中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子: 1.38
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 2095-4344
- 国内刊号: 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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骨髓间充质干细胞胰腺内移植治疗糖尿病:是否发生了细胞的“转分化”?
背景:近年来大量研究认为骨髓间充质干细胞植入后可以改善糖尿病鼠的高血糖状态,但相关的机制尚不明确且存在一些争议。目的:探讨骨髓间充质干细胞移植到糖尿病大鼠胰腺后的作用机制。方法:将增强型绿色荧光蛋白标记的骨髓间充质干细胞移植到糖尿病大鼠胰腺包膜下,血糖仪监测血糖, RT-PCR 动态检测受体鼠胰腺组织增强型绿色荧光蛋白阳性细胞中关键转录因子的表达,免疫荧光染色观察胰腺组织中增强型绿色荧光蛋白和胰岛素共表达情况,流式细胞术分析增强型绿色荧光蛋白阳性胰腺组织细胞的细胞周期和DNA倍性。结果与结论:胰腺包膜下移植骨髓间充质干细胞能有效降低糖尿病鼠血糖;Nestin、Nkx 2.2的表达分别在移植后1,3周到达峰值,Pax 4和Ngn 3的表达在移植后4周到达峰值,胰岛素和胰高血糖素的表达至移植后12周到达峰值,PDX-1的表达在8周时达到峰值并维持至12周;免疫荧光染色发现有增强型绿色荧光蛋白和胰岛素共表达细胞;流式细胞术测定增强型绿色荧光蛋白阳性的胰腺组织细胞中处于S+G2/M期的细胞增加,细胞核型未见多倍体或非整倍体细胞。提示在胰腺微环境中,植入糖尿病鼠胰腺局部的骨髓间充质干细胞在基因调控下向胰岛β样细胞发生横向转分化,而非细胞融合获得β细胞的功能表型。
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自身骨髓间充质干细胞治疗慢性移植物肾病的安全性与可行性
背景:慢性移植物肾病是肾移植领域较难处理的一种临床并发症,大多数终会发展为移植肾失功。骨髓间充质干细胞作为一种低免疫原性的特殊细胞群,已证实具有分化、转分化、旁分泌等多种功能,在临床其他领域已有成功应用的基础。基于此特点,将其应用于慢性移植物肾病的患者可能会起到一定的治疗作用。目的:探讨数字减影动脉造影引导下经移植肾动脉输注及之后经静脉输注自身骨髓间充质干细胞治疗慢性移植物肾病的安全性与可行性。方法:选择2011年3月至2013年1月间确诊慢性移植物肾病且符合入组标准的患者11例,行1次数字减影动脉造影引导下经移植肾动脉输注及之后2次经静脉输注骨髓间充质干细胞。观察治疗后1年内患者血肌酐、尿素氮、内生肌酐清除率、胱抑素C、24 h尿蛋白、血/尿β2微球蛋白的变化情况。结果与结论:11例患者未发生出血、移植肾动脉栓塞、假性动脉瘤等相关并发症。骨髓间充质干细胞治疗后1周、1个月时血肌酐、尿素氮、胱抑素C水平与治疗前相比明显下降,其差异有显著性意义(P<0.05);治疗3个月后,各指标与治疗前比较差异无显著性意义(P>0.05)。骨髓间充质干细胞治疗后1周、1个月时内生肌酐清除率较治疗前升高,其差异有显著性意义(P<0.05);而治疗3个月后与治疗前比较差异无显著性意义(P>0.05)。治疗7 d时24 h尿蛋白水平与治疗前相比明显下降,其差异有显著性意义(P<0.05),而治疗1个月后差异无显著性意义(P>0.05);血/尿β2微球蛋白治疗前后均无明显变化。结果可见数字减影动脉造影引导下经移植肾动脉输注及经静脉输注骨髓间充质干细胞治疗慢性移植物肾病是安全的,对患者肾功能改善有一定效果,输注细胞剂量及后续输注方式的选择尚有待研究。
