中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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微支抗种植体及不同矫治力作用下髁突软骨中核心结合因子a1的表达
背景:近年来微支抗种植体以其操作简单、创伤小、支抗强等优点被正畸医生广泛应用于口腔正畸临床,但鲜见用于Ⅱ类颌间的牵引.目的:以微种植体为支抗,探讨不同矫治力促兔下颌前导后髁突软骨中核心结合因子a1 蛋白的表达及与髁突改建的影响.方法:8 周龄健康新西兰大耳白兔随机分为实验组和对照组,实验组根据矫治力的不同分为100 g、200 g、300 g 和400 g 组.实验组动物以微型螺钉种植体为支抗,对兔下颌进行Ⅱ类颌间牵引.实验后4 周取材,检测髁突软骨中Cbfa1的表达.结果与结论:下颌持续牵引后,髁突后区各层的厚度明显高于髁突中前部.与对照组相比随矫治力的增加髁突各层厚度增加,髁突软骨中Cbfa1 表达也明显增加,至200 g 时达到峰值,而后随矫治力的增加,髁突各层厚度逐渐变薄,髁突软骨中Cbfa1 表达也逐渐降低(P < 0.05),提示矫治力能影响髁突软骨中Cbfa1 的表达,说明适宜的矫治力作用有利于髁突软骨的改建.
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比格犬下颌骨微种植体的置入部位和方法
背景:比格犬下颌骨解剖结构复杂,微种植体置入位置不恰当会造成微种植体周骨量不足和微种植体松脱.目的:观察比格犬下颌骨相应解剖结构及微种植体的置入部位和方法.方法:取成年雄性比格犬尸体下颌骨,测量下颌第二双尖牙牙尖至下颌第一磨牙远中颊尖的长度;下颌第二、三、四双尖牙和第一磨牙根分叉度及牙根分叉处距离下颌神经管的垂直高度;于牙槽嵴下4,6 mm 处用游标卡尺测量下颌第二、三、四双尖牙和第一磨牙颊舌向牙槽嵴厚度和近远中根的水平距离.结果与结论:下颌第二双尖牙牙尖至下颌第一磨牙远中颊尖的长度平均为52.70 mm;距离下颌神经管的垂直高度远的是第一磨牙,近的是第四双尖牙,根分叉度大的是第一磨牙,小的是第四双尖牙.下颌第二、三、四双尖牙和第一磨牙的颊舌向骨质厚度随着距离牙槽嵴顶深度的增加而增加.在距离牙槽嵴顶4,6 mm 的深度,下颌第二、三、四双尖牙和第一磨牙近远中根的水平距离均大于5 mm,且随着距离牙槽嵴深度的增加而增加.说明比格犬下颌第二双尖牙至第一磨牙牙槽骨段骨质结构均匀.在距离牙槽嵴顶4~6 mm 深度,单颗牙自身近远中牙根之间足以提供微种植体置入所需骨量.
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甲醛熏染模型大鼠肝脏组织增殖细胞核抗原表达与三七复方合剂的干预
背景:甲醛作为一种有毒物质可给人体带来严重的损害,同时又缺少有效的防治方法.目的:观察中药三七复方合剂对甲醛熏染大鼠肝细胞增殖的影响.方法:将SD 大鼠随机分成对照组、甲醛组和三七治疗组.对照组不做任何处理;甲醛组每天置于静态熏染箱内行甲醛熏染,连续8 周;三七治疗组处理同甲醛组,但自第5 周起,每日给予三七复方合剂灌胃1 次.结果与结论:苏木精-伊红染色结果显示,甲醛熏染8 周甲醛组大鼠肝组织肝小叶形态结构紊乱、肝细胞呈现明显的增殖现象,窦间隙缩窄,而三七治疗组肝组织的形态结构明显恢复.免疫组织化学结果显示,甲醛组大鼠肝组织增殖细胞核抗原阳性细胞数明显多于对照组(P < 0.01),而三七治疗组与甲醛组相比则明显降低(P < 0.01).结果证实,三七复方合剂能够降低由甲醛诱发的肝组织增殖细胞核抗原的表达,可有效减缓由甲醛诱发的大鼠肝细胞增殖.
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真核表达载体p4CCL20-ZsGreen1-DR 的构建与鉴定
背景:抗炎药物高通量筛选体系的建立,可为相关药物的研究提供一个理想的技术平台.目的:构建以核因子B 顺式作用元件4×CCL20 基序为增强子,以SV40 为启动子,以ZsGreen1-DR 为报告基因的真核表达载体p4CCL20-ZsGreen1-DR.方法:以PGL2-control 质粒为模板,PCR 扩增目的片段SV40,两侧引入KpnⅠ/BamH Ⅰ酶切位点,克隆至pZsGreen1-DR 质粒的Kpn Ⅰ /BamH Ⅰ酶切位点中,构建成pSV40-ZsGreen1-DR 载体.将4×CCL20 基序双链DNA 克隆到pSV40-ZsGreen1-DR 载体的BglⅡ和EcoRⅠ酶切位点之间,构建p4CCL20-ZsGreen1-DR 重组质粒.结果与结论:经过DNA 测序分析证实p4CCL20-ZsGreen1-DR 重组质粒构建成功.该重组质粒可作为抗炎药物高通量筛选体系的基础.
