中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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骨髓间充质干细胞对脓毒症急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB的调控
背景：骨髓间充质干细胞对急性肺损伤具有治疗作用，但其机制尚不清楚，探究其机制可使广大急性肺损伤患者获益。目的：探讨骨髓间充质干细胞治疗大鼠脓毒症急性肺损伤的可能机制。方法：①36只成年Wistar大鼠随机均分为3组：假手术组、脓毒症组和骨髓间充质干细胞治疗组，后2组采用盲肠结扎穿孔术建立脓毒症急性肺损伤模型，假手术组大鼠仅翻动盲肠，不结扎穿孔。骨髓间充质干细胞治疗组术后经股静脉注射骨髓间充质干细胞悬液1 mL(1×109L-1)，其他2组同法注射生理盐水1 mL，6 h后测定3组大鼠血清中白细胞介素10、巨噬细胞炎性蛋白2水平，取肺组织进行苏木精-伊红染色，光镜下观察肺组织病理结构的改变。②支气管肺泡灌洗法获取大鼠肺泡巨噬细胞，所获肺泡巨噬细胞接种于24孔培养板，分为3组：对照组加入生理盐水，脓毒症模型组加入脓毒症大鼠血浆，骨髓间充质干细胞干预组加入脓毒症大鼠血浆和骨髓间充质干细胞共同干预，于37℃、体积分数为5%CO 2培养箱孵育1 h。留取肺泡巨噬细胞，采用激光扫描共聚焦显微镜检测肺泡巨噬细胞NF-κB(P65)蛋白入核情况。结果与结论：①动物实验：与假手术组相比，脓毒症组、骨髓间充质干细胞治疗组血清巨噬细胞炎性蛋白2水平升高(P <0.05)，但骨髓间充质干细胞治疗组巨噬细胞炎性蛋白2水平明显低于脓毒症组(P <0.05)；各组血清白细胞介素10水平差异无显著性意义(P>0.05)；脓毒症组和骨髓间充质干细胞治疗组肺内大量炎性细胞浸润、肺间质水肿、肺内出血，但骨髓间充质干细胞治疗组症状较脓毒症组有所减轻。②细胞实验：与对照组相比，脓毒症模型组、骨髓间充质干细胞干预组肺泡巨噬细胞的NF-κB(P65)蛋白入核明显升高(P <0.05)，但骨髓间充质干细胞干预组明显低于脓毒症模型组(P <0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞在脓毒症急性肺损伤时可能调控肺泡巨噬细胞NF-κB(P65)蛋白入核，使其减少促炎细胞因子巨噬细胞炎性蛋白2表达，进而减少中性粒细胞浸润起到肺保护作用，暂不能说明骨髓间充质干细胞对白细胞介素10有影响。
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静脉及心肌注射骨髓间充质基质细胞未能改善慢性心肌梗死大鼠的心脏功能
背景：有多项研究证明，经静脉或经心肌表面注射移植间充质基质细胞促进了急性心肌梗死后心功能的改善。然而，目前尚缺乏有关经静脉联合经心肌注射移植间充质基质细胞对慢性心肌梗死心脏功能影响的研究。目的：探讨静脉联合心肌注射骨髓间充质基质细胞对慢性心肌梗死模型大鼠心脏功能的影响及其机制。方法：体外培养扩增Lewis大鼠的骨髓间充质基质细胞。将3×106 BrdU标记过的骨髓间充质基质细胞分别经股静脉和经心肌表面注射移植于慢性心肌梗死模型大鼠，对照组注射等量PBS。4周后检测两组大鼠心功能的变化，并对大鼠心脏组织行免疫组化染色，观察细胞分化情况及毛细血管数量。结果与结论：骨髓间充质基质细胞移植 4周后，细胞移植组与对照组心功能无明显差别，免疫组化染色提示存留于心肌组织内的移植细胞未分化为心肌细胞，心梗瘢痕区血管密度在细胞移植组和对照组间没有明显差别。结果表明经静脉联合经心肌注射骨髓间充质基质细胞未能改善慢性心肌梗死模型大鼠的心脏功能。
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骨髓间充质干细胞移植治疗顺铂致卵巢的化疗性损伤
背景：化疗药物可使处于生育年龄女性患者卵巢功能有不同程度的损伤，重则致卵巢早衰，已成为卵巢早衰发病的一个重要原因。因此，改善和恢复患者卵巢功能，已成为一个重要的课题。目的：探索骨髓间充质干细胞治疗化疗所致卵巢损伤的可行性及疗效。方法：建立化疗性卵巢衰竭模型，建模后注射PKH26标记后的骨髓间充质干细胞，于移植细胞后第15，30，45，60天，各取5只大鼠经尾静脉取血测卵泡刺激素、雌二醇水平并处死大鼠，留取右侧卵巢行常规病理切片，光学显微镜下记录卵巢卵泡数量变化。细胞移植后30 d，取2只大鼠与雄鼠合笼，观察生殖能力的差异。结果与结论：18%(4/22只)大鼠移植干细胞后动情周期能逐渐恢复，卵泡刺激素水平有所下降而雌二醇水平上升，卵巢病理切片提示卵泡数量减少，大鼠生育能力未受损害。结果表明骨髓间充质干细胞可以部分改善化疗后大鼠卵巢功能。
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中华小型猪心肌梗死后移植同种异体骨髓间充质干细胞归巢时间窗
