中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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组织工程化气管研究:软骨及血供障碍的突破
背景:气管的损伤及缺损在临床上较为常见,临床上难以行气管的端端吻合,需要植入人工气管或组织工程化气管进行修补缺损及完善其功能.植入后组织工程化气管的再血管化、免疫排斥、感染、纤维瘢痕形成及功能恢复情况是目前的研究重点.目的:认识分析近年来国内外组织工程化气管构建过程中种子细胞、支架材料、软骨生成及血管化的研究进展及影响组织工程化气管生长的因素.方法:第一作者应用计算机检索2000年1月至2014年4月PubMed数据库、中国知网全文数据库及谷歌学术有关组织工程化气管的文章,以“Tissue engineering,Tracheal reconstruction,Trachea substitute,Scaffold revascularization,Seed cells,Transforming growth factor”为英文检索词,“组织工程,气管重建,气管替代物支架材料,再血管化,种子细胞,转化生长因子”为中文检索词.共检索到140余篇相关文献,45篇符合纳入标准.结果与结论:组织工程化气管是利用机体的活体组织或者种子干细胞在体外支架材料上进行扩增繁殖,植入病损气管,修补原气管缺损,或者在原位进行诱导缺损端的增殖分化,从而修补缺损并能达到一定功能的技术方法.组织工程化气管的主要影响因素包括种子干细胞、气管支架材料、软骨生成和促进组织工程化气管再生的血管因素及相关生长因子.
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细菌生物膜对慢性伤口的影响及防治策略
背景:了解细菌生物膜的形成及对伤口愈合的影响机制,防止细菌生物膜对伤口愈合的影响,对于提高慢性伤口的治愈率有重要作用.目的:综述细菌生物膜对慢性伤口的影响机制,以及现有的治疗护理对策.方法:应用计算机检索Springerlink及CNKI数据库2008至2013年发表的文章,检索关键词为“细菌生物膜,慢性伤口感染;bacterial biofilm,Chronic wound infection”.选取与伤口感染、细菌生物膜相关的治疗及护理方面相关的文章.结果与结论:大量研究证实,致病菌或机会致病菌引起的慢性感染常与生物膜形成相关,细菌生物膜形成是导致慢性伤口难以愈合的重要因素之一.生物膜形成机制复杂.目前主要通过规范操作及环境管理、合理使用抗生素、及时清创来预防细菌生物膜的形成.针对细菌生物膜的治疗主要有超声治疗、负压治疗、噬菌体疗法、乳铁蛋白、硝酸镓、乙二胺四乙酸、木糖醇、蜂蜜、中药、高压氧治疗等.
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蛋白质组学相关技术在骨关节炎研究中的应用与进展
背景:蛋白质组学研究已经彻底改革了研究疾病的方式,提供了解开骨关节炎病理生理机制的途径.目的:了解蛋白质组相关技术的研究成果及其在骨关节炎早期诊断、治疗效应和发病机制的分子标志物研究取得的进展.方法:通过中国期刊全文数据库、中国生物医学文献数据库、重庆维普中文科技期刊数据库和万方数据知识服务平台,手工和在线检索已发表的关于蛋白质组学技术和骨关节炎相关的研究.英文文献采用以下数据库检索:MEDLINE数据库,Elsevier:ScienceDirect数据库,BIOSIS Previews数据库.纳入文献为采用严格相关和信息可靠的研究.结果与结论:蛋白质组学技术的成果为骨关节炎早期诊断、治疗效应和发病机制的分子标志物研究取得了一定的进展.研究证实了蛋白质组学在筛选骨关节炎分子标志物的研究中有较大的应用价值,其相对于单一蛋白鉴定具有通量高、速度快的特点,对骨关节炎的诊断和药物靶点鉴定发挥了重要作用.蛋白质组数据库是蛋白质组研究水平的标志和基础.生物信息学的发展已给蛋白质组研究提供了更方便有效的计算机分析软件.
