中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子: 1.38
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 2095-4344
- 国内刊号: 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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脂肪干细胞生物学特性及在口腔再生医学中的应用
背景:相比较于其他组织来源的干细胞,脂肪干细胞不仅来源广泛,获取方便,而且有强大的扩增和分化潜能,这些特点使其在口腔再生医学中有着广阔的应用前景。目的:总结脂肪干细胞的生物学特点及其在口腔再生医学中的研究进展。方法:以“脂肪干细胞,口腔组织再生,骨组织工程;牙周再生;骨缺损;adipose-derived stem cel s, oral tissue regeneration, bone tissue engineering, periodontal tissue regeneration, bone defects”为检索词,应用计算机检索PubMed、CNKI、万方数据库2000至2016年的相关文献。结果与结论:在体外牙周组织再生研究中,脂肪干细胞可以促进骨组织再生、成纤维组织再生、血管组织再生及提高牙周创面愈合能力。在口腔颅颌面骨再生研究中,脂肪干细胞作为种子细胞,可成功修复种植术前的牙槽骨缺损及外伤和肿瘤术后的大面积骨缺失。脂肪干细胞移植后的免疫原性和安全性等问题还需要进一步研究。
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骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病神经源性膀胱的研究与进展
背景:干细胞移植治疗近年来吸引了相当多的关注,为治疗糖尿病神经源性膀胱提供了新思路。目的:综述骨髓间充质干细胞移植治疗糖尿病神经源性膀胱的研究与应用进展。方法:由第一作者以“bone marrow mesenchymal stem cel s,diabetic neurogenic bladder,differentiation, transplantation;骨髓间充质干细胞,糖尿病神经源性膀胱,分化,移植”为检索词,检索2000至2016年Sciencedirect、PubMed、Embase、万方及知网数据库应用骨髓间充质干细胞对糖尿病神经源性膀胱治疗及机制相关文献。结果与结论:在糖尿病神经源性膀胱出现膀胱功能障碍时移植骨髓间充质干细胞,通过增殖和分化为平滑肌细胞修复膀胱及尿道功能,同时可合成多种生长因子,对膀胱内局部微环境产生营养性旁分泌作用,包括抗炎、促进增殖和存活等,有效治疗糖尿病神经源性膀胱。一方面,骨髓间充质干细胞凭借向损伤部位趋化的能力,通过血液循环迁移到受损部位参与修复;另一方面,骨髓间充质干细胞合成多种生长因子,以及具有可抑制炎性应答的细胞因子。但目前临床研究尚少,其有效性及安全性有待进一步验证。
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补肾活血方联用神经干细胞移植治疗大鼠耳鸣
背景:神经干细胞具有多向分化的潜能及自我维持和更新能力,其迁徙能力强大,补肾活血中药可减轻神经元损伤及促进神经细胞再生修复,实现神经功能重建,补肾活血方联合神经干细胞应用于水杨酸钠耳鸣大鼠模型的作用机制尚不清楚。目的:探讨补肾活血方联合神经干细胞对耳鸣大鼠模型的影响。方法:取SD大鼠60只随机等分为5组,正常对照组、模型组、补肾活血方组、神经干细胞组和联合组,后4组建立水杨酸钠耳鸣大鼠模型,造模15 d后,补肾活血方单组每天灌胃3 mL灌胃补肾活血方水煎液(2.592 g/mL),连续7 d,神经干细胞组尾静脉注射1 mL神经干细胞培养液(1.0×109 L-1);联合组则先通过混悬液灌胃给药后再进行尾静脉注射神经干细胞培养液。结果与结论:①补肾活血方和/或神经干细胞治疗均能有效促进大鼠饮水抑制率的恢复,且饮水抑制率:联合组<补肾活血方组<神经干细胞组;②补肾活血方和/或神经干细胞治疗均能有效减轻大脑初级听皮质的病理损伤;③Western blot结果表补肾活血方组及联合组大鼠大鼠5-羟色胺表达水平较模型组增加,且补肾活血方组与联合组大鼠脑组织5-羟色胺表达水平高于神经干细胞组;④ELISA法检测结果与Western blot结果一致;⑤表明补肾活血方联合神经干细胞对水杨酸钠耳鸣大鼠模型有一定疗效,其作用机制可能与修复神经元损伤及5-羟色胺含量及其蛋白表达有关。
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磁标记内皮祖细胞移植对糖尿病大鼠肾功能改善的作用:MRI成像验证
