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结肠癌组织中Ski的表达及其与临床病理因素的关系
目的 研究Ski在结肠癌组织中的表达与临床病理因素的相关性.方法 采用免疫组化检测癌旁和结肠癌组织中Ski蛋白表达情况.结果 结肠癌组织中Ski蛋白表达阳性率[61.76％(21/34)]明显高于癌旁组织[38.24％(13/34)],差异具有统计学意义(P=0.02).Ski阳性表达与肿瘤的浸润深度(P=0.03)、有无淋巴结转移(P=0.005)和患者的预后有关(P=0.005),而与患者的性别、年龄、肿瘤分化程度无关(P＞0.05).结论 Ski在结肠癌组织中的表达明显增强,并且与肿瘤的浸润、转移和患者的预后有关.
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Ski在神经系统中的作用及机制的研究进展
Ski作为一种进化保守蛋白，在不同物种中广泛参与并调节多种细胞的增殖及分化过程。Ski在胚胎神经系统发育、中枢及周围神经系统病变中发挥一定作用，可能涉及转化生长因子-β及其超家族成员之一骨形态形成蛋白信号通路。
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Ski对脂多糖诱导大鼠星形胶质细胞炎症因子释放的影响
目的 探讨Ski对激活星形胶质细胞炎症因子分泌的影响.方法 从3日龄Sprague-Dawley大鼠大脑皮质分离星形胶质细胞,分为空白对照组、阴性对照组、siRNA组,siRNA组沉默Ski基因.48 h后,采用Western blotting和免疫荧光染色检测Ski表达;再以脂多糖激活星形胶质细胞24 h.ELISA检测各组细胞中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)的浓度.结果 siRNA组Ski蛋白表达显著降低(P<0.001);激活后,TNF-α、IL-1β浓度显著减少(P<0.001).结论 Ski可能参与星形胶质细胞炎症反应.
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沉默ski基因对大鼠星形胶质细胞迁移的影响
目的 研究ski基因在大鼠星形胶质细胞迁移过程中的作用.方法 分离大鼠脑皮质星形胶质细胞,体外培养.合成ski基因和阴性对照小干扰片段.设置ski-siRNA转染组、阴性对照组和空白对照组.采用脂质体法将特异性针对ski基因的siRNA和阴性对照siRNA转入大鼠星形胶质细胞.采用Western blotting检测各组ski蛋白的表达水平;采用Transwell细胞迁移实验和细胞划痕实验检测ski-siRNA转染后星形胶质细胞迁移能力的变化.结果 与空白对照组和阴性对照组比较,ski-siRNA转染组细胞内ski蛋白的相对表达水平显著降低(F=132.957,P<0.001).Transwell细胞迁移实验发现,ski-siRNA转染组每孔迁移细胞数少于空白对照组和阴性对照组(F>47.197,P<0.05).细胞划痕实验显示,转染组细胞1~5 d的划痕愈合率均明显低于对照组(F>69.187,P<0.01).结论 沉默ski基因能显著抑制星形胶质细胞的迁移能力,ski可能参与星形胶质细胞的转移过程,进而调控胶质瘢痕的形成.
