中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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间充质干细胞治疗心肌梗死:离临床应用还有多远?
背景:间充质干细胞作为心肌损伤后细胞移植治疗的热门种子细胞,成为治疗缺血性心脏病研究的热点.目的:总结和分析间充质干细胞移植治疗缺血性心脏病的研究新进展.方法:计算机检索Medline、Ovid Embase、PubMed Central、Cochrane Library、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库、中国生物医学文献数据库(CBM)等文献数据库,语种限为中文和英文,检索时间为1985至2015年.纳入标准:①与间充质干细胞治疗缺血性心脏病相关的随机对照实验或临床研究;②方法规范、思路严谨的综述论文.排除标准:观察性研究、个案报道、无标准合理设计方案的研究、无规范严谨的纳入排除标准的综述论文、交叉试验研究、整群随机试验、与论述主题无关的研究.结果与结论:通过检索文献,总结了间充质干细胞来源、间充质干细胞的安全性和有效性、作用机制、注射方式,间充质干细胞移植的优劣势等方面的研究进展.骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死给临床带来了全新的方法,但仍存在许多需要去认识、解决的问题,如在细胞质量、细胞剂量、移植方法、移植时机和患者选择等各个方面仍未得到确切的答案,故局限了其在临床上的应用.
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调节骨髓间充质干细胞成骨成脂分化的因素
背景:骨髓间充质干细胞作为一类具有多向分化潜能的细胞群体,在一定诱导条件下可进行成骨或成脂分化.目的:就骨髓间充质干细胞成骨成脂分化的双向调控影响因素研究进展作一综述.方法:以"骨髓间充质干细胞,成骨,成脂"为中文检索词,以"bone marrow mesenchymal stem cells,osteogenic differentiation,adipocyte differentiation"为英文检索词,在中国知网期刊全文数据库和PubMed数据库检索(2006年1月至2016年8月)有关骨髓间充质干细胞成骨成脂分化的文献.结果与结论:转录因子、信号通路、小分子化合物等是调控骨髓间充质干细胞分化方向的关键因素,这些因素不是单独发挥作用的,而是相互作用,共同调控骨髓间充质干细胞的分化方向.所以基于这些关键分子来干预骨髓间充质干细胞成骨成脂分化方向的技术,可能是将来进行细胞治疗的重要手段,进而运用于组织工程和再生医学.此外,生物钟也可通过调控相关信号通路或转录因子对其成骨成脂分化产生影响.
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脂肪间充质干细胞移植上调肝脏增殖细胞核抗原表达促进肝细胞的再生
背景:脂肪间充质干细胞能够改善肝衰竭大鼠肝功能,在组织工程和细胞移植领域具有重要研究价值.目的:通过观察人脂肪间充质干细胞治疗肝衰竭大鼠的疗效,探讨其可能的相关生物学机制.方法:将肝衰竭模型大鼠随机分为模型组、脂肪间充质干细胞组,分别通过尾静脉注射生理盐水或DAPI标记的人脂肪间充质干细胞(3.0×106个).细胞移植后1,3,7 d,生化法检测各组大鼠血清肝功能,细胞移植后3 d,ELISA法检测血清肿瘤坏死因子 α、白细胞介素10水平,苏木精-伊红染色观察肝组织病理学变化,Western blot检测大鼠肝组织内增殖细胞核抗原表达.结果与结论:①人脂肪间充质干细胞经尾静脉途径移植后可迁移至大鼠肝、肺组织;②细胞移植后1,3 d,脂肪间充质干细胞组大鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶水平较模型组显著降低(P<0.05);③细胞移植后3 d,脂肪间充质干细胞组大鼠血清白细胞介素10、肿瘤坏死因子 α 水平较模型组显著降低(P<0.05);④脂肪间充质干细胞组大鼠肝组织变性、坏死减轻;⑤脂肪间充质干细胞组增殖细胞核抗原蛋白表达较模型组显著上调;⑥结果表明,人脂肪间充质干细胞可明显抑制炎性反应,上调增殖细胞核抗原蛋白表达,促进肝细胞再生及肝功能恢复.