背景：心肌梗死后不同时间点进行骨髓间充质干细胞移植，其归巢至损伤组织的能力以及起到的修复作用将有很大的不同。目的：探索心肌梗死后移植的骨髓间充质干细胞归巢于心肌组织的佳时间窗。方法：将18头中华小型猪采用开胸结扎左冠状动脉前降支的方法建立急性心肌梗死模型。造模成功后1 d，3 d，1周，2周，3周，4周6个时间点经冠状动脉注射BrdU标记的骨髓间充质干细胞，于移植后3 d处死动物，检测心肌梗死区骨髓间充质干细胞的归巢量。结果与结论：心肌梗死后1 d，3 d，1周，2周，3周，4周均可见有细胞核呈棕黄色的BrdU标记的阳性细胞，其中心肌梗死后1周的阳性细胞分布多且集中，高于其他5个时间点(P <0.05)。说明骨髓间充质干细胞归巢的佳时间窗为心肌梗死后1周，在此时间点给予干细胞移植促进心肌修复有一定意义。
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低氧诱导因子1α基因修饰脐血间充质干细胞移植治疗脊髓缺血再灌注损伤
背景：脊髓缺血再灌注损伤目前尚无有效治疗手段，多数研究集中于干细胞移植治疗。目的：观察肾下腹主动脉移植低氧诱导因子1α基因修饰的脐血间充质干细胞对脊髓缺血再灌注损伤大鼠的治疗作用。方法：30只成年SD雌性大鼠随机分为3组：对照组，未转染组，基因转染组，每组10只。手术阻断肾下腹主动脉1 h后恢复脊髓再灌注，分别经腹主动脉置管推注1 mL 10%PBS，1 mL脐血间充质干细胞悬液，1 mL低氧诱导因子1α修饰的脐血间充质干细胞悬液。术后1，6，12 d对大鼠进行BBB评分，Western blot法检测脊髓组织低氧诱导因子1α蛋白的表达，术后12 d行运动诱发电位测定。结果与结论：与对照组比较，未转染组和基因转染组大鼠BBB评分均显著升高(P <0.05)，脊髓组织低氧诱导因子1α蛋白表达明显上调(P <0.05)，运动诱发电位潜伏期缩短(P <0.05)，波幅增加(P <0.05)。与未转染组比较，基因转染组BBB评分明显升高(P <0.05)，脊髓组织低氧诱导因子1α蛋白表达上调(P <0.05)，运动诱发电位潜伏期缩短(P <0.05)，波幅增加(P <0.05)，结果表明低氧诱导因子1α修饰的脐血间充质干细胞治疗脊髓缺血再灌注损伤效果更加显著。
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干细胞与膀胱脱细胞基质构建组织工程管状移植物修复长段输尿管缺损
背景：临床上重建长段输尿管缺损的方法存在并发症多且创伤大等缺点，因此，需要寻找其他的修复方式。目的：探讨组织工程管状移植物修复长段输尿管缺损的可行性。方法：将兔骨髓间充质干细胞和膀胱平滑肌细胞种植到兔膀胱脱细胞基质的两面，培养7 d后制作成4 cm长的组织工程管状移植物，仅将膀胱平滑肌细胞种植到兔膀胱脱细胞基质构建组织工程管状移植物作为对照；新西兰兔25只，随机分为实验组20只和对照组5只，将2种组织工程管状移植物移植到兔体内修复输尿管缺损，修复同时利用网膜包裹，分别于术后2，4，8周取实验组标本做苏木精-伊红染色及免疫组化检测。结果与结论：组织学检查发现实验组尿路上皮层再生呈连续性，术后8周可见组织工程管状移植物管腔内覆盖多层尿路上皮结构及规则的平滑肌束，免疫组化可见uroplakinⅢa及CK AE1/AE3阳性，证实了组织工程管状移植物组织内有成熟上皮细胞覆盖，且上皮细胞之间有连接功能。对照组5只动物术后拔除输尿管支架管2周内均死亡，尸检见流出道瘢痕形成，组织工程管状移植物内腔闭锁，同侧肾脏重度积水，未作组织学观察。以上结果表明将骨髓间充质干细胞和膀胱平滑肌细胞种植于兔膀胱脱细胞基质上构建组织工程管状移植物修复长段输尿管缺损是可行的，组织工程管状移植物内腔有成熟上皮覆盖，骨髓间充质干细胞能促进尿路上皮再生。
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脐带间充质干细胞联合骨髓干细胞移植治疗失代偿期肝硬化：1年随访对照
背景：骨髓干细胞应用于治疗失代偿期肝硬化有较多单中心研究报道，效果均不理想，其原因可能与肝硬化患者年龄大、体质弱，骨髓造血功能差，能够获取的干细胞数量少，再生和增殖能力弱有关，而脐带间充质干细胞具有易获得、来源广、免疫原性弱等特点。二者联合移植有可能提高其对失代偿期肝硬化患者的治疗效果。目的：探讨脐带间充质干细胞联合骨髓干细胞治疗失代偿期肝硬化的疗效及安全性。方法：失代偿期肝硬化患者32例随机分为两组，对照组19例单纯内科综合治疗，干细胞组13例在内科治疗基础上进行脐带间充质干细胞联合骨髓干细胞移植。跟踪观察随访1年，分别于治疗后4，12，52周观察并详细记录患者肝功能(丙氨酸转氨酶、总胆红素、白蛋白)、凝血酶原时间、Child-Pugh评分、MELD评分、患者1年生存率、临床生活质量评分(QOL)及干细胞治疗相关不良反应。结果与结论：在治疗后4，12，52周，干细胞组和对照组肝功能、凝血酶原时间、Child-Pugh评分、MELD评分等指标较治疗前均有改善，但两组对比差异无显著性意义(P >0.05)；移植后4周患者临床症状及临床生活质量评分(QOL)有较快改善，与对照组相比差异有显著性意义(P<0.05)，在治疗后12，52周时差异无显著性意义(P >0.05)；两组患者1年生存率无明显差异，未发生与细胞治疗相关的严重并发症。结果表明脐带间充质干细胞联合骨髓干细胞移植能够较快地改善失代偿期肝硬化患者临床症状，安全性好，但对其确切疗效有待扩大样本量进一步深入研究。
