中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子: 1.38
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 2095-4344
- 国内刊号: 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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有氧训练大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a和肌细胞增强因子2的表达
背景:研究表明微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原可调解骨骼肌的分化与重塑.目的:观察有氧训练对腓肠肌微小RNA-133a、肌细胞增强因子2和成肌分化抗原表达的影响.方法:将SD大鼠随机分为对照组和有氧训练组,有氧训练组采用大鼠跑台运动模型,而对照组不进行运动训练.训练4,6周后采集各组大鼠腓肠肌组织,并称取腓肠肌的质量,实时定量PCR检测骨骼肌中肌球蛋白、微小RNA-133a、肌细胞增强因子2与成肌分化抗原mRNA的表达,并采用免疫组织化学的方法检测腓肠肌Ⅱ型肌纤截面积的改变.结果与结论:训练4,6周,有氧训练组大鼠腓肠肌的相对质量以及肌球蛋白重链-Ⅱa的表达水平较对照组显著增加(P < 0.05或P < 0.01),Ⅱ型肌纤维横截面积即显著增大(P < 0.05),其微小RNA-133a和肌细胞增强因子2 mRNA的表达较对照组显著升高(P < 0.05,P < 0.01),而成肌分化抗原mRNA的表达在各组间差异均无显著性意义.证实,有氧训练可上调大鼠腓肠肌组织微小RNA-133a、肌细胞增强因子2 mRNA的表达.
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选择性深低温血流阻断猴海马超微结构和波形蛋白表达的变化
背景:前期研究显示,选择性深低温顺行脑灌注能提高猴脑对缺血缺氧的耐受性.目的:观察选择性深低温血流阻断对猴海马超微结构和波形蛋白表达的影响.方法:将8只健康成年恒河猴随机分为两组:深低温组(n=5)在常温下阻断猴双侧颈总动脉及颈内静脉10 min,然后通过一侧颈内动脉灌注4 ℃林格氏液,同侧颈内静脉回流,使脑温维持在18 ℃以下,60 min后恢复脑血流;常温组(n=3)除灌注液改为37 ℃林格氏液外,其余与深低温组相同.结果与结论:深低温组猴全部成功复苏,海马组织形态及超微结构未见明显异常.常温组猴全部死亡,未能成功复苏,海马组织形态及超微结构有不同程度异常.与常温组比较,深低温组海马波形蛋白表达显著降低(P < 0.01).说明阻断双侧颈总动脉10 min后行选择性深低温顺行脑灌注可下调海马波形蛋白表达,保护海马组织,减轻脑缺血损害.
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正交法探索平板离心构建无载体细胞片的可行性
背景:实体器官移植目前在实验室及临床已积极展开,具有良好的治疗效果,但实体组织器官供体来源的匮乏是世界性的难题之一.目的:用平板离心技术构建细胞片以探索一种新的实体组织构建方法.方法:首先用梯度离心力对人皮肤成纤维细胞进行离心力反应和细胞即时贴壁率的探索,设计出不同离心力水平、细胞浓度及离心时间,用正交实验优选佳离心参数,用优选所得的佳离心条件进行稳定重复实验.用佳离心条件进行单层细胞离心实验,自然培养组为对照组,观察离心后单层细胞的活性及增殖活力.用离心法进行多层细胞片的构建,然后进行体外培养及苏木精-伊红染色切片以观察不同层数细胞片的形成情况.结果与结论:佳构建参数为细胞浓度9×105 cm-2,离心转速2 200 r/min,离心时间4 min,细胞种植效率可达(93.75±9.58)%;单层对照显示离心贴壁细胞增殖活性良好;苏木精-伊红染色观察显示可快速形成活性良好的细胞片.提示离心速构法形成了无支架组织,可作为一种方便、快捷、高效的实体组织工程构建方法.
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改构型酸性成纤维细胞生长因子抑制新生大鼠心肌缺氧/复氧模型细胞的凋亡
背景:酸性成纤维细胞生长因子对缺血及再灌注心肌具有较好的保护作用,删去N 端第21~27位的氨基酸序列后的改构型酸性成纤维细胞生长因子诱导的细胞增殖能力明显降低.目的:观察改构型酸性成纤维细胞生长因子对心肌缺氧/复氧后细胞凋亡的影响.方法:利用原代培养的SD新生大鼠心肌细胞建立体外心肌缺氧/复氧模型,分别用酸性成纤维细胞生长因子和改构型酸性成纤维细胞生长因子对此细胞模型进行干预.锥虫蓝拒染法检测心肌细胞存活率,流式细胞术检测心肌细胞凋亡率.结果与结论:改构型酸性成纤维细胞生长因子及酸性成纤维细胞生长因子均能显著降低缺氧/复氧后心肌细胞存活率及凋亡率(P < 0.01).证实,改构型酸性成纤维细胞生长因子能有效抑制缺氧/复氧后心肌细胞凋亡.