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吡格列酮联合内皮祖细胞移植改善糖尿病肾功能
背景:研究表明,吡格列酮可促进内皮祖细胞增殖活化,抑制内皮祖细胞凋亡.作者推测,吡格列酮干预和内皮祖细胞移植联合治疗可能会更有效地缓解高血糖症状,修复糖尿病肾脏损伤.目的:观察吡格列酮联合内皮祖细胞移植对糖尿病大鼠肾功能的改善作用.方法:①体外复苏人内皮祖细胞并进行CM-Dil标记,移植前备用;②从75只Wistar大鼠中随机选15只不做任何处理作为正常对照组,余60只连续5 d腹腔注射40 mg/kg链脲佐菌素柠檬酸钠溶液建立1型糖尿病大鼠模型,造模4周后随机分为糖尿病组、吡格列酮组、内皮祖细胞移植组和联合治疗组,经尾静脉注射内皮祖细胞悬液和/或20 mg/kg吡格列酮灌胃,连续治疗4 d;③治疗8周后测定各组大鼠血糖、血清胰岛素、血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白水平,荧光显微镜观测CM-Dil标记的内皮祖细胞存活及分布情况,TUNEL法检测肾细胞凋亡情况,并计算肾质量/体质量比值.结果与结论:①与糖尿病组比较,内皮祖细胞组、吡格列酮组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白水平明显降低,血清胰岛素明显升高,差异有显著性意义(P<0.05),联合治疗组大鼠血糖、血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白水平降低更明显(P<0.01),血清胰岛素升高更明显(P<0.01);②内皮祖细胞组、吡格列酮组大鼠肾质量/体质量比值低于糖尿病组(P<0.05),联合治疗组低于内皮祖细胞组、吡格列酮组(P<0.05);③联合治疗组大鼠CM-Dil标记阳性细胞明显多于内皮祖细胞移植组;④正常对照组细胞凋亡数少,糖尿病模型组细胞凋亡数多,与糖尿病模型组比较,内皮祖细胞移植组和吡格列酮组凋亡细胞数明显减少,联合组进一步减少;⑤结果表明,吡格列酮联合内皮祖细胞移植能够有效降低大鼠血糖、肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白水平,升高血清胰岛素水平,减少肾组织细胞凋亡,在一定程度上改善糖尿病大鼠肾功能紊乱.
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超声介导一氧化氮微泡辅助骨髓间充质干细胞移植治疗心肌梗死
背景:多项实验研究发现,超声联合微泡干预能够增强干细胞移植治疗心肌梗死后心力衰竭的效果,具有良好的应用前景.但超声介导一氧化氮微泡经冠脉移植骨髓间充质干细胞治疗大型动物心肌梗死是否具有同样的效果仍不明确.目的:探讨超声介导一氧化氮微泡与冠脉移植骨髓间充质干细胞治疗家猪心肌梗死的有效性及可能机制.方法:①密度梯度离心法分离、培养、鉴定家猪骨髓间充质干细胞,CM-Dil体外标记骨髓间充质干细胞;②经介入法球囊封堵猪左冠状动脉前降支成功建立24只家猪心肌梗死模型,随机分为PBS组、骨髓间充质干细胞组、超声介导声诺维微泡组、超声介导一氧化氮微泡组(n=6).于造模后1周进行如下干预:PBS组经冠脉注射10 mL PBS,骨髓间充质干细胞组将骨髓间充质干细胞(约1×107)用10 mL PBS稀释后经冠脉缓慢注射;超声介导声诺维微泡组经冠脉注入声诺维微泡0.1 mL/kg,同时超声干预(1 MHz、2 W/cm2)2 min,然后将骨髓间充质干细胞(约1×107)用10 mL PBS稀释后经冠脉缓慢注射;超声介导一氧化氮微泡组移植方法及条件同超声介导声诺维微泡组,仅将声诺维微泡换作一氧化氮微泡;③干预后48 h随机处死每组各3只家猪,取梗死区心肌组织作冰冻切片,计数比较各组缺血心肌内荧光标记阳性骨髓间充质干细胞.4周后对每组剩余家猪行M型心脏超声观察比较各组左心室收缩功能.心功能检测结束后处死所有家猪,取梗死区心肌组织行石蜡切片及苏木精-伊红染色,计数比较各组心肌缺血区的毛细血管密度.结果与结论:①与超声介导声诺维微泡组及骨髓间充质干细胞组比较,超声介导一氧化氮微泡组CM-Dil阳性骨髓间充质干细胞数增多,差异有显著性意义(P<0.05);②与超声介导声诺维微泡组、骨髓间充质干细胞组及PBS组比较,超声介导一氧化氮微泡组左室射血分数值有显著改善,差异有显著性意义(P<0.05);③与超声介导声诺维微泡组、骨髓间充质干细胞组及PBS组比较,超声介导一氧化氮微泡组平均毛细血管密度显著增多,差异有显著性意义(P<0.05);④结果表明,超声介导一氧化氮微泡与冠脉移植骨髓间充质干细胞联合治疗可以改善家猪急性心肌梗死后的左心收缩功能,可能与超声介导一氧化氮微泡促进骨髓间充质干细胞向心肌缺血区归巢以及局部血管生成有关.