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单纯疱疹病毒Ⅰ型基因治疗载体的快速构建
背景:单纯疱疹病毒Ⅰ型载体因具有独特的优点目前被广泛应用,但其构建尚缺乏一种快速有效的方法.目的:利用Cre/Loxp 高效重组系统构建单纯疱疹病毒Ⅰ型载体.方法:分离单纯疱疹病毒HSV-1,将含Cre 重组酶的c66-SV40-cre 质粒转染Vero 细胞,构建一株带有Loxp 位点的重组HSV-1 框架载体HSVLoxp.构建穿梭载体pShuttle- SV40-Cre-Loxp-IRES 及重组单纯疱疹病毒Ⅰ型载体HSV-GDNF,用HAT 培养基筛选出阳性毒株后用GDNF 引物做PCR 鉴定,扩增培养后测定滴度.结果与结论:成功构建pHV-TK-GFP 质粒,并在Vero细胞内发生重组,分离出缺失了Us3基因的重组病毒HSVtk-Loxp-GFP01.成功构建HSV-1 框架载体HSVLoxp 及穿梭载体pShuttle-SV40-Cre-Loxp-IRES,成功获得GDNF 基因,并将其转移到了HSV-1 基因组上,成功构建了表达GDNF 的单纯疱疹病毒HSV-1 载体,测定其滴度约为2.25×106 IU/mL.
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肝纤维化模型大鼠肝功能变化与萱草活性成分黄酮苷的干预
背景:萱草活性成分黄酮苷被认为具有调整人体代谢,清除超氧阴离子自由基,清除体内代谢废物,护肝抗衰老,有很强的扶正固本之功效.目的:观察萱草活性成分黄酮苷对肝纤维化模型大鼠的肝功能的影响.方法:建造四氯化碳大鼠肝纤维化模型,建模的同时给予萱草活性成分黄酮苷干预.实验4 周后采血,检测血清清蛋白、丙氨酸氨基转移酶、清球蛋白比值、高密度脂蛋白值,观察大鼠的进食、活动和生长状况.结果与结论:实验4 周后,四氯化碳模型组大鼠死亡率为37.5%,黄酮苷组为12.5%.2 周后,模型组大鼠体质量明显下降(P < 0.05),黄酮苷组与阴性对照组比较未见显著性下降(P > 0.05).黄酮苷组大鼠肝/体比值较模型组有所下降.黄酮苷较模型组血清清蛋白、丙氨酸氨基转移酶及清球蛋白比值显著降低,与阴性对照组差异无显著性意义.提示,在肝纤维化的病理进程中,采取萱草活性成分黄酮苷进行干预,可有效缓解大鼠肝损害改善肝功能.
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滇南小耳猪正常胆道和胆道瘢痕来源成纤维细胞核转录因子κB和凋亡调控蛋白FLICE样抑制蛋白的表达
背景:胆道瘢痕形成存在细胞的增殖和凋亡的平衡被破坏,尤其是成纤维细胞大量增殖并过度分泌胶原等基质成分.目的:对比核转录因子κ B 及其下游抗凋亡caspase-8 同源结构FLICE 抑制蛋白在胆道瘢痕及正常胆道来源的成纤维细胞系中的表达情况.方法:8 只滇南小耳猪随机等分为胆道损伤修复组和正常对照组,分别通过建立胆道损伤修复模型和不损伤胆道方法培养胆道瘢痕及正常胆道来源的成纤维细胞.结果与结论:与正常胆道来源的成纤维细胞相比,胆道瘢痕来源的成纤维细胞中核转录因子κ B 及凋亡调控蛋白FLICE 样抑制蛋白表达的范围更广,表达更强.提示胆道损伤后核转录因子κ B 激活增加,并导致caspase-8 同源结构FLICE 抑制蛋白过表达,从而导致胆道成纤维细胞凋亡减少致胆道瘢痕的形成.
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门静脉高压征模型大鼠构建及门静脉侧支血管和内脏血管的形成
背景:Apelin/APJ系统在心血管调节中具有降低血压、加强心脏收缩及Apelin 刺激血管生成等作用已为人们所证实.目的:确认apelin 和APJ 在内脏组织中的表达,及检验apelin 在门脉高压征大鼠的内脏新生血管发育、内脏充血及门静脉侧支化中的关联作用.方法:36 只大白鼠随机分为模型组18 只和假手术组18 只,模型组采用局部门静脉结扎构建门脉高压征大鼠模型,腹腔注射生理盐水或特定Apelin 受体拮抗剂F13A.假手术组除不行结扎外,其余同模型组.结果与结论:Apelin 及其受体APJ 在门静脉高压征的大鼠内脏血管系统过度表达.F13A 在门静脉高压征的大鼠中能有效减少内脏血管再生和减少血管内皮生长因子、血小板衍生生长因子和血管生成素2 的表达,也能减少门静脉侧支血管的形成.
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脑缺血再灌注模型大鼠跑台运动后海马神经再生和血管内皮生长因子mRNA 的变化
背景:研究表明跑台运动能促进健康大鼠海马的神经细胞再生.目的:观察跑台运动对脑缺血再灌注模型大鼠海马神经再生和血管内皮生长因子mRNA 表达的影响.方法:用线栓法阻塞大脑中动脉以建立单侧脑缺血再灌注模型大鼠,将建模成功大鼠随机分为跑台运动组和安静对照组,另设假手术组.安静对照组和假手术组大鼠安静饲养,跑台运动组进行7 d 跑台运动.跑台运动组和安静对照组大鼠在每天跑台运动前腹腔注射5-溴脱氧尿嘧啶核苷溶液.结果与结论:免疫组织化学染色结果显示,跑台运动组大鼠双侧海马及齿状回5-溴脱氧尿嘧啶核苷阳性表达细胞数量显著多于安静对照组(P < 0.01).实时荧光定量PCR 检测结果显示,跑台运动组大鼠海马血管内皮生长因子mRNA 表达水平显著高于安静对照组和假手术组(P < 0.05).结果证实,跑台运动能够明显促进脑缺血再灌注大鼠海马神经细胞的再生并上调海马组织血管内皮生长因子的表达.