背景:近几年的诸多研究发现,内皮祖细胞在损伤性疾病等方面有重要作用。目的:探讨磁标记内皮祖细胞移植对糖尿病大鼠肾功能的改善作用及MRI成像。方法:将60只Wistar大鼠随机分为3组,正常对照组不作任何处理;模型组、实验组腹腔注射40 mg/kg 链脲佐菌素,建立1型糖尿病模型,造模后4周,实验组尾静脉注射磁标记内皮祖细胞悬液0.15 mL(细胞浓度1×109 L-1)。细胞移植8周后,检测3组大鼠空腹血糖、血清胰岛素、血肌酐和尿素氮及24 h尿蛋白水平;采用MRI对移植细胞进行活体示踪,并与肾脏组织切片进行对照;测量大鼠体质量及肾质量变化,计算肾质量指数。结果与结论:①与正常对照组比较,模型组空腹血糖、血肌酐和尿素氮、24 h尿蛋白及肾质量指数升高(P<0.05),胰岛素水平降低(P<0.05);②与模型组比较,实验组空腹血糖、血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白及肾质量指数降低(P<0.05),胰岛素水平升高(P<0.05);③实验组可见稍长T1短T2信号,病灶边缘部位明显,梯度回波FLASH序列较T2加权RARE序列明显,其余组均未见明显低信号改变;实验组可见磁标记的阳性细胞且与组织切片结果相吻合,模型组和正常对照组未见磁标记的阳性细胞;④结果表明,磁标记内皮祖细胞移植可在一定程度上改善糖尿病大鼠的肾功能紊乱。
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牙髓干细胞移植治疗缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期行为学及环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的变化
背景:环磷酸腺苷反应元件结合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)是影响记忆存储的关键蛋白,与长期记忆密切相关,研究牙髓干细胞侧脑室移植远期行为学及CREB的变化机制可为缺氧缺血性脑损伤的治疗提供新思路。目的:观察人牙髓干细胞移植对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期行为学以及CREB表达的影响,为缺氧缺血性脑损伤的治疗提供科学的理论依据。方法:36只健康7 d龄SD大鼠随机等分为正常组、缺氧缺血性脑损伤组和人牙髓干细胞组。采用经典的Rice法建立新生大鼠缺氧缺血性脑损伤模型,造模后24 h后,人牙髓干细胞组经侧脑室注入2μL人牙髓干细胞(浓度为1.5×106μL-1),正常组和缺氧缺血性脑损伤组分别注射等量生理盐水。结果与结论:人牙髓干细胞组大鼠平均觅水时间、平均逃避潜伏期及平均逃避距离亦显著短于缺氧缺血性脑损伤组(P<0.01),但其平均觅水时间、逃避潜伏期及距离均长于正常组(P<0.01);尼氏染色结果示人牙髓干细胞组海马CA1区细胞排列较规则,细胞数量较多,显著多于缺氧缺血性脑损伤组,但仍少于正常组(P<0.05);免疫组织化学染色结果示人牙髓干细胞组CREB阳性细胞数亦显著多于缺氧缺血性脑损伤组,但仍显著少于正常组(P<0.01)。提示人牙髓干细胞移植可通过促进海马CA1区CREB的表达,改善缺氧缺血性脑损伤新生大鼠远期学习记忆能力,从而修复新生大鼠缺氧缺血性脑损伤。
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补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植对大脑中动脉栓塞模型整合素相关因子的影响
背景:前期研究发现,补阳还五汤联合骨髓间充质干细胞移植可发挥协同抗脑缺血损伤作用。目的:分析骨髓间充质干细胞移植联合补阳还五汤促进脑缺血血管新生的作用。方法:将96只SD大鼠随机分为4组,均制作大脑中动脉栓塞模型。联合组于造模前3 d灌胃给予补阳还五汤10 mL/kg,1次/d,造模成功后2 h灌胃1次,以后每12 h灌胃1次;局灶脑缺血2 h再灌注2 h后,干细胞组、联合组向脑室中注入骨髓间充质干细胞悬液,30 min后再注射抗CD34、CD45抗体;抗体组注射抗CD34、CD45抗体;模型组注射生理盐水。联合组于再灌注后12,24,36,48 h进行血清αVβ3水平及脑组织免疫组织化学、Q-PCR、免疫印迹检测,其余3组均于再灌注后36 h检测上述指标。结果与结论:①血清αVβ3水平:抗体组血清αVβ3水平低于模型组(P<0.05),干细胞组、联合组高于抗体组(P<0.05),且联合组再灌注不同时间点的血清αVβ3水平高于干细胞组(P<0.01);②免疫组织化学:抗体组CD34阳性细胞数量少于模型组(P<0.05),干细胞组、联合组高于抗体组(P<0.05);③Q-PCR与免疫印迹检测:与模型组相比,抗体组、干细胞组pFAK蛋白表达水平降低(P<0.05),FAK基因及蛋白表达变化不大;与其他组比较,联合组FAK蛋白(自再灌注后24 h开始)和pFAK蛋白(自再灌注12 h开始)显著升高(P<0.05, P<0.01),且随着再灌注时间延长有逐渐升高趋势;④结果表明:骨髓间充质干细胞移植联合补阳还五汤可逆转抗 CD34+CD45抗体引起的血管内皮细胞数量减少、整合素αVβ3及其下游信号分子表达下降,促进血管新生。