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带部分松质骨小牛皮质骨复合骨髓间充质干细胞植入兔体内成骨及骨形态发生蛋白2的表达
背景:前期研究已证实兔骨髓间充质干细胞在体外成骨诱导培养下可定向成骨分化,并能够稳定表达成骨细胞的特异性表型,具有成骨能力;且已证实带部分松质骨的小牛皮质骨支架材料具有良好的生物相容性和降解性,可以作为骨髓间充质干细胞的载体材料.目的:在前期研究基础上,根据骨组织工程学的基本原理,将骨髓间充质干细胞与小牛异种骨复合,植入新西兰大白兔髂骨内观察其成骨情况,为构建理想的初步组织工程骨工程化产品提供理论依据.方法:分别将兔骨髓间充质干细胞成骨诱导后复合的带部分松质骨小牛皮质骨(组织工程骨组)、单纯小牛异种骨(异种骨组)、自体髂骨(自体髂骨组)随机植入兔髂骨.观察各组植入物的表面变化和周围组织反应,植入后4,8,12,24周摄X射线片观察成骨情况,取材后利用免疫组织化学染色观察骨形态发生蛋白2的表达情况.结果与结论:异种骨植入兔髂骨后,伤口生长良好,没有全身和局部的炎症和毒性反应.X射线片显示组织工程骨组在术后24周时与宿主骨结合部基本愈合,而异种骨组术后24周与宿主骨愈合不满意.苏木精-伊红染色可观察到软骨化骨过程,免疫组织化学染色显示各时间点骨形态发生蛋白2染色阳性.体内实验结果表明兔骨髓间充质干细胞复合带部分松质骨的小牛皮质骨支架材料经体外诱导后具有在新西兰兔体内构建组织工程骨的能力.
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神经干细胞的培养鉴定及分化
背景:神经干细胞在神经损伤修复和退行性疾病中有广泛的应用前景,体外培养鉴定及促神经元诱导分化是后续研究的基础.目的:采用悬浮神经球培养法分离培养神经干细胞并对其鉴定,了解生物学特性.方法:采用悬浮神经球培养法从C57BL/6胎鼠大脑半球分离培养神经干细胞,观察形态特征及超微结构,CCK-8法绘制生长曲线,流式细胞仪检测细胞周期,免疫荧光法检测特异性标志蛋白Nestin的表达;用体积分数为1%和10%的血清诱导分化后,免疫荧光法检测GFAP、β Ⅲ-tubulin和MBP的表达.结果与结论:①体外培养得到悬浮生长的神经球,生长曲线和细胞周期表明细胞增殖力强;②透射电镜观察到神经干细胞核浆比高,呈未分化状态;③Nestin免疫荧光阳性;④不同体积分数的血清诱导后均可分化为星形胶质细胞、神经元和少突胶质细胞,体积分数为1%血清能诱导分化得到更多的神经元细胞;⑤结果表明,采用悬浮神经球培养法成功分离培养得到了神经干细胞,低体积分数血清有利于神经干细胞向神经元分化.
