中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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骨髓间充质干细胞在多种疾病治疗中的应用进展
背景:骨髓间充质干细胞是来源于中胚层的非造血干细胞,主要取材于骨髓,其有着较强的自我更新能力、多向分化能力以及低免疫原性,易于接受外源基因的导入,是近些年研究应用的热点.目的:综述骨髓间充质干细胞在各疾病中的研究与应用进展.方法:由第一作者检索2011至2016年PubMed数据库(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/PubMed)及中国生物医学文献数据库(http://www.sinomed.ac.cn/zh/),中文检索词为"骨髓间充质干细胞、治疗",英文检索词为"bone marrow mesenchymal stem cels,therapy".排除重复性研究或Meta分析类文章,共保留其中的49篇文献进行归纳总结.结果与结论:骨髓间充质干细胞在呼吸系统疾病、心血管疾病、泌尿系统疾病、神经系统疾病、肝脏疾病、糖尿病、血液系统疾病、自身免疫性疾病和移植物抗宿主病、运动系统疾病等方面均有了新的研究与应用进展,但其应用仍有致瘤性风险.随着对其深入研究,骨髓间充质干细胞的致瘤等相关问题将逐步得到解决,从而更好地应用于临床.
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表达嵌合抗原受体修饰T细胞治疗血液系统恶性肿瘤的新研究与进展
背景:近几年来,表达嵌合抗原受体修饰的T细胞(CAR-T细胞)疗法在血液系统恶性肿瘤的治疗中取得了很好的疗效.目的:综述CAR-T技术的概况、抗肿瘤机制、在血液系统恶性肿瘤治疗中的进展及其安全性和应对策略.方法:应用计算机检索2010年1月至2016年1月PubMed数据库、中国期刊全文数据库、万方数据库中有关CAR-T的文章,中文检索词为"嵌合抗原受体",英文检索词为"CAR-T".结果与结论:CAR-T细胞抗肿瘤的作用原理主要为:①通过MHC下调抵抗免疫逃逸;②产生白细胞介素6、白细胞介素10等细胞因子间接影响肿瘤细胞的生长;③肿瘤微环境状态的改变抑制肿瘤的生长.CAR-T近几年在治疗血液系统肿瘤方面取得了突发猛进的发展.目前针对B细胞淋巴瘤的研究多为抗CD19 CAR-T细胞,对急性粒细胞白血病和急性淋巴细胞白血病临床方面CAR-T均具有一定疗效,但其安全性和有效性都尚待研究.
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骨髓间充质干细胞修复辐射造血损伤的机制
背景:骨髓间充质干细胞与造血干细胞共移植,可提高辐射损伤的生存率.目的:对骨髓间充质干细胞在辐射损伤后造血重建及免疫调节方面的研究机制作一综述.方法:以"mesenchymalstem cels,radiation,radiation injury,hematopoietic stem cels,hematopoietic reconstitution,immunomodulatory"为关键词,应用计算机检索Web of science数据库2005到2016年的文献,选择性纳入与文章主题密切相关的文献.结果与结论:骨髓间充质干细胞能通过自噬及快速启动HR/NHEJ途径修复DNA断裂双键,通过细胞间相互作用、旁分泌作用保护与支持造血干细胞,通过抑制炎症与免疫反应维持造血微环境稳态,有效修复电离辐射导致的造血损伤.所以间充质干细胞可能有资格作为辐射导致的造血损伤的有效治疗手段.
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干细胞移植治疗炎症性肠病
背景:理论上,干细胞可以重建并调节人体免疫系统,而且干细胞具备定向分化功能,从而有望用于治疗炎症性肠病.目的:综述不同类型干细胞干预炎症性肠病的研究进展.方法:以"干细胞,造血干细胞,间充质干细胞,炎症性肠病,克罗恩病,溃疡性结肠炎"为中文检索词,以"stem cels transplantation,cel therapy,inflammatory bowel diseases,ulcerative colitis,Crohn's disease"为英文检索词,在中国知网(CNKI)期刊全文数据库、PubMed数据库以及FMJS数据库检索2002年1月至今有关干细胞移植治疗炎症性肠病的文献.终纳入49篇文献进行综述.结果与结论:胚胎干细胞与成体干细胞对炎症性肠病均有一定的治疗作用,但具体哪一种类型的干细胞安全、有效以及此种细胞的佳剂量与移植途径等,仍需要开展大量的研究.
