中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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构建医疗过程缺陷分析与风险评估的模型及方法
背景：医疗风险是医疗服务过程中可能发生的一切对患者造成损害或不安全的事件，现有的医疗风险管理主要以定性的经验为主，尚缺乏一种对既定的医疗救治过程进行系统规范的缺陷分析与风险评估的方法。
目的：构建医疗过程缺陷分析与风险评估模型，发现医疗过程可能存在的风险，提出消除或降低这些风险的有效措施。
方法：可靠性工程中的故障模式与影响分析方法应用于制造过程，即针对产品在生产过程中每个工序可能发生的工艺故障模式、原因及其对产品造成的所有影响，进行风险评估并对工艺薄弱环节制定改进措施，使风险达到可接受的水平。参考制造过程的故障模式与影响分析，可制定医疗过程缺陷分析与风险评估实施步骤，分析医疗过程中潜在缺陷，并对风险较高的薄弱环节提出改进措施，预防对患者造成重大不利影响的风险发生。结果与结论：借鉴故障模式与影响分析建立医疗过程缺陷分析和风险评估方法与基本步骤，以某医院目前急诊心肌梗死抢救过程为例，以抢救步骤中的“患者嚼服300 mg阿司匹林”为重点对象进行缺陷、原因和影响分析，并对不可接受的缺陷和原因提出改进措施和建议。从分析结果可见，文章提出的改进措施和建议可以显著降低该步骤的缺陷给患者带来的风险。因此将故障模式与影响分析应用到医疗过程，有较强的实用价值。 -
人参皂甙Rg1干预脊髓损伤模型大鼠转化生长因子β和脑源性神经营养因子的表达
背景：转化生长因子β和脑源性神经营养因子是脊髓损伤过程中的主要调节因子，研究转化生长因子β和脑源性神经营养因子在脊髓损伤过程中发生发展机制比较多，对于人参皂甙Rg1干预调节转化生长因子β和脑源性神经营养因子在脊髓损伤发作用的文献鲜有报道。
目的：通过人参皂甙Rg1干预结合转化生长因子β和脑源性神经营养因子在分子蛋白水平上表达量的变化来研究人参皂甙在脊髓损伤后对脊髓及神经的保护作用。
方法：将大鼠随机分为空白对照组、模型组和人参皂苷Rg1干预组。模型组和人参皂苷Rg1干预组大鼠以撞击法建立脊髓损伤模型。人参皂苷Rg1干预组大鼠在造模后24 h以10 mg/kg的人参皂甙Rg1腹腔注射，1次/d，连续14 d。空白对照组和模型组大鼠注射等体积生理盐水。
结果与结论：与空白对照组相比，模型组和人参皂苷Rg1干预组大鼠血清中的丙二醛含量升高，超氧化物歧化酶的含量降低，脊髓组织中转化生长因子β表达水平增加，脑源性神经营养因子表达水平降低；与模型组相比，人参皂苷Rg1干预组大鼠血清中的丙二醛降低，超氧化物歧化酶的含量增加，脊髓组织中转化生长因子β表达水平降低，脑源性神经营养因子表达水平升高。提示人参皂苷Rg1对损伤的大鼠脊髓组织具有保护作用。 -
建立嗅觉剥夺模型观察嗅觉活动调节成年豚鼠梨状皮质神经元的表达
背景：动物实验和临床研究表明在大脑发育的早期进行功能剥夺可能会引起成年期神经和认知功能障碍，但是到目前为止关于嗅觉功能活动是否影响成年豚鼠梨状皮质的神经发生尚无报道。
目的：建立嗅觉剥夺模型观察嗅觉经验对成年豚鼠两侧梨状皮质的微管聚合蛋白、小白蛋白、谷氨酸脱羧酶67以及微管相关蛋白与神经元特异性核蛋白共表达的影响。
方法：将20只成年豚鼠随机平分成2组，建立嗅觉剥夺模型饲养3周和6周之后灌注取材，应用免疫组织化学技术观察各个时间点豚鼠自身两侧梨状皮质微管相关蛋白、小白蛋白和谷氨酸脱羧酶67的分布，免疫荧光观察微管相关蛋白与神经元特异性核蛋白的共表达。
结果与结论：3周和6周组嗅觉未剥夺侧梨状皮质表达的微管相关蛋白、小白蛋白和谷氨酸脱羧酶67阳性细胞数目均明显多于嗅觉剥夺侧梨状皮质，两侧相比差异有显著性意义(P<0.05)；3周组和6周组两侧梨状皮质微管相关蛋白与神经元特异性核蛋白的共表达细胞差异无显著性意义(P>0.05)。提示嗅觉经验对成年豚鼠梨状皮质神经元的成熟及分化起着重要促进作用。 -
建立椎动脉急性血栓栓塞犬模型：微球囊导管临时隔截取栓
背景：为了避免机械取栓术中血栓脱落造成远端栓塞，作者以期运用微球囊临时隔截的方法来建立防止血栓脱落的保护装置。
目的：探讨采用微球囊临时阻断动脉血流并隔截栓塞段保护下行机械碎栓、吸栓联合溶栓治疗超急性脑梗死的安全性和可行性。
