中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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全反式维甲酸诱导小鼠碱性磷酸酶基因启动子区染色体重构
背景:碱性磷酸酶基因是成骨细胞分化和骨形成的重要标志.在C3H10T1/2细胞中,全反式维甲酸可通过核受体上调小鼠碱性磷酸酶的表达,与MAPK通路无关.目的:从染色体结构调控方面揭示全反式维甲酸上调碱性磷酸酶表达的分子机制.方法:10-6 mol/L全反式维甲酸处理C3H10T1/2细胞0,1,6,12 h,DNA酶Ⅰ超敏感实验确定全反式维甲酸调控区域的位置,染色质免疫共沉淀实验检验全反式维甲酸处理细胞后一系列转录相关因子与全反式维甲酸调控区域结合的量效关系以及时相分布.结果与结论:DNA聚合酶Ⅰ超敏感实验表明,小鼠碱性磷酸酶启动子转录起始位点上游约520 bp附近为潜在的全反式维甲酸调控区域;染色质免疫共沉淀实验表明,全反式维甲酸对小鼠碱性磷酸酶的上调作用是通过一系列转录相关因子的时序性共同作用来实现.表明全反式维甲酸诱导小鼠碱性磷酸酶基因转录的过程中伴随着染色质重构和组蛋白的修饰作用.
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缺血心肌梗死模型大鼠中等强度运动后梗死面积的变化
背景:目前对心肌梗死的急性期是否能进行适量的运动,且适量的运动是否对梗死心肌修复与再生有积极的意义,尚存在很大的争议.目的:观察中等强度运动对心肌梗死大鼠梗死面积的影响.方法:将48只SD大鼠随机分为雌、雄训练组和雌、雄对照组,每组12只.结扎大鼠左冠状动脉前降支建立左心室前壁梗死模型.造模24 h,训练组大鼠进行30 min/d的跑台训练,强度为20 m/min,0% grade,共持续12 d;对照组造模后正常饲养.2周后,对大鼠心肌行常规Masson's Trichrome染色,观察梗死面积和左心室几何参数的变化.结果与讨论:造模2周,训练组和对照组大鼠的死亡率十分接近(22% vs.20%).训练组(雌、雄)的心肌梗死面积明显小于对照组(P < 0.05),梗死边缘区室壁厚度大于对照组(P < 0.05),梗死区室壁小厚度也大于对照组,但差异无显著性意义 (P > 0.05).说明心肌梗死急性期即进行中等强度的跑台训练不但没有明显降低大鼠的存活率,还能有效减小缺血心肌的梗死面积、改善左心室重构,且上述作用没有性别差异.
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脑源性神经营养因子与心脏微血管内皮细胞的管状形成
背景:研究发现脑源性神经营养因子可促进内皮细胞的存活,诱导血管新生,但其促进血管新生的细胞与分子机制尚不清楚.目的:观察脑源性神经营养因子在3D体外管状形成模型中对心脏微血管内皮细胞管状结构形成的影响.方法:分离提取大鼠心脏微血管内皮细胞并培养使之形成细胞小球,将心脏微血管内皮细胞小球接种于Ⅰ型胶原-甲基纤维素的3D环境中培养,然后分别加入50,70,100 μg/L的脑源性神经营养因子继续培养,于培养24,48 h观察并测量心脏微血管内皮细胞的分枝长度和分枝条数.结果与结论:经分离的大鼠心脏微血管内皮细胞小球在Ⅰ型胶原-甲基纤维素3D环境中培养24 h,均可见管状分枝,且脑源性神经营养因子可促进管状分枝生长,以100 μg/L的脑源性神经营养因子的促生长效果明显,分枝也多.培养至 48 h,心脏微血管内皮细胞小球的分枝更长.说明脑源性神经营养因子在3D体外管状形成模型中可促进大鼠心脏微血管内皮细胞发芽及管状结构的形成,且具有剂量依赖性.
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老龄心房颤动犬模型肺静脉肌袖细胞起搏电流在异丙肾上腺素作用下的变化
背景:心房颤动是老年人常见的心律失常疾病,有研究表明肺静脉肌袖细胞起搏电流能增加快速心律失常特别是心房颤动发生的风险.目的:观察异丙肾上腺素对老龄犬肺静脉肌袖细胞起搏电流的作用.方法:选择14只老龄健康犬,7只快速起搏10周制备心房颤动模型,其余未经快速起搏处理的犬作对照.分离各组肺静脉肌袖细胞,利用全细胞膜片钳在电压钳模式下记录起搏电流.结果与结论:在0.1~10.0 μmol/L的浓度范围内异丙肾上腺素均使细胞膜起搏电流电流升高,且作用呈现出浓度依赖性,半数有效量为1.7 μmol/L (95%可信区间为1.2~2.6 μmol/L).房颤组肺静脉肌袖细胞给予1.0 μmol/L异丙肾上腺素时,起搏电流显著增加,在-120 mV的测试电位时,使其电流密度升高(P < 0.01).1.0 μmol/L异丙肾上腺素使房颤组肺静脉肌袖细胞起搏电流的稳态激活曲线向正方向移动,使半激活电压下降,更接近静息电位,同时也使激活曲线斜率(P < 0.01).结果证实,异丙肾上腺素可能通过升高肺静脉肌袖细胞起搏电流促进心房颤动的发生.
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大鼠硫酸软骨素蛋白多糖基因shRNA慢病毒载体的构建及干扰效率鉴定
背景:近研究发现硫酸软骨素蛋白多糖(NG2)在中枢神经系统中参与多种生理病理功能,慢病毒载体可感染分裂期细胞或非分裂期的细胞,并能在细胞内高效稳定的表达.目的:构建大鼠源性NG2基因shRNA慢病毒载体并检测其干扰效率.方法:选择大鼠NG2基因RNA干扰的靶序列,合成Oligo DNA,退火形成双链DNA,与Hpa Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后的pFU-GW-RNAi载体连接产生pLV-NG2-RNAi,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定.将重组载体与pHelper 1.0载体、pHelper 2.0载体通过lipofectamineTM 2000共转染293T细胞包装产生慢病毒LV-NG2-RNAi,收集病毒上清并浓缩.采用孔稀释滴度测定法计算病毒滴度.将LV-NG2-RNAi慢病毒感染C6细胞,于感染后96 h提取细胞总蛋白,采用Western blot检测NG2的表达.结果与结论:经PCR和测序证实构建片段大小及DNA序列与目的序列一致,实验成功构建大鼠NG2基因shRNA慢病毒载体LV-NG2-RNAi.包装浓缩慢病毒的滴度为8×1011 TU/L.Western blot检测显示在感染复数为50时,感染LV-NG2-RNAi慢病毒的C6细胞较感染对照慢病毒及未感染细胞NG2的表达明显降低,干扰效率可达100%(P < 0.05).结果证实了实验成功构建大鼠NG2基因shRNA慢病毒载体,且该载体能够在细胞水平有效沉默靶基因.
