中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位: 中华人民共和国卫生部
- 主办单位: 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子: 1.38
- 审稿时间: 1-3个月
- 国际刊号: 2095-4344
- 国内刊号: 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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毛囊干细胞在皮肤伤口修复中的促进作用
背景:毛囊干细胞来源于皮肤、毛发,数量极其可观,取材后无严重的并发症和免疫原性,可供自体移植,是容易获取的干细胞来源之一。目的:综述毛囊干细胞促进皮肤伤口修复的作用因素,以期为该领域研究提供有效的实验依据。方法:应用计算机以“毛囊干细胞、皮肤修复、再生医学、组织工程”或“hair fol icle stem cel ,skin repairing, regenerative medicine,tissue engineering”为检索词检索CNKI 和 PubMed 数据库1999年1月至2014年12月发表的关于毛囊干细胞促进皮肤伤口修复的文章,终选择45篇文章进行综述。结果与结论:毛囊干细胞作为一种容易获得、数量可观、使用较为安全以及具有分化潜能的成体干细胞,可以通过皮肤早期血管化、表皮及附属器官的再生、信号通路作用及转录因子调节等方面的影响,促进皮肤伤口的修复,能为再生医学及组织工程研究提供良好的种子细胞。
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温阳益气法对肿瘤微环境中骨髓间充质干细胞炎性平衡及遗传稳定性的调控
背景:骨髓间充质干细胞在癌性微环境中的遗传稳定性问题如何进一步明确并加以有效预防,日益成为推广其临床应用的关键问题。非可控性炎症和肿瘤之间存在互为因果现象,越来越受到科学界关注。目的:分析骨髓间质干细胞在肿瘤微环境中的炎性信号通路及遗传稳定性的变化,并基于中医学温阳固肾、益气升阳、扶正祛邪理论为指导,探讨温阳益气法提高骨髓间质干细胞在肿瘤相关炎性微环境中的效应及其作用机制。方法:以“骨髓间充质干细胞,炎性平衡,补肾,温阳,益气,升阳,肿瘤,癌,阳化气,阴成形,遗传稳定性”为中文检索词,以“bone marrow mesenchymal stem cel s, inflammatory balance, replenishing qi, warming yang, strengthening shen, elevate yang, tumor, cancer, yang can transform qi, yin shaping up body, genetic stability”为英文检索词,应用计算机检索中国知网CNKI数据库、维普和PubMed数据库,严格按纳入标准、排除标准进行文献质量评估和筛选,终选择42篇文献进行综合分析。结果与结论:在理化因素诱导或肿瘤微环境中,骨髓间充质干细胞可促进肿瘤增殖、侵袭转移,另外骨髓间充质干细胞自身也可被诱发转化为肿瘤相关纤维母细胞,发生遗传稳定性改变。炎性微环境及其骨髓间充质干细胞炎性信号通路异常在骨髓间充质干细胞的遗传稳定性改变中发挥重要作用,基于中医学温阳固肾、益气升阳、扶正祛邪理论,发现温阳益气类中药可明显提高肿瘤微环境及化学癌环境中骨髓间充质干细胞的遗传稳定性。
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精原干细胞的生物学特性:现状、发展与应用
背景:精原干细胞具有分化、自我更新和增殖的能力,是可以实现将遗传信息稳定传递给下一代的一类成体干细胞,在医学、遗传学及动物学方面的应用前景广阔。目的:对精原干细胞的来源、生物学特性、自我更新和分化的分子调控、精原干细胞应用的相关研究成果进行了综述。方法:以“spermatogonial stem cel ,biological characteristics,self-renewal,differentiation”和“精原干细胞,生物学特性,自我更新,分化”为检索词,由第一作者检索1990至2015年PubMed和中国知网数据库,查阅与精原干细胞有关的文献,终保留46篇文献进行分析。结果与结论:精原干细胞能够进行体外培养、冷冻保存和遗传修饰及同种或异种移植,这些特性将有助于解开精子发生的机制,为雄性不育症和遗传病的治疗提供新方法,也为青年肿瘤患者因放化疗带来的生殖细胞损伤带来新的希望。精原干细胞微环境、Plzf、GDNF、SCF/c-Kit 等相关信号通路对精原干细胞自我更新和分化的调控有重要作用。精原干细胞作为干细胞研究模型,将会使人们进一步了解干细胞的生物学特性,从而为医学、遗传学及动物科学方面开发奠定基础。