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蛇床子素干预人增生性瘢痕成纤维细胞增殖及转化生长因子β1的表达
背景:蛇床子素对体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞增殖和细胞分泌的转化生长因子β1 有抑制作用,但其具体作用机制尚待进一步研究.目的:体外观察蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖以及对细胞转化生长因子β1 的影响.方法:体外原代培养人增生性瘢痕成纤维细胞,以不同浓度的蛇床子素作用于成纤维细胞,观察细胞形态的变化,应用MTT 法和生长曲线法检测蛇床子素对细胞增殖活性的影响.免疫组织化学检测细胞转化生长因子β1 的表达.结果与结论:蛇床子素能明显抑制人增生性瘢痕成纤维细胞的生长.MTT 法检测的IC50 为(15.2±2.0) μmol/L,可以明显下调细胞转化生长因子β1 的表达(P < 0.05).说明蛇床子素对人增生性瘢痕成纤维细胞有很强的生长抑制作用并可以下调转化生长因子β1 的表达.
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构建兔抗人凝血因子XIII A亚单位多克隆抗体及特异性鉴定
背景:关于凝血因子XIII(FXIII)抑制物作用于FXIII 的具体结合表位,目前尚无报道.目的:用免疫动物方法制备针对FXIII A 亚单位多克隆抗体,并对其特异性和活性进行鉴定.方法:用人工合成的FXIII A 亚单位多肽免疫新西兰兔,制备多克隆抗体;应用Dot blot 鉴定抗体特异性,并用抗体中和/ 尿素溶解实验检测多克隆抗体活性;Western blot 方法检测2 例获得性FXIII 缺乏症患者的血浆FXIII 水平,再应用Dot blot 分析这2 例患者血浆FXIII 抑制物作用的抗原表位.结果与结论:Dot blot 证实兔血清中已产生抗FXIII 抗体,此抗体不仅可特异性与人FXIII 及转氨酶活性位点多肽结合,且在体外可抑制人FXIII 的活性;用此抗体可检测出获得性FXIII 缺乏症患者的血浆FXIII 缺乏,分析出转氨酶活性位点是病例2 血浆FXIII 抑制物的作用位点.证实动物免疫法可成功制备兔抗人FXIII A 亚单位转氨酶活性位点的多克隆抗体,此抗体可用于人FXIII 的检测和抗原表位分析.
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SPF级Balb/c小鼠脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标的测定与比较
背景:实验动物重要基础数据的标准化测定,是实行动物标准化监督管理的重要依据.目的:测定SPF 级Balb/c 小鼠主要脏器质量、脏器系数、血常规、血生化指标,并进行比较.方法:取18 g 左右Balb/c 小鼠240 只,雌雄各半,饲养1 周后,精确称量体质量和主要脏器质量,计算脏器系数,并检测血常规及血生化指标.结果与结论:雌性与雄性Balb/c 小鼠比较:①肺、脾、双肾、心、膀胱质量差异有显著性意义(P < 0.01 或P < 0.05).②肺、Supported by:the 脾、双肾、膀胱脏器系数差异有显著性意义(P < 0.01 或P < 0.05).③白细胞、单核细胞、嗜碱性粒细胞百分比、红细胞、血红蛋白、红细胞平均血红蛋白浓度、红细胞分布宽度、嗜酸性粒细胞百分比差异有显著性意义(P < 0.01 或P < 0.05).④Infrastructure Program 总蛋白、白蛋白、白球比、血糖、肌酐、尿酸、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白、高密度脂蛋白、铁、磷、尿素氮差异of the Ministry of 有显著性意义(P < 0.01 或P < 0.05).说明性别对SPF 级Balb/c 小鼠主要脏器、主要脏器系数、血常规、血生化指标有影响.
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胚胎及出生后大鼠视网膜细胞促红细胞生成素的表达
背景:促红细胞生成素是低氧诱导因子1 的下游靶基因,受低氧诱导因子1 的调节.目的:观察大鼠视网膜胚胎期及出生后早期发育过程中促红细胞生成素的时空表达与视网膜发育的关系.方法:取胚胎12,16,20d 鼠胚及成年Wistar 大鼠各5 只,处死后摘除眼球,分离视网膜,用免疫组织化学方法、半定量反转录聚合酶联反应检测视网膜促红细胞生成素蛋白及促红细胞生成素 mRNA 的表达.结果与结论:胚胎期大鼠视网膜神经上皮及色素上皮细胞的胞浆及胞核内均有促红细胞生成素阳性表达,表达趋势随胎龄增长而逐渐减弱;成年鼠视网膜促红细胞生成素阳性表达弱.说明大鼠视网膜胚胎发育过程中促红细胞生成素的表达存在时空上的变化,这种变化可能与大鼠视网膜胚胎期的发育密切相关.
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构建survivin shRNA重组载体及靶向下调PC3细胞survivin mRNA的表达
背景:survivin 基因特异性表达于肿瘤和胚胎组织,与肿瘤细胞的分化增殖、浸润转移以及多药耐药密切相关.目的:构建靶向survivin 基因的shRNA 重组质粒表达载体,转染前列腺癌细胞PC3,验证该载体能否下调细胞survivin 基因mRNA 水平.方法:以survivin 基因为靶点设计具有短发夹结构的shRNA 序列,经退火成互补双链后克隆入pENTR/U6 建立重组表达载体pENTR/U6-SUR ;转化E.coli TOP10 菌株,挑取阳性菌落进行菌落PCR 和测序鉴定;将重组质粒转染前列腺癌细胞株PC3 细胞,RT-PCR 检测重组质粒对细胞survivin 基因mRNA 水平的抑制效果.结果与结论:将设计合成的shRNA 序列经退火后克隆至pENTR/U6 载体中,菌落PCR 可扩增出目的条带,测序结果证实插入片段为所需序列;pENTR/U6-SUR 重组质粒转染后PC3 细胞survivin 基因mRNA 表达水平显著下降,且24 h 比48 h 作用更明显.成功构建了靶向survivin 基因的shRNA 质粒表达载体,并证实该载体显著下调了PC3 细胞中survivin 基因mRNA 水平.
