中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子: 1.38
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 2095-4344
- 国内刊号: 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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不同数量神经干细胞移植治疗实验性脑梗死
背景:研究已经确证脑梗死后进行神经干细胞移植可以促进动物神经功能恢复.目的:观察在大鼠实验性脑梗死后移植不同数量神经干细胞的效果,以期寻找出能有效促进神经功能恢复的小移植数量.方法:提取Wistar胚胎鼠脑组织,体外培养神经干细胞.利用线栓法制作Wistar大鼠脑梗死模型.在大鼠脑梗死第7天,取培养第12天的神经干细胞,预标记BrdU后通过立体定向、微量注射泵方法,分别移植低6×105、中8×105、高10×105数量的神经干细胞,并设立假移植组,通过抓握牵引实验、斜板实验评价移植3个月时4组动物的行为学变化,以及BrdU、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白等免疫组织化学染色方法检测移植后神经干细胞与周围宿主整合及向神经元、神经元胶质细胞分化情况.结果与结论:神经干细胞移植后能在宿主脑内存活,并分化为神经元和胶质细胞促进功能恢复.移植神经干细胞后3个月时,各移植组与假移植组相比行为学评分均有显著性升高;中等数量移植组大鼠各项行为学评分明显优于低等数量移植组,而中、高等数量移植组两组之间差异没有显著性意义.提示脑梗死后移植不同数量神经干细胞可改善因脑梗死造成的功能障碍,8×105数量神经干细胞移植可以较少的数量发挥较好移植效果.
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趋化因子受体7基因绿色荧光慢病毒载体构建及在未成熟树突状细胞中的表达
背景:趋化因子受体7(chemokine receptor-7,CCR7)是树突状细胞从外周迁移至淋巴系统发挥作用的重要的启动和调节者,但未成熟树突状细胞表面不表达CCR7,因此利用携带CCR7基因的未成熟树突状细胞可以更好地诱导免疫耐受.目的:构建携带小鼠CCR7基因的绿色荧光蛋白重组慢病毒载体,观察其在未成熟树突状细胞中的表达.方法:采用RT-PCR扩增小鼠CCR7基因并克隆至pCR-Blunt载体.将CCR7 DNA片段及IRES-GFP连入慢病毒转移质粒LV-Lac,生成重组慢病毒质粒LV-CCR7.采用脂质体转染法将慢病毒系统3质粒(重组慢病毒质粒LV-CCR7、包装质粒ΔNRF及包膜质粒pVSVG)共转染包装慢病毒,重组慢病毒感染未成熟树突状细胞,光学显微镜观察细胞状态,流式细胞术鉴定CCR7蛋白的表达.结果与结论:实验成功扩增出小鼠CCR7 DNA片段并克隆至pCR-Blunt载体,亚克隆构建慢病毒表达载体LV-CCR7,经3质粒包装系统感染293 FT细胞后,24 h于荧光显微镜下均观察到绿色荧光蛋白阳性表达,病毒滴度为108 U/L以上,获得携带CCR7基因的重组慢病毒.慢病毒颗粒可有效感染未成熟树突状细胞,荧光显微镜可见大量GFP蛋白表达,阳性细胞达50%,流式细胞术检测到CCR7蛋白表达,LV-CCR7基因修饰的未成熟树突状细胞仍保持在未成熟状态.结果证实,实验成功构建携带小鼠CCR7基因绿色荧光慢病毒载体LV-CCR7,并可在未成熟树突状细胞细胞中表达.
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羊膜上皮细胞移植治疗脑缺血缺氧新生大鼠
背景:研究表明移植羊膜上皮细胞可改善神经功能,但其作用机制尚不清楚.目的:观察缺氧缺血对新生大鼠脑神经干细胞和神经颗粒素表达的影响,及羊膜上皮细胞移植后对其治疗作用.方法:建立缺氧缺血性脑损伤模型,46只SD大鼠随机抽签法分为3组,移植组和模型组缺血缺氧后经侧脑室分别注入1 1012 L-1人羊膜上皮细胞悬液和PBS治疗;假手术组注射等量的生理盐水.结果与结论:移植组大鼠神经功能较模型组明显改善,移植后第3周脑切片检出NSE阳性细胞存在,神经颗粒素在第3周的表达模型组低于假手术组,移植组较模型组增加;而nestin结果显示模型组较假手术组增加,移植组较模型组增加.提示羊膜上皮细胞移植入脑缺血缺氧大鼠脑内后,可减轻缺氧缺血后神经元的损伤,改善神经功能,其机制可能是注射入侧脑室的细胞促进自体神经干细胞的增殖分化和突触再生而实现的.
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神经生长因子与表皮生长因子干预创伤性脑损伤后内源性神经干细胞的增殖
背景:表皮生长因子、神经生长因子可促进神经干细胞增殖,但对创伤性脑损伤后成年大鼠脑内内源性干细胞的影响研究甚少.目的:观察创伤性脑损伤后神经生长因子和表皮生长因子对内源性神经干细胞增殖的影响.方法:采用改良Feeney氏法自由落体撞击的方法建立大鼠创伤性脑损伤模型,48只大鼠随机抽签法分为4组,外伤后 24 h分别行神经生长因子、表皮生长因子单独或联合注射,对照组注射等量生理盐水.结果与结论:神经生长因子组、表皮生长因子组和联合组前肢放置实验及平衡实验评分均优于对照组,联合组优于单独治疗组(P < 0.05).单独治疗组和联合组大鼠室管膜下区、海马和损伤区域出现的BrdU阳性细胞数明显多于对照组,联合治疗组多于单独治疗组(P < 0.05).提示创伤性脑损伤后使用神经生长因子、表皮生长因子均可增加大鼠模型内源性神经干细胞的增殖和肢体功能的恢复,而且两种神经营养因子联合应用使这种效果更为明显.
