中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
丹酚酸B对骨髓间充质干细胞分化方向的影响
背景:随着组织工程学的不断发展,骨髓间充质干细胞的多向分化潜能为多种疾病的治疗带来了新的希望.近年来的研究发现,丹参的主要有效成分丹酚酸B具有多种药理活性,可以影响骨髓间充质干细胞的定向分化.目的:综述丹酚酸B对骨髓间充质干细胞分化方向的影响及具体机制.方法:分别以"丹酚酸B、骨髓间充质干细胞/骨髓基质干细胞、分化""Salvianolic acid B,differentiation/osteogenic/adipogenesis,mesenchymal stem cels"为检索词,由第一作者检索2000年1月至2017年9月在中国期刊全文数据库、PubMed数据库及万方数据库发表的相关文章,其中中文102篇,英文136篇,终选取具有代表性的49篇文献进行归纳总结.结果与结论:目前发现,丹酚酸B可以促进骨髓间充质干细胞成骨分化、成神经分化、成心肌细胞分化,抑制骨髓间充质干细胞成脂分化.丹酚酸B是否可以促进骨髓间充质干细胞向其他方向分化及在促进不同分化方向上的有效浓度仍有待于进一步研究.
-
Wnt/β-catenin信号通路调控间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化及在慢性阻塞性肺病修复中的作用
背景:研究发现Wnt/β-catenin信号通路在间充质干细胞增殖、分化过程中具有重要调控效应.因此,间充质干细胞移植过程中遇到的难题,如细胞存活时间短、分化比例低等,有望通过调控Wnt/β-catenin信号通路来找到解决方案,让干细胞移植为慢性阻塞性肺病提供治疗新希望.目的:对Wnt/β-catenin信号通路调控间充质干细胞向肺泡上皮细胞分化在慢性阻塞性肺病修复中的机制及研究进展进行综述.方法:由第一作者在PubMed、Elsevier、Medline等外文数据库及中国知网、万方及中国生物医学文献数据库等中文数据库检索2007至2017年的相关文献.中文检索词:间充质干细胞、慢性阻塞性肺疾病、Wnt/β-catenin信号通路、肺泡上皮细胞分化;英文检索词:Chronic Obstructive Pulmonary Disease,Wnt/β-catenin signaling pathway,Mesenchymal Stem Cels(MSCs),pulmonary epithelial differentiation.经过筛选,保留50篇文献进行进一步分析.结果与结论:Wnt/β-catenin信号通路有望打破间充质干细胞移植向肺上皮细胞分化率低的局限.慢性阻塞性肺疾病患者的肺脏环境复杂,而Wnt/β-catenin信号通路极易受诱导条件等外界因素影响,不同诱导条件对Wnt/β-catenin信号通路的调控效应是不一样的.因此,Wnt/β-catenin信号通路调控间充质干细胞向肺上皮细胞分化与间充质干细胞移植修复慢性阻塞性肺病的研究仍任重道远.
-
自体骨髓间充质干细胞移植治疗早期股骨头坏死
背景:目前国内外研究表明骨髓间充质干细胞可作为理想的种子细胞用于改善早期股骨头坏死区微循环.目的:观察自体骨髓间充质干细胞移植治疗早期股骨头坏死的疗效.方法:①体外实验:利用Transwel系统行骨髓间充质干细胞和成骨细胞共培养为实验组,正常成骨细胞培养为空白组,无血清培养基培养成骨细胞为对照组,培养3 d后MTT检测成骨细胞活力,流式细胞仪检测成骨细胞凋亡率,ELISA检测各组培养液中血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白2水平;②体内实验:新西兰兔30只随机分为3组:空白组(正常股骨头),对照组(髓芯减压术+生理盐水),实验组(髓芯减压术+自体骨髓间充质干细胞).移植7 d后获取股骨头标本,行苏木精-伊红染色、免疫组化染色.结果与结论:①与对照组和空白组比较,实验组成骨细胞增殖活力增强,成骨细胞凋亡减少,培养液中血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白2水平增高(P均<0.05);②对照组股骨头区骨小梁断裂,脂肪细胞坏死明显,出现大量空骨陷窝;实验组成骨细胞较对照组增多,毛细血管较对照组增多;实验组早期股骨头坏死区血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白2表达较对照组明显增加,差异有显著性意义(P<0.05);③结果表明,骨髓间充质干细胞移植后可促进股骨头坏死区血管内皮生长因子、骨形态发生蛋白2表达增加,达到改善早期股骨头坏死区微循环的效果.
