中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子: 1.38
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 2095-4344
- 国内刊号: 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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骨髓基质干细胞移植阿尔茨海默病模型大鼠:改善学习及记忆能力
背景:临床上通过药物治疗阿尔茨海默病患者虽然在一定程度上可以减轻和延缓阿尔茨海默病的进展,但单药治疗只有30%的患者达到临床治愈,而且并不能完全康复。
目的:观察大鼠骨髓基质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠的治疗作用。
方法:将大鼠海马区注射β淀粉样蛋白建立阿尔茨海默病模型大鼠,并在模型大鼠的海马区进行大鼠骨髓基质干细胞移植。
结果与结论:①行为学变化:造模2周后,与对照组比,模型组和实验组大鼠逃避潜伏期均明显较长(P<0.05),表明阿尔茨海默病模型大鼠建造成功。细胞移植4周后,与模型组比,实验组大鼠平均逃避潜伏期迅速下降(P<0.05),大鼠在平台象限滞留时间明显延长(P<0.05);②胆碱乙酰化酶:细胞移植4周后,脑组织检测结果显示,实验组大鼠胆碱乙酰化酶的表达与模型组相比显著提高(P<0.05)。③结果显示:骨髓基质干细胞可在阿尔茨海默病大鼠海马区分化及存活,对其学习及记忆能力具有一定的改善作用。 -
脐血干细胞移植修复失代偿期肝硬化
背景:国内外研究证实,脐血干细胞可在体内大量扩增、诱导分化成完备的肝细胞,并表现出一定的肝功能。
目的:观察脐血干细胞移植治疗大鼠失代偿期肝硬化的效果。
方法:取20只SD大鼠,以40%四氯化碳花生油诱导大鼠失代偿期肝硬化模型,造模后第8周随机分为对照组与实验组,每组10只,实验组于尾静脉注射1.0×107 L-1的人脐血干细胞悬浮液2 mL,对照组于尾静脉注射细胞培养液2 mL。移植4周后,检测大鼠血清学天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、白蛋白、总胆红素、透明质酸、层粘连蛋白、前胶原蛋白Ⅲ及胶原蛋白Ⅳ水平,肝脏组织病理切片结果。
结果与结论:①血清学检测结果:与对照组比较,实验组白蛋白水平增高(P<0.05),天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、总胆红素、透明质酸、层粘连蛋白、前胶原蛋白Ⅲ及胶原蛋白Ⅳ水平降低(P<0.05)。②肝脏病理组织学观察结果:两组肝脏组织均有不同程度的肝硬化,实验组肝硬化程度低于对照组。③结果表明,脐血干细胞移植可有效改善失代偿期肝硬化大鼠的肝组织生理功能。 -
骨髓间充质干细胞移植对大鼠胃癌前病变模型的修复作用
背景:胃癌前病变是多种因素共同参与的长期发展过程,骨髓间充质干细胞有修复组织损伤的作用。目的:探讨骨髓间充质干细胞移植对大鼠胃癌前病变的影响。
方法:将36只Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和移植组。模型组和移植组建立大鼠胃癌前病变模型,移植组大鼠经尾静脉注射1 mL CM-dil标记的骨髓间充质干细胞(3×106个细胞),每周注射1次,一共3次,模型组和对照组同样方法经尾静脉注入等量的生理盐水。末次注射后1周处死大鼠,观察大鼠胃组织病理变化,检测胃黏膜中血管内皮生长因子的表达以及血清中细胞因子含量。