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骨髓间充质干细胞移植促进糖尿病大鼠后肢缺血血管的新生
背景:骨髓间充质干细胞是否是促进下肢缺血血管新生的主要种子细胞来源呢?目的:探讨骨髓间充质干细胞肌肉注射移植诱导大鼠糖尿病后肢缺血的血管新生证据.方法:采用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)结合双侧股动脉结扎制备雄性SD大鼠糖尿病后肢缺血模型.自股动脉离断处起分10个点将BrdU标记BMSCs悬液注射入模型大鼠左后肢股直肌和腓肠肌中;右后肢采用等量生理盐水注射作为对照.结果与结论:移植2 周后模型大鼠双后肢可见血管显影,6周后血管更为丰富,左侧均高于右侧.移植后2周,左后肢股直肌与腓肠肌的毛细血管密度分别高于右后肢的密度(P < 0.05);BrdU标记阳性移植细胞参与了左后肢血管壁构成.表明局部注射移植骨髓间充质干细胞可改善糖尿病后肢缺血大鼠的血供,并参与小血管重建,有助于糖尿病后肢缺血的血管新生.
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不同途径骨髓间充质干细胞移植对颅脑损伤大鼠海马的作用
背景:近年来骨髓间充质干细胞移植在中枢神经系统中的应用越来越广泛,研究其佳的移植方式具有重要意义.目的:观察不同途径移植骨髓间充质干细胞对创伤性脑损伤大鼠海马神经元的影响.方法:分离培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,以PKH26标记第3代骨髓间充质干细胞,荧光显微镜观察并流式细胞仪检测标记率;采用改进Feeney法制作脑损伤致海马神经元损伤模型.60只Wistar大鼠随机分为3组,脑损伤区移植组:造模后注射含骨髓间充质干细胞的生理盐水10 μL;尾静脉移植组:自尾静脉注入含骨髓间充质干细胞的生理盐水1 mL;创伤性脑损伤组:不给予任何处理.结果与结论:荧光显微镜观察PKH26标记的BMSCs呈球形,呈现均匀分布的红色荧光;PKH26标记BMSCs的阳性率>99%.脑损伤区移植组大鼠学习记忆功能明显好于其他两组,PKH26阳性细胞和苏木精-伊红染色切片中的神经元数量脑损伤区移植组多于尾静脉移植组,尾静脉移植组多于创伤性脑损伤组(P < 0.05).GAP-43 mRNA的表达脑损伤区移植组高于尾静脉移植组,尾静脉移植组高于创伤性脑损伤组(P < 0.05).提示移植骨髓间充质干细胞对创伤性脑损伤大鼠海马神经元有保护作用,脑损伤区移植优于尾静脉移植.
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长期培养对基质细胞衍生因子1/CXCR4介导间充质干细胞迁移的影响
背景:人外源性的间充质干细胞能特异性地向损伤部位迁移,参与多种组织的损伤修复,然而其定向迁移的机制尚不清楚.目的:观察基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞定向迁移的影响.方法:体外培养不同个体的骨髓间充质干细胞,培养至第10代,检测细胞衰老状态.RT-PCR和细胞免疫荧光检测骨髓间充质干细胞CXCR4受体表达情况;体外迁移体系(Transwell)检测基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞迁移的影响.结果与结论:骨髓间充质干细胞在体外长期增殖后生长逐渐缓慢,在第6,7代衰老细胞增多,其CXCR4受体表达减少.基质细胞衍生因子1对骨髓间充质干细胞的趋化作用呈剂量依赖性.
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幼年大鼠脑室下区N-甲基-D-天冬氨酸受体亚单位2B的表达及其细胞类型
背景:神经干细胞表达有N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methy-D-aspartic acid receptor,NR)亚单位2B,深入研究其在幼年大鼠脑室下区的表达情况有助于揭示该区神经干细胞增殖、分化、迁移的机制.目的:观察NR2B在幼年大鼠脑室下区的表达及表达高峰期所在的细胞类型.方法:取出生后7,14,21,28 d SD大鼠,制备5 μm厚脑组织冰冻切片,观察脑室下区NR2B的表达,及其在出生后14 d大鼠脑室下区所在的细胞类型.结果与结论:免疫组化结果显示NR2B在出生后7,14,21,28 d大鼠脑室下区存在差异表达,于出生后14 d时表达达高峰,以侧脑室外侧角旁表达高;免疫荧光双标染色可见NR2B在脑室下区与胶质纤维酸性纤维蛋白、巢蛋白、β-Ⅲ微管蛋白共定位,以室管膜细胞明显;而与NeuN在脑室下区无共定位.说明NR2B在幼年大鼠脑室下区的表达存在时空变化,可能在神经发生中发挥作用.