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脐带间充质干细胞移植治疗脊髓损伤:不同方式的疗效对比
背景:目前,来源于人脐带的间充质干细胞移植途径主要为局部移植,存在创伤大、出血多、并发症多等缺点,限制了其在临床上的广泛应用。目的:探讨静脉移植人脐带间充质干细胞治疗脊髓损伤的可行性。方法:80只Wistar大鼠成功制备脊髓打击模型,随机分为5组:空白对照组10只大鼠不进行任何移植;DMEM局部移植组15只、DMEM静脉移植组15只大鼠分别通过局部、静脉途径移植DMEM;细胞局部移植组20只、细胞静脉移植组20只大鼠分别通过局部、静脉途径移植人脐带间充质干细胞悬液。术后定期行BBB评分、组织学观察和免疫组化检测来评价脊髓修复情况。结果与结论:移植后1 d-2周各组间BBB评分差距小,差异无显著性意义;移植后4-12周,细胞局部移植组、细胞静脉移植组BBB评分明显高于其他3组,差异有显著性意义;细胞局部移植组、细胞静脉移植组间差异无显著性意义(P>0.05)。组织学观察显示,细胞局部移植组、细胞静脉移植组损伤局部形成的空洞及胶质瘢痕较其他3组都相对减少,而细胞静脉移植组和细胞局部移植组相近。以上结果表明静脉移植的人脐带间充质干细胞能迁移到脊髓损伤部位,对急性脊髓损伤产生修复作用,且效果与局部移植相似。该方式简单易行,避免二次损伤、感染等,为治疗脊髓损伤提供了一种新的细胞移植途径。
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神经生长因子修饰脂肪干细胞移植促进损伤脊髓的修复
背景:基因修饰的干细胞能够增加多肽和全长蛋白的分泌而起到保护脊髓损伤和促进神经元功能恢复的作用,因而成为近年来的研究热点。目的:探讨神经生长因子修饰的脂肪干细胞移植对大鼠脊髓损伤的保护作用。方法:贴壁培养法原代培养脂肪干细胞,免疫荧光法行表面标志物鉴定;脂质体介导神经生长因子质粒转染修饰脂肪干细胞,Real-time PCR及Western blot检测转染后神经生长因子的表达;改良Al en法构建大鼠脊髓损伤模型,将转染后的脂肪干细胞注射移植入大鼠脊髓损伤部位,BBB评分评估修复效果;脂肪干细胞移植后3周处死大鼠,Real-time PCR及Western blot检测移植后损伤节段脊髓中神经生长因子的表达。结果与结论:原代培养脂肪干细胞获得成功,免疫荧光显示表面抗原CD29和CD44呈阳性表达;转染后脂肪干细胞中神经生长因子 mRNA及蛋白表达增高;转染神经生长因子的脂肪干细胞移植后,大鼠BBB评分明显升高,损伤节段脊髓中神经生长因子mRNA及蛋白表达明显升高。结果表明经神经生长因子转染修饰的脂肪干细胞可促进大鼠脊髓损伤修复。
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微骨折加骨髓间充质干细胞移植治疗膝关节软骨损伤
背景:如何利用组织工程学的方法促进膝关节软骨修复及缩短病程成为关节外科亟需解决的问题,而微骨折加干细胞移植疗法有可能为其开辟一条新的道路。目的:探讨关节镜下微骨折加自体骨髓间充质干细胞移植治疗膝关节软骨损伤的可行性。方法:2010年10月至2012年3月收治的膝关节软骨损伤患者16例,男12例,女4例;左膝11例、右膝5例;年龄16-52岁,平均38.6岁;所有病例软骨缺损均获得关节镜证实。治疗前2周抽取自体骨髓,分离骨髓间充质干细胞并行体外培养扩增,获取干细胞培养液3-5 mL(约107结果与结论:随访4-18个月,显效13例,有效2例,无效1例。Lysholm膝关节评分治疗前为42分(33-67分),治疗4周后为89分(75-99分),平均提高47分,随访均未出现症状反复和加重。结果可见关节镜下微骨折加自体骨髓间充质干细胞移植有效治疗膝关节软骨损伤,显著改善患者膝关节症状及恢复膝关节功能。个细胞)。膝关节镜下清理后微骨折尖锥于软骨缺损区钻孔,造成局部微骨折,排尽关节腔内积液,行微切口置入止血纱布贴覆软骨创面,注入制备好的骨髓间充质干细胞,弹力绷带加压包扎,早期CPM机锻炼。