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Rac1基因RNAi慢病毒载体的构建与鉴定
背景:Rac1是通过信号转导来调节癌细胞的侵袭、增殖,它在各种肿瘤中都有表达.目的:构建RAC1基因RNA干扰慢病毒载体,并检测其干扰效率.方法:应用Western blot检测Rac1基因在舌癌细胞中的表达.针对筛选确定的Rac1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经AgeI和EcoRI双酶切后的pMagic4.1载体连接产生短发卡RNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定后将质粒分别和包装质粒混合物共转染293T细胞,采用Real-Time PCR筛靶,将筛靶成功的质粒进行慢病毒包装,再感染Tca8113细胞.荧光定量PCR和Western blot检测鉴定Rac1基因表达的干扰效果以确定其生物活性.结果与结论:成功构建了RAC1干扰载体,Western blot检测显著抑制Rac1蛋白表达,经Real-time PCR检测pLVT447的抑制率达70%.成功的构建了Rac1基因RNAi慢病毒载体,为RNAi用于靶向Rac1的基因治疗舌癌(Tca8113)提供了有效的siRNA靶序列.
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黄芪多糖对肢体缺血再灌注骨骼肌的保护作用
背景:前期研究表明,黄芪对缺血再灌注心肌细胞的凋亡和损伤皆有影响,其对于骨骼肌缺血再灌注是否有同样作用,国内外尚未见报道.目的:验证黄芪多糖对肢体缺血再灌注骨骼肌的保护作用.方法:取成年家兔按随机数字表法分为2组,建立兔肢体缺血再灌注损伤模型.在即将恢复血流灌注时,对照组及实验组分别自耳缘静脉注射生理盐水、黄芪多糖注射液.分别在缺血前、缺血后2 h、再灌注后1,3 h采集术侧股静脉血样.测定血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性.取上述各时相点兔胫前肌组织,测定骨骼肌组织湿/干质量比值并观察微细和超微结构变化.结果与结论:实验组再灌注后血清乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性明显低于同期对照组(P < 0.01),骨骼肌组织湿/干质量比值低于同期对照组(P < 0.05).光镜及电镜观察结果示,实验组骨骼肌损伤程度轻于对照组.提示黄芪多糖能够缓解组织水肿,保护缺血再灌注骨骼肌.
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天麻素对大鼠骨骼肌细胞化学损伤的保护
背景:现代药理学研究表明,天麻的主要成分天麻素可以恢复大脑皮质兴奋与抑制过程间的平衡失调,产生镇静、安眠和镇痛等中枢抑制作用.目的:观察天麻素对L6大鼠成肌细胞化学损伤的保护作用.方法:用H2O2建立L6大鼠成肌细胞的化学损伤模型.DMEM培养液制备不同浓度的天麻素(1.562 500,0.781 250,0.390 625 g/L)预处理保护组的L6大鼠成肌细胞24 h,然后用0.1 mmol/L H2O2孵育80 min,同时设置增殖组(用不同浓度的天麻素预处理,但不经H2O2处理),模型组(仅用H2O2处理),阳性对照组(仅有L6细胞悬液),阴性对照组(只有DMEM培养液),对照组既不用天麻素预处理,也不用H2O2孵育.结果与结论:MTT检测显示,增殖组和保护组L6大鼠成肌细胞存活率明显高于模型组;DAPI荧光标记细胞核为蓝色,模型组细胞荧光度较弱,且数目显著少于保护组;苏木精-伊红染色显示保护组的细胞核形状较规则,细胞轮廓较清晰,而模型组破损细胞较多;Bax和Bcl-2免疫荧光细胞化学结果表明,模型组促凋亡基因bax表达明显高于保护组,而抑制凋亡基因bcl-2的表达量完全相反;流式细胞仪检测显示保护组的凋亡率显著低于模型组(P < 0.05).提示天麻素对保护大鼠骨骼肌细胞化学损伤有显著效果.
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活性氧介导高糖负荷致人系膜细胞癌胚纤维连接蛋白的表达
背景:研究发现,癌胚纤维连接蛋白系新合成细胞外基质的重要标志,而高糖环境氧化应激与癌胚纤维连接蛋白的关系尚未见报道.目的:观察高糖作用对人系膜细胞活性氧和癌胚纤维连接蛋白mRNA表达的影响.方法:将培养的系膜细胞分为以下各组:正常对照组(5 mmol/L D-葡萄糖);渗透压对照组(5 mmol/L D-葡萄糖+ 20 mmol/L L-葡萄糖);高糖组(25 mmol/L D-葡萄糖);α-硫辛酸干预组,分为高糖+LA50组(25 mmol/L D-葡萄糖+ 50 μmol/L α-硫辛酸)、高糖+LA100组(25 mmol/L D-葡萄糖+100 μmol/L α-硫辛酸)、高糖+LA200组(25 mmol/L D-葡萄糖+ 200 μmol/L α-硫辛酸).以RT-PCR法检测癌胚纤维连接蛋白mRNA表达水平,荧光显微镜和荧光酶标仪测定细胞内活性氧水平.结果与结论:高糖促进系膜细胞活性氧的产生,亦增加癌胚纤维连接蛋白mRNA的表达,α-硫辛酸可显著降低高糖负荷下细胞内活性氧水平,同时减少癌胚纤维连接蛋白mRNA的表达,且呈浓度依赖性,提示活性氧介导高糖负荷致人系膜细胞癌胚纤维连接蛋白的表达,α-硫辛酸可部分逆转这一效应.