方法：Beagle犬10只在全身麻醉下经股动脉插管将微球囊导管送至优势侧椎动脉内并充盈球囊临时阻断血流，经微导管注入自体血栓建立椎动脉血栓栓塞模型，按治疗方法均分为2组，对照组采用单纯支架取栓，实验组采用微球囊导管临时阻断血流并隔截靶动脉后行机械碎栓吸栓联合药物溶栓。两组治疗后均行数字减影血管造影复查栓塞椎动脉再通状况；采用血栓性脑缺血血流分级进行血流动力学评估。造模前及取栓后12 h行磁共振弥散加权成像。建模后12 h行核磁共振成像检查后处死动物行病理检查，统计两组血管再通成功率及并发症。
结果与结论：10只beagle犬的优势侧椎动脉均成功出现血栓栓塞。对照组中2只犬椎动脉完全再通，3只犬椎动脉部分再通，其中1只犬椎-基底动脉与颅内动脉中可见多处小点状充盈缺损，颅内动脉显影差，对比剂返流，建模后12 h 磁共振弥散加权成像示左侧颞顶叶稍高信号影，病理检查示左侧大脑颞叶动脉腔内见血栓形成。实验组中5只犬椎动脉均完全再通，未见脑梗死。实验组血管再通率高于对照组(P<0.05)。结果证实，在急性脑动脉栓塞血管再通中采用微球囊导管临时阻断血流并隔截靶动脉保护下机械碎栓、吸栓联合尿激酶溶栓，可有效防止小栓子脱落栓塞远端动脉，安全有效。 -
不同程度脊髓背侧压迫损伤模型大鼠脊髓损伤致伤器的设计
背景：随着对脊髓损伤研究的不断深入，国内外学者不断设计出各种脊髓损伤模型，主要包括脊髓挫伤、重物坠击、脊髓压迫、化学灼伤、放射性损伤及激素横断半横断损伤等，然而各种制备方法都存在一定的局限。
目的：设计脊髓损伤致伤器并建立不同程度脊髓损伤动物模型。
方法：实验自行设计包括致伤部件及传动装置的脊髓损伤致伤器，利用不同致伤质量m 1=10 g，m 2=20 g， m3=30 g及时间T1=3 s，T2=5 s，造成不同质量×时间暨不同程度SD大鼠脊髓背侧压迫损伤，分为m1T1，m2T1， m3T1，m1T2，m2T2，m3T2共6组，并设假手术组进行对照。结果与结论：造模后各实验组BBB评分均低于假手术组(P <0.01)，m 1T1组与其他各实验组相比差异有显著
性意义(P<0.01)，建模后8周m 1 T 2组BBB评分高于与m 2 T 2组及m 3 T 2组(P<0.05)。建模后8周各组体感诱发电位和运动诱发电位潜伏期明显长于假手术组(P<0.01)。除了m 1 T 1组与m 1 T 2组外，其他各组间建模后体感诱发电位潜伏期均明显延长(P <0.05)。所有组建模后运动诱发电位潜伏期均明显延长(P <0.05)。结果证实，实验所设计的脊髓损伤致伤器可制备出不同程度的脊髓背侧压迫损伤动物模型。 -
经皮穿刺纤维环建立大鼠椎间盘源性疼痛模型
背景：用于研究椎间盘源性疼痛的模型众多，采用经皮穿刺纤维环建立 SD 大鼠盘源性疼痛模型鲜见报道，利用微创方法建立的盘源性疼痛模型能减少开放性手术建模中组织创伤大的干扰因素。
目的：建立一种操作简单、稳定性高且利于大样本量制作的 SD 大鼠盘源性疼痛模型，从行为学、影像学和分子生物学方面研究其时程变化。
方法：SPF级SD雄性大鼠88只采用随机数表法分为对照组(n=10)、假手术组(n=34)和模型组(n=44)。模型组大鼠于X射线透视引导下经皮穿刺靶椎间盘纤维环；假手术组大鼠经皮穿刺椎旁组织，不穿刺纤维环。
结果与结论：与对照组及假手术组相比，模型组大鼠双后足50%机械撤足阈值下降。模型组大鼠L 5/6椎间盘退变较相邻椎间盘明显，其退变程度随时间延长有加重趋势。模型组大鼠背根神经节的降钙素基因相关肽从建模后第3天开始升高并在造模后第21天达到峰值，维持较高水平至第35天。模型组大鼠背根神经节的肿瘤坏死因子α也从建模后第3天开始升高并在造模后第14天达到峰值，维持较高水平至造模后第35天。表明X射线透视引导下穿刺SD大鼠纤维环建立的盘源性疼痛模型具有创伤小、稳定性好、干扰因素少等优点，可用于盘源性致痛的相关实验研究。 -
胶原诱导性关节炎模型大鼠炎性细胞因子表达及白喉乌头的影响
背景：目前治疗类风湿关节炎主要的药物有慢作用抗风湿药、生物制剂及植物药物，植物药因价格便宜、不良反应小而越来越受到瞩目。
目的：观察胶原诱导性关节炎模型大鼠滑膜中肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β表达及白喉乌头对其表达的影响。
方法：将45只大鼠随机分为正常对照组8只、造模组37只，造模组于大鼠足跖及尾根部多点皮内注射牛Ⅱ型胶原乳剂建立胶原诱导性关节炎大鼠模型。造模成功后，随机选取24只造模成功大鼠进行后续实验，将其随机分为模型组、雷公藤组和白喉乌头组，每组各8只，每周对3个造模后干预组和正常对照组共4组大鼠进行关节炎评分。经过灌胃给药治疗4周后，通过免疫组织化学染色检测肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β在滑膜中的表达。