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高压氧联合许旺细胞移植脊髓损伤大鼠电生理及后肢功能的变化
背景:高压氧治疗可以改善脊髓损伤区微环境,联合许旺细胞移植有望提高大鼠脊髓损伤疗效。目的:观察高压氧联合许旺细胞移植对脊髓损伤大鼠神经功能恢复的影响。方法:80只雌性SD大鼠建立脊髓损伤模型后随机分成4组,每组20只,空白对照组和细胞移植组分别在建模6 h后尾静脉注射L-DMEM培养液和许旺细胞(3×106结果与结论:联合组下肢运动功能优于细胞移植组和高压氧组,细胞移植组和高压氧组优于空白对照组。细胞移植组和联合组有SRY基因表达,对照组和高压氧组未检测到SRY基因。辣根过氧化物酶阳性神经纤维数:联合组>细胞移植组和高压氧组>空白对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。联合组大鼠体感诱发电位及运动诱发电位的潜伏期、波幅明显优于其他3组(P<0.05或P<0.01)。结果提示高压氧与许旺细胞移植联合应用可促进脊髓损伤大鼠神经突触的再生,改善肢体运动功能和电生理功能,其治疗效果优于单独应用高压氧或许旺细胞。个)悬液,高压氧组建模1h后开始高压氧治疗,联合组进行高压氧和许旺细胞移植联合治疗。于移植后1,3 d以及1,2,3,4周进行斜板试验、改良Tarlov 评分, BBB评分评定大鼠后肢运动功能恢复情况;移植第4周PCR检测各组脊髓组织中SRY基因表达;移植第8周行辣根过氧化物酶示踪及神经电生理检测。
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肌肉注射脐带间充质干细胞对扩张型心肌病大鼠相关细胞因子的影响
背景:已有研究表明,在一定的剂量范围内,健康大鼠肌肉注射异种脐带间充质干细胞安全可靠,也证实了这一途径对扩张型心肌病大鼠心力衰竭同样安全有效。目的:探讨肌肉注射脐带间充质干细胞对扩张型心肌病大鼠相关细胞因子表达的影响。方法:雄性SD大鼠160只,随机抽取20只作为正常组,余大鼠通过阿霉素腹腔注射方式建立扩张型心肌病模型。造模成功大鼠随机分为模型组、上清液祖、低剂量组、中剂量组、高剂量组,分别经四肢肌肉注射人脐带间充质干细胞培养液、上清液及不同剂量的人脐带间充质干细胞,注射后观察大鼠一般情况,并于首次注射后4周再次给予相同剂量的培养液、上清液或脐带间充质干细胞。结果与结论:ELISA 检测结果显示,肌注前后模型组大鼠血清肝细胞生长因子、白血病抑制因子、粒细胞集落刺激生物因子及血管内皮生长因子水平均较正常组增高(P<0.05),肌注后低剂量组肝细胞生长因子、白血病抑制因子、血管内皮生长因子和粒细胞集落刺激生物因子较肌注前显著升高(P<0.05),且较模型组明显升高(P <0.05),中剂量组白血病抑制因子较肌注前明显升高(P <0.05),高剂量组肝细胞生长因子、血管内皮生长因子和粒细胞集落刺激生物因子较肌注前无明显差异(P>0.05)。免疫组化及RT-PCR结果均显示,各肌肉注射组大鼠心肌细胞胰岛素样生长因子1、血管内皮生长因子、肝细胞生长因子均较正常组表达增强,中剂量组呈强阳性表达,较其他各组增强明显。以上结果表明中、低剂量人脐带间充质干细胞肌肉注射可使扩张型心肌病大鼠血清肝细胞生长因子、白血病抑制因子、粒细胞集落刺激生物因子及血管内皮生长因子水平增高,并增加心肌组织胰岛素样生长因子1、肝细胞生长因子、血管内皮生长因子表达。
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人脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮