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鹿茸再生及其蛋白质组学研究进展
背景:鹿茸是目前已知的惟一可以周期性再生的哺乳动物器官.这是一种来源于角柄骨膜并基于干细胞的再生过程.鹿茸又以角柄骨膜致敏区的干细胞作为再生基础,鹿茸及角柄骨膜中的蛋白质组,对于揭开鹿茸所具有的独特生物学活性以及再生机制具有重要的意义.目的:综述鹿茸再生和目前鹿茸蛋白质组学研究的两种主要途径与研究现状等.方法:应用计算机在PubMed数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/)与CNKI数据库(http://www.cnki.net/)中进行检索.在PubMed数据库中的检索词为“deer antler,antler regeneration,antlerproteome”;在CNKI数据库中的检索词为“鹿茸再生,鹿茸蛋白质组”.将涉及到鹿茸再生组织学与形态学,鹿茸干细胞以及鹿茸蛋白质组学研究相关的文章找出来,内容无关与重复的文章排除掉,后纳入43条文献进行综述.结果与结论:在PubMed与CNKI数据库中通过初检与筛选共找到了43篇文献.鹿茸是能够周期性再生的,并且通过组织学等相关实验表明这种再生是来源于角柄骨膜干细胞的,而角柄骨膜分为致敏区与休眠区,两者是通过与皮肤接触的紧密程度来划分的.正是致敏区骨膜与其所覆盖皮肤的相互作用才终促使角柄骨膜干细胞发育成完整的鹿茸组织.同时,鹿茸及角柄骨膜中的蛋白质组在这些过程中起着重要作用.通过还原蛋白质谱的完整情况并进一步通过基因工程等后续手段来研究未知蛋白的功能对于了解鹿茸具有的独特生物学活性与再生作用奠定重要基础,同时对于相关蛋白质在哺乳动物器官再生中所具有的调节作用提供参考.
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牙周组织工程研究进展:问题与应用
背景:组织工程技术的出现为实现牙周组织完全再生提供了全新的思路和方法.目的:就近年来牙周组织工程种子细胞、生长因子和支架材料三大基本要素的新研究及相关进展进行简要综述.方法:由第一作者检索PubMed数据库关于牙周组织工程研究方面的文章,检索词为“periodontal tissue englneenng”,限定文献语言种类为English;同时检索CBM数据库2009年1月至2013年12月相关牙周组织工程方面的文献,检索词为“牙周组织工程”.排除重复性研究,终纳入30篇文献进行综述.结果与结论:研究证实牙周膜干细胞在牙周组织再生领域是具有良好的应用前景,骨髓基质干细胞是修复牙周组织缺损的一种较为理想的种子细胞,牙囊细胞具有多向分化潜能,可以形成牙周组织.多种生物活性分子已被证实有较强的牙周组织修复功能,与牙周组织工程相关的主要生长因子有血小板衍化生长因子、骨形态发生蛋白、转化生长因子β、胰岛素样生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、釉基质衍生物等.目前应用于牙周组织工程的支架材料主要分为天然生物材料和人工合成材料.如何选择佳的种子细胞、细胞因子以及支架材料的复合物,其研究还需进一步完善.
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Micro CT定量研究去卵巢山羊胫骨平台松质骨微结构特点
背景:骨质疏松时胫骨平台松质骨微结构发生显著变化,Micro CT是一种能够全面、立体、无创测量骨微结构、评估骨质量及预测骨强度的新兴技术,近年来在骨质疏松研究领域得到日益广泛的应用.目的:应用Micro CT技术定量研究去卵巢山羊胫骨平台松质骨的微结构特点.方法:将12只2.5岁健康雌性山羊随机分为去卵巢组和假手术组,去卵巢组行卵巢切除,假手术组切除等量腹腔脂肪组织,每组各6只.两组实验动物分别在术后2,4年处死,分离并截取左侧胫骨平台,行Micro CT扫描,分别测量胫骨平台骨骺松质骨和干骺端松质骨微结构参数.结果与结论:术后2和4年,与假手术组相比,去卵巢组胫骨平台骨骺和干骺松质骨微观结构参数-骨体积分数、骨小梁数量和骨小梁厚度均降低(P＜0.05),骨小梁分离度均升高(P＜0.05),基本呈时间依赖性变化.仅在术后4年,去卵巢组骨骺松质骨微观结构参数骨小梁厚度与假手术组相比差异无显著性意义(P＞0.05),其骨小梁分离度、骨小梁厚度与去卵巢组术后2年相比差异无显著性意义(P＞0.05).无论术后2或4年,与假手术组相比,去卵巢组干骺端松质骨微结构参数的改变均比骨骺松质骨明显.结果证实,山羊胫骨平台骨骺松质骨微结构参数与干骺端松质骨具有一定的差异;骨质疏松时山羊胫骨平台松质骨微结构改变呈现出区域性特点,干骺端松质骨较骨骺松质骨微结构退变更为显著.