-
静脉移植人脐血单个核细胞治疗脑出血大鼠疗效的microPET-CT评价及抗炎机制
背景:脐血中分离出的单个核细胞含有丰富的细胞类型,在细胞替代治疗、基因治疗以及组织工程学中具有重要的研究和应用价值.目的:通过microPET-CT及Longa评分评估人脐血单个核细胞治疗大鼠脑出血的疗效,同时探讨其部分治疗机制.方法:采用二次注血/退针法制作脑出血大鼠模型,造模成功大鼠随机分为移植组与对照组,将从人脐血中分离出的单个核细胞经尾静脉注入移植组大鼠体内,对照组大鼠造模成功后不予治疗.各组大鼠均于移植前及移植后的第3,7,14,21天,通过microPET-CT及Longa评分对大鼠脑代谢变化及神经功能恢复情况进行评估;通过ELISA法检测大鼠血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的水平.结果与结论:①人脐血单个核细胞移植治疗后第7,14,21天,与对照组相比,移植组大鼠血肿中心及血肿周围脑代谢水平均显著升高(P<0.05),血肿及其周围缺血组织体积及Longa评分显著降低(P<0.05);②人脐血单个核细胞移植后第3,7,14天,移植组两种因子水平均较对照组显著降低(P<0.05),移植后第21天,两组血清中血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6水平均降至正常水平;③结果说明,人脐血单个核细胞移植可促进大鼠脑出血的神经功能恢复,其机制可能与其能够减少炎性因子表达及抑制炎性反应有关.
-
少突胶质前体细胞移植联合咪康唑修复脑白质营养不良模型小鼠的髓鞘
背景:少突胶质前体细胞是中枢神经系统中成髓鞘细胞——少突胶质细胞的前体细胞,与中枢脱髓鞘疾病如脑白质营养不良有着密切关系,近研究显示咪康唑可促进少突胶质前体细胞分化和髓鞘再生,咪康唑和少突胶质前体细胞二者联合可能用于脑白质营养不良的治疗.目的:探讨少突胶质前体细胞移植联合咪康唑对脑白质营养不良模型小鼠的髓鞘修复作用.方法:采用髓鞘碱性蛋白(myelin basic protein,MBP)基因敲除的shiverer小鼠作为脑白质营养不良模型,新出生shi-/-(MBP基因完全缺失)小鼠分为阴性对照组和治疗组,新出生shi+/+(MBP基因正常)小鼠作为阳性对照组.治疗组于生后24 h内移植少突胶质前体细胞,同时在生后1-5 d腹腔注射咪康唑,阴性对照组和阳性对照组分别以PBS和生理盐水代替少突胶质前体细胞和咪康唑.待小鼠8周龄时行MBP免疫荧光染色和Western blot检测MBP蛋白表达,透射电镜观察胼胝体区域髓鞘结构.结果与结论:①与阴性对照组比较,治疗组MBP荧光表达明显增强,平均荧光强度值差异有显著性意义(P<0.05),但与阳性对照组比较,治疗组MBP荧光强度显著下降(P<0.05);②治疗组的MBP蛋白表达量比阴性对照组高,但比阳性对照组低,差异有显著性意义(P<0.05);③透射电镜下,阴性对照组髓鞘罕见,形态不规则且板层排列松散、紊乱;阳性对照组髓鞘明显增多、增厚,形态均正常且板层排列紧密、边界清晰;治疗组髓鞘数量较阴性对照组增多,部分近似正常,但多数髓鞘厚度仍明显减低;④结果表明,少突胶质前体细胞移植联合咪康唑有助于改善脑白质营养不良的脱髓鞘状况,但不能完全逆转受损髓鞘的病理状态.