背景:系统性红斑狼疮是一种以多器官或多系统病变和血清中出现多种自身抗体为特征的自身免疫性疾病,目前缺乏有效的治疗方案,而理论上间充质干细胞可用于治疗系统性红斑狼疮。目的:观察人脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮小鼠的疗效。方法:分离培养人脐带间充质干细胞,并用深红色荧光DiR标记细胞。实验小鼠分5组:正常对照组(C57BL小鼠),模型对照组(C57BL/lpr小鼠),低、中、高剂量脐带间充质干细胞治疗组(C57BL/lpr小鼠),每组10只。各治疗组通过尾静脉注射低、中、高剂量(2×106,1×106,0.5×106结果与结论:细胞移植3次后,外周血抗核抗体、抗组蛋白抗体、抗双链DNA抗体均明显下降,CD4个)脐带间充质干细胞,每周1次,连续3周,治疗结束采血测抗核抗体、抗组蛋白抗体、抗双链DNA抗体变化,定量PCR检测OPG和Foxp3基因表达的变化。+CD25+T细胞明显升高,OPG和Foxp3基因表达也明显升高,接近正常对照组,与模型对照组相比差异均有显著性意义(P <0.01)。结果表明人脐带间充质干细胞能使C57BL/lpr小鼠的各项相关指标恢复到C57BL正常鼠水平,以高剂量治疗组效果明显。
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胚胎干细胞尾静脉注射移植糖尿病肾病大鼠的氧化应激反应
背景:近年来研究资料显示,糖尿病并发症的发生、发展与机体内氧化应激的平衡破坏程度有着密切的相关性。目的:探讨胚胎干细胞对糖尿病肾病大鼠氧化应激反应的影响。方法:原代培养小鼠胚胎干细胞,观察细胞形态,免疫组化检测表面抗原标志表达。腹腔注射柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液稀释的链脲佐菌素建立糖尿病肾病SD大鼠模型,细胞实验组经尾静脉注射胚胎干细胞,模型对照组注射等量PBS,正常对照组不造模,一次性腹腔注射柠檬酸钠-柠檬酸缓冲液,共注射2次,末次注射细胞后5周,检测各组大鼠血糖、肾功能指标(尿蛋白/尿肌酐、血尿素氮和血肌酐),测定肾组织氧化应激产物丙二醛及蛋白羰基含量,免疫印迹检测超氧化物歧化酶的表达水平。结果与结论:胚胎干细胞为椭圆形或圆形,边界清晰,折光性好,高表达Oct-4、SSEA-1;与正常对照组比较,模型对照组和细胞实验组肾功生化指标、丙二醛、蛋白羰基含量均明显升高,超氧化物歧化酶表达量显著下降(P<0.05);与模型对照组比较,细胞实验组肾功生化指标、丙二醛、蛋白羰基含量明显下调,超氧化物歧化酶表达量明显回升(P<0.05)。结果表明胚胎干细胞可以通过抑制氧化应激反应的进程从而逆转糖尿病肾病的发生发展。
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脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎:Th细胞因子的变化
背景:近年来,应用干细胞治疗免疫性疾病已成为研究热点,国内外有关脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎的报道较少。目的:观察脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎患者血清干扰素γ、白细胞介素4、白细胞介素17水平变化,探讨Th细胞因子在多发性肌炎/皮肌炎发生发展中的免疫机制。方法:81例多发性肌炎/皮肌炎患者,其中44例为常规治疗组,给予糖皮质激素联合免疫抑制剂治疗,37例为脐血间充质干细胞移植组,静脉输注脐血间充质干细胞(3.5-5.2)×107结果与结论:①两组治疗后1,3,6个月与治疗前比较肌酸激酶值明显下降、肌力评分明显增高(均P<0.001);移植组治疗后各时间点肌酸激酶值较常规治疗组低、肌力评分较常规治疗组高(均P<0.001)。②脐血间充质干细胞移植治疗能明显改善肺部影像学异常,且安全性好。③移植治疗后6个月干扰素γ水平显著升高,而白细胞介素4水平显著下降(均P<0.01);移植治疗后3,6个月白细胞介素17水平显著下降(均P<0.01)。④移植治疗后6个月白细胞介素4、白细胞介素17水平与肌酸激酶水平成正相关(r=0.467和0.488,均P <0.05);干扰素γ水平与肌酸激酶水平无明显相关(r=0.213,P >0.05)。结果表明给予糖皮质激素及免疫抑制剂治疗同时,联合脐血间充质干细胞移植治疗多发性肌炎/皮肌炎安全、有效,可调节多发性肌炎/皮肌炎患者免疫网络效应、改善免疫耐受。,用药方案与常规治疗组相同。随访治疗后1,3,6个月肌酸激酶、肌力变化及治疗后3,6个月肺部影像学改变,并在治疗前及治疗后3,6个月检测移植组Th细胞因子水平。