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丹酚酸B对糖氧剥夺损伤大鼠海马神经干细胞增殖、凋亡和分化的影响
背景:丹酚酸B具有改善神经损伤、促进神经发生的作用,但其对海马神经干细胞增殖、凋亡和分化的影响仍不清楚.目的:研究丹酚酸B对体外氧糖剥夺损伤大鼠海马神经干细胞增殖、凋亡及分化的影响.方法:取生长状态良好的新生SD大鼠海马神经干细胞,分6组培养:其中5组均于无糖培养基中在含有体积分数为1%O2、5%CO2和94%N2厌氧混合气体的培养箱中缺氧处理150 min,再分别加入0(对照),5,10,20,40 mg/L的丹酚酸B干预细胞,干预4 d后,MTT检测细胞增殖;干预48 h后,流式细胞术检测海马神经干细胞凋亡;干预5 d后,流式细胞术分析神经元特异性烯醇化酶和胶质纤维酸性蛋白阳性细胞的比例.以正常培养细胞为正常对照.结果与结论:①细胞增殖:与正常对照组比较,对照组神经元干细胞增殖能力明显降低(P<0.01);与对照组相比,丹酚酸B处理组神经干细胞增殖能力逐渐升高,以20,40 mg/L丹酚酸B干预组升高明显(P<0.01);②细胞凋亡:与正常对照组比较,对照组海马神经干细胞凋亡率明显升高(P<0.01);与对照组比较,丹酚酸B处理组神经干细胞凋亡率随着丹酚酸B质量浓度的增加而逐渐降低,以20,40 mg/L丹酚酸B干预组降低明显(P<0.01);③细胞分化:与正常对照组比较,对照组神经干细胞的胶质纤维酸性蛋白阳性细胞比例升高;与对照组比较,不同质量浓度丹酚酸B处理组神经干细胞的神经元特异性烯醇化酶阳性细胞比例升高,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞比例下降;④结果表明:丹酚酸B可促进氧糖剥夺损伤大鼠海马神经干细胞的增殖,抑制其凋亡,诱导其向神经元分化.
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肝X受体激活修复丙泊酚对骨髓间充质干细胞的抑制作用
背景:研究已证实,丙泊酚可减少成年大鼠间充质干细胞的数量,同时与间充质干细胞相关的分化也显著受到抑制.目的:探究肝X受体是否可激活修复丙泊酚对骨髓间充质干细胞的抑制作用.方法:将15只新生C57/BL6小鼠随机分为3组,空白对照组腹腔注射生理盐水;对照组腹腔注射丙泊酚60 mg/kg;实验组首先腹腔注射肝X受体激动剂10μL/g,隔天注射丙泊酚60 mg/kg.注射1-3 h后处死3组小鼠,分离培养骨髓间充质干细胞,CCK-8及克隆形成实验检测细胞增殖及自我更新情况;检测3组细胞的成脂、成骨及成软骨能力;实时定量PCR检测3组细胞诱导分化前、诱导分化后的Notch信号表达,以及加入Notch通路抑制剂后,成脂、成骨及成软骨诱导分化后的相关基因表达.结果与结论:①与空白对照组比较,对照组骨髓间充质干细胞增殖与克隆形成能力显著降低(P<0.05);与对照组比较,实验组骨髓间充质干细胞增殖与克隆形成能力显著升高(P<0.05);②与空白对照组比较,对照组骨髓间充质干细胞成脂、成骨及成软骨能力显著降低(P<0.05);与对照组比较,实验组骨髓间充质干细胞成脂、成骨及成软骨能力显著升高(P<0.05);③诱导分化前,3组间Notch信号表达无差异.诱导分化后,与空白对照组比较,对照组骨髓间充质干细胞成脂、成骨及成软骨分化相关基因表达显著下调(P<0.05);与对照组比较,实验组骨髓间充质干细胞成脂、成骨及成软骨分化相关基因表达显著上调(P<0.05).加入Notch通路抑制剂后,3组细胞成脂、成骨及成软骨诱导分化均受抑制;④结果表明,肝X受体激活可修复丙泊酚对骨髓间充质干细胞的抑制作用.