-
单根肌纤维法分离培养多裂肌卫星细胞及鉴定
背景:多裂肌的损伤、萎缩是临床各种腰背痛及功能障碍的主要来源之一,肌卫星细胞是肌肉干细胞,对肌肉的损伤修复起至关重要的作用.但目前尚缺少有关多裂肌卫星细胞分离培养方面的研究.目的:采用单根肌纤维法分离大鼠多裂肌卫星细胞并进行鉴定.方法:在体分离大鼠多裂肌,采用单根肌纤维法获得多裂肌卫星细胞,经反复差速贴壁法纯化,观察其形态变化并绘制细胞增殖曲线;以分化培养基进行诱导,观察其成肌分化情况;并采用免疫荧光法鉴定多裂肌卫星细胞标志蛋白Pax7、Myod、Desmin的表达.结果与结论:①单根多裂肌纤维经培养72 h后,可见肌纤维周围有大量长梭形或纺锤形细胞贴壁;②采用差速贴壁法纯化后,可见原代细胞呈圆形,高折光性,重新接种后24-48 h可贴壁,其生长呈"S"型;③以分化培养基诱导可出现较大肌管;④免疫荧光鉴定可见Pax7、Myod在肌卫星细胞的细胞核中为阳性反应,Desmin在细胞质中为阳性反应;⑤结果表明,单根肌纤维法可成功分离大鼠多裂肌卫星细胞,可用于未来多裂肌再生修复方面的研究.
-
Apelin干预骨髓间充质干细胞移植治疗改善心肌梗死后心功能
背景:课题组前期研究发现血管紧张素受体AT1相关的受体蛋白内源性配体(apelin)能够促进骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)在体外缺血缺氧条件下的生存和血管再生.目的:采用体内实验探讨apelin联合MSCs移植治疗对心肌梗死后心功能的影响及相关机制.方法:开胸结扎50只C57BL/6小鼠左前降支冠状动脉并随机分为5组:MSCs组、MSCs+apelin组、sh-APJ MSCs+apelin组、apelin组和PBS组.模型建立2周后,对动物进行第2次开胸手术,MSCs组于局部梗死心肌内注射单纯的MSCs,MSCs+apelin组和sh-APJ MSCs+apelin组分别注射MSCs以及sh-APJ MSCs并且均连续腹腔内注射2周apelin-13,PBS组心肌内注射不含MSCs的PBS.各组治疗前及治疗2周后检测心功能.实验结束后,摘取心脏检测左心室心肌组织梗死边缘区的MSCs生存和血管再生情况以及相关因子的表达.结果与结论:①与治疗前比较,治疗2周后MSCs组、MSCs+apelin组、sh-APJ MSCs+apelin组、apelin组左室射血分数明显增加(P<0.01),左室舒张末期内径、左室收缩末期内径显著减小(P<0.01);其中MSCs+apelin组以上指标改善显著(P<0.01);②与MSCs组和sh-APJ MSCs+apelin组相比,MSCs+apelin组梗死边缘区PKH26阳性细胞和CD31阳性细胞的平均光密度值显著增高,且PKH26和CD31双阳性细胞占PKH26阳性细胞的比例显著增加(P<0.01);③与MSCs组和sh-APJ MSCs+apelin组相比较,MSCs+apelin组APJ、AKT、pAKT以及VEGFA表达显著增加,而MSCs组和sh-APJ MSCs+apelin组在上述各项指标表达方面差异均无显著性意义(P>0.05);④以上提示apelin能够通过与其受体APJ结合改善MSCs在心肌梗死局部组织中的生存和血管再生,从而进一步提高心肌梗死后心功能,此效应与VEGFA表达上调相关,PI3K/AKT的激活可能在其中起到一定的调控作用.