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前交叉韧带损伤与干细胞的治疗
背景:有研究报道,前交叉韧带有着在非手术情况下康复的潜力,韧带的某些与细胞修复有关的细胞因子以及干细胞或祖细胞等生物因素影响着前交叉韧带的愈合.目的:综述间充质干细胞与前交叉韧带损伤治愈联系的相关文献,了解终分化为前交叉韧带的干细胞/祖细胞的潜力,为利用间充质干细胞治疗前交叉韧带损伤提供依据.方法:第一作者检索PubMed数据库的相关文献.检索词为"ACL regeneration stem/progenitor cels mesenchymal stem cels".查阅近年来相关文献,包括综述、临床研究和基础研究,终纳入45文献.结果与结论:近年来,对细胞治疗前交叉韧带损伤以及肌肉骨骼再生有了大量的研究,但是干细胞的使用还远远达不到日常临床治疗的需要,适宜前交叉韧带再生的干细胞的来源以及它们合适的注入点仍有待确定.尽管采用间充质干细胞治疗前交叉韧带损伤成功的例子已经在动物模型中报告,但仍然不清楚是否干细胞的营养因子可以改善再生或这些细胞自身可以形成新的组织.
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乳腺癌干细胞近年的主要研究进展
背景:随着对乳腺癌发生、发展机制的不断深入研究,乳腺癌干细胞日益受到重视.目的:对乳腺癌干细胞的特征、调控乳腺癌干细胞的相关信号通路以及乳腺癌干细胞与上皮间质转化、乳腺癌转移、肿瘤微环境、治疗抵抗等方面的主要研究进展做一综述.方法:由第一作者以"Breast cancer,Stem cels,Signaling pathway,Epithelial mesenchymal transition,Tumor microenvironment"为关键词,检索PubMed等数据库从2001至2017年的相关文献,排除与文章研究目的无关及重复性的文章,纳入符合标准的60篇文献进行综述.结果与结论:肿瘤干细胞学说的提出解释了肿瘤转移和复发的根本原因,为肿瘤治疗提供一个新的研究思路,随着对乳腺癌干细胞的致病分子机制、特性和相关分子调控机制的深入研究,明确了乳腺癌干细胞在乳腺癌发生、发展中所扮演的角色,对靶向乳腺癌干细胞的肿瘤治疗方法的研究具有重要指导意义.
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骨髓间充质干细胞移植联合生化止血方治疗产后子宫复旧不全
背景:经查阅大量文献发现,骨髓间充质干细胞移植能促进损伤子宫的修复,生化止血方具有活血化瘀,调经止痛的功效.目的:探讨骨髓间充质干细胞移植联合生化止血方治疗子宫复旧不全的作用及其机制.方法:40只雌性SD大鼠建立子宫复旧不全模型,随机分为4组(n=10):对照组、生化止血方组、骨髓间充质干细胞组、骨髓间充质干细胞+生化止血方组(联合组).对照组不作任何处理,骨髓间充质干细胞组与联合组在造模成功后的第1天,将细胞浓度为1×107 L-1的骨髓间充质干细胞溶液1 mL局部注射至子宫肌层内;生化止血方组切开大鼠子宫后不做任何处理,生理盐水冲洗后关腹;生化止血方组与联合组分别在造模成功后的第1天开始灌喂生化止血方,灌喂体积为8 mL/(kg?d),每日灌胃1次,连续7 d,进行相关指标检测.结果与结论:①治疗后,联合组雌鼠体质量、子宫湿质量、子宫指数均下降,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05),生化止血方组雌鼠体质量、子宫湿质量下降,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05);②治疗后,生化止血方组白细胞介素1表达水平、血清肿瘤坏死因子α水平均下降,血清血栓素B2水平上升,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05);骨髓间充质干细胞移植组白细胞介素1表达水平、血清肿瘤坏死因子α水平均下降,血管内皮生长因子水平上升,与对照组比较,差异有显著性意义(P<0.05),联合组白细胞介素1表达水平,血清肿瘤坏死因子α水平下降,血清血栓素B2、血管内皮生长因子水平上升,与对照组比较,差异有非常显著性意义(P<0.01);③结果表明,骨髓间充质干细胞移植联合生化止血方能够降低产后雌鼠体质量、子宫湿质量和子宫指数,促进子宫复旧,这种机制可能是通过降低白细胞介素1表达水平、血清肿瘤坏死因子α水平,同时升高血栓素B2、血管内皮生长因子水平实现的.