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颅骨来源骨髓基质干细胞的分离培养方法
背景:从小鼠颅骨提取的一类骨髓基质干细胞称为PA6细胞,研究者发现当PA6细胞与其他干细胞共培养时可向神经细胞分化,此特性可被应用于神经损伤部位的修复。所以,PA6细胞越来越受到研究者的关注,但目前国内对类似骨髓基质干细胞PA6的提取方法鲜见报道。目的:分离培养SD大鼠颅骨来源的骨髓基质干细胞,体外观察细胞形态并免疫荧光鉴定。方法:无菌条件下,取新生的SD大鼠颅骨将其剪碎,用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液冲洗颅骨碎片,反复吹打制成单细胞悬液,将其置于培养瓶中培养,多次换液培养纯化细胞。取第2代生长均一的细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,并用免疫荧光染色法进行细胞表面标记鉴定。结果与结论:原代细胞培养24 h后,骨髓基质干细胞开始贴壁;3 d后细胞数量增多,形态呈不规则形、多角形、三角形和扁平形;细胞传代后,形态基本均一,细胞排列呈放射状和束状,贴壁能力较强,部分细胞呈聚集生长,增殖速度比原代有明显的加快。免疫荧光染色检测CD105、CD73、CD44、CD90表达呈阳性, CD45、CD34、CD14和HLA-DR表达呈阴性,证实了提取的细胞为骨髓基质干细胞。
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骨髓间充质干细胞增殖分化能力可随鼠龄增长而下降
背景:骨髓间充质干细胞是理想的组织工程种子细胞来源,但是不同年龄的骨髓间充质干细胞体外增殖、分化特点有很大差异,有关年龄与骨髓间充质干细数量的关系目前尚缺少系统研究。目的:观察不同鼠龄大鼠骨髓间充质干细胞诱导分化活性的差异。方法:通过全骨髓贴壁培养法,体外分离、纯化、扩增 SD 大鼠骨髓间充质干细胞,倒置相差显微镜观察形态学特点,流式细胞仪检测细胞表面标记,体外诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞、成软骨细胞分化并鉴定。取第3代2,4,6,8,12周龄和10,12月龄大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导1,2,3周,采用酶联免疫法检测骨钙素含量。结果与结论:体外培养的骨髓间充质干细胞为贴壁生长,长梭形成纤维细胞样细胞,可增殖形成克隆;流式细胞仪分析骨髓间充质干细胞CD29、CD90表达阳性,CD45表达阴性,CD44部分表达;经成骨分化诱导,细胞碱性磷酸酶染色阳性,茜素红染色阳性;经成软骨分化诱导,阿利辛蓝染色阳性,可见通过全骨髓贴壁法可成功地从大鼠骨髓中分离出骨髓间充质干细胞。通过不同鼠龄骨髓间充质干细胞诱导成骨分化后骨钙素含量测定得出骨髓间充质干细胞增殖分化能力随鼠龄的增长而下降。
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芒果苷对缺氧损伤骨髓间充质干细胞的保护作用