结果与结论:①移植组大鼠胃黏膜损伤较模型组轻,移植组血管内皮生长因子表达明显高于模型组和对照组(P<0.05);②模型组和移植组血清白细胞介素17和γ-干扰素水平高于对照组(P<0.05),移植组血清白细胞介素17和γ-干扰素水平低于模型组(P<0.05);③结果表明,骨髓间充质干细胞通过增加胃黏膜病变部位血管内皮生长因子的表达,降低血清白细胞介素17和γ-干扰素水平,从而提高血管通透性,减轻炎症反应,阻断或者缓解癌前病变的发生。 -
大黄素对骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性再灌注肾损伤的影响
背景:已有研究表明大黄素通过抑制炎症因子释放对肠缺血再灌注损伤具有保护作用。目的:探讨大黄素对骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性再灌注肾损伤的作用。
方法:40只SD大鼠随机分为5组(n=8):假手术组、缺血再灌注组、骨髓间充质干细胞组、大黄素低剂量干预组、大黄素高剂量干预组。除假手术组外,其余4组建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型。造模后骨髓间充质干细胞组下腔静脉注射1 mL骨髓间充质干细胞悬液,大黄素低剂量干预组与高剂量干预组术前7 d内每天灌胃大黄素30 mg/kg和60 mg/kg,后续处理与骨髓间充质干细胞组一致。再灌注6 h后,苏木精-伊红染色法检测肾组织病理改变,实时荧光定量PCR检测肿瘤坏死因子α,白细胞介素6和白细胞介素18以及TLR2和TLR4 mRNA表达水平,免疫印迹法检测COX-2,ICAM-1,iNOS蛋白表达水平。结果与结论:①缺血再灌注后可见大量小管上皮脱落,间质有炎性细胞浸润;骨髓间充质干细胞组可见部分小管上皮细胞脱落,部分间质有炎细胞浸润;药物低剂量干预组与高剂量干预组肾小管管腔几乎完整,少量间质有炎细胞浸润;②与假手术组相比,缺血再灌注组肿瘤坏死因子α,白细胞介素6,白细胞介素18以及TLR2,TLR4 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),COX-2,ICAM-1,iNOS蛋白表达水平也显著升高(P<0.05);骨髓间充质干细胞组上述各因子表达明显低于缺血再灌注组(P<0.05);大黄素低剂量干预组与高剂量干预组的降低程度更为显著,且与大黄素剂量相关;③结果表明,大黄素具有促进骨髓间充质干细胞改善大鼠缺血性再灌注肾损伤的作用。 -
CD133+细胞联合人脐血干细胞在心力衰竭小鼠中的作用
背景:目前常规方法治疗心力衰竭效果不佳。
目的:研究CD133+细胞联合人脐血干细胞在心力衰竭小鼠中的效果,为心力衰竭治疗提供依据。
方法:采集足月妊娠顺产婴儿脐血,并利用淋巴细胞分离液法提取 CD133+细胞和人脐血干细胞。将20只Balb/C裸小鼠随机等分为单个核细胞组和CD133+细胞联合人脐血干细胞组。2组小鼠均建立心力衰竭模型。单个核细胞组经尾注射单个核细胞治疗,CD133+细胞联合人脐血干细胞组经尾注射CD133+细胞联合人脐血干细胞治疗。
结果与结论:①治疗后14 d时:CD133+细胞联合人脐血干细胞组小鼠体质量及肝脏、心脏和肺脏质量显著大于单个核细胞组(P<0.05);②治疗30 d后:CD133+细胞联合人脐血干细胞组小鼠心肌排列整齐,而单个核细胞组小鼠的心肌排列紊乱,CD133+细胞联合人脐血干细胞组小鼠心肌胶原纤维平均面积显著小于单个核细胞组(P <0.05),血清基质金属蛋白酶9浓度显著低于单个核细胞组(P <0.05), Masson 染色结果显示,CD133+细胞联合人脐血干细胞组小鼠蓝色胶原纤维较少,排列相对整齐;单个核细胞组小鼠心内膜出现不同程度胶原纤维增多,排列紊乱;③结果提示:CD133+细胞联合人脐血干细胞治疗小鼠心力衰竭效果理想,具有较高的临床应用价值。 -