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心肌干细胞移植心肌梗死区12周后的心电生理稳定性及室颤阈值改善效应
背景：课题组前期研究证实心肌干细胞治疗心肌梗死后短中期(6周)能明显改善心电生理学稳定性和室颤阈值。目的：观察心肌干细胞对心力衰竭大鼠室颤阈值和心电生理稳定性的长期影响。方法：开胸结扎20只SD大鼠左前降支冠状动脉，2周后其中10只大鼠局部梗死心肌内注射PKH26荧光标记的由PBS悬浮的心肌干细胞，另10只大鼠局部梗死心肌内注射等量PBS。治疗12周后，再次开胸检测梗死区、梗死边缘区和非梗死区的心电生理特性和室颤阈值。实验结束后，摘取心脏行病理切片，检查PHK26标记的心肌干细胞是否在梗死区内生存并表达连接蛋白43及α-肌动蛋白。结果与结论：与对照组相比，心肌干细胞移植12周后其梗死区、梗死边缘区和非梗死区的单极电图激动恢复时间、纠正的激动恢复时间差异无显著性意义(P >0.05)；单极电图纠正的激动恢复时间离散度、电刺激所激发的恶性心律失常差异无显著性意义(P>0.05)；室颤阈值方面，实验组梗死区和梗死边缘区与对照组相比差异无显著性意义(P >0.05)，非梗死区与对照组相比差异有显著性意义(P <0.05)。PHK26标记的心肌干细胞在梗死边缘区内被发现并表达连接蛋白43和α-肌动蛋白。以上结果提示心肌干细胞移植后12周其心电生理的稳定性和室颤阈值的改善效应已逐渐消失，但机制未明。
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自体造血干细胞移植治疗外周T细胞淋巴瘤
背景：外周T细胞淋巴瘤亚洲地区发病率高，具有侵袭性，预后普遍较差，目前尚无标准治疗策略。目的：评价自体造血干细胞移植治疗外周T细胞淋巴瘤的疗效及毒副反应。方法：回顾性分析2003年3月至2014年4月行自体造血干细胞移植治疗外周T细胞淋巴瘤35例，包括结外NK/T细胞淋巴瘤鼻型22例，血管免疫母细胞T细胞淋巴瘤1例，外周T细胞淋巴瘤(非特殊型)8例，间变性大T细胞淋巴瘤 ALK(+)3例，ALK(-)1例；所有病例均按WHO 2001年和WHO 2008年分类进行病理分型，均采用VAEMMC+全射照射预处理方案。结果与结论：随访中位时间54个月(9-120个月)，28例患者(80%)存活，其中无病存活25例(71%)，8例(23%)复发，其中7例死亡，1例尚在治疗中。近期毒性主要为骨髓造血受抑，无明显远期并发症。结果表明自体造血干细胞移植治疗外周T细胞淋巴瘤安全有效，早期(第1次完全缓解)行移植疗效佳。
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炎症预激活骨髓间充质干细胞条件培养基修复小肠黏膜急性辐射损伤
背景：间充质干细胞条件培养基被认为是干细胞移植的良好替代方案。既往研究表明，炎症因子的诱导激活能增强间充质干细胞多种生物学潜能，而正常状态的间充质干细胞可能由于免疫活性和迁徙能力不足，无法有效修复损伤组织。目的：探讨炎症预激活前后骨髓间充质干细胞条件培养基对急性辐射损伤小肠上皮治疗作用的差异。方法：分离、培养、鉴定SD幼鼠骨髓间充质干细胞，分别与正常对照和辐射损伤的小肠隐窝细胞株IEC-6在Transwel培养板中共培养24 h，预刺激的骨髓间充质干细胞继续单独培养48 h，收集到的上清液分别为正常状态间充质干细胞条件培养基(MSC-CMNOR)和辐射炎症预激活间充质干细胞条件培养基(MSC-CMIR)。将成年SD大鼠随机分为4组，正常对照组、辐射损伤组、MSC-CMNOR治疗组和MSC-CMIR治疗组，以14 Gy剂量一次性腹部局部照射制备急性小肠辐射损伤大鼠模型，模型制备后尾静脉注射和植入式胶囊渗透压泵腹腔植入联合给药。于治疗后第1，3，7天取小肠组织检测短回路电流和血清木糖水平观察小肠分泌、吸收功能变化。治疗后第3天取小肠组织行电镜观察超微结构改变，治疗后第1，3，5，7，14天取小肠组织行苏木精-伊红染色观察小肠黏膜组织学改变。记录各组大鼠生存状态及生存时间。结果与结论：输注MSC-CM IR后，大鼠小肠短回路电流差值、血清木糖水平较辐射损伤组升高，差异有显著性意义(P <0.05)。苏木精-伊红染色和电镜观察显示从治疗后第3天起MSC-CMIR组小肠黏膜病理改变明显减轻，上皮厚度、紧密连接间隙明显优于辐射损伤组。生存分析显示MSC-CMIR组生存率和平均生存时间明显改善(P <0.05)，而MSC-CMNOR组的各项指标与辐射损伤组比较差异无显著性意义(P >0.05)。结果表明炎症激活状态下的骨髓间充质干细胞条件培养基可促进辐射损伤小肠结构和功能的修复。
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骨关节炎患者骨髓间充质干细胞的功能状态与病情进展
