细胞凋亡在干眼症发病中的作用及相关机制的研究进展

干眼症是由多种因素相互作用所致的一种泪液和眼表疾病,发病率较高,发病原因有多种,而细胞凋亡在干眼症的发病机制中占有非常重要的地位.细胞凋亡是由多蛋白严格控制的主动过程,涉及一系列相关蛋白的激活、表达及蛋白调控等,文章将对细胞凋亡的机制及其在干眼症发病中的作用进行综述.

茶多酚对氧化应激状态下人脐静脉内皮细胞凋亡蛋白的调节作用

血管内皮细胞对于维持血管结构和功能完整具有重要意义,研究显示低密度脂蛋白经酶性和非酶性途径氧化修饰成氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL),引起血管内皮细胞损伤和功能改变,是动脉粥样硬化发生的始动因素.本实验以抗氧化剂茶多酚作为受试物,从凋亡角度观察了茶多酚抑制ox-LDL对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的毒性作用,旨在为茶多酚的进一步广泛应用提供科学依据.

基于"异类相制"的雷公藤复方对小鼠精母细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨雷公藤复方单体成分对小鼠精母细胞凋亡及凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax),半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的影响.方法:建立体外培养小鼠精母细胞体系,实验分为空白组,雷公藤甲素3.5 mg·L-1组,雷公藤甲素3.5 mg·L-1+梓醇3 mg·L-1组,雷公藤甲素3.5 mg·L-1+三七总皂苷12 mg·L-1组,雷公藤甲素3.5 mg·L-1+草酸铵1.5 mg·L-1组,雷公藤甲素3.5 mg·L-1+青藤碱0.75 mg·L-1组.流式细胞仪测定药物作用24 h后精母细胞凋亡率,Western blot测定精母细胞Bax,Bcl-2,Caspase-3蛋白表达情况.结果:梓醇、三七总皂苷可减轻雷公藤甲素对小鼠精母细胞凋亡的诱导作用,与雷公藤甲素比较有明显差异(P＜0.05),草酸铵和青藤碱组与雷公藤甲素组相比无明显差异;雷公藤甲素促使Bax,Caspase-3蛋白表达上调,Bcl-2蛋白表达下调,与正常比较差异显著(P＜0.01),雷公藤甲素配伍梓醇、三七总皂苷后Bax,Caspase-3蛋白表达下调,Bcl-2蛋白表达上调,与雷公藤甲素比较较有明显差异(P＜0.05).而配伍草酸铵及青藤碱则差异不明显.结论:雷公藤甲素可引起精母细胞凋亡,并通过Bax/Bcl-2,Caspase-3系统启动精母细胞凋亡.而雷公藤复方组成中其他药物组分可不同程度抑制雷公藤甲素引起的精母细胞凋亡,减轻其雄性生殖毒性.

流式细胞仪检测清开灵注射液及其有效成分诱导HL-60细胞凋亡及其机理研究

我们通过流式细胞仪检测证明:清开灵注射液及其有效成分黄芩甙、猪去氧胆酸体外作用以诱导HL-60细胞凋亡为主,体外作用6h可诱导产生凋亡早期蛋白AnnexinV,并同时增加Fas蛋白表达,降低bcl-2蛋白表达(P＜0.01).牛黄胆酸可同时上调Fas和bcl-2表达,无明显诱导细胞凋亡作用.

蒙药寒水石化灰小剂对S-180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用相关研究

目的:探讨蒙药寒水石化灰小剂对S-180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响及凋亡相关蛋白的调控作用.方法:建立S-180荷瘤小鼠模型,随机分为模型组,阳性对照组,环磷酰胺+寒水石化灰小剂低剂量联合给药组,寒水石化灰小剂高、中、低剂量组.各组连续给药后,称瘤重、脾重,计算抑瘤率、脾系数;ELISA法检测血清中免疫相关因子TNF-α、IL-6、IL-10的含量;取肿瘤组织常规HE染色镜下观察肿瘤组织;应用Western Blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax和血管内皮细胞标志物CD34的表达.结果:与模型组相比,各给药组的瘤重均显著降低,抑瘤率分别为阳性对照组50.28％,联合给药组54.73％,寒水石化灰小剂高、中、低剂量组分别为31.07％、36.05％、13.14％.联合给药组和寒水石化灰小剂高、中剂量组IL-6含量均显著高于模型组和阳性对照组;联合给药组和寒水石化灰小剂高、中剂量组IL-10含量均显著低于模型组(P＜0.05,P＜0.01).模型组病理切片观察发现模型组肿瘤组织血管丰富,坏死率约为10％-15％,联合给药组,寒水石化灰小剂高、中剂量给药组血管相对较少,纤维化明显,坏死率明显高于模型组;肿瘤组织的Bcl-2蛋白表达显著降低,而Bax蛋白表达显著增加,Bcl-2/Bax比值显著降低(P＜0.05).结论:寒水石化灰小剂可能是通过调节免疫,调控凋亡相关蛋白的表达,抑制肿瘤血管生成相关蛋白表达,发挥抑制肿瘤生长的作用;同时,寒水石化灰小剂与环磷酰胺有协同抗肿瘤作用.