自体外周血干细胞局部注射联合腔内介入治疗糖尿病下肢血管病变
背景:研究表明外周血干细胞具有高度分化潜能,可分化成血管内皮细胞,促进血管再生,改善侧支循环,从而达到治疗肢体缺血的目的。
目的:观察糖尿病下肢血管病变患者腔内治疗结合自体外周血干细胞移植的临床效果。
方法:收集2011年3月至2014年12月住院治疗的糖尿病下肢血管病变患者50例,其中25例采取腔内治疗和自体外周血干细胞移植(联合组),另外25例只采取腔内治疗(对照组)。所有患者于治疗后1,6,12个月随访,记录患肢疼痛、冷感等主观评分,测定踝肱指数、经皮氧分压、跛行距离等客观指标。结果与结论:①两组患者治疗后踝肱指数均明显增加,尤其是治疗后1个月时增加显著,治疗后6,12个月有所下降,但与治疗前比较差异均有显著性意义(P <0.05)。治疗后1,6,12个月时两组比较差异无显著性意义(P >0.05);②两组患者治疗后经皮氧分压、跛行距离也明显增加,治疗后1,6,12个月与治疗前比较差异均有显著性意义(P <0.05),治疗后1,6,12个月时联合组经皮氧分压、跛行距离高于对照组,差异有显著性意义(P <0.05);③治疗后12个月内患肢痛感和冷感均有不同程度改善,联合组改善更明显;④外周血干细胞采集过程中出现低钙血症3例,移植后出现发热2例,局部渗血3例,对症治疗后好转;⑤结果表明,糖尿病下肢血管病变患者行腔内治疗结合自体外周血干细胞移植加速患肢侧支循环的建立,从而减轻患肢缺血症状,因此能取得比单独采取腔内治疗更好的临床效果。 -
脐血间充质干细胞移植对心肌细胞凋亡的影响
背景:研究发现,脐血间充质干细胞移植可为减少心肌细胞凋亡、减轻心肌纤维化、改善心脏功能发挥作用。
目的:观察脐血间充质干细胞移植对大鼠心肌细胞凋亡的影响。
方法:①体外实验:将原代培养72 h的正常心肌细胞作为对照组,阿霉素损伤心肌细胞作为损伤组,阿霉素损伤心肌细胞与脐血间充质干细胞共培养作为共培养组,培养48 h采用TUNEL染色评估心肌细胞的凋亡情况;②体内实验:SD大鼠45只,随机分为正常对照组、阿霉素组、脐血间充质干细胞移植组,移植后2周采用Powerlab检查心功能,蛋白质免疫印迹法检测凋亡相关蛋白Bax、Caspase-3表达水平,组织学观察各组心肌病理变化。
结果与结论:①正常对照组的心肌细胞凋亡率较低,损伤组心肌细胞凋亡明显增加,共培养组凋亡率显著降低,各组间比较差异有显著性意义(P<0.05);②与阿霉素组比较,脐血间充质干细胞移植组的心功能指标明显降低,差异有显著性意义(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05);③阿霉素组心肌细胞损伤后Bax、Caspase-3表达水平较高,脐血间充质干细胞移植组Bax、Caspase-3表达水平降低(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05);④与阿霉素组比较,脐血间充质干细胞移植组心肌梗死面积显著减小(P<0.05),但仍高于正常对照组(P<0.05);⑤结果表明,脐血间充质干细胞作用能够抑制阿霉素诱导的大鼠心肌细胞的凋亡,其发挥作用的途径可能与下调Bax、Caspase-3的表达水平有关。 -
经颈静脉移植神经干细胞治疗脑性瘫痪
背景:移植入宿主体内的神经干细胞能够存活、增殖、分化为神经元和/或胶质细胞,从而促进宿主缺失功能的部分恢复。
目的:观察神经干细胞移植对脑性瘫痪大鼠的治疗作用。
方法:将24只大鼠随机分为3组:对照组,模型组和移植组,后两组脑性瘫痪模型建立后1周,移植组大鼠经颈静脉注射1 mL神经干细胞悬液(1×105个),对照组和模型组大鼠经颈静脉注射1 mL生理盐水。移植后3周,测量各组大鼠的趾距、步长和抬高身体摇摆情况,并观察各组大鼠大脑病理组织学变化。