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放射性咀嚼肌损伤模型软组织病理改变及转化生长因子β1的表达
背景:长期的放射线累积更可引起周围组织纤维化,张口受限,严重影响肿瘤患者的生活品质.目的:观察大鼠咀嚼肌放射损伤后软组织的病理改变及体内转化生长因子β1 mRNA的表达.方法:成年Wistar大鼠30只,随机分成对照组(n=10)和放射组(n=20).放射组利用直线加速器累积照射咀嚼肌40 Gy.光镜和电镜下观察咀嚼肌放射损伤区血管病理改变及RT-PCR检测咀嚼肌放射损伤区转化生长因子β1基因表达.结果与结论:放射组咀嚼肌放射损伤区毛细血管密度较对照组明显降低(P < 0.01),转化生长因子β1 mRNA水平较对照组显著升高(P < 0.01).提示放射损伤可促使组织纤维化修复放射损伤.
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脂质体介导法转染mIMCD-3细胞的可行性及佳转染条件
背景:近年来阳离子脂质体成为基因转移较为常用的载体,但应用脂质体对mIMCD-3细胞株进行转染的相关报道较少.目的:探讨脂质体法转染mIMCD-3细胞株的可行性,并通过优化脂质体转染效率的影响因素,获得mIMCD-3的佳转染条件.方法:以绿色荧光蛋白作为报告基因,采用脂质体LipofectamineTM 2000包裹pIRES2-EGFP质粒转染mIMCD-3细胞,分别按照细胞接种密度、DNA用量、DNA与脂质体的比例、不同的质粒抽提方法、血清有无设定分组,观察以上因素对mIMCD-3细胞转染效率的影响.结果与结论:采用脂质体LipofectamineTM 2000转染mIMCD-3细胞,在2×108 L-1细胞接种浓度、1 μg DNA用量、1∶3的DNA与脂质体比例时,转染效率高.采用美国OMEGA公司生产的E.Z.N.A.Endo-Free Plasmid Mini Kit抽提的质粒能获得更高的转染效率.转染前漂洗细胞后换入无血清培养基比有血清组转染效率高(P < 0.01),而转染后6 h加入血清不影响转染效率.结果显示,脂质体法转染mIMCD-3细胞株是可行的,通过优化脂质体转染效率的影响因素,获得了mIMCD-3的佳转染条件,可作为有关研究或应用的参考.
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中药接骨Ⅰ号治疗超声透入桡骨骨折愈合过程中骨形态发生蛋白7的表达
背景:将低强度脉冲超声波与中药相结合,即中药超声透入疗法,在动物实验和临床中用于骨折的治疗并取得了确切的疗效,然而其促进骨折愈合机制的研究却少有报道.目的:观察中药超声透入对新西兰大白兔桡骨中段骨缺损愈合过程中骨形态发生蛋白7表达的影响.方法:84只兔构建双侧桡骨中段骨缺损的骨折模型,建模成功后随机分成3组:中药组给予以接骨Ⅰ号为耦合剂的低强度脉冲超声透入治疗,超声组每日于骨折部位予以普通超声耦合剂的低强度脉冲超声治疗,对照组行假刺激.分别于术后第3,6,9,12,15天取骨痂行采用RT-PCR和免疫组织化学染色法检测骨形态发生7 mRNA表达和平均吸光度值变化,第4和6周行X射线片检查以观察不同治疗方法对骨缺损愈合的疗效.结果与结论:X射线检测结果显示中药组骨折愈合效果好.中药组骨形态发生蛋白7 mRNA表达和平均吸光度值均高于超声组和对照组(P < 0.05),在术后第9和12天较明显(P < 0.01).结果证实,中药低强度脉冲超声透入疗法能促进兔桡骨骨折的修复、缩短骨折修复时间,其修复作用与促进骨形态发生蛋白7表达有关.
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人外周血内皮祖细胞增殖、凋亡及丙二醛、抗氧化因子合成与波动性高糖的影响
背景:研究表明波动性高血糖较持续性高血糖对血管内皮功能的损害可能更严重.目的:观察波动性高糖对人外周血内皮祖细胞增殖、凋亡及丙二醛、抗氧化因子合成的影响.方法:密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞.取经培养鉴定后的内皮祖细胞,细胞同化后分别给予5.5 mmol/L,20 mmol/L,5.5/20 mmol/L葡萄糖(5.5,20 mmol/L的葡萄糖培养液每8 h更换1次)及20 mmol/L甘露醇.干预72 h后,MTT法检测内皮祖细胞的增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率;比色法测定培养液中丙二醛水平及超氧化物歧化酶活力.结果与结论:20 mmol/L和5.5/20 mmol/L葡萄糖作用72 h,内皮祖细胞增殖减少、凋亡率增高(P < 0.01),培养液中丙二醛水平增高、超氧化物歧化酶活力降低(P < 0.01),均以5.5/20 mmol/L葡萄糖作用明显(P < 0.01).说明波动性高糖较恒定性高糖更易抑制内皮祖细胞增殖并促进其凋亡,其机制可能与波动性高糖环境下氧化应激水平增高有关.
