱霉素对小鼠肺纤维化模型的效果,寻找一种较为合理可靠的小鼠造模剂量.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-09/2008-04在上海市发育生物学重点实验室完成.材料:SPF级健康雌性C57BU6J小鼠60只,体质量18~22 g,用于制备小鼠肺纤维化模型.方法:60只小鼠随机数宁表法分为博莱霉素组(n=45)和对照组(n=15),博莱霉素组各选15只动物分别气管内注射不同剂量(2,3.5,5 mg/kg)的博莱霉素,对照组气管内注射相同体积的生理盐水,所有小鼠于造模后第28天处死并取其左肺叶制作病理切片,右肺叶作羟脯氨酸含量测定.主要观察指标:小鼠28 d内的存活情况;光镜观察肺部炎症和纤维化程度;取右肺叶做羟脯氨酸测定.结果:①实验开始后前7 d,博莱霉素组和对照组均无小鼠死亡,第8天博莱霉索组小鼠死亡率高丁对照组(P<0.05);博莱霉素3个剂量组之间死亡率由高到低分别为5,3.5,2 mg/kg博莱霉素组,但差异无显著性意义(P>0.05).②光镜下可见对照组肺泡形态正常,问质中无炎症细胞浸润;博莱霉素组可见肺实变和胶原沉积,剂量越高,肺纤维化程度越重,以5 mg/kg博莱霉素组明显.③各组小鼠肺组织中羟脯氨酸含量从高到低依次为5 mg/kg博莱霉素组、3.5 mg/kg博莱霉素组、2 mg/kg博莱霉奈组和对照组.结论:经气管注射博莱霉素制作小鼠肺纤维化模型应兼顾造模效果和动物的存活率,3.5 mg/kg是较为理想的小鼠造模剂量.
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基于人脂肪组织获取基因构建pET28a-leplin(瘦素)重组子
背景:新近的一些研究认为,采用体外重组瘦素替代疗法对遗传性肥胖、难愈性创面和内源性瘦素缺乏应是行之有效的方法.目的:取人脂肪组织获取瘦素基因,构建pET28a-leptin重组子.设计、时间及地点:单一样奉观察,实验于2004-06/2007-12在江西省医学科学研究所抗肿瘤室完成.材料:取自22岁汉族女性行重睑于术时皮下脂肪组织,冻存于液氮中备用,供者知情同意.方法:取人脂肪组织,反转录-聚合酶链反应得到瘦素基因后,通过DNA重组技术克隆至pMDl8T载体与pET28a原核表达载体,EcoR Ⅰ+Xho Ⅰ双酶切及测序鉴定.主要观察指标:①cDNA扩增结果.②重组质粒鉴定.③DNA测序结果.结果:扩增得到520 bp目的基因;所构建重组瘦素原核表达载体pET28a-leptin经双酶切电泳见520 bp目的条带,DNA测序与相应基因序列同源性达100%.结论:通过DNA重组至pET28a原核表达载体,经EcoR Ⅰ+Xho Ⅰ双酶切及测序鉴定成功构建pET28a-leptin重组子.
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维生素E对离心运动大鼠骨骼肌超微结构的影响
背景:维生素E作为一种抗氧化剂,具有清除自由基的功效,可减轻运动中抗氧化酶所受的自由基损伤,减缓疲劳出现,从而提高运动能力.目的:通过维生素E对骨骼肌运动性损伤的干预,探讨其对骨骼肌运动性损伤形态学变化的影响,为骨骼肌运动性损伤的形态学研究和抗损伤机制的探索提供实验依据.设计、时间及地点:随机分组,动物实验,于2007-05/10在沈阳体育学院国家体育总局重点实验室和中国医科大学电镜中心完成.材料:雄性SD大鼠16只,随机均分为对照组、运动组、生理盐水组、维生素E组.方法:维牛索E组于实验前1 d腹腔注射维生素E胶丸,注射量为1.0-1.2mg/kg,总量为4mL/kg,每8 h注射1次,共4次.生理盐水组以生理盐水为对照,注射方式、注射量及处死时间同维生素E组.运动组只进行运动,不给予药物或生理盐水,对照组仅为常规饲养,无任何干预.采用一次力竭性下坡跑运动建造大鼠损伤模型,运动结束后,取大鼠右侧肱三头肌,制做电镜标本.主要观察指标:肌原纤维和肌节排列情况;Z线异常变化;细胞膜、细胞核、线粒体、肌浆网、T小管、卫星细胞等形态学改变.结果:补充维生素E组后,骨骼肌损伤的超微结构改变有明显的改善,虽然肌浆网尚有水肿表现,但肌纤维排列基本整齐,Z线明暗带清晰,细胞核清楚.结论:补充维牛素E可有效地减少离心运动对骨骼肌肌纤维损伤的形态学改变,肌纤维排列更加整齐、肌节更加清晰,其作用可能与维生素E的抗氧化和促进蛋白质的合成功能等因素有关.