背景:研究表明骨髓间充质干细胞移植在临床治疗方面具有广阔的应用前景。然而,移植细胞的死亡限制了组织再生,寻找新的抗自由基和保护骨髓间充质干细胞的药物有着重要意义。目的:研究芒果苷对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤的保护作用。方法:采用氯化钴(CoCl 2)建立体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞缺氧损伤模型。将细胞分为正常对照组、氯化钴缺氧损伤组、氯化钴加芒果苷20,40,80,160μmol/L组。缺氧损伤12,24 h检测各组骨髓间充质干细胞培养上清液中超氧化物歧化酶、丙二醛、过氧化氢酶水平。缺氧损伤3,6,12,24 h检测各组骨髓间充质干细胞内活性氧变化。结果与结论:芒果苷能明显提高缺氧损伤的骨髓间充质干细胞的存活率,提高细胞内超氧化物歧化酶、过氧化氢酶活性,降低细胞内丙二醛、活性氧水平,有效保护缺氧损伤下的骨髓间充质干细胞。芒果苷具有较强的抗氧化能力及缺氧保护作用,可明显减轻骨髓间充质干细胞的氧化应激损伤。
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依达拉奉对骨髓基质干细胞氧化损伤的调节作用
背景:既往依达拉奉作为抗氧化剂对神经细胞氧化损伤的保护作用已得到证实,但其对骨髓基质干细胞氧化损伤的保护作用未见明确报道及深入研究。目的:观察依达拉奉对骨髓基质干细胞在氧化损伤中的调节作用。方法:通过冲洗髓腔的方法提取新西兰大耳白兔的长骨骨髓,然后应用密度梯度离心联合贴壁筛选的方法体外培养获得骨髓基质干细胞。实验将第3代骨髓基质干细胞分为5组:空白组仅加入体积分数为10%胎牛血清、1%的双抗的低糖DMEM培养液;地塞米松组加入含有1×10-7 mol/L地塞米松的细胞培养液,不含有依达拉奉;50,100,300 mg/L依达拉奉组分别加入1×10-7 mol/L的地塞米松和质量浓度为50,100,300 mg/L的依达拉奉,培养后分别用四甲基偶氮唑蓝法、流式细胞仪法检测细胞增殖水平及细胞周期。结果与结论:依达拉奉组较空白组及地塞米松组细胞增殖水平明显增强,依达拉奉对骨髓基质干细胞起到了保护作用,当依达拉奉质量浓度为50 mg/L时即发挥作用(P<0.05),并且与依达拉奉的质量浓度有一定的量效关系,当依达拉奉质量浓度为100 mg/L时,其保护作用明显提高(P<0.01),但随着质量浓度的增加,这种保护作用没有进一步增加,反而稍有下降。结果表明:高浓度地塞米松可以使骨髓基质干细胞受到氧化损伤,依达拉奉可以通过抗氧化作用保护骨髓基质干细胞免受氧化损伤。
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蛇床子素可促进体外培养神经干细胞的增殖
背景:神经干细胞具有自我更新和多向分化潜能,但正常情况下,神经干细胞数目太少,且大部分处于静息状态,促进其增殖是神经干细胞治疗神经退行性疾病的关键。目的:观察蛇床子素对体外培养的神经干细胞增殖作用的影响,分析其促进增殖能力的作用机制。方法:体外培养神经干细胞,在增殖培养基中培养至第3代,加入不同浓度的蛇床子素(10,50和100μmol/L)作用24 h用CCK-8法检测细胞活力,再培养3,5,7 d后测量神经球半径,用免疫荧光组化法计数Ki67阳性细胞数目;再培养3 d后利用RT-PCR技术检测神经干细胞中Notch 1、Hes 1和 Mash 1基因表达的情况。结果与结论:与正常组比较,50,100μmol/L的蛇床子素具有明显促进神经干细胞增殖能力的作用,100μmol/L作用为显著,可引起Notch 1基因、Hes 1基因上调表达,对Mash 1基因基本无影响,说明蛇床子素对体外培养的神经干细胞具有促进增殖作用,其作用机制可能与激活Notch信号通路上的Notch 1、Hes 1基因有关。
