中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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干细胞治疗1型糖尿病:问题与前景
背景:1 型糖尿病是以胰岛 β 细胞被破坏为特点的自身免疫性疾病,患者需要依靠外源性胰岛素才能生存,目前仍缺乏特效的治疗方式.目的:综述各类干细胞的来源、分化能力、自身排斥以及存在的问题,从而为1型糖尿病的再生治疗提供依据.方法:以"type 1 diabetes melitus,stem cel,stem cel therapy,regeneration treatment,stem-cel differentiation,stem-cel transplantation, immune suppression,insulin secreting cels,isletβ-cels, therapeutic effect"为英文检索词,由第一作者检索2003至2015年PubMed数据库,查阅干细胞治疗1型糖尿病的相关文献,终保留了42篇文献进行分析.结果与结论:干细胞治疗 1 型糖尿病引起了相当多的关注,目前理想的治疗方式就是通过外源性干细胞移植使β细胞再生,即通过干细胞在体外适当的培养条件下诱导分化为具有内分泌功能的胰岛β细胞.通过各类研究,既阐述了干细胞的来源、定向分化、纯化、免疫抑制等特点以及存在的问题,还针对 1 型糖尿病的发生发展进行讨论,以选出佳的干细胞来源,从而有助于治疗该疾病.
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应用于骨再生医学的干细胞及药物治疗骨质疏松:现状与未来
背景:除药物治疗外,利用再生医学方法治疗骨质疏松是目前全球研究的热点,寻找对患者创伤相对较小、更合适的种子细胞也是关注的重点.目的:了解药物治疗骨质疏松及干细胞应用于骨再生医学的研究现状及新进展.方法:由第一作者应用计算机检索 PubMed数据库2000年1月至2014年12月相关文献.在标题、摘要、关键词中以"osteoporosis,drug therapy,bone regenerative medicine,stem cel therapy"为检索词进行检索并查阅其相关参考文献,终选择39篇文献进行综述.结果与结论:来自日本的Yoshikazu Mikami等人通过人工合成色氨酸衍生物发现了两种新型骨形成促进剂—— SST-VEDI和SSH-BMI,为相关药物研究提供了一个新的方向.去分化脂肪细胞和牙髓干细胞因其具有成骨方向分化能力且创伤小、伦理争议小等具有广阔的应用前景.
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干细胞移植修复骨折骨不连的效果评价
背景:目前已证实干细胞移植治疗疾病具有很多优势,应用该技术能治疗神经系统、免疫系统、内分泌系统等多种系统的各种疾病,具有无可比拟的优势,这些都归功于其特殊能力,包括取材容易,自身增殖能力强,分化范围广,能够修复损伤的组织以及免疫调节等功能.目的:探讨干细胞移植治疗骨折骨不连的临床疗效.方法:检索2005至2014年CNKI数据库有关干细胞移植治疗骨折骨不连的文献,检索词为"干细胞,骨不连",对检索到的244篇文献进行文献分析,并对典型文献进行进一步分析比较.结果与结论:干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,来源不受限,取材方便,对供者损伤小,无免疫原性,并发症少,成本低,易分离培养,可无限增殖,为骨不连、骨缺损、粉碎性骨折等严重骨损伤难题提供了解决途径,随着对干细胞的深入研究,开创了骨折骨不连治疗的新方向,并在临床实验中取得了一定成果.
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重复测量分析脐带间充质干细胞移植治疗肝硬化的疗效
背景:国内外已有应用间充质干细胞治疗肝硬化的临床研究且取得了可喜的进步,但在实际应用中,经常会误用t检验分析这类资料.目的:采用重复测量方法分析脐带间充质干细胞治疗肝硬化患者的有效性和安全性.方法:失代偿性肝硬化患者27例,均行常规内科治疗,包括护肝、对症治疗等.在入院1周后静脉移植脐带间充质干细胞(第2-4代),细胞存活率≥90%,干细胞数量≥2×107个,共治疗4次,每次间隔5-7 d.使用重复测量方差分析脐带间充质干细胞移植治疗不同时点的肝功能变化.结果与结论:单变量重复测量方差分析结果显示,在治疗后2,3个月时血清白蛋白升高、总胆红素降低,与治疗前比较差异有显著性意义(P < 0.05);治疗后3个月,谷草转氨酶降低、胆碱酯酶升高,与治疗前比较差异有显著性意义(P < 0.05),所有患者在观察期内无肝脏及其他器官肿瘤发生.结果表明脐带间充质干细胞移植治疗肝硬化安全有效,患者肝功能得到改善.
