中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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骨髓间充质细胞复合胶原-壳聚糖材料联合骨搬移修复胫骨缺损：随机对照实验方案
背景：骨髓间充质干细胞发挥成骨作用需要支架材料的辅助，一方面支架材料不仅可将细胞运载至骨缺损区域，另一方面还可作为新骨生长的框架结构。胶原-壳聚糖复合材料是骨组织工程较为理想的支架材料之一，同时其具有骨诱导性，比常规支架材料更优越的成骨能力。骨搬移技术在临床上在修复长段骨缺损方面已得到广泛应用，但也存在成骨慢、外固定时间长、骨不连等缺憾。如何进一步加快骨形成速度，减少并发症发生，已成当前亟待解决的问题。实验假设：骨髓间充质干细胞复合胶原-壳聚糖支架移植能提高胫骨缺损骨搬移修复效果。
方法/设计：随机对照动物实验。分为体外和体内实验两部分。体外实验中取月龄一两个月的新西兰大白兔股骨骨髓，提取骨髓间充质干细胞，培养至第3代，将细胞悬液滴于胶原-壳聚糖支架材料，构建骨髓间充质干细胞复合胶原-壳聚糖支架。体内实验选用24只三四月龄新西兰大白兔，被随机分配接受如下干预：骨搬移、支架植入、骨搬移联合支架植入。研究的主要观察指标为植入材料与骨缺损界面的生长情况、X 射线检测的缺损区骨修复情况、苏木精-伊红染色及扫描电镜观察缺损区成骨情况、免疫组织化学染色检测成骨区Ⅰ型胶原蛋白的表达情况、扫描电子显微镜观察移植材料与宿主骨的界面键合情况、超微结构及新骨的生成。
讨论：实验结果将有助于确定对骨缺损进行骨搬移治疗过程中，应用骨髓间充质干细胞复合胶原-壳聚糖支架移植促进骨缺损再生修复效果的可行性。 -
不同来源间充质干细胞生物学特性差异
背景：间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为软骨、肌肉、肌腱等。间充质干细胞进行的临床试验主要包括组织损伤修复，如骨、软骨、关节损伤的修复，心脏、肝脏、脊髓损伤和神经系统疾病的治疗。
目的：比较各种来源的间充质干细胞的生物学特性。
方法：检索1987到2015年PubMed数据库和中国知网数据库收录的与间充质干细胞来源，间充质干细胞生物学特性相关的文献。从细胞表面标记物，增殖、分化、迁移能力，以及功能方面进行分析总结，探讨了各种来源的间充质干细胞的优缺点。
结果与结论：不同来源的间充质干细胞的增殖潜力和表面标记物存在差异。不同组织来源的间充质干细胞免疫活性可能与间充质干细胞处于不同组织中的活化状态、种属差异、组织来源和培养条件的不同有关，从而导致不同源性间充干细胞免疫活性也不完全相同。深入认识影响不同组织来源间充质干细胞迁移的因素和机制，可以增强不同源性间充质干细胞靶向迁移的能力，提高其在创伤愈合、组织修复和再生中的治疗效率。 -
胎盘间充质干细胞的应用研究
背景：胎盘间充质干细胞因其具有来源广泛、免疫原性低、不涉及伦理问题等优点成为种子细胞的新来源。
目的：阐述胎盘间充质干细胞的来源、生物学特性及应用新研究进展。
方法：检索 PubMed、ScienceDirect、OvidSP、CNKI数据库相关文章，检索时限为2003至2015年，英文检索词为“Placenta，Mesenchymal stem cels，The placenta mesenchymal stem cels, Cel transplantation , Application mechanism”，中文检索词为“胎盘，间充质干细胞，胎盘间充质干细胞，细胞移植，应用机制”，从中筛选出与主题相关且论据可靠的部分文献，终纳入57篇文章进行归纳综述。
结果与结论：目前已成功分离培养出胎盘间充质干细胞，并对其生物学特性进行研究，证明其具有干细胞源性及多向分化潜能。目前有较多关于胎盘间充质干细胞应用于实验动物及临床的研究，在骨组织工程、血管再生及神经组织等修复过程中均显示出了巨大的潜力，但胎盘间充质干细胞的具体应用机制目前尚不清楚，尚处于探索阶段，在胎盘间充质干细胞广泛应用于临床之前，仍有许多问题有待进一步研究明确，以确保其安全性和有效性。 -
骨髓间充质干细胞藻酸钙移植物与复合降解膜修复皮肤缺损
背景：一直以来学者们认为皮肤移植是修复大面积组织缺损有效的方法，但都存在供体来源限制和免疫排斥反应等问题，因此，加速真皮的构建在皮肤组织工程中极为重要。
目的：观察骨髓间充质干细胞藻酸钙凝胶、碱性成纤维细胞生长因子复合缓释降解膜修复皮肤缺损的效果。
方法：新西兰大耳白兔15只，取其自体髂骨骨髓，体外分离出骨髓间充质干细胞进行培养、扩增、传代并纯化备用；制作皮肤全层缺损模型3处，随机植入自体骨髓间充质干细胞藻酸钙凝胶、碱性成纤维细胞生长因子复合降解膜(实验组)，自体骨髓间充质干细胞藻酸钙凝胶(对照1组)，不含骨髓间充质干细胞的藻酸钙凝胶(对照2组)，术后均用羊膜覆盖创面。术后7，14，21 d取新生创面组织，进行苏木精-伊红染色、免疫组织化学染色及图像分析仪测定。