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下颌下腺主导管结扎可激活损伤组织中的干/祖细胞
背景:成体干细胞的伦理学问题较少,而且某些操作技术比较成熟,利用成体干细胞进行组织工程化涎腺的构建具有十分诱人的吸引力和极其重要的应用前景。目的:建立下颌下腺主导管结扎的涎腺组织损伤大鼠模型,探讨涎腺组织损伤模型中成体干/祖细胞存在的可能性及可能位置。方法:SD大鼠统一行右侧下颌下腺主导管结扎,1周后处死大鼠取出两侧腺体,通过苏木精-伊红染色、PAS糖原染色及细胞角蛋白19、Bcl-2、Ki-67等指标的免疫组织化学测定,对正常涎腺组织与建立的损伤模型组织进行比较。结果与结论:同一只大鼠,结扎侧与对照侧体积、质量有明显的差异。对照侧下颌下腺组织呈卵圆形,色泽红润,表面光滑,有完整包膜,质地柔软;结扎后腺体萎缩,组织形态欠规整,色泽暗红,包膜充血,质地变韧,周围组织血管代偿性扩张。主导管结扎的组织损伤模型可导致 PAS 阳性腺细胞的消失和细胞角蛋白19阳性的小导管上皮细胞增殖,并有在未结扎的腺体中很少见到的小丛层粘连蛋白阳性细胞出现在导管周围,而抑制细胞凋亡的Bcl-2和提示增殖活跃度的Ki-67的表达均有所增强。可见下颌下腺组织中可能存在着定位于涎腺周围导管区的下颌下腺干/祖细胞;下颌下腺主导管结扎导致的组织损伤模型是一种能有效激活下颌下腺组织中干/祖细胞的方法。
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内皮祖细胞修复缺血再灌注大鼠肾损伤
背景:内皮祖细胞在损伤信号的诱导刺激下能被招募到血管损伤局部,分化为成熟内皮细胞,参与血管新生和内皮修复。目的:验证内皮祖细胞能否促进缺血再灌注大鼠肾损伤的修复。方法:抽取大鼠外周血,采用密度梯度离心的方法分离、培养内皮祖细胞。22只雄性SD大鼠随机分为3组,缺血再灌注组采用右肾摘除左肾蒂夹闭左肾动脉、静脉40min后松开制备缺血再灌注模型;正常对照组除未给予左肾动静脉夹闭外,余操作同缺血再灌注组模型组;内皮祖细胞组动物同样制备缺血再灌注模型,夹闭40min后从左肾动脉移植内皮祖细胞(5×109L-1,共1mL)至左肾,缺血再灌注组予注射同等剂量的细胞培养液。于术后第1天收获3组大鼠肾脏和血标本。流式细胞仪及细胞免疫荧光鉴定内皮祖细胞表面标志(CD34/血管内皮生长因子受体2);测定血尿素氮和肌酐;行免疫组织化学观察各组CD34表达情况。结果与结论:与正常对照组比较,缺血再灌注组大鼠的尿素氮、肌酐均明显升高,肾组织CD34表达减少(P<0.05);给予内皮祖细胞治疗后,缺血再灌注组大鼠的尿素氮、肌酐较治疗前明显下降,肾组织血管内皮细胞标志物CD34的表达较治疗前明显增加(P<0.05)。结果证实内皮祖细胞移植可促进缺血再灌注大鼠肾脏损伤的修复。
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慢病毒介导骨形态发生蛋白2基因转染大鼠骨髓内皮祖细胞
背景:基因治疗已成为疾病治疗的新趋势,为某些难治性疾病带来了曙光,合适的细胞、基因及载体的选择是治疗的关键。目的:探讨慢病毒介导骨形态发生蛋白2基因转染大鼠骨髓内皮祖细胞应用于基因治疗的有效性和可行性。方法:从SD大鼠骨髓分离、培养、鉴定内皮祖细胞,采用构建的慢病毒载体(LV)将空载体(LV-eGFP)或骨形态发生蛋白2基因(LV-eGFP-BMP2)转染至内皮祖细胞,通过eGFP荧光检测转染效率。ELISA法检测上清液中骨形态发生蛋白2蛋白的分泌,Western blot法检测细胞骨形态发生蛋白2蛋白的表达,比较转染后细胞的迁移、增殖和抗凋亡能力。