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不同质量浓度肉苁蓉总苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞样细胞的定向分化
背景:肉苁蓉及其所含的化学成分有神经保护作用,并能促进神经功能的恢复.目的:分析肉苁蓉总苷体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经细胞样细胞的佳剂量.方法:分离培养Wistar大鼠骨髓间充质干细胞,并利用β-巯基乙醇及不同质量浓度肉苁蓉总苷诱导骨髓间充质干细胞,分为空白对照组、β-巯基乙醇对照组、肉苁蓉总苷100,200,300 μg/L组进行观察.结果与结论:诱导7 d后,与空白对照组比较,其他各组活细胞数明显增高(P < 0.05);诱导第3天,与空白对照组比较,内苁蓉总苷各剂量组细胞Nestin、NSE阳性表达率明显增高(P < 0.05).100,200 μg/L质量浓度肉苁蓉总苷可有效促进骨髓间充质干细胞增殖,并能够明显促进其向神经细胞样细胞分化,300 μg/L质量浓度可以促进骨髓间充质干细胞增殖,但效果不及100,200 μg/L组(P < 0.05).
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人骨髓间充质干细胞移植促进脑梗死大鼠神经细胞再生和神经功能恢复
背景:有研究表明,骨髓间充质干细胞或神经干细胞同种移植可改善脑梗死模型鼠神经功能.目的:观察人骨髓间充质干细胞在移植大鼠脑神经功能梗死局部的内存活、迁移情况及神经细胞再生.方法:将人骨髓间充质干细胞经静脉注入免疫抑制的大脑中动脉闭塞模型大鼠,每周观察、记录移植大鼠的行为和神经功能状况(NSS评分、转棒实验);于移植后1~8周处死大鼠,采用免疫组织化学染色,免疫荧光染色和RT-PCR检测检测移植大鼠大脑人细胞核抗原、神经干细胞标志物(巢蛋白)及神经细胞标志物(神经元核心抗原、脑型微管蛋白、胶质纤维酸性蛋白)的表达.结果与结论:骨髓间充质干细胞移植后2周,脑梗死模型鼠NSS评分明显降低(P < 0.05)、转棒实验停留时间明显延长(P < 0.01),神经功能得到改善(P < 0.05).人骨髓间充质干细胞移植后1~8周,在移植大鼠病变侧室管膜下区、海马齿状回、梗死灶周围均可检测到人细胞核抗原阳性细胞.移植后一二周,在移植大鼠病变侧室管膜下区、海马齿状回(CA1,CA3区)、梗死灶周围可见部分巢蛋白阳性细胞和mRNA表达,存续至8周.移植后2周,在移植大鼠病变侧室管膜下区、海马齿状回、梗死灶周围可见部分神经元核心抗原、脑型微管蛋白阳性细胞和mRNA的表达.移植后4~8周,在海马、梗死灶周围可见少量胶质纤维酸性蛋白阳性细胞和少量mRNA的表达.结果证实,静脉移植人骨髓间充质干细胞能在脑梗死模型大鼠脑内存活、并迁移至病变部位,继而分化为神经细胞,促进新生神经细胞的形成,改善移植大鼠的神经功能.
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小型猪富血小板血浆对牙周膜干细胞的成骨诱导
背景:组织工程技术为牙周炎致骨组织缺损的修复提供了新的思路.目的:探寻富血小板血浆在小型猪牙周膜干细胞成骨诱导中的作用.方法:采集贵州小型猪静脉血,三次离心制备富血小板血浆.采用组织块法分离培养小型猪牙周膜干细胞,分别将含体积分数0.8%,1.0%,1.2%的富血小板血浆与牙周膜干细胞共同培养3,7,14,21 d,以未添加富血小板血浆的牙周膜干细胞作为对照.结果与结论:体积分数0.8%,1.0%,1.2%的富血小板血浆成骨诱导第14天,碱性磷酸酶活性达到峰值,其中体积分数1.0%的富血小板血浆诱导的细胞碱性磷酸酶活性高,第21天时碱性磷酸酶活性降低.茜素红染色显示富血小板血浆成骨诱导第21天细胞染色呈阳性.单克隆纯化后细胞的生长曲线从第3天起进入对数生长期,第8天细胞数量达到顶峰.说明富血小板血浆具有诱导牙周膜干细胞成骨的能力,以体积分数1.0%时诱导成骨效率优.
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转白血病抑制因子基因人胚肺成纤维细胞对脐血CD34+细胞体外扩增的影响
背景:单份脐血的造血细胞数量有限,难以满足成人的需要,如何有效地扩增脐血造血干/祖细胞是目前研究的热点.目的:构建人白血病抑制因子基因修饰的人胚肺成纤维细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞体外扩增的影响.方法:建立转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞,用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因的表达;采用免疫磁珠法分离脐血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验检测自发迁移率和基质细胞衍生因子1诱导迁移试验以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力.结果与结论:成功建立转基因饲养层细胞,RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达,与人白血病抑制因子转基因饲养层细胞共培养7 d后CD34+造血干/祖细胞可大量扩增,同时表面黏附分子的表达量仍较高.体外迁移实验显示与转基因饲养层细胞共培养的造血细胞的诱导迁移率明显高于对照组,可以较好地保持其归巢能力.因此转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力.