结果与结论:①模型组大鼠的左前掌趾距和步长明显低于右前掌趾距和步长,差异有显著性意义(P <0.05),移植组和对照组大鼠的趾距、步长均明显高于模型组,差异有显著性意义(P<0.05);②模型组抬高身体为不对称摆动,对照组和移植组大鼠为对称摆动;③移植组和对照组大鼠的右侧大脑半球面积/左侧大脑半球面积比值明显高于模型组,差异有显著性意义(P<0.05);④结果表明,经颈静脉移植神经干细胞可明显改善脑性瘫痪大鼠的病理损伤,并可恢复运动神经行为学功能。 -
体外培养骨髓间充质干细胞的增殖活性:脑灌注剂量CT扫描评价
背景:利用骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性脑血管病是目前的研究热点,移植后大多采用CT脑灌注扫描的方式了解缺血区血流改善情况,但CT脑灌注X射线照射可能会影响所移植骨髓间充质干细胞的活性,并影响到治疗效果。
目的:探讨大鼠CT脑灌注扫描剂量对骨髓间充质干细胞活性的影响。
方法:选取第5代SD大鼠骨髓间充质干细胞,随机分为3组,每组6管。从每组6管中随机选择1管不进行照射,其余5管分别进行1-5次 CT 脑灌注扫描。扫描结束之后,连续计数培养10 d的细胞数量,描绘各管细胞生长曲线,流式细胞仪检测各管细胞周期,MTT法检测细胞活性。
结果与结论:连续计数10 d,各管细胞数量经比较差异均无显著性意义(P>0.05)。各管细胞的生长曲线基本重合。各管细胞的不同细胞周期比例和细胞活性差异均无显著性意义(P>0.05)。实验结果表明,常规进行CT脑灌注扫描对骨髓间质干细胞活性无影响。 -
白细胞介素6受体单克隆抗体与骨髓间充质干细胞可减少急性脊髓损伤神经元的凋亡
背景:研究提示白细胞介素6是急性脊髓损伤中导致细胞凋亡的重要因素。
目的:观察白细胞介素6受体单克隆抗体联合骨髓间充质干细胞治疗大鼠急性脊髓损伤的效果。
方法:将30只健康SD大鼠随机分为5组,假手术组、急性脊髓损伤组、白细胞介素6受体单克隆抗体移植组、骨髓间充质干细胞移植组、白细胞介素6受体单克隆抗体+骨髓间充质干细胞联合移植组(简称联合移植组),每组6只。假手术组仅暴露但并不打击脊髓,其余大鼠采用改良Al en’s法制备急性脊髓损伤大鼠模型。术后2 d各治疗组大鼠损伤部位用局部注射法进行治疗。治疗前1 d及治疗后1,3,7,14,28 d分别采用改良BBB评分法及Tarlov评分法,对大鼠后肢进行运动能力测试。治疗28 d各组大鼠取材行Tunel法检测脊髓细胞凋亡情况。
结果与结论:①与假手术组相比,其他各组BBB评分及改良Tarlov评分均显著降低(P <0.05)。②治疗14 d后,白细胞介素6受体单克隆抗体移植组、骨髓间充质干细胞移植组BBB评分及Tarlov评分显著高于急性脊髓损伤组(P <0.05),治疗7 d后,联合移植组BBB评分及改良Tarlov评分显著高于急性脊髓损伤组(P<0.05)。③与骨髓间充质干细胞移植组相比,治疗14 d后联合移植组BBB评分及改良Tarlov评分显著升高(P <0.05)。④与假手术组相比,其他各组细胞凋亡数显著增加(P <0.05);与急性脊髓损伤组相比,各治疗组细胞凋亡数显著减少(P<0.05);与骨髓间充质干细胞移植组相比,联合移植组细胞凋亡数显著减少(P<0.05)。⑤结果表明白细胞介素6受体单克隆抗体联合骨髓间充质干细胞治疗脊髓损伤优于单纯骨髓间充质干细胞治疗。白细胞介素6受体单克隆抗体减少了脊髓损伤引起的细胞凋亡,对于急性脊髓损伤的保护具有积极意义。 -
骨髓间充质干细胞修复系膜增生性肾炎:作用及机制
背景:骨髓间充质干细胞可以向肾脏实质细胞分化,因而可能具有修复肾脏损伤的作用。目的:探讨骨髓间充质干细胞修复系膜增生性肾小球肾炎的效果及作用机制。
