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Notch信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义
目的 本研究旨在探讨Notch信号通路相关蛋白在前列腺癌中的表达及临床意义.方法 采用实时定量PCR(Q-PCR)和Western blotting方法检测135例新鲜前列腺癌病理组织标本及临近非肿瘤组织标本中Notch 1、Notch 3及Hes1 mRNA和蛋白表达情况.同时采用免疫组化方法检测135例前列腺癌病理组织标本与临近非肿瘤组织标本中Notch 1、Notch 3及Hes 1蛋白表达情况,并分析各蛋白表达与前列腺癌患者临床病理因素的关系.结果 135例新鲜前列腺癌病理组织标本Q-PCR及Western blotting结果表明,与临近非肿瘤组织相比,前列腺癌组织中Notch 1、Notch 3及Hes 1 mRNA和蛋白表达均上调(P均＜0.05).免疫组化的结果表明,59.26％(80/135)前列腺癌样本为Notch 1阳性,高于临近非肿瘤组织17.78％ (24/135)(P＜0.05);65.19％(88/135)前列腺癌样本为Notch 3阳性,高于临近非肿瘤组织22.22％(30/135) (P＜ 0.05);62.22％ (84/135)前列腺癌样本为Hes 1阳性,高于临近非肿瘤组织17.78％(24/135)(P＜0.05).统计分析证实Notch 1蛋白表达与前列腺癌的肿瘤转移密切相关(x2=7.532,P=0.003);Notch 3蛋白表达与前列腺癌的肿瘤转移密切相关(x2=7.532,P=0.003);Hes 1蛋白表达与前列腺癌的肿瘤大小密切相关(x2=6.781,P=0.012).结论 Notch信号通路相关蛋白Notch 1、Notch 3及Hes 1在前列腺癌患者组织中表达升高,Notch信号通路的激活可能在前列腺癌发生、发展过程中起重要作用.
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Notch 1活化型突变诱导T-ALL发病的研究进展
急性T淋巴细胞白血病(T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)是我国儿童和青少年常见的恶性疾病之一,其进展迅速,病死率高.1991年,首次在伴有t(7;9)转位的T-ALL中发现Notch 1的一类活化型突变,在此后至今的近20年里,对活化型Notch 1突变与T-ALL发病之间关系的理解进一步深入.本文就活化型Notch 1突变影响正常信号转导过程和基因表达、继而诱导T-ALL发病的机制研究进展作一综述.
关键词： Notch 1 急性T淋巴细胞白血病 活化型突变 -
姜黄素对大脑中动脉缺血模型大鼠的神经保护作用及机制研究
目的：通过观察姜黄素（curcumin）对Notch 1及NF-κB表达的影响及脑含水量和梗死体积的变化，探讨其对大脑中动脉梗死（middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型大鼠的神经保护作用及机制。方法采用成年健康雄性Sprague-Dawley大鼠93只，随机分为假手术组（sham），溶剂对照组（vehicle-control），姜黄素组（CUR）。MCAO术后立即腹腔注射姜黄素溶液（80 mg/kg），溶剂对照组及假手术组给予同体积含0.5 mol/L NaOH的0.01 PBS。根据不同时间点每组分为对照、3 h、6 h、12 h、24 h、48 h、72 h共7个亚组，分别在相应时间点进行神经功能学评分，2～4分者纳入实验组。归组后将动物断头处死，留取病变侧脑组织利用免疫组织化学法及Western blot观察Notch 1及NF-κB的表达。各组仅取48 h一个时间点进行脑含水量测定及2%的2，3，5-三苯基四唑氮红（triphenyltetrazolium chloride，TTC）染色观测梗死体积。结果 CUR组降低Notch 1和NF-κB的表达，这种抑制效果至少持续至MCAO后72 h（P＜0.05）。与vehicle-control组相比，CUR组在MCAO后48 h时即可显著改善神经功能缺损（P＜0.05），减少脑含水量[（80.42±9.00）% vs（83.71±7.00）%（P＜0.05）]及梗死体积[（40.08±3.66）% vs（28.94±6.20）%（P＜0.05）]。结论姜黄素干预后，MCAO模型病变脑组织含水量降低，梗死体积减小，Notch 1和NF-κB表达水平同步下调，推测姜黄素有脑保护作用，姜黄素可能通过抑制Notch 1和NF-κB的表达对缺血性脑组织起到脑保护作用。
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促自噬剂AZD8055对U87起始细胞Notch通路相关蛋白的表达和成球能力的影响
目的 研究促自噬剂AZD8055对U87细胞株起始细胞Notch通路相关蛋白的表达和成球能力的影响.方法 应用免疫磁珠法分选获得U87细胞株CD133阳性的胶质瘤起始细胞(GICs).采用免疫荧光染色技术鉴定GICs细胞球干性标志物CD133和Nestin,以及自噬相关蛋白LC3B和p62的表达.以CCK8检测AZD8055对U87起始细胞存活率的影响.采用Western blot检测AZD8055不同浓度处理组Notch 1、Notch胞内域、Hes1、p62、LC3B蛋白的表达.通过单细胞成球实验观察AZD8055对GICs成球能力的影响.结果 免疫荧光染色结果显示,GICs细胞球中CD133和Nestin呈阳性表达.CCK8检测结果提示,随着AZD8055浓度的增高,U87起始细胞的存活率逐渐降低.Westem blot结果提示,与溶媒对照组相比,随着AZD8055浓度的升高,药物处理组的自噬水平增高,而Notch1通路相关蛋白的表达降低,且各浓度组之间的蛋白表达差异均有统计学意义(均P＜0.05).免疫荧光染色结果提示,经AZD8055处理后U87起始细胞的LC3B表达明显升高,p62表达降低.单细胞成球实验显示,随着AZD8055药物浓度的增高,各组成球数目和细胞球体积递减,且差异有统计学意义(均P ＜0.05),说明U87 GICs的成球能力降低.结论 AZD8055通过诱发自噬抑制了Notch通路相关蛋白的表达,并且AZD8055能够抑制U87 GICs的成球能力.