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神经球方法体外无血清含生长因子培养的神经干细胞主要向神经胶质细胞分化
背景:体外分离培养出神经干细胞并掌握其生物学特性是神经干细胞移植研究的前提.目的:采用神经球方法分离培养胎鼠皮质神经干细胞,并观察其生长和分化特性.方法:利用无血清悬浮方法分离培养胚胎来源的神经干细胞,用免疫细胞化学的方法检测神经干细胞及其分化细胞的标志物.结果与结论:体外无血清含生长因子的培养液培养胎鼠皮质神经干细胞,可得到悬浮生长的神经球,但悬浮生长的神经球可以发生融合,免疫细胞化学显示神经球呈巢蛋白表达阳性,神经干细胞可以分化为神经元,神经胶质细胞和少突胶质细胞,但主要向神经胶质细胞分化.说明在血清含有生长因子的而培养条件下,利用神经球方法可以分离培养出胎鼠皮质神经干细胞.
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白细胞介素3与c-kit+Lin-细胞的增殖
背景:c-kit+Lin-即为骨髓衍生肝干细胞,与其他造血干细胞类似,c-kit+Lin-细胞的数量有限,难以满足科研的需要.目的:观察在无血清无基质的条件下,白细胞介素3和因子组合对扩增c-kit+Lin-细胞的影响.方法:采用免疫磁珠法分离小鼠骨髓c-kit+Lin-细胞,在干细胞因子、肝细胞生长因子、FLt-3配基、促血小板生成素和白血病抑制因子组合中添加不同剂量的白细胞介素3培养7 d,检测细胞总数、c-kit+Lin-细胞扩增倍数及细胞凋亡率.结果与结论:各因子组均可显著扩增c-kit+Lin-细胞,扩增倍数7~19倍不等.随白细胞介素3剂量加大,虽然细胞总数上升,但是超过一定浓度后c-kit+Lin-细胞扩增反而不明显.40 μg/L白细胞介素3组细胞总数扩增245.41倍,但c-kit+Lin-细胞扩增仅为15.80倍,与20 μg/L白细胞介素3组差异有显著性意义(P < 0.05).但40 μg/L白细胞介素3组细胞凋亡率低,仅为4.66%.提示白细胞介素3能协同干细胞因子+肝细胞生长因子+ FLt-3配基+促血小板生成素+白血病抑制因子有效地扩增c-kit+Lin-细胞,其表型并不受影响,但过高剂量反而促使干细胞分化.20 μg/L剂量的白细胞介素3扩增效果佳.
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微孔膜法比较Stro-1+和Stro-1-间充质干细胞的免疫调节作用
背景:研究表明间充质干细胞对淋巴细胞的增殖具有免疫抑制效应.但间充质干细胞是非均一性的细胞群,Stro-1+的抑制效应显著强于Stro-1-间充质干细胞.目的:评估Stro-1+和Stro-1-间充质干细胞对淋巴细胞增殖抑制效应的显著差异在间充质干细胞与淋巴细胞非直接接触的情况下是否依然存在.方法:先将1×104,3×104 Stro-1+或Stro-1-间充质干细胞加入微孔膜培养板(Transwell)的下室,一两小时待细胞贴壁后,再将1×104反应性外周血淋巴细胞和等量经照射的刺激性外周血淋巴细胞加入培养板的上室进行共孵育.培养5 d后以3H-TdR掺入率检测外周血淋巴细胞的增殖情况.对照组为间充质干细胞与淋巴细胞直接接触的培养体系.结果与结论:在间充质干细胞与淋巴细胞直接接触的条件下,Stro-1+间充质干细胞对淋巴细胞增殖的免疫抑制效应显著强于Stro-1-间充质干细胞;当使用微孔膜培养板阻断间充质干细胞与外周血淋巴细胞的直接接触时,这一免疫抑制作用的显著差异则消失,并且不论是Stro-1+还是Stro-1-间充质干细胞对淋巴细胞增殖的抑制作用均显著弱于各亚群与外周血淋巴细胞直接接触的情况.提示间充质干细胞与淋巴细胞的直接接触是间充质干细胞的免疫调节效应得以发挥的主要因素,而某些可溶性因子在此过程中的作用只占小部分;细胞间的这种"直接对话"也是Stro-1+间充质干细胞优势性免疫调节作用得以发挥的前提.
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中药复方对急性髓系白血病干细胞的影响
背景:白血病的发生发展、治疗耐药和容易复发的根本原因在于白血病患者体内存在一群白血病干细胞.目的:观察中药复方对急性髓系白血病干细胞的影响.方法:30例患者骨髓进行免疫磁珠分选白血病干细胞 CD34+CD38-,将所得每例白血病干细胞细胞混悬液分成2组:对照组不加药物,实验组加入中药复方制剂,终浓度为100 mg/L.结果与结论:中药复方对于白血病干细胞的抑制率为(36.660±0.018)%,核转录因子κB在22例标本中有表达,阳性率73.33%(22/30).电泳迁移率检测核转录因子κB 活性,通过凝胶成像系统分析DNA蛋白质结合条带灰度值的比较,实验组核转录因子κB活性低于对照组(P < 0.05).结果表明,中药复方可干预白血病干细胞的生长状态,可能是通过抑制核转录因子κB活性实现的.
