《中国组织工程研究》杂志2014年稿约

维甲酸在轴突再生过程中的作用与机制

背景：维甲酸信号通路在神经系统形成、神经元的特化以及轴突生长过程中极为重要，近年的研究结果显示维甲酸在轴突再生过程中具有重要作用，但是却鲜有关于其确切作用分子机制的研究报道。
　　目的：对近年来维甲酸信号通路在轴突再生过程中的作用机制进行总结分析。
　　方法：以“维甲酸，中枢神经系统，神经损伤，轴突再生，作用机制”为中文捡索词，以“Retinoic acid, the central nervous system, nerve damage, axon regeneration, signaling pathway，mechanism”为英文检索词，检索维普和中国知网(CNKI)期刊全文数据库、PubMed网络数据库、BioMed Centeral 、Springer 、The Free Medical Journals、EBSCO和外文生物医学期刊全文数据库(Foreign Journals Integration System)2000年1月至2013年12月有关维甲酸在轴突再生中作用机制的研究报道，排除重复性研究和不典型报道。
　　结果与结论：急性中枢神经系统损伤后，机体轴突再生和功能恢复的能力极为有限。为了保持机体的某些特有功能，神经元轴突必须再生并再支配它的作用靶点，以实现机体结构和功能的恢复。中枢神经系统损伤后，维甲酸信号通路通过表达转录因子RAβ2受体，可诱导轴突的再生；同时在背根神经节神经元中，经慢病毒转染表达RARβ2后可以引起胞内cAMP水平升高，从而促进神经轴突生长；在脊髓损伤后以及体外轴突生长抑制环境中，RA-RARβ途径可以直接抑制中枢神经再生抑制因子Nogo受体(NgR)复合体-Lingo-1的转录，从而促进轴突的再生。维甲酸信号通路正是通过以上一系列的分子机制在轴突再生过程中其重要的作用。

工程组织及器官的血管化：研究现状与应用进程

背景：构建有效的血管系统对于三维结构组织内细胞的存活和功能表达均具有决定性作用。因此，寻找一种合适的血管化策略已成为组织工程领域研究的热点和亟待解决的问题。
　　目的：总结并讨论组织工程血管化的理论基础及研究进展。
　　方法：检索 PubMed 数据库相关文章，检索时间为2003至2013年，检索词为“tissue engineering, vascularization, endothelial cel , scaffold”，并限定文章语言种类为英语，再从中筛选出与主题相关的部分文献，进行总结讨论。
　　结果与结论：初检得到124篇文章，按主题相关性对文献进一步筛选，终纳入41篇文章。血管化一直是组织工程领域关注的焦点和难点，国内外研究过多种血管化的策略，如复合生长因子、细胞共培养、生物反应器动态培养、人工支架或脱细胞支架等，但尚未公认一种有效的血管化策略实现与受体血管的功能性连接和体内细胞的长期存活。应用诱导多能干细胞与其他干细胞共培养，并通过添加生长因子、优化培养条件等方法在体内定向诱导分化，有望成为实现组织工程器官血管化的突破点。

泥浴疗法治疗膝骨关节炎疼痛的荟萃分析

背景：泥浴疗法治疗膝骨关节炎一直受到研究者的重视，但其有效性在以往的各项研究中尚存在争议。
　　目的：分析研究泥浴疗法治疗膝骨关节炎疼痛的有效性。
　　方法：计算机检索 Pubmed/Medline 数据库以及手工检索相关文献的参考文献。所有检索截止至2013年3月9日。收集国内外公开发表的有关泥浴疗法治疗膝骨关节炎的随机对照试验和前瞻性对照试验。
　　结果与结论：纳入Meta分析的研究共7个，累计研究对象410例。治疗组和对照组的目测类比疼痛评分(标准化标准差[SMD]-0.74)和 WOMAC 疼痛评分(标准化标准差[SMD]-0.30)组间差异有显著性意义。可见泥浴疗法可改善膝骨关节炎疼痛的症状。但此结论有待更多高质量的随机对照试验进一步证实。