-
慢病毒介导人白细胞介素12转染鼠骨髓间充质干细胞可抑制CT26瘤体的生长
背景:白细胞介素12作为具潜力的抑瘤因子一直是研究的热点,但其在结直肠癌方面的研究相对较少.目的:构建稳定表达人白细胞介素12的大鼠骨髓间充质干细胞株(hIL-12-BMSCs),观察其对大鼠结肠癌模型的影响.方法:设计并合成引物,PCR扩增并回收纯化后的p40和p35基因片段,行Overlap-ping PCR连接获得hIL-12的单链双亚基表达融合基因,与慢病毒包装系统共转染293T细胞,构建慢病毒过表达重组体,再转染大鼠骨髓间充质干细胞,药物筛选培育出稳转株.32只裸鼠皮下注射CT26细胞悬液造模成功后,随机分为4组:瘤周分别注射0.2 mL hIL-12-BMSCs(hIL-12-BMSCs组)、0.2 mL PBS溶液(PBS组)、0.2 mL骨髓间充质干细胞(骨髓间充质干细胞组)、0.2 mL表达IL-12的慢病毒液(LV-IL-12组),统计并分析各组瘤体生长情况.结果与结论:①观察期内PBS组与骨髓间充质干细胞组肿瘤体积差异无显著性意义(P>0.05),表明骨髓间充质干细胞本身对CT26瘤体生长无明显促进或抑制作用;②注射7 d后hIL-12-BMSCs组与PBS组、PBS组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异均有显著性意义(P<0.01),表明白细胞介素12对CT26瘤体生长有明显抑制作用;③注射10 d后hIL-12-BMSCs组与LV-IL-12组间肿瘤体积差异有显著性意义(P<0.05),表明hIL-12-BMSCs抑制CT26生长优于LV-IL-12;④结果表明,hIL-12-BMSCs对裸鼠CT26移植瘤体生长有明显的抑制作用.
-
血管内皮生长因子165、神经营养因子3、血管生成素1基因转染诱导骨髓间充质干细胞向神经元及血管内皮细胞分化
背景:骨髓间充质干细胞是一种多功能间充质干细胞,具有多向分化潜能,可通过腺病毒转染等方法对其进行基因修饰,使其能够产生多种生长因子,如血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、神经营养因子3(neurotrophin 3,NT-3)、血管生成素1(angiopoietin 1,Ang-1)等,从而应用于组织工程研究中.目的:探讨VEGF165、NT-3、Ang-1基因转染大鼠骨髓间充质干细胞向神经元及血管内皮细胞诱导分化的可能性.方法:采用差速贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,进行流式细胞术和成骨、成脂诱导分化能力鉴定.以巨细胞病毒(CMV)作为启动子,构建2个腺病毒载体,其一为双顺反子载体,携带hVEGF165及Ang-1基因(Adv-Bic);其二为携带NT-3基因载体,即AdvNT-3.以不同感染复数值将Adv-Bic(绿色荧光)及AdvNT-3(红色荧光)同时转染大鼠骨髓间充质干细胞,转染2 d后根据荧光显微镜下绿色及红色荧光蛋白表达情况确定佳感染复数值.将生长良好的第3代骨髓间充质干细胞分为2组,实验组以适感染复数值转染Adv-Bic(无荧光标记)及AdvNT-3(无荧光标记);对照组以相同感染复数值转染空白对照病毒.两组分别于体外培养7 d后进行免疫荧光及qPCR检测.结果与结论:①间质干细胞表面分子CD29、CD44呈阳性表达,造血干细胞表面分子CD34、CD45呈阴性表达.骨髓间充质干细胞能够定向分化为成骨细胞及脂肪细胞;②病毒转染骨髓间充质干细胞48 h后荧光显微镜下观察有绿色及红色荧光蛋白表达,随着感染复数值增大荧光表达量逐渐增强,感染复数值为100时荧光表达强烈;③免疫荧光及qPCR结果显示,实验组VEGF165、NT-3、Ang-1表达水平高于对照组,且血管内皮特异性标记物CD31、CD34表达水平高于对照组,神经元特异性标记物NSE、Nestin表达水平高于对照组;④结果提示,VEGF165、NT-3、Ang-1基因转染骨髓间充质干细胞,使其过表达VEGF165、NT-3、Ang-1生长因子,能够诱导骨髓间充质干细胞定向分化为神经元及血管内皮细胞.