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枸杞多糖含药血清对MC3T3-E1细胞内Ca2+及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响
背景:前期实验发现枸杞多糖对成年去势雌性大鼠骨质疏松有明显的骨质改善作用.目的:观察含枸杞多糖大鼠血清对成骨细胞株MC3T3-E1细胞内Ca2+及Ⅰ型胶原蛋白合成的影响.方法:将20%空白血清(对照组),5%,10%,20%含枸杞多糖血清分别加入成骨细胞株MC3T3-E1细胞培养液中,通过MTT法测定细胞增殖,激光扫描共聚焦显微镜测定胞内游离钙离子浓度,免疫细胞化学方法检测Ⅰ型胶原蛋白表达.结果与结论:与对照组比较,5%,10%含枸杞多糖血清可明显促进成骨细胞株MC3T3-E1细胞增殖(P < 0.05,P < 0.01);10%,20%含枸杞多糖血清组成骨样细胞株MC3T3-E1内细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成明显升高(P < 0.05,P < 0.01).说明含枸杞多糖血清可能通过影响细胞内Ca2+水平及Ⅰ型胶原蛋白合成防治骨质疏松症.
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黄芪注射液腹腔注射脑缺血再灌注模型大鼠海马组织神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达
背景:有研究表明黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡.目的:观察黄芪注射液腹腔注射脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达.方法:采用四血管阻断法制备全脑缺血再灌注大鼠模型,建模后给予质量浓度2,4,6,8和10 mL/kg的黄芪注射液腹腔注射,并设立假手术组.分别采用原位末端标记法染色和蛋白免疫印迹方法检测各组大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达.结果与结论:模型组大鼠海马神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达明显增多(P < 0.05);与模型组相比,黄芪注射液4,6,8,10 mL/kg组海马神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达明显减少(P < 0.05);与黄芪注射液4 mL/kg组比,黄芪注射液6,8,10 mL/kg 组神经元凋亡指数及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达减少(P < 0.05),且呈剂量依赖性.结果证实,黄芪注射液可抑制脑缺血再灌注大鼠海马神经元凋亡及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白表达.
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心外膜脂肪组织转染人apM1基因抑制兔冠状动脉粥样硬化的形成
背景:心外膜脂肪分泌的脂联素水平下降可能是导致冠状动脉粥样硬化的主要原因之一.目的:观察人脂联素基因apM1转染至兔心外膜脂肪组织对高脂喂食兔冠状动脉粥样硬化形成的影响.方法:向兔心包腔内注射脂质体包裹的pEGFP-apM1重组质粒50 μL,分别于注射后2,7,28 d观察转染效率.采用高脂喂食方法制备兔冠状动脉粥样硬化模型,并按上述方法转染apM1基因,于转染后4周取材.结果与结论:心包腔内转染apM1基因2 d后即可检测到兔心外膜脂肪组织apM1基因高表达,并可持续至28 d.心外膜脂肪转染apM1基因对高脂喂食引起的外周血脂联素、肿瘤坏死因子α、总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇水平无显著影响,但可使心包腔液中脂联素水平显著增加、肿瘤坏死因子α水平显著降低(P < 0.01),冠状动脉内膜/中膜厚度比减小40.66%.说明经心包腔注射可将apM1基因有效转染入心外膜脂肪组织,并可在局部通过抑制高脂诱导的炎性因子释放而抑制冠状动脉粥样硬化的形成.
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兔肩袖损伤模型的建立及初步组织学研究
背景:兔的冈上肌形态及结构与人类相仿,在组织学上,兔肩袖肌腱包括与人类相似的由肌腱到骨的移行区域,可用于腱-骨愈合的研究.目的:建立兔的肩袖损伤模型,探讨此模型的可行性并进行肩袖愈合的初步组织学研究.方法:18只骨骼成熟雄性新西兰大耳白兔,建立肩袖损伤模型后随机数字表法均分为2组:修复组造模后1周行腱-骨缝合;对照组不予修复.分别于造模后2,4,8周对冈上肌标本进行切片及苏木精-伊红染色,观察冈上肌的脂肪浸润情况和腱-骨愈合情况.结果与结论:兔冈上肌的解剖结构和组织结构均与人类相似,肩袖损伤模型建立和手术修复的操作过程可重复性高.两组均未观察到明显的冈上肌脂肪浸润和萎缩变性.修复组在8周时形成了新的冈上肌止点,对照组则无新止点形成.说明急性冈上肌损伤修复后8周可形成新止点,兔是建立肩袖损伤模型的合适动物并适用于肩袖疾病的研究.