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骨髓间充质干细胞条件培养液对H2O2损伤大鼠心肌细胞的保护
背景:间充质干细胞移植可以降低心肌梗死面积、改善心功能,目前多数认为间充质干细胞分泌生物因子起主要作用.目的:观察骨髓间充质干细胞条件培养液对过氧化氢诱导新生大鼠心肌细胞凋亡的影响.方法:分离培养并鉴定骨髓间充质干细胞和新生大鼠心肌细胞,制作骨髓间充质干细胞条件培养液以及过氧化氢损伤新生大鼠心肌细胞模型,实验分为4组:对照组、模型组、骨髓间充质干细胞条件培养液组以及骨髓间充质干细胞条件培养液+ PI3K 抑制剂处理组.以ELISA检测乳酸脱氢酶活性和流式细胞术检测细胞凋亡率来评估新生大鼠心肌细胞损伤程度.结果与结论:模型组乳酸脱氢酶活性明显高于其余各组(P < 0.01),同时骨髓间充质干细胞条件培养液+抑制剂组也高于骨髓间充质干细胞条件培养液组(P < 0.01);骨髓间充质干细胞条件培养液组细胞凋亡率低于与骨髓间充质干细胞条件培养液+抑制剂组(P < 0.01),并且都低于与模型组(P < 0.01).证明了骨髓间充质干细胞条件培养液抑制了过氧化氢诱导的新生大鼠心肌细胞凋亡,该作用部分是通过PI3K途径发挥的.
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胎源性非黏附骨髓基质细胞的特性
背景:骨髓中存在非黏附干细胞,该类细胞形态及表型特征与黏附骨髓间充质干细胞相似.目的:观察胎源性非黏附骨髓基质细胞的基本特性.方法:采用反复贴壁分离法培养胎源性骨髓非黏附基质细胞,每24 h取悬浮细胞分瓶培养,共4次;采用MTT法测定第1,3,5代细胞生长曲线,流式细胞仪行细胞周期测定和表面标志分析;并取第1代细胞行造血集落培养,第3代细胞成骨和成脂诱导培养.结果与结论:反复贴壁分离培养4次后仍有细胞贴壁并有集落形成,剩余细胞经培养7 d后即可得到原代骨髓非黏附基质细胞.骨髓非黏附基质细胞形态不均匀,高表达整合素及内皮细胞表面标记,中等量表达CD106,同时也表达造血细胞标记CD34;体外可分化为成骨细胞及造血细胞,但成脂分化能力较弱.
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全骨髓直接贴壁分离人骨髓间充质干细胞的生物学特性
背景:体外分离培养骨髓间充质干细胞成为实验研究和临床应用的关键环节.目的:采用全骨髓培养法分离人骨髓间充质干细胞,建立一种简单、有效的分离培养骨髓间充质干细胞的方法.方法:通过全骨髓培养法分离培养人骨髓间充质干细胞,并通过传代进行纯化和扩增培养.分别在特定诱导体系中诱导人骨髓间充质干细胞向脂肪、成骨及软骨细胞分化.结果与结论:采用全骨髓培养分离法能获得90%以上纯度的骨髓间充质干细胞;流式细胞仪检测结果显示,贴壁细胞均表达CD73、CD90、CD105,不表达造血细胞表型CD34、CD45和HLA-DR;细胞倍增时间为(24.04±0.49) h;细胞周期分析表明:G0~G1期和S+G2+M期所占比例分别为71.63%和28.37%;诱导分化结果显示,人骨髓间充质干细胞能够向脂肪、骨和软骨细胞分化.说明全骨髓分离培养法是一种较好的分离人骨髓间充质干细胞的方法.
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小鼠脂肪干细胞的免疫原性及移植安全性
背景:多组实验证实脂肪干细胞体外能够大量扩增,经一定诱导条件作用后能够向3个胚层分化,并且能够加以一定的基因修饰.目的:观察小鼠脂肪干细胞的免疫原性和经静脉移植后的安全性.方法:体外分离培养小鼠脂肪干细胞,流式细胞仪鉴定细胞表面的免疫标记物;体外淋巴细胞增殖试验检测脂肪干细胞对淋巴细胞的活化能力;经小鼠尾静脉移植脂肪干细胞,观察细胞在体内对小鼠T、B淋巴细胞的刺激作用;仔细解剖移植后小鼠,观察细胞移植后的成瘤性.结果与结论:脂肪干细胞在体外容易扩增培养,表达间质干细胞表面标记物;体外与淋巴细胞共培养时,不能有效刺激淋巴细胞增殖;经静脉移植后,不能激活机体细胞免疫反应,但是能够活化B淋巴细胞,激活机体体液免疫反应;细胞移植后未观察到肿瘤形成和组织畸变.提示脂肪干细胞总体免疫原性较低,移植后不会激活宿主细胞免疫系统;脂肪干细胞移植后无肿瘤样生长,安全性较好.
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携带双报告基因真核表达载体pHSV1-TK-IRES2-EGFP在小鼠骨髓间充质干细胞内的表达
背景:单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶(herpes simplex virus 1-thymidine kinase,HSV1-TK)与绿色荧光蛋白(EGFP)双报告基因共表达载体构建及其在骨髓间充质干细胞内的表达研究报道较少.目的:构建pHSV1-TK-IRES2-EGFP真核表达载体,并检测其在体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞内的表达.方法:应用聚合酶链式反应从质粒pHSV106中扩增出HSV1-TK基因后与pMD18-T载体连接,构成重组质粒pHSV1-TK/18T.重组质粒以限制性内切酶Bgl Ⅱ和Sal Ⅰ进行双酶切,将其插入同样双酶切处理的pIRES2-EGFP载体内;并将新构成的重组质粒pHSV1-TK-IRES2-EGFP以脂质体法转染小鼠骨髓间充质干细胞.结果与结论:酶切鉴定结果表明,扩增的HSV1-TK基因序列正确,大小为1 130 bp;重组质粒载体内的HSV1-TK序列与Gene Bank报告的序列完全一致;骨髓间充质干细胞转染后在荧光显微镜下可以观察到有特异性绿色荧光出现,HSV1-TK的mRNA有表达.实验成功构建了pHSV1-TK-IRES2-EGFP真核表达载体,在体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞内能有效的表达.