结果与结论：与模型组比较，治疗后白喉乌头组、雷公藤组关节炎评分明显降低(P<0.05)。肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β在模型组滑膜中表达明显高于正常对照组(P <0.05)，在白喉乌头组、雷公藤组中表达低于模型组(P<0.05)。结果证实，白喉乌头治疗类风湿关节炎的机制可能与其抑制肿瘤坏死因子α和白细胞介素1β表达有关。 -
激素性股骨头缺血性坏死模型兔股骨组织中间隙连接蛋白Cx43的表达
背景：激素性股骨头缺血性坏死的发病机制至今尚未完全阐明，间隙连接蛋白 Cx43作为骨组织细胞间的主要间隙连接，通过介导骨细胞间信息、能力的正常传递参与调控骨组织细胞生长、分化，代偿性的骨增加或减少，间隙连接蛋白Cx43与激素性股骨头坏死发生发展的关系国内外尚少见报道。
目的：通过建立兔激素性股骨头坏死模型，初步探讨间隙连接蛋白Cx43在激素性股骨头坏死中的表达变化。方法：将新西兰大白兔40只随机等分为两组，模型组采用内毒素+激素方法构建激素性股骨头坏死模型，对照组于相同时间点注射等量生理盐水。
结果与结论：建模4周后，苏木精-伊红染色结果显示，模型组股骨头软骨下区骨小梁变细，结构紊乱，空骨陷窝明显增多，脂肪细胞增多，髓腔内造血细胞明显减少；对照组股骨头软骨下区骨小梁排列整齐、很少见空骨陷窝，骨髓造血细胞丰富，脂肪细胞较少；免疫组织化学检测显示：Cx43蛋白阳性表达于骨小梁边缘成骨细胞及骨小梁内骨细胞胞浆上及骨髓细胞间质。Western blot检测显示，碱性磷酸酶和Cx43蛋白的表达在模型组中低于对照组(P<0.05)。结果证实，在激素性股骨头坏死兔模型组织中Cx43蛋白表达下降，可能是激素性股骨头坏死发生发展的重要环节。 -
木瓜蛋白酶诱导早期膝骨关节炎模型大鼠软骨超微结构的动态变化
背景：木瓜蛋白酶诱导大鼠膝关节骨性关节炎是常用造模方法，能获得稳定的骨关节炎模型。
目的：观察木瓜蛋白酶诱导大鼠膝早期骨关节炎进程中透射电镜下关节软骨细胞超微结构的变化规律。
方法：将18只SD大鼠随机分为3组，2只为正常对照组不做干预；16只大鼠右膝关节腔注射木瓜蛋白酶和L-半胱氨酸混合液诱导骨关节炎模型(骨关节炎模型组)，左侧注射生理盐水(生理盐水对照组)。注射后第1，2，4，6周后分别取材，使用透射电镜观察股骨内侧髁关节软骨超微结构变化。
结果与结论：正常对照组和生理盐水对照组胞质内有丰富的粗面内质网、线粒体。骨关节炎模型组注射1周后，线粒体空泡化，可见轻度扩张的粗面内质网；2周后，出现脂滴，线粒体变性明显，空泡化严重，数目减少，粗面内质网扩张明显；4周后，脂滴增多，线粒体数目明显减少，大部分粗面内质网高度扩张，部分粗面内质网溶解断裂；6周后，胞质内见数个脂滴，大部分线粒体消失，仅有少量线粒体存在，大部分粗面内质网断裂溶解。说明木瓜蛋白酶诱导大鼠膝早期骨关节炎进程中透射电镜下软骨超微结构呈渐进性变化。 -
前交叉韧带离断骨关节炎大鼠印第安刺猬蛋白以及Runt相关转录因子2的表达
背景：印第安刺猬蛋白(Ihh)及其信号蛋白Gli1以及Runt相关转录因子2(Runx2)是骨关节炎密切相关的因子，在骨关节炎发病过程中，是引起关节退行性改变的重要原因之一。
目的：探索Ihh，Gli1以及Runx2在骨关节炎发病过程中的作用。
方法：将30只SD大鼠随机分成对照组(n=10)和模型组(n=20)。模型组大鼠取一侧膝关节行前交叉韧带离断建立骨关节炎模型，分别于造模后4周及12周，各取10只大鼠进行观察。对照组大鼠仅暴露前交叉韧带，于术后12周进行观察。
结果与结论：与对照组相比，造模4周后可见骨关节炎模型大鼠膝关节出现软骨退变，膝关节软骨中 Ihh， Gli1及Runx2表达水平明显增高，而造模12周后软骨退变进一步加重，但膝关节软骨中Ihh，Gli1及Runx2表达水平下降。提示Ihh，Gli1及Runx2在骨关节炎退变过程中起重要作用，其表达水平在骨关节炎的早期即明显升高，可作为骨关节炎防治研究中的评价指标。 -
构建股骨骨折合并脑损伤模型大鼠低氧诱导因子1α和核心结合因子α1的表达
背景：骨折及脑损伤后造成的低氧环境导致一系列相关因子的表达，包括低氧诱导因子1α和核心结合因子α1，二者在骨折愈合中具有重要的调控作用。但骨折合并脑损伤后骨折愈合加速是否与低氧诱导因子1α和核心结合因子α1的表达相关还不十分清楚。