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pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato重组质粒构建腺相关病毒包装
背景:实验为基因治疗退变椎间盘实验的前期部分,旨在构建含免疫荧光的pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato重组质粒并应用腺相关病毒包装,为后期体内外实验打下基础.目的:构建人SOX9基因过表达腺相关病毒pAAV- hSOX9-IRES- tdTomato的包装.方法:用酶切法将质粒pAAV-IRES- tdTomato和质粒pUC57- hSOX9连接成pAAV-hSOX9-IRES- tdTomato,用质粒共转染方法包装腺相关病毒,感染293AAV细胞,腺相关病毒纯化及用生物学滴度测定法进行滴度测定.结果与结论:经测序结果BLAST比对分析,pAAV-hSOX9-IRES-tdTomato完全与合成的基因序列hSOX9相符,滴度为1×107TU/mL.结果表明,人SOX9基因过表达腺相关病毒pAAV-hSOX9-IRES- tdTomato包装成功.
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piggyBac转座子调节pPiggyBac-Rb质粒的构建
背景:外源性Rb基因的导入是抑制视网膜母细胞瘤细胞增殖的有效途径,piggyBac转座子介导的外源基因表达载体高效安全,在基因治疗方面具有广阔的应用前景.目的:探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用.方法:采用RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb;通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50.结果与结论:考马斯亮蓝染色证明piggyBac转座子系统的转染效率高,荧光定量PCR以及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率高且可在细胞中长期稳定表达,MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响为显著.结果提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体.
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短暂脑缺血后老年模型大鼠大脑少突胶质前体细胞的变化
背景:目前老年脑内少突胶质前体细胞在短暂脑缺血后和修复过程中的变化尚不清楚.目的:观察短暂脑缺血后老年模型大鼠大脑少突胶质前体细胞的变化.方法:以线栓法制作大鼠短暂脑缺血模型,24只12月龄老年雄性SD大鼠随机数字表法分4组,对照组仅暴露血管,然后缝合,不进行栓塞;缺血再灌注1,7,14 d组:造模后分别再灌注1,7,14 d.结果与结论:①短暂脑缺血后各时间点梗死中心区硫酸软骨素蛋白聚糖、未成熟少突胶质细胞的标记物(O4)和环核苷酸磷酸二酯酶阳性细胞数明显减少.②梗死周边区硫酸软骨素蛋白聚糖和O4阳性细胞数随着时间延长而逐渐增加,短暂脑缺血后7,14 d时显著增加;而环核苷酸磷酸二酯酶阳性细胞数在短暂脑缺血后1,7 d时稍有减少,脑缺血后14 d时明显增加.③脑梗死对侧区3种抗原阳性细胞数无明显变化.提示老年SD大鼠短暂脑缺血后梗死周边区少突胶质前体细胞增多,并可能分化为成熟少突胶质细胞,参与脑缺血损伤的修复过程.
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微小RNA-146a影响血管平滑肌细胞增殖和凋亡的机制
背景:微小RNA-146a通过负调控核因子κB信号通路介导免疫细胞和肿瘤细胞的增殖,但是否参与血管平滑肌细胞的增殖或凋亡未见研究报道.目的:观察微小RNA-146a对血管平滑肌细胞增殖、凋亡的影响及其相关机制.方法:采用脂质体2000将50 nmol/L微小RNA-146a反义寡核苷酸转染至大鼠血管平滑肌细胞,以转染错义链及PBS的细胞作为对照.结果与结论:微小RNA-146a反义寡核苷酸转染48 h后,血管平滑肌细胞增殖减少(P < 0.01)、凋亡增多(P < 0.05),细胞的微小RNA-146a水平明显降低(P < 0.01),核因子κBp65、增殖细胞核抗原蛋白表达明显降低(P < 0.05).说明微小RNA-146a可以促进血管平滑肌细胞的增殖,抑制凋亡,其机制与增加核因子κBp65表达有关.