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高压氧对递增负荷训练大鼠腓肠肌P53、Bcl-2 蛋白表达的影响
背景:研究显示高压氧疗法在运动损伤与疲劳恢复方面具有较好的应用效果,但其机制尚不清楚.目的:观察高压氧对递增负荷跑台运动后大鼠腓肠肌P53、Bcl-2蛋白表达及细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验.于2008-03/05在苏州大学运动人体科学实验室完成.材料:2个月龄雄性SD大鼠24只,随机分为3组,安静对照组、递增负荷训练组、高压氧恢复组,每组8只.方法:递增负荷训练组:坡度10%,递增负荷训练,第1~4周,每天20 m/m.n运动10 min,25 m/min运动10 min,30 m/mIn运动10 min,35 m/min运动10 min.第5~8周,每天20 m/mIn运动10 min,25 m/min运动10 min,30 m,min运动20 min,35 m/min运动20 min.高雎氧恢复组:运动方案相同,运动后即刻用0.2 MPa压力的商压氧恢复60 min.安静对照组自由喂养,不进行训练.递增负荷训练组末次运动后1 h、高压氧舱恢复组恢复1 h及相应安静对照组分批麻醉处死,快速取腓肠肌立即用体积分数为0.1甲醛固定,制作切片.主要观察指标:①苏木精-伊红染色观察各组大鼠骨骼肌细胞凋亡情况.②免疫组织化学检测各组大鼠骨骼肌细胞P53与Bcl-2蛋白表达情况.结果:24只大鼠进入结果分析.①递增负荷训练组大鼠骨骼肌细胞凋亡数量增多,经高压氧恢复后细胞凋亡数量减少.②递增负荷训练组大鼠骨骼肌细胞P53蛋白表达增多,经高压氧恢复后表达显著减少.③递增负荷训练组大鼠骨骼肌细胞Bcl-2蛋白表达增多,高压氧恢复后未见减少.结论:高压氧能够抑制递增负荷训练大鼠骨骼肌P53蛋白的表达,减少运动导致的大鼠骨骼肌细胞凋亡的发生.
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小鼠胚胎流出道心内膜α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞的分布
背景:早期胚胎心脏流出道心内膜α-平滑肌肌动蛋向阳性细胞参与了流出道的分隔,但在流出道分隔中的分布规律及作用机制仍然不明.目的:观察心内膜α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞在流出道分隔过程中分布的时空规律,探讨其与流出道分隔的关系.设计、时间及单位:单一样本观察,于2006-06/2007-12在山西医科大学组织胚胎学教研室完成.材料:鼠龄3个月的雌性中国昆明小鼠30只,体质量30~32 g.方法:妊娠小鼠经乙醚麻醉,收集9~16 d胎龄胚胎共32只,制作心脏切片.连续切片每10片取1片做苏木精-伊红染色,其余9片进行免疫组织化学染色.主要观察指标:抗α-平滑肌肌动蛋白、抗结蛋白、抗α-横纹肌肌节肌动蛋白单克隆抗体在胎龄9~16 d小鼠胚胎心脏流出道的表达.结果:胎龄10d,可见α-平滑肌肌动蛋白阳件丰肺动脉隔形成,同时,α-平滑肌肌动蛋白阳件细胞沿弓动脉壁迁入流出道心胶质.胎龄11 d,流出道心内膜内,α-平滑肌肌动蛋白阳件和a一平滑肌肌动蛋白阴性问充质细胞聚集形成流出道嵴.胎龄12~13 d,主肺动脉隔将半月瓣远端流出道分隔为升主动脉和肺动脉干,主肺动脉隔分化为升主动脉和肺动脉干相对的内侧壁.胎龄13 d后,半月瓣以下,流出道嵴愈合形成流出道隔,将流出道近段分为左右心室流出道.流出道隔中可见部分α-平滑肌肌动蛋白阳性细胞聚集争漩涡状.间充质性流出道隔形成与其肌性化相伴随.结论:流出道心内膜和主肺动脉隔的α-平滑肌肌动蛋白强阳性细胞来自神经嵴.流出道不同部位的α-平滑肌肌动蛋白阳性神经嵴细胞功能不同,与流出道其他细胞成分相互作用,完成流出道的分隔和霞建.
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电针对家免Oddi括约肌运动及其相关脑肠肽的影响
背景:"经脉一脏腑相关"是针灸经络学说中主要的研究内容之一,课题以一个脏腑为基础研究其与多条经脉之间的关系,探讨经脉与脏腑之间是甭存在相对特异性.目的:通过电针足三阳经穴对家兔Oddi括约肌肌电发放及其相关脑肠肽胆囊收缩素浓度的影响,探讨针刺对Oddi括约肌的调整作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-01/2007-12在湖南中医药大学针灸推拿学重点实验室完成.材料:新西兰大耳白兔60只,体质量2.0~2.5 kg,雌雄不拘,随机分为空白组、阿托品组、足三里组、阳陵泉组、四白组、承筋组,每组10只.方法:各组兔用生理记录仪记录Oddi括约肌肌电活动1 h后,除空白组滴注生理盐水外,其余各组均静滴阿托品,静滴的同时足三里、阳陵泉、四白、承筋组分别电针相应腧穴20 min.主要观察指标:记录处理前、后Oddi括约肌肌电各1 h,放射免疫法检测血浆及Oddi括约肌组织内胆囊收缩素的浓度.结果:与阿托品组比较:空白组、叫白、足二里、阳陵泉组慢波高活动相及快波平均振幅升高(除足三里组快波外,均为P<0.01或P<0.05);四白、足二里、阳陵泉组均能使Oddi括约肌组织及血浆巾胆囊收缩素的浓度升高(除足三里组Oddi括约肌组织胆囊收缩素浓度外,均为P<0.01或P<0.05),产生上调的效应依次为:四白组>阳陵泉组>足三里组.结论:经(穴)对所辖脏腑存在着或直接或间接的、特异性的调控作用,胆囊收缩素是针刺对胆道系统运动起调节作用的重要脑肠肽之一.