-
二仙汤对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及骨向分化的影响
背景:骨髓间充质干细胞参与骨形成,研究表明二仙汤能防治骨质疏松症,但对去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞的作用并不清楚.目的:通过研究二仙汤对骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖及骨向分化的影响,探讨二仙汤防治骨质疏松与骨髓间充质干细胞之间的关系.方法:将大鼠随机分为6组,分别为假手术组、模型组、雌激素组、二仙汤高、中、低剂量组.以去卵巢法复制大鼠骨质疏松模型,除假手术组外,其他各组均手术彻底摘除卵巢.假手术组、模型组大鼠灌胃生理盐水,雌激素组大鼠灌胃戊酸雌二醇(0.08 g/L),二仙汤给药组大鼠灌胃二仙汤提取液(含生药量分别为1.2,0.8,0.4 g/mL),给药剂量为10 mL/kg,连续给药90 d.全骨髓贴法分离骨髓间充质干细胞,MTT法绘制细胞生长曲线,碱性磷酸酶检测试剂盒检测细胞碱性磷酸酶活力,茜素红染色法检测细胞钙结节变化.结果与结论:与模型组相比,高、中、低剂量二仙汤均可显著提高去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞的增殖能力(P<0.01);高、中、低剂量二仙汤明显改善去卵巢大鼠骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活力(P<0.05,P<0.01),中剂量二仙汤的改善作用为显著(P<0.01);高、中剂量二仙汤可促进去卵巢骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞钙结节的形成(P<0.01).结果证实,改善骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞增殖、骨向分化能力是二仙汤治疗骨质疏松症的内在机制之一.
-
慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化
背景:骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor 165,VEGF-165)均为骨修复过程中必不可少的细胞因子,利用慢病毒转染干细胞研究双因子作用下细胞的生物学改变具有重要意义.目的:探讨慢病毒介导人BMP-2和人VEGF-165双基因转染(2次转染)骨髓间充质干细胞的可行性以及转染后细胞的诱导成骨性能.方法:将骨髓间充质干细胞分为4组:①未转染组;②空载组:通过2次相同感染复数的空载慢病毒转染细胞;③BMP-2组:转染了单个目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP);④BMP-2/VEGF-165组:通过2次转染后携带双目的基因的细胞(Lv-BMP-2/GFP,Lv-VEGH-165/RFP).转染后不同时间点Western Blot检测目的蛋白表达,MTT法检测各组细胞增殖活性,转染后14 d检测各组细胞碱性磷酸酶活性.结果与结论:①空载组、BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组在荧光显微镜下均可见相应的绿色及红色荧光蛋白表达;②转染后3 d,BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组均有相应目的蛋白高表达;转染后7,14,21 d,目的蛋白检测无明显变化(P>0.05);③BMP-2/VEGF-165组增殖稍快于BMP-2组(P<0.05),BMP-2组明显快于未转染组、空载组(P<0.05);④BMP-2组、BMP-2/VEGF-165组碱性磷酸酶活力明显高于未转染组、空载组;⑤结果表明,慢病毒介导的hBMP-2和hVEGF-165双基因经2次转染成功转入兔骨髓间充质干细胞内,并长期稳定表达,该双因子的表达能通过刺激细胞碱性磷酸酶生成促使细胞更好的向成骨细胞分化.
-
不同硬度聚丙烯酰胺调控骨髓间充质干细胞的定向分化
背景:基底材料硬度可以直接影响干细胞的分化命运,但是干细胞向不同体细胞分化的敏感程度及调控机制目前尚不清楚.目的:探讨基底力学性能对骨髓间充质干细胞分化的影响及其机制.方法:通过调控聚丙烯酰胺的力学强度,使之弹性模量分别与神经组织(0.5 kPa)、软骨组织(10 kPa)、心肌组织(20 kPa)以及骨组织(40 kPa)类似.采用酶联免疫吸附法检测骨髓间充质干细胞在不同弹性模量基底上的分化情况,采用细胞骨架染色及免疫荧光染色观察骨髓间充质干细胞在基底上的细胞骨架形态以及黏着斑蛋白表达.结果与结论:①骨髓间充质干细胞在低硬度基底上向神经和软骨方向分化趋势明显,而高硬度基底上向心肌以及成骨方向分化的趋势不明显,说明骨髓间充质干细胞向神经以及软骨方向分化时,对材料的力学性能敏感,向心肌以及成骨方向分化时对材料的力学性能不敏感;②随着基底硬度的提高,黏着斑蛋白的表达量增高,说明在低硬度基底上,骨髓间充质干细胞感应的力学信号较低,激活了某些与软骨和神经分化相关的信号通路的表达,从而促进干细胞向神经和软骨方向分化.