目的：构建脑损伤大鼠模型，对低氧诱导因子1α和核心结合因子α1在大鼠股骨骨折合并脑损伤及单纯股骨骨折模型的骨折愈合过程中表达的对比，评价脑损伤对骨折愈合的影响。
方法：将大鼠随机分为空白组、单纯股骨骨折组和股骨骨折合并脑损伤组。造模后1，2，3，5周处死动物，通过股骨骨折断端X射线评分及骨痂组织进行苏木精-伊红染色评价模型大鼠不同时间点骨折愈合情况，通过免疫组织化学检测，评价3组低氧诱导因子1α和核心结合因子α1的表达。
结果与结论：股骨骨折合并脑损伤组的骨折愈合情况优于单纯股骨骨折组。单纯股骨骨折和股骨骨折合并脑损伤两组的组内1，2，3，5周低氧诱导因子1α和核心结合因子α1的表达比较，差异有显著性意义(P<0.05)；同一时间段组间比较，单纯股骨骨折组和股骨骨折合并脑损伤组均明显高于空白组，股骨骨折合并脑损伤组高于单纯股骨骨折组(P <0.05)。结果证实，骨折合并脑损伤模型大鼠低氧诱导因子1α和核心结合因子α1表达更为突出，这可能是骨折合并脑损伤后骨折愈合加速的重要原因。 -
构建双基因共表达腺病毒载体转染关节炎模型大鼠的意义
背景：淋巴细胞异常激活以及核因子κB依赖非特异性的炎症反应是类风湿关节炎关节组织炎症损害的两个重要方面。共刺激信号CD40/CD40L是T细胞识别、活化中重要的共刺激分子。IκBα有效的抑制核因子κB的途径，可以在中心环节上抑制炎症反应的产生，抑制炎症因子滑膜组织的损害。
目的：采用 CD40LIg-IRES2-IκBα双基因表达的腺病毒载体转染到关节炎动物模型，探索双基因共表达腺病毒载体转染对免疫性关节炎的治疗效果。
方法：构建pAdCD40LIg-IRES2-IκBα双基因共表达腺病毒载体。采用含1 g/LⅡ型胶原蛋的完全弗氏佐剂皮下多点注射构建关节炎Wistar大鼠模型。将20只构建成功的关节炎大鼠模型分为未处理组和转染组，分别给予2组大鼠四肢末端关节腔注射生理盐水和pAdCD40LIg-IRES2-IκBα腺病毒载体。
结果与结论：转染14 d后，与未处理组相比，转染组大鼠关节炎评分、关节液中淋巴细胞CD40L表达水平、关节滑膜组织中核因子κB p65表达水平、关节液内白细胞介素2、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α、间质金属蛋白酶3和间质金属蛋白酶9的水平降低。提示共表达CD40LIg和IκBα腺病毒载体局部转染可有效抑制关节炎大鼠关节炎症状，降低关节腔内炎性细胞因子及炎性分子在滑膜组织中的表达，取得良好的治疗效果。 -
类风湿关节炎模型大鼠滑膜组织中证实有髓样细胞诱发受体2的表达
背景：髓样细胞诱发受体2在类风湿关节炎活动期患者滑膜组织呈高表达，但其在类风湿关节炎发病机制中发挥的作用，目前并不清楚。
目的：观察髓样细胞诱发受体2在牛源性Ⅱ型胶原诱导的关节炎大鼠模型滑膜组织中的表达。
方法：制备胶原诱导关节炎模型大鼠，动态观察大鼠各项关节炎的活动指标和滑膜组织的病理学改变，RT-PCR法检测滑膜组织中髓样细胞诱发受体2、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素10 mRNA的表达， Western blot及免疫组织化学法分别检测关节滑膜组织中髓样细胞诱发受体2的蛋白表达及定位。
结果与结论：模型组大鼠免疫13 d后出现足爪红肿，关节炎指数评分逐渐升高(P <0.01)，炎症高峰期在19-25 d，苏木精-伊红染色可见诱导性关节炎大鼠滑膜组织增生及炎性细胞浸润、软骨骨质破坏。与对照组相比，模型组大鼠关节滑膜髓样细胞诱发受体2的mRNA和蛋白的表达、肿瘤坏死因子α、白细胞介素1βmRNA表达均明显升高(P<0.05或P<0.01)，白细胞介素10 mRNA表达显著降低(P<0.05)。结果证实，髓样细胞诱发受体2可能是类风湿关节炎模型大鼠发病过程中一个重要的炎症调节递质，其反应性升高在类风湿关节炎模型大鼠发病中发挥着重要作用。 -
减体积肝移植模型大鼠肝脏能量差异蛋白的表达
背景：目前，蛋白质组学是一项比较成熟的科研技术，已经在肝移植基础研究领域中初步得到应用，但在大鼠减体积肝移植相关研究中的应用未曾报道。
目的：应用蛋白质组学相关技术探讨大鼠减体积肝移植后与肝脏能量代谢蛋白相关的差异蛋白。