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神经干细胞移植治疗脑性瘫痪:神经修复的效果和安全性评估
背景:神经干细胞具有增殖、分化潜能,可修复脑部受损组织,神经干细胞移植治疗脑性瘫痪是重要临床方向.目的:观察神经干细胞移植治疗脑性瘫痪患儿的运动功能变化和安全性.方法:分离人胚胎脑神经干细胞,并进行免疫荧光染色特异性蛋白鉴定后,静脉途径移植治疗26例脑性瘫痪患儿.神经干细胞移植前及移植后3,6 个月,用粗大运动功能评价量表(GMFM)和婴幼儿精细运动发育量表(PDMS-FM)评估患儿的运动功能;检测移植前后血常规和肝肾功能,监测患儿临床不良反应.结果与结论:6 个月随访期间无遗失病例,神经干细胞特异性蛋白检测均为阳性.神经干细胞移植3,6个月,患儿GMFM量表的A、B、C功能区得分及总分较移植前显著提高(P < 0.05,P < 0.01),而D、E功能区得分未见明显提高(P > 0.05);患儿精细运动发育商、抓握能力指数和视觉感知能力指数在细胞移植3个月未见明显提高(P > 0.05),但在移植6个月均有显著提高(P < 0.05,P< 0.01).26例脑瘫患儿细胞移植前后血常规和肝肾功能各项指标均处于正常范围,整个移植治疗过程中未见明显严重不良反应.表明人胚胎脑神经干细胞移植较安全,能改善脑性瘫痪患儿的运动功能,且对粗大运动的治疗起效比精细运动更快.
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脂肪干细胞移植对Duchenne型肌营养不良症鼠神经肌肉再生单位的影响
背景:目前,Duchenne 型肌营养不良症尚无有效治疗方法,之前的研究表明基因治疗和干细胞移植治疗是可能的"治愈"方法.实验拟将两者结合起来,在动物模型上观察其疗效,并验证之前提出的神经肌肉再生单位的假说.目的:探讨脂肪干细胞移植治疗 Duchenne 型肌营养不良症的有效性和可行性,观察细胞移植对肌纤维、新生血管及神经末梢的影响.方法:体外分离培养mdx鼠脂肪干细胞,经杆状病毒基因载体进行基因修饰,用于移植治疗Duchenne型肌营养不良症模型鼠.移植后检测实验动物的血清肌酸激酶水平、肌肉病理改变及肌肉内dystrophin表达;免疫荧光检测细胞移植后血管、肌肉和神经再生情况.结果与结论:细胞移植后,能够重建模型鼠的dystrophin表达,一定程度上减轻并逆转肌肉的病理损害,进而降低血清激酸激酶水平;此外,细胞移植后能够形成干细胞来源的肌纤维、血管内皮细胞和神经末梢.这些证据表明,脂肪干细胞移植是有希望治疗Duchenne型肌营养不良症的方法之一.
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真皮来源细胞亚群修复小鼠颅骨缺损
背景:考虑到皮肤是全身大的器官,拥有丰富的皮肤毛细血管网,可能存在足够的成体干细胞用于组织工程.目的:探讨真皮骨形成蛋白受体ⅠB亚型阳性细胞的成骨潜能和修复骨缺损的能力.方法:采用组织学方法分析骨形成蛋白受体ⅠB 亚型细胞在皮肤中的定位和表达情况.新鲜皮肤组织制成单细胞悬液,以表面蛋白骨形成蛋白受体ⅠB 亚型作为分选标志,采用免疫磁珠分选获得骨形成蛋白受体ⅠB亚型细胞.在体外进行成骨诱导分化,并分别通过碱性磷酸酶染色和茜素红染色检测其碱性磷酸酶和钙结节的表达.将骨形成蛋白受体ⅠB 亚型细胞复合于珊瑚支架后修复小鼠颅骨缺损,术后 6 周通过组织学方法,术后24周通过影像学方法评估其修复骨缺损的能力.结果与结论:骨形成蛋白受体ⅠB 亚型细胞在皮肤中呈单个分散存在,位于真皮网状层.通过免疫磁珠分选可获得表达骨形成蛋白受体ⅠB 亚型的细胞亚群.体外成骨诱导后,碱性磷酸酶染色呈阳性表达,茜素红染色显示大量的钙结节形成,证实其在体外具有成骨分化能力.体内修复颅骨缺损 6 周后组织学结果显示在骨形成蛋白受体ⅠB亚型阳性细胞复合珊瑚组可见大量新生骨形成;24周影像结果显示骨形成蛋白受体ⅠB亚型阳性细胞复合珊瑚组的颅骨骨缺损组织基本完全修复.结果表明真皮来源的骨形成蛋白受体ⅠB 亚型阳性细胞亚群拥有成骨的潜能,其可能是骨组织工程适合的种子细胞.