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脂肪干细胞三维生长骨组织工程复合体的构建
背景:组织工程支架是模仿细胞赖以生长代谢的细胞外基质而构建的支架和环境,其选择、制备以及种子细胞的选择是骨组织工程领域中的一项十分重要的课题.目的:利用几丁质凝胶/异种骨构建脂肪干细胞三维生长环境,并对其相容性进行研究.方法:从出生8d新西兰大白兔腹股沟获取脂肪组织,提取脂肪干细胞.脂肪干细胞经过体外成骨诱导分化后,种植于几丁质凝胶/异种骨,构建新型骨组织工程复合体,并将其设为细胞/几丁质凝胶/异种骨组;将脂肪干细胞直接种植于异种骨,构成脂肪干细胞/异种骨复合体作为细胞/异种骨组,单独异种骨为空白组.体外诱导2周后进行电镜扫描,观察细胞与支架的复合情况.结果与结论:镜扫描观察显示几丁质凝胶充分渗透于支架的空隙内,形成一个细胞的三维生长环境,使原本只能在材料上贴壁生长的脂肪干细胞能够在三维的环境中生长,为细胞外基质的再生提供足够的空间.几丁质凝胶/异种骨悬浮诱导后的脂肪干细胞,承载了更多的细胞,减少了细胞在载体中的流失,是一种较好的骨组织工程载体.
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骨代谢指标在骨质疏松患者椎体变形中的意义
背景:骨质疏松常导致胸腰段椎体变形,鉴于骨代谢指标可灵敏的反映个体骨转换过程,结合骨密度可减少漏诊,预测骨折风险,提前干预可降低重度椎体畸形的发生率.目的:分析骨代谢指标在骨质疏松患者椎体变形中的意义.方法:将157例老年人骨质疏松患者按是否存在椎体变形分为椎体变形组和椎体形态正常组,椎体变形组中根据骨密度的不同分为骨密度正常和骨密度减低亚组,进行骨密度和总Ⅰ型胶原氨基端前肽、β胶原特殊序列、N端骨钙素骨代谢指标进行检测,比较了2组间及椎体变形组内骨密度正常和骨密度减低亚组间各骨代谢指标的差异.结果与结论:椎体变形组总Ⅰ型胶原氨基端前肽、β胶原特殊序列、N端骨钙素水平较椎体形态正常组增高(P＜0.05);骨密度正常亚组总Ⅰ型胶原氨基端前肽与β胶原特殊序列水平较骨密度减低亚组增高(P＜0.05),N端骨钙素在2亚组间差异无显著性意义(P＞0.05).结果表明骨质疏松患者中椎体变形者总Ⅰ型胶原氨基端前肽、β胶原特殊序列、N端骨钙素的骨代谢水平高于无椎体变形者,在存在椎体变形的患者中,骨密度正常者总Ⅰ型胶原氨基端前肽、β胶原特殊序列的骨代谢水平高于骨密度降低者,骨代谢水平增高结合骨密度及椎体变形可用于骨质疏松的诊断和椎体脆性骨折的预测.
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反复力竭运动大鼠心脏窦房结细胞T-型钙离子通道的变化
背景:目前,运动医学领域关于运动对窦房结细胞T-型钙离子通道(T-Ca2+通道)的影响鲜见报道.目的:分析2周力竭跑台运动对大鼠心脏窦房结T-Ca2+通道亚基Cav3.1 mRNA表达及通道电流密度的影响.方法:健康雄性SD大鼠50只共分5组.对照组10只大鼠不进行任何运动训练,一次力竭组20只大鼠在正常饲养2周后,进行一次速度25 m/min,坡度为0.跑台训练至力竭;反复力竭组20只大鼠运动方式及强度同一次力竭组,跑台训练1次/d,每周运动6d,休息ld,共训练2周.运动组大鼠分别于运动后0h及24 h(各10只)取材,应用实时荧光定量PCR技术测定T-Ca2+通道亚基Cav3.1 mRNA表达变化,应用细胞急性分离及全细胞膜片钳技术测定通道电流密度变化,以观察跑台训练运动对大鼠心脏窦房结细胞膜上T-Ca2+通道的影响.结果与结论:与对照组相比,反复力竭运动0h和反复力竭运动24h组Cav3.1 mRNA表达明显下降(P＜0.01).反复力竭运动0h和反复力竭运动24 h组T-Ca2+通道/Ca,T电流密度明显低于对照组及一次力竭组(P＜ 0.01).结果表明,2周反复力竭跑台训练可引起窦房结细胞膜T-Ca2+通道亚基Cav3.1 mRNA表达及/Ca,T电流密度减少,这可能引起窦房结细胞舒张期自动除极及自律活动减慢,提示反复力竭运动对于T-Ca2+通道的影响可能成为运动引发窦房结功能障碍及运动性心律失常的离子通道机制之一.