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关节腔注射自体骨髓间充质干细胞治疗轻中度骨性关节炎
背景:大量来源于动物实验或实验室的证据表明骨髓间充质干细胞具有强有力的免疫抑制、抗炎症、软骨再生能力。但是相对于动物实验,骨关节炎患者的关节微环境更复杂,涉及大量的生物活性因子及免疫机制。目的:分析经皮穿刺关节腔注射自体骨髓间充质干细胞治疗轻中度骨性关节炎患者的疗效,探讨其炎症抑制、免疫调节、缓解软骨降解等机制。方法:收集26例轻中度骨性关节炎患者骨髓15 mL,在实验室分离、培养、获得足量的骨髓间充质干细胞,并以流式细胞仪检测其表面标志物,分析其体外诱导成骨、成脂分化能力。26例患者双侧膝关节分别入组实验组及对照组,实验组膝注射自体来源的体外培养的骨髓间充质干细胞(2×107结果与结论:按照标准化的细胞分离、培养扩增方案,能获得足量的用于关节腔注射的骨髓间充质干细胞(超过2×10个),对照组则注射等量不含细胞安慰剂。采用WOMAC评分评价治疗前后膝关节功能变化。在治疗前、治疗后2周,利用ELISA检测关节液中白细胞介素1、肿瘤坏死因子α、白细胞介素10、软骨寡聚基质蛋白水平。7第3代细胞)。从患者分离出来的骨髓间充质干细胞均阳性表达CD105、CD29,阴性表达CD45、CD34,体外具有良好的成骨、成脂能力。治疗后患者的膝关节功能明显改善,而且相对于对照组,实验组关节液中白细胞介素1、肿瘤坏死因子α、软骨寡聚基质蛋白水平明显下降,而白细胞介素10水平上升。以上结果表明,关节腔注射自体骨髓间充质干细胞治疗轻中度骨性关节炎具有良好的疗效,进一步推测注射到关节腔内的骨髓间充质干细胞有可能通过炎症抑制及逆转软骨降解等机制发挥作用,从而有望成为治疗轻中度骨性关节炎有效、可行的方法。
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骨髓间充质干细胞移植治疗肺气肿:静脉和气管途径谁更有优势?
背景:骨髓间充质干细胞移植可以抑制肺气肿炎症反应及细胞凋亡,治疗肺功能严重损害已经得到实验证实。目的:探讨不同途径移植骨髓间充质干细胞对实验性肺气肿炎症反应及细胞凋亡的抑制作用。方法:Wistar 雌性大鼠随机分对照组、静脉组及气管组,均用烟熏加气管内滴注猪胰弹性蛋白酶法建立肺气肿模型。静脉组和气管组经尾静脉及气管途径移植雄性大鼠骨髓间充质干细胞,对照组尾静脉和气管内注射PBS,移植后14 d观察大鼠肺组织病理学变化,检测肺泡壁细胞凋亡指数,支气管肺泡灌洗液肿瘤坏死因子α水平。结果与结论:与对照组相比,静脉组及气管组均能减轻肺气肿病理改变,降低肿瘤坏死因子α水平及凋亡指数,差异有显著性意义(P<0.01);但是静脉组与气管组比较,肺气肿病理改变、肿瘤坏死因子α水平及凋亡指数差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明两种途径移植骨髓间充质干细胞对肺气肿均有明显的治疗作用,从方便易行的角度考虑经静脉移植骨髓间充质干细胞治疗肺气肿较为有优势。
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富血小板血浆促进骨髓间充质干细胞的增殖
背景:富血小板血浆含有多种刺激因子,且能上调蛋白多糖及胶原合成。目的:观察山羊富血小板血浆对山羊骨髓间充质干细胞增殖的影响。方法:抽取6月龄的内蒙古锡盟山羊颈静脉血,采用二度离心法获取富血小板血浆,运用骨髓穿刺包从山羊髂骨上抽取骨髓,采用密度梯度离心方法分离、纯化获得山羊骨髓间充质干细胞,然后取生长状态较好的原代细胞,加入含体积分数为10%,20%,30%富血小板血浆的 L-DMEM 完全培养基进行培养,对照组只用L-DMEM完全培养基培养。结果与结论:在2-6d期间,富血小板血浆各组明显比对照组细胞增殖迅速,而且体积分数越高细胞生长的速度越快,生长的数目越多,细胞形态越成熟。培养第4天时,体积分数为10%,20%,30%富血小板血浆组细胞倍增时间约为50 h,35 h,25 h。结果表明山羊富血小板血浆能明显促进骨髓间充质干细胞的增殖,而且富血小板血浆体积分数越大促增殖能力越显著。