方法：肝移植的供体是Lewis雌性大鼠，受体是Wistar雄性大鼠，供受体体质量差约20 g；移植肝质量/受体肝质量≈50%。采用改良减体积肝移植模型。获取供体肝组织过程中按照要求进行减体积，修整供体肝脏，将门静脉和肝下下腔静脉分别套入不同型号的套管以备套入受体的门静脉和肝下下腔静脉，胆道用细小支撑管植入供体的胆管中以备插入到受体的胆管中；后进行受体的肝移植，受体先切除受体的原来肝脏组织，然后将准备好的供体肝脏植入受体中。造模后1，3和7 d获取移植肝脏组织，然后与预先获取冻存的供、受体肝脏组织应用蛋白组学技术建立双向凝胶电泳图谱，再利用串联质谱分析及数据库对差异表达的蛋白质点进行鉴定。
结果与结论：采用变化倍数大于10倍为标准进行差异蛋白点的选择，结果总共发现了72个差异点，通过鉴定，终32个蛋白的功能比较明确，其中有ATP合成酶β亚基、电子转化黄素蛋白β多肽和质子转运ATP合成酶3个蛋白参与了细胞能量代谢的过程，其分布于肝移植后的第1和7天，占6%。 -
构建截肢创伤模型大鼠肝脏功能变化及硫化氢的影响
背景：截肢是一种特殊类型的创伤，创伤导致肝脏损害的机制及硫化氢对肝脏的作用目前尚不明确。目的：探索构建截肢创伤模型大鼠的肝脏损伤，以硫化氢(H 2 S)对其的影响。
方法：将Wistar大鼠和SD大鼠分别随机等分为正常组、截肢后6，12，24，72 h组、硫氢化钠(NaHS)组、炔丙基甘氨酸组和为正常组、截肢后6 h组、NaHS组、炔丙基甘氨酸组。除正常组外所有大鼠完全截断左侧于膝关节上方1.2-1.4 cm处结构，并在结扎血管后剪断左侧股静、动脉，建立左后肢的截肢模型大鼠。NaHS组及炔丙基甘氨酸组大鼠分别于截肢后即刻腹腔注射28μmol/kg NaHS和50 mg/kg炔丙基甘氨酸。
结果与结论：与正常组相比，截肢后6h组大鼠肝脏和线粒体结构出现了损伤性改变，血浆及肝脏髓过氧化物酶、丙二醛、H2S/胱硫醚γ-裂解酶水平、血浆及肝脏髓过氧化物酶、丙二醛、肝脏线粒体呼吸控制率、膜电位及ATP酶活性明显降低(P<0.05)，NaHS干预后H 2 S/胱硫醚γ-裂解酶水平及以上指标明显升高(P<0.05)，但血浆转氨酶并未明显变化(P>0.05)。应用炔丙基甘氨酸后，以上除线粒体指标无明显变化外，多表现为进一步降低，转氨酶也明显下降(P<0.05)。说明H 2 S可减轻截肢模型大鼠肝脏组织脂质过氧化、炎症反应，并使线粒体功能明显改善，但并未减轻肝脏功能的受损。 -
肝门静脉海绵样变性模型大鼠组织抑制因子及基质金属蛋白酶表达与周围血管新生
背景：目前国内外尚无有效治疗肝门静脉海绵样变性的策略，且其病因的基础研究报道较为鲜见。
目的：拟建立大鼠门静脉海绵样变性模型，检测基质金属蛋白酶2，9，基质金属蛋白酶组织抑制剂1，2在大鼠门静脉及其周围组织的表达及周围血管新生中的作用。
方法：SD大鼠80只随机分为3组。以门静脉部分缩窄法复制门静脉海绵样变性的大鼠模型，以21 G钝针头操作。模型组和假手术组分别设术后2，4，6周3个时间点，对照组即不做任何处理的正常SD大鼠(造影后取材)。各组分别于处理后不同时间点行门静脉造影，免疫组织化学检测血管内皮细胞标记物CD31观察门静脉周围血管变化，并使用实时荧光定量PCR和免疫组织化学法检测大鼠门静脉及其周围组织的基质金属蛋白酶2，9，基质金属蛋白酶组织抑制剂1，2 mRNA的含量和蛋白的表达。
结果与结论：门静脉造影及血管内皮细胞标记物 CD31免疫组织化学显示，模型组门静脉周围新生血管明显增多。RT-PCR与免疫组织化学结果分析显示：对照组和假手术组基质金属蛋白酶2 mRNA及蛋白表达均较同期模型组低(P<0.01，P<0.05)，基质金属蛋白酶9 mRNA及蛋白表达均较同期模型组低。模型组基质金属蛋白酶组织抑制剂1，2各个时间段的表达水平与对照组和假手术组相比差异无显著性意义(P >0.05)；模型组造模后第2周基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶组织抑制剂2比值明显高于对照组和假手术组同期(P <0.05)。结果提示，构建的门静脉海绵样变性的模型大鼠死亡率低，成模率高，且比较稳定。基质金属蛋白酶2，9表达升高以及基质金属蛋白酶2/基质金属蛋白酶组织抑制剂2的比值失衡，可能是大鼠门静脉海绵样变周围血管新生的分子机制之一。 -
早期糖尿病视网膜病变模型大鼠玻璃体腔注射安维汀后房水细胞因子变化
背景：关于抑制血管生成药安维汀治疗早期糖尿病视网膜病变大鼠的机制研究多数局限于血管内皮生长因子，而结缔组织生长因子和色素上皮衍生因子也在其中起重要的作用。
目的：探讨安维汀玻璃体腔注射在早期糖尿病视网膜病变模型大鼠应用后房水细胞因子的变化及意义。