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熟地鳖甲与系膜细胞协同上调成骨细胞骨钙素基因及蛋白表达
背景:熟地鳖甲含药血清可上调成骨细胞骨钙素基因表达,系膜细胞上清液亦可促进成骨细胞该基因的表达.目的:验证熟地鳖甲含药血清与系膜细胞上清液对成骨细胞骨钙素基因及蛋白表达的影响是否有叠加作用.方法:原代培养经鉴定的SD大鼠成骨细胞分为4组培养:①空白对照组含空白血清培养液.②含药血清组含熟地鳖甲含药血清培养液.③无药系膜组含空白血清培养液+空白系膜细胞上清.④含药系膜组含熟地鳖甲血清培养液+含药系膜细胞上清液.6 d后收集培养液,并与3 d所收集的培养液混匀进行检测.结果与结论:与空白对照组比较,含药血清组、无药系膜组、含药系膜组骨钙素mRNA表达率明显上调(P < 0.05),含药系膜组骨钙素mRNA表达率明显高于含药血清组或无药系膜组.含药系膜组成骨细胞骨钙素浓度/MTT A值明显高于空白对照组(P < 0.05).与含药血清组比较,含药系膜组成骨细胞骨钙素浓度/MTT A值明显升高(P < 0.05).提示系膜细胞上清液及含药血清可上调成骨细胞骨钙素基因表达,二者共同作用进一步上调骨钙素基因的表达量,此时骨钙素分泌量亦明显增加.
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肿瘤侵犯相关蛋白自分泌运动因子在瘢痕疙瘩中的表达
背景:肿瘤侵犯相关蛋白自分泌运动因子在肿瘤细胞中表达量增高,并可增强肿瘤细胞的生长、侵犯和转移能力,而瘢痕疙瘩具有恶性肿瘤生物学特性.目的:了解肿瘤侵犯相关蛋白自分泌运动因子在人体瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、生理性瘢痕组织中的表达情况.方法:生理性瘢痕、增生性瘢痕、瘢痕疙瘩患者各20例,切取3种瘢痕组织;用组织免疫荧光染色法观测3种瘢痕组织中自分泌运动因子的分布及相对表达量;用蛋白质免疫印迹法和荧光定量PCR检测3种瘢痕组织中的自分泌运动因子蛋白水平和基因水平的表达.结果与结论:在组织水平、蛋白水平、基因水平上,生理性瘢痕和增生性瘢痕组织中自分泌运动因子的表达较低,且二者分布及相对表达量差异无显著性意义,而瘢痕疙瘩组织中,自分泌运动因子在3个水平上的表达强度明显增高,与前二者比较差异有显著性意义(P < 0.01).结果提示自分泌运动因子与瘢痕疙瘩的肿瘤生物学特征有着密切的关系.
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大鼠膝关节软骨与不同强度跑台运动的影响
背景:适量的运动是维持正常关节组织形态结构及生理功能的必要条件,过度运动或制动均可导致关节软骨退变.目的:观察不同强度跑台运动对大鼠膝关节软骨的影响.方法:将18只雄性成年Wistar大鼠随机分安静组、低强度运动组、高强度运动组.6周后 ELISA法测定血清基质金属蛋白酶3水平,并行蕃红-O染色、基质金属蛋白酶3与Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及Mankin评分,反转录聚合酶链反应检测软骨基质金属蛋白酶3的mRNA表达.结果与结论:高强度运动组Mankin评分、血清及软骨中基质金属蛋白酶3表达均显著高于安静组与低强度运动组(P < 0.05),基质糖氨多糖及Ⅱ型胶原含量均显著低于安静组与低强度运动组(P < 0.05);低强度运动组与安静组差异无显著性意义.说明高强度运动可造成大鼠膝关节软骨退行性变,且软骨运动性损伤可能与基质金属蛋白酶3表达增强有关.
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重组人骨形成蛋白2诱导成肌细胞成骨分化中的矿化反应
背景:近年来成肌细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导下向成骨细胞分化已经通过多种方式得到了证实.目的:探讨成肌细胞在重组人骨形态发生蛋白2诱导下向成骨分化过程的矿化反应及其体外诱导表达成骨表型的可行性.方法:采用差速贴壁法和酶消化法获取Wistar乳鼠成肌细胞并体外培养,纯化鉴定后取第3代培养成肌细胞加入含重组人骨形成蛋白2的培养液进行诱导,对照组不加入重组人骨形成蛋白2,体外培养21 d.结果与结论:成肌细胞经重组人骨形成蛋白2诱导后,细胞增殖减缓,相邻细胞聚集呈层状排列,诱导8 d可见胞浆有少量不透光结节,诱导14 d结节增多,21 d时胞浆内可见大量不透光结节,未经重组人骨形成蛋白2诱导的成肌细胞融合成有收缩性的肌管.诱导后的成肌细胞碱性磷酸酶活性随时间延长而增强,诱导21 d时细胞经碱性磷酸酶染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色和钙结节染色均呈阳性反应.表明大鼠成肌细胞经重组人骨形成蛋白2诱导可以出现矿化反应,可在体外一定条件下诱导能够转化为成骨细胞.