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血管内皮祖细胞对共植入缺血再灌注模型大鼠神经干细胞增殖、凋亡和血管重建的影响
背景:神经干细胞移植在缺血性脑血管疾病治疗中的作用已经明确,但细胞不能在移植局部存活等问题限制了进一步的应用。目的:探讨血管内皮祖细胞对共植入缺血再灌注模型大鼠神经干细胞增殖、凋亡和血管重建的影响。方法:125只SD大鼠随机分为5组,假手术组、缺血对照组、神经干细胞组、神经干细胞+血管内皮祖细胞组、血管内皮祖细胞组,每组25只。线栓法制备缺血再灌注大鼠模型,并进行分组干预。移植后1,2,3,4,5周,检测各组神经干细胞增殖、凋亡以及缺血区血管新生情况。结果与结论:①移植后不同时间点,血管内皮祖细胞组、缺血对照组、假手术组均未观察到BrdU阳性细胞。神经干细胞+血管内皮祖细胞组的BrdU阳性细胞数显著高于神经干细胞(P<0.05);②移植后不同时间点,神经干细胞+血管内皮祖细胞组和神经干细胞组可观察到BrdU+/Caspase-3+双标阳性细胞。神经干细胞+血管内皮祖细胞组的细胞凋亡率显著低于神经干细胞组(P<0.05);③移植后不同时间点,假手术组均未见新生血管,其他4组均出现新生血管。神经干细胞+血管内皮祖细胞组的血管新生数量显著多于其他各组(P<0.05);④结果表明,血管内皮祖细胞可以促进共植入缺血再灌注模型大鼠缺血半暗带的神经干细胞增殖,抑制细胞凋亡,并促进缺血区血管新生。
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尾静脉移植羊膜间充质干细胞对缺血再灌注损伤后神经功能恢复的影响
背景:研究表明,MAG、OMgp等髓磷脂抑制物的过表达是早期神经元再生失败的主要原因。目的:探讨人羊膜间充质干细胞移植对缺血再灌注损伤大鼠神经功能恢复的影响。方法:SD大鼠60只,随机分为假手术组、缺血再灌注损伤组及人羊膜间充质干细胞移植组,每组20只。人羊膜间充质干细胞组于缺血再灌注损伤后24 h经尾静脉注入细胞浓度为1.0×108 L-1的人羊膜间充质干细胞悬液1 mL。移植后24 h,3 d及1,2,3周,采用Longa行为学评分、圆筒实验、水平梯行走实验及肢体对称性实验对各组大鼠进行行为学评估,观察神经功能恢复情况;移植1 d和1,2,3周后免疫荧光法观察细胞迁移和分布情况;移植后2周采用Western blot检测各组大鼠脑组织MAG及OMgp蛋白的表达;移植后3周采用TUNEL 染色观察神经元凋亡情况。结果与结论:①移植后1周在损伤区周围可见红色阳性标记细胞,并且随移植时间的延长,阳性标记细胞逐渐增多;②与缺血再灌注损伤组比较,在移植后3 d及1,2,3周人羊膜间充质干细胞移植组大鼠神经功能得到明显改善(P<0.05);③与缺血再灌注损伤组比较,人羊膜间充质干细胞移植组MAG及OMgp蛋白的表达量均显著降低,差异有显著性意义(P<0.05);④与假手术组相比,缺血再灌注损伤组凋亡细胞数增多;人羊膜间充质干细胞移植组凋亡细胞数目较缺血再灌注损伤组下降;⑤结果表明,人羊膜间充质干细胞移植可能通过降低MAG及OMgp表达,减少神经元凋亡,进而促进缺血再灌注损伤大鼠的神经功能恢复。
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比较人脐带和胎盘间充质干细胞对小鼠急性移植物抗宿主病的预防作用
背景:目前脐带、胎盘间充质干细胞在一些急性移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)临床实验及动物模型中展现了良好的预防效果,但两种干细胞哪一个对GVHD的治疗更为有效尚无文献报道。目的:观察比较人脐带和胎盘间充质干细胞的免疫调节功能,以及对小鼠急性GVHD的预防作用。方法:①体外实验:取人外周血单个核细胞,分4组培养,单独培养组、植物凝集素组、植物凝集素联合脐带间充质干细胞组、植物凝集素联合胎盘间充质干细胞组。5d后,检测外周血单个核细胞增殖及培养上清干扰素γ分泌水平;②动物体内实验:取BABL/c(H-2d)小鼠57只,8.5 Gy全身照射后分6组,单纯照射组尾静脉注射生理盐水0.5 mL;同基因脊髓移植组尾静脉注射同种异体骨髓有核细胞悬液0.5 mL;异基因骨髓移植组尾静脉注射异种骨髓有核细胞悬液0.5 mL;急性GVHD组尾静脉注射异种骨髓有核细胞与脾脏单个核细胞混合液0.5 mL;脐带干细胞组尾静脉注射异种骨髓有核细胞、脾脏单个核细胞与人脐带间充质干细胞混合液0.5 mL;胎盘干细胞组尾静脉注射异种骨髓有核细胞、脾脏单个核细胞与人胎盘间充质干细胞混合液0.5 mL。移植后11 d,进行GVHD临床症状评分;移植后3周,进行生存时间分析;移植后2周,进行皮肤、肝脏及小肠病理组织学分析。结果与结论:①体外实验:与脐带间充质干细胞相比,胎盘间充质干细胞具有更强的抗炎功能;②动物体内实验:脐带干细胞组、胎盘干细胞组GVHD临床症状评分低于急性GVHD组(P<0.05),小鼠存活率高于急性GVHD组(P<0.05)。急性GVHD组、胎盘间充质干细胞组和脐带间充质干细胞组均未发生皮肤组织病变,各组均可见小肠组织黏膜脱落病变,组间差异不明显;急性GVHD组小鼠肝脏组织可见多发性灶性坏死和大量炎症细胞浸润,胎盘干细胞组和脐带干细胞组仅见小的坏死病灶和较少的炎症细胞浸润;③结果表明,脐带和胎盘间充质干细胞均可预防小鼠急性GVHD,两者之间未见明显差异。