骨形态发生蛋白2诱导成骨分化与长链非编码RNA AK007000的影响

背景：长链非编码 RNA 调控一系列生理过程，被认为在发育、分化和代谢的基因调控中发挥重要的作用。MC3T3-E1、C2C12和 C3H10T1/2细胞可向骨细胞、肌细胞等多个方向分化，用于肌肉骨骼等运动系统相关疾病的研究。
　　目的：观察长链非编码RNA在骨形态发生蛋白2诱导成骨分化中的作用。
　　方法：对MC3T3-E1、C2C12和C3H10T1/2细胞在骨形态发生蛋白2诱导下，成骨分化过程中的长链非编码RNA表达变化进行芯片分析，找到在3株细胞中同时变化的长链非编码RNA，siRNA干扰方法观察长链非编码RNA对骨形态发生蛋白2诱导成骨分化的影响，采用Real-Time PCR与碱性磷酸酶染色检测成骨相关指标。
　　结果与结论：骨形态发生蛋白2诱导MC3T3-E1、C2C12和C3H10T1/2成骨分化过程中，相应成骨指标增高，成肌指标肌细胞生成素降低。筛选出骨形态发生蛋白2诱导成骨分化过程中出发挥作用的长链非编码RNA AK007000。AK007000被干扰后成骨分化指标碱性磷酸酶、骨钙素、RUNX2、SP7表达下降，肌细胞生成素表达上升。因此，AK007000可能具有促进成骨抑制成肌作用。

成骨细胞增殖分化中的地塞米松和鹿瓜多肽：抑制还是促增殖分化？

背景：目前因地塞米松注射液广泛及长期使用引起的骨质疏松症发病率逐渐升高，但临床尚没有确切的治疗方法，鹿瓜多肽注射液为常用的促进骨折愈合、提高骨密度的药物。
　　目的：观察鹿瓜多肽注射液在高浓度地塞米松条件下对成骨细胞增殖与分化的影响。
　　方法：将大鼠成骨细胞随机分成3组，地塞米松+鹿瓜多肽注射液组添加1×10-7 mol/L地塞米松注射液、8 mg/L鹿瓜多肽注射液和终浓度为1g/L的二甲基亚砜；地塞米松组添加与地塞米松+鹿瓜多肽注射液组等量的二甲基亚砜及1×10-7 mol/L的地塞米松注射液；对照组只添加与地塞米松+鹿瓜多肽注射液组等量的二甲基亚砜。96 h后以RT-PCR分析骨钙素的表达，21 d后茜素红染色对比观察钙结节的表达。
　　结果与结论：地塞米松+鹿瓜多肽注射液组与对照组骨钙素的mRNA表达量均高于地塞米松组(P<0.01)，地塞米松+鹿瓜多肽注射液组与对照组钙结节表达量也高于地塞米松组(P<0.01)，而地塞米松+鹿瓜多肽注射液组与对照组比较差异无显著性意义(P>0.05)。提示鹿瓜多肽注射液可对抗高浓度地塞米松对成骨细胞增殖和分化的抑制作用。

辛伐他汀对成骨细胞增殖分化及连接蛋白43表达的调控

背景：辛伐他汀对成骨细胞增殖分化的影响以及分子机制尚不完全明了，尤其对连接蛋白43的作用知之甚少。
　　目的：探讨辛伐他汀对成骨细胞增殖分化及成骨基因和连接蛋白43表达的调控作用。
　　方法：选取新生SD大鼠，采用颅盖骨消化法培养成骨细胞。采用不同浓度辛伐他汀(0.0625，0.125，0.25，0.5和1.0μmol/L)处理成骨细胞，MTT检测辛伐他汀对成骨细胞增殖作用的影响；碱性磷酸酶活性检测辛伐他汀对成骨细胞分化作用的影响；实时定量RT-PCR和免疫印迹检测细胞成骨基因和间隙连接蛋白43 mRNA和蛋白的表达。
　　结果与结论：细胞培养第3天，辛伐他汀组各浓度组MTT吸光度值比较差异无显著性意义(P >0.05)；但是培养第4天和第5天，辛伐他汀各浓度组MTT吸光度值低于对照组(P <0.05)。通过不同浓度辛伐他汀处理成骨细胞后，与对照组比较，成骨细胞碱性磷酸酶活性增加(P<0.05)，且0.25μmol/L 浓度组作用对成骨细胞碱性磷酸酶活性的影响为显著。采用0.25μmol/L辛伐他汀处理成骨细胞后，辛伐他汀组与对照组比较，成骨细胞骨钙蛋白、碱性磷酸酶、I型胶原和连接蛋白43 mRNA和蛋白表达均增加(P <0.05)。提示辛伐他汀可能通过上调成骨基因和间隙连接蛋白43 mRNA 和蛋白的表达来抑制成骨细胞增殖和促进其分化，这为他汀类药物治疗骨质疏松症提供新的干预靶点。