-
Wnt/β-catenin信号通路在卵巢癌干细胞增殖、迁移和侵袭中的作用
背景:在肿瘤细胞中,β-catenin降解障碍导致胞浆内游离的β-catenin聚集并与TCF/LEF结合进入细胞核内,启动下游基因转录,诱发Wnt/β-catenin信号通路异常改变.因此,研究β-catenin与卵巢癌干细胞的关系,可为特异性抑制卵巢癌干细胞提供新的思路.目的:观察β-catenin基因沉默后卵巢癌干细胞增殖、迁移与侵袭能力的变化.方法:采用免疫磁珠法从人卵巢癌细胞A2780中分离CD133阳性卵巢癌干细胞.选取70%-80%融合的CD133阳性细胞,分别转染慢病毒pLKO.1-shRNA-β-catenin(实验组)与pLKO.1-shRNA-ctrl(对照组)质粒,转染后72 h,采用Western blot检测两组细胞β-catenin、上皮表型分子E-cadherin和间质表型分子Vimentin的表达,MTT法检测两组细胞增殖活性,Transwel小室实验检测两组细胞迁移与侵袭能力.结果与结论:①转染后72 h,实验组细胞β-catenin蛋白明显低于对照组(P<0.05);②实验组培养2,3 d的细胞增殖能力低于对照组(P<0.05);③转染后72 h,实验组细胞迁移能力、侵袭能力明显低于对照组(P<0.05);④转染后72 h,实验组上皮表型分子E-cadherin蛋白表达高于对照组(P<0.05),间质表型分子Vimentin蛋白表达低于对照组(P<0.05);⑤结果表明,Wnt/β-catenin信号通路参与了卵巢癌干细胞的迁移与侵袭,沉默β-catenin基因表达可抑制卵巢癌干细胞的增殖、迁移及侵袭能力.
-
甲状腺乳头状癌肿瘤干细胞增殖、凋亡、侵袭与miR-93的影响
背景:前期研究发现,miR-93作为保护因子而非致病因子参与甲状腺腺瘤及其应激胰岛素抵抗的发生和发展.目的:研究miR-93对甲状腺乳头状癌肿瘤干细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法:采用流式细胞技术从人甲状腺乳头状癌细胞TPC-1中分选CD44+CD24-肿瘤干细胞与非CD44+CD24-细胞,检测两种细胞中miR-93基因的表达.取CD44+CD24-肿瘤干细胞,分别转染miR-93模拟物与miRNA模拟物对照,采用CCK-8法、流式细胞技术、Transwel小室检测细胞增殖、凋亡、侵袭能力,采用Western Blot检测细胞增殖蛋白Ki67、凋亡蛋白Bax及Bcl-2、侵袭标志蛋白MMP-2及MMP-9的表达.结果与结论:①CD44+CD24-细胞中的miR-93表达明显低于非CD44+CD24-细胞(P<0.05);②转染miR-93模拟物的CD44+CD24-肿瘤干细胞的增殖速度明显慢于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05),细胞增殖蛋白Ki67表达明显低于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05);③转染miR-93模拟物的CD44+CD24-肿瘤干细胞的凋亡率明显高于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05),促凋亡蛋白Bax表达高于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达低于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05);④转染miR-93模拟物的CD44+CD24-肿瘤干细胞的侵袭能力、侵袭标志蛋白MMP-2及MMP-9表达均明显低于转染miRNA模拟物对照组(P<0.05);⑤结果表明,miR-93可抑制甲状腺乳头状癌肿瘤干细胞的增殖及侵袭能力,促进其凋亡.
-
自体脂肪干细胞、壳聚糖/胶原蛋白支架材料及GDF-5复合物移植修复兔软骨缺损
背景:GDF-5可诱导人脂肪干细胞分化为软骨样细胞,壳聚糖/胶原蛋白支架在软骨组织损伤修复中应用广泛.目的:利用兔的自体脂肪干细胞复合壳聚糖/胶原蛋白支架材料加入GDF-5修复兔关节软骨缺损,观察其修复效果.方法:取日本大耳兔皮下脂肪组织提取脂肪干细胞体外培养、纯化、扩增,并BrdU体外标记,应用紫外线交联法以1:3比例构建壳聚糖/胶原蛋白复合支架载体,将标记后的兔脂肪干细胞种植到支架载体上共同培养形成复合物,以手术方式造成兔膝关节软骨直径为5 mm,深3 mm的圆柱形缺损,建立膝关节软骨缺损模型兔,随机分为4组,复合物组:脂肪干细胞+壳聚糖/胶原蛋白支架+GDF-5复合物植入干预;支架组:单纯植入壳聚糖/胶原蛋白支架;脂肪干细胞组:单纯植入脂肪干细胞;假手术组:单纯钻孔不作处理.各组干预4,8,12周时取材,行组织学检测、软骨Ⅱ型胶原免疫组织化学染色及BrdU免疫荧光染色.结果与结论:①术后12周,与其他3组相比,复合物组圆柱型缺损处完全被与周围正常软骨相同的乳白色透明样物质填充修复,软骨缺损区域由分化一致的透明软骨所替代修复,Wakitani评分低(P<0.01);②Ⅱ型胶原免疫组化染色及BrdU免疫荧光染色:复合物组与术后4,8,12周免疫组化染色可见修复区组织Ⅱ型胶原染色胞浆内呈淡黄色阳性表达,修复区新生组织可见BrdU绿色荧光表达;③结果证实,自体脂肪干细胞+壳聚糖/胶原蛋白支架+GDF-5复合物移植修复兔膝关节软骨缺损效果较好.