方法：经链脲佐菌素诱导10周建立早期糖尿病视网膜病变模型大鼠，分别采用安维汀(1.25，2.5 mg)和生理盐水进行玻璃体腔注射。
结果与结论：ELISA 检测显示，与生理盐水注射组比较，两个安维汀注射组房水中血管内皮生长因子质量浓度降低，色素上皮衍生因子和结缔组织生长因子质量浓度增高(P<0.05)，但两组间上述细胞因子的浓度差异无显著性意义(P>0.05)。结果证实，安维汀玻璃体腔注射在早期糖尿病视网膜病变大鼠应用促进新生血管的细胞因子血管内皮生长因子水平降低，抑制新生血管的细胞因子色素上皮衍生因子质量浓度升高，促进结缔组织生长因子水平升高。 -
构建大鼠白细胞介素1β基因shRNA腺病毒载体
背景：特异性下调白细胞介素1β蛋白的表达可以有效缓解外周神经损伤后病理性疼痛。与siRNA相比，shRNA可以更加稳定、高效地抑制目的基因的表达，但是单纯的shRNA无法高效地进入靶细胞中发挥对目的基因的下调作用，而腺病毒载体具有宿主范围广、感染效率高以及能够在宿主细胞中稳定表达等特点。
目的：构建大鼠白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体并检测其对目的基因表达的影响。
方法：根据NCBI查询获得的大鼠白细胞介素1β基因序列设计3条 siRNA 并合成相应的 shRNA，分别为shRNA1、shRNA2、shRNA3。采用3’和5’单链退火得到的shRNA片段与经过BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切的pHBAd/U6/GFP干扰载体连接，构建白细胞介素1βshRNA腺病毒载体穿梭质粒。测序后将穿梭质粒与骨架质粒共转染HEK293细胞，进行白细胞介素1β基因的shRNA腺病毒载体(rAd/shRNAs)的包装与扩增，分别为rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3。将rAd/shRNAs感染大鼠H9C2细胞，使用荧光显微镜观察其感染效率，采用Western Blot 检测rAd/shRNAs对目的基因表达的影响。
结果与结论：测序结果显示白细胞介素1β基因的3条shRNA腺病毒载体穿梭质粒中的序列分别与所设计的3条 shRNA 序列相同；并成功构建了大鼠白细胞介素1β基因的 shRNA 腺病毒载体(rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3)。rAd/shRNA1、rAd/shRNA2、rAd/shRNA3均可以下调白细胞介素1β的表达，其中rAd/shRNA2的下调效果明显。 -
凋亡素原核表达载体构建及活性测定
背景：体外合成或通过基因工程表达的凋亡素 Apoptin 是一种可以特异性地诱导肿瘤细胞凋亡，而对人体正常细胞无毒性和转化活性的蛋白，为抑制肿瘤的生长提供可能。
目的：构建凋亡素基因的原核表达载体，优化诱导蛋白表达的相关条件，检测纯化所得目的蛋白的活性。
方法：将已构建好的凋亡素基因亚克隆至原核表达载体 pET-28b(+)中，将该质粒转化至大肠杆菌E.coli宿主菌中，以异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)对其进行诱导表达，聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析目的蛋白，并检测所表达的目的蛋白对肿瘤细胞的增殖抑制作用。
结果与结论：凋亡素基因被成功的克隆至 pET-28b(+)，在26℃、IPTG 0.5 mmol/L诱导8 h的情况下，Apoptin为包涵体表达，表达产物经 SDS-PAGE 分析，在相对分子质量约15000的位置出现目的蛋白条带，大小与预期结果一致，经变复性和亲和层析纯化后，获得高纯度目的蛋白，进一步检测发现其对肺癌细胞 H460及H1299具有一定的促凋亡作用。实验成功构建了凋亡素原核表达载体PET-28b-Apoptin，获得了具有一定生物活性的目的蛋白，为进一步研究凋亡素的功能和开发其应用价值研究奠定了基础。 -
构建以RACK1为核心口腔鳞状细胞癌差异基因间相互作用的关系网路
背景：RACK1与口腔鳞状细胞癌的发生发展密切相关，但肿瘤的发生发展不是一个基因或蛋白决定的，是多基因、多分子呈网络结构，多步骤、多阶段共同作用的长期复杂过程，各肿瘤基因之间相互协同作用促使肿瘤细胞形成和发展。因此要揭示口腔鳞状细胞癌的作用机制将不能局限于单个蛋白或基因，而要着眼于与口腔鳞状细胞癌差异蛋白或基因相关的信号网络通路，研究整个信号通路中相关蛋白或基因的表达变化，进而分析研究这些分子之间的相互作用机制。