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膝关节腔内注射Sox9转染骨髓间充质干细胞修复膝关节骨关节炎
背景:相关研究认为,骨髓间充质干细胞具有良好的增殖及分化能力,Sox9转录因子在软骨形成及维持软骨细胞表型方面起关键作用。目的:明确Sox9转染骨髓间充质干细胞对骨关节炎病变软骨的修复作用。方法:体外以慢病毒为载体介导Sox9基因转染骨髓间充质干细胞。通过切断前交叉韧带建立小鼠膝关节骨关节炎模型,将小鼠随机分为生理盐水组、单纯骨髓间充质干细胞组及Sox9转染骨髓间充质干细胞组,分别将0.1 mL生理盐水、0.1 mL无转染骨髓间充质细胞生理盐水溶液、0.1 mL的Sox9转染骨髓间充质细胞生理盐水溶液注射入小鼠膝关节腔内。注射后4,8,12周后通过甲苯胺蓝及免疫组织化学染色检测病变关节软骨的修复情况。结果与结论:①关节软骨病变:甲苯胺蓝染色显示,生理盐水组关节软骨病变较间充质干细胞组严重,且时间越长差别越明显,单纯骨髓间充质干细胞组软骨损伤有改善,但改善情况差于Sox9转染骨髓间充质干细胞组;②免疫组织化学染色显示,Sox9转染骨髓间充质干细胞组Ⅱ型胶原表达均强于其他2组,各组随时间阳性轻度减弱;③结果提示,Sox9转染小鼠骨髓间充质干细胞对小鼠膝关节炎病变软骨修复有促进作用。
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自体骨髓间充质干细胞治疗扩张性心肌病:安全和有效性的Meta分析
背景:自体骨髓间充质干细胞已被用于扩张性心肌病的临床治疗,但其安全性和有效性存在争议。目的:运用Meta分析方法评价自体骨髓间充质干细胞移植治疗扩张性心肌病的安全性和有效性。方法:系统检索PubMed、Cochrane Library(2016年第2期)、Embase、CNKI、CBM、维普、万方数据库中,有关自体骨髓间充质干细胞移植与常规药物治疗扩张性心肌病的临床随机对照试验。运用R3.1.0软件对两种治疗后的左室射血分数、左室舒张末期内径、6 min步行距离、心肌灌注缺损面积百分比、治疗及随访过程中患者死亡率、恶性心律失常发生率及心脏移植率进行Meta分析。结果与结论:纳入7个随机对照试验,合计341例扩张性心肌病患者。Meta分析结果显示:与常规药物疗法相比,自体骨髓间充质干细胞移植能增加扩张性心肌病患者左心室射血分数[1个月:MD=3.02,95%CI(1.55,4.49);3个月:MD=4.38,95%CI(3.55,5.52);6个月:MD=6.47,95%CI(4.78,8.15);≥12个月:MD=8.23,95%CI(5.15,9.19)],降低治疗3个月后的左室舒张末期内径[3个月:MD=-0.65,95%CI(-0.72,-0.59);6个月:MD=-0.12,95%CI(-0.21,-0.03);≥12个月:MD=-0.19,95%CI(-0.24,-0.13)],增加治疗6个月后6 min步行距离[6个月:MD=87.70,95%CI(51.55,123.85);≥12个月:MD=143.83,95%CI(122.73,164.93)],降低治疗3个月的心肌灌注缺血面积百分比[MD=-3.56,95%CI(-5.57,-1.55)],降低治疗及随访期间死亡率[RR=0.46,95%CI(0.24,0.89)];两种治疗在降低恶性心律失常及心脏移植率上无明显差异。研究结果提示,自体骨髓间充质干细胞移植治疗扩张性心肌病疗效优于常规药物疗法,且安全性良好。
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骨髓间充质干细胞分离培养方法及其对CD8+T淋巴细胞的免疫调控