结果与结论：实验组皮下真皮组织增生明显，其成纤维细胞、血管及胶原纤维较多，特别是术后14，21 d表皮增生较快，其覆盖范围较大，术后21 d，新生表皮大多重建呈多层结构，明显优于对照1组和对照2组。由此可见，骨髓间充质干细胞藻酸钙凝胶和碱性成纤维细胞生长因子复合降解膜植入皮肤缺损局部，加速了真皮组织的再生修复，从而促进表皮的再生和重建。 -
骨髓间充质干细胞联合茶黄素修复激素性股骨头坏死
背景：临床上对于股骨头坏死病理机制尚不完全知晓，大剂量使用糖皮质激素容易引起股骨头坏死。
目的：观察骨髓间充质干细胞联合茶黄素在大鼠激素性股骨头坏死中的临床治疗效果。
方法：体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，将其复合在明胶海绵上。实验分4组，骨髓间充质干细胞联合茶黄素组采用液氮冷冻法建立激素性股骨头坏死鼠模型，并移植复合了骨髓间充质干细胞的明胶海绵，每天进行250 mg茶黄素灌服，设模型对照组，单纯减压组和细胞移植组作对照。
结果与结论：造模后4周，4组大鼠股骨头标本外形表现为圆形，关节软骨呈现为苍白色，关节软骨开始出现剥脱现象。造模后4周，模型对照组关节软骨剥脱加重，部分股骨头标本出现塌陷；骨髓间充质干细胞联合茶黄素组股骨头标本呈现出圆形，且为苍白色。造模后8周，模型对照组坏死区增加；单纯减压组出现成骨细胞，且存在纤维性骨痂形成；细胞移植组能够见到少量空骨陷窝，髓腔形态不规则；骨髓间充质干细胞联合茶黄素组出现大量新生骨形成，且髓内脂肪细胞规则。骨髓间充质干细胞联合茶黄素组造模后4，8周空骨陷窝阳性数显著少于其他3组(P <0.05)。结果证实，激素性股骨头坏死采用骨髓间充质干细胞基础上联合茶黄素治疗效果理想。 -
骨髓间充质干细胞在致敏与非致敏BALB/c小鼠造血干细胞移植中的应用
背景：造血干细胞移植对多种疾病具有治疗作用，但其取材不便，且细胞数量受年龄限制等原因，故而应用具有一定局限性。
目的：探索骨髓间充质干细胞在致敏与非致敏BALB/c小鼠造血干细胞移植中的应用价值。
方法：将 BALB/c 小鼠骨髓细胞在体外进行分离，采用贴壁培养的方法获得间充质干细胞，使用流式细胞仪对细胞表面的分子标记进行检测。应用异基因脾细胞输注方法建立致敏动物模型，用绿色荧光染料标记骨髓间充质干细胞，分别移植到致敏和非致敏的受体小鼠体内，并在移植后的不同时间点对间充质干细胞的归巢情况进行检测。对致敏BALB/c小鼠进行照射预处理，联合应用异基因骨髓细胞与同基因间充质干细胞移植，观察BALB/c小鼠的生存情况。
结果与结论：移植48 h后，间充质干细胞在致敏受体和非致敏受体小鼠分别归巢于脾脏和骨髓。在造血干细胞的移植实验中，致敏 BALB/c 小鼠接受异基因骨髓细胞与同基因骨髓间充质干细胞联合移植，结果显示致敏BALB/c小鼠全部在移植后12-15 d死亡，生存的中位时间是14 d，而仅接受异基因骨髓细胞移植的致敏BALB/c小鼠的中位生存时间为13 d。说明细胞移植后在致敏受体内间充质干细胞主要归巢为脾脏和骨髓，联合应用间充质干细胞移植对异基因造血干/祖细胞植入致敏受体体内并没有起到有效的促进作用。 -
胃癌干细胞的分离、鉴定及其特性
背景：近年来随着肿瘤干细胞的深入研究，越来越多的证据表明肿瘤干细胞是恶性肿瘤转移复发的原因，因此分离鉴定出肿瘤干细胞对阐明肿瘤发病机制和研发抗肿瘤药物具有重要意义。
目的：分离培养胃癌干细胞，并检测胃癌干细胞的生物学特性。
方法：收集16例胃癌患者术中切除肿瘤组织，采用组织块贴壁培养法和酶消化培养法从肿瘤组织中分离胃癌干细胞，倒置显微镜下观察细胞形态，绘制生长曲线，并观察成骨成脂诱导分化能力。
结果与结论：两种方法均能够分离出胃癌干细胞，在显微镜下可以发现细胞形态为长梭形或多角样，细胞增殖生长达到融合时，呈漩涡状、放射状排列。从细胞生长曲线可以看出，1-3 d为潜伏期，4-9 d为对数增殖期，10 d后进入生长平台期。流式细胞仪检测结果显示：第3代胃癌干细胞高表达细胞表面标志物CD90、CD29、CD44，而低表达CD34、CD45、HLA-DR。第3代胃癌干细胞经成骨诱导后可见钙化结节，成脂诱导后细胞胞浆开始出现微小明亮的脂肪滴。结果表明胃肿瘤组织内存在肿瘤干细胞，且与正常细胞有相似的形态、生物特性以及多向分化能力，可能参与胃癌的发生、发展。 -
神经干细胞移植脑出血恢复期大鼠神经功能和促血管生成素1及受体的表达
背景：近年研究发现骨髓间充质干细胞经过长时间体外培养后，可自然分化为神经干细胞，从而再定向分化为神经细胞及神经胶质细胞，为帕金森病、脑梗死后遗症、小脑萎缩和脑发育不良等疾病的治疗提供了一种新的思路。