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丹酚酸B促进内皮祖细胞动员和黏附的作用
背景:动脉粥样硬化、高血压和糖尿病等多种疾病都伴有血管内皮损伤,而体循环中的内皮祖细胞可以对受损内皮细胞进行有效的修复.目的:研究丹酚酸B在小鼠体内对血管内皮祖细胞动员和黏附的作用.方法:选取30只C57BL/6小鼠,随机分为手术组和假手术组,每组15只,手术组小鼠颈总动脉损伤后按照给药不同分为对照亚组、丹酚酸B亚组和血管内皮生长因子亚组,每组5只.对照亚组给予5%葡萄糖注射液,丹酚酸B亚组注射100 g/L丹酚酸B,血管内皮生长因子亚组注射10μmol/L血管内皮生长因子,给药剂量均为10 mL/kg.假手术组并未进行颈总动脉损伤,分组和给药方式与手术组相同;连续给药7 d后,分离小鼠外周血中的血管内皮祖细胞,并通过流动腔实验检测内皮祖细胞黏附性;酶联免疫吸附法检测血清基质细胞衍生因子1和白细胞介素8水平.结果与结论:①手术组中内皮祖细胞占有核细胞的比例明显增加,与假手术组相比差异有显著性意义(P<0.05);②给药7 d后,手术组中丹酚酸B亚组和血管内皮生长因子亚组内皮祖细胞占有核细胞的比例明显高于对照亚组,差异有显著性意义(P<0.05);假手术组中血管内皮生长因子亚组内皮祖细胞占有核细胞的比例明显高于对照亚组和丹酚酸B亚组,差异有显著性意义(P<0.05);③流动腔实验结果显示丹酚酸B组内皮祖细胞明显高于对照亚组,差异有显著性意义(P<0.05);④在手术组中,丹酚酸B亚组与血管内皮生长因子亚组血清中基质细胞衍生因子1和白细胞介素8水平明显高于对照亚组,差异有显著性意义(P<0.05);在假手术组中,血管内皮生长因子亚组血清中基质细胞衍生因子1和白细胞介素8水平明显高于对照亚组,差异有显著性意义(P<0.05);⑤结果表明,丹酚酸B可以在体内增加内皮祖细胞骨髓动员的效率,帮助内皮祖细胞黏附于胶原表面,同时还可以上调基质细胞衍生因子1和白细胞介素8细胞活性因子水平.