破骨细胞活化过程中免疫内酯LY267108对核因子κB的抑制

背景：目前尚无理想药物可用于人工关节无菌性松动的防治。研究表明红霉素对假体周围骨溶解具有较强的抑制作用，然而其抗菌活性却限制了其在人工关节松动防治中的应用。免疫内酯 LY267108是一种新型红霉素衍生物，其消除了抗菌活性，同时保留了抗炎活性。
　　目的：评价LY267108在破骨细胞活化过程中对核因子kB的抑制作用。
　　方法：将RANKL、巨噬细胞-集落刺激因子加入小鼠RAW264.7细胞系建立破骨细胞诱导模型，同时分别加入不同浓度的阿仑膦酸钠、红霉素及LY267108共培养48 h，分别采用电泳迁移率分析法及蛋白免疫印迹法测定胞核内核因子κB活性和胞浆内κB抑制蛋白α含量。
　　结果与结论：LY267108对核因子κB具有较强的抑制活性，10 mg/L LY267108、25 mg/L红霉素与10 mg/L阿仑膦酸钠对核因子κB具有相似的抑制作用，且显著强于10 mg/L红霉素，而25 mg/L LY267108具有强的抑制作用。10 mg/L LY267108、25 mg/L红霉素与10 mg/L阿仑膦酸钠组中胞浆内κB抑制蛋白α水平差异无显著性意义，但显著高于10 mg/L红霉素组，而25 mg/L LY267108组胞浆内κB抑制蛋白α水平高。提示免疫内酯LY267108在破骨细胞活化过程中，对核因子kB具有较红霉素更强的抑制作用，且安全性高于阿仑膦酸钠。同时 LY267108无抗菌活性的特性，使其成为防治人工关节无菌性松动的潜在理想药物。而LY267108对κB抑制蛋白α降解的抑制作用，可能是其抑制核因子κB活化的机制之一。

跑步锻炼大鼠缺损股骨干内的骨质生长

背景：研究已经证实，力学刺激能够促进骨折的愈合。但是，跑步锻炼所产生的力学刺激能否增加骨材料的骨传导性和促进骨缺损的愈合尚不清楚。
　　目的：观察跑步锻炼所产生的间接力学刺激对骨缺损愈合和骨材料成骨性能的影响。
　　方法：在12周龄SD大鼠左股骨远端制作一个直径3 mm、高3 mm的缺损，然后在缺损内塞入同等大小的硫酸钙支架材料。实验组于术后1周开始以10 m/min，45 min/d，5 d/周的策略进行跑步锻炼，持续3周；对照组不给予跑步锻炼。
　　结果与结论：通过micro-CT分析得到，术后1周时，实验组和对照组的骨缺损内已经有少量的新骨形成。在2，3，4周时，实验组骨缺损内新骨生成量明显高于对照组，差异有显著性意义(P<0.05)。在4周时，组织学切片结果也说明实验组新骨生成情况明显优于对照组。另外，给予跑步锻炼之后，实验组骨缺损内生成的新骨骨密度高于对照组，但差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明，适度的跑步锻炼确实能够增加骨材料的成骨性能和加速骨缺损的愈合。

正常与退变髓核细胞形态学及Ⅱ型胶原蛋白的定量分析

背景：椎间盘退变导致椎间隙狭窄的主要变化是髓核细胞表达软骨特异性基因产物蛋白聚糖和Ⅱ型胶原的减少。
　　目的：对成人的正常与退变椎间盘髓核细胞Ⅱ型胶原蛋白免疫荧光染色及番红O染色进行定量观察比较。
　　方法：取成人脊柱侧弯患者与椎间盘突出症患者自愿者术中取出的废弃髓核组织各3例，经培养后每个患者各测量26个细胞，正常组和退变组分别测量78个细胞。对正常与退变椎间盘髓核细胞进行番红“O”染色并行灰度及测定细胞内Ⅱ型胶原蛋白行免疫荧光染色定量测定。
　　结果与结论：免疫荧光染色显示：退变椎间盘髓核细胞仅轻度染色，染色模糊，其呈类圆形，纺锤形，梭形及不规则形，其内仅有极少量荧光颗粒；Ⅱ型胶原表达较正常髓核细胞降低显著(P<0.05)。番红O染色显示：退变的髓核细胞肿胀，细胞核肿胀染色略淡，细胞突起延长，胞浆染色不匀伴有空泡，部分细胞崩解，细胞分布零散，混乱，可见成片坏死区。与正常髓核细胞图像灰度值相比差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明退变的椎间盘髓核细胞减少、部分凋亡，其细胞内Ⅱ型胶原蛋白含量较正常髓核细胞显著减少。