目的：探讨神经干细胞移植对脑出血恢复期大鼠神经功能的影响及其作用机制。
方法：将60只雄性SD大鼠按照随机数字表法分为正常组(18只)、脑出血组(21只)和移植组(21只)，后2组大鼠采用Ⅶ型胶原酶诱导法建立大鼠脑出血模型，造模21 d后移植组大鼠通过尾静脉注射神经干细胞，脑出血组给予等量生理盐水。移植后第7，14，21天进行改良黏附物移除试验(MST)评分，评分结束后处死各组大鼠，采用RT-PCR法测定大鼠出血周围脑组织促血管生成素1 mRNA表达，采用Western Blotting法检测大鼠出血周围脑组织酪氨酸激酶受体2蛋白表达。
结果与结论：与正常组相比，脑出血组和移植组各时点MST评分均明显降低，差异均有显著性意义(P <0.05)；从移植后7 d开始移植组各时点的MST评分均明显高于脑出血组，差异均有显著性意义(P <0.05)。移植后7，14，21 d移植组和脑出血组促血管生成素1 mRNA和酪氨酸激酶受体2蛋白含量均明显高于正常组，且移植组升高更为明显，差异均有显著性意义(P均<0.05)。结果表明神经干细胞移植能够有效促进脑出血恢复期大鼠神经功能的恢复，其机制可能与增加出血周围脑组织促血管生成素及酪氨酸激酶受体2的含量有关。 -
牵张力下mTOR/MMPs信号通路可促进间充质干细胞-成骨细胞系的迁移
背景：目前对于牵张成骨促进间充质干细胞-成骨细胞系迁移的机制尚未明了，亟需基于这一机制的新的治疗方案，以提高牵张成骨临床疗效。
目的：观察牵张应力下间充质干细胞-成骨细胞系mTOR信号通路相关基因的表达以及细胞迁移能力。
方法：将12只SD大鼠随机分为2组：牵张组大鼠(n=6)进行右侧下颌骨牵张成骨，非牵张组大鼠(n=6)行同侧下颌骨截断后安置牵张器但不牵张，术后15 d进行免疫组织化学染色分析新生骨痂中p-mTOR表达变化。另外，对培养的健康SD大鼠下颌骨间充质干细胞进行体外牵张试验，施加(6%，4 h)的静息牵张力，对照组不施加牵张力，实时定量PCR、划痕实验等方法检测间充质干细胞-成骨细胞系mTOR信号通路相关基因的表达及细胞迁移能力的变化。
结果与结论：牵张组大鼠新生骨痂中的p-mTOR表达高于非牵张组(P <0.05)。与非牵张组(0%，4 h)相比，牵张组(6%，4 h)间充质干细胞-成骨细胞系的 mTOR、Raptor、p70S6K、MMP-2、MMP-9、MMP-13基因表达升高，间充质干细胞-成骨细胞系迁移距离更远(P <0.05)。结果提示牵张应力可能通过激活间充质干细胞-成骨细胞系的mTOR/MMPs信号通路，促进其迁移。 -
miR-155有助于骨髓间充质干细胞成软骨分化
背景：近年发现，miRNA 是能够对基因表达产生影响的一种新型调控子，miRNA 有助于多能干细胞分化增殖以及自我更新。
目的：探讨miR-155对大鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化的调控机制。
方法：12周龄健康SD大鼠60只，随机分为研究组与对照组，每组30只。于麻醉状态下将大鼠处死，获取下肢骨髓，进行骨髓间充质干细胞分离、培养，研究组给予miR-155基因模拟物转染，对照组给予阴性对照序列转染，经成软骨诱导分化后进行RT-PCR检测Sox9、ColagenⅡ、Aggrecan、Colagen X基因的表达， Western blot检测Sox9、Runx2蛋白的表达。
结果与结论：研究组Sox9、ColagenⅡ、Aggrecan基因表达高于对照组，Colagen X基因表达低于对照组，差异均有显著性意义(P<0.05)。研究组Sox9蛋白表达高于对照组，Runx2蛋白表达低于对照组，差异均有显著性意义(P <0.05)。结果表明miR-155不仅有助于骨髓间充质干细胞成软骨分化，而且可以抑制骨髓间充质干细胞成软骨分化呈肥大趋势发展。 -
灯盏花素联合骨髓间充质干细胞移植促进脑梗死大鼠神经功能恢复
背景：灯盏花素治疗脑梗死疗效确切、不良反应少、远期疗效稳定、毒副作用少，能够改善脑梗死后中枢神经系统受损区的微环境。
目的：探讨灯盏花素注射液联合骨髓间充质干细胞移植对脑梗死神经功能恢复及生长相关蛋白43表达的影响。
方法：将60只大脑中动脉闭塞模型 SD 大鼠随机分为脑梗死组、骨髓间充质干细胞移植组和联合组。建模6 h后通过尾静脉注射1 mL PBS、1 mL骨髓间充质干细胞悬液(2.5×106)、1 mL骨髓间充质干细胞悬液(2.5×106)+灯盏花素注射液75 mg/kg，连续注射5 d，1次/d。