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异氟醚麻醉抑制海马齿状回神经干细胞的增殖及分化
背景:异氟醚由于起效快、苏醒迅速、无积蓄等优点在儿科手术也逐渐被推广使用,然而其安全性还需要进一步观察.目的:观察异氟醚麻醉对新生大鼠海马齿状回神经干细胞增殖及神经元分化的影响.方法:将大鼠随机分为异氟醚组和对照组,分别予以异氟醚吸入麻醉和仅吸入空气.分别在给药前及停止给约后对动物予以5-溴脱氧球苷(BrdU)腹腔注射,第2次注射后24 h处死大鼠,获得脑组织,检测BrdU+和脑内神经源性分化因子表达情况.结果与结论:停止麻醉处理之后进行血糖以及动脉血气检测,发现异氟醚组大鼠 PaCO2出现轻度上升,pH值出现轻微下降,而PaO2、BE、SaO2以及血糖水平则均未出现改变.与对照组相比,异氟醚组经异氟醚麻醉之后,未出现明显的缺氧表现,包括紫绀和呼吸抑制等.大鼠海马齿状回神经干细胞大多分布在门区,异氟醚组的BrdU阳性细胞数少于对照组(P < 0.05).两组大鼠海马齿状回存在大量新生细胞表达NeuroD,门区NeuroD+/BrdU+阳性细胞数明显高于颗粒细胞下区,且异氟醚组显著高于对照组(P < 0.05).结果证实,异氟醚麻醉会对新生大鼠海马齿状回神经干细胞增殖及神经元分化产生一定的影响,抑制其增殖,并促进其神经元分化.
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神经干细胞体外培养鉴定及诱导分化的表型特征
背景:神经干细胞促进受损中枢神经系统结构和功能再修复具有广阔的应用前景,而进行神经干细胞体外培养鉴定及诱导分化表型的研究是实现这一应用的基础.目的:观察神经干细胞在体外培养条件下的生物学特性和分化表型特点.方法:从新生小鼠海马、嗅球提取神经干细胞.选取 3 代后稳定的神经干细胞采用 BrdU 进行标记,并进行BrdU+巢蛋白+Hochest33258免疫荧光复合染色对神经干细胞进行鉴定.体外诱导促使神经干细胞贴壁分化,对分化产生的子代细胞进行BrdU、β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白、Hochest33258复合免疫荧光染色确定分化表型.结果与结论:来源于新生鼠海马及嗅球的细胞连续传代培养后可形成稳定悬浮的类球状细胞团,且 BrdU+巢蛋白免疫荧光双染阳性.神经干细胞体外诱导贴壁分化后可产生β-微管蛋白Ⅲ、胶质纤维酸性蛋白阳性的子代细胞.以上结果表明体外培养的神经干细胞具有很强的自我增殖更新的能力,在培养过程中趋向于形成稳定的神经球,经体外诱导通过不对称细胞增殖、分化产生神经元和星形胶质细胞等细胞表型.
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SOX-9和GDF-5共同转染骨髓间充质干细胞向类髓核细胞的分化
背景:移植间充质干细胞预防和治疗椎间盘退变是一种可行的方法,将SOX-9和GDF-5共同转染骨髓间充质干细胞,使其向髓核细胞转化,以期获得更大的髓核诱导和促增殖效应.目的:探讨SOX-9和GDF-5基因共同诱导兔骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化的效果.方法:提取、分离、纯化4周龄新西兰大白兔骨髓间充质干细胞,取第3代骨髓间充质干细胞分为5组体外诱导其向类髓核细胞分化,分别为未转染组、空载体转染组、SOX-9转染组、GDF-5转染组、共转染组.转染后第14 天采用RT-PCR检测SOX-9,GDF-5和Ⅱ型胶原的mRNA表达,免疫组化染色法检测髓核细胞标记物KRT19表达.结果与结论:共转染组SOX-9 mRNA表达高于转染SOX-9组,差异有显著性意义(P < 0.05);共转染组GDF-5 mRNA表达高于转染GDF-5组,差异有显著性意义(P < 0.05).共转染组Ⅱ型胶原表达高于转染SOX-9组、转染GDF-5组,差异有显著性意义(P < 0.05).SOX-9转染组及GDF-5转染组KRT19呈阳性表达,共转染组呈强阳性表达,可见被转染的骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化,且双基因转染诱导骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化的能力和分泌细胞外基质的能力明显高于单基因转染.