构建人端粒酶反转录酶基因腺相关病毒2载体在人髓核细胞的表达

背景：动物研究显示，自体髓核细胞移植能有效修复椎间盘退变。然而髓核细胞体外增殖能力差，这就限制了其作为种子细胞在椎间盘退变性疾病治疗中的研究及应用。
　　目的：构建包含外源性人端粒酶反转录酶基因的腺相关病毒2载体，观察其转染人髓核细胞后人端粒酶反转录酶基因的表达。
　　方法：构建pSNAV2.0-pRSV-hTERT质粒并鉴定，采用AAVMaxTM包装系统进行重组腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶载体的构建，以 PCR 及酶切方法验证构建的质粒，构建成功后扩增，并纯化。利用腺相关病毒2-增强型绿色荧光蛋白载体转染第1代人髓核细胞，测定佳感染复数。参照此感染复数值，确定腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶对人髓核细胞转染的相关感染复数；对照组采用不含外源性人端粒酶反转录酶基因的腺相关病毒2进行转染。转染后1，2，4周分别采用RT-PCR对人端粒酶反转录酶基因mRNA水平进行半定量检测。
　　结果与结论：实验成功构建了腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶载体；并获得了滴度达2×1011 v·g/mL的腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶载体。测得腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶载体对人髓核细胞的佳感染复数为5×104 v·g/cel。在以1×104，5×104，1×105 v·g/cel 转染人髓核后，均可检测到人端粒酶反转录酶基因mRNA的高量表达。采用RT-PCR半定量检测方法，发现以转染后2周时人端粒酶反转录酶 mRNA表达量相对高(P <0.05)，4周时仍可见人端粒酶反转录酶基因mRNA的稳定表达。而对照组无论在何时间点均未能检测到人端粒酶反转录酶mRNA的表达。提示利用腺相关病毒2可以成功构建包含外源性人端粒酶反转录酶基因的病毒载体，腺相关病毒2-人端粒酶反转录酶能有效转染人髓核细胞并稳定表达人端粒酶反转录酶基因mRNA，此结果可能为增强髓核细胞性能提供新的策略。

β-七叶皂甙钠抑制损伤脊髓细胞胶质纤维酸性蛋白的表达

背景：研究证实脊髓损伤后早期应用甲基强的松龙冲击治疗可以减轻脊髓损伤的病理程度，但是近20年未再有突破性进展。
　　目的：观察β-七叶皂甙钠对脊髓损伤大鼠脊髓神经细胞坏死及胶质纤维酸性蛋白抗体表达的影响。
　　方法：采用改良Al en撞击方法建立脊髓损伤大鼠模型，将建模成功的180只SD大鼠按照随机数字表法分成3组，每组60只，造模后即刻给药，β-七叶皂甙钠组腹腔注射5 mg/kgβ-七叶皂甙钠，甲基强的松龙组腹腔注射100 mg/kg甲基强的松龙，对照组腹腔注射等体积生理盐水。每天给药1次，于治疗后8，24，96 h，治疗后7，14 d 5个时间节点处死实验动物并取损伤段脊髓进行苏木精-伊红染色及免疫组化染色观察脊髓组织坏死神经细胞数及胶质纤维酸性蛋白抗体表达情况。
　　结果与结论：各组均于治疗后8 h出现坏死细胞且7 d达高峰，14 d时水肿减轻但坏死细胞并未减少，但β-七叶皂甙钠及甲基强的松龙两组同一时间点上坏死细胞数目均明显少于对照组(P<0.05)；各组胶质纤维酸性蛋白吸光度均随着时间延长而增加，β-七叶皂甙钠组与对照组在96 h内增加快速，而甲基强的松龙组缓慢均匀增加，24 h以内β-七叶皂甙钠组与对照组之间无明显差别，但均低于甲基强的松龙组(P<0.05)，96 h后β-七叶皂甙钠及甲基强的松龙两组均明显低于对照组(P<0.05)，7 d后各组均开始缓慢下降。结果表明β-七叶皂甙钠对脊髓损伤大鼠脊髓细胞具有明显保护作用，可通过减少胶质纤维酸性蛋白的表达促进神经功能恢复，在用药2周时间内的效果与甲基强的松龙相似。

慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染的人脐静脉内皮细胞

背景：人脐静脉内皮细胞转染慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白方便后期示踪该细胞，掌握转染的佳感染复数(MOI)和产生较强荧光强度的时间，可为后期观察人脐静脉内皮细胞在动物模型体内的示踪奠定基础。
　　目的：观察慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白在人脐静脉内皮细胞中的表达，找到稳定标记人脐静脉内皮细胞的方法。
　　方法：采用胶原酶灌注消化分离人脐静脉内皮细胞，将其置于含有体积分数20%胎牛血清、内皮细胞生长因子的培养基内培养，倒置显微镜观察内皮细胞生长情况，消化离心重悬后进行计数，平均分成4组，每组细胞数5.0×105个，接种于24孔培养皿，空白组加入10μL的DMEM无血清培养基，剩余3组加入慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白进行转染，MOI分别为2，3，4，每组3个皿。
　　结果与结论：分离的人脐静脉内皮细胞在体外培养5-7d可长成单层，光镜下胞体为单层鹅卵石状排列，第Ⅷ因子相关抗原的检测为阳性。转染后24 h可见绿色荧光，72 h荧光达到强，细胞转染率与MOI值呈线性增长关系，至21 d 时仍可见绿色荧光。转染后0，7，14，21 d，MOI=3组的人脐静脉内皮细胞数量均与空白组差异无显著性意义，表明转染后细胞增殖能力不受慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白影响。提示慢病毒携带增强型绿色荧光蛋白转染人脐静脉内皮细胞效率高，绿色荧光蛋白基因可持续表达21 d，且标记后不影响人脐静脉内皮细胞的增殖活性。

大鼠来源滑膜间充质干细胞的成软骨分化

背景：相比其他组织来源的间充质干细胞，滑膜间充质干细胞有着较强的成软骨特性和克隆能力，因此将是软骨组织工程中有前景的种子细胞之一。
　　目的：培养及体外扩增 SD 大鼠滑膜间充质干细胞，鉴定其多向分化潜能及在添加生长因子后三维立体培养条件下的成软骨能力。
　　方法：无菌条件下获取SD大鼠滑膜组织，Ⅰ型胶原酶消化法分离大鼠滑膜间充质干细胞。体外扩增、培养，取第3代滑膜间充质干细胞进行吉姆萨、生长曲线测定、成脂诱导、成骨诱导和三维条件下成软骨诱导，成软骨诱导21 d后通过甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原免疫组化染色及RT-PCR对成软骨诱导后产物进行检测。
　　结果与结论：获取的大鼠滑膜细胞具有间充质干细胞的特性，滑膜间充质干细胞在体外培养呈成纤维样形态，并维持着多向分化的能力。使用生长因子诱导软骨细胞21 d后，可见软骨样组织，蛋白聚糖和Ⅱ型胶原可以在甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化染色后被检测到。RT-PCR 检测结果显示软骨诱导分化后细胞中Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA呈阳性表达。提示大鼠来源的滑膜间充质干细胞具有成软骨能力。

快速成型钛板结合自体骨移植修复犬下颌骨缺损

背景：近年来，快速成型技术被迅速的应用于医学重建领域，利用快速成型技术可为组织缺损患者制作个体化的植入物，可达到空间尺寸上的精确修复。
　　目的：利用快速成型技术制作个体化钛板，结合自体松质骨移植，修复犬下颌骨节段性缺损。
　　方法：9只杂种犬行螺旋CT扫描获取头颅骨骼数据，建立数字3D模型，在模型上模拟右侧下颌骨体部切除术，并制作个体化板状修复体，经快速成型加工制造，获得个体化的钛板。然后行动物实验，手术制造右侧下颌骨体部4 cm长节段性缺损，同期手术切取自体髂骨块固定于快速成型钛板的舌侧，修复下颌骨缺损。采用核医学、力学、影像学和组织学等方法评估骨移植后的转归。
　　结果与结论：应用快速成型支架重建了左右对称的下颌骨形态，自体髂骨移植后逐渐皮质化，植骨和钛板之间形成纤维结缔组织间隔层。在下颌骨缺损修复中，应用快速成型钛板能够达到形态和功能兼顾的效果。

人脱落乳牙干细胞骨向分化相关分子Runx2的动态表达

背景：Runx2被认为是成骨基因表达的主要调节因子，是一种向成骨细胞分化的不可或缺的转移因子，在成骨细胞发育、分化、调控、骨钙化形成及骨修复过程中起着极其重要的作用。
　　目的：观察人脱落乳牙干细胞生物学特征，探讨乳牙干细胞骨向分化潜能，以及不同时间点成骨相关转录因子Runx2的动态表达规律。
　　方法：体外分离、培养人脱落乳牙干细胞。流式细胞仪检测乳牙干细胞表面标志。体外脂向诱导分化4周后进行油红O染色，检测脂滴形成情况；矿化诱导21 d进行茜素红染色，检测矿化结节形成情况。于成骨诱导的不同时间点，用RT-PCR技术检测Runx2的动态表达。
　　结果与结论：通过酶消化法和有限稀释法获得了乳牙干细胞，流式细胞仪检测显示CD146和STRO-1均有不同程度的表达。成脂诱导油红O染色可见橙红色阳性颗粒。矿化诱导茜素红染色呈阳性。RT-PCR技术检测Runx2在成骨诱导第0天已有表达，0-6 d成明显增强趋势，6-12 d显著下降，12-18 d表达再次上升，以后相对平稳。结果表明乳牙干细胞可体外分离、培养，表达间充质干细胞表面标志，具有成脂和成骨向分化能力。Runx2在乳牙干细胞成骨分化各阶段均有表达，早期和晚期表达上升，中期表达有下降趋势。