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二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧复氧损伤的影响
背景:大量实验表明,中药何首乌有效活性成分二苯乙烯苷具有降血脂、抗动脉粥样硬化和保护心血管等作用.在许多病理过程中,活件氧可引起细胞脂质过氧化,引起细胞转运功能和酶的性质发生改变,丧失了对细胞离子的调节功能.目的:观察二苯乙烯苷对人脐静脉血管内皮细胞缺氧,复氧损伤是否具有保护作用.设计、时间及地点:以血管内皮细胞为观察对象的随机对照实验,于2006-04/10在九江学院医学院分子生物实验中心完成.材料:人脐静脉血管内皮细胞株.方法:采用人脐静脉血管内皮细胞建立缺氧复氧损伤模型,干预实验分为8组,每组重复6次.对照组为人脐静脉血管内皮细胞常氧条件下培养;缺氧复氧组为人脐静脉血管内皮细胞缺氧3 h后分别复氧2 h;10,5,2.5 ng/L二苯乙烯苷治疗组分别在缺氧复氧损伤前及缺氧复氧损伤后给予相应剂量的二苯乙烯苷;10,5,2.5 ng/L二苯乙烯苷预处理组分别在缺氧复氧损伤前给予相应剂量的二苯乙烯苷.主要观察指标:应用四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞活力;用UV-1206紫外光分析光度计检测乳酸脱氢酶、总抗氧化能力、丙二醛、超氧化物歧化酶及一氧化氮.结果:二苯乙烯苷能剂量依赖性的提高缺氧复氧血管内皮细胞的存活率,降低乳酸脱氢酶活性及丙二醛浓度,提高总抗氧化能力、超氧化物歧化酶活性及一氧化氮浓度(P<0.01),且治疗组比预处理组作用更明显(P<0.01).结论:二苯乙烯苷对血管内皮细胞缺氧复氧损伤具有明显的保护作用,而且其治疗作用优于预防作用.
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低氧对成人成肌细胞增殖的影响
背景:人成肌细胞可再生不同组织的细胞来用于组织工程方面的研究,其体外培养时增殖能力有限,因此,进行促进人成肌细胞体外增殖的研究很重要. 目的:通过间歇性低氧处理,观察成年大鼠原代培养的成肌细胞的增殖能力的变化.设计:对比观察,重复测晕设计.时间及地点:实验于2007-08/2008-06在辽宁医学院附属第一医院外科实验室完成.对象:3例男性成人正常颞肌标本取自于开颅手术患者,年龄分别为23岁,29岁和36岁.患者均知情并同意.方法:取成人正常颢肌组织,分离培养成肌细胞并鉴定,将培养至第3代的成肌细胞分为常氧对照组、体积分数为0.1 O2组、0.03 O2组及无氧组.各组细胞采用4孔板培养4 d后进行记数.主要观察指标:不同培养条件下细胞的生长状态和特点;以自动生化分析仪测定培养液中氧含量,以乳酸分析仪测定细胞培养液中的乳酸浓度;以流式细胞仪测定各组细胞的增殖指数.结果:随着环境氧浓度的下降,细胞培养液中的氧含量也逐渐下降(P<0.05),而乳酸浓度逐渐升高(P<0.05),当环境氧浓度为0时,乳酸浓度大于2.0 mmol/L.低氧组成肌细胞数日比常氧组明显增加,尤以体积分数为0.1的02组更为明显,其成肌细胞数目约为常氧组的2.5倍(P<0.05),体积分数为0.03的O2组在低氧1 d和2d时增殖指数低于常氧组,低氧4d时,增殖指数增加;而体积分数为0.1的O2组增殖指数一直高于常氧组(P<0.05).结论:轻中度低氧有利于成人成肌细胞的体外增殖,提示低氧作为体外的一种可控制因素,可调节成肌细胞的增殖,对于其基础及临床研究具有一定的意义.
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人Leptin基因融合蛋白表达载体构建及对人成骨细胞的作用
背景:瘦素作为一种内分泌激素参与机体能量代谢的调节,近年来瘦素对骨代谢的调节作用也越来越被人们所重视.目的:克隆人Leptin基因,构建重组原核表达载体PEGX-5X-3/Leptin并在大肠杆菌中表达,观察Leptin融合蛋白对人成骨细胞的生长抑制作用.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-07/2008-05在苏州大学附属第一医院骨科实验室完成.材料:新鲜的脂肪组织取自苏州大学附一院(供者知情并同意)、大肠杆菌DH5а、人成骨细胞由苏州大学附属第一医院骨科实验室保种.方法:从人脂肪组织中提取RNA,采用反转录-聚合酶链式反应获得人Leptin全部序列,克隆入带有GST原核细胞表达载体PEGX.5X-3中,实现插入基因的融和表达,用SDS.PAGE和Western Blot对表达产物进行鉴定,提取并纯化GST-Leptin融合蛋白,以5,10,20,40 mg/L不同质量浓度与人成骨细胞共培养,同时设立相应浓度梯度的GST蛋白组,四甲基偶氮唑盐法测两组人成骨细胞的体外增殖情况.主要观察指标:①Leptin 基因的克隆与鉴定.②重组质粒的双酶切及聚合酶链反应鉴定.③融合蛋白的表达.④GST-Leptin融合蛋白的纯化.⑤GST-Leptin融合蛋白的鉴定.⑥GST-Leptin融合蛋白对人成骨细胞的生长影响.结果:反转录-聚合酶链反应扩增得到的特异性片段长度约为450 bp,以此构建的重组质粒PEGX-5×-3/Leptin,经BamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后显示5 kb和450 bp左右的两条片段.测序结果与Genbank中报道的完全一致,证明Leptin基因已成功地克隆到了原核表达载体PEGX-5×-3中.并在大肠杆菌中获得稳定的表达,表达产物的相对分子质量(Mr)同预期值相一致,融合蛋白为M 45 000,GST蛋白为Mr29 000,与GST蛋白组相比,20,40 mg/L的GST-Leptin融合蛋白可以明显促进细胞的生长(P<0.05),且其促进作用有一定的浓度依赖性.结论:成功构建了PEGX-5X-3/Leptin重组原核表达载体,在E.coil BL21中表达GST-Leptin融合蛋白,并以浓度依赖性促进人成骨细胞的生长.