健脾益肾活血法对ITP小鼠淋巴细胞Fas/FasL蛋白表达的影响

目的:观察健脾益肾活血法对特发性血小板减少性紫癜(ITP)模型小鼠淋巴细胞Fas/FsaL蛋白表达的影响.方法:BALB/c小鼠随机分为空白对照组、模型对照组、PA对照组和JYH低、中、高剂量组,各组连续灌胃14d.于实验第5天开始,除空白对照组外,各组连续腹腔注射豚鼠抗小鼠血小板血清(GP-APS)复制ITP模型.检测外周血血小板(PLT)、平均血小板体积(MPV)、血小板分布宽度(PDW)、血小板压积(PCT),淋巴细胞Fas/FsaL表达阳性率.结果:与空白对照组比较,模型对照组小鼠PLT数量明显减少(P＜0.05),与模型对照组比较,PA对照组和JYH低、中剂量组PLT数量明显增加(P＜0.05)；模型对照组MPV均值明显高于空白对照组(P＜0.05),与模型对照组比较,JYH中剂量组MPV明显降低(P＜0.05)；模型组小鼠淋巴细胞Fas+/FsaL+表达与空白对照组比较显著上调(P＜0.05),与模型对照组比较,JYH低、中、高剂量组及PA对照组可不同程度下调其Fas+/FsaL+表达(P＜0.05).结论:健脾益肾活血法对ITP小鼠淋巴细胞Fas/FsaL异常表达具有调节作用.

加味小柴胡汤对顺铂诱导的BRL细胞相关凋亡蛋白表达的影响

目的:探讨加味小柴胡汤对顺铂诱导的大鼠肝BRL细胞凋亡蛋白表达的调控作用.方法:将培养的BRL细胞分为空白组、顺铂组、实验1组(加味小柴胡汤大剂量)、实验2组(小剂量)4组.采用MTT、TUNEL、DNA琼脂糖凝胶电泳、免疫组化、完整细胞蛋白质斑点印迹等方法,检测各组细胞存活率、凋亡率及细胞相关凋亡蛋白的变化.结果:顺铂组细胞凋亡率比空白组明显升高,Rb、p21、Caspase-3、Bax、wp53蛋白表达上调;存活率显著降低,Bcl-2、mp53表达下调;实验1组、2组凋亡率明显较顺铂组降低,存活率升高,其他各指标皆与顺铂组有明显差异,1组作用更明显.结论:加味小柴胡汤可使顺铂诱导的BRL细胞存活率升高,凋亡率降低,对顺铂诱导BRL细胞凋亡蛋白的异常表达有调控作用.

软坚消瘿汤对自身免疫性甲状腺炎大鼠细胞因子及凋亡蛋白Fas、Fasl表达的影响

目的 观察软坚消瘿汤对实验性自身免疫性甲状腺炎(EAT)大鼠自身抗体,白细胞介素-1(IL-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和凋亡蛋白Fas、Fasl的影响,从细胞因子和凋亡蛋白关系角度探讨其作用机制.方法 SPF级SD雌性大鼠60只分为正常组、模型组,模型组运用甲状腺球蛋白与弗氏佐剂混合免疫注射法,联合饮用高碘水模拟大鼠EAT.造模完成后的大鼠分为中药组、雷公藤组、模型组.酶联免疫法检测甲状腺抗体、IL-1及TNF-α水平,免疫组化染色法检测大鼠甲状腺细胞Fas,Fasl变化.结果 软坚消瘿汤能显著降低EAT大鼠血清自身抗体、IL-1及TNF-α水平,降低甲状腺细胞Fas、Fasl表达.结论 软坚消瘿汤通过降低EAT血清中自身抗体及细胞因子水平,致使凋亡相关蛋白Fas、Fasl表达下降,从而起到减轻甲状腺细胞凋亡作用.