方法:30只SD大鼠随机分为3组,每组10只,分别为正常组、模型组以及治疗组。模型组和治疗组尾静脉注射小鼠抗大鼠Thy1.1单克隆抗体制备系膜增生性肾小球肾炎模型,造模后1周,治疗组大鼠经尾静脉注射2×106个骨髓间充质干细胞,其他2组注射等量生理盐水。细胞移植后2周,检测尿蛋白定量、尿素氮、肌酐水平,苏木精-伊红染色观察各组肾组织病理改变,免疫组化检测肾组织转化生长因子β1表达。
结果与结论:①模型组和治疗组的尿蛋白定量、尿素氮、肌酐水平均显著高于正常组(P<0.05),治疗组尿蛋白定量、尿素氮、肌酐水平均显著低于模型组(P<0.05);②模型组大鼠肾小球系膜细胞弥漫性增多伴基质增加,部分肾小球硬化,间质存在炎性细胞浸润;治疗组肾小球增生和系膜增殖程度较模型组明显减轻,炎性细胞浸润现象也明显减轻;③模型组和治疗组转化生长因子β1表达水平显著高于正常组(P<0.05),治疗组转化生长因子β1表达水平显著低于模型组(P<0.05);④结果表明,骨髓间充质干细胞移植可以修复系膜增生性肾炎损伤,其部分机制可能与其抑制肾组织的转化生长因子β1过高表达有关。 -
铁过载诱导产生活性氧导致人骨髓间充质干细胞成骨成脂分化失平衡
背景:新研究显示,铁过载作为一种新的病因参与到了老年骨质疏松症的发病过程。但是铁过载导致老年骨质疏松症发病的机制仍不明确。骨髓间充质干细胞成骨/成脂分化平衡的调节在正常人体骨量稳定维持过程中扮演重要的角色。骨髓间充质干细胞成骨/成脂分化失调能够导致老年骨质疏松症的发生。铁对骨髓间充质干细胞成骨/成脂分化的影响仍不清楚。因此,研究铁离子对骨髓间充质干细胞成骨/成脂分化的影响,可以进一步明确铁过载在老年骨质疏松症发病过程中的作用。
目的:探讨铁过载导致人骨髓间充质干细胞成骨成脂分化失衡的机制,明确其在骨质疏松症发病过程中所起的作用。
方法:采用密度梯度离心法分离培养人骨髓间充质干细胞,根据不同的处理实验分为,正常组:不加特殊处理,采用等量生理盐水进行干预;枸橼酸亚铁组:采用不同浓度(10,20,30μmol/L)的枸橼酸亚铁培养人骨髓间充质干细胞;抗氧化剂干预枸橼酸亚铁组:采用枸橼酸亚铁(30μmol/L)处理人骨髓间充质干细胞后,同时采用N-乙酰胺半胱氨酸(0.5 mmol/L)进行干预。
结果与结论:①铁过载对人骨髓间充质干细胞增殖没有明显的抑制作用;②铁过载可促进人骨髓间充质干细胞内活性氧的产生;③铁过载抑制人骨髓间充质干细胞内c-Maf、Runx2的表达,促进人骨髓间充质干细胞内过氧化物酶体增殖物激活受体γ的表达,抑制人骨髓间充质干细胞生成钙结节、促进人骨髓间充质干细胞内脂滴的生成;④抗氧化剂抑制活性氧后,能够上调c-Maf的表达以及部分逆转铁过载对人骨髓间充质干细胞成骨/成脂分化平衡的干扰效果;⑤结果提示,铁过载诱导产生活性氧通过抑制c-Maf的表达,从而导致人骨髓间充质干细胞成骨成脂分化失衡;抗氧化剂能部分逆转铁过载导致的抑制效应。 -
低氧预处理诱导骨髓间充质干细胞Pim-1激酶高表达抑制细胞凋亡
背景:骨髓间充质干细胞移植入缺血心肌后存活率低,而低氧有可能增强骨髓间充质干细胞的增殖,促进其存活。
目的:探讨Pim-1激酶是否介导缺氧预处理对骨髓间充质干细胞的保护作用及其机制。
方法:设置不同低氧处理时间(0,6,12,24 h)处理骨髓间充质干细胞,RT-qPCR及Western blot检测 Pim-1及凋亡相关基因的表达,确定佳低氧处理时间为12 h。将骨髓间充质干细胞分为3组:正常对照组、低氧组、低氧+Pim-1抑制剂组,分别进行Transwel 迁移实验、细胞凋亡流式检测、线粒体膜电位检测评估各组骨髓间充质干细胞的迁移能力及抗凋亡能力;建立心肌梗死模型,1周后按分组在大鼠梗死心肌周围多点注射骨髓间充质干细胞,2周后制备心肌冰冻切片行DiI染色统计骨髓间充质干细胞存活数量;心肌梗死模型建立前后、细胞移植4周行超声心动图检查评估大鼠心脏功能。