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5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷标记大鼠骨髓间充质干细胞的有效性
背景:深入准确地研究骨髓间充质干细胞在体内外增殖、分化的规律,寻找安全、有效、灵敏度高、特异性强、简便的标记活细胞的方法至关重要.目的:探索5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞的有效性及对其增殖能力的影响.方法:全骨髓贴壁法培养扩增SD大鼠骨髓间充质干细胞至第3代.将细胞以5×107 L-1浓度接种于96孔板中,掺入法加入终浓度为0,10,20,50 μmol/L 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷,分别在培养24,48和72 h检测5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷标记细胞的阳性率、标记后的细胞形态,并绘制标记细胞的生长曲线.结果与结论:各浓度组标记率均随标记时间延长而升高(P < 0.05);各时间点标记率随标记浓度的升高而增加,但其差别无显著性意义(P > 0.05).10 μmol/L 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶标记骨髓间充质干细胞72 h即可获得良好的标记率.标记前后各组间充质干细胞生长曲线均呈"S"形.说明在实验浓度范围内应用5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷体外标记骨髓间充质干细胞有效,不影响细胞的增殖,且10 μmol/L 5-乙炔基-2'脱氧尿嘧啶核苷标记骨髓间充质干细胞72 h即可获得良好的标记率.
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小鼠脂肪源干细胞分离培养和成骨诱导前后造血调控因子的表达
背景:小鼠脂肪源干细胞的体外分离培养和诱导分化以及成骨诱导前后造血调控因子表达的报道甚少.目的:观察小鼠脂肪源干细胞的体外分离培养方法以及成骨诱导前后造血调控因子分子水平的表达.方法:采用酶消化法获得雄性C57BL/6小鼠脂肪来源的细胞,传代培养至第3代,分别进行成脂与成骨细胞诱导.结果与结论:小鼠脂肪来源的细胞体外培养呈梭形贴壁生长,可稳定传代.细胞表面标志CD29表达率强阳性,CD34表达率较低,CD106、CD49d低表达.成脂及成骨细胞诱导均为阳性.造血调控因子β-连环蛋白表达量高,基质细胞衍生因子1和神经钙黏素次之,其余干细胞因子、巨噬细胞炎性蛋白1α、配体jagged1、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子均为低表达.结果证实,小鼠脂肪来源的细胞为脂肪源干细胞,其成骨诱导前后的造血调控因子均有表达,但差异无显著意义.
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CD271磁珠体外诱导人胚胎干细胞分化为成骨细胞的可行性
背景:来源于人胚胎干细胞的成骨细胞研究结果引人关注,但是能够产生大量有效的成骨细胞且不含有其他杂细胞的诱导方法仍然没有建立起来.目的:探讨利用CD271磁珠从体外诱导分化的人胚胎干细胞中分选出成骨细胞的可行性.方法:人胚胎干细胞株SYSU-2形成拟胚体6 d,贴壁分化14 d后,通过CD271磁珠分选技术获得CD271阳性细胞,进一步检测CD271阳性细胞核型,表面抗原表达及分化潜能.结果与结论:CD271阳性细胞与骨髓来源的间充质干细胞形态相似,为长梭形,并可在体外保持稳定核型至14代左右.同时,这种细胞也具有与骨髓来源的间充质干细胞相似的表面抗原标记(CD45阴性和CD73,CD105,CD166阳性).分化潜能鉴定证明CD271阳性细胞只能诱导形成成骨细胞.这对于研究成骨发育的机制和为骨组织工程提供足量安全有效的种子细胞都有着重要意义.
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豚鼠脂肪间充质干细胞向类神经元样细胞的分化
背景:目前关于耳科干细胞研究的动物实验大多是将其他动物种属的干细胞用于豚鼠模型,而对于豚鼠本身来源的干细胞研究报道极少.目的:探寻豚鼠脂肪间充质干细胞向神经细胞元样分化的潜能.方法:取豚鼠脂肪,分离脂肪间充质干细胞培养至第3代,cck-8试剂盒检测第1~10天细胞增殖A值,流式细胞仪检测细胞的免疫表型;成神经诱导并行巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经丝蛋白200免疫荧光染色.结果与结论:豚鼠脂肪间充质干细胞增殖的生长曲线近似"S"形,传代后经过3 d的潜伏期,3 d后进入对数生长期,8 d后进入平台期,其细胞的免疫表型CD29表达率86.3%,CD44表达率55.5%,CD45表达率为0.4%,成神经细胞诱导后细胞形态与神经细胞类似,巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经丝蛋白200染色均呈阳性.说明豚鼠脂肪间充质干细胞在体外易于分离、培养及扩增,具有向神经细胞元样分化的潜能.