背景:骨髓间充质干细胞具有免疫调节特性,使其在免疫抑制方面有可预期的应用价值。目的:探讨骨髓间充质干细胞的分离培养方法及其对CD8+T淋巴细胞的免疫调控。方法:采用骨髓直接贴壁法获得原代Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,利用差速贴壁结合消化法纯化原代细胞,加入Ⅰ型胶原蛋白作为细胞外基质,扩增骨髓间充质干细胞。取第2代骨髓间充质干细胞,分别将0,1×103,1×104,1×105/wel 的骨髓间充质干细胞与CD8+T淋巴细胞共培养,植物血凝素刺激68 h,荧光CFSE法观察CD8+T淋巴细胞聚集,MTT法检测CD8+T淋巴细胞增殖率。结果与结论:①不同密度骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞均有抑制作用,1×103/wel 组抑制能力弱,形成集落现象;1×105/wel 组抑制能力强,细胞未见明显聚集现象;②1×103,1×104,1×105/wel 组CD8+T淋巴细胞增殖率分别为(44.83±4.92)%、(31.94±6.28)%及(15.77±3.98)%,3组间两两比较差异均有显著性意义(P<0.05);③结果表明,采用全骨髓直接贴壁法能获得原代大鼠骨髓间充质干细胞,采用差速贴壁联合消化控制法能完成细胞纯化,骨髓间充质干细胞浓度依赖性抑制T淋巴细胞增殖。
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骨髓间充质干细胞对经转化生长因子β1、骨桥蛋白基因沉默肝癌细胞MHCC97-H的影响
背景:骨髓间充质干细胞对肝癌增殖能力和转移能力的影响是研究的热点,可通过基因工程技术对肝癌细胞进行改造,使其降低生物活性因子的表达,从而寻找合适的干预靶点,提高骨髓间充质干细胞的干预效能。目的:经转化生长因子β1、骨桥蛋白基因沉默的高转移潜能肝癌细胞(MHCC97-H)与骨髓间充质干细胞共培养,观察MHCC97-H细胞侵袭能力的变化,并通过动物模型荧光成像观察骨髓间充质干细胞对MHCC97-H肝癌组织动物模型的干预作用。方法:①将MHCC97-H细胞细胞分为4组,MHCC97-H设为空白对照组,MHCC97-H基因沉默转染阴性对照为阴性对照组,MHCC97-H-转化生长因子β1为转化生长因子β1基因沉默组,MHCC97-H-骨桥蛋白为骨桥蛋白基因沉默组;②Transwel s法进行各组细胞与骨髓间充质干细胞共培养实验,48 h后结晶紫染色,随机取3个视野,计数;③结合有红色荧光蛋白基因的各组MHCC97-H细胞株,分别自裸鼠右侧腋下接种复制皮下移植瘤模型。肿瘤体积到50 mm3开始瘤内注射骨髓间充质干细胞,4周后进行荧光强度分析;肝癌组织冰冻切片二脒基苯基吲哚细胞核染色后行荧光显微镜观察。结果与结论:①细胞计数结果表明,骨髓间充质干细胞使经基因沉默后的MHCC97-H细胞迁移数量明显减少;结晶紫染色病理图片显示,经基因修饰的MHCC97-H细胞迁移能力明显降低;②体内荧光成像结果显示,骨桥蛋白基因沉默组肿瘤体积明显缩小,荧光亮度低于其他组别,定量结果显示骨桥蛋白基因沉默组吸光度值明显降低,表明骨髓间充质干细胞对经骨桥蛋白干扰的MHCC97-H高转移潜能肝癌动物模型干预效能佳;③病理切片荧光观察结果显示,骨髓间充质干细胞主要分布在肿瘤坏死区附近,骨桥蛋白基因沉默组荧光表达较转化生长因子β1基因沉默组和空白对照组多,表明MHCC97-H细胞经骨桥蛋白基因沉默后骨髓间充质干细胞在肿瘤中的分布增多;④结果提示,通过抑制骨桥蛋白和转化生长因子β1两种因子的表达可以降低肝癌细胞侵袭能力,经骨桥蛋白沉默可能更有利于基于骨髓间充质干细胞的生物治疗。
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雌激素缺乏型人骨髓间充质干细胞肾虚表型的验证
背景:因雌激素缺乏导致绝经后骨质疏松症患者骨髓间充质干细胞增殖和成骨分化能力下降,从雌激素及其受体角度研究该病的发病机制和治疗策略具有重要意义。目的:观察雌激素缺乏型骨髓间充质干细胞的肾虚表型特点。方法:第3代骨髓间充质干细胞在成骨诱导条件下培养,用不同浓度(0,10-10,10-9,10-8,10-7 mol/L)芳香化酶抑制剂来曲唑干预细胞,未诱导的骨髓间充质干细胞作空白对照组。qPCR和Western Blot检测AROM mRNA和蛋白表达,MTT检测细胞增殖能力,碱性磷酸酶活性检测细胞成骨能力,ELISA检测细胞上清液中雌二醇水平,qPCR检测肾虚标志物cAMP mRNA表达。结果与结论:①10-8 mol/L来曲唑对骨髓间充质干细胞内AROM mRNA和蛋白的抑制效果好;②培养72 h,10-8 mol/L来曲唑组细胞增殖能力低;③培养第14天,10-8 mol/L来曲唑组细胞碱性磷酸酶活性低于其他组;④10-8 mol/L来曲唑组细胞上清液中雌二醇水平低于其他组;⑤10-8 mol/L组细胞cAMP mRNA表达低于其他组;⑥结果表明,10-8 mol/L来曲唑在成骨诱导环境中能明显抑制骨髓间充质干细胞增殖及向成骨分化,同时降低骨髓间充质干细胞内cAMP表达及合成和分泌雌二醇的能力,说明适宜浓度来曲唑作为AROM抑制剂建立的雌激素缺乏型骨髓间充质干细胞模型具有肾虚表型特征。
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高糖环境下趋化因子8促进间充质干细胞旁分泌功能提高人脐静脉血管内皮细胞归巢