结果与结论:慢病毒介导骨形态发生蛋白2载体的转染效率可达90%。与正常内皮祖细胞、转染空载体内皮祖细胞比较,转染骨形态发生蛋白2基因的内皮祖细胞分泌和表达骨形态发生蛋白2蛋白增加(P<0.01),迁移和增殖能力无明显改变(P >0.05),肿瘤坏死因子α损伤后的细胞凋亡率明显降低(P <0.05)。结果表明慢病毒介导骨形态发生蛋白2载体可成功转染内皮祖细胞,转染后可增加内皮祖细胞分泌和表达骨形态发生蛋白2蛋白,增强对炎性损伤的抗凋亡能力,对迁移能力和增殖活性无明显影响。
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正常成人粒细胞集落刺激因子动员外周血内皮祖细胞的生物学特性
背景:内皮祖细胞具有很好的临床应用前景,特别是作为种子细胞参与组织工程血管构建及疾病治疗。目的:观察粒细胞集落刺激因子动员的外周血中内皮祖细胞的生物学特性。方法:获取粒细胞集落刺激因子动员正常人的外周血单个核细胞,同时获取8例正常成人外周血单个核细胞作为对照。将获取的细胞接种在预铺纤维连接蛋白的培养皿中进行体外培养。FACS和免疫组化法检测获取细胞的免疫表型;采用 MTT 比色法和黏附能力测定实验检测内皮祖细胞的增殖和黏附能力;实时定量PCR检测血管形成相关细胞因子的表达;荧光标记的乙酰化低密度脂蛋白(Dil-acLDL)吞噬实验鉴定内皮功能;将获取的细胞接种在含有血管内皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的基底膜胶中诱导血管生成。结果与结论:动员后外周血和未动员外周血内皮祖细胞具有相似的细胞形态和免疫表型,FACS 和免疫组化检测结果显示上述两种内皮祖细胞都表达内皮细胞特异性抗原 CD34、CD31、FLK-1、ve-Cadherin、vWF和CD133。内皮细胞生长因子和基质细胞衍生因子1在动员后外周血内皮祖细胞中的表达水平增加;两种来源的内皮祖细胞都具有吞噬 Dil-acLDL 和在体外诱导血管生成的能力。但是,动员的外周血中内皮祖细胞的数量和增殖能力明显强于未动员外周血中的内皮祖细胞。结果可见动员后的外周血中可以分离出具有内皮祖细胞特性的细胞群体,该群体具有体外诱导血管生成的能力;与未动员的外周血内皮祖细胞相比,动员后外周血内皮祖细胞数量明显增加并具有更好的增殖能力。
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Toll样受体4对牙周膜干细胞免疫学特性的影响
背景:Tol 样受体4及其配体脂多糖与牙周疾病的发生、发展密切相关,牙周膜干细胞的免疫学特性在牙周组织修复重建、牙周病的治疗中发挥重要作用,而Tol 样受体4及其配体对牙周膜干细胞免疫学特性的影响还不清楚。目的:探讨Tol 样受体4对牙周膜干细胞免疫学特性的影响。方法:分离、培养牙周膜干细胞,与10 mg/L的Tol 样受体4配体脂多糖共同培养3 d。以未经脂多糖处理的牙周膜干细胞作为对照,观察脂多糖处理的牙周膜干细胞能否引起同种异体淋巴细胞的增殖,以及对混合淋巴细胞反应和植物血凝素引起的淋巴细胞增殖的影响。通过建立Transwel 培养系统建立牙周膜干细胞+植物血凝素+异体外周血单个核细胞的反应体系,测定细胞上清液中的前列腺素E2浓度。在上述反应体系进行中和实验,观察被牙周膜干细胞抑制了的淋巴细胞重新发生增殖的情况。结果与结论:无论是否与脂多糖共培养,牙周膜干细胞都没有引起等量异体外周血单个核细胞增殖,都能够抑制植物血凝素引起的淋巴细胞增殖和混合淋巴细胞反应,但是脂多糖预处理牙周膜干细胞的免疫抑制作用显著低于无脂多糖组。在牙周膜干细胞+植物血凝素+异体外周血单个核细胞的反应体系中,前列腺素 E2浓度显著升高。中和实验发现,前列腺素E2的拮抗剂吲哚美辛基本恢复了被牙周膜干细胞抑制的淋巴细胞增殖。提示,脂多糖减弱了牙周膜干细胞的免疫抑制特性,该效应由前列腺素E2减少引起。