结果与结论:①低氧处理12 h时,骨髓间充质干细胞的 Pim-1、p-Akt及Bcl-2表达量明显升高,Bax、Caspase-3表达量明显降低。②低氧组骨髓间充质干细胞抗凋亡能力明显增强,与正常对照组之间差异有显著性意义(P<0.01)。③低氧组骨髓间充质干细胞移植1周后存活率明显提高(P<0.001);移植4周后,大鼠心功能明显改善(P<0.05)。上述获益可被Pim-1抑制剂抑制。④结果证实,低氧预处理骨髓间充质干细胞通过激活Akt及上调Pim-1表达抑制细胞凋亡,改善骨髓间充质干细胞对缺血性心脏病的治疗效果。 -
人端粒酶反转录酶基因电转染优化培养大鼠前软骨干细胞
背景:将人端粒酶反转录酶转染至目的细胞中,可以提高其端粒酶活性,保持端粒的长度,在调控增殖和分化方面有重要作用。
目的:探讨人端粒酶反转录酶基因转染对体外培养大鼠前软骨干细胞端粒酶活性及生物学特性的影响。
方法:体外培养Wistar大鼠前软骨干细胞,以反转录病毒PLXSN 为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染,同时设置对照组、阴性对照序列组、转染组。用TRAP-ELISA法检测前软骨干细胞端粒酶活性, RT-PCR、Western blot检测前软骨干细胞人端粒酶反转录酶基因和蛋白的表达,CCK-8法、细胞生长曲线检测细胞生长增殖情况,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。
结果与结论:①人端粒酶反转录酶基因转染前软骨干细胞48 h,端粒酶活性明显升高;②与对照组、阴性对照序列组相比,转染组人端粒酶反转录酶基因和蛋白水平表达明显,细胞的生长速度明显增快, G0/G1期细胞数减少,S期细胞数增多,差异有显著性意义(P<0.05);③结果表明,以反转录病毒PLXSN为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染使前软骨干细胞端粒酶活性明显升高,能够促进大鼠前软骨干细胞增殖。 -
在5-杂氮胞苷诱导下人脐带间充质干细胞生物活性特性及向心肌样细胞的分化
背景:人脐带间充质干细胞属于一类特殊的干细胞,该类细胞数量有限,且分离、纯化难度系数较大,并且临床上对于该类细胞生物学特性缺乏认识。
目的:研究人脐带间充质干细胞的生物活性特性,探讨人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的作用。方法:无菌采集剖宫产新生儿脐带,在胶原酶Ⅱ下进行消化,采用组织块培养法分离人间充质干细胞。利用免疫细胞化学染色检测细胞表面标志,观察细胞形态学特性,并采用MTT法检测细胞增殖绘制其生长曲线,将获得的人脐带间充质干细胞进行培养,待细胞生长到70%-80%融合时,采用10μmol/L 5-杂氮胞苷进行24 h诱导。
结果与结论:①组织块贴壁法培养1周后:可见人脐带间充质干细胞,去组织块加入培养液培养后,人脐带间充质干细胞集落生长;②第3代及第10代人脐带间充质干细胞接种24 h内:细胞为潜伏期,此后呈对数生长,倍增时间为30 h;③免疫细胞化学染色结果显示:第3代细胞90%以上表达基质细胞相关表面标志物CD44、CD29等,不表达造血及内皮细胞标志物CD28、CD31;④人脐带间充质干细胞诱导3周后:细胞突起消失,出现不规则形状,诱导4周后呈现圆形,且表达心肌特异性免疫标志物。⑤结果提示人脐带间充质干细胞具备较强的增殖能力:分离的细胞具备充质干细胞的基本生物学特性,能够在5-杂氮胞苷诱导下分化为心肌样细胞。 -
人早孕蜕膜组织子宫内膜间质干细胞向子宫内膜上皮细胞的分化