背景:趋化因子具有促进干细胞旁分泌血管活性因子,加速血管新生的重要作用。目的:观察高糖环境下,趋化因子8(CXCL-8)刺激的人骨髓间充质干细胞上清液对人脐静脉血管内皮细胞归巢的影响,并分析Sonic Hedgehog信号通路在CXCL-8刺激骨髓间充质干细胞的机制。方法:①细胞体外实验:在细胞高糖环境模型下,将质量浓度100μg/L趋化因子8刺激的间充质干细胞设为高糖CXCL-8组,预先以5μmol/L的shh抑制剂辛基马来酰亚胺处理45 min,再用质量浓度100μg/L CXCL-8刺激间充质干细胞者为高糖Shh抑制剂组,高糖环境下培养的间充质干细胞为高糖对照组。提取各组细胞上清液为条件培养基培养人脐静脉血管内皮细胞,其分组按条件培养基而定。使用CCK8细胞增殖实验、细胞划痕实验或Transwel 细胞小室实验分别观察各条件培养基(CM)对人脐静脉血管内皮细胞增殖、凋亡、趋化等能力的影响;②动物体内实验:建立C57BL/6J小鼠糖尿病皮肤溃疡模型,分别以各组间充质干细胞条件培养基进行处理,验证CXCL-8刺激的间充质干细胞的条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞归巢和溃疡愈合的影响。结果与结论:①体外实验结果:与高糖对照条件培养基相比,高糖CXCL-8组条件培养基能够促进人脐静脉血管内皮细胞增殖、降低人脐静脉血管内皮细胞凋亡率,并且细胞划痕面积闭合率、细胞迁移率均明显提高(P<0.01),高糖CXCL-8组条件培养基中血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子水平明显提高(P<0.01);与高糖CXCL-8组相比,高糖Shh抑制剂组上述结果指标呈反向变化(P<0.01);②体内实验结果:与Shh抑制剂-CM组和间充质干细胞-CM组相比,CXCL-8-CM组糖尿病皮肤溃疡的愈合效果和绿色荧光蛋白标记的人脐静脉血管内皮细胞数均显著升高(P<0.01);③结果提示,在高糖环境下,CXCL-8能够通过Shh通路,刺激间充质干细胞旁分泌血管内皮细胞生长因子、表皮生长因子,提高了对脐静脉血管内皮细胞招募的能力。
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长链非编码RNA NR_033474对C3H10T1/2间质干细胞增殖的影响
背景:近研究发现,长链非编码RNA可调控干细胞的增殖与分化,但关于长链非编码RNA NR_033474在干细胞增殖及细胞周期调控中的作用,目前尚不清楚。目的:通过在C3H10T1/2间质干细胞中过表达NR_033474,观察NR_033474对C3H10T1/2细胞增殖和细胞周期的影响,进一步分析NR_033474影响间质干细胞C3H10T1/2增殖的可能作用机制。方法:通过慢病毒载体在C3H10T1/2细胞中过表达NR_033474,应用Real-time PCR检测其表达效率,以转染空载体慢病毒的C3H10T1/2细胞为对照,利用细胞计数法绘制生长曲线,观察过表达NR_033474后C3H10T1/2细胞的生长变化;PI染色流式细胞仪检测细胞周期改变;通过Western蛋白印迹法检测过表达NR_033474后,细胞周期相关蛋白(P53、Cyclin B1、CDK1、Cyclin D1)的表达。结果与结论:①与对照组比较,感染NR_033474慢病毒后的C3H10T1/2间质干细胞NR_033474表达上调约100倍(P<0.01);②与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2细胞增殖能力明显降低(P<0.05);③与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞阻滞于G2/M期;④与对照组比较,过表达NR_033474后的C3H10T1/2间质干细胞Cyclin B1和CDK1蛋白表达下调,P53、Cyclin D1蛋白水平无明显变化;⑤结果表明,NR_033474可能通过下调 Cyclin B1及CDK1蛋白表达水平,抑制C3H10T1/2间质干细胞的增殖生长能力,使细胞阻滞于G2/M期。
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人胎盘胎儿侧间充质干细胞无血清培养上清的抗氧化活性分析
背景:目前关于间充质干细胞的研究大多集中于其免疫调节功能,而关于细胞和培养上清的其抗氧化能力的研究较为少见。目的:观察人胎盘胎儿侧间充质干细胞在无血清培养条件下,其上清的抗氧化能力。方法:采用无血清培养基培养胎儿侧胎盘间充质干细胞,分别于48 h收集P2-P6代细胞培养上清。在空白培养基中添加维生素C 100μmol/L作为阳性对照。检测P2-P6代人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清的总抗氧化能力、清除活性氧自由基的能力和抗氧化酶活性。结果与结论:①抗氧化能力:各代次人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清具有一定的抗氧化能力,且不同代次间的上清具有一定的差异,其中总抗氧化能力与40-80μmol/L 的维生素C相当,各代次上清均具有一定的清除二苯基苦基苯肼自由基、羟自由基、超氧阴离子自由基等自由基清除能力;②抗氧化酶活性分析:各代次间的人胎盘胎儿侧间充质干细胞培养上清中均可以检测到一定水平的超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性;③结果提示,在无血清条件下培养胎儿侧胎盘间充质干细胞的上清具有一定的抗氧化能力和抗氧化酶的活性。人胎盘胎儿侧间充质干细胞的抗氧化能力与其旁分泌机制有关,但其中的抗氧化成分及分子机制有待进一步的研究。