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MG63和MG63/ADR骨肉瘤裸鼠模型血管内皮生长因子和核因子κB1的表达
背景:恶性肿瘤耐药研究中发现核因子κB1 及血管内皮生长因子基因可能与肿瘤耐药密切相关.目的:观察MG63 和MG63/ADR 骨肉瘤裸鼠模型中血管内皮生长因子和核因子κB1 表达的差异.方法:对数期生长的MG63 细胞采用阿霉素浓度递增培养法冲击诱导建立MG63/ADR 细胞株.BALB/C 裸鼠随机分为2 组,分别将含5.0×106 个MG63 和MG63/ADR 细胞的0.2 mL 细胞悬液采用皮下接种法注入裸鼠的一侧腋部皮下.第6 周处死裸鼠取材.结果与结论:注射MG63 和MG63/ADR 细胞的2 组裸鼠成瘤率均为100%;免疫组织化学及RT-PCR 方法检测发现MG63/ADR 组瘤灶中血管内皮生长因子和核因子κB1 基因和蛋白的表达均明显高于MG63 组(P < 0.05).说明血管内皮生长因子和核因子κB1 表达的上调可能是导致骨肉瘤耐药的重要原因.
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血清体积分数对人细胞因子诱导杀伤细胞增殖的影响
背景:细胞因子诱导的杀伤细胞的培养多采用体积分数10%的血清,但关于血清体积分数对其生长特性的影响少有报道.目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞在不同血清体积分数培养液中的增殖情况.方法:分别配制血清体积分数为10%,20%和30% +重组人白细胞介素2 等细胞因子的完全培养液培养人细胞因子诱导的杀伤细胞,使用流式细胞仪分析血清体积分数对细胞周期的影响,通过MTT 法检测细胞因子诱导的杀伤细胞在不同血清体积分数培养液中的增殖,并观察细胞因子诱导的杀伤细胞的生长状态.结果与结论:细胞因子诱导的杀伤细胞在体积分数10%血清培养液中增殖速率和增殖指数均低,在体积分数30%血清培养液中高,3 组细胞的不同时间点的增殖速率差异均有显著性意义(P < 0.05 或P < 0.01).结果证实,体外培养的细胞因子诱导的杀伤细胞的增殖具有血清体积分数依赖性,高血清体积分数培养液的促细胞因子诱导的杀伤细胞增殖效应明显.
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阿魏酸及其酯化产物与体外培养大鼠大脑皮质神经元的存活
背景:大量体外筛选中得到的中药脑神经保护活性成分,多因脂溶性低难以透过血脑屏障而限制了其临床应用.目的:比较阿魏酸及其酯化产物阿魏酸甲酯、乙酯对原代培养的大鼠大脑皮质神经元体外存活的保护作用.方法:出生1 d内的乳鼠采用酶消化法分离培养大脑皮质神经元.培养6 d后,分别进行阿魏酸、阿魏酸甲酯及乙酯干预,继续培养1 d.结果与结论:形态学观察结果显示细胞生长良好,NSE 染色检查表明培养6 d 的存活细胞大部分均为神经元.MTT 比色法测量结果显示,与空白对照组比较,阿魏酸仅在质量浓度为200 mg/L 时有明显促进大脑皮质神经元存活的作用,而阿魏酸甲酯、乙酯在质量浓度为0.16~20 mg/L 时均能明显促进神经元体外存活,且作用趋势、作用强度相近.表明阿魏酸的酯化产物阿魏酸甲酯和阿魏酸乙酯均能促进原代培养的大脑皮质神经元体外存活,显示出较好的脑神经元保护作用,且活性比阿魏酸更强.
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动脉内皮细胞中TIE2启动CREG真核表达质粒pTIE2-CREG-EGFP-N1的表达
背景:血管内皮发生的分子机制是细胞及基因替代治疗的首要前提.目的:构建一种通过血管内皮细胞特异蛋白TIE2 启动子来启动表达的E1A 激活基因阻遏子(cellular repressor of E1A-stimulated genes,CREG) 和增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP) 融合的真核表达质粒.方法:根据GenBank 中公布的TIE2 基因的启动子序列,人工合成TIE2 启动子DNA 序列,经AseⅠ和NheⅠ双酶切后,亚克隆入表达质粒pEGFP-N1 中构建pTIE2-EGFP-N1.同时,用BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pcDNA3.1 myc-His/hCREG质粒得到CREG 基因,亚克隆入质粒pTIE2-EGFP-N1 中构建pTIE2-CREG-EGFP-N1,酶切鉴定.应用脂质体法将该质粒转染至体外培养的小鼠动脉内皮细胞,荧光显微镜下观察EGFP的表达;Western blot 检测CREG 蛋白的表达.结果与结论:经酶切鉴定证实实验构建的pTIE2-CREG-EGFP-N1 质粒正确;体外转染48 h,荧光显微镜下可见EGFP的表达,Western blot 检测到CREG 蛋白的表达.说明实验成功构建了pTIE2-CREG-EGFP-N1 重组质粒,其可携带目的基因在小鼠动脉内皮细胞中有效表达.
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人ski基因真核表达载体的构建及促细胞增殖作用
背景:c-Ski 既可促进组织修复,又能降低瘢痕形成,有望成为一个全新的基因治疗药物.目的:构建人ski 基因的真核表达载体,并对其促成纤维细胞增殖效果进行验证.方法:RT-PCR 法从人包皮培养原代成纤维细胞总RNA 中扩增出人ski 基因,连同真核表达启动子CMV 克隆到pUC118 载体上,酶切和测序验证后,应用脂质体将其转染到培养的大鼠皮肤成纤维细胞中.结果与结论:酶切和测序结果证实表达质粒构建成功,Western blot 显示Ski 蛋白在转染细胞中成功表达,且可显著提高转染细胞的增殖效应,说明以pUC118 为骨架的重组ski 表达质粒具有促进大鼠皮肤成纤维细胞增殖的作用.