背景:蜕膜组织是重要的子宫内膜干细胞来源之一,从蜕膜组织中可分离出间充质干细胞。通过对其进行一定的诱导,可分化为不同的细胞类型。
目的:从人早孕蜕膜组织中分离得到子宫内膜间质干细胞,对其进行诱导分化,观察其向子宫内膜上皮细胞分化的情况。
方法:获得人早孕蜕膜组织,进行子宫内膜间质干细胞分离培养和鉴定。对子宫内膜间质干细胞进行定向分化诱,进行实验分组,分别为实验组(子宫内膜条件培养液)和对照组(含胎牛血清的正常培养基),利用免疫荧光法检测角蛋白表达情况。并进行Western bolt检测,检测实验组与对照组细胞的角蛋白相对表达量。
结果与结论:①从人早孕蜕膜组织中成功分离培养获得子宫内膜间质干细胞,细胞体外生长曲线呈“S”形,接种后1-48 h,曲线平缓上升,细胞处于适应期。接种48 h之后,曲线陡峭上升,细胞增殖速度加快,进入对数期;接种60 h之后,细胞生长速度下降,曲线平稳上升;②经流式细胞仪检测,子宫内膜间质干细胞可以表达CD73、CD90,不表达CD34、CD45、细胞角蛋白;③经免疫荧光检测,角蛋白表达方面,对照组不表达,实验组大部分细胞均呈阳性表达;④经Western bolt检测,实验组细胞的角蛋白相对表达量显著高于对照组(P<0.05);⑤实验结果表明,从人早孕蜕膜组织中可以分离获得子宫内膜间质干细胞,通过对细胞进行定向诱导,可以使其向子宫内膜上皮细胞发生分化。 -
养精胶囊提取液对精原干细胞增殖的影响
背景:临床研究显示补肾填精中药能够促进精原干细胞的增殖和分化。目的:验证养精胶囊提取液对精原干细胞增殖的影响。
方法:取雄性小鼠睾丸,分离精原干细胞,用无血清培养液同步化24 h后,加入10,50,100 mg/L养精胶囊提取液24 h,观察对精原干细胞活性、增殖及细胞周期变化。
结果与结论:①与对照组相比,养精胶囊提取液干预的细胞数量增加、活力增强、S期细胞比例增加, BrdU标记的精原干细胞的数量增加,其中以50 mg/L养精胶囊提取液的效果为显著;②提示养精胶养精胶囊提取液能促进精原干细胞的增殖和促进精原干细胞活力的增加。 -
胃癌干细胞在胃癌侵袭、转移中及血管形成中的作用和机制
背景:肿瘤干细胞及其分化的血管细胞对于化疗、分子靶向治疗并不敏感,虽然能够减少肿瘤总体的血供,却助长了肿瘤的浸入及转移,成为治疗失败的主要机制。
目的:分析胃癌干细胞在胃癌侵袭、转移中的机制及其在血管形成中的作用。
方法:取20株胃癌肿瘤干细胞CSC-G和普通胃癌细胞SGC7901细胞,普通癌细胞培养条件为10%的PBS;肿瘤干细胞CSC-G培养条件为:DMEM/F12(1∶1)、B27(2%)、表皮生长因子(20μg/L)。对2种细胞进行球形克隆形成试验、平板克隆试验以及Transwel 侵袭性实验,观察胃癌肿瘤干细胞的侵袭性;测定CD44、E-cadherin中mRNA水平及蛋白表达水平,观察细胞的转移能力;利用细胞划痕试验、Transwel 迁移实验和成环实验观察细胞的血管形成能力。
结果与结论:①普通癌细胞均贴壁生长,肿瘤干细胞CSC-G为悬浮生长,生长后显微镜下显示为梭形间质形态;②球形克隆形成试验结果:普通癌细胞瘤球数量显著少于肿瘤干细胞CSC-G(P<0.05);③平克隆试验结果:胃癌肿瘤干细胞瘤球数量显著多余普通胃癌细胞(P<0.05);④转移性试验结果:胃癌肿瘤干细胞穿过基底膜细胞数显著多于普通胃癌(P <0.05);⑤划痕试验结果:肿瘤干细胞 CSC-G迁移距离、成环试验中成环数量显著多于普通胃癌细胞(P<0.05)。⑥结果提示:胃癌肿瘤干细胞侵袭能力高于普通胃癌细胞,且胃癌干细胞迁移能力以及血管成形能力较强,它可以通过形成血管等途径来进一步促进胃癌的发生与发展。 -
骨髓间充质干细胞对前列腺癌细胞生物学行为的影响