夹脊电针对脊髓损伤小鼠运动功能及凋亡蛋白的影响

目的 观察夹脊电针对脊髓损伤小鼠模型运动功能及凋亡蛋白的影响.方法 96只C57BL/6雌性小鼠随机分为假手术组、模型组、针刺组和电针组[疏密波(2/100 Hz),0.2 mA,15 min],每组24只,采用腹腔注射麻醉剂制备T10SCI模型.选择T8和T12两对夹脊穴进行针刺治疗,每天1次,干预28 d.观察CatWalk步态分析,采用Western Blot测定脊髓P53、Bax、Bcl-2蛋白表达.结果 与模型组同期比较,电针组14、28 d小鼠爪印面积、支撑时相比增加,P53表达降低,28 d下肢摆动速度加快(P＜0.05);针刺组28 d小鼠下肢摆动速度、支撑时相比增加,7、14、28 d P53表达降低(P＜0.05);电针组和针刺组3～28 d Bax表达降低,7～28 d Bcl-2表达升高(P ＜0.01,P＜0.05).与针刺组同期比较,电针组28 d爪印面积变大、支撑时相比增加,P53表达降低,7、14 d Bax表达降低,7、28 d Bcl-2表达升高(P＜0.05).结论 夹脊电针可促进脊髓损伤小鼠运动功能恢复,抑制P53、Bax和促进Bcl-2表达.

归脾汤对苯中毒小鼠外周血、骨髓有核细胞及细胞凋亡蛋白Fas、FasL表达的影响

目的:观察归脾汤对苯中毒小鼠外周血、骨髓有核细胞计数及骨髓细胞凋亡蛋白Fas、FasL表达的影响,初步揭示归脾汤可能减轻苯中毒对小鼠骨髓造血功能损害并提高外周血象的机理.方法:将72只小鼠随机分为正常对照组、模型组、西药组以及归脾汤大、中、小剂量组,每组12只.除正常对照组外,其余组进行熏苯复制苯中毒模型.造模后,归脾丸大、中、小剂量组分别给予归脾汤溶液8、4、2mg/(kg·d)灌胃;西药组给予利血生1.5mg/(kg·d)和鲨肝醇5mg/(kg·d)混悬液灌胃;正常对照组和模型组给予生理盐水灌胃,均每天1次,连续3周.应用全自动血细胞分析仪、流式细胞仪及SABC检测试剂,分别检测外周血细胞、骨髓有核细胞计数及Fas、FasL蛋白的表达.结果:归脾丸可明显升高外小鼠周血白细胞(WBC)、血红蛋白(HGB)(P<0.05或P<0.01),而对血小板作用差别无统计学意义(P>0.05);与模型组比较,归脾汤高、低剂量组及西药组骨髓有核细胞计数均明显增加,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,归脾汤大剂量组、西药组能明显降低骨细胞凋亡蛋白Fas、FasL的表达(P<0.05);与西药组相比,归脾汤大剂量组及小剂量组能对Fas、FasL的影响无统计学意义(P>0.05).结论:归脾汤可改善苯中毒小鼠骨髓造血组织,提高骨髓有核细胞计数以促进骨髓增生,同时也可降低骨细胞凋亡蛋白的表达,达到减轻苯中毒对小鼠骨髓造血功能的损害,改善外周血象.

黑绛丹对大鼠放射性皮炎创面细胞凋亡相关蛋白表达的影响

目的 观察黑绛丹治疗放射性皮炎的可能作用机制.方法 55只大鼠采用60Co源局部照射建立大鼠Ⅳ度放射性皮炎动物模型,将48只造模成功的大鼠随机分为黑绛丹组、对照1组、对照2组、模型组,每组12只,各组分别外敷黑绛丹溶液、重组人表皮生长因子外用溶液、水溶维生素E、生理盐水1ml,每日1次,连续给药10天.另设空白组12只,予生理盐水外敷模型组大鼠同样部位.透射电镜观察各组创面组织细胞超微结构,并检测各组创面组织细胞凋亡相关因子,即死亡相关因子(Fas)、死亡相关因子配体(FasL)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8(Caspase-8)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶9 (Caspase-9)、B细胞淋巴瘤2(Bcl-2)、B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(Bax)、抗癌基因p53(p53)、细胞色素C(Cyto-C)、凋亡诱导因子(AIF)蛋白表达.结果 模型组细胞核染色质浓聚,线粒体肿胀,粗面内质网扩张,呈凋亡细胞改变;黑绛丹组和对照l组细胞线粒体结构正常,见胶原纤维,桥粒丰富;对照2组细胞核染色质浓缩,粗面内质网扩张.与模型组比较,黑绛丹组创面组织Fas、Bax、Caspase-3、CaspaSe-8、Caspase-9、Cyto-C及AIF表达显著降低,Bcl-2表达显著升高(P＜0.01).与对照1组比较,黑绛丹组Fas、Caspase-8 p53、Caspase-3、Bcl-2、Cyto-C、Bax表达显著升高(P＜0.05或(P＜0.01);与对照2组比较,黑绛丹组Caspase-8、Bax、Caspase-9、Cyto-C、AIF表达降低,Bcl-2、FasL表达升高(P＜0.05或(P＜0.01). 结论 黑绛丹可通过抑制局部创面组织细胞凋亡、调节凋亡相关蛋白表达从而减轻大鼠放射性皮炎损伤程度.