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补气活血类中药黄酮与锌协同的抗自由基作用
背景:药物总黄酮的含量与药物的种类有密切的关系,将提取中药中黄酮与微量元素结合,研究药物抗自由基效果,是研究中药药效机制的有效方法.目的:观察补气活血类16种中药黄酮的含量、抗氧化作用,以及与微量元素锌协同作用抗自由基的效果.方法:采用醇提法提取丹参等补气活血类16种中药中的总黄酮,紫外分光光度法测定药物总黄酮的含量,测定不同中药黄酮与锌作用抗氧化率.结果与结论:不同补气活血类中药的总黄酮含量有一定差异,含量依次为是丹参>虎杖>赤芍>泽兰>充玉子>白芍>银杏叶>川芎>牛膝>当归>坤草>回心草>党参>黄芪>人参>郁金,但不同中药黄酮均能够抑制超氧阴离子自由基.与微量金属锌协同作用后,多数中药对超氧阴离子自由基的清除率增加,特别是人参黄铜的抗氧化能力提高效率达7倍,说明补气活血类药物作用可能与金属锌协同相关.
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人工合成多肽FGL对神经细胞模型PC12细胞增殖与凋亡的影响
背景:FGL是NCAM的核心活性多肽片段,可直接作用于成纤维细胞生长因子受体1,激活NCAM的信号传导途径.目的:观察FGL人工合成多肽联合培养对PC12细胞增殖和凋亡的作用.方法:将培养的PC12细胞分为对照组和实验组,实验组预先加入1%的FGL多肽溶液.分别于培养1,3,5,7,9 d采用细胞计数试剂8法检测细胞增殖情况.将PC12细胞分为正常组、实验组和损伤组,损伤组加入H2O2刺激16 h.实验组加入H2O2与FGL人工合成多肽刺激16 h,流式细胞仪检测细胞凋亡,荧光定量PCR法检测PC12中的核转录因子κB mRNA表达.结果与结论:FGL人工合成多肽与PC12复合培养细胞生长良好,可明显促进PC12细胞的活性并且减低PC12 细胞凋亡并可明显降低凋亡模型中PC12细胞核转录因子κB基因的表达.说明FGL多肽可以明显促进PC12细胞增殖,并可以抑制PC12细胞凋亡.
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骨性关节炎动物模型内侧副韧带的应力松弛
背景:韧带和其他生物软组织一样,具有黏弹性特性,其应力松弛和蠕变黏弹性特性是为适应人的生理功能需要而存在的.研究说明骨性关节炎对韧带力学性能具有一定影响.目的:比较正常和骨性关节炎动物模型内侧副韧带的应力松弛流变特性,确定骨性关节炎对内侧副韧带应力松弛特性的影响.方法:以闭合关节刻痕法复制骨性关节炎动物模型,取正常和骨性关节炎动物模型大鼠膝关节内侧副韧带各10个试样,进行应力松弛实验.应力松弛实验的应变增加速度为5%/s.设定实验时间为7 200 s,采集100个数据,观察应力松弛数据和曲线、应力与时间的变化规律,以一元线性回归分析的方法处理实验数据.结果与结论:正常组和病态组试样应力松弛初600 s变化较快,之后应力缓慢下降,正常组7 200 s应力松弛量0.47 MPa,病态组7 200 s应力松弛量0.29 MPa.模型组7 200 s应力松弛量显著低于正常组(P < 0.05),且应力松弛曲线是以对数关系变化的.说明骨性关节炎时可以使膝关节对内侧副韧带应力松弛量降低,对膝关节应力松弛特性具有一定影响.
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激素性股骨头坏死模型兔血管内皮细胞生长因子表达与普伐他汀的干预
背景:有研究表明他汀类药物可使体外培养的人脐静脉内皮细胞的血管内皮细胞生长因子呈高表达,血管内皮细胞生长因子可促进内皮细胞增殖,明显提高成骨细胞活性并加速骨形成.目的:观察普伐他汀对激素性股骨头坏死兔模型血管内皮生长因子的蛋白表达的影响.方法:将新西兰白兔随机分为对照组,模型组和普伐他汀组.模型组和普伐他汀组制备兔激素性股骨头缺血坏死模型.普伐他汀组建模成功后以普伐他汀(1.2 mg/kg)灌胃,1次/d,模型组和对照组以等体积的蒸馏水灌胃.于造模后8,12,16周截取各组股骨头行免疫组织化学检测血管内皮生长因子蛋白的表达情况.结果与结论:对照组不同时间点股骨头血管内皮生长因子蛋白表达均为阳性.造模后8周,模型组血管内皮生长因子蛋白表达呈阴性表达,普伐他汀组呈弱阳性表达.造模后12周,模型组和普伐他汀组血管内皮生长因子蛋白表达呈阳性表达,16周呈弱阳性表达.结果证实,普伐他汀可有效促进早期激素性股骨头坏死兔模型坏死股骨头内源性血管内皮生长因子的蛋白表达.
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创伤后深静脉血栓形成中的黏着斑激酶信号通路
背景:创伤后深静脉血栓形成的分子机制复杂,黏着斑激酶信号通路在深静脉血栓形成过程中的作用尚未阐明.目的:探讨黏着斑激酶信号通路在创伤性深静脉血栓形成中的作用.方法:取20只SD大鼠制备股骨骨折模型.造模后5 d,根据血栓形成情况将模型大鼠分为2组:血栓形成组和无血栓形成组,每组10只.另取10只正常大鼠作为对照组.无创切取大鼠股静脉血管组织,抽取总RNA,Genechip Rat Genome 430 2.0芯片测定股静脉RNA的表达,并分析黏着斑激酶信号通路基因表达的变化.结果与结论:与无血栓形成组比较,血栓形成组中黏着斑激酶信号通路细胞外基质、蛋白激酶C、Fyn、辅肌动蛋白、Vav等关键基因均上调;下调的有整联蛋白α、肌球蛋白轻链磷酸酶、c-Jun基因.结果提示黏着斑激酶信号通路可能是调控血栓生物学状态的重要信号通路.