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重组人血管内皮生长因子165/重组人骨形态发生蛋白2/脱蛋白骨与深低温冷冻骨成骨能力的比较
背景:载体+骨诱导因子+生长因子模式人工骨已被证实是理想的人工骨材料.目的:验证血管内皮生长因子+骨形态发生蛋白与脱蛋白骨复合成重组合人工骨的再血管化及成骨作用,并与深低温冷冻骨比较.方法:新西兰大白兔左前臂制成桡骨15 mm骨缺损模型,随机分成2组,实验组植入重组血管内皮生长因子165/重组骨形态发生蛋白2/脱蛋白骨;对照组植入深低温冷冻骨.结果与结论:16周,实验组骨缺损区骨性愈合,移植物密度接近周围正常骨组织;对照组:断端间可见较多骨痂生成,移植物密度稍高于周围正常骨组织.实验组移植物-受体介面无明显分界,达到骨愈合;对照组移植物-受体分界线模糊,部分骨愈合.第3天及第1,2,4,8周,墨汁灌注微血管分析结果显示,实验组血管生成明显多于对照组(P < 0.01);生物力学测试结果显示,实验组三点抗弯曲应力负荷明显强于对照组(P < 0.01).结果表明,重组血管内皮生长因子165/重组骨形态发生蛋白2/脱蛋白骨重组合人工骨能诱导断端间骨痂形成,加快移植物的血管化速度,且具有良好的生物学功能及生物力学功能.
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糖尿病模型大鼠烫伤创面皮肤组织P物质和Bcl-2表达与龙血竭的干预
背景:研究证明龙血竭有促进创伤愈合、抗血小板聚集、抗炎镇痛、抗菌抗氧化等生物活性.目的:验证龙血竭在糖尿病大鼠烫伤皮肤组织愈合过程中对P物质和Bcl-2表达的影响.方法:Wistar大鼠112只,随机分为4组.龙血竭组、磺胺嘧啶银(SD-Ag)组、糖尿病对照组和正常对照组.其中前3组为糖尿病深Ⅱ度烫伤模型,正常对照组为正常深Ⅱ度烫伤模型.结果与结论:烫伤后第7天开始创面愈合率龙血竭组、正常对照组高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P < 0.05),第21天龙血竭组创面愈合率明显高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P < 0.05),正常对照组高.烫伤后第15天正常对照组P物质阳性表达水平高,峰值显著高于其他3组,以后逐步减弱.龙血竭组、SD-Ag组和糖尿病对照组于烫伤后第21天阳性表达强,且龙血竭组表达明显高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P < 0.05).烫伤后第3天开始正常对照组Bcl-2阳性表达水平明显高于其他3组;于第15天各组阳性表达水平皆达到峰值,龙血竭组高,明显高于SD-Ag组和糖尿病对照组(P < 0.05),与正常对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05).说明龙血竭能通过参与调控P物质和Bcl-2的表达,有效地促进糖尿病烫伤创面的愈合.
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大鼠脊髓胶质瘢痕形成的规律
背景:脊髓损伤后治疗不理想的原因是脊髓组织的囊变和胶质瘢痕的形成,因此,明确胶质瘢痕的发生发展规律具有重要意义.目的:观察大鼠脊髓损伤后脊髓胶质瘢痕形成的空间分布、时间规律,以及轴突变化特征.方法:采用改良Allen重物坠落法建立SD大鼠脊髓损伤模型,分别于损伤后1 d,3 d,5 d,1周,2周,4周,6周,8周,10周,12周取材.以正常饲养的大鼠作对照.结果与结论:大鼠脊髓损伤后4周开始出现致密瘢痕增生,之后瘢痕厚度平稳下降,至损伤后10周形成光滑的囊腔壁,囊腔内无胶质纤维酸性蛋白阳性星形胶质细胞,损伤区囊腔周围的胶质瘢痕内可见密集肥大的星形胶质细胞,未见神经丝蛋白阳性轴突位于囊腔内.提示脊髓损伤后4周胶质瘢痕厚度达到高峰,囊腔与残存轴突之间开始形成机械屏障,损伤后10周瘢痕厚度趋于稳定.
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低氧训练大鼠骨骼肌组织低氧诱导因子1对血管新生的影响
背景:低氧诱导因子1是一种在氧平衡调节中起关键作用的转录因子,与机体的耐缺氧能力密切相关.目的:观察低氧训练大鼠骨骼肌组织中低氧诱导因子1和血管内皮CD34的蛋白表达,探讨低氧诱导因子1在促进骨骼肌组织血管形成中的作用.方法:将健康雄性SD大鼠60只,随机分为6组:常氧对照组、低氧不运动组、常氧训练组、低住高练组、高住低练组和高住高练低练组.运动组采用10 周递增负荷跑台运动训练,每周训练6 d,运动量由第1 周的速度为15 m/min、持续时间为25 min 递增至第10 周速度为28 m/min、持续时间为50 min,低练组每周二、四、六在相当于海拔1 500 m的低氧环境中训练,并且在低氧环境中居住,低氧程度由第1 周相当于海拔1 800 m 递增至第10 周相当于海拔3 600 m.结果与结论:低氧状态下,低氧诱导因子1有大量的蛋白表达,低氧复合运动表达更多,而CD34 蛋白表达只发生在常氧运动组和低氧训练组.提示低氧诱导因子1是促进骨骼肌组织血管新生的一种重要因子,但须结合运动才能产生积极的作用.