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Ski在大鼠脊髓损伤后不同时间的表达变化
目的：探究ski在大鼠正常及损伤后脊髓中的表达及随时间变化的规律。方法60只成年雌性Sprague-Dawley大鼠，随机分为假手术组(n=30)和损伤组(n=30)，各组设1周、2周、4周、8周、12周亚组，每个亚组6只大鼠。用Allen法制备T10打击损伤模型。损伤后1 d、3 d、1周、2周、4周、8周、12周行BBB后肢功能评分；术后1周、2周、4周、8周、12周，各组取3只大鼠行HE染色，观察损伤后脊髓病理变化及空洞形成；另3只大鼠行ski免疫荧光染色及半定量分析。结果损伤组各时间点BBB评分均低于假手术组(P<0.05)。损伤后1周、2周，脊髓主要以坏死为主；4周时空洞完全形成，空洞周围有致密瘢痕组织；8周、12周空洞及瘢痕无明显变化，但损伤中心及附近脊髓明显变细。ski在正常脊髓中表达较低，损伤后ski表达逐渐增高，8周时达到高峰，12周时有所降低；ski在正常及损伤后12周脊髓中主要分布于白质；损伤后2周、4周和8周时灰质中出现明确ski表达。在损伤中心，ski在空洞周围密集表达。结论 ski在脊髓损伤后表达。它可能作用于星形胶质细胞，并调控其活化、增生以及胶质瘢痕形成。
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沉默ski基因对大鼠星形胶质细胞活化增殖及Cyclin D1表达的影响
目的 研究ski基因对大鼠星形胶质细胞增殖的影响及其分子机制.方法 分离3日龄Sprague-Dawley大鼠脑皮质星形胶质细胞,体外培养.合成ski和阴性对照小干扰片段.设置ski-siRNA组、阴性对照组和空白对照组,采用脂质体法将特异性针对ski基因的siRNA和阴性对照siRNA转入ski-siRNA组、阴性对照组星形胶质细胞中.Western blotting分析ski、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和Cyclin D1蛋白表达;CCK8法检测星形胶质细胞增殖活力;流式细胞仪检测细胞周期.结果 ski-siRNA组星形胶质细胞ski蛋白表达明显降低(F=38.611,P<0.01),GFAP(F=7.547,P<0.05)和Cyclin D1蛋白(F=3.901,P<0.05)表达降低;培养12 h后,ski-siRNA组增殖活力明显降低(F>30.507,P<0.01),G1期细胞比例明显增加,S期明显减少(F>48.425,P<0.01).结论 沉默ski基因可能通过下调Cyclin D1表达,抑制星形胶质细胞增殖.
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Ski在全反式维甲酸抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖中的作用
目的 探讨全反式维甲酸(ATRA)对转化生长因子(TGF)-β1诱导的大鼠系膜细胞增殖及Ski表达的影响.方法 不同浓度ATRA预处理大鼠HBZY-I系膜细胞(为各剂量ATRA组)24 h后再加TGF-β1(10 μg/L)培养24 h.CCK-8法检测细胞增殖情况；Real-time PCR法检测Ski mRNA的表达；Western blot检测Ski蛋白的表达；激光共聚焦荧光显微镜检测Ski蛋白的亚细胞定位.并与正常对照组及TGF-β1组比较.结果 与正常对照组相比,TGF-β1组系膜细胞增殖明显,且Ski mRNA及蛋白表达升高(P＜0.05)；与TGF-β1组相比,ATRA能够呈剂量依赖性地抑制TGF-β1的促增殖作用,ATRA 10 μmol/L组Ski mRNA及蛋白表达量明显增高.ATRA组Ski蛋白主要定位于大鼠系膜细胞核,其细胞核荧光信号强度较TGF-β1组明显增强,细胞浆中荧光信号强度较TGF-β1组减弱.结论 ATRA可通过上调大鼠系膜细胞Ski表达,抑制其向核外转位,从而抑制TGF-β1诱导的系膜细胞增殖.
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人ski基因真核表达载体的构建及促细胞增殖作用
背景:c-Ski 既可促进组织修复,又能降低瘢痕形成,有望成为一个全新的基因治疗药物.目的:构建人ski 基因的真核表达载体,并对其促成纤维细胞增殖效果进行验证.方法:RT-PCR 法从人包皮培养原代成纤维细胞总RNA 中扩增出人ski 基因,连同真核表达启动子CMV 克隆到pUC118 载体上,酶切和测序验证后,应用脂质体将其转染到培养的大鼠皮肤成纤维细胞中.结果与结论:酶切和测序结果证实表达质粒构建成功,Western blot 显示Ski 蛋白在转染细胞中成功表达,且可显著提高转染细胞的增殖效应,说明以pUC118 为骨架的重组ski 表达质粒具有促进大鼠皮肤成纤维细胞增殖的作用.