背景：骨髓间充质干细胞对骨和软骨在细胞水平的发育和再生至关重要，其数量缺失和功能受损被广泛认为是骨关节炎病因之一。目的：探讨骨关节炎患者骨髓间充质干细胞功能状态与病情进展的关系。方法：2013年7月至2014年10月间收集3组病例，每组10例，分别为对照组、轻度骨关节炎患者组、重度骨关节炎患者组。获取3组患者股骨或胫骨骨髓5 mL分离培养骨髓间充质干细胞，培养至3代时采用CCK-8法检测各组患者骨髓间充质干细胞的增殖能力，成软骨诱导14 d后行甲苯胺蓝染色鉴定，Real time PCR法检测对照组诱导后软骨细胞特征基因Aggrecan、Col2A1的表达。结果与结论：骨髓间充质干细胞体外培养后贴壁生长，胞浆含有较大的颗粒，核卵圆形，细胞呈多角形、梭形，有多个大小不一的突起，细胞分裂相多见。对照组增殖能力强，重度骨关节炎患者组增殖能力弱，但均在培养1周后进入平台期。成软骨诱导14 d后细胞呈多角形、类圆形改变，紫红色异染颗粒分布于胞浆外围。对照组诱导后软骨细胞特征基因 Aggrecan、Col2A1有高表达趋势。结果表明骨关节炎患者骨髓间充质干细胞功能状态与病情严重程度成负相关，其功能状态影响骨关节炎患者的病情进展。
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人骨髓间充质干细胞对肝癌细胞的生物学效应
背景：肝癌的转移特性是影响预后的关键因素，观察人骨髓间充质干细胞对肝癌转移行为的影响，对于提高肝癌患者的生存期具有重要意义。目的：探讨人骨髓间充质干细胞对不同转移潜能肝癌细胞生物学特性的影响。方法：Transwel下室加入人骨髓间充质干细胞，上室加入高、低转移潜能肝癌细胞悬液，共培养36 h酶标仪检测吸光度值及细胞计数法观察肝癌细胞侵袭能力的变化。CCK-8法检测人骨髓间充质干细胞对高低转移潜能肝癌细胞增殖能力的影响。PCR检测人骨髓间充质干细胞与高低转移潜能肝癌细胞共培养前后转移相关因子骨桥蛋白、唾液酸蛋白、整合(α-V)以及增殖相关基因转化生长因子β1和程序化凋亡因子的表达。结果与结论：①共培养组的肝癌细胞迁移数量显著少于单独培养组，经酶标仪半定量检测肝癌细胞侵袭性显示，共培养组吸光度值明显低于单独培养组，差异有显著性意义(P <0.05)。②高转移潜能肝癌细胞与人骨髓间充质干细胞共培养组转移相关因子骨桥蛋白和骨唾液酸蛋白表达显著下降(P <0.05)，但整合(α-V)基因表达未出现明显改变(P >0.05)。低转移潜能肝癌细胞与人骨髓间充质干细胞共培养组转移相关因子骨桥蛋白、骨唾液酸蛋白以及整合(α-V)基因表达显著下降(P <0.05)。③经酶标仪半定量检测肝癌细胞增殖能力显示，共培养组吸光度值明显高于单独培养组，差异有显著性意义(P <0.05)。④高转移潜能肝癌细胞与人骨髓间充质干细胞共培养组的转化生长因子β1基因表达显著上调(P <0.05)；但程序化凋亡因子基因表达无明显改变(P >0.05)。低转移潜能肝癌细胞与人骨髓间充质干细胞共培养组的转化生长因子β1、程序化凋亡因子基因表达均显著上调(P <0.05)。以上结果提示人骨髓间充质干细胞与肝癌细胞共培养后，肝癌细胞侵袭能力明显下调，增殖能力明显提高。
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在复合成分培养基中骨髓间充质干细胞的诱导成骨
背景：研究显示骨质疏松多伴有成骨细胞的减少，成骨细胞替代疗法成为治疗骨质疏松症的新靶点。目的：观察人骨髓间充质干细胞在含地塞米松、维生素C及β-甘油磷酸钠培养基中向成骨细胞分化的能力。方法：采用人淋巴细胞分离液从成人骨髓血中分离纯化间充质干细胞，应用流式细胞仪检测其表面标志物的活性，透射电镜观察骨髓间充质干细胞的超微结构；将骨髓间充质干细胞在含有地塞米松、维生素 C 与β-甘油磷酸钠的成骨诱导培养基中诱导分化， RT-PCR检测骨髓间充质干细胞成骨诱导后骨形态发生蛋白2 mRNA的表达情况。结果与结论：培养2周后可见细胞呈成纤维状生长，强表达 CD44，CD29，不表达 CD34，CD45，具有向成骨细胞诱导分化的潜能，茜素红及碱性磷酸酶染色阳性，骨形态发生蛋白2 mRNA表达阳性，说明人骨髓间充质干细胞在含地塞米松、维生素C及β-甘油磷酸钠培养基中可向成骨细胞诱导分化，具有治疗骨质疏松症的潜能。
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红色荧光基因慢病毒转染骨髓间充质干细胞：表达21 d对细胞活性无影响
背景：掌握转染的佳感染复数和产生较强荧光强度的时间，可为后期观察人骨髓间充质干细胞在动物模型体内的示踪奠定基础。目的：探讨HIV-1来源的慢病毒携带增强型红色荧光蛋白转染人骨髓间充质干细胞的可行性。方法：将第4代人骨髓间充质干细胞分成空白组和感染复数为2，3，4组，以细胞数5.0×105个接种于12孔培养皿，添加含有体积分数为1%胎牛血清的成人骨髓间质干细胞完全培养基1 mL。调整慢病毒携带增强型红色荧光蛋白感染滴度为1.0×1011 TU/L，加入各组培养皿中病毒液体积分别为10，15，20μL，感染复数分别为2，3，4，空白组加入10μL PBS。转染后24，72 h荧光倒置显微镜观察细胞红色荧光表达情况并计算出转染率。结果与结论：增强型红色荧光蛋白在骨髓间充质干细胞中稳定表达，转染后24 h倒置荧光显微镜下可见红色荧光，72 h荧光达到强，细胞转染率与感染复数值呈线性增长关系。转染后21 d内，各转染实验组的人骨髓间充质干细胞数量与空白组比较差异无显著性意义(P >0.05)，以上结果提示采用 HIV-1来源的慢病毒载体介导增强型红色荧光蛋白转染标记人骨髓间充质干细胞是可行的，当感染复数为4时转染效率高并可持续表达至少21 d，且标记后对其增殖活性无影响。