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人胚胎骨骨膜来源成骨细胞的分离培养与生物学特性
背景:胚胎骨来源成骨细胞因其低免疫原性和高增殖与成骨活性有可能成为适用于骨组织工程方法异体骨组织缺损修复的种子细胞.冻存复苏后的牛物学特点是台能进行进一步临床应用研究有待证实.目的:建立人胚胎骨骨膜来源成骨细胞的分离培养、保存方法,观察骨膜来源成骨细胞生物学特点.设计、时间及地点:细胞形态学与生物学特性实验研究,于2005-04/2006-05在天津市口腔医院细胞与组织工程实验室完成.材料:细胞来源为5月龄自然流产胎儿,产妇及家属知情同意,无菌条件下取长骨骨膜组织.方法:采用组织块法对成骨细胞进行原代培养,传代培养细胞液氮冻存3~6个月后,选择不同代次细胞复苏培养.主要观察指标:通过形态学、超微结构,细胞增殖曲线,钙结节Von kossa法染色以及细胞内碱性磷酸酶定量检测与钙钴法染色确定其增殖与成骨活性.结果:组织块法培养骨膜来源成骨细胞第6天即可获得原代细胞增殖,传代扩增细胞具有典型成骨细胞形态学和生物学活性.苏木精-伊红染色密集融合的成骨细胞与细胞外基质显示转化为脊样骨组织结构排列.经统计学分析定量榆测成骨细胞碱性磷酸酶活性与细胞密度有线性正相关关系.液氮冷冻保存后复苏培养复层成骨细胞钙钴法碱性磷酸酶染色阳性率在45%以上,超微结构显示为高分化功能活跃成骨细胞.结论:胚胎骨骨膜来源成骨细胞具有良好的增殖与成骨活性.深低温液氮冻存成骨细胞复苏后仍能连续传代增殖并具有良好的成骨代谢活性,能够体外借助细胞外基质形成骨样结构.
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人牙胚组织在裸鼠肾囊膜培养模式下的成牙能力
背景:建立一种科学可靠、简便可行,既可以人为进行干预,又不会影响牙齿继续发育的体外培养模式对于了解人类牙齿发育的组织学特点至关重要.目的:将流产人胚胎12周的磨牙牙胚植入到裸鼠肾囊膜下培养.观察其成牙情况,建立人牙胚再生的培养模式.设计、时间及地点:细胞水平的动态观察实验,于2005-03/2006-12在福建师范大学生命科学学院和发育与神经生物学福建省高校重点实验室完成.材料:12周流产人胚胎由福州市第二人民医院妇产科提供,6~10周龄Blab/c裸鼠.方法:无菌条件下分离新鲜的12周流产人胚胎下颌,分离磨牙牙胚.将牙胚移植到裸鼠肾囊膜下分别培养4,8,12和16周,取移植块.主要观察指标:以苏木精-伊红染色和Azon法染色后进行形态学观察.结果:生长4周的人牙胚内,可以观察到造釉器和牙乳头的细胞发生形态改变,牙上皮细胞和间充质细胞开始极化,胞体变长形成前成釉质细胞和前成牙本质细胞.生长8周时,前成釉质细胞和前牙本质细胞的极化变得更加明显,细胞已变成高柱状,在未来牙尖区域可发现少量牙本质的形成.培养12同时,可见连续完整的牙本质.生长16周的人牙胚,已经形成连续完整的成釉质细胞,牙釉质、牙本质和成牙本质细胞层.结论:肾囊膜是入牙胚组织体外培养的良好模式.
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人骨形态发生蛋白7基因转染对兔髓核细胞增殖和细胞外基质合成的影响
背景:以往的研究表明人骨形态发生蛋白7(hBMP·7)能够有效促进细胞外基质合成,修复受损的椎间盘基质,恢复椎间盘高度.因此有希望用于控制和逆转椎间盘退变.然而重组蛋白半衰期短,生物学活性低,退变椎M盘中很难保持骨形态发生蛋白7浓度.基因治疗能够宵效预防这些缺陷.目的:观察人骨形态发生蛋白7基因转染对原代培养的兔髓核细胞牛物学活性的影响,为人骨形态发生蛋白7基因治疗椎间盘退变的体内实验研究奠定基础.设计、时间及地点:随机对照,细胞学体外实验.于2005-12,2006-09在解放军第二军医大学长海医院全军胸心外科研究所实验室完成.材料:4周龄新西兰大耳白兔6只,体质量约500 g.Ad-hBMP7由长海医院胸心外科研究所构建.方法:麻醉后处死白兔,提取髓核,依次经过链霉蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和儿型DNA酶在37℃条件下消化4 h,细胞接种于培养皿内,孵箱内培养,7 d后每周更换培养液2次.将细胞随机分为3组,用整合有人骨形态发生蛋白7基因的腺病毒感染髓核细胞,整合有Lac-Z基因的腺病毒感染的髓核细胞以及末转染的髓核细胞作为对照组.主要观察指标:以反转录-聚合酶链反应和Western-blot的方法在不同水平检测其表达情况,以四甲基偶氮唑盐的方法观察其对细胞增殖能力的影响,以改进的二甲基亚甲蓝色比色法和ELISA法观测人骨形态发牛蛋白7基因转染对细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原能力的影响.结果:鉴定确定入骨形态发牛蛋白7基因为正向插入腺病毒载体,无突变.原代培养的兔髓核细胞形态与文献报道一致.腺病毒载体介导的人骨形态发生蛋白7基因能够高效转染髓核细胞,并表达人骨形态发生蛋白7,同时促进了髓核细胞增殖以及合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原,较对照组有显著性差异(P<0.05).结论:腺病毒介导的人骨形态发生蛋白7基因具有逆转兔椎间盘退变的能力.