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脐带和胚胎肝来源间充质干细胞生长特性的比较
背景:不同来源的干细胞具有不同的分子特征及生长特性,对疾病治疗的机制及效果可能会有所差异。目的:比较两种来源间充质干细胞的生物学特性。方法:分离培养人脐带源、胚胎肝来源的间充质干细胞,传至第5代时分别进行细胞形态观察,细胞群体倍增时间计算,细胞表面标志鉴定,诱导分化能力检测。另外将脐带源间充质干细胞继续培养至第10,15代,绘制生长曲线并计算细胞群体倍增时间。结果与结论:两种来源的间充质干细胞在对数生长期均为梭形,旋涡状生长,均具有成骨、成脂、成软骨分化的能力。两种间充质干细胞的生长曲线均为S形。第5代胎肝来源间充质干细胞的倍增时间为(34.37±0.31) h,脐带源间充质干细胞的倍增时间为(35.63±0.38) h,差异无显著性意义(P>0.05)。第10代和第15代脐带源间充质干细胞的倍增时间分别为(52.6±0.53) h和(53.27±0.92) h,与第5代比较差异有显著性意义(P<0.05)。结果可见两种来源间充质干细胞生物学特性基本相同,肉眼观察胎肝来源间充质干细胞比脐带源间充质干细胞形态稍小,增殖较快,但统计学上差异无显著性意义。
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脐带间充质干细胞对裸鼠胸腺发育的作用及机制
背景:自身免疫性疾病的传统治疗方法很难有效解决患者免疫耐受机制缺失的问题。间充质干细胞具有再生修复实质组织器官和免疫调节的生物学特性。目的:探讨人脐带源间充质干细胞对裸鼠胸腺发育的影响及作用机制。方法:采用腹腔注射的方式向Foxn1-/-的BABL/c裸鼠体内注射人脐带源间充质干细胞,2×106/只,分析治疗后裸鼠胸腺残基的组织结构变化、胸腺上皮细胞的分布及成熟度,以及发育后的胸腺成熟淋巴细胞输出功能,并探讨人脐带源间充质干细胞发挥治疗作用的机制。结果与结论:胸腺残基出现了清晰的皮髓质结构,胸腺上皮细胞数量增加并且胸腺输出功能增强,外周血中调节性T细胞增多。其作用机制可能是由于人脐带源间充质干细胞能够定植在胸腺组织内并且表达多种促进胸腺发育的细胞因子,尤其是对胸腺发育非常重要的角质形成细胞生长因子。结果表明人脐带源间充质干细胞能够为裸鼠胸腺的结构发育和功能成熟提供合适的微环境,促进裸鼠胸腺残基的发育和功能成熟,为间充质干细胞治疗免疫性疾病的作用机制提出了新的理论观点。
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脐带间充质干细胞在不同培养体系条件下的生物学特性