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基于"升降开阖"通玄府的引经药诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化
背景:地黄饮子诱导的骨髓间充质干细胞移植对脑缺血再灌注损伤模型大鼠神经功能恢复有明显的影响.目的:探讨应用"升降开阖"通玄府的引经报使药(升麻、牛膝分别置换薄荷)地黄饮子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性,并进一步研究在骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中的调节作用.方法:取4周龄健康清洁级 SD大鼠骨髓,采用全骨髓贴壁法体外培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测第 3代细胞表面的骨髓基质标志 CD90和造血细胞标志 CD45.取第3代细胞,根据诱导条件不同分为4组:空白对照组、地黄饮子组、牛膝组、升麻组,空白对照组只用含体积分数为 1%胎牛血清的 DMEM/F12培养,后 3 组用地黄饮子含药血清、以牛膝为药引子的地黄饮子含药血清、以升麻为药引子的地黄饮子含药血清+体积分数为1%胎牛血清+DMEM/F12培养,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,诱导7 d后,采用免疫细胞化学法和 Western blot检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白的表达,RT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子、脑源性神经营养因子mRNA的表达.结果与结论:第 3 代骨髓间充质干细胞大致呈单一的长梭形或扁平形,紧密漩涡样排列生长,流式细胞仪示 CD90表达高达98%,而CD45表达仅1.3%.诱导7 d后,升麻组、牛膝组和地黄饮子组的细胞收缩变圆,向四周伸出多个明显突起,部分突起间存在连接,表现出典型的神经元样细胞形态,而空白对照组变化不明显.免疫组化染色显示牛膝组及升麻组神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白表达均高于地黄饮子组,牛膝组高于地黄饮子组,升麻组高于牛膝组,差异均有显著性意义(P < 0.05).Western blot检测结果与免疫细胞染色结果一致.RT-PCR检测胶质细胞源性神经营养因子、脑源性神经营养因子 mRNA改变类似于相应蛋白改变,升麻组>牛膝组>地黄饮子组>空白对照组,各组间差异均有显著性意义(P < 0.05).结果表明升麻、牛膝为药引子的地黄饮子可诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化,Wnt/β-catenin 信号通路可能在骨髓间充质干细胞向神经分化过程中起重要作用.
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有氧运动协同骨髓干细胞动员对心肌梗死后心电图和血流动力学指标的影响
背景:心电图和血流动力学是评价心功能康复的有效指标,目前已经证实有氧运动或骨髓干细胞动员单一因素干预均可对心肌梗死动物心电图和血流动力学产生良好影响,而二者联合干预对心电图和血流动力学指标的影响尚未见文献报道.目的:探讨有氧运动联合骨髓干细胞动员对缺血心脏心电图和血流动力学部分指标的影响.方法:结扎大鼠左冠状动脉前降支制作急性心肌梗死模型,心肌梗死运动组和心肌梗死运动动员剂组大鼠于造模后1周在电动跑台进行有氧运动训练,每周训练5 d,持续8周.心肌梗死动员剂组和心肌梗死运动动员剂组大鼠在造模后3 h皮下注射生理盐水稀释的重组人粒细胞集落刺激因子10μg/(kg?d),连续使用5 d.8周后检测心电图和血流动力学部分指标评价心功能.结果与结论:心肌梗死大鼠左心室收缩压、左室内压大上升速率和左室内压大下降速率值均明显降低,左室舒张末压升高,提示心梗后心脏已发生心功能不全;心肌梗死运动组和心肌梗死动员剂组大鼠左心室收缩压、左室内压大上升速率和左室内压大下降速率值均有一定程度的升高,左室舒张末压有所下降,提示有氧运动和骨髓干细胞动员均能改善心梗大鼠心肌收缩和舒张功能;心肌梗死运动动员剂组大鼠心功能的各项评价指标更接近于正常对照组大鼠,说明有氧运动协同骨髓干细胞动员显著增强了大鼠心肌收缩性能,使心肌收缩/舒张功能都得到显著改善.