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基质结构蛋白在脑血管畸形中的表达差异
背景:有研究表明脑血管畸形中存在管壁结构基质蛋白的表达差异,但血管畸形间结构基质蛋白的差异及结构蛋白差异与畸形血管管壁异形关系少有报道.目的:观察基质结构蛋白在脑血管畸形中的差异性表达.方法:对50例脑血管畸形手术标本和34例正常颞浅动脉标本进行苏木精-伊红染色,并应用美国Santa Cruz公司生产单/多克隆抗体对4种基质结构蛋白-Ⅳ型胶原蛋白、a-血管平滑肌蛋白、层粘连蛋白和纤维连接蛋白免疫组织化学染色.结果与结论:苏木精-伊红染色显示,脑血管畸形壁结构与正常血管相比呈现明显紊乱和构成异形性;且脑血管畸形中,脑动静脉畸形与海绵状血管瘤结构存在明显差异.免疫组织化学染色显示:正常颞浅动脉和畸形血管中Ⅳ型胶原和a-血管平滑肌蛋白全部呈阳性表达且无显著性差异,但结构排列差异明显;正常颞浅动脉与畸形血管层粘连蛋白和纤维连接蛋白表达阳性率差异有显著性意义(P＜0.05),正常血管表达更多层粘连蛋白,畸形血管表达更多纤维连接蛋白;畸形血管中脑动静脉畸形和海绵状血管瘤间层粘连蛋白和纤维连接蛋白的阳性率表达差异有显著性意义(P＜0.05),脑动静脉畸形血管表达更多层粘连蛋白,海绵状血管瘤血管表达更多纤维连接蛋白.结果证实:与正常血管相比,脑血管畸形者管壁结构存在明显异形性,结构蛋白Ⅳ型胶原和a-血管平滑肌蛋白结构明显紊乱,且低表达层粘连蛋白而高表达纤维连接蛋白,这种差异可能是导致脑血管壁结构异常的原因.
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比较4种不同复合固定液对小鼠视网膜的固定效果
背景:在各种实验与临床病理研究中,需要一种能够较好固定视网膜并且避免固定液性视网膜脱离的眼球固定液.目的:比较4种不同复合固定液对小鼠视网膜的固定效果.方法:40只昆明小鼠处死后,立即摘除眼球,并将其随机分为4组,每组20只眼球.分别浸泡在固定液1(多聚甲醛4g,加入0.1 mol/L磷酸缓冲液80 mL,加热至60℃左右,持续搅拌,使粉末完全溶解,加少许1 mol/L NaOH澄清.待冷却后,加冰醋酸5 mL、丙酮10 mL,用0.1 mol/L磷酸缓冲液补足至100 mL),固定液2(5％重铬酸钾40 mL、体积分数为10％甲醛10 mL、冰醋酸10 mL、三氯醋酸10 mL、10％醋酸钠10 mL);固定液3(冰醋酸10 mL、体积分数为40％甲醛溶液20 mL、生理盐水70 mL、体积分数为75％乙醇10 mL混合);固定液4(无水乙醇60 mL、体积分数为40％甲醛溶液10 mL、冰醋酸10mL、氯仿20 mL).固定24 h进行常规脱水、石蜡包埋固定、苏木精-伊红染色.结果与结论:经过固定液4固定的视网膜组织可以清晰看到视网膜各层,而且罕见固定液性视网膜脱离.由于固定液4中加入能与乙醇、冰醋酸互溶的氯仿,有效地促进了固定液的眼球渗透,故降低了固定液性视网膜脱离,效果比其他几种固定液好.