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脑缺血再灌注损伤模型大鼠参附注射液干预后热休克蛋白70的表达
背景:参附注射液可通过改善微循环,增加组织血氧含量发挥对缺血再灌注损伤的保护作用.目的:观察参附注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70 表达的影响.方法:将SD 大鼠随机分为3 组:假手术组、大脑中动脉闭塞缺血再灌注损伤模型组、参附注射液组.结果与结论:应用参附注射液1d 后,改善了缺血再灌注大鼠脑部神经细胞的排列,减轻了胞体肿胀,核固缩等现象,应用3d 后改善更为明显,胞体结构已较清晰,核固缩、溶解程度显著减轻,胞体肿胀现象明显改善.参附注射液组治疗后1,3d 热休克蛋白70 表达明显高于假手术组与模型组.提示参附注射液对脑缺血再灌注具有显著的保护作用,其作用可能是通过促进热休克蛋白70 的表达来实现的.
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原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节
背景:体外实验常采用外源性转化生长因子β1 刺激来观察细胞增殖变化,易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1 的影响.目的:检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞(L929) 自分泌转化生长因子β1 的浓度和细胞增殖的变化.方法:Elisa 试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1 水平.结果与结论:纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1 浓度随培养时间延长而升高,原代成纤维细胞内转化生长因子β1 浓度随培养时间延长而降低;两种细胞培养上清转化生长因子β1 浓度均随时间而上升,但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞(P < 0.01),峰值时达到原代成纤维细胞的20 倍;两种细胞增殖曲线在72 h 内均随时间而显著增高(P < 0.01),同一时间点比较,纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞.提示自分泌转化生长因子β1 具有促进细胞增殖的作用,不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1 反应不同的重要原因.
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脯氨酰羟化酶RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定
背景:慢病毒载体可稳定介导基因沉默且具有较高的转染效率.目的:构建并鉴定脯氨酰羟化酶 RNA 干扰慢病毒载体.方法:针对脯氨酰羟化酶2 基因序列设计RNA 干扰靶序列,合成靶序列的寡聚DNA,退火形成双链DNA,与经Age Ⅰ和EcoR Ⅰ酶切的pGCSIL-GFP 连接、转化大肠杆菌感受态细胞,产生重组RNA 干扰慢病毒表达载体,PCR 筛选阳性克隆,测序鉴定.结果与结论:PCR 和DNA 测序证实合成的含脯氨酰羟化酶短发卡RNA 慢病毒载体寡核苷酸链正确插入pGCSIL-GFP 载体.说明实验成功构建脯氨酰羟化酶基因RNA 干扰慢病毒载体.
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双极射频能量处理时间可影响软骨细胞活性和软骨表面轮廓
背景:射频能量已用于处理关节软骨损伤,但其安全性受到质疑.目的:在体外模拟关节镜条件下使用双极射频能量处理软骨损伤,分别通过葡萄胺聚糖检测和扫描电镜观察评估软骨细胞的活力和表面轮廓.方法:无菌条件下,应用双极射频能量分别处理新鲜牛膝关节软骨10,20,30,40 和50 s.处理后取下全层关节软骨,每个标本分为2 部分,一部分通过检测葡萄胺聚糖释出率评估软骨细胞的活性,另一部分通过扫描电镜评估软骨的表面轮廓.结果与结论:双极射频能量对软骨细胞造成时间相关的有害效应,软骨细胞的活性与处理时间呈负相关.表面轮廓的光滑度与处理时间呈正相关,处理时间大于20s 才可充分光滑软骨表面,达到扫描电镜评分的2 分.提示应用双极射频能量处理关节软骨损伤时,软骨细胞的活性和表面轮廓的光滑度与处理时间相关,应谨慎使用射频能量处理关节软骨损伤直至其长期效应得到评估.
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去卵巢牙周炎模型大鼠牙槽骨吸收与补骨脂的干预
背景:补骨脂在治疗骨质疏松症方面有明显效果.目的:观察补骨脂对去卵巢牙周炎大鼠牙槽骨代谢、牙槽骨密度及高度的影响.方法:将30只雌性Wistar 大鼠随机等分为3 组:去卵巢组和补骨脂组行双侧卵巢切除术,假手术组仅手术不切除卵巢,补骨脂组于卵巢切除第2 天灌胃3 g/kg 补骨脂水剂,1次/d.去卵巢2周,所有大鼠采用结扎上颌磨牙的方法建立牙周炎1540007,模型结果与结论:上颌磨牙结扎12 周,与假手术组比较,去卵巢组大鼠血清雌二醇、钙离子浓度显著降低(P < 0.05),碱性磷酸酶水平显著升高(P < 0.05),X 射线片及苏木精-伊红染色显示去卵巢组大鼠上颌骨骨密度及高度显著降低(P < 0.05) ;与去卵巢组比较,补骨脂组大鼠血清钙离子浓度显著升高(P < 0.05),碱性磷酸酶水平显著降低(P < 0.05),上颌骨骨密度及高度显著增高(P < 0.05),且与假手术组比较差异无显著性意义(P > 0.05).说明雌激素缺乏促进实验性牙周炎大鼠牙槽骨吸收,补骨脂可有效阻止雌激素降低导致的牙槽骨高度、骨密度降低.
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组织工程皮肤的构建及组织形态学观察
背景:应用于临床的组织工程皮肤具有血管化速度慢、力学强度差以及无法永久性保留等局限,因此,需要对相关技术环节进行改进以制备一种合适的永久性皮肤替代物.目的:建立一种构建有活性的双层组织工程皮肤的方法,并对其组织形态学进行观察.方法:以Ⅳ型胶原和成纤维细胞联合修饰的同种脱细胞真皮基质为支架,与表皮干细胞复合后依次经浸没式培养和气液分离界面培养构建组织工程皮肤,利用光镜和扫描电镜对其组织学特点进行观察和分析.结果与结论:以表皮干细胞和同种脱细胞真皮基质制备的组织工程皮肤具有表、真皮双层结构,其中表皮由多层不同分化程度的表皮细胞组成,真皮为天然三维孔隙结构,胶原纤维完整,且表皮层与真皮层紧密连接,形成整体结构,可满足全层皮肤替代物的基本组织学要求.