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兔关节软骨损伤生物标志物的蛋白质组学检测
背景:采用蛋白质组学的方法可以检测出关节、血液、尿液等体液中一些能反映关节软骨损伤程度的特异性标志物的水平.目的:进一步验证采用生物芯片技术发现兔关节软骨损伤生物标志物.方法:采用改良的Hulth方法建立兔关节软骨损伤模型,建模后自由活动,不固定伤肢.30 min/d分2次驱赶,连续12周.以不做任何处理兔膝关节为正常对照.并在造模后0,4,8,12周时采取部分标本(血清、关节液),验证观察关节软骨的损伤程度;各个时间点的动物关节液、血清样本放入采用PBSⅡ-C型蛋白质芯片阅读机,采用CM10芯片检测.结果与结论:改良的Hulth造模方法建立膝关节软骨损伤模型,比较全面地反映了关节软骨损伤从早、中、晚、失代偿各期的变化.与正常对照组相比,血清学样品:模型组3 475 蛋白表达下调,7 558,15 475,33 665蛋白表达上调;关节液样品:模型组7 558,33 278蛋白表达下调,3 950,16 055蛋白表达上调;质核比3 475,7 558,16 884为血清学和关节液样本共有差异蛋白质谱波峰显著蛋白.结果提示样本中出现的部分差异蛋白质可能为关节软骨损伤的生物标志物.
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不同比例共培养内皮细胞和成骨细胞的成骨及成血管效应
背景:近年来研究显示内皮细胞和成骨细胞共培养修复骨组织的过程中存在相互促进的作用.目的:观察不同比例下内皮细胞和成骨细胞共培养对其成血管和成骨作用的影响.方法:分离培养人脐静脉内皮细胞和成骨细胞MG63,内皮细胞和成骨细胞按照1∶0,8∶1,4∶1,1∶1,1∶4,1∶8,0∶1在24孔板中进行共培养,内皮细胞和成骨细胞分别单纯单层培养作对照.在第7,14,21天时观察细胞生长状态、血管内皮生长因子表达水平及碱性磷酸酶活性.结果与结论:各组细胞在21 d中生长良好,第14天1∶8组可见成骨细胞开始集落式生长,第21天1∶4组钙化染色结节要明显强于1∶8组,而单纯成骨细胞组并未出现钙化结节.1∶4组碱性磷酸酶含量在3个时间点均明显增高(P < 0.05)且第7天时血管内皮生长因子开始增高,直到第21天时达到高峰.说明内皮细胞和成骨细胞共培养比例为4∶1时,成血管作用较强,而比例为1∶4时成骨作用更强.
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快速冷冻与慢速冷冻条件下复合组织血管内皮的生物活性
背景:恢复良好血供对于复合组织保存及再植至关重要,但不同冷冻方法对血管活性影响不同.目的:比较快速冷冻与慢速冷冻方法对复合组织血管内皮活性的影响.方法:新西兰大白兔后肢分别进行快速冷冻与慢速冷冻,快速冷冻的兔后肢直接放入液氮中,慢速冷冻组经4 ℃,-20 ℃,-80 ℃冷冻后再投入到液氮中,各组依次保存12 h,3 d,7 d后快速复温,并设对照组.所有新西兰大白兔后肢均经甲醛溶液固定后行苏木精-伊红染色及免疫组织化学染色检测各组血管内皮的病理变化.结果与结论:快速冷冻组和慢速冷冻组冷冻12 h,3 d,7 d时兔血管组织形态评分均低于对照组(P < 0.05).快速冷冻组冷冻12 h,3,7 d时血管内皮组织血管内皮生长因子评分低于慢速冷冻组(P < 0.05).证实,慢速冷冻法能更好的维持复合组织中的血管内皮细胞的生物学活性.