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RNA干扰TRAP1表达抑制CD133+CD44+喉癌干细胞生长并促进凋亡
背景:肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)是线粒体特异性热休克蛋白90家族的同源基因.大量研究表明其过量表达与多种癌症的发生密切相关.但其在喉鳞癌发生中的作用及作用机制目前还不清楚.目的:探讨RNA干扰能否靶向抑制TRAP1过表达以及对人喉癌干细胞增殖和凋亡的作用效果.方法:采用免疫磁珠技术从人喉癌Hep-2细胞系中分选出CD133+CD44+喉癌干细胞.设计及合成TRAP1的shRNA序列,LipofectamineTM 2000转染CD133+CD44+喉癌干细胞.CCK-8增殖实验、集落形成实验、流式细胞术检测干扰TRAP1基因表达对CD133+CD44+喉癌干细胞增殖和凋亡的影响,采用分光光度法检测细胞内caspase-3,caspase-8,caspase-9活性.结果与结论:①TRAP1 shRNA转染的CD133+CD44+喉癌干细胞内TRAP1基因和蛋白表达明显下调(P<0.01);②与空白对照组和转染空质粒阴性对照组比较,TRAP1表达下调抑制了CD133+CD44+喉癌干细胞增殖和集落形成能力(P<0.05);③与空白对照组和转染空质粒阴性对照组比较,TRAP1表达下调增加CD133+CD44+喉癌干细胞凋亡率(P<0.05);④TRAP1 shRNA介导细胞凋亡与caspase-3,caspase-8和caspase-9激活有关;⑤结果提示RNA干扰TRAP1表达可抑制CD133+CD44+喉癌干细胞生长并促进细胞凋亡.TRAP1可能为喉鳞癌治疗的基因靶点.
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CD54+和CD54-脂肪干细胞的成脂分化能力
背景:研究表明,脂肪干细胞具有多向分化潜能,但是其向成熟脂肪细胞分化的效率仍较低,只有30%-40%.因此,如何提高脂肪干细胞的成脂分化能力是软组织再生研究过程中需要解决的关键科学问题.目的:观察兔脂肪干细胞表面标志物CD54的表达与其成脂分化能力的关系,并探讨同一诱导剂对CD54+和CD54-兔脂肪干细胞成脂分化的影响.方法:取新西兰大白兔(8-12周龄)腹股沟皮下脂肪垫3 mL,采用贴壁法体外分离培养兔脂肪干细胞并行多向分化诱导及细胞表型标志物鉴定.取第3代细胞经免疫磁珠分选得到CD54+兔脂肪干细胞和CD54-兔脂肪干细胞,经成脂诱导14 d后行油红O染色,检测成熟脂肪细胞的密度及细胞内脂滴含量.RT-PCR检测脂肪干细胞成脂分化相关基因表达水平.结果与结论:①兔脂肪干细胞具有间充质干细胞特性,可向成熟脂肪细胞、成骨细胞和软骨细胞表型分化,细胞表面标志物CD29、CD44、CD49d、CD54、CD73、CD90和CD105表达均为阳性,而CD31、CD34和CD45表达阴性;②成脂诱导第14天,CD54+兔脂肪干细胞分化为成熟脂肪细胞的密度和细胞内脂滴含量均高于CD54-兔脂肪干细胞,差异均有显著性意义(P<0.05);③成脂诱导14 d后,CD54+兔脂肪干细胞成脂相关基因ADD1、C/EBPα、PPARγ的mRNA表达水平明显高于CD54-兔脂肪干细胞,差异均有显著性意义(P<0.05);④结果表明,CD54+脂肪干细胞具有高成脂分化能力.
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超声破碎及反复冻融收集脂肪间充质干细胞裂解液的优条件
背景:旁分泌在间充质干细胞治疗方面起主要作用.提取间充质干细胞裂解液,可以避免直接间充质干细胞本身所致栓塞、肿瘤以及免疫排斥反应等问题,然而目前提取间充质干细胞裂解液的方法存在差异.目的:比较超声破碎及反复冻融方法获得间充质干细胞裂解液的差异.方法:①从健康的人腹部皮下脂肪中分离出脂肪间充质干细胞,经贴壁筛选法纯化细胞,胎牛血清培养基体外培养扩增,并采用流式细胞检测仪鉴定其常用表面标记;②采用反复冻融及超声细胞破碎2种破壁方法,将1×109 L-1,2×109 L-1,4×109 L-13种不同密度的细胞分别置于生理盐水与双蒸水中进行破碎,比较细胞破碎率及裂解液蛋白含量的差异.结果与结论:①通过体外分离人体脂肪组织,可获得脂肪间充质干细胞;②细胞裂解时,细胞浓度越高,破壁所需时间越长,而破碎时间越长,则细胞破碎率越大;③生理盐水中超声细胞破碎法得到的蛋白含量较其他条件高;④结果提示在生理盐水环境下使用超声方法提取脂肪间充质干细胞裂解液尤为有效,且推荐细胞浓度为4×109 L-1以内.