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痰热清联合人羊膜间充质干细胞移植对输血相关急性肺损伤的保护
背景:随着细胞技术的提高,使得干细胞移植研究延伸到包括输血相关急性肺损伤在内的各个领域.目的:探讨痰热清注射液联合人羊膜间充质干细胞移植对输血相关急性肺损伤小鼠的保护作用及机制.方法:选取80只BALB/C雄性小鼠,随机分为对照组、模型组、痰热清注射液组、人羊膜间充质干细胞移植组及联合治疗组.除对照组外,其他4组制备输血相关急性肺损伤模型.经尾静脉注入痰热清注射液和人羊膜间充质干细胞悬液干预24 h后,镜下观察各组小鼠肺组织病理形态,计算肺组织湿干质量比,ELISA测定各组小鼠支气管肺泡灌洗液中白细胞介素10、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平,RT-PCR、Western blot检测肺损伤小鼠肺组织KGF-1基因和蛋白表达,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况.结果与结论:①模型组小鼠肺组织出现肺泡间隔增厚、肺泡内纤维蛋白浸润、肺泡内出血、支气管壁增厚等病理变化,肺组织湿干质量比增高,人羊膜间充质干细胞移植组和痰热清注射液组以上病理变化较模型组略轻,肺组织湿干质量比低于模型组(P<0.05),联合治疗组肺组织湿干质量比明显低于模型组(P<0.01);②人羊膜间充质干细胞移植组和痰热清注射液组小鼠肺泡灌洗液中白细胞介素10、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α水平均低于模型组(P<0.05);联合治疗组上述各因子水平明显低于模型组(P<0.01),仍高于正常对照组(P<0.05);③联合治疗组KGF-1基因和蛋白的表达高于人羊膜间充质干细胞移植组和痰热清注射液组(P<0.05),人羊膜间充质干细胞移植组和痰热清注射液组高于模型组(P<0.05);④联合治疗组凋亡细胞数低于人羊膜间充质干细胞移植组和痰热清注射液组,人羊膜间充质干细胞移植组和痰热清注射液组低于模型组;⑤结果表明,痰热清注射液联合人羊膜间充质干细胞移植能提高输血相关急性肺损伤小鼠肺组织中KGF-1的表达,减轻肺部炎症反应及组织病理学损伤程度,减少肺组织细胞凋亡,对肺损伤具有保护作用.
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肿瘤坏死因子α拮抗剂联合酪氨酸激酶C基因修饰神经干细胞移植治疗脊髓损伤
背景:脊髓损伤在控制损伤后炎症反应的同时联合神经干细胞移植,是否能够提高脊髓损伤的治疗效果,目前尚不明确.目的:实验旨在检测早期应用肿瘤坏死因子α拮抗剂Etanercept联合酪氨酸激酶C基因修饰移植治疗后大鼠脊髓组织修复,髓鞘再生和神经轴突再生,运动功能恢复情况及其可能机制.方法:利用慢病毒转染技术构建酪氨酸激酶C过表达的神经干细胞,制备大鼠脊髓横断损伤模型,采用肿瘤坏死因子α拮抗剂Etanercept联合酪氨酸激酶C基因修饰神经干细胞移植.利用尼氏染色、免疫荧光及免疫印迹等方法测定损伤后神经元数目和神经再生情况;利用BBB功能学评分和诱发电位来检测大鼠运动功能;利用电镜检测和甲苯胺蓝染色来检测治疗后各组髓鞘再生情况.结果与结论:损伤后28 d,与其他组相比,Etanercept联合酪氨酸激酶C-神经干细胞移植组损伤脊髓尾端处有更多前角运动神经元存活(P<0.05),具备髓鞘包绕的轴突数量增高(P<0.05),损伤后运动功能评分相对更高(P<0.05),运动诱发电位的振幅恢复更大(P<0.05),潜伏期相对更短(P<0.05).结果证实,大鼠脊髓损伤后早期应用肿瘤坏死因子α拮抗剂联合酪氨酸激酶C-神经干细胞移植,可有效促进大鼠神经元轴突及髓鞘再生,进而促进运动功能恢复.