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健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子α诱导大鼠成骨细胞凋亡的影响
背景:成骨细胞数量减少或凋亡进程加速,使骨形成少于骨吸收可导致骨质疏松的发生.肿瘤坏死因子а在去势大鼠或绝经后骨质疏松患者骨组织中呈高表达,在体外可刺激成骨细胞凋亡.健骨颗粒可降低骨质疏松模型鼠血清肿瘤坏死因子а水平.目的:验证健骨颗粒含药血清对肿瘤坏死因子а诱导的鼠成骨细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2004-07/2006-12在福建巾医学院骨伤系分子生物学实验室完成.材料:3月龄SD雌性大鼠40只用于制备含药血清,24 h SD乳鼠5只用于培养成骨细胞.健骨颗粒由煅狗骨、淫羊藿、山茱萸、党参等药味组成,原约材由福建省药材公司提供,福建中医药研究院中试车间加工制备,每克颗粒含原生药2.9 g.方法:用酶消化法培养成骨细胞.随机将40只SD大鼠分为高、中、低剂量含药血清组和生理盐水对照组,每组10只,分别将健骨颗粒按4,2,1 g/(kg·d)的药量灌服,对照组每天灌服2 mL生理盐水.连续给药7 d后腹主动脉取血得到健骨颗粒含药血清,将含药血清作用于成骨细胞48h后,再用肿瘤坏死因子а诱导24 h.运用TUNEL技术、流式细胞术、免疫细胞化学结合图像分析方法,检测成骨细胞凋亡情况.主要观察指标:①成骨细胞凋亡指数.②成骨细胞凋亡峰.③成骨细胞Bcl-2、Bax表达.结果:用肿瘤坏死因子а诱导的各组成骨细胞均出现凋亡现象,其中中、高剂量含药血清组的细胞凋亡指数和凋亡率明显低于其他组,而Bcl-2/Bax灰度比值却较其他组高(P<0.05),Bcl-2/Bax灰度比值与凋亡指数呈负相关(r=-0.757,P<0.01).结论:健骨颗粒对肿瘤坏死因子Q诱导的成骨细胞凋亡有一定的保护作用,可能通过提高Bcl-2的表达来实现.
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雌性激素对骺生长板软骨细胞周期调节蛋白的作用
背景:长骨干骺端生长板是哺乳动物在生长发育期间实现线性生长的结构基础.激素及生长因子对生长板软骨细胞的调节作用与生长、生长板老化直至完全闭合具有决定性意义.目的:观察雌性激素对骺生长板软骨细胞周期蛋白表达的影响,及其在生长板闭合过程中的作用.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2003-07/2005-07在重庆医科大学动物实验中心完成.材料:健康雌性12周龄新西兰白兔30只,平均体质量1.57 kg.方法:30只新西兰白兔性发育前(12周龄)行双侧卵巢切除,4周后(16周龄)随机抽签法分为2组:雌二醇组每周苯甲酸雌二醇肌肉注射,140μg/kg;对照组:每蒯不含雌二醇的等体积火菌棉籽油肌肉注射(1.5 mL/kg).两组动物分别于处理后第4,7,10周(20,23,26周龄)取双侧股骨远端、胫骨近端干骺部分生长板作免疫组织化学染色.主要观察指标:两组动物不同年龄股骨和胫骨末闭合骺生长板软骨细胞细胞周期蛋白D1、P53、P21WAF1/CIP1及P16INK4A蛋白的表达.结果:①雌二醇组雌兔实验后4周相当于性发育早期(20周龄),胫骨近端、股骨远端骺生长板细胞周期蛋白D1表达水平显著高于同年龄期对照组(P<0.05);7周后(23周龄)胫骨近端骺生长板细胞周期蛋白D1表达仍高十对照组雌兔(P<0.05),股骨远端骺生长板细胞周期蛋白D1表达开始降低,与对照组雌兔无显著差异(P>0.05).②实验后4,7周(20-23周龄)雌二醇组雌兔股骨远端和胫骨近端骺生长板软骨细胞P53蛋白表达明显高于对照组(P<0.05).⑧雌二醇组P21WAF1/CIP1的表达增高则出现在实验后7周(23周龄),与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.05).④两组雌兔骺生长板P16INK4A蛋白免疫组织化学检测均为阴性.结论:雌二醇具有加速生长板闭合过程的作用,可能与雌性激素长期作用于软骨细胞后诱导细胞周期抑制蛋白如P21WAF1/CIP1、P53有关.
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不同人群踝关节跖屈肌群肌肉形态与力量的相关性
背景:骨骼肌肌肉形态与力量关系密切,采用CT、核磁共振等仪器对人体骨骼肌进行活体形态测量,结合相关肌肉力量测量手段探索两者之间相关关系的报道尚不多见.目的:对比观察不同人群肌肉形态与力量的差异,探讨踝关节跖屈肌群形态特征与肌肉收缩力量之间的关系.设计、时间及地点:对比观察,于2006-05/12在中国医科大学附属第二医院完成.对象:选择普通男性青年学生14人作为对照组,测试前未专门从事过力量训练;另选健将级速滑运动员10人作为运动组.所有测试对象试验期间踝关节均无损伤.方法:采用螺旋CT对受试对象双侧小腿进行不问断连续扫描,影像分析采用Xiphoid CT专用图像分析软件,由CT图像计算得出小腿围、踝关节跖屈肌横截面积,根据体视学原理采用数值积分法计算跖屈肌群体积.采用CYBEX-NORM型多关节等速测力系统对踝关节跖屈肌群进行60,120,180,240,300(.)/s不同角速度下的等速测试.主要观察指标;①各组受试者跖屈肌形态及不同角速度下跖屈峰力矩和跖屈相对峰力矩的变化.②各组受试者不同角速度下跖屈峰力矩与跖屈肌群体积、大横截面积、小腿围相关性. 结果:①与对照组相比,运动组跖屈肌大横断面积、体积和小腿围均显著增大(P<0.05).在踝关节等速向心测试中,运动组的跖屈向心峰力矩在每一个角速度下均显著高于对照组(P<0.05),但随着关节运动角速度的增加,对照组和运动组的跖屈向心峰力矩都相廊地减小,②在不同的角速度F,跖屈肌群大横截面积、肌肉体积、小腿围与跖屈峰力矩之间均具有显著的正相关性(r>0.725,P<0.05-0.01).结论;跖屈肌群峰力矩变化趋势与肌肉形态相一致,肌肉形态可作为观测肌力变化的一个重要参考指标.