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基底膜基质/壳聚糖诱导骨髓间充质干细胞成软骨分化
背景：课题组前期研究发现基底膜基质能够定向诱导骨髓间充质干细胞向软骨方向分化，但其力学性能与实际应用有较大差距，还需要进一步研究。目的：制备兼具适宜力学性能和优异生物相容性的壳聚糖/基底膜基质水凝胶支架用于软骨修复。方法：以京尼平为交联剂，将壳聚糖溶液与基底膜基质按2︰1，1︰1，1︰3比例混合制成水凝胶，接种大鼠骨髓间充质干细胞，培养14 d。经材料力学测试、细胞增殖、活细胞染色、酶联免疫吸附测试以及阿尔新蓝染色等方法评价材料诱导细胞成软骨分化能力。结果与结论：在基底膜基质内添加壳聚糖后，材料力学性能从0.48 kPa上升到1.78 kPa。标志性蛋白分泌结果显示，纯壳聚糖组早期诱导成软骨活性高于其他组，但后期诱导能力减弱，而含基底膜基质各组在后期能够保持较好的诱导活性，其中壳聚糖/基底膜基质=1︰1组材料具有一定的力学强度，且Ⅱ型胶原和Ⅹ型胶原的表达量在14 d较其他组高。结果表明实验制备的壳聚糖/基底膜基质水凝胶具有良好的力学性能，并能够促进骨髓间充质干细胞向软骨方向分化，可用于软骨组织工程研究。
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胎盘源间充质干细胞分离提取的新方法
背景：胎盘是获取间充质干细胞的理想来源，在干细胞治疗和再生医学中具有潜在广泛的用途，建立高效分离提取方法有助于其存储和临床应用。目的：分析组织绞碎加酶液消化法培养人胎盘间充质干细胞的生物学特性。方法：采用组织绞碎加酶液消化法分离、富集胎盘组织中间充质干细胞，应用流式细胞术检测细胞表面标记， MTT法分析增殖能力，并采用诱导剂定向诱导胎盘间充质干细胞成脂、成骨和成软骨分化。结果与结论：胎盘组织来源间充质干细胞在体外可稳定长期传代培养，应用流式细胞仪检测结果显示 CD73、CD90、CD105表达阳性，CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR表达阴性。胎盘间充质干细胞增殖活跃，第3-5天进入对数生长期，第6天进入平台期。经诱导后，胎盘间充质干细胞具有向脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞分化的潜能。结果表明联合利用组织绞碎和酶液消化法可高效获取胎盘间充质干细胞，在体外培养过程中生长稳定，增殖能力强，可长期传代。
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牙周膜干细胞与牙周膜细胞甲状旁腺激素受体表达的比较
背景：牙周膜干细胞是牙周膜细胞中一类具有自我更新及多向分化潜能的间充质干细胞，经诱导可分化为成骨样细胞或脂肪样细胞。关于牙周膜干细胞是否表达甲状旁腺激素受体以及受体表达量对牙周膜干细胞成骨能力的影响等，目前尚未见相关报道。目的：检测并比较牙周膜干细胞与牙周膜细胞中甲状旁腺激素受体表达的差异，并探讨甲状旁腺激素受体在成骨过程中的作用机制。方法：应用免疫磁珠法筛选分离牙周膜干细胞及牙周膜细胞。通过细胞免疫荧光染色、荧光定量PCR等方法检测并比较牙周膜干细胞与牙周膜细胞中甲状旁腺激素受体的表达差异。应用荧光定量PCR、碱性磷酸酶活性检测及矿化能力分析等方法评价甲状旁腺激素受体对两者成骨能力的影响。结果与结论：应用免疫磁珠法筛选的STRO-1阳性细胞，经细胞免疫荧光染色鉴定STRO-1、CD146、Vimentin等间充质干细胞表面表型均呈阳性，证明为牙周膜干细胞。细胞免疫荧光染色证明，牙周膜干细胞表达甲状旁腺激素受体，其主要分布于细胞膜与胞浆内，与牙周膜细胞及人成骨肉瘤MG63细胞系相似。荧光定量PCR结果表明，牙周膜干细胞甲状旁腺激素受体的表达量约为牙周膜细胞的3.7倍，与MG63细胞相近。经10-7 mol/L甲状旁腺激素处理30 min后，牙周膜干细胞的甲状旁腺激素受体表达量明显增加。经成骨诱导后，牙周膜干细胞的甲状旁腺激素受体表达量、成骨相关基因表达量、碱性磷酸酶活性及矿化能力均高于牙周膜细胞。上述实验结果证明，牙周膜干细胞能表达甲状旁腺激素受体，且主要分布于细胞膜和细胞浆内。牙周膜干细胞甲状旁腺激素受体的表达量明显高于牙周膜细胞，而且甲状旁腺激素受体表达量与细胞的成骨能力相关，说明牙周膜干细胞比牙周膜细胞具有更强的成骨能力，是口腔组织工程学中具有广阔应用前景的种子细胞。
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人肺腺癌干细胞表型与预后的相关性