结果与结论：移植后2周，免疫荧光法观察到 BrdU 阳性标记的骨髓间充质干细胞主要集中于梗死灶周围且联合组的BrdU阳性细胞数量多于骨髓间充质干细胞组及脑梗死组(P <0.01)；移植后1，2，3周联合组的神经功能障碍评分明显低于骨髓间充质干细胞组及脑梗死组(P <0.05)；移植后2周，与骨髓间充质干细胞组及脑梗死组比较，联合组的脑梗死面积明显减小，水肿程度明显减轻，生长相关蛋白43的表达明显增高(P <0.05)。光镜下联合组脑梗死组织中胶质细胞明显增生，脑组织水肿有明显减轻。结果表明灯盏花素注射液联合骨髓间充质干细胞可明显减轻脑梗死面积及水肿程度，促进大鼠脑梗死后神经功能恢复及梗死灶生长相关蛋白43的表达。 -
肾上腺髓质素对缺氧培养骨髓间充质干细胞表达凋亡相关蛋白的影响
背景：肾上腺髓质素基因转染能增强骨髓间充质干细胞在缺血、缺氧环境下的抗凋亡能力，但其机制尚未完全明确。
目的：观察肾上腺髓质素对骨髓间充质干细胞缺血、缺氧时 Bax、Bcl-2和 Caspase-3等凋亡相关调节蛋白表达的影响。
方法：贴壁法分离、培养、纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞，缺氧、无血清培养0，3，6，9，12 h后用Western blot测定Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达以确定佳缺氧时间。采用缺氧6 h为时间点，根据缺氧、无血清培养前是否进行肾上腺髓质素预处理分为对照组(未加入肾上腺髓质素)及肾上腺髓质素不同质量浓度组(1，10，100μg/L)，然后采用Western blot测定Bax、Bcl-2、Caspase-3蛋白的表达。
结果与结论：①无血清培养条件下缺氧0，3，6，9，12 h后骨髓间充质干细胞 Bax、Bcl-2表达均增加(P <0.05)，缺氧6 h时Bax/Bcl-2比值、caspase-3蛋白达到小(P <0.05)。②缺氧6 h时，与1，10μg/L肾上腺髓质素组相比，100μg/L肾上腺髓质素组表达Bax蛋白、Caspase-3蛋白低，Bax/Bcl-2比值低，而表达Bcl-2蛋白高(P <0.05)。结果表明肾上腺髓质素能降低无血清、缺氧条件下骨髓间充质干细胞Bax/Bcl-2比值、Caspase-3蛋白表达，该效应存在剂量依赖性。 -
定向诱导分化环境下骨髓间充质干细胞向成骨及成脂细胞的分化
背景：骨髓间充质干细胞属于骨髓中的非造血干细胞，能够在不同的条件下诱导分化为软骨细胞、骨细胞以及脂肪细胞等，是有前途的组织工程种子细胞。
目的：探讨定向诱导分化环境下骨髓间充质干细胞向成骨细胞及脂肪细胞分化的关系。
方法：无菌抽取日本大耳兔骨髓，采用密度梯度离心法和细胞贴壁法分离、纯化出骨髓间充质干细胞，分别采用成脂诱导培养基和成骨诱导培养基进行诱导培养，培养后不同时间点进行苏丹Ⅳ染色、Von Kossa染色、碱性磷酸酶活性检测，比较细胞成脂和成骨率。以正常DMEM培养液培养细胞为对照组。
结果与结论：骨髓间充质干细胞经过7 d成脂诱导后细胞浆开始出现小脂滴、细胞无序，培养21 d后细胞浆内形成高折光性的脂滴。苏丹Ⅳ染色结果显示：骨髓间充质干细胞克隆中心的细胞浆内存在大量的颗粒状红色脂滴，对照组仅5%骨髓间充质干细胞分化为脂肪细胞。骨髓间充质干细胞经过7 d成骨诱导后细胞逐渐汇合成铺路石状，并且形成多个结节；培养14 d后能够看见褐色点状矿化结节中心；培养21 d后形成小片状矿化结节。成骨诱导实验组成骨率为40%，成脂率为20%，显著高于对照组(成骨率为5%，成脂率为5%)。结果提示在适当的环境下骨髓间充质干细胞能够一部分转化为脂肪细胞，另一部转化为骨细胞，并且二者存在一定的联系，即分化的脂肪细胞多，骨细胞则少；反之分化的脂肪细胞少，骨细胞则多。 -
人端粒酶反转录酶基因修饰骨髓间充质干细胞调控肝细胞增殖和凋亡
背景：研究表明人端粒酶反转录酶基因的导入可以使骨髓间充质干细胞的生命周期得到显著延长，使其能够继续保持多向分化潜能。
目的：探讨人端粒酶反转录酶基因修饰骨髓间充质干细胞对肝细胞增殖和凋亡的影响。
方法：采取直接贴壁法，分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞，利用脂质体转染法，将编码hTERT基因的真核表达质粒pCIneo-hTERT导入骨髓间充质干细胞。将hTERT基因转染骨髓间充质干细胞与肝细胞按1︰1共培养(观察共培养组)，同时设未转染骨髓间充质干细胞与肝细胞按1︰1共培养组(对照共培养组)和肝细胞单独培养组，采用MTT比色法和免疫荧光染色法观察骨髓间充质干细胞对肝细胞增殖和凋亡的影响。
结果与结论：观察共培养组的肝细胞增殖率明显高于对照共培养组和肝细胞单独培养组，差异有显著性意义(P <0.05)；观察共培养组的肝细胞存活率明显高于肝细胞单独培养组，差异有显著性意义(P <0.05)。结果表明人端粒酶反转录酶基因修饰的骨髓间充质干细胞可以抑制肝细胞的凋亡，并促进其增殖，具有改善肝细胞功能的作用。 -