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下颌角区域解剖结构特征与颅耳沟微创切口
背景:下颌角整形常采用口外切1:3、1:3内切口、口内外联合切口等3种入路,颅耳沟微创切口下颌角截骨作为一种较新的入路方式,其报道尚不多见.目的:明确下颌角及其相关血管神经的解剖,为颅耳沟微创切口下颌角截骨手术提供解剖依据.设计、时间及地点:单一样本观察,于2008-02/05在解放军第二军医大学解剖教研室完成.材料:成人头颅标本15个,男4例,女11例,共30侧;成人下颌骨15个30侧.方法:将成人头颅标本15个30侧逐层解剖,观察下颌角的解剖层次,行经下颌角区域的血管神经的分布、走行及与下颌角的位置关系;选用15个成人下颌骨并做标记线,依次沿标记线锯开下颌骨,用游标卡尺分别测量颏孔、下颌孔及各横断面的下颌管截面至下颌骨边缘、内壁、外壁的距离并计算各项指标的x±s.主要观察指标:①下颌角区域的解剖层次.②卜颌角区域的血管.③下颌角区域的神经.④下颌管.结果:耳大神经、颈外静脉、面神经颈支、面动脉、面静脉在下颌骨下缘水平距离下颌角的距离分别是(19.48±6.45),(13.84±3.78),(9.58±3.05),(22.62±7.16),(20.08±6.45)mm;面神经下颌缘支出腮腺的位置距离下颌角(7.79±2.57)mm;下颌管在第3磨牙外缘至下颌角凸点连线距离是(16.97±2.24)mm.结论:下颌角区域解剖结构复杂,有许多重要的血管神经,但尚有一定规律可循,颅耳沟微创切口从解剖学角度相对安全.
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乙哌立松对慢性下腰痛椎旁肌血流效应影响:随机对照观察
背景:椎旁肌被广泛认为是导致慢性下腰痛的一个重要病理因素.往往伴有椎旁肌的肌内压力增高和血流减少.目前国内尚缺乏盐酸乙哌立松对椎旁肌血流影响的相关研究.目的:观察盐酸乙哌立松对慢性下腰痛患者椎旁肌肌肉血流效应的影响.设计、时间及地点:随机对照试验,于2007-07/2008-06在南京中医药大学附属常熟医院完成.对象:选择南京中医药大学附属常熟医院就诊的男性慢性下腰痛患者45例,平均年龄46岁左右.方法:45例男性患者随机分配到3个组:每组15例,对照组仅接受物理治疗;EMPP组接受4周的盐酸乙哌立松治疗和麦肯基疗法;麦肯基疗法组接受麦肯基疗法.主要观察指标:分别于受试前、第2,4周以日本骨科学会腰痛评分系统(JOA)、目测类比评分量表(VAS)评价患者疼痛值,以非侵袭性的近接触红外分析镜观察椎旁肌血氧含量.结果:46例患者均进入结果分析.3组间年龄、身高、体质量、吸烟史及骶骨前倾角、T11~L1脊柱前凸角度差别均无显著性意义(P>0.05).第4周EMPP组的VAS评分明显低于对照组(P<0.05);JOA评分3组疼痛值无显著差别.EMPP组较麦肯基疗法组和对照组的椎旁肌血氧达到高峰的时间缩短、且椎旁肌血氧含量明显增加.结论:使用盐酸乙哌立松4周后,患者的神经根性痛得到改善,增加了椎旁肌血氧含量及椎旁肌的血流量.
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端粒长度与腰骶部慢性骨筋膜间隔综合征
背景:端粒的长度与细胞老化、永生化、痛变有密切的关系.目的:探讨端粒长度变化在腰骶部慢性骨筋膜间隔综合征中的意义.设计、时间及地点:对比观察,实验于2007-07/2008-02在上海交通大学医学院医学基因组学国家重点实验室完成.对象:25份竖脊肌组织标本取自2007-05/09,年龄29-49岁,平均(34.7±12.6)岁,其中10份为正常人标本,15份为腰骶部慢性骨筋膜间隔综合征所致慢性腰痛患者标本,根据年龄正常标本分为30-37岁和38-45岁2个对照组;非正常标本分为29~34岁、35~43岁和44~49岁组,每组5例.方法:取各组标本提取DNA,采用Southen Blotting杂交技术,测量各组标本竖脊肌组织骨骼肌细胞端粒长度.主要观察指标:患者竖脊肌组织与jF常组织端粒酶长度.结果:腰骶部慢性骨筋膜间隔综合征所致慢性腰痛患者竖脊肌细胞平均端粒长度明显比正常人竖脊肌细胞平均端粒长度短,且有显著性差异(P<0.05),44~49岁组短,29~34岁组其次.结论:端粒的异常状态参与腰骶部慢性骨筋膜间隔综合征的发生.在腰骶部慢性骨筋膜间隔综合征病变的过程中,端粒长度明显变短,与年龄有关.