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低频电刺激对坐骨神经损伤大鼠不同类型骨骼肌萎缩及内源性胰岛素样生长因子1表达的影响
背景:低频电刺激可以缓解骨骼肌的萎缩,但对肌纤维类型的影响尚不清楚,同时内源性胰岛素样生长因子1在萎缩后的肌纤维中的表达与电刺激的关系尚无公识.目的:观察低频电刺激对坐骨神经损伤大鼠不同类型骨骼肌纤维萎缩情况及内源性胰岛素样生长因子1表达的影响.方法:将健康雄性SD大鼠随机分为3组,切断模型组和电刺激组大鼠左侧坐骨神经制备失神经支配模型,适应5 d后,对电刺激组大鼠损伤侧腓肠肌施以2 Hz的电刺激,2次/d,每次持续20 min,正常组和模型组常规饲养.30 d后,取大鼠腓肠肌腹部,检测其肌纤维直径和数量;免疫组织化学法检测肌组织中胰岛素样生长因子1的水平.结果与结论:失神经支配后,大鼠腓肠肌Ⅰ、Ⅱ型肌纤维直径减小,Ⅰ型肌纤维数比例增大.与模型组比较,电刺激组大鼠腓肠肌Ⅰ、Ⅱ型肌纤维直径有所增大,尤以Ⅰ型肌纤维直径增大更明显(P < 0.05).同时,电刺激组大鼠腓肠肌中胰岛素样生长因子1的表达也明显高于模型组(P < 0.05).提示,2 Hz的电刺激可促进胰岛素样生长因子1的表达,减轻Ⅰ型肌纤维的萎缩.
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仙灵骨葆治疗骨质疏松大鼠:血清学及骨组织形态计量学评价
背景:目前对于骨质疏松的治疗多为抑制骨吸收,有研究报道仙灵骨葆可促进骨形成,但具体机制不清.目的:通过干预去卵巢大鼠骨质疏松动物模型,探讨仙灵骨葆对骨质疏松大鼠骨量、生物力学性能及骨代谢的影响.方法:将24只大鼠随机分为正常对照组、模型组和仙灵骨葆组.除正常对照组外,其他2组行卵巢切除.6周后仙灵骨葆组给予仙灵骨葆干预,模型组给予等量双蒸水.4周后各组留取尿液、血清检测血Ⅰ型原胶原氨基端延长肽、尿脱氧吡啶诺啉排泄率和Ⅰ型胶原氨基末端肽排泄率.取各组左侧股骨行骨密度测定,取左侧胫骨制备硬组织不脱钙切片,行骨组织形态计量学检测.结果与结论:与模型组比较,仙灵骨葆组血Ⅰ型原胶原氨基端延长肽、尿脱氧吡啶诺啉排泄率、尿Ⅰ型胶原氨基末端肽排泄率,破骨细胞数、骨吸收周长百分数显著降低(P < 0.05),而远端骨密度和骨小梁体积均显著增高(P < 0.05),结果证实,仙灵骨葆可抑制骨吸收,促进骨形成,降低去卵巢大鼠骨转换水平,进而部分阻止其骨量丢失.
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心肌梗死模型家猪存活心肌的磁共振延迟成像评价
背景:心脏磁共振延迟成像被认为是极有前景的无创性判断心肌存活状态的影像检查手段.目前常用的对比剂Gd-DTPA存在过高或过低评价存活心肌和不可逆性梗死心肌,而坏死亲和性对比剂ECIII-600可以准确地反映坏死心肌的面积.目的:对比冠脉内注射坏死亲和性对比剂在猪再灌注急性心肌梗死存活心肌诊断中的应用价值.方法:三四个月龄普通家猪12头,建立急性再灌注心肌梗死动物模型,分别冠脉内注射0.1 mmol/kg Gd-DTPA或 0.005 mmol/kg ECIII-600.胸导R波触发心电门控,T1加权FAST序列,短轴面延迟强化扫描成像.扫描结束后沿短轴面将心脏切成6 mm断面行氯化三苯基四氮唑染色和光镜检查.比较相应层面的MRI延迟强化区和氯化三苯基四氮唑染色所示梗死区的关系.结果与结论:注射Gd-DTPA的延迟成像10 min时强化区面积与氯化三苯基四氮唑染色相比过高估计梗死心肌面积约21%,30 min时强化区面积与氯化三苯基四氮唑染色结果一致,之后则过低估计坏死心肌的面积;注射ECIII-600的延迟磁共振成像在坏死区显示强烈而持续的对比增强,强化区面积与氯化三苯基四氮唑染色所示心肌梗死面积一致.说明ECIII-600增强磁共振延迟成像可以准确反映急性心肌梗死面积.Gd-DTPA评价心肌梗死面积不稳定,观察时间窗短,心脏磁共振成像应在对比剂注射后1 h以内完成.
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经皮纤维环穿刺法建立兔椎间盘退行性变动物模型
背景:合适的椎间盘退变动物模型是椎间盘组织工程研究的必要条件,但目前尚缺乏公认的模型制备方法.目的:采用C形臂辅助下经皮纤维环穿刺法制备兔椎间盘退变动物模型,并评估其可行性.方法:选定新西兰大白兔L2/3和L3/4椎间盘作为穿刺干预椎间盘,L1/2和L5/6椎间盘作为空白对照组,采用C形臂辅助下经皮穿刺法干预椎间盘.于术后2,4,8,12周各选择2只兔麻醉后拍摄兔腰椎核磁共振影像,处死动物采集椎间盘,进行椎间盘髓核蛋白多糖测定.核磁共振检查观察椎间盘退行性改变,二甲基亚甲蓝染色分光光度法测定髓核中蛋白多糖含量变化.结果与结论:术后4周穿刺干预椎间盘髓核区域核磁共振信号强度及髓核内蛋白多糖含量同空白对照组相比均下降(P < 0.05),其后两者呈现逐渐下降趋势.结果证实,C形臂X射线机辅助下经皮纤维环穿刺法可用于椎间盘退变动物模型的制备.