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胰岛素样生长因子1与转化生长因子β2促进组织工程软骨构建的体外实验
背景:软骨组织的再生能力差,软骨组织工程能利用较少的细胞、支架材料和细胞因子对缺损进行修复.目的:观察胰岛素样生长因子1 与转化生长因子β2 联合应用对组织工程软骨形成的影响.方法:用酶消化法获取人软骨细胞,将培养的细胞以4×109 L-1 的细胞浓度接种在藻酸钙凝珠支架上,分别加入200 μg/L 胰岛素样生长因子1 和(或)1 μg/L 转化生长因子β2 进行立体培养.于培养的第3,5,7,9,1,13 天,进行细胞计数,观察软骨细胞的增殖情况.培养2 周后,进行大体形态观察和阿尔新蓝-过碘酸雪夫氏染色(AB-PAS)及抗Ⅱ型胶原免疫组织化学染色.结果与结论:细胞计数及免疫组织化学染色显示,胰岛素样生长因子1 和转化生长因子β2 均能促进软骨细胞增殖和软骨相关基质黏多糖及Ⅱ型胶原的分泌,其中胰岛素样生长因子1 的作用主要体现在促细胞增殖方面,而转化生长因子β2 的作用主要体现在促进软骨相关基质形成方面,二者联合应用具有促进组织工程软骨形成的协同作用.
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重组pcDNA3.1-hBMP-2转染兔脂肪干细胞体外诱导的成骨分化
背景:骨形态发生蛋白2 具有很强的诱导干细胞成骨活性.目的:构建人骨形态发生蛋白2 基因真核表达载体,探讨其转染脂肪干细胞后的成骨效果.方法:通过噬菌斑原位杂交筛选人混合细胞cDNA 文库获得人骨形态发生蛋白2基因,与真核表达载体pcDNA3.1-连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2.利用脂质体LipofectamineTM2000分别介导人骨形态发生蛋白2基因、EGFP基因转染第4 代脂肪干细胞,并经G418 进行筛选.结果与结论:酶切鉴定及DNA 测序结果证实重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2 构建成功.经计算脂质体介导的脂肪干细胞瞬时转染率为(18.0±0.42)%,并经过G418 筛选后获得了稳定转染的细胞.细胞生长曲线表明转染后对脂肪干细胞生长、增殖无明显影响.ELISA 检测发现人骨形态发生蛋白2 组的人骨形态发生蛋白2 因子表达量均高于EGFP组及未转染组,且能够稳定表达.经人骨形态发生蛋白2 基因转染的脂肪干细胞的Ⅰ型胶原含量、碱性磷酸酶活性以及钙结节数目均比EGFP组及未转染组有明显升高.
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京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响
背景:京尼平苷能够促进韧带成纤维细胞的增殖和胶原的合成,促进组织的修复和韧带损伤的愈合.目的:观察京尼平苷对大鼠软骨细胞增殖的影响.方法:采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并取第4 代细胞给予0,25,50,100mmol/L 京尼平苷干预,利用MTT 比色、流式细胞仪检测细胞周期等方法检测药物干预后第4 代软骨细胞的增殖情况.结果与结论:体外培养的软骨细胞随着传代次数的增加,细胞形态由原代的多角形逐渐变为长梭形;且随着培养时间的延长及京尼平苷浓度的升高,软骨细胞增殖更为显著(P < 0.01).
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骨质疏松性骨折愈合中骨改建的动态参数及骨密度变化
背景:当骨质疏松骨强度下降时,遭受轻微创伤或其他各种风险因素均易发生骨折.目的:观察骨质疏松性骨折愈合过程中骨小梁组织学变化,骨密度及骨矿化沉积率的改变.方法:SD 大鼠随机分为骨质疏松组与对照组,骨质疏松组大鼠切除双侧卵巢,术后3 个月,建立骨折模型.骨折后4,8,12,16 周,荧光显微镜下观察骨改建的动态参数,双能X 线骨密度仪下测定骨痂组织的骨密度;骨折后1,2,4,6,8,12,16 周,应用自动图像系统测量骨组织形态.结果与结论:骨质疏松组大鼠成熟小梁骨占骨痂面积比对照组小,且小梁骨厚度变薄、小梁骨间距较宽,骨质疏松组骨小梁表面荧光标记百分比及骨痂组织骨密度低于对照组;而骨矿化沉积率高于后者对照组.说明在骨质疏松性骨折愈合过程中,骨痂组织的组织学的异常改变导致骨折愈合质量的降低.
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流体切应力对成骨细胞Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路的影响
背景:力学刺激对Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路对成骨细胞的分化,增殖和凋亡有重要作用.Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路的影响是近年来研究的热点.目的:探讨流体切应力对Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路的影响在促进骨细胞骨形成和修复中的作用.方法:应用计算机检索CNKI 期刊全文数据库和PubMed 数据库(1990-01/2009-12)与流体切应力对成骨细胞Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路影响有关的文章,纳入43 篇符合标准的文献进行综述.结果与结论:力学负荷刺激Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路可提高LRP5 G171V 鼠骨细胞骨形成敏感性,导致骨量增多,密度增大.体内和体外力学实验都支持Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路是力学刺激的正常反应通路,Wnt/β-连锁蛋白信号转导通路在力学刺激作用下能提高成骨或骨细胞的成骨敏感性.