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镁黄长石浸提液诱导多潜能干细胞的成骨分化
背景:镁黄长石属于硅酸盐生物活性陶瓷,在生物体内具有降解作用,降解溶出的离子产物能够诱导细胞成骨分化,是组织工程骨支架材料的良好选择。目的:通过研究不同浓度的镁黄长石浸提液对诱导性多潜能干细胞增殖和成骨分化的影响,确定镁黄长石浸提液促进诱导性多潜能干细胞成骨分化的佳浓度。方法:将诱导性多潜能干细胞培养于不同浓度的镁黄长石浸提液中,用MTT法检测细胞的增殖情况;在第7,14,21天时,分别收集培养上清液,检测其中碱性磷酸酶、骨钙素、Ⅰ型胶原蛋白含量。结果与结论:镁黄长石浸提液促进诱导性多潜能干细胞增殖的作用具有时间依赖性,第3天时,诱导性多潜能干细胞增殖明显,第5天与第3天相比差异无显著性意义,至第7天时则明显减弱。同时,1/4浓度浸提液组促进诱导性多潜能干细胞增殖作用强。作为细胞成骨分化标志的碱性磷酸酶和骨钙素含量随时间增加而增加,1/4浸提液浓度组含量高。作为细胞成骨分化早中期标志的Ⅰ型胶原蛋白在第7天时各组均未检出,第14,21天时,同样是1/4浓度浸提液组含量高,这些说明镁黄长石浸提液中的Ca、Mg、Si离子参与了诱导性多潜能干细胞的成骨分化,其中1/4浓度浸提液(Ca离子2.37 mmol/L、Mg离子1.12 mmol/L、Si离子1.05 mmol/L)促进诱导性多潜能干细胞体外成骨分化的效果好。
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人端粒酶反转录酶转染大鼠许旺细胞的生物学特性
背景:研究表明,基因修饰许旺细胞可使许旺细胞在体内存活时间延长,促进神经再生和功能的恢复。目的:以反转录病毒 PLXSN 为载体,将 hTERT 基因转染入体外培养的大鼠许旺细胞,检测许旺细胞端粒酶活性及细胞生物学特性。方法:体外培养Wistar大鼠许旺细胞,经反转录病毒PLXSN为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染,在同等条件下进行空载病毒转染,以正常培养的许旺细胞为对照组。采用RT-PCR,Western blot检测许旺细胞人端粒酶反转录酶基因和蛋白的表达,流式细胞仪测定细胞周期分布的变化。以细胞生长曲线、MTT比色法观察细胞生长的优化作用。结果与结论:人端粒酶反转录酶基因转染许旺细胞48 h后,检测到人端粒酶反转录酶mRNA和蛋白水平表达明显。与对照组和空载病毒组比较,细胞的生长速度明显增快,G 0/G 1期细胞数减少,S期细胞数增多,差异有显著性意义(P<0.05)。结果表明通过反转录病毒PLXSN 为载体介导人端粒酶反转录酶基因转染使许旺细胞端粒酶活性明显升高,能够促进体外培养的大鼠许旺细胞增殖。
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骨形态发生蛋白9体外诱导牙囊细胞的成骨分化
背景:有研究表明骨形态发生蛋白9能促进多种干细胞的成骨分化,但其是否具有诱导牙囊细胞成骨向分化的能力尚不清楚。目的:探讨骨形态发生蛋白9对大鼠牙囊细胞成骨分化的诱导作用。方法:以纯化的第3代大鼠牙囊细胞为研究对象,感染骨形态发生蛋白9腺病毒后,检测牙囊细胞中碱性磷酸酶活性、钙盐沉积以及矿化相关因子基因和蛋白的表达变化。结果与结论:感染骨形态发生蛋白9的牙囊细胞碱性磷酸酶活性持续增强,钙盐沉积明显增强。Real time PCR检测结果显示感染骨形态发生蛋白9的牙囊细胞中矿化相关因子碱性磷酸酶、骨钙素、骨涎蛋白、骨桥蛋白和核心结合因子mRNA表达增强。Western blot检测结果显示感染骨形态发生蛋白9的牙囊细胞中骨桥蛋白的表达增强。以上结果表明骨形态发生蛋白9可诱导牙囊细胞向成骨方向分化。
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人胎盘间充质干细胞的超微结构及其吞噬功能