低浓度尼古丁对大鼠硬腭软组织缺损愈合的影响

背景：新系列研究发现低浓度尼古丁具有促进血管生成，加速皮肤伤口愈合的作用，但低浓度尼古丁能否在颌面部软组织创伤修复中尤其是口腔黏膜创伤修复中发挥作用目前还不清楚。
　　目的：观察低浓度尼古丁对大鼠硬腭黏膜缺损修复的影响。
　　方法：Wistar大鼠65只，于硬腭第一磨牙近中至第三磨牙远中的黏膜作一直径为3 mm的圆形切创缺损。造模后局部给药，大鼠随机分成低浓度尼古丁+凝胶组、凝胶组、空白对照组，每组动物分别在3，7，10，14 d处死，苏木精-伊红染色观察组织愈合过程，并通过大体标本结合图像测量分析比较各组间伤口愈合差异。
　　结果与结论：修复后3 d各组间愈合情况差异无显著性意义；修复后7，10 d组低浓度尼古丁+凝胶组愈合快于凝胶组和空白对照组(P <0.05)；修复后14 d各组创面已基本愈合，各组间差异无显著性意义。提示低浓度尼古丁可能具有促进大鼠硬腭膜缺损修复的作用。

青少年女性月经周期不同阶段加力对正畸牙移动的影响

背景：雌激素对正畸牙齿移动有影响，目前仅有动物实验证明，雌激素水平越低，正畸牙移动量越大，雌激素水平越高，正畸牙移动量越小。
　　目的：分析青少年女性正畸患者月经周期的不同时期加力对正畸牙移动的影响。
　　方法：选取12例14-18岁已具有月经初潮，月经规律，需要拔除上颌第1前磨牙的女性患者。采取自身对照，将患者上颌左右两侧尖牙，随机分为月经期加力组和排卵期加力组，应用种植体支抗加力远中移动尖牙，月经期加力组加力2周后排卵期加力组开始加力。各组分别于加力即刻及4周时取模，灌制超硬石膏模型，测量各组尖牙向远中移动的距离，采用GraphPad Prism5软件包对数据进行统计学分析。
　　结果与结论：月经期加力组尖牙移动量大于排卵期加力组(P<0.05)。提示青少年女性正畸患者在月经期加力正畸牙的移动速度较排卵期正畸牙的移动速度显著增加，可有效缩短正畸矫治疗程。

人脑源性神经营养因子和神经营养素3真核双表达载体的构建与鉴定

背景：脑源性神经营养因子(brain-derived ；neurotrophic factor，BDNF)和神经营养素3(Neurotrophines-3，NT-3)在细胞分化过程中有重要作用。病毒载体临床应用存在安全隐患，利用真核表达载体表达蛋白为解决安全性问题提供了一种方法。目的：构建双基因共表达载体pIRES 2-BDNF-NT-3并对其进行鉴定。方法： BDNF和NT-3基因核心序列是通过直接PCR的方法从外周血单个核细胞的基因组DNA中获取。然后将BDNF的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建pIRES2-BDNF-EGFP载体，随后将NT-3 cDNA片段以替换EGFP的方式插入pIRES2-BDNF-EGFP中，后构建成为含有内部核糖体进入位点(IRES)的pIRES2-BDNF-NT-3双基因共表达载体。实验通过双酶切和DNA测序方法对其鉴定，将重组的双基因共表达载体感染HEK293细胞，利用RT-PCR与Western-blot方法检测双基因的表达。
　　结果与结论：DNA测序显示，提取的BDNF和NT-3均与基因库报道序列一致。构建的pIRES 2-BDNF-NT-3双基因共表达载体经Eco RⅠ/Bam HⅠ切出BDNF条带，经Bam HⅠ/NotⅠ双酶切后切出IRES-NT-3片段，经Eco RⅠ/NotⅠ双酶切后切出BDNF-IRES-NT-3片段。RT-PCR与Western-blot方法检测显示，此载体转染后的HEK293细胞均能表达BDNF和NT-3 mRNA和蛋白。结果证实，实验成功采用IRES序列构建了能分别表达的 BDNF 和 NT-3双基因真核表达载体。