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神经干细胞神经分化示踪中GFAP启动子驱动荧光报告系统的价值
背景:神经干细胞作为近年来神经科学研究的热点,在神经系统损伤治疗方面具有广阔的应用前景,但如何获取大量纯化且特征均一的终末神经细胞是这一领域的难点.利用细胞内荧光报告系统示踪神经干细胞分化的过程,并获得纯化的单一类型终末神经细胞为这一难点的解决提供了可行的方案.目的:探讨携带星形胶质细胞特异标志物GFAP基因的启动子驱动的荧光报告系统在神经干细胞神经分化示踪中的价值.方法:原代分离小鼠胚胎的脑部皮质,经机械消化和吹打后悬浮培养,免疫荧光染色检测其特异标志物Nestin的表达以确定神经干细胞.再将携带pLV/Final-neo-GFAP(promoter)-dTomato载体的慢病毒感染小鼠神经干细胞,遗传霉素G418筛选14 d后获得纯化神经干细胞,然后诱导其向星形胶质细胞分化,显微镜观察细胞红色荧光(dTomato)的变化.诱导第13天采用细胞免疫荧光技术对表达红色荧光的细胞行GFAP抗体复染.结果与结论:①原代分离获得的小鼠神经干细胞呈Nestin表达阳性;②慢病毒感染并筛选14 d后得到具有G418抗性的纯化神经干细胞;③该细胞经神经诱导分化后,显微镜下观察到红色荧光大量表达,且GFAP复染与红色荧光具有非常高的一致性;④实验成功地获得了体外表达neo-GFAP(promoter)-dTomato载体的小鼠神经干细胞,该细胞可以体外示踪GFAP基因的特异表达,为神经干细胞的定向神经分化机制、细胞移植及组织工程产品开发等研究提供了有力的工具.
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脉冲磁场对颅脑损伤脑组织中内源性神经干细胞因子的影响
背景:有研究指出,脉冲电磁在促进及诱导脑梗死、脊髓损伤周围神经再生,改善神经疾病患者记忆功能等方面有良好效果.目的:探讨脉冲磁场对颅脑损伤大鼠脑功能及脑组织中内源性神经干细胞因子的影响.方法:将320只雄性成年SD大鼠随机分为模型组、脉冲磁场0.1 mT组、脉冲磁场0.3 mT组及脉冲磁场0.5 mT组,均采用侧向液压打击法建立颅脑损伤模型,脉冲磁场0.1 mT组、脉冲磁场0.3 mT组及脉冲磁场0.5 mT组建模后给予相应强度的脉冲磁场照射,照射后1,3,7,14 d,进行平衡木行走实验、水迷宫实验,以测定大鼠运动功能;相应照射时间点前1 d,腹腔注射BrdU,应用免疫组织化学法测定脑组织BrdU及皮质巢蛋白阳性细胞数.结果与结论:①照射后1,3,7 d,脉冲磁场0.1,0.3,0.5 mT组水迷宫实验时间、平衡木行走实验均短于模型组(P<0.05),脉冲磁场0.5 mT组水迷宫实验时间、平衡木行走实验均短于脉冲磁场0.1,0.3 mT组(P<0.05),脉冲磁场0.3 mT组水迷宫实验时间、平衡木行走实验均短于脉冲磁场0.1 mT组(P<0.05);②照射后3,7,14 d,脉冲磁场0.1,0.3,0.5 mT组BrdU及皮质巢蛋白阳性细胞数多于模型组(P<0.05),脉冲磁场0.5 mT组BrdU及皮质巢蛋白阳性细胞数多于脉冲磁场0.1,0.3 mT组(P<0.05),脉冲磁场0.3 mT组BrdU及皮质巢蛋白阳性细胞数多于脉冲磁场0.1 mT组(P<0.05);③结果表明,脉冲磁场能明显保护颅脑损伤大鼠脑功能,且电磁场强度越强效果越明显,其可能机制与脉冲磁场激活颅脑损伤大鼠脑组织中神经干细胞及促进其增殖有关.