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β-连环素及Notch1蛋白质在鼻内翻性乳头状瘤中的表达及意义
目的 通过对鼻内翻性乳头状瘤(nasal inverted papilloma,NIP)组织中β-连环素(β-catenin)及Notch 1表达水平的测定,探讨NIP中Wnt及Notch信号传导系统的调控作用.方法 63例鼻内翻性乳头状瘤、30例鼻息肉、38例鼻腔鼻窦鳞状细胞癌(简称鳞癌)及11例正常鼻黏膜组织均采用免疫组织化学法检测β-catenin及Notch 1蛋白质的表达水平.结果 鼻息肉、鼻内翻性乳头状瘤和鼻腔鼻窦鳞癌中的β-catenin异常表达率分别为3.33%、58.73%和78.95%;正常鼻黏膜、鼻息肉、鼻内翻性乳头状瘤和鼻腔鼻窦鳞癌中Notch 1阳性表达率分别为27.27%、36.67%、73.02%和92.11%,呈阶梯状升高且差异有统计学意义(P<0.05);β-catenin异位表达与鼻内翻性乳头状瘤不典型增生程度有一定的相关性(P<0.05),复发组中Notch 1的水平明显高于初发组(P<0.05).结论 Wnt/β-catenin和Notch信号途径的异常澈活对NIP中起不同作用,β-catenin对NIP的发生发展及终恶变成鳞癌可能起到了重要作用,术后Notch 1水平升高可提示NIP复发.
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微环境乏氧通过肿瘤干细胞途径对脑胶质瘤细胞放射敏感性的影响
目的 探讨微环境乏氧是否能通过肿瘤干细胞途径引起脑胶质瘤放射敏感性的改变以及可能的相关机制.方法 选择脑胶质瘤SHG44和U251细胞株分别在常氧(20%0_2)、乏氧(1%0_2)12和24 h的条件下培养后,应用流式细胞仪检测CD133表达阳性细胞的比例,细胞克隆形成实验绘制细胞存活曲线以观察其放射敏感性,采用Western blotting方法测定基因HIF-la及其下游基因Notch 1蛋白的表达水平.结果 与常氧培养条件比,SHG44和U251细胞乏氧12和24 h后CD133阳性表达比例明显升高;SF_2(2 Gy照射时的存活分数)均升高.在乏氧12和24 h培养时,SHG44细胞株的氧增强比的值分别为1.54和1.38.而U251细胞株则分别为1.44和1.23,提示在乏氧培养时细胞的放射敏感性下降;与常氧培养条件比,乏氧时HIF-la和Notch 1的蛋白表达水平均明显升高.结论 微环境乏氧能通过提高肿瘤干细胞的比例而降低脑胶质瘤细胞的放射敏感性,其可能的作用信号途径为HIF-la-Notch 1.
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宫颈癌NOTCH 1相关信号路径的研究进展
在宫颈癌上皮细胞中存在有RBP-JK路径、P13K-PKB/Akt路径及IKK-NF-κB路径等多条Notch 1相关信号路径,在调节正常细胞的增殖、分化及凋亡中起着关键作用.Notch 1相关信号路径参与了宫颈癌的发生发展,但过表达的Notch 1却能通过诱导细胞周期停滞而发挥抑癌作用.因此,扰乱的Notch 1信号能因细胞内外环境不同而表现出双重作用,这些分子水平的认识将应用于宫颈癌的基因治疗战略.