周期性张应力下成肌细胞中半胱天冬氨酸蛋白酶9参与力学信号传导

背景：功能矫形使面颌部肌肉发生适应性改建，以纠正错颌畸形。成肌细胞是适应性改建的主要体现者，周期性牵张应力导致成肌细胞凋亡，而半胱天冬氨酸蛋白酶9是线粒体凋亡通路中的重要因子。
　　目的：明确半胱天冬氨酸蛋白酶9在不同时间周期性张应力作用下的表达变化。
　　方法：以大鼠L6成肌细胞为实验对象，在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上，通过多通道细胞牵张应力加载系统，分别对待测细胞持续施加1，6，12，24 h的周期性张应力，不加力组为对照组。倒置相差显微镜下观察成肌细胞的形态学改变和生长状况；运用RT-PCR和Western Blot技术检测周期性张应力作用下半胱天冬氨酸蛋白酶9的mRNA和蛋白含量变化。
　　结果与结论：倒置相差显微镜观察结果显示成肌细胞施加周期性张应力后贴壁生长情况良好，细胞无变性并且脱落率极低，说明成功构建了成肌细胞体外培养-力学刺激模型。RT-PCR和Western Blot检测结果显示，随着加力时间的延长，半胱天冬氨酸蛋白酶9 mRNA含量和活化型半胱天冬氨酸蛋白酶9的蛋白含量均显著增加，而半胱天冬氨酸蛋白酶9前体蛋白含量随着加力时间的延长均显著降低。可见半胱天冬氨酸蛋白酶9参与了周期性张应力作用下的力学信号传导。

正畸力作用下大鼠炎性牙周组织中肝细胞生长因子的表达

背景：细胞因子在牙周组织改建机制中具有重要的免疫调节和直接介导作用。目前肝细胞生长因子在正畸力作用后对牙周组织改建的作用及机制尚未见报道。
　　目的：探讨肝细胞生长因子在炎性牙周条件下参与牙移动及牙周改建的机制。
　　方法：选用30只8周龄雄性SD大鼠，建立牙周炎模型，随机分为2组，炎性对照组5只，炎性加力组25只。炎性加力组在上颌第一磨牙近中施加50 g的力值，分别在受力1，3，5，7，14 d处死，每次处死5只。采用苏木精-伊红染色、免疫组化方法分析牙齿受力移动不同阶段牙周组织中肝细胞生长因子表达和分布变化。
　　结果与结论：苏木精-伊红染色结果显示，受力牙齿与未受力牙齿牙周组织中都存在一定程度的改建。免疫组化结果显示，炎性对照组中可观察到肝细胞生长因子在牙周组织中呈阳性表达，分布较均匀。炎症加力组大鼠牙周组织内肝细胞生长因子受力后表达增高，在第5天达到高峰，之后开始下降；其中成骨细胞、成纤维细胞及破骨细胞均为强表达。提示肝细胞生长因子参与了正畸牙周组织的改建过程，其表达随时间呈现一定规律，炎症刺激可导致牙周组织中肝细胞生长因子的表达增高。

赤子爱胜蚓核酸酶样蛋白的一级结构特征

背景：前期研究从赤子爱胜蚓组织中获得一组核酸酶样蛋白，对该组核酸酶样蛋白的一级结构进行研究，有利于揭示其结构的基本性质，为进一步结构与功能的研究奠定基础。
　　目的：对核酸酶样蛋白EWD1和EWD2进行一级结构的测定。
　　方法：采用Edman降解法测定EWD1和EWD2的N末端氨基酸序列，采用酸水解法测定其氨基酸组成， LC-MS/MS测定蛋白质内部分氨基酸的序列，MALDI-TOF-MS测定蛋白的含糖量和二硫键数目。
　　结果与结论：核酸酶样蛋白EWD1和EWD2的氨基酸组成中，天冬氨酸和天冬酰胺之和的含量高，都达到近10%，疏水氨基酸亮氨酸的含量也较高，半胱氨酸含量较少，氨基酸组成比较显示，该2种酶与其它核酸酶较相似。Edman降解法测定，EWD1蛋白大亚基的N末端6个氨基酸序列为：D、E、W、V、Y、P，EWD2蛋白的N末端9个氨基酸序列为：L、L、G、P、Y、K、P、K、C；串，联质谱的结果提示2种核酸酶为新蛋白；MALDI-TOF-MS法显示1号核酸酶中含有8个半胱氨酸，形成4对二硫键，2号核酸酶中有6个半胱氨酸，形成3对二硫键。EWD1，2均为糖蛋白，EWD1中的含糖量为17.3%，EWD2蛋白中的含糖量为15.6%。