背景：肺腺癌干细胞是肺腺癌确诊的重要实验室依据，但其评估患者预后的价值如何，临床尚未定论。目的：探讨人肺腺癌干细胞表型与患者预后的关系。方法：选取2010年2月至2013年1月在新疆医科大学第一附属医院治疗的肺腺癌患者48例，采用免疫荧光法检测患者肺腺癌干细胞表型标志，比较不同表型与患者临床病例特征以及患者预后的关系。结果与结论：48例肺腺癌组织中均观察到SP-C表达和CCSP表达，具有肺细支气管肺泡干细胞的表型特征，其中34例同时表达OCT4(OCT4+支气管肺泡干细胞组)，14例不表达OCT4(OCT4-支气管肺泡干细胞组)。OCT4+支气管肺泡干细胞组和OCT4-支气管肺泡干细胞组肺腺癌患者的年龄、性别、吸烟史以及肿瘤分期差异无显著性意义(P >0.05)；OCT4+支气管肺泡干细胞组有23例(68%)患者癌细胞转移，明显高于OCT4-支气管肺泡干细胞组(21%)，差异有显著性意义(P <0.05)；在腺癌患者年龄、性别、吸烟史、分期以及癌细胞转移等临床病理特征分层中，OCT4-支气管肺泡干细胞组肺腺癌2年生存率普遍高于OCT4+支气管肺泡干细胞组，两组生存曲线差异有显著性意义(P <0.05)。结果表明人肺腺癌干细胞具有肺细支气管肺泡干细胞表型特征，同时表达胚胎干细胞基因OCT4时，患者预后差，与肺腺癌转移有关。
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5-氟尿嘧啶对人舌鳞癌Tca8113中肿瘤干细胞的富集作用
背景：肿瘤对于化疗药物具有耐药性，而耐药性产生又与肿瘤干细胞密切相关。因此，如何靶向杀伤肿瘤干细胞，将成为口腔鳞癌治疗的关键。目的：探讨5-氟尿嘧啶对舌鳞癌Tca8113肿瘤细胞生物学特性的影响。方法：利用CCK-8实验检测不同质量浓度5-氟尿嘧啶对Tca8113细胞活性的影响，筛选相对较好的药物质量浓度和作用时间进行后续实验，以不添加5-氟尿嘧啶为对照组，流式细胞仪检测细胞周期及肿瘤细胞中侧群细胞比例的变化，划痕实验检测肿瘤细胞迁移能力变化。结果与结论：CCK-8检测显示：5-氟尿嘧啶对舌鳞癌Tca8113细胞系细胞的活性抑制呈时间及药物浓度的正相关关系，50 mg/L 5-氟尿嘧啶作用48 h时，细胞活性抑制效果相对较好。流式细胞仪细胞周期检测显示：实验组G0/G1期细胞比例较对照组明显升高(P=0.01)，S期细胞较对照组下降(P=0.244)，实验组G2/M期细胞完全消失(P=0.00)。5-氟尿嘧啶处理后侧群细胞比例较处理前明显升高(P=0.00)。细胞划痕实验显示实验组划痕愈合能力较对照组增强。结果表明5-氟尿嘧啶药物筛选人舌鳞癌Tca8113细胞可以作为富集类肿瘤干细胞的方法之一。
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结直肠癌组织中DCLK1+/Ki67-肿瘤干细胞样细胞的形态和分布
背景：DCLK1是在有丝分裂后的神经元中发现的一种跨膜微管相关蛋白激酶，近些年来发现其可能是肠道肿瘤干细胞的标志物。目的：观察DCLK1与Ki67在结直肠肿瘤中的表达及其病理学意义，探讨是否可以将DCLK1+/Ki67-作为结直肠癌肿瘤干细胞的标志物。方法：运用免疫组织化学方法检测150例结直肠癌组织中DCLK1与Ki67的表达，并与正常肠黏膜组织、癌旁组织、腺瘤组织比较。结果与结论：DCLK1和Ki67在癌组织中的表达率分别为36.7%，34.7%，其数量明显高于正常肠黏膜和腺瘤组织；DCLK1的表达与部位、浸润深度、淋巴结转移有关(P <0.05)，而Ki67的表达仅与浸润深度有关(P <0.05)；DCLK1与 Ki67的表达呈负相关(r=-0.460，P=0.000)。结直肠癌组织中DCLK1+/Ki67-细胞数量约为2.01%，主要分布于肠黏膜隐窝的基底部及共壁腺管的共壁处，细胞核大深染且呈圆形或卵圆形，核仁明显，核分裂象少见，细胞质较少。DCLK1+/Ki67-细胞在不同分化程度的腺癌组织中均存在，且分化程度越低，细胞数量越多，故无论从细胞数量和位置，还是细胞形态，都表明DCLK1+/Ki67-细胞符合肿瘤干细胞的特征，可以将DCLK1+/Ki67-作为结直肠癌肿瘤干细胞的标志物。
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改良原代培养体系提高人脐带间充质干细胞的产量
背景：目前关于脐带间充质干细胞培养方法的研究很多，但尚无关于初次培养后废弃物的相关研究。目的：探讨优化人脐带来源间充质干细胞体外培养的佳方法。方法：采用组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞，记为初次培养组。将原代培养瓶中的培养液及组织离心，重新分成组织组、混合组和纯液组进行再次培养。观察4组原代细胞的细胞形态、获得时间和细胞得率；MTT法绘制细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞周期及免疫表型。结果与结论：初次培养组、再次培养组织组、再次培养混合组、再次培养纯液组获取细胞的平均时间分别为(15.00±0.45) d，(7.0±0.3) d，(8.00±0.25) d，(8.00±0.25) d。每个T75培养瓶可获取的第1代细胞数分别为(4.0±0.5)×105、(9.0±0.55)×105、(15.0±0.2)×105、(7.0±0.33)×105个。倒置显微镜下观察4组细胞为形态相对均一的梭形贴壁细胞，呈平行排列生长或漩涡状生长。4组细胞的生长曲线、增殖活性、表面标记物检测均无明显差异。结果表明对脐带间充质干细胞的原代培养体系进行再次培养，可在短时间内扩增出大量原代细胞。