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蛇床子素可促进体外培养神经干细胞的增殖
背景：神经干细胞具有自我更新和多向分化潜能，但正常情况下，神经干细胞数目太少，且大部分处于静息状态，促进其增殖是神经干细胞治疗神经退行性疾病的关键。目的：观察蛇床子素对体外培养的神经干细胞增殖作用的影响，分析其促进增殖能力的作用机制。方法：体外培养神经干细胞，在增殖培养基中培养至第3代，加入不同浓度的蛇床子素(10，50和100μmol/L)作用24 h用CCK-8法检测细胞活力，再培养3，5，7 d后测量神经球半径，用免疫荧光组化法计数Ki67阳性细胞数目；再培养3 d后利用RT-PCR技术检测神经干细胞中Notch 1、Hes 1和 Mash 1基因表达的情况。结果与结论：与正常组比较，50，100μmol/L的蛇床子素具有明显促进神经干细胞增殖能力的作用，100μmol/L作用为显著，可引起Notch 1基因、Hes 1基因上调表达，对Mash 1基因基本无影响，说明蛇床子素对体外培养的神经干细胞具有促进增殖作用，其作用机制可能与激活Notch信号通路上的Notch 1、Hes 1基因有关。
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肝细胞Notch 1基因敲除小鼠模型的建立
目的 繁育和鉴定Notch 1基因敲除小鼠.方法 用B6.Notch 1flno/flox和B6.Alb-Cre转基因小鼠进行饲养和杂交;将繁育出的第1代小鼠再进行相互交配,得到第2代小鼠.通过PCR鉴定出基因型为B6.Notch 1flno/flox.Alb-Cre的第2代小鼠.采用Western blot法检测Notch 1蛋白在肝脏中有无表达.结果 两种转基因小鼠繁殖产生的第2代小鼠基因型符合孟德尔遗传定律,可通过该方法获得较多的B6.Notch 1flno/flox.Alb-Cre小鼠.该基因型小鼠肝脏中不表达Notch 1蛋白.结论 应用Cre-loxp系统可以成功地敲除小鼠Notch 1基因.
关键词： Cre-loxp系统 Notch 1 基因敲除 -
Notch 1和VEGF在结直肠癌中的表达及临床意义
目的 探讨Notch 1和VEGF在结直肠癌中的表达及其与各临床病理参数之间的关系,分析Notch 1与VEGF两者之间的相关关系.方法 应用免疫组织化学技术检测85例结直肠癌和41例癌旁正常黏膜组织Notch 1蛋白和VEGF蛋白的表达,并分析它们与临床病理参数的关系.结果 结直肠癌中Notch 1和VEGF蛋白的阳性表达率分别为63.5％和60.0％,显著高于癌旁结直肠黏膜组织中的12.2％ (P =0.000)和19.5％ (P=0.000).在结直肠癌中,Noch 1和VEGF的表达与TNM分期及淋巴结转移相关,Notch 1的表达与肿瘤的分化程度相关.Notch 1和VEGF在结直肠癌中的表达呈正相关(r=0.526,P＜0.01).结论 Notch 1和VEGF在结直肠癌中呈高表达且互相相关,提示两者在结直肠癌的发生、发展中可能起促进和协同作用.
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Notch1、Notch2在肾脏发育及肾纤维化中的作用研究进展
Notch信号通路与肾脏胚胎细胞发育、肾脏肿瘤、肾纤维化过程密切相关,信号通路的细胞内调节因子γ-分泌酶抑制剂可抑制肾纤维化过程.信号途径Notch 1、Notch 2受体均参与了肾脏的发育及肾纤维化过程,但两者在其中的作用存在着区别.本文围绕Notch 1、Notch 2在肾脏发育及肾纤维化中的作用的研究进展做一综述.
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Notch 1在体外培养的大鼠根尖蕾细胞中的表达
目的:分离、培养和纯化大鼠切牙根尖蕾细胞,观察Notch 1在根尖蕾细胞中的表达.方法:分离出生后7d SD大鼠下颌切牙胚,切取根尖唇侧部分,酶消化法原代培养,差别胰酶消化法纯化上皮细胞.角蛋白14和波形丝蛋白染色鉴定细胞来源.Notch 1免疫细胞化学染色.结果:原代培养的细胞经2～3次差别胰酶消化后可获得纯化的根尖蕾上皮细胞.免疫细胞化学染色角蛋白14阳性,波形丝蛋白阴性,并且在根尖蕾细胞中存在Notch 1阳性细胞.结论:体外培养的根尖蕾细胞中存在Notch 1表达阳性的细胞,Notch信号途径可能参与了根尖蕾中干细胞增殖和分化的调控.