体外冲击波治疗兔膝骨关节炎：白细胞介素1β及基质金属蛋白酶13的表达

背景：白细胞介素1β和基质金属蛋白13能促进软骨细胞的分解代谢，抑制软骨细胞的合成修复能力，引起细胞外基质的降解，在骨关节炎的发生中有十分重要的作用。
　　目的：观察体外冲击波对兔膝骨关节炎软骨细胞中白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13表达的影响。
　　方法：将30只新西兰兔随机分为治疗组、模型组、对照组，每组10只。治疗组和模型组均采用改良伸直位固定6周，制备兔膝骨关节炎模型。治疗组造模后给予体外冲击波治疗1次，能流密度0.1 mJ/mm2，冲击次数1000次。对照组不作任何处理。各组兔于治疗后4周处死，取膝关节液和关节软骨。苏木精-伊红染色和甲苯胺蓝染色法检测各组膝关节病理学形态改变，采用酶联免疫吸附法测定关节液白细胞介素1β水平，免疫组化法检测白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达。
　　结果与结论：治疗组和模型组关节液白细胞介素1β水平较对照组明显增高(P <0.01)，治疗结束后治疗组关节液白细胞介素1β水平较模型组下降(P <0.05)。治疗组和模型组软骨组织Mankin评分较对照组明显增高(P<0.01)，治疗结束后治疗组软骨组织Mankin评分较模型组下降(P<0.05)。治疗组和模型组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较对照组明显增高(P<0.01)，治疗结束后治疗组软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13阳性表达率较模型组下降(P<0.05)。结果可见体外冲击波能下调膝骨关节炎软骨细胞白细胞介素1β和基质金属蛋白酶13的表达，促进Ⅱ型胶原和蛋白聚糖的合成，从而对膝骨关节炎起防治作用。

弥散张量成像显示亚急性期脑梗死神经网络损伤及各运动参数分析

背景：脑卒中后神经网络与运动功能的相关性尚未明确。
　　目的：应用磁共振弥散张量成像研究亚急性期脑梗死后神经网络受损情况，并分析其与神经功能缺陷及运动功能障碍的相关性。
　　方法：将19例亚急性期脑梗死患者和20名正常成人分别进行弥散张量成像检查，分析比较以下参数：各向异性分数、表观扩散系数和各向异性分数指数、表观扩散系数指数。同时对患者进行神经功能缺损和运动功能的各项量表评估，检测10 m步行速度。将脑梗死患者弥散张量成像的各项参数与各项量表及10 m步行速度进行相关性分析。
　　结果与结论：脑梗死患者各向异性分数指数和双侧内囊后肢的各向异性分数值均小于正常对照，且患侧内囊后肢的各向异性分数值小于健侧内囊后肢的各向异性分数值(P<0.05)。患侧内囊后肢的表观扩散系数值、表观扩散系数指数大于正常对照内囊后肢的表观扩散系数值和表观扩散系数指数(P<0.05)。患侧内囊后肢的表观扩散系数值、表观扩散系数指数与下肢Fugl-Meyer评分呈负相关(P <0.05)。提示弥散张量成像参数与下肢运动功能障碍密切相关。脑卒中后的局灶性病变造成神经网络缺损，是下肢运动功能障碍的主要原因。

不同方法深低温保存兔肢体再植后血管组织的病理学变化

背景：虽然对于单一组织的冷冻保存获得了空前的成果，并且已逐渐应用于临床，但是对于复合组织的冷冻保存及应用还鲜有研究。
　　目的：通过实验研究深低温冷冻不同复温方法下兔肢体再植后血管形态学变化，找出一种对复合组织中血管损伤小的复温方法，从而为深低温处理后断肢再植可行性提供理论依据。
　　方法：30只健康新西兰大白兔随机数字表法均分为对照组、慢速冷冻-慢速复温组、慢速冷冻-快速复温组，均给予大白兔右后肢自膝上1 cm处离断。慢速冷冻两组复温后均行断肢再植，再植肢体成活6 h后给予再次离断右后下肢。3组兔断肢均取股血管组织采用染色光镜及电镜进行形态学观察及大体观察，光镜病理计分结果用显著性分析。
　　结果与结论：慢速冷冻-慢速复温组、慢速冷冻-快速复温组兔肢体再植6h后的病理变化(大体标本、光镜、电镜)均较对照组差，但慢速冷冻-慢速复温组与慢速冷冻-快速复温组相比血管内皮细胞完整性较好，细胞器破坏较少。证实，经过深低温冷冻-复温处理后兔断肢再植6 h，离断肢体血管组织能保持一定的结构完整性，再植后6h兔肢体获得成活，且慢速冷冻-慢速复温组更为适合离断肢体的保存，为深低温处理后离断肢体行断肢再植远期成活可行性提供了依据。