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脂肪与髓核来源间充质干细胞在转化生长因子β1诱导下向类髓核细胞分化
背景：大量研究表明多种组织来源的成体干细胞在体外均可向类髓核细胞分化。椎间盘髓核组织来源间充质干细胞在转化生长因子β1诱导下能否向类髓核细胞分化？其分化能力与脂肪间充质干细胞相比是否有差异目前未见报道。目的：比较脂肪间充质干细胞与髓核间充质干细胞在转化生长因子β1诱导下向类髓核细胞诱导分化能力的差异。方法：分别取大鼠腹股沟处脂肪组织与尾段脊柱，采用机械酶消化法分离培养脂肪间充质干细胞与髓核间充质干细胞。流式细胞仪检测两种细胞 CD105、CD90、CD29、CD45、CD44、CD34、CD24的表达。脂肪间充质干细胞与髓核间充质干细胞各自分为诱导组、无因子诱导组和对照组，诱导组以转化生长因子β1标准软骨诱导液培养，无因子诱导组以不含转化生长因子β1的软骨诱导液培养，对照组以含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养液培养。培养14 d后用RT-PCR检测各组细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9基因的表达。结果与结论：两种细胞CD105、CD90、CD29表达阳性，CD45、CD44、CD34、CD24表达阴性。向类髓核细胞诱导培养14 d后两种细胞诱导组Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX-9基因表达水平较对照组均明显升高，差异有显著性意义(P <0.05)；髓核间充质干细胞诱导组3种基因的表达水平明显高于脂肪间充质干细胞诱导组，差异有显著性意义(P <0.05)。提示脂肪间充质干细胞与髓核间充质干细胞均具有向类髓核细胞分化的能力，而髓核间充质干细胞相对于脂肪间充质干细胞其软骨相关基因表达更高，可能更适合于作为组织工程髓核研究的种子细胞。
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干细胞治疗椎间盘退变性疾病：现状与展望
背景：目前关于椎间盘退变性疾病的治疗方案均未关注于缓解或逆转椎间盘退变的病程，近年来越来越多的研究正在尝试使用干细胞治疗椎间盘退变性疾病。目的：综述干细胞治疗椎间盘退变性疾病的现状、展望与挑战。方法：由第一作者应用计算机检索PubMed数据库中相关文献，检索时限为2004年1月至2014年12月。检索英文主题词“stem cel，intervertebral disk”。选择文章内容与干细胞治疗椎间盘退变性疾病有关者，同一领域文献则选择近期发表在权威杂志的文章。结果与结论：初检得到文献342篇，选择符合纳入标准的43篇文献进行综述。将干细胞与载体结合后注射到退变的椎间盘是一种全新的治疗方案。目前适用于干细胞疗法的候选细胞包括：胚胎干细胞、诱导多能干细胞、间充质干细胞、人脐带间充质干细胞及类软骨细胞或髓核细胞。未来干细胞疗法的临床应用需克服以下风险：细胞泄露、椎间盘感染及肿瘤化，但其应用于治疗椎间盘退变性疾病的前途将不可估量。
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禽类间充质干细胞的研究：探索与前景
背景：禽类间充质干细胞是来源于禽类中胚层的一类多能性成体干细胞，具有强大的增殖能力和多向分化潜能，应用前景广阔。目的：对禽类间充质干细胞的来源、分离、纯化、培养和分化等方面的新研究进展进行综述，为禽类间充质干细胞的进一步研究和应用提供理论依据和实验基础。方法：以“mesenchymal stem cels，poultry，chicken，isolation，culture，differentiation”和“间充质细胞，禽类，鸡，分离培养，分化”为检索词，由第一作者检索1990至2014年PubMed和中国知网数据库，查阅近年禽类间充质干细胞的相关文献，终保留42篇文献。结果与结论：禽类间充质干细胞在建立禽类细胞体外模型、研究禽类疾病发病机制以及动物营养和肉品质调控方面有着巨大的应用前景。间充质干细胞来源广泛，易于获得，不同组织来源间充质干细胞的分离、纯化、培养和生物学特性也有所不同。但是禽类间充质干细胞的研究还在探索过程中，还有许多亟待解决和深入探究的问题。
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干细胞培育技术的研究与进展：创新、突破与高质量