骨髓基质干细胞体外定向诱导后表面MHC抗原的表达
背景：同种异体骨髓基质干细胞移植治疗骨骼疾病是研究热点，寻找有效的方法防止移植后免疫排斥反应的发生，是当前迫切需要解决的问题。
目的：探讨骨髓基质干细胞在体外诱导为成骨细胞后表面MHC抗原的表达。
方法：抽取兔骨髓组织，在体外分离、培养获得骨髓基质干细胞，加入含骨形态发生蛋白2重组蛋白的IMDM诱导培养基诱导后，流式细胞仪分析骨髓源性成骨细胞MHC抗原的表达。
结果与结论：骨髓源性成骨细胞表面 MHCⅡ类抗原不表达、MHCⅠ类抗原表达。骨髓基质干细胞体外分化为成骨细胞后，未见免疫排斥反应，可用于同种异体或异种骨髓基质干细胞移植治疗骨缺损。 -
脂多糖诱导钛种植体周围骨髓间质细胞炎症中的巨噬细胞游走抑制因子
背景：目前大量研究证实，巨噬细胞游走抑制因子在多种生物活动中发挥着重要的作用，如肿瘤的发生发展等，近年来发现其在机体发生的炎症过程中也扮演者重要的角色，也取得了很多成绩，然而在口腔内牙种植体周围这一特殊的环境中，巨噬细胞游走抑制因子是否发挥着作用以及发挥着怎样的作用，尚不清楚。
目的：观察巨噬细胞游走抑制因子在经过脂多糖诱导纯钛材料周围生长的骨髓间质细胞发生的炎症中发挥的作用。
方法：首先将骨髓间质细胞接种于钛细胞培养爬片上，模拟口内种植体周围环境，实验分4组：对照组为不加任何刺激的骨髓间质细胞；脂多糖组利用脂多糖诱导骨髓间质细胞发生炎症；非特异性siRNA+脂多糖组利用脂多糖刺激转染过非特异性小干扰RNA的骨髓间质细胞；巨噬细胞游走抑制因子siRNA+脂多糖组利用脂多糖刺激转染过巨噬细胞游走抑制因子靶向小干扰RNA的骨髓间质细胞。
结果与结论：实验通过流式细胞筛选技术，筛选出细胞表面蛋白CD29、CD90阳性率大于95%，而且CD45表达低于5%的骨髓间质细胞作为实验对象。CCK8实验结果提示，脂多糖与巨噬细胞游走抑制因子靶向小干扰RNA对骨髓间质细胞的增殖活性几乎无影响，然而与对照组相比，脂多糖可明显刺激骨髓间质细胞发生炎症反应，为对照组的15-20倍(P <0.01)。巨噬细胞游走抑制因子siRNA+脂多糖组白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α表达低于脂多糖组(P <0.01)。结果证实，脂多糖可以促进种植体周围骨髓间质细胞的炎症反应，而且巨噬细胞游走抑制因子靶向小干扰RNA沉默可以在一定程度上抑制炎症反应的发生。 -
三磷酸腺苷对骨髓间充质干细胞成骨和成脂分化的影响
背景：骨髓间充质干细胞的功能紊乱是骨质疏松的重要病理机制，而适当力学刺激可促进骨生长、提高骨强度，同时也会使细胞分泌腺苷类物质，如三磷酸腺苷。
目的：探讨三磷酸腺苷对骨髓间充质干细胞成骨和成脂肪分化的影响及其相关机制。
方法：不同浓度(10，50，250μmol/L)的三磷酸腺苷刺激骨髓间充质干细胞，通过RT-qPCR检测成骨和成脂肪相关基因表达、茜素红染色和油红O染色来评估三磷酸腺苷对骨髓间充质干细胞成骨和成脂分化的影响。Western blot检测三磷酸腺苷刺激对ERK1/2通路激活的影响。
结果与结论：三磷酸腺苷促进骨髓间充质干细胞成骨相关基因的表达和钙沉积，抑制成脂肪相关基因表达和脂滴生成，但不影响细胞增殖，这些影响呈剂量依赖性。三磷酸腺苷可以激活ERK1/2通路，ERK1/2通路抑制剂U0126抑制了三磷酸腺苷对骨髓间充质干细胞的促成骨抑成脂效应。 -
骨关节炎患者骨髓间充质干细胞功能状态与病情进展的相关性
背景：研究表明骨髓间充质干细胞功能状态的改变是骨关节炎的病因之一。
目的：探讨骨关节炎患者骨髓间充质干细胞功能状态与病情进展的相关性。
方法：收集45例患者的临床资料，其中15例为关节镜下进行膝关节交叉韧带重建患者(对照组)，15例为轻度骨关节炎患者(轻度骨关节炎组)，15例为重度骨关节炎患者(重度骨关节炎组)。体外培养获得3组患者骨髓间充质干细胞，观察其形态变化，检测其增殖能力及软骨向诱导分化能力。
结果与结论：原代骨髓间充质干细胞经24 h培养后呈整齐排列状，且为长梭形，3组骨髓间充质干细胞形态基本一致，不存在显著差异。骨髓间充质干细胞成软骨诱导14 d后行甲苯胺蓝染色鉴定，爬片可见甲苯胺蓝异染颗粒，3组成软骨诱导分化能力无明显差异。CCK-8法检测各组患者骨髓间充质干细胞的增殖能力，其中以对照组增殖能力强，重度骨关节炎组增殖能力弱，结果表明骨关节炎患者骨髓间充质干细胞功能状态与病情进展之间存在一定的相关性。 -
体外磁共振观察胎鼠神经干细胞的标记
背景：神经干细胞移植后的细胞存活、识别和迁移需动态监控。
目的：通过体外磁共振技术对胎鼠神经干细胞体外标记，为神经干细胞在神经系统修复中的应用提供依据。