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间充质干细胞对去除CD4+CD25+调节性T细胞哮喘小鼠气道炎症的影响
背景:间充质干细胞具有免疫调节作用,可抑制哮喘小鼠气道炎症,但其机制尚不明确。前期研究表明,间充质干细胞可上调哮喘小鼠外周血CD4+CD25+调节性T细胞(Treg)。目的:观察骨髓间充质干细胞移植对去除CD4+CD25+Treg哮喘小鼠气道炎症的影响。方法:将40只BALB/c小鼠随机分为5组:正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、去除Treg细胞哮喘模型组(C组)、MSCs处理组(D组)、去除Treg细胞哮喘模型MSCs处理组(E组)。除A组外,其余各组以卵白蛋白致敏和激发的方法建立哮喘动物模型;C组和E组在激发前1d及激发实验第3天经尾静脉注射大鼠抗小鼠CD25+单克隆抗体,以去除CD4+CD25+Treg;D组、E组于诱导哮喘的第10天尾静脉注射0.2 mL骨髓间充质干细胞(1×109 L -1)。后1次激发后24 h,检测各组小鼠外周血CD4+CD25+Treg占淋巴细胞的比例,支气管肺泡灌洗液中炎症细胞总数及分类计数,并进行肺组织病理观察。结果与结论:①外周血CD4+CD25+Treg占淋巴细胞比例:B组、D组低于A组(P<0.01),D组高于B组(P<0.01);②支气管肺泡灌洗液中炎症细胞计数:B组﹑C组﹑D组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数均显著高于A组(P<0.01),C组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数显著高于B组(P<0.01),D组炎症细胞总数、酸性粒细胞计数显著低于B组(P<0.01),E组炎症细胞总数﹑嗜酸性粒细胞计数显著低于C组(P<0.01);③肺组织病理:间充质干细胞可显著抑制哮喘小鼠气道炎症;去除Treg细胞可加重哮喘小鼠气道炎症,但间充质干细胞仍能显著抑制去除外周血CD4+CD25+Treg哮喘小鼠的气道炎症;④结果表明:间充质干细胞可显著抑制去除CD4+CD25+Treg哮喘小鼠的气道炎症反应。
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子宫内膜基质干细胞的体外分离培养及生物学特性
背景:从干细胞角度去认识和研究子宫内膜细胞,能够为临床上解决子宫内膜引发的子宫内膜疾病治疗提供新的治疗方案和研究切入点。目的:比较不同方法体外分离、培养子宫内膜基质干细胞的生物学特性。方法:采用3种常用的细胞分离方法(胰蛋白酶法、胶原酶Ⅰ法、胰蛋白酶联合胶原酶Ⅰ法)从切除的子宫中分离培养内膜基质干细胞,通过组织分离培养,对生长5d的第2代细胞进行锥虫蓝染色,计数活细胞数量。采用间质干细胞标志物CD146联合造血干细胞标志物CD90单克隆抗体,以免疫组化及RT-PCR法对培养获得的子宫内膜基质干细胞进行鉴定;同时取生长对数期细胞进行培养,并绘制细胞生长曲线。结果与结论:①培养获得的子宫内膜基质干细胞形态呈现梭形,细胞贴壁生长,排列无极性,具有成纤维细胞形态;②子宫内膜基质干细胞标志物CD146和CD90的DNA分别在500 bp和150 bp呈现高表达,而子宫肌层组织对照组不表达;③培养所得干细胞的生长曲线呈现S型,3种方法培养的细胞生长周期差异无显著性意义;相对于胰蛋白酶法和胰蛋白酶联合胶原酶Ⅰ法而言,胶原酶Ⅰ法分离培养所得的子宫内膜基质干细胞数量较多,生长速度较快;④结果表明,从切除的子宫组织中能够成功分离出子宫内膜基质细胞,且胶原酶Ⅰ法是一种较为高效、实用、稳定的体外子宫内膜基质干细胞培养方法。
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人胎盘来源间充质干细胞的生物学性能及体外生物相容性