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突触蛋白质组学分析中双向电泳技术的优化
背景:双向电泳是突触蛋白质组学分析中流行通用的蛋白质分离方法之一.但文献中突触蛋白双向电泳对线性固相pH梯度(immobilized pH gradients,IPG)胶条和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electroph-oresis,SDS-PAGE)浓度的选择很多,尚未见统一标准.目的:对突触蛋白双向电泳的IPG胶条和SDS-PAGE凝胶浓度进行优化,以获得高质量的突触蛋白双向电泳图谱.方法:以大鼠海马突触蛋白为试材,比较pH 5.0-8.0与pH 3.0-10.0线性IPG胶条,线性与非线性pH 3.0-10.0IPG胶条,以及单一浓度10％与12％ SDS-PAGE对双向电泳的影响.此外,还使用计算机检索了1989至2013年中国知网及PubMed数据库中关于突触蛋白双向电泳的文献,对文献中选择的IPG胶条、SDS-PAGE凝胶浓度进行了统计和评价,并总结了突触蛋白在不同pH值IPG胶条和不同浓度SDS-PAGE凝胶的双向电泳图谱上的分布特征.结果与结论:结果表明,使用pH 3.0-10.0的非线性胶条及单一浓度10％ SDS-PAGE凝胶进行突触蛋白双向电泳较为适宜,电泳图谱质量好,实验操作便利;同时还推荐合并使用pH 4.0-7.0和pH 6.0-11.0的IPG胶条,以及线性梯度浓度9％-16％ SDS-PAGE凝胶,也适用于突触蛋白双向电泳分析.
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骨形态发生蛋白7通过PI3K/Akt通路可抑制人髓核细胞的凋亡
背景:骨形态发生蛋白7可促进人髓核细胞的细胞外基质合成,减缓椎间盘退变.近年来,有学者提出其可能通过对抗髓核细胞凋亡从而发挥上述作用,但其进一步的分子机制一直未被详细阐明.目的:观察骨形态发生蛋白7对无血清诱导下发生凋亡的人髓核细胞产生的作用及其对PI3K/Akt通路的影响,分析并探讨骨形态发生蛋白7抑制人髓核细胞凋亡的分子机制.方法:通过改良Pfirrmann分级及相关条件选取12例患者获取椎间盘组织,采用酶消化法获取人髓核细胞后分组实验,以含体积分数15％胎牛血清的培养基正常培养的髓核细胞设为空白组;使用无血清培养基培养48 h诱导凋亡作为阳性对照组;在无血清条件下,通过加入不同剂量的骨形态发生蛋白7以及同时添加PI3K/Akt通路拮抗剂LY294002形成处理组和拮抗组.使用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;免疫荧光观察p-Akt表达;蛋白印迹法检测Akt,p-Akt,BAD和Caspase 9等通路蛋白的表达变化.结果与结论:无血清凋亡诱导下,流式细胞术结果显示,随着骨形态发生蛋白7处理浓度上升,髓核细胞凋亡率明显下降,加入LY294002共同作用后细胞凋亡率再次升高(P＜0.05).p-Akt免疫荧光和蛋白印迹法检测结果进一步表明,与凋亡阳性对照组相比,加入骨形态发生蛋白7的实验组中,p-Akt表达明显增加,其下游凋亡相关蛋白BAD、Caspase 9蛋白表达减少(P＜0.05),而在同时加入Akt通路拮抗剂LY294002后,p-Akt蛋白表达下降而凋亡相关蛋白的表达又恢复到相对较高的水平(P＜0.05).结果证明,骨形态发生蛋白7在无血清诱导的人类髓核细胞凋亡中通过激活PI3K/Akt通路,拮抗了BAD-Caspase 9相关的细胞凋亡过程,抑制了髓核细胞的退变.
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半月板部分切除后胫股关节接触面积及生物力学变化
背景:生物力学实验有助于阐明为何半月板切除后会导致进行性的软骨病变.关节软骨退行性变的原因复杂,包括生物学、力学以及结构通路等.目的:研究内侧半月板后角撕裂行半月板部分切除后胫股关节接触面积、压力及半月板应变的变化.方法:取8具新鲜冷冻的混合品种的狗后肢膝关节标本,序贯进行以下半月板切除操作,采取百分比来计算每一样本半月板切除的范围:①内30％的内侧半月板后角撕裂.②内75％的内侧半月板后角撕裂.③内侧半月板后角完全切除.用双轴液压伺服生物材料测试实验机(MTS 858)进行生物力学测试.统计学比较采用SPSS 18.0软件进行组间比较.结果与结论:半月板组织切除越多,内侧和外侧胫股关节接触面积下降越明显,内侧半月板后角切除75％和全切后,内侧接触面积差异无显著性意义(P＞ 0.05);内侧半月板后角完全切除之后,外侧接触面积显著减少.内侧半月板后角切除75％和全切之后,内侧间室的接触压力显著升高,与对照组相比差异有显著性意义(P＜0.05),内侧半月板后角完全切除后外侧间室接触压力显著降低(P＜0.05).因为半月板组织的切除,其相应的应变下降,但是各组间差异无显著性意义.说明半月板切除多少决定术后半月板的生物力学功能;对于半月板撕裂,尤其是“红区”损伤,应尽量选择半月板缝合术,减少半月板切除范围,以避免或者延缓膝关节的退行性变.