基于压缩感知预测凋亡蛋白亚细胞位点

目的 蛋白质的亚细胞位点信息有助于了解蛋白质的功能,同时还可以为新药物的研发提供帮助.方法 在本研究中,采用压缩感知算法对凋亡蛋白的亚细胞位点进行分类.结果 经过在2个常用的数据集上使用Jackknife测试,在ZD98数据集上取得了90.6％的预测准确率,在ZW225数据集上取得了87.3％的准确率.结论 实验结果表明压缩感知算法对已凋亡蛋白的亚细胞定位研究效果良好,且避免了特征提取的过程.

线粒体相关凋亡蛋白的研究进展

线粒体是细胞凋亡发生的核心,线粒体通路是细胞凋亡的重要通路之一.与线粒体相关的一些重要蛋白如:BCL-2家族蛋白、凋亡诱导因子、细胞色素C等在细胞凋亡过程中各司其职,共同调控着凋亡的发生发展,对细胞凋亡产生重要的作用.

活性氧在脊髓损伤中的作用及损伤机制

目的 研究脊髓损伤(SCI)后脊髓组织中丙二醛(MDA)的动态水平变化和神经细胞凋亡及其凋亡相关因子表达的变化,探讨活性氧(ROS)在SCI后的作用及其分子机制.方法 成年雄性大鼠132只,用改良的Allen法复制大鼠急性SCI模型,致大鼠脊髓(T_(10))中度挫伤,采用化学比色法测定不同时间段受损脊髓组织的MDA含量;免疫组织化学法分析受损脊髓组织区域凋亡相关因子Caspase-3、Bcl-2和Bax的表达变化;荧光原位缺口末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡.结果 SCI 后6h,脊髓组织中MDA含量明显增高并维持到损伤后5d,期间在6h和3d出现两次高峰, 7d基本恢复正常;SCI后6h 脊髓组织中凋亡细胞开始增多,3d达高峰,以后逐渐减少,各时间点与假手术组比较有显著性的差异;Bcl-2和Bax蛋白损伤后6h开始有较多的表达,以后快速增多,5d达高峰,然后逐渐回落.Caspase-3蛋白在损伤后6h开始增多, 3d达高峰,以后逐渐减少.3种凋亡相关因子在各时间点与假手术组比较有显著性差异;甲基强的松龙(MPSS)治疗组与SCI组比较:MDA含量、凋亡细胞数、凋亡因子Caspase-3和Bax表达减少,Bcl-2表达增加,并且在部分时间点有显著性差异.结论 在SCI后ROS可能通过促进Caspase-3表达和降低Bcl-2/Bax之间的比值诱导神经细胞凋亡,从而加重了SCI继发性损伤.

凋亡蛋白:特异性触发肿瘤细胞死亡的蛋白质

特发性血小板减少性紫癜患者B淋巴细胞的特征

为了探讨特发性血小板减少性紫癜(ITP)的发病机制,我们对50例ITP患者(正常对照30例)外周血总B淋巴细胞、CD5+ B淋巴细胞的数量,B淋巴细胞Fas蛋白、FasL蛋白,CD40+、CD80+和CD86+表达率,胞浆内凋亡蛋白bcl-2的表达水平进行了测定.

肝硬化患者血浆降钙素原与肝细胞凋亡及Fas/FasL表达的关系

通过检测肝硬化患者血浆降钙素原(procalcitonin,PCT)水平,并同步观察肝细胞凋亡和肝组织凋亡蛋白Fas/FasL的表达状况,探讨它们之间的相互关系及在肝硬化病情演变中的作用.