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脐带间充质干细胞在骨组织工程中的应用进展
背景:在骨组织工程领域,对新型种子细胞脐带间充质干细胞的研究逐渐增多.目的:针对脐带间充质干细胞的分离培养、生物学特征及其在骨组织中所用载体进行综述.方法:由第一作者应用计算机检索1999-01/2011-03 PubMed数据库及中国期刊全文数据库中有关脐带间充质干细胞分离培养、生物学特征、载体方面的文章.英文检索词为"umbilical cord stem cell,tissue engineering",中文检索词为"脐带间充质干细胞,骨组织工程".排除重复性研究及无关研究,共保留46篇文章进行综述.结果与结论:脐带间充质干细胞具备胚胎和成体干细胞的多重特点,并且符合国际细胞疗法协会制定的间充质干细胞标准,但是脐带间充质干细胞的分离培养、诱导分化方法等尚不完善,应进一步深入分析.在脐带干细胞的载体方面,单一的材料支架目前研究已很多,对于复合材料载体与可注射性载体的研究可能是今后的热点.
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骨髓间充质干细胞在胶质瘤治疗中的作用
背景:骨髓间充质干细胞已成为脑胶质瘤基因治疗中理想的载体细胞.目的:了解骨髓间充质干细胞在胶质瘤治疗中的研究进展及相关机制.方法:以"bone marrow mesenchymal stem cells,mesenchymal stem cells,multipotent stem cells,treatment of glioma,gene therapy"为检索词,检索Pubmed数据库中1990/2011-01的文献;纳入与骨髓间充质干细胞的生物特性、在胶质瘤基因治疗中作用有关的基础性、前瞻性及临床性研究.排除重复文献.结果与结论:计算机初检得到109篇文献,根据纳入排除标准,对其中30篇文献进行分析.主要阐述了骨髓间充质干细胞的生物特性,通过比较国外骨髓间质干细胞移植治疗胶质瘤的动物实验和临床研究,证实骨髓间充质干细胞作为胶质瘤基因治疗的载体,在胶质瘤治疗中具有良好的应用前景.
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静脉输注骨髓间充质干细胞的归巢路径
背景:间充质干细胞被认为是有希望用于治疗多种疾病的一种非造血组织的多能干细胞,但是其靶向组织器官归巢率偏低,影响了其作为干细胞疗法的效果.目的:通过对国内外相关文献的综合分析,探讨静脉输注骨髓间充质干细胞的归巢现象.方法:利用计算机检索清华同方数据库、万方数据库、Pubmed数据库,检索英文关键词为"Bone marrow mesenchymal stem cells,homing",中文关键词为"骨髓间充质干细胞,归巢",主要筛选出近10 年内具代表性的文献资料.经查阅、整理出33篇可支持本综述的文献.结果与结论:研究发现,静脉输注的骨髓间充质干细胞与血管壁接触并穿过内皮细胞从而归巢至多个脏器,特别是损伤、炎症及肿瘤部位.文章从静脉输注骨髓间充质干细胞的归巢特点,输注回输骨髓间充质干细胞迁移与归巢的可能机制等方面进行了相关论述.归巢的机制与参与调控的信号分子及其受体,如趋化因子、生长因子和黏附分子等有关.
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细胞工程和基因技术修复已损害的房室传导或建立人工房室通路
背景:利用细胞工程和基因技术治疗缓慢性心律失常具有不需要外来能源,不受机体神经激素调控的特点,是更为接近人体的起搏方式,具有药物和电子起搏治疗所无法比拟的优势.目的:综述目前利用细胞工程和基因技术治疗缓慢性心律失常的进展及存在的问题.方法:检索2000-01/2011-06 PubMed数据库和万方数据库相关文献.结果与结论:基因工程技术治疗缓慢性心律失常早被关注的是β2肾上腺素受体基因、Kir2.1基因,目前研究热门的为HCN基因、AC-VI基因和Tbx3基因.细胞工程中的干细胞移植(包括基因修饰干细胞移植)、细胞融合以及新兴的诱导多能干细胞和成体心肌干细胞移植技术也展示了其治疗缓慢性心律失常的巨大潜能.因此,利用细胞工程和基因技术修复已经损害的房室传导通路或建立一个人工的房室旁路,允许正常的窦性电活动传导至心室是一个更好的选择,但仍很多关键的问题有待解决,比如佳化的房室延迟、自动应答的程序设计、人工通路的位置如何固定等.
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干细胞治疗骨质疏松症的可能与可行
背景:药物治疗骨质疏松并不理想,近年来越来越多的科学家尝试采用干细胞移植方法治疗骨质疏松症.目的:旨在探究通过干细胞治疗骨质疏松的进展,以促进其临床应用.关键词中以"stem cell,osteoporosis,bone metabolism,osteoporosisbone marrow mesenchymal stem cells(BMMSCs),Adipose-derived stem cells (ADSCs)或"干细胞,骨质疏松,骨代谢,骨髓间充质干细胞,脂肪源干细胞"为检索词进行检索.选择文章内容与干细胞治疗骨质疏松有关者,同一领域文献则选择近期发表在权威杂志文章.摘要、方法:由第一作者应用计算机检索PubMed、中国期刊全文数据库(CNKI) 1997-05/2011-10相关文献.在标题、结果与结论:初检得到144篇文献,根据纳入标准选择50篇文献进行综述.应用干细胞治疗骨质疏松主要是通过增加成骨细胞的数量来达到治疗目的,常用的方法有干细胞移植及诱导干细胞分化.干细胞可以从根本上治疗骨质疏松,并且能避免药物治疗的毒副作用,具有广阔应用前景.