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富血小板血浆在骨愈合治疗中的作用
背景:富血小板血浆可明显促进各种组织的修复和愈合.临床上运用其治疗骨软骨以及软组织缺损等骨科疾病方面已取得了很多成果.目的:简要综述近年来富血小板血浆相关研究,总结其在骨科基础研究与临床应用中的进展.方法:以"platelet-rich plasma,bone formation,tissue engineering "为检索词,检索Pubmed 数据库(1999-01/2011-01),Orthopedics,以"富血小板血浆,骨缺损,组织工程"为检索词,检索中国期刊全文数据库(1999-01/2011-01).纳入与干细胞以及干细Changzheng 胞在骨科应用方面的基础和临床研究,排除不相关及重复研究.计算机初检得到301 篇文献,根据纳入排除标准,终纳入62 篇.结果与结论:尽管目前还存在争论,但富血小板血浆仍是一种非常有潜力的技术,尤其是作为细胞支架在组织工程中的应用如能被进一步研究证实有效,将对骨组织工程乃至其他各种组织工程研究产生重大的影响.因此除了规范研究在循证医学方aspirin_cj@yahoo.面的要求之外,这应该是富血小板血浆今后研究的有一个重要方向.
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骨形态发生蛋白9的成骨效应研究与进展
背景:组织工程人工骨是解决传统植骨骨量不足,新骨形成缓慢的有效途径,而寻找促进细胞增殖和成骨分化的因子和技术是目前研究组织工程骨的关键领域.目的:全面了解骨形态发生蛋白9 的成骨机制、作用及表达纯化的方法,为更好的实现成骨分化因子在临床促进骨形成,解决骨缺损修复奠定基础.方法:检索PubMed 数据库2000-01/2010-12 及CNKI数据库2006-01/2010-12 收录的骨形态发生蛋白9 相关综述和论文报告,并分析其成骨机制、作用及表达纯化的方法几个方面的研究进展.结果与结论:共纳入骨形态发生蛋白9 的相关文献21 篇.在骨形态发生蛋白9 诱导成骨过程中,经典Wnt 信号通路、Hey1、碱性螺旋-环-螺旋蛋白和过氧化物酶增殖体活化受体2、激活素受体样激酶1 和2、胰岛素生长因子2 及类维生素A 等机制都起着重要的作用.目前,骨形态发生蛋白9 已经在体内外被证实是成骨能力强的转化生长因子.对骨形态发生蛋白9 的研究主要是通过重组腺病毒作为载体,但目前构建的病毒载体会有许多编码蛋白质的基因,其表达产物免疫原性很强,应用上存在安全隐患.有学者将真核质粒作为载体,转染真核细胞中,得到骨形态发生蛋白4.能否用此方法得到骨形态发生蛋白9,从而解决腺病毒应用的安全性问题,为临床治疗骨缺损等提供生物技术支持,还有待进一步的研究证实.
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人体负重行走的生物力学研究及前景
背景:人体背部负重行走时若背负重物过重或长时间地承担质量,容易导致一系列的损伤问题,目前有关人体负重行走状态下的生物力学研究较少.目的:综述人体负重行走的步态参数变化、足-地反作用力变化、压力传感器及肌电的应用.方法:由第一作者检索2005/2010 PubMed 数据库及中国知网数据库有关负重、行走、背包方面的文章.英文检索词为"gait,load carriage,backpack",中文检索词为"负重行走、背包、步态".结果与结论:目前对于负重行走的研究:①在研究指标上,各种指标比较单一,综合研究还不够.②在研究对象上,针对青年人群和儿童的相关研究比较多,有关士兵负重行军的研究相对较少.③在研究内容上,针对负重行走的步态研究居多,背包商业化测试较多,对产生负重损伤的生物力学机制探讨,以及足底压力变化上研究较少,对相关鞋类产品的生物力学测试关注不够.④在研究结果上,一些研究结果产生相互矛盾的结论,致使负重行走对人体步态影响的确切机制仍旧模糊不清.
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腰椎间盘突出症蛋白质组学变化与中医证型的相关性
背景:腰椎间盘突出症的中西医结合治疗效果较好.目的:全面综述腰椎间盘突出症中医辨证分型与蛋白质组学相关的研究.方法:检索万方、清华同方等中文数据库及Pubmed 数据库2001-01/2010-12 的相关文章,中文检索词为"中医证型、蛋白质组学、腰椎间盘突出症",英文检索词为"syndrome types,traditional Chinese medicine,protcomics,lumbarintervertebral disk protrusion".纳入腰椎间盘突出症血清蛋白质组学研究及蛋白质组学、中医分型与中医药3 者关联的研究,排除重复研究及Meta 分析类文章.结果与结论:计算机检索得到361 篇文献,中文79 篇,英文282 篇,阅读标题与摘要进行筛选,排除与此文无关的文献.对29 个符合要求的研究进行综述.研究认为,部分疾病的中医分型与血清蛋白质组学有关,机体某些特异性标志蛋白表达可能与椎间盘退变相关.腰椎间盘突出症与中医血瘀证、湿热证、寒湿证等证型的关联性得到了部分实验及临床的验证,但缺乏蛋白质组学相关性研究.
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组织工程化软骨修复关节软骨缺损
背景:目前治疗软骨缺损的方法均有明显缺陷,组织工程软骨修复关节软骨缺损为微创治疗软骨缺损提供了新方法.目的:总结组织工程软骨应用于修复关节软骨缺损的新进展.方法:由第一作者用计算机检索万方数据库(2000/2010)和PubMed 数据库(2000/2010),检索词分别为"软骨缺损,组织工程软骨"和"articular cartilage defects,tissue-engineered cartilage ",语言分别设定为中文和英文.从组织工程软骨及其新进展2 方面进行总结,对组织工程软骨的发展及构建等方面进行介绍.共检索到666 篇文献,按纳入和排除标准对文献进行筛选,共纳入23 篇文章.结果与结论:近年来随着细胞支架材料的不断发展和组织构建技术的日趋成熟,结合活性细胞和支架的组织工程软骨为微创修复关节软骨缺损提供了良好的治疗手段及方法,组织工程软骨修复软骨缺损是完全可行的,C-GP 凝胶与种子细胞相容性好,可做为组织工程软骨的理想支架,但细胞支架的制备及选择仍然是组织工程软骨的热点和难点.