方法：采用胎鼠神经干细胞的分离与培养标记、染色剂鉴定及神经干细胞的活性检测，构建大鼠脑缺血再灌注模型，采用超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞并移植至模型大鼠左侧脑内，未标记的胎鼠神经干细胞移植至右侧脑中，对标记的细胞进行普鲁士蓝染色，观察其定植和迁移情况，并通过磁共振示踪动态的监测神经干细胞在活体移植之后的信号改变情况。
结果与结论：超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠神经干细胞的方法效率达95%以上，电镜结果显示超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞内含铁颗粒，且集中在溶酶体和内涵体当中，磁共振结果显示胎鼠标记的神经干细胞呈现低信号改变，细胞活性的影响与未标记组差异无显著性意义，但标记的胎鼠神经干细胞T2WI与 T2*WI信号降低。证实超顺磁性氧化铁颗粒体外标记胎鼠的神经干细胞可高效表达，磁共振的监控可以用于神经干细胞的活体示踪。 -
脂肪源性干细胞体外分离培养及向内皮祖细胞的诱导分化
背景：脂肪源性干细胞是目前组织工程种子细胞的研究热点，通常采用胶原酶消化脂肪组织来获得，但是存在着操作繁琐，花费高等不足。
目的：观察组织块培养法分离的脂肪源性干细胞的基本生物学特性及其向骨细胞、脂肪细胞及内皮祖细胞的诱导分化潜能。
方法：无菌条件下切取大鼠双侧腹股沟脂肪组织，组织块法分离培养脂肪源性干细胞，CCK-8法检测细胞增殖活性，流式细胞仪分析干细胞表面标志表达。取第4代脂肪源性干细胞用成骨诱导液、成脂诱导液、内皮祖细胞诱导液培养两三周并进行鉴定。
结果与结论：组织块培养法得到的脂肪源性干细胞易扩增，传代后以长梭形细胞生长为主，呈漩涡状排列，克隆样生长；经多次传代仍能保持较强的增殖能力，细胞生长曲线呈抛物线形；细胞表面标志CD44、CD90、CD29呈阳性表达，CD45、CD31呈阴性表达。成脂诱导后细胞油红O染色阳性、成骨诱导后细胞茜素红染色阳性。诱导后的内皮祖细胞CD34及DiI-ac-LDL和FITC-UEA-1双荧光染色阳性。以上结果显示组织块培养法能成功分离培养出脂肪源性干细胞，且获得的细胞纯度较高、易于增殖培养，能高表达干细胞表面抗原以及具有向骨细胞、脂肪细胞及内皮祖细胞多向分化的潜能，可以满足组织工程研究种子细胞的需求。 -
LIM矿化蛋白1/低氧诱导因子1α慢病毒载体转染脂肪源性干细胞的成骨分化
背景：LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α作为胞内蛋白，可分别从诱导成骨分化及促进血管再生两个方面促进成骨，联合二者高效诱导脂肪源性干细胞成骨分化具有重要的意义。
目的：探讨慢病毒载体介导的LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染的脂肪源性干细胞成骨分化的情况。
方法：应用反转录PCR技术克隆目的基因LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α片段，并分别克隆于慢病毒骨架质粒 pLVX-EF1α-DsRed-Hyg 和 pLVX-EF1α-IRES2-AcGFP1中，构建慢病毒载体主体质粒pLVX-EF1α-DsRed-Hyg-RLMP-1和 pLVX-EF1α-AcGFP-RHIF-1α，随即与辅助质粒和包装质粒共转染Lenti-X 293T细胞，包装慢病毒载体；采用组织块加酶消化法分离培养大鼠脂肪源性干细胞，使用流式细胞仪对其进行鉴定。分别在慢病毒转染脂肪源性干细胞3，7，14 d后，应用反转录PCR方法检测脂肪源性干细胞中成骨基因骨形态发生蛋白2、Runx-2、碱性磷酸酶、骨钙蛋白表达水平的同时检测血管内皮生长因子的表达水平。
结果与结论：pLVX-EF1α-DsRed-Hyg-RLMP-1和pLVX-EF1α-AcGFP-RHIF-1α可有效地转染入大鼠脂肪源性干细胞；反转录 PCR结果显示成骨基因骨形态发生蛋白2、Runx-2、碱性磷酸酶、骨钙蛋白在 LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染后第7天都开始明显过表达，并且可持续到14 d。说明LIM矿化蛋白1及低氧诱导因子1α双基因转染脂肪源性干细胞可提高其成骨活性。 -
人脂肪干细胞向淋巴管样内皮细胞分化的佳条件
背景：作者所在课题组前期研究表明，脂肪干细胞在血管内皮生长因子C作用下，可以诱导分化为淋巴管样内皮细胞，经淋巴内皮细胞透明质酸受体1染色证实为淋巴管样内皮细胞，但其佳诱导方案尚不明确。