背景:研究表明,骨髓间充质干细胞与肿瘤的发生和发展具有密切关系,不仅表现为对肿瘤有明显的募集作用,还表现在干预肿瘤细胞的生物学行为。
目的:探讨骨髓间充质干细胞对前列腺癌Du145细胞生物学行为的影响。
方法:采集健康成人骨髓间充质干细胞,实验组将前列腺癌Du145细胞和骨髓间充质干细胞分别接种于Transwel 小室的上下两室进行共培养,阳性对照组为人真皮成纤维细胞HDF-a细胞与人前列腺癌Du145细胞共培养,阴性对照组为野生型前列腺癌Du145细胞单独培养。培养3 d后,流式细胞仪检测前列腺癌Du145细胞的细胞周期,软琼脂克隆形成实验检测细胞增殖活性,结晶紫染色观察Du145细胞迁移能力。
结果与结论:①与阳性对照组相比,实验组处于 G2/M+S 期的细胞比例、透过滤膜数量和克隆形成数明显减少;②结果表明,骨髓间充质干细胞通过缩短前列腺癌Du145细胞G2/M+S期,抑制前列腺癌Du145细胞的增殖和侵袭能力,为前列腺癌的治疗提供新的思路和方法。 -
胃癌微环境对大鼠骨髓间充质干细胞形态、生长及CD34、CD44表达的影响
背景:临床胃癌组织及裸鼠体内致瘤组织分离得到的胃癌间质干细胞(GC-MSCs),其生物学特性与骨髓间充质干细胞相似,并证明是肿瘤微环境的重要组成部分,可促进肿瘤的生长,作者推测骨髓间充质干细胞在胃癌微环境中生物学特性可能发生变化。
目的:观察胃癌微环境对骨髓间充质干细胞形态、生长及CD34、CD44表达的影响。
方法:设立骨髓间充质干细胞单独常规培养为对照组,实验组采用 transwel 小室将人胃癌 BCG-823细胞与大鼠骨髓间充质干细胞非接触共培养建立胃癌微环境,倒置相差显微镜观察骨髓间充质干细胞形态的变化、四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)观察骨髓间充质干细胞的增殖率、流式细胞术(FCM)检测骨髓间充质干细胞周期及表面抗原CD34、CD44的表达。
结果与结论:①实验组骨髓间充质干细胞排列紊乱,不规则,细胞间连接疏松,细胞变细、变长,胞核变小,呈团生长,与人胃BGC-823癌细胞形态有相似之处;②G1期细胞比例明显降低,S期细胞比例明显增加(P<0.01)、G2/M期细胞比率显著增加(P<0.05);③实验组骨髓间充质干细胞的CD44阳性表达率显著降低,CD34阳性表达率显著降升高(P<0.01);④结果表明,将人胃癌BCG-823细胞与大鼠骨髓间充质干细胞非接触共培养模拟胃癌微环境对骨髓间充质干细胞形态、生长增殖及CD34、CD44表达有显著影响,有向胃癌细胞恶性转化的趋势。 -
细胞因子诱导杀伤细胞分泌因子影响人肝癌干细胞的凋亡
背景:采用自体免疫细胞进行免疫治疗已发展为治疗恶性肿瘤的主要辅助手段之一,但其作用机制尚未阐明。
目的:探讨细胞因子诱导的杀伤细胞分泌因子对人肝癌干细胞凋亡的影响。
方法:采用无血清悬浮细胞培养法富集获得人肝癌干细胞;以γ-干扰素、CD3单克隆抗体和重组人白细胞介素2诱导肝癌患者外周血单个核细胞产生细胞因子诱导的杀伤细胞。将第1代肝癌干细胞分为2组,对照组单纯进行肝癌干细胞培养,实验组将细胞因子诱导的杀伤细胞与肝癌干细胞共培养,培养48 h 后用流式细胞仪检测肝癌干细胞的凋亡情况,RT-PCR 和 Western blot 检测凋亡相关基因caspase-3 mRNA与蛋白的表达。
结果与结论:①对照组的肝癌干细胞凋亡率显著低于细胞因子诱导的杀伤细胞组(P<0.05)。②实验组的促凋亡相关基因 caspase-3 mRNA和蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。③实验结果表明,细胞因子诱导的杀伤细胞会明显促进肝癌干细胞的凋亡,并显著上调肝癌干细胞促凋亡相关基因 caspase-3 mRNA和蛋白的表达水平。