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肝衰竭患者血浆置换前后血清诱导脐带间充质干细胞向肝细胞的分化
背景:脐带间充质干细胞治疗肝衰竭已经取得了一定的疗效,但是肝衰竭患者的血清微环境对脐带间充质干细胞分化的影响尚未见报道.目的:探讨慢加急性肝衰竭患者血浆置换前、后血清对脐带间充质干细胞向功能肝细胞分化的影响.方法:采用组织块贴壁培养法获得脐带间充质干细胞并进行细胞形态及表型鉴定;取第3代脐带间充质干细胞,用含有肝衰竭患者血浆置换前、后血清的 α-MEM培养基诱导培养,常规胎牛血清培养基为对照组,显微镜下观察各组细胞的形态,免疫组化检测细胞甲胎蛋白、白蛋白和细胞角蛋白18的表达水平.结果与结论:①组织块贴壁培养法能够获得大量高纯度的脐带间充质干细胞,细胞高表达CD44,CD73,CD90,CD105,不表达CD45,符合间充质干细胞的表型特征;②慢加急性肝衰竭患者血清可改变脐带间充质干细胞的形态,并诱导脐带间充质干细胞表达甲胎蛋白、白蛋白和细胞角蛋白18.血浆置换后血清组3种蛋白阳性率高于血浆置换前血清组,差异有显著性意义(P<0.05);③结果表明,肝衰竭患者血浆置换后血清更加有利于脐带间充质干细胞生长及向肝细胞分化.
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人脐带间充质干细胞应用于肝移植患者的观察
背景:近年来间充质干细胞的免疫调节作用可被应用于诱导机体免疫耐受研究.目的:评估脐带间充质干细胞应用于肝移植患者的安全性和可行性.方法:培养人脐带间充质干细胞并进行鉴定.经医学伦理委员会同意后,将总计50例患者经1:1的比例按入组时间随机分入试验组和对照组,每组25例.试验组分别在术中门静脉灌注及术后第3天给予颈内静脉输注脐带间充质干细胞,剂量为1×106/kg(制备成50 mL的细胞悬液).两组患者均采用标准免疫抑制方案.术前,术后第3,7天,术后第1,2,3,6,12个月检测血生化、免疫功能指标,统计急、慢性排斥反应发生率,感染发生率,移植相关并发症发生率.结果与结论:①与对照组相比,术后第3,7天试验组外周血的CD4+CD25+(调节性T细胞)细胞比例高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05),CD4+(辅助性/诱导性T细胞)细胞比例及CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);②与对照组相比,试验组谷丙转氨酶、总胆红素水平差异无显著性意义(P>0.05);③试验组术后肝功能异常事件的发生率明显低于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);④两组移植后相关并发症的发生率、感染发生率差异无显著性意义(P>0.05);⑤以上结果提示,肝移植术后静脉输注脐带间充质干细胞安全可行,早期可促进CD4+CD25+(调节性T细胞)的增殖和活化,降低CD4+(辅助性/诱导性T细胞)比例及CD4+/CD8+T淋巴细胞的比值,进而改善肝移植受者免疫状态.