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脊髓型颈椎病椎间盘白细胞介素1水平与颈脊髓功能的相关性
背景:白细胞介素1自身及其产生的级联反应在椎问盘退变及周围组织如脊髓的功能障碍中起着重要作用.目的:分析脊髓型颈椎病患者颈椎间盘白细胞介素1 а、白细胞介素1 β水平及其与颈脊髓功能的相关性,探讨白细胞介素1在脊髓型颈椎病发病机制中可能起到的作用.设计、时间及地点:实验采用对比观察,于2008-01/11在安徽医科大学第一附属医院骨科及安徽医科大学寄生虫学实验室完成.对象:实验组收集安徽医科大学第一附属医院2008-01/10骨科住院的25例脊髓型颈椎病患者48个椎间盘组织,因颈椎刨伤的10例患者20个椎间盘组织作为对照.标本均为颈椎前路手术摘取凡患者自愿捐献.方法:应用酶联免疫吸附(ELISA)法测量两组颈椎间盘白细胞介素1а、白细胞介素1 β的水平;采用日本骨科协会颈脊髓功能评分(JOA评分17分法)对实验组病例进行术前颈脊髓功能评分.主要观察指标:①两组椎间盘组织中的白细胞介素1а、白细胞介素1 β水平.②实验组椎间盘组织中的白细胞介素1 а、白细胞介素1 β质量浓度与JOA评分相关性分析.结果:所收集的病例全部纳入结果分析.脊髓型颈椎病患者椎间盘组织白细胞介素1 а、白细胞介素1 β质量浓度水平明显高于对照组(P<0.01).脊髓犁颈椎病患者椎问盘组织中的白细胞介素1 а、白细胞介素1 β质量浓度与JOA评分间呈负相关(ra=-0.860:rb=-0.669,P<0.01).结论:脊髓型颈椎病患者颈椎间盘组织的白细胞介素1 а、白细胞介素1 β水平明显增高,且与颈脊髓功能成负相关.
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脊柱全长摄片发现骶椎腰化并骶1~2隐裂1例
1例男性患者早期依据腰椎平片被误诊为腰椎骶化并腰5骶1隐裂,后由于患多发脊椎结核行颈胸椎影像学检查才发现诊断错误予以纠正.提示常规仅凭腰椎影像资料有可能漏误诊骶椎腰化并骶1-2隐裂的诊断,脊柱全长片对明确判定腰骶椎畸形有重要意义.
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血红素加氧酶1分子克隆及表达载体的构建
背景:近年来许多研究发现血红素加氧酶1具有抗炎、抗氧化及抗凋亡等作用,并且在心肌缺血-再灌注损伤等应激反应中有重要的保护作用,从而成为研究热点.目的:克隆大鼠血红素加氧酶1全长基因,并将其于真核表达载体PIRES2-EGFP相连接,构建血红素加氧酶1的真核表达载体.设计、时间及地点:实验于2008-03/06在苏州大学生物技术研究所完成.材料:成年雄件SD大鼠,由苏州大学动物实验中心提供,用于脾脏细胞总RNA的提取;克隆载体PMDl8-T购自Takara公司;表达载体PIRES2-EGFP由苏州大学生物技术研究所保存.方法:分离大鼠脾脏获取脾脏细胞,Trizol法提取脾脏细胞的总RNA,经反转录一聚合酶链反应扩增获得血红素加氧酶1基因,将扩增出来的产物与克隆载体PMDl8.T连接,转化TOP10感受态细菌,挑取阳性克隆经PCR及酶切鉴定后测序确证.测序正确后抽提质粒作为模板进行PCR,Sal-Ⅰ和BamH-Ⅰ同时双酶切PCR产物和载体PIRES2-EGFP,再在T4 DNA连接酶的作用下进行连接,构建其真核表达载体.主要观察指标:血红素加氧酶1基因的克隆和DNA测序结果证实序列是否正确;PIRES2.EGFP/血红素加氧酶1真核表达载体的构建以及测序证实目的基因成功插入载体.结果;①实验完成了大鼠血红素加氧酶1基因的克隆,所获得的序列与GeneBank中收录的大鼠血红素加氧酶1序列完全一致.②构建真核表达载体PIRES2-EGFP/血红素加氧酶1,测序正确说明血红素加氧酶1基因成功插入表达载体PIRES2-EGFP中.结论:实验成功克隆了大鼠血红素加氧酶1基因全长,并构建了其真核表达载体.
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人可溶性血管内皮生长因子受体1基因克隆及真核表达载体的构建
背景;血管内皮生长因子在肿痛新生血管的形成中发挥着关键的作用,可溶性血管内皮生长因子受体1能竞争性地抑制血管内皮生长因子诱导新生血管形成的生物学功能.目的:克降人可溶性血管内皮生长因子受体基因1,尝试构建可溶性血管内皮牛长因子受体1基因的真核表达载体.设计、时间及地点:基因表达载体构建实验,于2006-1012007-11在中山大学附属第一医院外科实验室完成.材料:人脐静脉内皮细胞、pMD-18T载体及pcDNA3载体.方法:提取人脐静脉内皮细胞总RNA,使用反转录一聚合酶链反应的方法扩增获得到可溶性血管内皮生长因子受体1基因cDNA,并将其克隆至pMD-18T载体中,经酶切及测序证实.然后应用聚合酶链反应的方法从pMD-18T可溶性血管内皮生长因子受体1重组载体中克隆可溶性血管内皮生长因子受体1基因,再将其定向亚克降至真核表达载体pcDNA3中,构建真核表达重组体pcDNA3-可溶性血管内皮生长因子受体1,提取质粒进行双酶切、聚合酶链反应及测序鉴定.主要观察指标:可溶性血管内皮生长因子受体1基因反转录一聚合酶链反应情况及pcDNA3-可溶性血管内皮生长因子受体1真核重组体的构建与鉴定结果.结果:构建的真核表达重组体pcDNA3-可溶性血管内皮牛长因子受体1经过双酶切及聚合酶链反应鉴定,证实其中含有目的可溶性血管内皮生长因子受体1基因;测序结果经比对分析,证实与预期设计的编码区cDNA一致.结论:应用反转录-聚合酶链反应方法成功从人脐静脉内皮细胞中克隆出可溶性血管内皮生长凼子受体1基因,成功构建出了可溶性血管内皮生长因子受体1基因真核表达载体.