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雷公藤甲素通过上调Ski表达改善单侧输尿管梗阻模型大鼠肾间质纤维化
目的 通过检测肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、Ski、Smad3的表达,探讨雷公藤甲素对单侧输尿管梗阻(UUO)模型大鼠肾间质纤维化损伤的保护作用及其机制.方法 60只雄性SD大鼠,随机分为假手术组(Sham组)、模型组(UUO组)、UUO+雷公藤甲素(0.2mg· kg-1·d-1)治疗组.分别于术后第3、7、14、21天时处死大鼠,留取各组血清标本,检测Scr、BUN；留取肾组织标本,制成切片经HE、Masson染色后,在光镜下观察肾小管间质的病理改变,免疫组织化学染色观察肾组织中Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)、Ski和Smad3蛋白在各组不同时间的表达；Western印迹法检测肾组织中TGF-β1、Ski和Smad3蛋白的表达；实时定量PCR法检测肾组织中TGF-β1、Ski和Smad3 mRNA的表达.结果 与Sham组相比,UUO组大鼠Scr、BUN升高(P＜0.05)；病理结果显示UUO组较Sham组有明显的肾间质纤维化,肾间质损伤评分显著增高(P＜0.05)；UUO组大鼠各时间点肾组织内Col-Ⅰ、Smad3的表达增加,Ski的表达减少(P＜ 0.05)；UUO组大鼠各时间点肾组织TGF-β1、Smad3蛋白和mRNA表达量增高,Ski蛋白和mRNA的表达减少(P＜0.05).与UUO组比较,雷公藤甲素治疗组病理改变减轻(P＜0.05)；免疫组化结果显示肾组织Ski的表达增加,Smad3及Col-Ⅰ的表达减少(P＜0.05),肾组织中TGF-β1、Smad3蛋白和mRNA的表达减少,Ski蛋白和mRNA的表达增加(P＜0.05).结论 雷公藤甲素可以通过上调Ski蛋白的表达,抑制TGF-β1、Smad3的表达,减轻肾脏纤维化程度.
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水飞蓟宾对肾间质纤维化的治疗作用及机制
目的:研究水飞蓟宾对肾间质纤维化模型大鼠的保护作用及机制.方法:8周龄雄性SD大鼠36只,随机分成假手术组、模型组及治疗组,模型组及治疗组采用左侧输尿管梗阻方法复制肾间质纤维化模型,假手术组大鼠只做手术(不结扎输尿管),治疗组造模同时给予灌胃水飞蓟宾至处死前[200 mg/(kg·d)],假手术组和模型组注射等量生理盐水灌胃;各组大鼠分别于术后第7和14天处死(6只/组),取肾组织行HE染色观察大鼠肾组织病理改变、Masson染色以观察各组大鼠肾间质胶原的沉积,行免疫组化染色观察观察大鼠肾脏组织切片中Ski、转化生长因子-β1 (TGF-β1)、smad3及纤维连结蛋白(FN)的表达;Western Blot检测肾脏组织匀浆中Ski 、TGF-β1、smad3 、FN蛋白表达水平,Pearson法分析Ski与TDI、TFI、TGF-β1、smad3及FN表达的相关性.结果:HE、Masson染色结果显示,假手术组大鼠肾小球、肾小管未见异常,模型组大鼠HE染色可见肾小管上皮细胞肿胀、空泡变性及基底膜增厚,Masson染色肾小管、肾间质可见纤维阳性染色,第14天时更严重;治疗组各时点肾脏病变程度均较同期模型组减轻,模型组大鼠的TDI和TFI评分均高于假手术组,治疗组较模型组有所降低,第14天时变化更大(P＜0.05);肾脏组织免疫组化结果显示,与假手术组比较,模型组SKi表达明显减少,TGF-β1、smad3及FN表达明显升高,第14天时变化更明显(P＜0.05);与模型组比较,治疗组Ski有所增加,但仅第14天差异有统计学意义(P＜0.05),TGF-β1、smad3、FN显显著降低,第14天组更为明显(P＜0.05);肾脏组织匀浆Western Blot结果显示,与假手术组比较,模型组SKi表达少明显减,TGF-β1、smad3 、FN表达明显升高,第14天时变化更明显(P＜0.05);与模型组比较,治疗组Ski显著增加,TGF-β1、smad3、FN显显著降低,第14天组时变化更明显(P＜0.05);Pearson相关分析显示,Ski表达与TDI、TFI、TGF-β1、smad3、FN均呈显著负相关(P＜0.05).结论:水飞蓟宾可能通过上调Ski阻遏TGF-β/smad信号通路改善肾间质纤维化模型大鼠的肾间质纤维化过程.