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自然沉降速度法分选骨髓间充质干细胞
背景:在前期研究低渗结合自然沉降分选兔骨髓间充质干细胞的基础上,以工程学关于颗粒流体力学为指导,求出兔骨髓间充质干细胞在培养液中的沉降速度.通过自然沉降速度法分选及鉴定细胞,建立一个简单易行的分离、纯化、增殖间充质干细胞的方法.目的:探讨自然沉降法分选骨髓间充质干细胞的可行性.方法:梯度密度离心法确定兔骨髓间充质干细胞的密度区间(ρ1),扫描电镜测量出兔骨髓间充质干细胞的直径(d),液体密度计测算出培养液的密度(ρ2),黏度计测算出培养液的黏度(μ),选择合适的公式计算出骨髓间充质干细胞的沉降速度(Vt).以此沉降速度从兔的骨髓细胞中分选兔骨髓间充质干细胞,体外培养并观察其增殖能力、细胞纯度、细胞分化潜能,同时测定兔骨髓间充质干细胞克隆集落形成率,记录原代培养时间.结果与结论:①通过电镜测量得出兔骨髓间充质干细胞的直径为(20.37±4.58)μm,进一步确定兔骨髓间充质干细胞在培养液中的沉降速度为50-55 mm/h.②通过自然速度沉降法可成功从兔骨髓组织中分选出骨髓间充质干细胞,分选出的骨髓间充质干细胞原代培养呈成纤维样集落生长,经诱导后具有成骨、成脂分化潜能.③与梯度密度离心法比较,自然速度沉降法分离出的间充质干细胞具有原代培养时间短,细胞集落形成率高的特点.④自然速度沉降法在间充质干细胞分选过程中不采取任何干预措施,也不添加任何分离介质,仅通过物理原理自然沉降,可能对细胞损伤小,使细胞原有的生物学特性得到保留.
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内源骨髓间充质干细胞在心肌梗死后的迁移、归巢与分化
背景:目前的大多数研究主要集中在移植外源干细胞来源的心肌细胞对受损心肌进行修复与再生,而有关内源干细胞迁移、归巢及分化的研究比较少.目的:观察内源骨髓间充质干细胞在心肌梗死后迁移、归巢以及分化情况.方法:成年雌性C57BL/6小鼠随机分为2组:心肌梗死组(n=4)小鼠建立骨髓重建模型,于骨髓重建4周后行冠状动脉左前降支结扎术建立急性心肌梗死模型,1 周后处死;对照组(n=3)小鼠进行单纯骨髓重建,于骨髓重建4周后处死.取心脏组织,采用免疫荧光染色检测心肌特异性蛋白Troponin Ⅰ的表达,观察心肌梗死后表达绿色荧光蛋白的骨髓间充质干细胞在心肌组织中的分布、分化情况.结果与结论:骨髓重建小鼠心肌梗死组与对照组均可见到发绿色荧光的骨髓间充质干细胞,心肌梗死组骨髓间充质干细胞数量比对照组明显增多.两组切片均可见部分骨髓间充质干细胞呈GFP、Troponin Ⅰ和PI三阳性,心肌梗死组三阳性的细胞比对照组明显增多,表明心肌梗死后内源骨髓间充质干细胞能迁移、归巢到受损的心肌组织并获得心肌分化表型.