目的：探讨利用血管内皮细胞生长因子C(VEGF-C156s)诱导脂肪干细胞成为淋巴管样内皮细胞的佳条件。
方法：取健康成人脂肪组织，胰酶消化法获得脂肪组织来源的间质干细胞，通过流式细胞仪检测其表面标记，并进行成脂肪、成骨诱导等体外分化能力鉴定。取生长状态良好的第3代细胞，对照组加入低糖DMEM培养基，其余5组分别加入含25，50，100，200，300μg/L VEGF-C156s，分别观察诱导结果。
结果与结论：成功分离纯化脂肪干细胞，在体外成功利用含VEGF-C156s、碱性成纤维生长因子等生长因子的诱导液将脂肪干细胞诱导为淋巴管内皮样细胞，对照组未见明显淋巴内皮细胞透明质酸受体1染色阳性细胞。诱导8 d后，25μg/L VEGF-C156s诱导后可见少数细胞染色阳性；50，100μg/L VEGF-C156s诱导后可见大量细胞淋巴内皮细胞透明质酸受体1阳性表达；200，300μg/L VEGF-C156s诱导会导致细胞大量死亡。说明以质量浓度为50μg/L的VEGF-C156s诱导8 d，是脂肪干细胞诱导分化为淋巴管样内皮细胞的佳条件。 -
同种异体脂肪干细胞复合纳米级胶原基骨材料修复尺骨缺损
背景：随着医学模式的不断发展进步，人们对于骨缺损的治疗以及后期康复水平提出了更高的要求，这就使得以干细胞培养为基础的骨组织工程技术成为骨缺损治疗中较为重要的组成部分。
目的：探讨同种异体脂肪干细胞复合纳米级胶原基骨材料修复兔尺骨缺损的可行性。
方法：选取成年雌性新西兰兔70只作为研究对象，其中10只用于脂肪间充质干细胞的分离培养，60只采取随机数字表法分为单纯支架组、支架材料结合自体骨组、支架材料结合异体脂肪干细胞组，每组20只，均行尺骨中段部分切除，构建12 mm的骨缺损，然后植入相应的材料。植入材料6，9，12周测量骨密度，植入材料14周后观察3组坚固融合、非坚固融合、假关节形成比例。
结果与结论：支架材料结合异体脂肪干细胞组坚固融合比例显著高于单纯支架组、支架材料结合自体骨组，非坚固融合及假关节比例显著低于单纯支架组、支架材料加自体骨组(P <0.05)。单纯支架组坚固融合比例显著低于支架材料结合自体骨组，非坚固融合及假关节比例显著高于支架材料结合自体骨组(P <0.05)。支架材料结合异体脂肪干细胞组植入材料后第6，9，12周骨密度明显高于单纯支架组、支架材料结合自体骨组(P <0.05)。单纯支架组骨密度明显低于支架材料结合自体骨组(P <0.05)。结果表明同种异体脂肪干细胞复合纳米级胶原基骨材料修复尺骨缺损效果确切，骨密度较高。 -
Wnt信号途径促进脂肪间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞分化
背景：脂肪间充质干细胞向Ⅱ型肺泡上皮细胞定向分化的能力以及调节机制尚未完全阐明。
目的：观察脂肪间充质干细胞在体外分化为Ⅱ型肺泡上皮的能力以及W nt途径对分化的调节作用。
方法：取大鼠脂肪组织，体外分离培养脂肪间充质干细胞并通过流式细胞术进行鉴定。实验分为对照组、小气道生长液组和Wnt3a组，对照组用普通DMEM培养基培养，小气道生长液组和Wnt3a组均使用小气道生长液培养，且Wnt3a组加入Wnt信号通路激动剂Wnt3a培养。诱导10 d后分别通过qRT-PCR和免疫荧光检测Ⅱ型肺泡上皮标志物肺表面活性蛋白B，C，D的表达，并于诱导5 d和10 d时通过Western blot检测磷酸化β-catenin和GSK-3β。
结果与结论：大鼠脂肪组织中可成功分离出纯度较高的脂肪间充质干细胞，可表达 CD44和 CD29，不表达CD11b和CD45；经小气道生长液诱导后，脂肪间充质干细胞中肺表面活性蛋白B，C，D蛋白和mRNA表达均上调(P <0.01)，表明其可被诱导为Ⅱ型上皮细胞；加入Wnt3a后，经诱导的脂肪间充质干细胞中肺表面活性蛋白B，C，D蛋白和mRNA表达均高于小气道生长液组(P <0.01)，且在诱导过程中磷酸化β-catenin表达随时间逐渐上调而GSK-3β表达逐渐下调(P <0.01)。结果证实，Wnt信号通路在脂肪间充质干细胞诱导分化为Ⅱ肺泡上皮细胞过程中激活并促进干细胞的定向分化。 -
人皮下脂肪干细胞的成骨、成脂分化诱导及鉴定
背景：脂肪干细胞是从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的间充质干细胞，在组织工程中比骨髓间充质干细胞具有更多优势，是当今的研究热点之一。
目的：在体外建立一种分离纯化人皮下脂肪来源脂肪干细胞的方法，进行体外培养扩增及诱导其向成骨、成脂细胞分化。
方法：通过密度梯度离心和贴壁筛选法相结合，对人脂肪干细胞进行分离、体外培养及扩增。倒置显微镜下观察人脂肪干细胞的细胞形态和生长特性。选取第2代及第5代细胞，用CCK-8法检测细胞活性，绘制细胞生长曲线，用流式细胞仪检测细胞表面抗原标记。选取第5代细胞，分别进行成脂及成骨诱导分化，以确定其多向分化潜能。