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雌激素替代抑制萘诱导去卵巢大鼠的晶状体氧化损伤
背景:抗氧化作用可能是雌激素对晶状体保护作用的机制之一,但此机制的具体途径目前仍不明确,同时临床上常用的几种雌激素替代治疗方法对晶状体氧化损伤的影响至今少见报道.目的:观察雌二醇及其联合孕酮对萘诱导去卵巢雌性大鼠晶状体氧化损伤模型中晶状体混浊情况、晶状体氧化防御系统、脂质过氧化产物及可溶性蛋白水平的影响.方法:将SD大鼠随机分为假手术组、模型组、雌二醇组、雌二醇+孕酮组,后3组均行双侧卵巢切除.术后2周,4组均用萘混悬液灌胃,定期行裂隙灯显微镜检查观察各组大鼠晶状体变化;灌胃6周后检测晶状体氧化防御系统、脂质过氧化产物及可溶性蛋白水平,测定血清雌二醇和孕酮水平.结果与结论:与模型组相比,雌二醇组、雌二醇+孕酮组及假手术组晶状体混浊程度轻,出现时间晚,而晶状体超氧化物歧化酶、谷胱甘肽、维生素C,可溶性蛋白含量,血清雌二醇与孕酮水平增高(P < 0.05或P < 0.01),丙二醛水平降低(P < 0.05).结果证实,雌二醇及其联合孕酮两种替代治疗方法对萘诱导去卵巢雌性大鼠晶状体的氧化损伤均有抑制作用,其机制与晶状体氧化防御系统的活性、抑制脂质过氧化产物的形成并维持可溶性蛋白的水平有关,抑制晶状体的氧化损伤是雌激素替代治疗发挥晶状体保护作用的机制之一.
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多效生长因子及血小板源性生长因子在增龄鼠椎间盘中的表达
背景:在组织缺氧状态下,多效生长因子能够直接参与新生血管的生成,在人类腰椎间盘退变方面起重要的作用.目的:观察增龄鼠椎间盘中多效生长因子和血小板源性生长因子的表达,及其与椎间盘退变的关系.方法:取1,3,6,12,18月龄Wistar大鼠各10只.采用免疫组织化学染色方法检测椎间盘组织中多效生长因子及血小板源性生长因子的表达情况.采用Spearman相关分析方法对多效生长因子和血小板源性生长因子的相关性进行分析.结果与结论:随着大鼠月龄的增加,椎间盘细胞中多效生长因子及血小板源性生长因子的表达有逐渐减低的趋势,但至18月龄又有所增加.同月龄组椎间盘细胞中,多效生长因子及血小板源性生长因子在终板的表达高于髓核和纤维环(P < 0.05).多效生长因子及血小板源性生长因子在椎间盘组织中的表达有一定的相关性(P < 0.01).提示大鼠椎间盘结构随月龄增加发生退行性变,多效生长因子及血小板源性生长因子参与了大鼠椎间盘的退变.
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p38MAPK信号通路与应力介导成肌细胞的凋亡
背景:在体内条件下,细胞力学的功能研究因其所处生理环境的复杂性、实验条件的不易控制而很难得到满意结果.目的:在成功构建成肌细胞体外培养-力学刺激模型的基础上,研究p38MAPK信号通路在成肌细胞凋亡中的作用及其机制.方法:将体外培养的C2C12细胞分为对照组和SB203580组,SB203580组中加入 20 mmol/L的p38MAPK抑制剂SB203580.应用细胞应力加载装置Flecell Strain Unit-5000T给细胞提供15%的力值,分别施加0,6,12,24 h的周期性张应力.每分钟10个循环,每循环包括3 s牵张,3 s松弛.Hoechst 33258染色观察细胞的形态学变化;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR法检测促凋亡基因bax mRNA的表达;Western blot检测信号通路中p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达.结果与结论:随着加力时间的延长,细胞逐渐出现核固缩及凋亡小体,凋亡率增加(P < 0.05),bax mRNA表达增多(P < 0.05);细胞p38MAPK和p-p38MAPK蛋白均在加力6 h达到低,此后逐渐升高.p38MAPK抑制剂SB203580可抑制加力引起的细胞凋亡,减少bax mRNA及p38MAPK和p-p38MAPK蛋白的表达(P < 0.05).说明p38MAPK信号通路在应力介导的成肌细胞凋亡中起到重要的作用.
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间歇性高糖对胰岛β细胞生长及细胞周期进程的影响
背景:间歇性高糖可阻滞胰岛β细胞生长,增加β细胞的凋亡,但具体作用机制尚不清.目的:观察间歇性高糖对大鼠胰岛素细胞增殖、凋亡及对细胞周期进程的影响.方法:实验对大鼠胰岛素细胞进行培养,分为正常糖对照组,恒定性高糖组和间歇性高糖组,分别含葡萄糖5.5,30,30和5.5 mmol/L间歇换液.采用细胞计数试剂盒检测细胞增殖活性,流式细胞仪测定细胞周期,Annexin-V/PI双标流式细胞术检测细胞凋亡,应用Western blot检测细胞周期调控蛋白Cyclin D1的表达水平.结果与结论:与正常糖对照组相比,恒定性高糖组及间歇性高糖组均明显抑制大鼠胰岛素细胞细胞的生长(P < 0.01),增加大鼠胰岛素细胞的凋亡(P < 0.01),明显抑制细胞周期进程,使大鼠胰岛素细胞的细胞周期更多滞留在G0/G1期(P < 0.01),能显著减弱细胞周期调控蛋白Cyclin D1的表达(P < 0.01).与恒定性高糖组相比,间歇性高糖以上各指标作用均更显著(P < 0.01).结果证实,间歇性高糖能够抑制大鼠胰岛素细胞的生长,增殖和诱导凋亡,其机制可能是通过降低Cyclin D1的活性,使细胞阻滞在G0/G1期,抑制细胞周期进程,从而减弱细胞的增殖活性.
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缺血性糖尿病足部溃疡皮肤Vδ1T细胞胰岛素样生长因子1与诱生型一氧化氮合酶的表达
背景:皮肤Vδ1T细胞分泌的一系列细胞因子能促进伤口愈合,但与糖尿病足部皮肤组织溃疡难以愈合的关系尚未见报道.目的:观察缺血性糖尿病患者足部溃疡皮肤Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子1与诱生型一氧化氮合酶的表达.方法:选取缺血性糖尿病足部溃疡患者及正常对照者足部全层皮肤,各10例.双酶标免疫荧光标记测量Vδ1T细胞及胰岛素样生长因子1、诱生型一氧化氮合酶蛋白表达.结果与结论:缺血性糖尿病足部溃疡患者Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子1蛋白表达较对照者明显减少(P < 0.01);诱生型一氧化氮合酶蛋白表达明显增加(P < 0.01).提示Vδ1T细胞中胰岛素样生长因子1减少可能与缺血性糖尿病足部溃疡难以愈合有关,而胰岛素样生长因子1减少与溃疡皮肤Vδ1T细胞诱生型一氧化氮合酶表达增加,产生氧化应激有关.