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大鼠肝癌诱导过程中肝癌干细胞标志及炎症因子的动态变化
背景:近年来已有研究者从肝癌组织和细胞系中发现了CD133、乙醛脱氢酶(ALDH)、CD90、CD44、EpcAM、CD13、OV6、K19、c-kit、ABCG2等多种肝癌干细胞的标志物,其中CD家族的CD133、CD90、CD44等被认为与肝癌的复发和转移密切相关.目的:探讨大鼠肝癌诱导过程中肝癌干细胞标志及炎症因子的动态变化及两者相关性.方法:应用二乙基亚硝胺(DEN)溶液饲养SD大鼠24周诱导大鼠肝癌模型,并设立普通水喂养的健康对照组.结果与结论:免疫组织化学检测显示,模型组肝癌诱导过程中Kupffer细胞相关ED2表达呈现出逐渐增多的情况,与健康对照组比较,模型组ED2在诱癌第12,16,20,24周的表达均显著升(P < 0.05).定量PCR检测显示,肝癌诱导过程中CD90呈逐渐上升趋势(P < 0.05),较之健康肝脏组织,肝癌组织中CD90上升更明显(P < 0.05);CD133呈现出一定升高趋势,但经单因素方差分析无统计学意义(P > 0.05);在诱癌过程中其他肝癌干细胞标志物未出现明显改变(P > 0.05).肝癌诱导过程中,肿瘤坏死因子α、转化生长因子β、MCP-1及白细胞介素6均明显上升(P < 0.05),较之健康肝脏组织,肝癌组织中转化生长因子β、MCP-1、白细胞介素6表达显著偏高(P < 0.05),其余炎症因子在诱癌过程中则未出现明显改变(P > 0.05).经Pearson相关性分析,MCP-1、转化生长因子β、白细胞介素6与CD90的表达之间呈显著正相关(P < 0.05).表明Kupffer细胞所释放的部分炎症因子与肝癌干细胞标志之间存在一定的相关性,Kupffer细胞可促进肝癌的发生.
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胃癌干细胞对氟尿嘧啶敏感性及化疗药物耐受细胞的生物学机制
背景:氟尿嘧啶是胃癌化疗的基础药物,临床上耐药现象较为常见.肿瘤干细胞对化疗药敏感性较低,可能是导致化疗后肿瘤复发进展的重要原因.目的:探讨胃癌干细胞对氟尿嘧啶敏感性,从细胞生物学角度分析胃癌的化疗耐药机制.方法:利用免疫组织化学染色法检测69例胃癌组织内干细胞标志物CD44和耐药蛋白胸苷酸合成酶表达情况;基于克隆形态的分选策略,从AGS胃癌细胞系内分离胃癌干细胞克隆,检测CD44和胸苷酸合成酶的表达和自我更新能力;利用CCK-8法检测不同AGS细胞克隆的5-氟尿嘧啶半数抑制浓度(IC50).结果与结论:69例胃癌组织标本中,胸苷酸合成酶和CD44的表达阳性率分别为57%(39/69)和61%(42/69), CD44与胸苷酸合成酶的表达之间呈正相关关系(Kappa=0.41,χ2=11.59,P < 0.05).AGS细胞系的克隆形成率为39%(29/69),其中,副克隆、次克隆、全克隆所占比例分别为 17%(5/29)、69%(20/29)、14%(4/29).二代克隆形成后,采用胰酶消化克隆并再次低密度接种传代,副克隆均无法传代,次克隆仅少数可连续传代,全克隆均可连续传代.不同浓度5-氟尿嘧啶作用之后,全克隆的生长抑制率均显著低于次克隆和AGS细胞,经比较差异均有显著性意义(P < 0.05).以上结果表明胃癌干细胞对5-氟尿嘧啶敏感性较低,其对化疗药物耐受,可能是临床胃癌化疗耐药的产生机制之一.
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不同生长因子对脂肪干细胞生物学行为的影响
背景:骨量不足限制了口腔种植修复的广泛应用,如何促进干细胞的迁移、黏附和增殖进而促进内源骨再生成为研究的关键点.目的:观察不同生长因子对体外培养兔脂肪干细胞迁移、黏附和增殖的影响,筛选出佳的组合因子.方法:无菌切除兔腹股沟处的白色脂肪组织,采用酶消化法培养脂肪干细胞,取第3代细胞分为5组进行干预,分别为转化生长因子β1+血小板源性生长因子AB组(组1),血小板源性生长因子AB+血管内皮生长因子组(组2),转化生长因子β1+血管内皮生长因子组(组3),转化生长因子β1+血小板源性生长因子AB+血管内皮生长因子组(组4)和空白对照组.采用Transwel 小室法检测细胞的迁移能力,黏附实验检测细胞的黏附能力,CCK-8法检测细胞的增殖能力.结果与结论:Transwel实验显示,4组间迁移细胞数差异有显著性意义(P < 0.05),其中,转化生长因子β1 (2 μg/L)+血小板源性生长因子AB(10μg/L)+血管内皮生长因子(10μg/L)组(组4)迁移细胞数多,显著促进了脂肪干细胞的迁移.黏附实验结果显示,4组间黏附细胞数差异有显著性意义(P < 0.05),其中转化生长因子β1+血管内皮生长因子组(组3)黏附细胞数多,显著促进了脂肪干细胞的黏附.CCK-8结果显示,在不同的时间点(1,3,5,7 d),各因子组合组吸光度值较对照组均显著增高(P < 0.05),其中血小板源性生长因子AB+血管内皮生长因子组(组2)递增的吸光度值大,显著促进了兔脂肪干细胞的增殖.