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烧伤变性真皮基质组织工程化改造和临床再利用
背景:大面积烧伤患者切痂术后丢弃的变性皮肤是否可再利用称为目前研究的热点.目的:通过(保留)变性真皮(基质)基础研究和临床应用进展,探讨烧伤变性真皮基质组织工程化改造和临床再利用的可行性.方法:应用计算机检索PubMed 数据库、Medline database 和中国期刊全文数据库(1970/2011-01),选择文章所述内容需与烧伤变性真皮基质的获取、性质、重塑、应用、评价等方面密切相关的25 篇文献,排除重复性研究文献.结果与结论:保留变性真皮治疗大面积烧伤在临床上取得较为满意的疗效;相关基础研究显示真皮细胞外基质含有功能性基质隐匿性肽,烧伤变性真皮基质及其降解物是细胞蛋白(激)酶作用的良好底物,具有细胞趋化活性.这些结果表明,烧伤变性真皮基质及其降解产物不是临床再生利用的障碍,通过体外合理改造若能成功应用于临床必将明显缓解烧伤治疗中自体皮源不足,提高复合皮移植效果和降低医疗费用.
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外周血白细胞热休克蛋白70mRNA在太极拳运动后的表达
背景:大部分研究显示,太极拳运动有望通过改善机体免疫功能而延缓衰老,但其机制不明.目的:观察太极拳运动后外周血白细胞热休克蛋白70 mRNA 的表达情况.方法:在健康中老年女性学练太极拳前、练习3 个月和6 个月时对其外周血白细胞热休克蛋白70 mRNA 表达进行实时定量PCR 检测.结果与结论:经过3 个月的太极拳运动干预,中老年妇女外周血白细胞热休克蛋白70 mRNA 的表达量与干预前比略增加,但没有明显差异,但干预6 个月后表达量下降明显,与干预前和干预3 个月的表达量相比差异均有显著性意义.结果初步表明热休克蛋白mRNA 表达的改变反映了太极拳健身的效果,而热休克蛋白的分子伴侣作用是太极拳健身效果的可能机制.
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绝经后妇女骨代谢过程中血清基质金属蛋白酶3和骨桥蛋白的变化
背景:骨桥蛋白和基质金属蛋白酶3 具有高度的亲和力,此二者的表达可能与骨代谢有关.目的:观察绝经后妇女血清基质金属蛋白酶3 和骨桥蛋白水平,并观察其与骨保护蛋白、骨保护蛋白配体及骨代谢指标的关系.方法:将120 名绝经后妇女分为骨密度正常组、低骨量组和骨质疏松组3 组,对其血清基质金属蛋白酶3、骨桥蛋白、骨保护蛋白、骨保护蛋白配体及骨碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原交联C 端肽和尿Ⅰ型胶原交联N 端肽进行测定,计算骨桥蛋白/基质金属蛋白酶3 比值.结果与结论:骨质疏松组中血清骨桥蛋白和基质金属蛋白酶3 的水平高于正常组(P < 0.05).绝经后妇女血清基质金属蛋白酶3、骨桥蛋白和骨桥蛋白/基质金属蛋白酶3 比值与血清骨保护蛋白配体、骨碱性磷酸酶和骨钙素水平呈明显负相关(P < 0.05),与骨保护蛋白、尿尿Ⅰ型胶原交联N 端肽/肌酐比值呈明显正相关性(P < 0.05).骨质疏松组中血清基质金属蛋白酶3、骨桥蛋白和骨桥蛋白/基质金属蛋白酶3 比值与血清骨保护蛋白配体、骨碱性磷酸酶和骨钙素水平呈明显负相关(P < 0.05),与骨保护蛋白、尿尿Ⅰ型胶原交联N 端肽/肌酐水平比值存在明显正相关性(P < 0.05).提示绝经后妇女血清骨桥蛋白水平和骨桥蛋白/基质金属蛋白酶3 比值升高与绝经后骨质疏松症伴随骨代谢转换过程增快有关.
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应用表皮生长因子治疗深Ⅱ度烧伤创面疗效的Meta分析
背景:中国应用表皮生长因子治疗烧伤创面的临床研究较为广泛,但缺少大样本随机对照研究.目的:对中国应用表皮生长因子治疗深Ⅱ度烧伤创面的疗效进行系统评价.方法:应用计算机检索中国生物医学文献数据库(CBM,1979/2010)、万方数据库(1982/2011)、重庆维普中文科技期刊全文数据库(VIP,1989/2010)和中国期刊全文数据库(CNKI,1979/2010),以"表皮生长因子"和"深Ⅱ度烧伤"为检索词,收集有关表皮生长因子治疗深Ⅱ度烧伤与不采用表皮生长因子治疗相比较的随机对照实验.评价纳入研究的方法学质量并进行资料提取后,采用RevMan 5.0 软件进行Meta 分析.结果与结论:共纳入10 个随机对照研究,包括536 例深Ⅱ度烧伤患者.Meta 分析结果显示:表皮生长因子治疗组创面愈合时间少于对照组(P < 0.01);第2 周和第3周创面愈合率表皮生长因子治疗组与对照组差异有显著性意义(P=0.000 2,P=0.01);表皮生长因子治疗组瘢痕增生与对照组比较明显减少(P < 0.000 01);而在减少烧伤创面疼痛方面两者差异无显著性意义(P=0.16).表明应用表皮生长因子能明显促进烧伤创面的愈合和减少瘢痕增生的形成,但对缓解创面疼痛程度无明显优势.