背景:体外培养的脐带间充质干细胞在不同培养体系下生长状态差异显著,因此选取一种更适合的培养基相当必要。目的:对比观察人脐带间充质干细胞在3种培养基中的生长增殖情况,并检测细胞免疫表型以及间充质干细胞的诱导分化能力。方法:在无菌条件下用贴块法收获人脐带间充质干细胞,用T75培养瓶培养传代后,取第3代脐带间充质干细胞分别种入到含体积分数为5%胎牛血清的DMEM/F12培养基、含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基和Mesen PRO RSTM培养基中,培养第1,3,5,7天进行细胞计数,绘制细胞生长曲线。采用流式细胞仪分析第3代脐带间充质干细胞免疫表型,并检测其成骨及成脂肪诱导分化能力。结果与结论:培养出的第3代人脐带间充质干细胞高表达CD44、CD73、CD90、CD105,不表达CD29、CD31、CD34、HLA-DR。经成脂诱导后,油红O染色可见胞浆中有大量红色小脂滴;成骨诱导后,茜素红染色后镜下可见成骨样细胞团,说明脐带间充质干细胞在体外具有多向分化的潜能。在倒置显微镜下观察可见含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基中的细胞集落密集,形态均匀,而其他2种培养基中的细胞集落密集程度和形态都不如前者好。在培养传代细胞时,可优先选择含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基。
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豚鼠脂肪间充质干细胞植入耳聋模型修复听力的作用
背景:脂肪间充质干细胞是否是治疗因毛细胞退化、缺失所造成的感音神经性聋的福音呢?目的:探讨豚鼠脂肪间充质干细胞经耳蜗鼓阶途径植入感音神经性耳聋动物模型后对听力的修复作用。方法:庆大霉素腹腔注射建立豚鼠感音神经性耳聋动物模型,耳蜗鼓阶途径植入豚鼠脂肪间充质干细胞,分别于植入后1,3周检测听性脑干反应,观察植入脂肪间充质干细胞后耳聋动物听力的变化;并追踪EDU标记的豚鼠脂肪间充质干细胞在耳蜗内的迁移及分布情况。结果与结论:在植入后1周及3周进行听性脑干反应检测,听力较移植前逐渐好转。植入细胞后1周,细胞大多分布在外淋巴液中,部分迁移至耳蜗柯蒂器贴附于基底膜上,植入细胞后3周,细胞不仅迁移并贴附在Corti器基底膜发挥作用,而且部分迁移到蜗神经,植入时间越长,存活细胞越少。结果表明豚鼠脂肪间充质干细胞通过耳蜗鼓阶途径微孔植入,可以定向迁移并存活终达到提高听力的目的。
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γ型干扰素增强脂肪干细胞介导的免疫抑制
背景:脂肪干细胞可以向成骨细胞和软骨细胞、平滑肌细胞、心肌细胞和神经细胞等分化。脂肪源性干细胞与间充质干细胞不但具有非常近似的生物学性质,而且在细胞表面标志谱的表达方面也十分接近。目的:探索脂肪源性干细胞表面白细胞抗原Ⅱ类分子的表达以及其免疫原性和免疫调节作用,并探讨其具体机制是通过什么途径诱导的。方法:分离培养脂肪源性干细胞,并用γ型干扰素刺激,然后用流式细胞术检测其表面免疫分子白细胞抗原Ⅱ的表达,实时荧光定量PCR和Western bolt分别检测吲哚胺-2,3-双加氧酶基因和蛋白的表达。脂肪源性干细胞单向刺激淋巴细胞,观察细胞增殖情况。淋巴细胞用植物血凝素刺激后,加入1×102-1×105脂肪源性干细胞,观察淋巴细胞增殖情况;同时,1×102-1×105脂肪源性干细胞作为“第三者”细胞加入混合双向淋巴细胞反应体系中,同样观察淋巴细胞增殖情况。结果与结论:脂肪干细胞低表达白细胞抗原Ⅱ和吲哚胺-2,3-双加氧酶,但在γ型干扰素刺激后,白细胞抗原Ⅱ和吲哚胺-2,3-双加氧酶表达均明显上调。脂肪源性干细胞不能刺激淋巴细胞增殖,但能抑制植物血凝素或异体淋巴细胞导致的淋巴细胞增殖,且脂肪源性干细胞与混合淋巴细胞共培养的上清中检测到大量γ型干扰素的表达。提示脂肪干细胞具有低免疫原性,同时可在体外抑制淋巴细胞增殖反应,添加外源性γ型干扰素有助于脂肪源性干细胞发挥免疫抑制作用。