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生长分化因子5诱导脂肪干细胞复合Ⅰ型胶原支架成软骨细胞的分化
背景:前期实验中发现生长分化因子 5 可以诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化,但在复合Ⅰ型胶原支架的体外培养条件下其向软骨细胞分化的能力尚未见研究报道.目的:探讨生长分化因子5诱导脂肪干细胞复合Ⅰ型胶原支架向软骨细胞分化的能力.方法:从兔脂肪组织中分离培养脂肪干细胞,使用倒置相差显微镜观察细胞形态,使用免疫荧光对其表型进行鉴定.在复合Ⅰ型胶原支架条件下,加入外源性生长分化因子 5 对脂肪干细胞向软骨细胞进行诱导,在诱导14 d时,采用苏木精-伊红染色和扫描电镜对诱导的细胞进行形态学观察.在诱导7,14和21 d时,采用反转录PCR方法检测诱导的细胞的Ⅱ型胶原和蛋白多糖mRNA表达情况.结果与结论:原代脂肪干细胞贴壁生长,呈梭形、多角形分布,细胞表面抗原CD44、CD49d 阳性,CD106阴性.生长分化因子 5 诱导的脂肪干细胞与Ⅰ型胶原支架黏附良好,增殖能力旺盛,细胞表面存在着大量的细胞外基质分泌,Ⅱ型胶原和蛋白聚糖mRNA表达水平明显增加.说明生长分化因子5能够成功诱导复合Ⅰ型胶原支架的脂肪干细胞成软骨细胞分化.
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两种肝组织匀浆上清液诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的比较
背景:前期研究证明正常大鼠肝组织匀浆上清液可诱导人脐带间充质干细胞定向分化为具有部分肝细胞功能的肝样细胞,而肝纤维化大鼠肝组织匀浆上清液的诱导可行性及与前者诱导效果的比较尚不明确.目的:比较正常肝组织及纤维化肝组织微环境诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化的能力.方法:采用腹腔注射3%硫代乙酰胺生理盐水溶液(200 mg/kg,2次/周,共4周)的方法制备SD大鼠肝纤维化模型,取肝纤维化大鼠及正常大鼠肝脏制备肝组织匀浆上清.将第 3 代人脐带间充质干细胞进行分组诱导培养:①标准对照组:加入含体积分数为 10%胎牛血清的 DMEM/F12 培养基.②纤维化肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及50 g/L纤维化肝组织匀浆的DMEM/F12培养基.③正常肝组织匀浆组:加入含体积分数为10%胎牛血清及100 g/L正常肝组织匀浆的DMEM/F12培养基.诱导开始后于倒置显微镜下观察各组细胞形态学变化;取标准对照组及诱导7 d的匀浆组细胞采用Western Blot法检测CK18、AFP、CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2的表达情况,采用ELISA法测定各组细胞培养液中白蛋白水平.结果与结论:与标准对照组长梭形成纤维样细胞相比,诱导7 d时,肝纤维化匀浆组及正常匀浆组细胞形态变化明显,呈类圆形,胞体丰满.与标准对照组相比,两匀浆组细胞均可表达肝细胞标志物CK18和AFP.标准对照组细胞可表达少量CYP2E1,两匀浆组细胞表达CYP3A4、CYP2E1、CYP2D6、TPH2等肝细胞功能蛋白,且CYP2E1的表达量较标准对照组明显增加(P < 0.01),而两匀浆组间上述蛋白的相对表达量差异无显著性意义(P > 0.05).同时,两匀浆组细胞分泌白蛋白的能力较标准对照组亦明显增强(P < 0.01),两匀浆组相比差异无显著性意义(P > 0.05).实验结果显示正常肝组织和纤维化肝组织微环境均可诱导人脐带间充质干细胞向肝细胞分化,在达到相同诱导效果时,纤维化肝组织所需组织液浓度更低,提示纤维化肝组织微环境可能更有利于人脐带间充质干细胞向肝细胞分化.