-
HGF/c-Met反应轴对脂肪干细胞修复烧伤创面的调控
背景:研究发现,肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)能促进脂肪干细胞增殖迁移,进而促进创面愈合.目的:观察HGF/c-Met调节脂肪干细胞增殖和迁移的作用机制及其对烧伤创面愈合的影响.方法:将提取的人脂肪干细胞按实验要求分为空白对照组(未处理的脂肪干细胞)、HGF组(10μg/L,24 h)、c-Met siRNA+HGF组(10μg/L,24 h);采用Western blot技术检测c-Met、AKT、p-AKT的蛋白表达,CCK-8和Transwel法分别检测细胞增殖和迁移情况.将12只裸鼠随机分为2组,用99℃烫头接触裸鼠背部皮肤5 s,构建直径为1 cm的皮肤Ⅲ度烫伤模型.实验组创面周围皮肤内注射1×106个10μg/L HGF处理24 h的脂肪干细胞,对照组注射等量未处理的脂肪干细胞.所有裸鼠在实验第7天处死,取新生创面全层皮肤组织,进行苏木精-伊红染色,计算创面愈合率和再上皮化厚度.结果与结论:①HGF能够诱导c-Met表达(P<0.05);HGF促进脂肪干细胞的增殖和迁移,c-Met siRNA对脂肪干细胞的增殖与迁移起抑制作用(P<0.05);HGF促进p-AKT蛋白表达,c-Met siRNA抑制p-AKT蛋白表达;②实验组创面再上皮化厚度大于对照组(P<0.05),创面愈合率高于对照组(P<0.05);③结果表明,HGF干预的脂肪干细胞能通过诱导c-Met基因的表达,激活PI3K/AKT信号通路,提高脂肪间充质干细胞的增殖与迁徙能力;HGF干预的脂肪干细胞能促进裸鼠烫伤创面的愈合.
-
犬脐带间充质干细胞来源外泌体修复皮肤创伤
背景:研究发现,间充质干细胞来源的外泌体具有抑制炎症、促进皮肤细胞增殖和血管再生、减少肌成纤维细胞积累的作用,表明间充质干细胞主要通过旁分泌方式修复损伤,给皮肤损伤治疗提供了新方法.但应用犬脐带间充质干细胞来源外泌体治疗皮肤创伤的研究甚少.目的:研究犬脐带间充质干细胞来源的外泌体对犬皮肤创伤的修复作用,并探讨其作用机制.方法:选取年龄相近的健康中华田园犬12只,在背部正中肩胛骨下方皮肤做4 cm×4 cm正方形切口,然后随机分成外泌体组和模型组,每组6只.外泌体组在创口周围注射1 mL质量浓度为300 mg/L犬脐带间充质干细胞来源外泌体溶液,模型组注射等量生理盐水.造模前后每天观察犬的精神状况和创面愈合情况,定时检测血常规和创口面积,并于第1,2,4周进行病理组织观察.结果与结论:在造模后第1周,模型组出现了明显炎症反应,白细胞数量也较造模前升高了30%,而外泌体组炎症反应不明显,白细胞总数和中性粒细胞升高速度较模型组慢;两组的淋巴细胞数和红细胞数无明显差异.治疗组肉芽组织生长和伤口愈合速度较模型组快,但无显著性差异.结果提示,犬脐带间充质干细胞来源外泌体具有一定抑制炎症和促进皮肤创面愈合的作用.