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模拟失重状态下成骨细胞胰岛素样生长因子1基因表达与降钙素的干预
背景:航天飞行、长期卧床等低重力负荷状态会引起骨吸收和骨形成的代谢紊乱,导致骨质疏松.有研究显示降钙素有直接促进成骨细胞增殖的作用,并可增加成骨细胞胰岛素样生长因子1 mRNA的表达.目的:观察降钙素和体外模拟失重状态对成骨细胞功能及胰岛素样生长因子1基因表达的影响.方法:采用二次酶消化法提取新生SD大鼠颅骨的成骨细胞,凝胶化形成成骨细胞海藻酸钠微包囊后进行实验.实验分为正常重力组、模拟失重组、模拟失重+降钙素(10,40,80 IU/L)组.将细胞置于模拟失重三维回转培养器中培养72 h后,检测成骨细胞的增殖、凋亡及碱性磷酸酶活性;采用RT-PCR 方法检测胰岛素样生长因子1、碱性磷酸酶、骨钙素mRNA的表达.结果与结论:与正常重力组比较,模拟失重组细胞增殖率及培养基中碱性磷酸酶活性均明显降低(P < 0.01),胰岛素样生长因子1、骨钙素、碱性磷酸酶mRNA表达减少,凋亡增多;与模拟失重组比较,模拟失重+降钙素组细胞增殖率,胰岛素样生长因子1、骨钙素、碱性磷酸酶mRNA表达均有所增加,但无剂量依赖关系.说明降钙素可通过上调胰岛素样生长因子1 mRNA表达改善模拟失重条件下成骨细胞的增殖与分泌功能.
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骨关节病患者肌纤维萎缩类型及其与日常活动的相关性
背景:骨关节病患者因制动等原因可出现严重的肌纤维萎缩,但目前对这类肌纤维萎缩的微观分类及其与日常活动的研究较少.目的:观察骨关节病患者肌肉萎缩类型以及其与日常活动的相关性.方法:纳入24例老年女性骨关节病患者,应用功能独立性评定量表对患者习惯性的日常运动进行了评价,在进行关节置换过程中对患者肌纤维进行了测定并通过活检进行组织病理学侧量.同时选取同期因骨折需要进行修复的4例女性患者为对照组.观察患者的肌纤维(Ⅰ型、ⅡA型和ⅡB型)发生萎缩类型和比率变化.结果与结论:骨关节病患者根据发生萎缩的肌纤维类型不同,分为1型、2B型何1+2AB型.Ⅰ型的肌纤维肌横截面积明显小于ⅡA型和ⅡB型肌纤维(P < 0.05).大部分骨关节病患者在得病过程中仅发生同一种肌纤维类型的萎缩,而非所有的肌纤维均出现萎缩.功能独立性评定量表评分从1+2AB型,2B型和1型逐渐减少(P < 0.05).结果证实,肌肉萎缩1+2AB型对骨关节病患者日常活动影响大,而单纯的2B型影响小.
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六股自体腘绳肌腱"人"字形编织重建膝关节前交叉韧带
背景:目前不同学者对膝关节损伤前交叉韧带重建方法存较多争论,因此寻找简便、经济的修复方法是目前该领域的研究热点.目的:观察关节镜下应用6股自体腘绳肌腱"人"字形编织重建修复前交叉韧带损伤的临床疗效.方法:对19例单侧前交叉韧带功能不全的患者采用6股自体腘绳肌腱人字形编织,胫骨隧道钻取双隧道模拟前内、后外两束重建膝关节前交叉韧带,于重建前后利用IKDC分级,Lysholm功能评分和KT-2000TM关节动度仪测试试验,对患者进行主观和客观评分,并应用IKDC分级进行影像学评估.结果:19例患者随访的IKDC分级:A级8例、B级10例、C级1例,无伸膝受限,活动范围120°~140°,平均126°.KT-2000TM膝关节稳定性测量在90.7 kg,136.1 kg和大拉力时,患膝和健膝之间的关节活动度差异均无显著性意义 (P > 0.05).随访时Lysholm膝关节功能评分显著高于重建前(P < 0.01).影像学IKDC评估为:A级15例(79%),B级3例(16%),C级1例(5%).结果证实,应用6股自体腘绳肌腱"人"字形编织双束重建前交叉韧带短期临床疗效良好.
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血管内皮细胞生长因子与半月板白区修复中新生血管的长入
背景:血管内皮细胞生长因子的研究集中于对皮肤坏死、肌腱的修复作用,对半月板的影响研究甚少.目的:观察血管内皮细胞生长因子能否促进血管向损伤半月板的白区生长及半月板白区愈合.方法:将新西兰大白兔24只随机选择左后肢或右后肢作为实验组,另一条后肢作为对照组,均建立半月板后角损伤模型,实验组关节内注射血管内皮细胞生长因子.术后1,3,6,12周切除半月板,制作切片进行大体和组织学观察.结果与结论:术后1周,实验组较对照组血管增生,成纤维细胞丰富,并且有透明软骨细胞出现.术后3周,实验组的软骨层明显较对照组厚.术后12周,实验组软骨层出现成骨基质和成骨细胞.结果提示术后早期,血管内皮细胞生长因子促进了血管的发生,从而促进损伤区的修复;但晚期随血管的长入,促进了软骨内化骨,损伤了已修复的软骨层.