买朱尼含药血清对IL-1β作用下兔软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的 研究买朱尼·阿扎拉克含药血清对兔关节炎性软骨细胞的增殖和凋亡的调控作用.方法 10只新西兰白兔平均分为五组,分别灌胃生理盐水、买朱尼药液1.1 g、买朱尼药液2.2 g、买朱尼药液4.4 g及塞来昔布药液11.0 mg/(kg·d),用于制备含药血清.细胞学实验分组及处理分别为:正常组(空白血清);模型组(空白血清+10 ng/ml IL-1β);生理盐水组(空白血清+10 ng/ml IL-1β+生理盐水);买朱尼低剂量组(买朱尼低剂量血清+10 ng/ml IL-1β);买朱尼中剂量组(买朱尼中剂量血清+10 ng/ml IL-1β);买朱尼高剂量组(买朱尼高剂量血清+10 ng/ml IL-1β);阳性对照药组(塞来昔布血清+10 ng/ml IL-1β).EdU法检测细胞增殖;Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;蛋白质印迹法检测细胞凋亡相关蛋白(Caspase-3,Caspase-7和Caspase-8)的表达水平.结果 与模型组相比,买朱尼各剂量组显著增加软骨细胞增殖(P ＜0.001),中和高剂量组显著减少软骨细胞的早期凋亡(P ＜0.05),各剂量组Caspase-3,Caspase-7和Caspase-8表达水平显著下降,且均具有剂量依赖性.结论 买朱尼·阿扎拉克通过减少凋亡蛋白表达对兔关节炎性软骨细胞具有保护作用.

二氮嗪预处理对 H2 O2损伤 L6骨骼肌成肌细胞的作用及机制研究

目的：：研究二氮嗪( diazoxide, DZ)预处理对H2 O2损伤L6骨骼肌成肌细胞( skeletal myoblast, SKM)的保护作用,并探讨其与磷脂酰肌醇3激酶( phosphatidylinositol-3 kinase, PI3K)/Akt信号通路的关系。方法：体外培养的L6 SkMs随机分为4组：对照组、H2O2损伤组(H2O2 group；0.40mmo1/L H2O2作用24 h),DZ预处理组(DZ group；200μmol/L DZ预处理30 min后,0.40mmo1/L H2O2作用24 h),LY294002抑制剂组(LY group；200μmol/L DZ和50μmol/L LY294002共同孵育30 min后,0.40mmo1/L H2O2作用24 h)。采用MTT比色法检测各组细胞存活率；Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测各组细胞凋亡率；Western blot-ting法检测各组细胞P-Akt、Caspase-3、Caspase-9的表达水平。结果：与对照组相比,H2 O2损伤可诱导细胞凋亡,显著降低细胞存活率,降低P-Akt蛋白表达而增加Caspase-3,9蛋白表达。与H2 O2组比较,DZ组的细胞存活率显著上升,凋亡率显著下降, P-Akt蛋白表达明显增加而Caspase-3,9表达明显降低。而PI3 K抑制剂LY294002能够显著抑制DZ预处理对细胞的保护和抗凋亡作用,同时使P-Akt蛋白表达显著降低, Caspase-3,9蛋白表达显著增加。结论：DZ预处理可激活PI3 K/Akt信号通路,下调凋亡蛋白caspase-3,9,从而抑制H2 O2引起的L6 SKMs的凋亡。

LHRH类似物对肝癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:观察LHRH类似物的体内抗肝癌细胞增生活性,为LHRH类似物用于肝癌的内分泌治疗提供实验依据.方法:实验选用5-7周龄♂BALB/c裸鼠20只,分治疗组(丙氨瑞林瘤内注射组)和对照组(生理盐水瘤内注射组),用人肝癌hHCC细胞系建立肝癌荷瘤裸鼠模型,观察LHRH类似物丙氨瑞林(LHRH-A)对裸鼠移植瘤生长的影响;并分别用H-E染色和免疫细胞化学技术检测瘤组织的病理组织学改变和GnRH受体及凋亡蛋白Bax表达的变化.结果:LHRH-A瘤内注射(剂量为75 μg/d)可显著抑制肝癌移植瘤的生长.治疗3 wk后治疗组裸鼠肿瘤体积(1885.9±738.3mm3)明显小于对照组裸鼠的肿瘤体积(4223.4±1027.6mm3),两组间有统计学差异(P＜0.005);LHRH-A治疗3wk后的抑瘤率可达58%;治疗组裸鼠存活期(87.8±5.3d)较对照组(64.6±6.8d)显著延长(P＜0.05);治疗3wk后病理组织学发现治疗组瘤组织中癌细胞核分裂象减少,腺样癌组织、凋亡细胞数增多;治疗组瘤组织中表达GnRH受体的癌细胞数增加(72.5% vs 56.4%,P＜0.05),Bax阳性细胞比率增加(53.8% vs 41.5%,P＜0.05).结论:LHRH-A具有显著抑制肝癌裸鼠移植瘤细胞增生的活性,LHRH受体和凋亡蛋白Bax可能参与了LHRH-A对肝癌细胞增生的抑制作用.