背景:胎盘间充质干细胞组织来源丰富,与骨髓间充质干细胞有着类似的形态、表面标记物、潜在分化能力,是人体理想的间充质干细胞来源之一。目前对胎盘间充质干细胞超微结构和吞噬功能的研究较少,对其在胎盘组织中的生理功能也鲜有探讨。目的:了解胎盘间充质干细胞的超微结构和吞噬功能。方法:分离培养5个正常娩出胎盘来源的胎盘间充质干细胞,经体外培养后在透射电子显微镜下观察细胞的超微结构;在培养上清中添加荧光微球,孵育3h后用流式细胞仪检测细胞的吞噬能力。结果与结论:胎盘间充质干细胞在透射电镜下表现为细胞核比较大,核仁明显;核膜折叠、内陷显著,常染色质多,核浆比例正常。内质网系统发达,可见大量狭小或扩张的粗面内质网。胞浆内高尔基器、溶酶体常见;细胞表面微绒毛发达,偶可见细胞间连接。5个标本的胎盘间充质干细胞中均有部分细胞能吞噬荧光微球,多有49.6%,少有18.4%。上述胎盘间充质干细胞的超微结构特点提示细胞功能活跃,可合成和分泌大量蛋白质,并具有吞噬功能;而吞噬实验进一步验证胎盘间充质干细胞吞噬异物的能力,提示胎盘间充质干细胞在胎盘中可能起着维持微环境稳态、清除异物的功能。
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人牙髓细胞分化过程中DNA甲基胞嘧啶双加氧酶TET家族的表达
背景:DNA甲基胞嘧啶双加氧酶TET家族可将甲基胞嘧啶氧化为羟甲基胞嘧啶,参与机体DNA去甲基化,调控细胞增殖与分化,但其在牙髓细胞中的表达模式仍不清楚。目的:检测TET家族在牙髓细胞成牙本质分化过程中的表达模式。方法:采用酶消化法分离培养人牙髓细胞,细胞免疫荧光法检测TET家族的表达及分布;Western Blot检测TET家族在牙髓细胞传代培养(P1-P7代)中的表达规律;对第3代牙髓细胞矿化诱导7,14 d,qRT-PCR法检测矿化诱导第0,7,14 d的TET家族mRNA水平,Western Blot法检测其蛋白量的表达变化。结果与结论:TET家族在人牙髓细胞的细胞质和细胞核中均有表达。在牙髓细胞体外传代培养过程中,TET1蛋白在P1-P6代随细胞传代呈上升趋势,TET2蛋白在P2和P3代细胞中表达增强(P<0.05),TET3表达量在不同细胞代数之间差异无显著性意义(P >0.05)。细胞经矿化诱导后,TET1,TET2和TET3的mRNA和蛋白表达量均升高(P<0.05)。以上结果提示TET家族可能参与调控牙髓细胞成牙本质分化进程。
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乳腺癌干细胞培养鉴定及分化过程中微环境的影响
背景:乳腺癌干细胞会对乳腺癌的发生、转移等产生较大的影响。通过模拟肿瘤微环境,可以更好的对乳腺癌干细胞增殖与分化情况进行分析。目的:探讨肿瘤微环境对乳腺癌干细胞分化过程的影响。方法:对乳腺癌细胞及MCF-7细胞进行成纤维细胞上清液和无血清培养液PCM-2原代培养,观察乳腺癌细胞微球体的形成情况,采用 MTT 比色法检测乳腺癌细胞增殖能力,利用免疫细胞化学方法和 RT-PCR 方法检测乳腺癌干细胞标记物和上皮间质标记物的表达情况。结果与结论:无血清培养液PCM-2培养的原代细胞微球体直径显著大于成纤维细胞上清液。成纤维细胞上清液培养速度显著快于无血清培养液PCM-2。无血清培养液PCM-2培养第3天原代细胞中ALDH1表达率显著高于成纤维细胞上清液。与无血清培养液PCM-2培养比较,成纤维细胞上清液培养原代细胞中的ALDH1表达出现下调现象,而E-cadherin、Vimentin等上皮间质标记物表达则出现上调现象。在成纤维细胞上清液培养MCF-7细胞中的E-cadherin、VimenTin表达上调,而ALDH1、Oct-4等乳腺癌干细胞标记物表达下调。结果表明肿瘤微环境会对乳腺癌干细胞生存状态和分化过程产生一定的影响,成纤维细胞上清液中分泌的一些因子可以从一定程度上对乳腺癌干细胞样微球体的增殖与分化产生促进作用。
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CD44+/C-myc+癌干细胞在结直肠肿瘤中表达及与预后的关系