背景：随着干细胞基础研究和临床研究的开展，对干细胞的需求量在不断增加，但相对落后的干细胞培育技术，制约了干细胞研究的开展。目的：对国内外开展的干细胞培育技术的改进和创新作一综述。方法：在标题和摘要中，以“stem cels, induced pluripotent stem cels, cultivation, efficiency, reprogramming”或“干细胞，诱导多能干细胞，培育，效率，重编程”为检索词，检索中国期刊全文数据库(CNKI)、维普数据库、万方数据库和PubMed数据库中2005年1月至2014年11月关于干细胞培育技术的文章。同一领域文章则选择近期发表或发表在权威杂志上的文章。初检得到61篇文献，根据纳入标准，选择其中的39篇文献进行综述。结果与结论：干细胞培育技术的进步和改进，有效地增加了干细胞的培育数量，提高了干细胞的培育质量，促进了干细胞基础及临床研究的开展。随着干细胞培育技术的进一步创新和突破性进展，高效地培育出高质量的干细胞将成为可能，人类疾病的干细胞移植试验的研究将得到极大的推动。
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造血干细胞移植后非感染性肺部并发症：研究与进展
背景：造血干细胞移植为血液系统肿瘤、实体肿瘤、免疫性及遗传性疾病患者带来了生存的希望，但移植后非感染性肺部并发症发生及死亡率高，诊断、治疗困难。目的：对造血干细胞移植后非感染性肺部并发症的发病时间、危险因素、临床表现、高分辨 CT 特征、组织病理、相关基因及治疗方案作一综述。方法：在标题和摘要中，以“造血干细胞移植、肺部并发症、非感染性、吡非尼酮”或“HSCT, Pulmonary complications, Non-infectious, Pirfenidone”为检索词，检索维普数据库、PubMed数据库和Sciencedirect数据库中2005年1月至2014年10月关于造血干细胞移植后非感染性肺部并发症方面的文献。终选择31篇文献进行综述。结果与结论：造血干细胞移植后非感染性肺部并发症发生率逐渐增多，临床症状不典型，诊断及治疗手段有限，临床上可根据其不同的发病时间、临床表现、相应的诊断标准、合适的实验室检查作出早期诊断并早期干预，尤其是胸部高分辨CT、纤支镜灌洗的应用及新型药物的及时干预，可提高患者生存率。
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诱导性多能干细胞治疗：移植排斥与安全性问题
背景：诱导性多能干细胞自发现以来一直是再生医学的研究热点，但人们过多地关注了它的运用性却忽略了安全性。目的：通过综述目前诱导性多能干细胞在动物移植研究中的表现，分析诱导性多能干细胞的安全性问题及可能原因，为今后的诱导性多能干细胞研究及临床运用提供参考。方法：以英文检索词为“induced pluripotent stem cels，safety，immune，immunogenicity，tumorigenicity， cancer，epigenomic，transplantation，Generation，Reprogramming，genomic，mutation”由第一作者检索2006至2014年PubMed数据库，查阅近年来与诱导性多能干细胞安全性相关的文献，进一步从Cel Press数据库和Nature数据库中获得文献全文阅读，终保留发表时间较近的28篇文献。结果与结论：诱导性多能干细胞的安全性问题正引起越来越多人的重视，免疫原性、潜在的致瘤性与表观遗传学变异问题是其临床应用的主要隐患。诱导性多能干细胞的安全性问题主要来自于重编程过程，“插入式基因操作”比非插入式操作具有更大的致瘤风险。体细胞重编程后不同程度的发生了表观遗传学变异，这些变异多与被重编程细胞的“遗传记忆”有关。
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人参皂苷Rg1与神经干细胞共培养的促增殖和保护作用
背景：研究表明传统中药提取物对大鼠神经干细胞进行干预，能够反映其对神经系统的恢复和保护作用。目的：探讨人参皂苷Rg1对神经干细胞的增殖和保护作用。方法：将妊娠19 d左右的SD大鼠进行解剖取出胎鼠，然后分离海马组织提取神经干细胞，与含50 g/L人参皂苷Rg1的DMEM/F12培养基共培养作为人参皂苷Rg1组，正常DMEM/F12培养基培养的神经干细胞作为空白对照组，与含0.64%苯酚的DMEM/F12培养基共培养作为阳性对照组，MTT法检测各组神经干细胞的增殖情况，Western-blot方法检测各组神经干细胞脑源性神经营养因子和转化生长因子β蛋白的表达。结果与结论：神经干细胞分离初期在镜下为圆形单个细胞，细胞的边缘比较清楚，接种2 d后，细胞贴壁并形成小的细胞球。人参皂苷Rg1组大鼠神经干细胞增殖率显著高于空白对照组(P<0.05)，阳性对照组神经干细胞增殖率显著低于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组相比，人参皂苷Rg1组大鼠神经干细胞脑源性神经营养因子蛋白表达显著升高，转化生长因子β蛋白表达显著下降，以上结果提示人参皂苷Rg1对大鼠神经干细胞具有一定的促进增殖和保护作用。