背景:目前作为骨组织工程的种子细胞主要是骨髓间充质干细胞,但其在骨髓中的含量极低,只有0.001%-0.01%,同时分离纯化难度大。目的:探讨人胎盘来源间充质干细胞的生物学性能及与三维多孔羟基磷灰石陶瓷支架的生物相容性。方法:人胎盘来源间充质干细胞进行形态学观察和流式细胞仪鉴定;将人胎盘来源间充质干细胞经成骨、成脂、成软骨诱导分化培养3周,进行茜素红S、油红O、甲苯胺蓝染色,鉴定其多向分化潜能。将人胎盘来源间充质干细胞接种于三维多孔羟基磷灰石陶瓷支架,通过DAPI染色、扫描电镜观察人胎盘来源间充质干细胞在支架表面的黏附情况。结果与结论:①人胎盘来源间充质干细胞呈长梭形,大小均匀一致;②人胎盘来源间充质干细胞高表达CD29, CD90等干细胞表面标志,不表达CD45,CD106等造血细胞表面标志;③诱导培养3周后,茜素红S染色可以看到红色的矿化结节,油红O染色观察到红色的脂滴,甲苯胺蓝染色可以看到软骨细胞染成蓝色;④DAPI染色、扫描电镜均观察到人胎盘来源间充质干细胞在支架表面能很好地黏附,可以作为组织工程良好的种子细胞。
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槲皮素通过STAT通路抑制胶质瘤干细胞增殖促进其凋亡
背景:多项研究表明,槲皮素可抑制肿瘤细胞的增殖、迁移并促进其凋亡。目的:探索槲皮素对胶质瘤干细胞增殖及凋亡的影响。方法:采用免疫磁珠分离培养胶质瘤干细胞,分4组培养,分别以含0(对照),25,50,100μmol/L槲皮素的培养基培养。48 h后,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测增殖相关蛋白增殖细胞核抗原、凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和存活素及STAT3、p-STAT3的表达。结果与结论:①与对照组比较,槲皮素呈剂量依赖性抑制胶质瘤干细胞的增殖(P<0.05);随着槲皮素浓度的升高,胶质瘤干细胞增殖细胞核抗原表达逐渐降低;②与对照组比较,槲皮素呈剂量依赖性促进胶质瘤干细胞的凋亡(P<0.05);随着槲皮素浓度的升高,胶质瘤干细胞促凋亡蛋白Bax表达逐渐升高,抑制凋亡蛋白Bcl-2和存活素表达逐渐降低;③随着槲皮素浓度的升高,胶质瘤干细胞p-STAT3表达逐渐降低,STAT3表达无明显变化;④结果表明,槲皮素可能通过抑制STAT通路抑制胶质瘤干细胞的增殖,促进其凋亡。
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肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默CD24-CD44+人喉鳞癌干细胞生物学特性的改变
背景:肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的异常表达与多种肿瘤的发生、发展密切相关。因此靶向抑制肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的表达成为治疗或干预肿瘤生长的重要靶点。目的:观察肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默对人喉鳞癌干细胞生长及凋亡的影响。方法:采用流式细胞技术特异性分离出CD24-CD44+喉鳞癌干细胞。设计及合成肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的siRNA序列,脂质体 TM2000转染CD24-CD44+喉鳞癌干细胞。流式细胞仪、MTT实验、细胞克隆形成实验、TUNEL凋亡实验评价沉默肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因对CD24-CD44+喉鳞癌干细胞增殖、凋亡的影响。结果与结论:①相关因子表达:相比于CD24+CD44-的人喉鳞癌细胞,CD24-CD44+人喉鳞癌干细胞内干性基因OCT4,SOX2,NANOG,肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的表达均上调(P<0.05)。RNA干扰后,肿瘤坏死因子受体相关蛋白1的表达显著降低(P<0.05);②细胞周期及增殖:肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默后人喉鳞癌干细胞的生长速度明显减慢(P<0.05),细胞停滞在G0/G1期,在S期细胞数减少(P<0.05), M期细胞无明显变化。肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默后人喉鳞癌干细胞的增殖受到明显的抑制(P<0.05);③细胞克隆形成能力:相比于未经转染的人喉鳞癌干细胞,肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默后人喉鳞癌干细胞克隆形成能力显著下调(P<0.05);④细胞凋亡:相比于未经转染的人喉鳞癌干细胞,肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因沉默后人喉鳞癌干细胞的凋亡基因BAD及BAX表达上调(P<0.05);⑤结果表明,特异性干扰肿瘤坏死因子受体相关蛋白1基因表达可抑制人喉鳞癌干细胞增殖并促进其凋亡。