背景:肿瘤复发的原因是具有自我更新特性的肿瘤干细胞未能彻底清除,于是如何标记并消灭肿瘤干细胞成为治疗肿瘤的关键所在。目的:观察结直肠癌组织中CD44+/C-myc+方法:选取150例结直肠腺癌患者的病理组织制成组织芯片,采用免疫组化双重染色观察并计数CD44细胞的形态分布及数量,并探讨其表达与患者肿瘤复发转移的关系。+/C-myc+细胞,并与正常组织、腺瘤组织比较。使用手机、书信等方式对患者进行随访,统计患者的复发转移与CD44+/C-myc+结果与结论:CD44细胞表达的关系。+/C-myc+细胞在正常组织中无分布,在腺瘤组织中极少散在分布,在腺癌组织中少量单个点状或灶性分布,双阳细胞数量与腺癌分化程度、浸润深度、淋巴结转移有关(P<0.05)。单因素分析患者腺癌的总生存率、无进展生存率均与双阳性细胞数量、淋巴结有无转移、Ducks分期有关(P<0.05),多因素分析患者的总生存率与双阳性细胞数有关,无进展生存率与双阳性细胞数及Ducks分期有关。结果表明结直肠组织中CD44+/C-myc+细胞极有可能为腺癌干细胞;Ducks分期、CD44+/C-myc+细胞的数量是影响患者预后的重要因素。
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肺癌干细胞富集及相关标志物的表达
背景:肺癌干细胞与肺癌的治疗和预后等紧密相关,通过对其表面标志物和致瘤性的研究,可以为临床诊治提供更多的参考依据。目的:探讨肺癌球体干细胞的富集方法及其致瘤性。方法:使用含有表皮细胞生长因子、胰岛素样生长因子1以及碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养基对肺癌细胞进行诱导,采用免疫荧光检测诱导后细胞相关标志物的表达。小鼠皮下移植诱导后肺球体细胞,以了解其致瘤性。结果与结论:经无血清悬浮培养和诱导,肺癌细胞形成细胞球体,免疫荧光检测显示80%以上的球体细胞呈SP-C、CCSP以及OCT4染色阳性。小鼠皮下移植球体细胞后可形成肿瘤。结果表明,无血清悬浮培养肺癌细胞可增殖形成细胞球体,该细胞球体中肺癌干细胞高度富集并具有致瘤性。
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脂肪组织血管基质部分中克隆形成细胞治疗膝骨关节炎的能力
背景:脂肪组织消化后得到的血管基质部分是多种细胞的混合体,其中以克隆样生长的细胞组分可能是真正具有“干性”维持能力的脂肪间充质干细胞。目的:分离、传代、培养脂肪组织血管基质部分中的克隆形成细胞,并检测其在动物模型中修复膝关节软骨的能力。方法:培养新鲜分离得到的脂肪组织血管基质部分,挑选其中以克隆样生长的贴壁细胞,消化、传代、培养至第3代。通过手术建立骨关节炎兔模型,将第3代克隆形成细胞移植入模型兔关节腔,与未进行细胞移植治疗的模型兔进行比较,观察兔膝关节软骨的再生情况。结果与结论:脂肪组织中血管基质部分细胞接种后第3天,贴壁细胞中出现克隆样生长的细胞集落,生长至第5天时,克隆样生长的细胞集落数和周围的单个细胞数均增加,传代至第3代时,仍然呈克隆样的集落生长,梭形形态。大体观察和MRI检查此类克隆形成细胞能在关节腔内帮助软骨修复,增加滑液分泌,同时有助于控制炎症,溃疡面积呈缩小趋势。实验结果有助于优化脂肪间充质干细胞的体外分离、培养体系,并为临床上治疗骨关节炎提供了新的思路。
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Cx43基因干扰对鼠胎肝干细胞培养的优化效应
背景:胎肝干细胞具有分化成肝细胞、胆管细胞的潜能,参与肝脏的修复与重建,是肝细胞的重要来源,但是人体的胎肝干细胞含量极少,如何获取一定数量和较高纯度的胎肝干细胞是目前研究的热点。目的:构建能有效抑制大鼠胎肝干细胞Cx43基因表达的siRNA载体,探讨抑制 Cx43表达对体外培养的鼠胎肝干细胞增殖及细胞周期的影响。方法:体外培养鼠胎肝干细胞,设计及合成靶向 Cx43的 siRNA 序列(Cx43-siRNA)以及阴性对照序列(NC-siRNA),采用电转法转染大鼠胎肝干细胞,即为实验组和对照组,未转染的胎肝干细胞为空白组。应用real-time PCR和Western blot法检测转染前后鼠胎肝干细胞Cx43基因和蛋白的表达;细胞生长曲线、CCK-8法观察细胞生长增殖情况;流式细胞术测定细胞周期分布的变化。结果与结论:转染Cx43-siRNA后,实验组与对照组、空白组相比Cx43基因和蛋白水平表达均明显降低,细胞的生长速度明显增快,G 0/G 1期细胞减少,S期细胞数增多,差异有显著性意义(P <0.05),结果表明通过电转法转染靶向Cx43的siRNA能促进体外培养的鼠胎肝干细胞增殖,对其培养有优化作用。