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正常关节软骨和骨关节炎关节软骨细胞中血管活性肠肽表达的比较
背景:神经肽的发现给骨关节炎的治疗带来了新的希望,但神经肽的表达与骨关节炎发病以及软骨退变程度的关系尚不清楚.目的:观察血管活性肠肽在正常关节软骨和不同退变程度骨关节炎软骨中的表达,以及血管活性肠肽表达与骨关节炎发病及软骨退变程度的关系.方法:选取2007-03/11中南大学湘雅医院骨科进行关节置换的骨关节炎患者的关节软骨标本26个,选取因外伤行截肢的膝关节软骨或股骨颈暴力骨折的股骨头正常关节软骨标本10个为对照,根据大体观察凿取正常和骨关节炎不同退变程度软骨块50个,再根据关节软骨改良Mankin病理评分法进行分组,采用免疫组织化学染色检测软骨组织中血管活性肠肽的表达和分布.结果与结论:各关节软骨中均可见到血管活性肠肽阳性神经纤维,正常关节软骨中血管活性肠肽的表达明显高于骨关节炎关节软骨(P < 0.05).且血管活性肠肽表达与软骨改良Mankin病理评分呈负相关(r=-0.896,P < 0.05).说明血管活性肠肽低表达与关节软骨退变程度、骨关节炎病程进展有关,可能是关节软骨退变、骨关节炎发病的机制之一.
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腱周组织及骨膜对骨-肌腱结合部位早期愈合质量的影响
背景:骨腱结合部组织结构复杂,损伤愈合过程相对缓慢,其愈合过程中的关键在于促进特征性结构纤维软骨移行带的修复.目的:通过组织学方法对腱骨结合部愈合进行评估.方法:18周龄新西兰大白兔随机分为两组.骨膜组将骨膜游离并植入兔髌骨部分切除模型中骨-肌腱结点中,对照组不植入骨膜.术后4,8,12周行组织学染色观察,对比Safranin'O染色阳性染色的积分吸光度值.结果与结论:组织学检查显示骨膜组术后4,8周骨-肌腱结合部组织愈合明显,以从松质骨再生和骨-肌腱愈合接点纤维软骨带的再生为特征,较对照组迅速,提示早期骨膜组恢复较对照组迅速.说明骨膜可以促进骨-肌腱结合部位细胞增生,增加细胞基质合成,促进新生骨和纤维软骨移行带形成,促进其愈合.同时,组织学检测可以很好地判断腱骨结合部的愈合.
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不同强度静磁场对成骨细胞细胞骨架改建的影响
背景:静磁场对成骨细胞增殖活性、细胞因子分泌及碱性磷酸酶表达等功能活性影响的机制尚不清楚.目的:观察不同强度静磁场加载对成骨细胞骨架改建和细胞骨架蛋白表达的影响.方法:取新生24 h内SD大鼠颅骨进行成骨细胞的培养和鉴定.采用静磁场加载装置对体外培养的成骨细胞进行0,8,50,160 mT的静磁场加载,分别于静磁场加载24,48,72 h应用BODYPY-Phaloidin进行成骨细胞骨架染色,激光扫描共聚焦显微镜和图像处理软件Image J测定细胞骨架蛋白的荧光强度.结果与结论:8,50,160 mT静磁场加载24,48,72 h,荧光标记的成骨细胞骨架蛋白向细胞核周围集中,荧光强度增强(P < 0.05),其中经50 mT静磁场加载的成骨细胞骨架蛋白的荧光强.说明一定强度的静磁场可以影响成骨细胞骨架的改建和重组.
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成纤维细胞生长因子与器官发育
背景:成纤维细胞生长因子能够影响多种器官组织的形态发生、分化及功能,对多种器官的发育具有决定性作用.目的:综述近年来关于成纤维细胞生长因子在器官发育中所起的作用,为进一步研究器官发育提供理论基础.方法:检索Pubmed(1995/2010)和CNKI(2001/2010)数据库,检索关键词分别为"fibroblast growth factor,tooth development,kidney development,lung development,salivary gland development","成纤维细胞生长因子、牙齿发育、肾脏发育、肺发育、涎腺发育".纳入与成纤维细胞生长因子结构、功能及其与器官发育相关的研究,同一领域研究则选择近期发表及发表在权威杂志的文章.结果与结论:共收集文献850篇,排除发表时间较早及重复研究文献,共纳入37篇英文文献和2篇中文文献.目前研究发现,牙齿、肺、肾脏、羽毛、毛发、心脏、涎腺的发育都是从上皮与间充质相互作用开始的.成纤维细胞生长因子能够促进上皮和间充质细胞之间的相互作用,诱导两种细胞的增殖并抑制其凋亡,成纤维细胞生长因子与器官发育紧密相关.
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与应力调控相关的基因选择性剪接
背景:适当的力学环境是生物体正常生长发育、结构重建以及功能维持的重要因素,也是损伤组织功能性修复的关键因素之一.应力调控基因表达不仅体现在基因的开关或表达水平的调节,还可以体现在转录后的选择性剪接.目的:结合力生长因子介绍选择性剪接这种新的应力调控方式,并推测可能的调控机制.方法:检索PubMed 数据库(1964/2010)、CNKI数据库(2000/2009)有关力信号转导和基因选择性剪接方面的综述文章和研究报告,分析二者的联系和可能的调控机制.结果与结论:应力刺激可以导致肌细胞、成骨细胞中的胰岛素样生长因子1基因发生选择性剪接,产生一种新的应力敏感的生长因子力生长因子,这种新型调控方式的机制还不明确,推测与应力导致的剪接小体的位置(位移运动)以及改变了剪接酶(如RNP酶)的位置和空间结构(变形)有关.
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SDF-1/CXCR4信号通路在骨性关节炎病理进程中的作用
背景:骨性关节炎的发病机制错综复杂,其预防与治疗是当今医学界的难题之一,与其相关的信号通路的研究已成为国内外研究的热点,其靶向治疗有望成为攻克骨性关节炎的关键.目的:总结SDF-1/CXCR4信号通路在诸多疾病尤其是在骨性关节炎发病中的作用,为骨性关节炎的靶向治疗提供科学依据.方法:应用计算机检索PubMed和CBM数据库中2008-09/2010-07发表的相关文献.以主题检索为主要检索方法,结合限定检索等方法,以"SDF-1/CXCR4信号通路、骨性关节炎"和"SDF-1/CXC4 signaling pathway,osteoarthritis"为中英文检索词,选择与骨性关节炎SDF-1/CXCR4信号通路有关的文献,排除内容陈旧、重复的文章.结果与结论:共检索到2 147篇文章,按纳入和排除标准对文献进行筛选,保留32篇文章进行综述.目前,SDF-1/CXCR4信号通路在诸多疾病的发生发展过程中具有重要作用,已成为目前世界医学的研究热点之一.有研究表明,SDF-1/CXCR4信号通路可能在骨性关节炎的发病中具有重要作用,而对该信号通路的干预可能成为预防与治疗骨性关节炎的靶点,有望成为今后骨性关节炎防治方面研究的热点.