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叉头转录因子1质粒标准品的构建
背景:研究表明叉头转录因子1是一种新的2型糖尿病易感基因,但2型糖尿病患者与健康人的叉头转录因子1基因在转录水平上差异性的研究不多.由于还没有商品化叉头转录因子1的质粒标准品,因此有必要构建其标准品.目的:构建应用实时荧光定量-聚合酶链反应检测叉头转录因子1 mRNA的质粒标准品.设计、时间及地点:单一样本重复实验,于2007-1 1/2008-03在苏州大学附属第一医院检验科实验室完成.材料:SYBR ExScriptTM反转录-聚合酶链反应Kit试剂盒,SYBR Premix Ex TaqTM试剂盒,凝胶回收纯化DNA试剂盒,质粒DNA小量纯化试剂盒,PMDl8-T Vector试刺盒等.方法:从健康志愿者血标本中提取总RNA,反转录合成cDNA,以cDNA为模板应用聚合酶链反应扩增出目的片段,对其回收纯化连接到PMD18-T载体及转化JMl09,阳性克隆经测序分析,确认重组质粒正确.抽提重组质粒,用紫外分光光度仪测定其浓度,再根据公式换算成拷贝浓度,后稀释成梯度标准品.主要观察指标:重组质粒聚合酶链反应和基因测序结果,标准品标准曲线的相关系数及标准品的重复性.结果:成功构建了叉头转录因子1质粒标准品,通过聚合酶链反应及基因测序鉴定其目的片段已成功插入载体.各稀释度的标准品经荧光定量-聚合酶链反应扩增后,其循环阈值与起始模板量的对数值之间有着良好的线性关系,线性范围是2.39×(105-1012)copies/mL.各稀释度标准品的批内重复性好,其变异系数范围为0.29%~1.16%.结论:实验成功构建了具有较好灵敏度和重复性的叉头转录因子1质粒标准品.
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重组人骨形态发生蛋白2在大肠杆菌中的可溶性表达和纯化
背景:骨形态发生蛋白是一类调节骨组织发育的生长因子,其中骨形态发生蛋白2诱骨活性强,在骨组织工程研究中需要大量的骨形态发生蛋白2.目的:克隆表达骨形态发生蛋白2基因,并进行蛋白表达及蛋白纯化定量.设计、时间及地点:单一样奉观察,于2008-05/07在宝牛物工程(大连)有限公司开放实验室完成.材料:表达载体pET28a Vector及相应的宿主细胞E.coil BL21(DE3)购于Novagen公司;分子伴侣质粒pTF16、pGr07、PKJE7购于宝生物工程(大连)有限公司.方法:利用基因重组技术,优化片人工合成骨形态发生蛋白2基因,亚克隆至含T7启动子的原核表达载体pET28a中,构建表达载体pET-BMP.将重组质粒pET-BMP与3种含分子伴侣质粒共转入宿主菌E.coil BL21(DE3)中,用IPTG进行诱导表达.菌体经超声波破碎,镍柱亲和层析纯化并定量.主要观察指标:①3种表达质粒的表达及町溶性检测及表达上清的westem blotting检测.②pET-BMPg的纯化.结果:在表达宿主菌中,骨形态发生蛋白 2基因获得了高效表达,其中一组为可溶性表达,表达产物经亲和层析纯化后,可溶性表达量达12.18 mg/L培养基.结论:人骨形态发生蛋白2基凼能在PET表达系统中得到高效可溶性表达.
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槟榔提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用
背景:目前有关槟榔成分对成纤维细胞增殖的影响存在两种截然不同的结果.有学者用较低浓度的槟榔碱能促进成纤维细胞增殖,另有实验显示槟榔碱在高于15.6 mg/L时对成纤维细胞的直接作用是抑制成纤维细胞生长和胶原合成.目的:进一步验证槟榔提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞的抑制作用,为烧伤后增生性瘢痕的治疗提供实验依据.设计、时间及地点;分组对比观察,于2002年在解放军总医院烧伤研究所完成.材料:槟榔生药为北京问仁堂提供.手术中取下的2例增生性瘢痕患者组织,年龄30岁以下,病程半年~2年,患者对治疗及研究均知情同意.方法:体外培养烧伤后的人增生性瘢痕成纤维细胞,分别加入15.63,31.25,62.5,125,250,500 mg/L不同剂量的槟榔提取物作用.主要观察指标:24 h后观察细胞形态学,以乳酸脱氢酶为指标观察细胞毒性,以四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖活性.结果:加入不同剂量提取物作用24 h后,培养上清液中乳酸脱氢酶与对照组无显著性差异(P>0.05);不同浓度的槟榔提取物均能改变成纤维细胞形态,抑制细胞增殖,浓度在500 mg/L以下无明显的细胞毒作用.结论:槟榔提取物对人增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,并呈剂量依赖关系.
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自体富血小板凝胶修复新西兰大白兔皮肤缺损
背景:自体富血小板凝胶含有的多种牛长因子已被证实可促进一些特定细胞的增殖分化.目的:观察自体富血小板凝胶修复新西兰大白兔皮肤缺损的效果.设计、时间和地点:同体对照实验,于2007-03/2008-03在上海交通大学附属第六人民医院完成.材料:清洁级成年健康新西兰大白兔20只,体质量2.5-3.0 kg,雌雄不限.抽取兔耳中动脉血液8 mL制作自体富血小板凝胶.方法:取新两兰大白兔20只,在背部脊柱两侧分别制作面积为3 cm×3 cm的全层皮肤缺损.随机选择一侧为实验组,皮肤缺损区以自体富血小板凝胶覆盖,另一侧为对照侧,以自体血凝块覆盖,用3M膜密封创面.术后第5,10,15,20天通过大体观察,面积计算以及组织学切片来观察两侧伤口愈合情况.主要观察指标:①检测自体富血小板凝胶和全血中血小板浓度.②两组创面大体形态观察和组织学观察.结果:富血小板血浆中血小板浓度明显大于全血涂片.术后第5天,可见自体富血小板凝胶组炎性渗出物较少;术后第5~20天,两侧创面逐渐缩小,自体富血小板凝胶创面缩小速度明显大于对照组.组织学观察显示,自体富血小板凝胶组新生皮肤较对照组成熟.结论:自体富血小板凝胶可促新西兰大白兔皮肤缺损的修复.