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富血小板血浆体外培养人脐带间充质干细胞:细胞增殖及成骨分化的能力
背景:研究证明,富血小板血浆可促进骨髓间充质干细胞、脂肪来源干细胞及骨骼肌卫星细胞的增殖及成骨分化,但其是否可促进人脐带间充质干细胞的增殖及成骨分化目前尚不清楚.目的:观察不同质量浓度富血小板血浆对体外培养人脐带间充质干细胞增殖及成骨分化的影响.方法:将第5代人脐带间充质干细胞分6组培养,分别以含0,250,500,750,1000,2000 ng/L活化富血小板血浆的培养基中培养,1,3,5,7 d后,检测细胞增殖,筛选佳富血小板血浆质量浓度,进行以下实验.将第5代细胞人脐带间充质干细胞分4组培养,空白对照组添加完全培养基,富血小板血浆组添加佳浓度的富血小板血浆,成骨诱导组添加成骨诱导培养基,联合组添加佳浓度的富血小板血浆与成骨诱导培养基,培养3,7,14 d,检测细胞碱性磷酸酶活性;培养7,14,21 d,检测骨标志基因骨桥蛋白、骨特异性转录因子、骨钙蛋白mRNA的相对表达量;培养21 d,检测细胞外基质的矿化.结果与结论:①培养5,7 d时,500,750,1000 ng/L富血小板血浆组的细胞增殖高于0 ng/L富血小板血浆组(P<0.05),其中以750 ng/L质量浓度促增殖效果明显,以此浓度进行以下实验;②联合组培养不同时间点的碱性磷酸酶活性高于其余3组(P<0.05);③联合组培养不同时间点的骨桥蛋白、骨特异性转录因子、骨钙蛋白mRNA相对表达量高于其余3组(P<0.05);④联合组细胞外基质矿化程度高于其余3组(P<0.05);⑤结果表明,750 ng/L富血小板血浆可促进人脐带间充质干细胞的增殖及成骨分化.
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干细胞拉曼光谱收集条件选择及间充质干细胞与胚胎干细胞拉曼光谱的比较
背景:拉曼光谱在检测细胞状态方面相比于传统技术具有快速、非介入、非标记等特点,因此在生物医学领域中的应用正日益受到关注,但是该技术应用于干细胞检测的条件还有待进一步优化.目的:探索激光波长与光栅刻度密度对于干细胞拉曼光谱分辨率与收集时间等参数的影响,明确可以用于干细胞分析的拉曼光谱收集条件.方法:首先比较532,638,785 nm 3个波长激光及600,1200,1800 gr/mm 3种光栅刻度密度条件对人间充质干细胞与人胚胎干细胞拉曼光谱的影响;之后比较这2个条件不同组合得到的拉曼光谱的光谱分辨率与收集时间,选择出佳的组合条件;后使用选出的佳条件结合主成分分析方法比较胚胎干细胞与间充质干细胞拉曼光谱的差异以验证优化条件的适用性.结果与结论:①激光波长与光栅刻度密度均会不同程度影响干细胞拉曼光谱的峰强,进而影响特征性拉曼峰之间的比值;②785 nm波长激光与1200 gr/mm光栅刻度密度条件组合是适合收集条件;③对比分析胚胎干细胞与间充质干细胞的拉曼光谱图,提示胚胎干细胞具有更高的核酸含量,而间充质干细胞在一些蛋白和脂类含量上更为丰富.
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干细胞转录因子OCT4、SOX2在食管鳞癌组织中表达及与预后的关系
背景:研究表明,OCT4、SOX2、HIWI等在肿瘤组织中有表达.目的:分析干细胞转录因子SOX2、OCT4在食管鳞癌中的表达变化及与患者临床特征、预后的关系.方法:采用免疫组织化学SP法检测77例手术后经病理学证实为食管鳞癌患者的手术标本(食管癌组)和40例癌旁组织标本(癌旁组织)中SOX2、Oct4蛋白的表达水平,并分析其与患者临床特征、预后的关系.结果与结论:①食管癌组织中的SOX2蛋白、Oct4蛋白阳性表达率均显著的高于癌旁组织(P<0.05);②食管癌组织中的SOX2蛋白、Oct4蛋白在低分化、淋巴结转移患者中呈显著的高表达(P<0.05);③食管癌组织中的SOX2蛋白阳性表达患者的3年随访中位生存期24个月,显著低于阴性患者的30个月;Oct4蛋白阳性表达患者的中位生存时间21个月显著低于阴性患者33个月;④结果提示,SOX2、Oct4蛋白在食管癌组织中高表达,并且与患者的分化程度、转移及预后有关.