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绝经后骨质疏松肾阴虚证相关基因的信息学分析
背景:在绝经后骨质疏松症患者中,不同中医证型在骨质疏松易感基因不同表型中分布存在差异,但其基因组学机制尚未见报道.目的:通过基因表达谱的差比性分析,探讨绝经后骨质疏松症肾阴虚证相关基因的信息学特征.方法:随机选择绝经后骨质疏松症受试者,分为肾阴虚证组4例,肾阳虚证组3例、非肾虚证组3例,并选择健康绝经后妇女3例设为正常对照组.用人全基因组表达谱芯片检测4组基因表达谱,肾阴虚证组分别与其他3组比较,筛选共同的差异表达基因,进行GO和Pathway分析.结果与结论:肾阴虚证组与正常对照组、肾阳虚证组、非肾虚证组的差异表达基因分别为197,354和54条;肾阴虚证组与其他3组比较共同的差异表达基因有9条:PROK2,ASB1,MUC12,GSTM5,CLCF1,GPR27,C3orf35和未知基因chr3:113822408-113822347,chr18:34851804-34851745.与正常对照组相比,表达上调基因为GSTM5,MUC12,表达下调基因为GPR27,C3orf35,ASB1,CLCF1和PROK2.Pathway分析GSTM5参与谷胱甘肽代谢通路,CLCF1参与细胞因子与受体之间干扰通路和JAK-STAT信号转导通路.结果证实,绝经后骨质疏松症肾阴虚证与GPR27,ASB1,PROK2,CLCF1和GSTM5基因的表达有关,并与谷胱甘肽代谢通路、细胞因子与其受体相互作用通路和JAK-STAT信号转导通路存在关联.
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骨钙素基因Hind Ⅲ多态性与福州地区汉族绝经后妇女骨密度的相关性
背景:骨质疏松症是一种多基因遗传病,骨钙素受体基因多态性与骨密度关系存在地域和人群的差异.目的:观察绝经后妇女骨钙素基因型频率分布及其与骨密度的关系,探讨福州地区汉族绝经后妇女骨质疏松症的遗传易感基因.方法:用聚合酶链式反应限制性片段长度多态性分析201例汉族绝经后妇女骨钙素基因型,用双能X射线吸收法测定腰椎、股骨颈,大转子和Ward's三角4个部位骨密度值.结果与结论:福州地区汉族绝经后妇女骨钙素基因型频率分布符合Hardy-Weinberg定律(χ2=2.29,P > 0.05),基因多态性分布依次为HH 5%、hh 46%、Hh 49%,与福州、北京、广州、台湾地区骨钙素基因Hind Ⅲ位点多态性分布频率差异无显著性意义(P > 0.05).但是与日本人、白种人差异明显(P < 0.05).且HH基因型在大转子骨密度明显高于hh型(P < 0.05),但不同基因型在第2~4腰椎、股骨颈、Ward's三角区的骨密度差异无显著性意义.提示绝经后妇女骨钙素基因型与大转子骨密度可能存在一定关联.
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5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶基因多态性及补充叶酸与非综合征性唇腭裂的相关性
背景:对于5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(5,10-methylene tetrahydrofolate reductase,MTHFR)基因C677T位点多态性与唇腭裂相关性的研究国内外结果不一,未见结合干预因素叶酸影响的相关报道.目的:探讨河南地区汉族人群MTHFR基因C677T位点多态性及补充叶酸与非综合征性唇腭裂的发病关系.方法:选取2008-09/2010-03在郑州大学第一附属医院及郑州市第一人民医院整形外科就诊的非综合征性唇腭裂患者110例,采用PCR-RFLP法检测外周血中MTHFR基因C677T位点基因型并与40例健康对照比较频数差异.同时结合母孕期是否补充叶酸进行统计学分析.结果与结论:病例组和对照组C677T基因型及等位基因频率比较差异均具有显著性意义(P < 0.01),且有家族史的患者TT基因型及T等位基因频率高于无家族史患者(P < 0.05).对母孕期是否补充叶酸进行比较,发现非综合征性唇腭裂与叶酸摄入呈负相关(χ2=4.304,r=-0.169,P < 0.05).结果提示MTHFR基因C677T位点突变与河南汉族人群非综合征性唇腭裂的发生相关,母孕期补充叶酸能降低非综合征性唇腭裂的发病风险.
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利多卡因对心脏术后脑保护效果的Meta分析
背景:虽然心脏手术日趋成熟,但术后认知障碍发生率仍然较高.利多卡因对脑的保护效应的研究结果不一.目的:分析利多卡对心脏术后脑保护效果.方法:在PubMed,Cochrane databases,CNKI和Ovid等数据库中系统检索有关利多卡因、心脏手术及脑保护的前瞻性的随机对照研究.提取术后认知障碍发生率及脑代谢相关的指标用于疗效评价,结果以优势比(OR)、加权均数差(WMD)和 95%可信区间(CI)表示.提取的资料采用Review Manager Version 5软件进行分析.结果与结论:共有5篇含有术前和术后的神经心理学测试的文献及2篇关于术中脑代谢测量的文献入选.合并后的结果显示认术后的认知障碍和术前的差异无显著性意义,但在亚组分析中显示低年龄组和低剂量组的术后认知障碍较术前减少 (P < 0.05).术中应用利多卡因能够在手术中降低动脉-颈内静脉血氧含量差,脑氧摄取率)及脑乳酸产生量(P < 0.05).死亡及退出患者总数差异无显著性意义.结果说明现有证据不足以证明利多卡因有脑保护的作用,但应用在合适的临床情况下,利多卡因是有脑保护的作用的.