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正常青年人自然步态下肢肌的表面肌电图分析
背景:肌肉的生物电活动是人体的能动部分,可反映人体运动的功能.目的:观察和分析正常青年人在自然步态中下肢肌肉的表面肌电活动.方法:采用美国NORAXON公司生产的 TELEMYO 2400R G2表面肌电图仪对30例正常青年人在平地自然行走时,其双下肢股直肌、胫前肌、股二头肌和腓肠肌内侧进行测试,分析在正常步态中受试肌群表面肌电信号的变化规律.结果与结论:正常青年人平地自然步行中,其双下肢股直肌、胫前肌、股二头肌和腓肠肌内侧的肌电随步态周期呈活动与静止周期性变化,左右侧同名肌肉交替活动;平均肌电振幅、平均肌电积分、平均频率、中位频率值大的是腓肠肌内侧,其余由大到小依次是胫前肌,股二头肌,股直肌,右左腿分布规律一致;右侧腓肠肌内侧平均肌电振幅、平均频率、中位频率值均明显低于左侧(P < 0.05);受试肌的时域、频域值波动在一定范围.提示正常青年人自然步态中下肢肌群肌电活动呈节律性和右左侧交替活动;在受试肌中腓肠肌内侧的肌电活动强;腓肠肌内侧的肌电活动存在着优势侧与非优势侧的轻度差别;下肢肌肌电活动的时域、频域值在一定范围波动.
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机械离心力对成骨细胞骨形态发生蛋白信号通路的影响
背景:Runx-2是骨形态发生蛋白信号的靶目标,骨形态发生蛋白信号转导通路参与了成骨细胞对机械离心力刺激的生理响应过程,而且在成骨细胞对力学信号引起的信息传递级联反应中扮演了重要角色.目的:观察机械离心力对成骨细胞骨形态发生蛋白信号通路的影响.方法:将MC3T3-E1细胞用体积分数为10%胎牛血清DMEM培养基预处理24 h后,分为对照组,90 r/min组、180 r/min及250 r/min组,每组再分为离心1,3,6 h亚组,给予不同转速和不同时间离心力刺激.对照组同步置于除离心外相同的环境中.收获细胞,提取总RNA,并反转录为cDNA,通过实时荧光定量PCR检测Runx2基因表达情况.结果与结论:随着加力时间的延长,Runx2 mRNA的表达增加,二者成正相关,转速为180 r/min组的Runx2 mRNA表达明显高于90 r/min组和250 r/min组(P < 0.01);90 r/min组和250 r/min组Runx2 mRNA的表达稍高于对照组,差异无显著性意义(P=0.119).结果可见离心力大小和离心持续时间不同对成骨细胞骨形态发生蛋白信号通路的生理响应不同,该通路在对力学信号引起的信息传递级联反应中起重要作用.
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血小板裂解液在骨组织工程中的应用
背景:以血小板裂解液修复骨缺损不仅去除了残余细胞结构,降低了免疫原性,而且还保留了其中的多种生长因子,可为异体或异种移植创造条件.目的:总结归纳有关对能促进骨生长的血小板裂解液相关研究及应用方式进行综述.方法:以"tissue engineering,bone defect,gene therapy,growth factor"为检索词,检索PubMed数据库(2004-01/2011-01),以"血小板血浆,骨组织工程,血小板裂解液,生长因子"为检索词,检索CBM数据库(2004-01/2011-01).文献检索语种为英文和中文.纳入血小板裂解液促进骨的再生和修复的文献,排除重复文献.结果与结论:计算机初检得到340篇文献,根据纳入排除标准,对其中23篇文献进行分析.目前研究证实,血小板裂解液可促进骨髓基质干细胞和成骨细胞的增殖;与生物陶瓷或自体骨复合,可明显促进骨缺损的修复.合理应用血小板裂解液对骨的再生和修复具有重要意义.
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腺病毒介导的骨形态发生蛋白基因增强在骨组织工程中的应用
背景:将目的基因转导到靶细胞中需要载体工具,载体可协助基因进入细胞及表达蛋白,载体的选择是转基因成败的关键.目的:总结腺病毒介导的骨形态发生蛋白基因增强用于诱导成骨和修复骨缺损的研究现状.方法:应用计算机检索PubMed 数据库及中国期刊网全文数据库1989-01/2012-01 有关腺病毒介导骨形态发生蛋白基因转染的诱导成骨作用,骨形态发生蛋白基因修饰的组织工程化骨修复骨缺损的文章,英文检索词为"adenovirus,bone morphogenetic protein,gene transfection,bone tissue engineering",中文检索词为"腺病毒,骨形态发生蛋白,基因转染,骨组织工程".排除重复性及非中英文语种研究,共保留24篇文献进行综述.结果与结论:腺病毒介导的骨形态发生蛋白基因增强的组织工程利用基因工程技术将编码特定功能因子的基因转移到种子细胞上,使其持续产生生长因子.转基因后的细胞停留支架材料表面缓慢释放生长因子,促进成骨前体细胞增殖分化,也可在骨缺损处诱导成骨前体细胞向成骨细胞定向分化,从而修复骨缺损.
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CDKAL1基因rs7754860位点G《C多态性与2型糖尿病易感关系的Meta分析
背景:遗传学研究显示2型糖尿病可能存在遗传易感性,但研究结论存在一定的差异.目的:探讨CDKAL1(细胞周期素依赖激酶5调节亚单位相关蛋白1类似物1)基因rs7754860位点G