目的：筛选出的口腔鳞状细胞癌相关差异基因，使用STRING数据库通过生物信息学的方法构建它们之间的相互作用关系网络，为后续实验提供线索。
方法：根据作者所在课题组前期口腔鳞状细胞癌的经典蛋白组学实验结果和基因表达谱芯片实验的数据结果，选择表达一致且差异相对较大的基因作为实验的差异基因。将筛选的差异基因输入STRING数据库进行分析，找出差异基因对应蛋白之间的可能作用关系，构建相互作用网络结构图。
结果与结论：口腔鳞状细胞癌的19个差异基因对应蛋白相互间构成一个复杂的作用网络，各差异蛋白间通过多条相互作用通路进行调节，RACK1蛋白是整个网络的节点蛋白。GNB2L1的编码蛋白RACK1蛋白通过WD40重复蛋白亚基(编号COG2319)和β-G蛋白亚基(编号KOG0279)与其他差异蛋白的亚基间相互作用。其中WD40重复蛋白(编号 COG2319)与其中5个差异蛋白直接作用并构建了10条相互作用通路，β亚基 G 蛋白(编号KOG0279)与其中8个差异蛋白直接作用并构建了11条相互作用通路。说明通过STRING数据库分析构建了这19个差异基因相互作用的结构网络图发现RACK1蛋白的2个亚基共与8个相关差异蛋白直接作用，产生18条相互作用通路。在这个网络结构中RACK1蛋白是中心，提示其是口腔鳞状细胞癌的一个关键节点蛋白。 -
灯盏花素干预糖尿病模型大鼠睾丸组织增殖细胞核抗原和c-fos的表达
背景：有研究表明灯盏花素可影响2型糖尿病大鼠的生殖能力，但其作用机制少有报道。
目的：探讨灯盏花素对2型糖尿病大鼠睾丸增殖细胞核抗原和原癌基因c-fos表达的影响作用。
方法：选取36只健康雄性大鼠随机分为对照组、模型组和灯盏花素组各12只。模型组和灯盏花素组采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型，大鼠血糖监测达到16.7 mmol/L作为建模标准，对照组大鼠予以同等容积的柠檬酸缓冲液单次腹腔注射。灯盏花素组采用灯盏花素注射液10 mg/(kg?d)连续4周腹腔注射，其他2组在相同时间注入等量生理盐水。
结果与结论：干预4周后，血清睾酮检测、免疫组织化学染色和PCR检测结果显示，血清睾酮水平、增殖细胞核抗原、c-Fos蛋白及mRNA表达：对照组>灯盏花素组>模型组(P<0.05)；血糖水平：对照组<灯盏花素组<模型组(P<0.05)。结果证实，灯盏花素可以通过增强增殖细胞核抗原和c-fos的表达，保护2型糖尿病大鼠的生殖功能。 -
颈部深静脉穿刺置管三维虚拟穿刺仿真模型构建
背景：应用颈部深静脉三维可视化模型进行虚拟穿刺仿真，提高临床深静脉穿刺技能的研究还处在探索阶段。目的：寻求三维虚拟穿刺仿真技术在颈部深静脉穿刺置管中的应用
方法：取健康志愿者CT断面图像，Mimics软件对颈部各种组织半自动分割和重建，三维化显示颈部深静脉及周围解剖结构，并模拟颈部深静脉穿刺，包括模拟颈内静脉，锁骨上静脉和锁骨下静脉穿刺。
结果与结论：成功模拟颈部3种深静脉穿刺，显示虚拟穿刺针和周围解剖结构三维毗邻关系，并测量穿刺进针的安全角度、深度、佳穿刺路径。三维虚拟穿刺仿真技术为颈部深静脉穿刺提供直观形态学参考。 -
成人头面部模型标本：内眦动脉的定位观测及临床意义
背景：鼻唇沟皮瓣在临床手术中应用较广，面动脉的解剖学研究已广泛应用于临床，内眦动脉解剖对鼻唇沟区手术日益重要，但目前缺乏对内眦动脉的解剖分析。
目的：对内眦动脉进行解剖，为鼻唇沟皮瓣的手术提供解剖学依据。
方法：解剖20侧成人头面部尸体标本，以内眦连线为X轴，面中线为Y轴，建立坐标轴，定点A-F点测量内眦动脉的位置。
结果与结论：①内眦动脉在BC、CD、DE、EF段的倾斜角度分别为(11.1±4.3)°，(34.1±8.8)°，(21.5±10.5)°，(17.0±4.7)°。②内眦动脉来源于面动脉多于眼动脉，并且右侧血管直径要大于左侧。③来源于眼动脉的内眦动脉起始于由内眦连线与面中线交点正上方10 mm处向两侧延伸8.1 mm位置，起始点管径为(0.7±0.2) mm，全程共20.1 mm。④来源于面动脉的内眦动脉起始于内眦连线与面中线交点正下方40 mm处向两侧延伸25.8 mm位置，起始点管径为(0.9±0.3) mm，走行至鼻翼外侧点的距离为(5.0±1.2) mm，全程共68.7 mm。由解剖结果得出内眦动脉的体表投影，可为鼻唇沟皮瓣的相关手术提供解剖学基础。 -