-
异基因骨髓细胞联合淋巴细胞输注抑制结肠癌肝转移
背景:异基因造血干细胞移植对结肠癌术后肝转移的预防和治疗在临床以及动物实验中鲜有研究报道,结肠癌术后肿瘤负荷较小,此时建立混合型嵌合体可望取得一定疗效.目的:探讨异基因造血干细胞移植对结肠癌肝转移的抑制作用及其对嵌合体和移植物抗宿主病的影响,并对其抑瘤机制进行研究.方法:BALB/c×C57BL/6杂交一代CB6F1小鼠保脾注射CT-26大肠癌细胞建立结肠癌肝转移模型,随机分为4组:对照组、环磷酰胺组、全相合脾细胞加骨髓细胞移植+环磷酰胺组(全相合移植组)、半相合脾细胞加骨髓细胞移植+环磷酰胺组(半相合移植组),每组8只.取自C57BL/6小鼠和CB6F1小鼠骨髓及脾细胞混合后行尾静脉注射,之后接受腹腔注射环磷酰胺进行非清髓性预处理,再输注供鼠淋巴细胞.观察各组小鼠生存时间、肿瘤肝转移以及移植物抗宿主病发生情况;流式细胞仪进行嵌合体分析,ELISA方法测定血浆白细胞介素2、γ-干扰素、白细胞介素4、转化生长因子β水平.结果与结论:①半相合移植组小鼠生存期明显延长,结肠癌肝转移抑制率明显增高,抑瘤率明显增加,与环磷酰胺组及全相合移植组相比,差异有显著性意义;②半相合移植组小鼠混合细胞移植7 d后,供鼠细胞嵌合率逐渐增加;至移植后28 d,供鼠细胞基本取代受鼠细胞,嵌合率达99%以上;③半相合移植组小鼠的移植物抗肿瘤效应明显增强,但未出现严重的移植物抗宿主病症状,且小鼠血浆白细胞介素2、γ-干扰素水平较其他组明显升高,转化生长因子β水平明显降低,而白细胞介素4水平无明显差异;④结果表明,小鼠经环磷酰胺非清髓处理的异基因骨髓细胞联合淋巴细胞移植后嵌合率明显增加,伴随产生了明显的移植物抗肿瘤效应,其对结肠癌肝转移具有抑制作用.血浆白细胞介素2、γ-干扰素、转化生长因子β水平变化与肿瘤生长抑制是有关联的.
-
白细胞介素1β与机械牵拉共同作用角膜成纤维细胞CollagenⅠ及Lumican的表达
背景:继发性圆锥角膜是角膜屈光手术后的并发症之一,但其发生机制尚不清楚.目的:探讨白细胞介素1β与机械牵拉对角膜成纤维细胞Col agenⅠ和Lumican表达的影响.方法:体外培养角膜成纤维细胞,对其施加不同幅度(5%,10%,15%)的机械牵拉和不同质量浓度的白细胞介素1β,共同作用12,24,36 h,通过实时荧光定量PCR检测ColagenⅠ和Lumican mRNA的表达变化.结果与结论:①白细胞介素1β单独作用12 h使ColagenⅠα1的表达降低(P<0.05),作用24 h使Lumican的表达升高(P<0.05);②5%牵拉单独作用24,36 h使ColagenⅠα1表达升高(P<0.05);10%和15%牵拉单独作用12,24,36 h使ColagenⅠα1和ColagenⅠα2的表达降低(P<0.05);③5%牵拉单独作用12 h使Lumican表达升高(P<0.05),而10%和15%牵拉单独作用12 h使Lumican表达降低(P<0.05);5%,10%,15%牵拉24 h和36 h时使Lumican表达升高(P<0.05);④白细胞介素1β和机械牵拉共同作用24,36 h使ColagenⅠα1和ColagenⅠα2表达降低,Lumican表达升高;⑤结果提示,白细胞介素1β能抑制Col agenⅠ的合成,而促进Lumican的表达.低幅度机械牵拉能促进角膜成纤维细胞胶原的合成,中高幅度机械牵拉抑制其胶原的合成.两者共同作用能抑制角膜成纤维细胞胶原合成且促进Lumican的表达.