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神经系统疾病的干细胞治疗
背景:干细胞具有自我更新和多向分化的生物学特性,在生理或病理情况下能维持组织器官内环境的稳定,近年被广泛用于再生医学的研究.目的:对神经系统疾病的干细胞治疗进展进行综述.方法:通过Pubmed数据库检索有关干细胞治疗神经系统疾病的相关文献.检索词为"stem cells、Nervous system diseases、therapy".初检得到298篇文献,终保留54篇符合标准的文献进行分析.结果与结论:经过近些年的研究,干细胞被认为是神经损伤和变性疾病的一个很有前景的治疗手段.通过干细胞的移植,取代受损的神经细胞,促进受损神经网络的恢复从而重建神经功能.
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脐血间充质干细胞移植脊髓损伤恢复期患者的免疫功能变化
背景:间充质干细胞移植因其具有一定的免疫原性,对脊髓损伤患者免疫功能的影响尚无深入系统的报道.目的:观察脐血源间充质干细胞移植对脊髓损伤患者免疫功能的影响.方法:61例脊髓损伤患者采用静脉滴注结合腰椎脊髓蛛网膜下腔注射脐血间充质干细胞悬液治疗.应用流式细胞术及免疫比浊法分别测定患者移植前后T淋巴细胞亚群、免疫球蛋白及补体的含量.结果与结论:与治疗前相比,患者CD3+、IgA及IgG有下降趋势,差异有显著性意义;CD4+、CD8+、CD4+/CD8+、IgM、C3及C4均有升高或下降趋势,但差异无显著性意义.提示脐血源间充质干细胞移植对细胞及体液免疫不会激活急性免疫应答,移植是安全的,存在负向免疫调节作用的可能,但尚需进一步完善相关指标,扩大样本,明确相关机制.
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从母系遗传研究肾阴虚型慢性再生障碍性贫血的发病机制
背景:多项研究表明恶性血液病可以出现线粒体的突变,但尚未有关于慢性再生障碍性贫血中线粒体变化的研究.目的:研究肾阴虚和肾阳虚型慢性再生障碍性贫血患者线粒体突变情况,探讨母系遗传的本质--线粒体与肾阴虚型慢性再障发生、发展的关系,以期进一步研究慢性再障的发病机制.方法:收集10例诊断明确的肾阴虚型5例肾阳虚型慢性再生障碍性贫血患者骨髓和口腔黏膜上皮,提取DNA,进行线粒体DNA的全测序,比较线粒体基因.结果与结论:肾阴虚型慢性再生障碍性贫血患者线粒体全测序表明许多患者的突变位点发生在与线粒体氧化呼吸链密切相关的区域,涵盖了还原态烟酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶1~2、4~6,细胞色素B等多个线粒体DNA的编码基因.而肾阳虚型慢性再生障碍性贫血患者线粒体突变不明显.提示线粒体基因突变引起的呼吸链酶复合体表达水平的改变,造成细胞能量代谢障碍,可能在造血干细胞衰竭的发生发展中起到关键作用.而这一变化是与肾阴虚--母系遗传息息相关的.
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脐血单个核细胞移植治疗糖尿病足23例
背景:以自体骨髓、外周血间充质干细胞移植治疗糖尿病足,对缺血性病变及周围神经损伤所致临床症状有改善作用.目的:观察脐血单个核细胞移植治疗糖尿病足病缺血及神经损伤的疗效.对象:选取2006/2010住院行脐血单个核细胞移植治疗的糖尿病足病患者23例,脐血单个核细胞稀释后双下肢肌肉内注射,每点1~3 mL,间隔约3 cm.单个肢体移植1.23×108~1.06×109个,共计38条肢体.结果与结论:移植后踝肱指数升降不一,移植后6个月疼痛评分及冷感评分明显改善,间歇性跛行及皮肤温度、经皮氧分压治疗后3,6个月比较差异均有显著性意义;对神经病变损伤自觉症状评分、临床检查评分、振动觉阀值移植后6个月与移植前比较差异有显著性意义.腓浅神经、胫神经感觉神经传导速度,腓总神经、胫神经运动神经传导速度,在移植后3个月与移植前比较,差异无显著性意义(P > 0.05),移植6个月与移植前相比较有升高,差异有显著性意义(P < 0.05).可见脐血单个核细胞可以改善糖尿病缺血性病变及周围神经病变的临床症状及客观指标.
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慢性肾脏病患者外周血干细胞因子水平的测定
背景:干细胞因子是一种多功能细胞因子,在肾间质纤维化过程中起至关重要的作用.目的:观察慢性肾脏病患者外周血干细胞因子水平的变化及其临床意义.方法:采用ELISA法检测22例健康对照者和116例慢性肾脏病患者外周血干细胞因子水平,分析其与肾损害程度、贫血、脂质代谢紊乱、心血管病变、尿毒症皮肤瘙痒等的相关性.结果与结论:慢性肾脏病患者外周血干细胞因子水平明显高于对照组(P < 0.01);随着肾功能减退,外周血干细胞因子水平逐渐升高,各组间相比差异有显著性意义(P < 0.05),且其水平与慢性肾脏病分期、血肌酐、尿素氮、C-反应蛋白、血酯、甲状旁腺激素呈正相关,与血红蛋白呈负相关,提示外周血干细胞因子的升高可能与慢性肾脏病进展、并发贫血等并发症的发生发展有重要关系.