海洛因成瘾模型大鼠心肌细胞的动作电位和L型钙通道电流
背景：钙离子通道异常可导致心肌受损，海洛因可直接作用钙离子通道，从而改变心肌结构。
目的：观察海洛因成瘾致大鼠心律失常后心肌细胞超微结构、L 型钙离子通道电流及心肌细胞动作电位的变化情况。
方法：SD大鼠随机分为对照组和模型组，模型组大鼠以海洛因初使剂量5 mg/(kg?d)，采用逐日剂量递增法[递增剂量2.5 mg/(kg?d)]复制海洛因成瘾大鼠模型；20 d海洛因成瘾模型成功建立，继续递增剂量至第30天，进一步建立海洛因成瘾大鼠心律失常模型。
结果与结论：与对照组相比，海洛因成瘾大鼠心肌电镜结构改变主要表现在细胞核膜皱缩、核浓缩、变小，染色质集结成块，线粒体嵴排列紊乱、消失，肌小节排列紊乱、灶性断裂，肌丝辨识不清等，心肌细胞 L 型钙通道电流-电压曲线呈现上移趋势，90%去极化动作电位显著缩短。表明海洛因可直接致心肌结构发生病理改变，钙通道电流发生改变是造成心肌损伤的主要原因之一。 -
构建不同周龄载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠血脂和病理学观察
背景：载脂蛋白E基因敲除小鼠形成的动脉粥样硬化病变与人类全身动脉粥样硬化好发处相近，是目前建立动脉粥样硬化理想的动物模型。
目的：研究载脂蛋白E基因敲除小鼠不同周龄动脉粥样硬化的病理进程，探讨不同饮食对载脂蛋白E基因敲除小鼠动脉粥样硬化发生发展的影响。
方法：将8周龄雄性载脂蛋白E基因敲除小鼠，随机分为2组，分别给予高脂饮食和普通饮食喂养8，12，16，20，24周。
结果与结论：血清学指标检测显示，不同周龄的高脂饮食组血清中总胆固醇、三酰甘油和低密度脂蛋白胆固醇水平显著高于普通饮食组(P<0.05)，呈时间依赖性。大体和冰冻切片油红O染色结果显示，高脂饮食组动脉粥样硬化管腔斑块面积显著高于普通饮食组(P<0.05)，呈时间依赖性，此时两组各周龄小鼠管腔斑块面积相比均有显著性意义(P <0.05)，小鼠在高脂饮食16周时主动脉可见明显的脂质斑块。结果表明，实验成功构建了载脂蛋白E基因敲除动脉粥样硬化模型小鼠，此模型形成脂质条纹和纤维增生病变的时间较普通饮食组更快。 -
C4/5椎间不稳模型动物病理学变化及黄韧带转化生长因子β1的表达
背景：破坏颈椎后方稳定结构会导致黄韧带退变加速，颈椎前方不稳是否会导致后方相应黄韧带及邻近节段黄韧带退变加速还不清楚。
目的：观察颈椎不稳动物模型中黄韧带的组织病理学变化及对转化生长因子β1表达的影响。
方法：将36只新西兰大白兔随机等分为实验组及对照组。实验组通过颈椎前路穿刺破坏纤维环及抽吸C 4/5髓核组织建立兔颈椎不稳动物模型，对照组不做任何处理。
结果与结论：与对照组相比，实验组兔C 3/4，C4/5，C5/6黄韧带中纤维排列紊乱，玻璃样变性，黄韧带中转化生长因子β1阳性染色面积增加，其中以C4/5为显著；4，8及12周时2组大白兔C3/4，C4/5，C5/6黄韧带中转化生长因子β1的阳性面积接近。说明颈椎前方不稳会诱发后方黄韧带退变加速，其中以损伤节段黄韧带退变为严重。 -
构建趾深屈肌腱横断模型：移植腱周膜预防肌腱粘连
背景：肌腱修复术后肌腱与周围组织的粘连问题一直是临床工作中难以解决的问题之一。
目的：构建雌性来亨鸡制备双爪第3趾趾深屈肌腱横断模型，研究腱周膜移植对预防肌腱术后粘连的作用。方法：造模成功后，左爪第3趾为实验组1，肌腱切断后缝合，取鸡同侧第4趾趾深屈肌腱腱周膜包绕实验组1肌腱吻合端，左爪第4趾为实验组2直接缝合皮肤。右爪第3趾为对照组1，肌腱切断后缝合，不修复腱周膜；右爪第4趾手术不损伤腱周膜为对照组2，肌腱进行大体观察和组织学观察。
结果与结论：术后28 d，来亨鸡肌腱大体观察及组织学观察采用Kruskal-Wal isH和 Nemenyi检验两两比较，实验组1术后效果优于对照组1(P <0.05)，但较对照组2及实验组2略差(P <0.05)；实验组2术后效果优于对照组1组(P<0.05)，与对照组2比较，差异不显著(P>0.05)。屈趾功能采用LSD-t检验两两比较，实验组1术后效果优于对照组1(P <0.05)，但较对照组2及实验组2略差(P <0.05)，实验组2术后效果优于对照组1(P<0.05)，与对照组2比较，差异不显著(P>0.05)。结果提示，腱周膜移植可以有效预防术后肌腱粘连，切取腱周膜对正常肌腱滑动影响不大。