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低功率激光修复末端病大鼠跟腱早期愈合中转化生长因子β1的表达
背景:低功率激光是一种治疗性激光,其在运动医学领域内应用价值潜力很大.目的:观察低功率激光照射后,末端病大鼠跟腱转化生长因子β1表达的变化,探讨低功率激光修复末端病大鼠跟腱的机制.方法:4周龄雄性Wistar大鼠96只,随机分为空白对照组(n=8)、造模组(n=88),造模组又分为造模对照组(n=48)和不同时间的激光照射组:激光照射1,2,3,7,14 d组(n=8).造模组大鼠进行5周的电刺激跳跃之后,对激光照射组的大鼠跟腱按要求进行激光照射.用实时定量PCR方法测定跟腱内转化生长因子[1 mRNA的表达;双抗体夹心ABC-ELISA法测试转化生长因子β1的蛋白含量.结果与结论:造模即刻,与空白对照组比较,造模对照组大鼠跟腱转化生长因子β1明显升高(P＜0.05).随着时间的推移,转化生长因子β1逐渐下降,与激光照射组比较,造模对照组大鼠跟腱转化生长因子β1在第7,14天时明显下降(P＜0.05).低功率激光对末端病大鼠跟腱早期愈合有一定的促进作用:可延缓末端病大鼠跟腱转化生长因子β1的浓度下降,使转化生长因子β1在7-14d内保持较高水平,对细胞外基质起着重要的调节作用.
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神经生长因子可促进骨折愈合过程中血管内皮生长因子的表达
背景:骨折愈合过程十分复杂,需要多种细胞因子的参与.目前研究较多的细胞因子有骨形态发生蛋白、成纤维细胞生长因子、转化生长因子β、血管内皮细胞生长因子和胰岛素样生长因子,但神经生长因子在骨折愈合过程中对血管内皮细胞生长因子的作用尚不明确.目的:观察神经生长因子对兔骨折愈合中血管内皮生长因子表达的影响.方法:实验建立标准兔桡骨骨折模型,分别用神经生长因子、神经生长因子单克隆抗体和生理盐水进行干预,即应用神经生长因子组、拮抗神经生长因子组和对照组.结果与结论:损伤后24,48 h和损伤后1,3,6,8周Western blot检测骨折端组织血管内皮生长因子蛋白的表达分析结果显示,3组各时间点血管内皮生长因子表达的关系为:应用神经生长因子组＞对照组＞拮抗神经生长因子组(P＜0.05).结果证实,在骨折愈合过程当中,应用神经生长因子可以促进血管内皮生长因子表达.
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人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体的构建与鉴定
背景:人向血病抑制因子(LIF)和血管内皮生长因子165(VEGF165)对脊髓损伤后神经元存活有重要作用.病毒载体临床应用存在安全隐患,利用真核表达载体表达蛋白为解决安全性问题提供了一种方法.目标:构建双基因共表达载体plRES2-LIF-VEGF165并对其进行鉴定.方法:是采用直接PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取人白血病抑制因子基因,然后将人白血病抑制因子的cDNA片段插入到plRES2-EGFP多克隆位点构建成为plRES2-LIF-EGFP.人血管内皮生长因子165 cDNA片段是通过双PCR的方法从plRES2-VEGF165-EGFP质粒中获取,接着将血管内皮生长因子165 cDNA片段以替换EGFP的方式插入plRES2-LIF-EGFP中,后构建成为含有IRES(即内部核糖体进入位点)的plRES2-LIF-VEGF165双基因共表达载体.通过双酶切和DNA测序方法对其鉴定,将重组的双基因共表达载体感染HEK293细胞,利用RT-PCR与Western-blot方法检测双基因的表达.结果与结论:DNA测序显示,提取的人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165均与基因库报道序列一致,片段大小分别为609 bp和576 bp.构建的plRES2-LIF-VEGF165双基因共表达载体经EcoRI/BamHI切出LIF条带,经BamHI/Notl双酶切后切出IRES-VEGF165片段,经EcoRI/ Notl双酶切后切出LIF-IRES-VEGF165片段.RT-PCR与Western-blot方法检测显示,此载体转染后,HEK293细胞均能表达人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白.结果证实,实验成功构建了人白血病抑制因子和血管内皮生长因子165双基因真核表达载体.