结果与结论：①采用密度梯度离心和贴壁培养相结合方法，可成功从人脂肪组织中获得纯度较高的人脂肪干细胞。②人脂肪干细胞经历了生长滞缓期、对数增殖期和生长平台期，符合正常细胞的生长规律，且其生长具有对数生长期，其倍增时间较短。③人脂肪干细胞表达干细胞表面抗原标记，具有低免疫原性，且具有成脂成骨多向分化潜能。④DAPI是一种简单、有效的标记人脂肪干细胞的方法，DAPI不损伤细胞活性，对细胞标记率高。 -
卵巢癌细胞中CD90+肿瘤干细胞的生物学特性
背景：肿瘤干细胞与卵巢癌的发生和发展等之间存在十分密切的联系，CD90+是一种重要的肿瘤干细胞标志物。
目的：探索卵巢癌细胞中CD90+肿瘤干细胞生物学特性。
方法：获得原代卵巢癌细胞并进行分析，对人卵巢癌细胞系SKOV3和原代卵巢癌细胞的CD133和CD90阳性率进行流式细胞术检测，分选获得 CD90+和 CD90-细胞，并通过反转录 PCR法对其干细胞和上皮间质化相关基因mRNA的相对表达情况进行检测。通过Transwel 小室侵袭试验对细胞侵袭能力进程观察，利用克隆形成试验对细胞增殖分化能力进行观察，利用悬浮成球试验对干细胞潜能进行观察。并通过免疫缺陷小鼠体内有限稀释成瘤试验，对成瘤时间以及成瘤率进行观察。
结果与结论：SKOV3细胞的CD133和CD90阳性率均显著低于原代卵巢癌细胞。SKOV3细胞系CD90+干细胞相关基因mRNA相对表达CD133和OCT4均显著高于SKOV3细胞系CD90-干细胞；原代卵巢癌细胞CD90+干细胞中CD44、CD133、乙醛脱氢酶1和OCT4均显著高于原代卵巢癌细胞CD90-干细胞。SKOV3细胞系CD90-和CD90+干细胞的上皮间质化相关基因mRNA相对表达水平差异有显著性意义，原代卵巢癌细胞CD90-和CD90+干细胞的上皮间质化相关基因mRNA相对表达水平差异有显著性意义。随着接种细胞数量的增加，CD90-和 CD90+细胞成瘤率呈现出不断上升的情况，成瘤时间则不断下降。其中，CD90+干细胞的上升较之 CD90-干细胞更为显著。SKOV3细胞系和原代卵巢癌细胞的 CD90+干细胞穿膜细胞数、细胞克隆数、悬浮成球数量均显著大于CD90-干细胞。提示卵巢癌细胞中CD90+干细胞可高表达干细胞相关基因和间质属性基因，并具备较高的侵袭、增殖分化能力以及成瘤能力和较大的干细胞潜能。 -
联合两种成体干细胞快速构建组织工程骨在植骨融合中的应用
背景：尽管应用一种干细胞进行组织修复已取有重大进展，但联合两种或多种干细胞构建组织工程骨的研究尚不多见。
目的：观察脂肪干细胞联合骨髓间充质干细胞/异体骨植入兔腰椎后路横突间植骨融合模型的骨修复效果。
方法：新西兰大白兔75只，随机分为5组，分别在各组兔L5、L6腰椎横突融合模型中做以下处理：①植入骨髓间充质干细胞/异体骨复合骨条，周围注入脂肪干细胞悬液。②植入骨髓间充质干细胞/异体骨复合骨条，周围注入生理盐水。③单纯植入异体骨条，周围注入脂肪干细胞悬液。④单纯植入异体骨条，周围注入生理盐水。⑤植入自体骨条。术后1，3，5周用PET/CT对各组动物行全身显像，比较各组植骨区SUV值。
结果与结论：各组植骨区PET/CT图像均显示了不同程度的骨融合和骨代谢增强。各组植骨区SUV值随时间增加而增高，但单纯异体骨组3个时间点的SUV值差异无显著性意义(P >0.05)，其他各组第3周和第5周时SUV值均高于第1周(P <0.05)，且第3周与第5周差异无显著性意义(P >0.05)。术后第3周，脂肪干细胞联合骨髓间充质干细胞/异体骨组的SUV值优于骨髓间充质干细胞/异体骨组和自体骨组，差异有显著性意义(P <0.05)，说明联合脂肪干细胞和骨髓间充质干细胞快速构建组织工程骨具有良好的成骨和血管化作用。 -
以EdU体外标记人脐带间充质干细胞：5，10μmol/L是其适浓度
背景：EdU为新一代细胞核标记物，目前对此标记的研究较少。
目的：采取EdU标记人脐带间充质干细胞，筛选出EdU标记人脐带间充质干细胞的适浓度。
方法：采用组织块法分离、纯化及传代培养人脐带间充质干细胞，倒置显微镜观察其形态及生长情况，流式细胞仪鉴定细胞表面标志物，并进行成脂诱导分化能力鉴定。分别采用5，10，20，50，100μmol/L浓度的EdU标记脐带间充质干细胞24 h，选择标记率高的优化浓度，绘制细胞增殖曲线。
结果与结论：倒置显微镜下观察细胞为贴壁生长，形态为长梭形，且EdU标记后的细胞形态与其一致，流式细胞仪检测CD44呈阳性表达，成脂诱导后具有向脂肪细胞分化的能力。5，10μmol/L EdU的标记率高，两种浓度标记的人脐带间充质干细胞生长曲线未见明显差异，故5，10μmol/L是体外标记人脐带间充质干细胞的适浓度。