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脐带间充质干细胞对乳腺癌细胞系MCF-7裸鼠移植瘤生长的影响
背景:已有临床前和临床研究资料表明,间充质干细胞预防和治疗异基因造血干细胞移植后移植物抗宿主病、自身免疫性疾病以及糖尿病等具有显著疗效.但间充质干细胞植入后是否会促进体内肿瘤生长是其临床应用安全性的一个重要体现,目前这部分内容研究尚少.目的:观察脐带间充质干细胞对人乳腺癌细胞MCF-7荷瘤裸鼠肿瘤生长的影响.方法:随机抽取BALB/c裸鼠8只作为正常对照组,随机抽取乳腺癌细胞系MCF-7裸鼠分为4组,每组8只,分别为模型对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组.3 个剂量组尾静脉注射脐带来源的间充质干细胞,分别为4×104、2×105和1×106个,共给予2次,间隔2周;正常对照组和模型对照组注射生理盐水.实验观察周期为6周.结果与结论:模型对照组肿瘤体积呈持续增长趋势,观察结束后各剂量组与同期模型对照组动物相比,脐带间充质干细胞有抑制肿瘤体积及质量的趋势,但差异无显著性意义,病理组织学结果显示中高剂量组各有 1只动物肺脏可见转移瘤.结果表明脐带间充质干细胞不促进MCF-7裸鼠肿瘤的生长,但可促进MCF-7裸鼠转移瘤的形成.
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序列分析及确认HLA新等位基因B*55:46
背景:近几年来,随着中华骨髓库的建立和人类白细胞抗原分型技术的不断发展和提高,中国人类白细胞抗原新等位基因不断被发现.目的:探索中国人的人类白细胞抗原新等位基因.方法:应用PCR-序列特异性寡核苷酸探针基因分型技术,对1名27岁男性汉族造血干细胞志愿捐献者进行HLA基因分型,并应用基于测序的方法分析该基因序列及与相近等位基因序列的差异.结果与结论:PCR-序列特异性寡核苷酸探针结果显示该样本 HLA-B 基因座反应格局出现异常提示;基因测序结果表明其B基因座第3外显子序列与所有已知HLA-B等位基因序列均不一致,在所检测的第2、3外显子中,与序列相近的等位基因B*55:02:01的差异只是在第3外显子发生了nt 412 A→G一个核苷酸替代,导致第138位密码子由AAC→GAC,相应的编码的天冬酰胺改变为天冬氨酸.将其序列提交国际基因数据库及 IMGT/HLA 数据库,证实该 HLA 等位基因为国际上首次发现,被世界卫生组织织人类白细胞抗原因子命名委员会正式命名为HLA-B*55:46 (HM989018).
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丁香酚胚胎毒性评价:应用胚胎干细胞的实验模型
背景:丁香酚在医学及食品领域的应用越来越广泛,其药理学作用也不断被研究和发现.但是,对其毒性的研究尚未建立完整的数据库,特别是发育毒性及致畸性的安全性评价亟需完善.目的:建立胚胎干细胞实验模型的基础上,应用胚胎干细胞实验模型初步评价丁香酚的胚胎毒性.方法:体外培养小鼠成纤维细胞3T3和小鼠胚胎干细胞E14TG2a,MTT法检测阳性对照5-氟尿嘧啶、阴性对照青霉素G和受试物丁香酚对3T3细胞和E14TG2a细胞的细胞毒性,计算3种化合物对E14TG2a细胞和3T3细胞的半数生长抑制浓度值;采用悬滴-悬浮-贴壁法体外诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化,根据浓度-反应曲线计算3种化合物对E14TG2a细胞的半数分化抑制浓度值.利用胚胎毒性预测模型预测丁香酚的胚胎毒性.结果与结论:丁香酚对 3T3 细胞和 E14TG2a 细胞的增殖均有抑制作用,其半数生长抑制浓度值分别为(3.613±0.192)和(1.799±0.131) mg/L.丁香酚对E14TG2a细胞的心肌分化亦有抑制作用,其半数分化抑制浓度值为(3.501±0.158) mg/L.根据胚胎干细胞实验模型预测模型计算得出丁香酚为强胚胎毒性化合物.这为进一步评价丁香酚的安全性提供了研究数据.