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胎鼠不同脑组织中神经干细胞和神经元所占比例及差异
背景:目前,小鼠神经干细胞的体外培养技术已被众多科研平台熟练掌握,但是各科研平台在培养脑源性神经干细胞时所使用的脑组织有很大差异.胎龄14 d(E14)小鼠脑组织被广泛用于培养胎鼠神经干细胞,而对于此时胎鼠不同脑组织中所含神经干细胞的详细比例及其间有无差异,目前研究较少.目的:比较E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中神经干细胞和神经元所占比例及差异,为后期优化分离高纯度神经干细胞提供直接量化数据和前期研究基础.方法:分离E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织,加入胰酶消化成单细胞,贴壁培养3.0-4.0 h,然后通过细胞免疫荧光实验,用DAPI标记总细胞,神经干细胞特异性抗原Nestin标记神经干细胞,神经元特异性抗原Tuj1标记神经元,统计分析Nestin+/DAPI和Tuj1+/DAPI所占比例.另外,通过实时荧光定量PCR技术检测E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中Nestin和Tuj1 mRNA的表达水平.结果与结论:①细胞免疫荧光结果显示,E14小鼠全脑、大脑皮质和前脑组织中均有大量Nestin+和Tuj1+细胞存在;小鼠前脑组织中Nestin+细胞所占比例高,明显高于全脑(P<0.01)和大脑皮质(P<0.05);而前脑组织中Tuj1+细胞比例明显低于全脑(P<0.05)和大脑皮质(P<0.001).该结果表明,与全脑和大脑皮质相比,前脑组织中神经干细胞所占比例高,神经元所占比例低;②Real time PCR结果显示,E14小鼠前脑组织中Nestin mRNA表达水平高,明显高于全脑组织(P<0.05),略高于大脑皮质(P>0.05),说明前脑组织中有较多神经干细胞存在;而Tuj1 mRNA的表达水平明显低于全脑组织(P<0.05)和大脑皮质组织(P<0.05),说明前脑组织中有较少神经元存在;③综合以上结果,与全脑和大脑皮质相比,分离、消化E14小鼠前脑组织所获得的神经干细胞比例高,是后期培养优质神经干细胞的重要前提.
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腺病毒载体携带标记基因EGFP转染人羊膜上皮细胞
背景:人羊膜上皮细胞具有干细胞的某些性能,可诱导分化为角膜样上皮细胞,但在体外培养时无法示踪,不能有效地监测其细胞转归.目的:探讨利用腺病毒载体将标记基因EGFP转染入人羊膜上皮细胞的可行性及感染效率.方法:pDC316-mCMV-EGFP腺病毒包装后,腺病毒载体携带标记基因EGFP转染体外培养的人羊膜上皮细胞,并扩增培养,观察转染后人羊膜上皮细胞与未转染人羊膜上皮细胞的形态差异,并在荧光显微镜下观察转染基因的表达,用流式细胞仪检测转染细胞的细胞周期及EGFP阳性表达率.结果与结论:①多数转染细胞筛选出的抗性克隆以及培养的克隆细胞与正常体外培养的人羊膜上皮细胞在形态上无显著差异;②瞬时转染后48 h的人羊膜上皮细胞中增强型绿色荧光蛋白阳性表达率高达99.01%;③转染后的人羊膜上皮细胞的细胞周期有所减慢,说明利用腺病毒载体能将标记基因EGFP转染入人羊膜上皮细胞,可更直观地观察到人羊膜上皮细胞在体外的进一步转归.
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人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离培养:组织块法的优化
背景:关于人胎盘绒毛膜间充质干细胞分离培养方法的研究很多,但是如何简便、快捷获得大量原代培养间充质干细胞的问题尚未解决.目的:探讨优化人胎盘绒毛膜间充质干细胞体外分离培养组织块法的佳方法.方法:无菌条件下,取正常足月剖宫产胎盘绒毛膜,用匀浆器处理组织块,采用组织块法贴壁分离培养人胎盘绒毛膜间充质干细胞,经初次培养的组织块进行再次接种培养.结果与结论:用电动匀浆器处理人胎盘绒毛膜省时省力,组织分散度和去除红细胞效果好.初次培养和再次培养获得细胞的平均时间分别为(17.73±1.14)d和(10.03±1.30)d.每个Φ100 mm培养皿获得的原代细胞分别为(6.97±0.98)×105个和(13.82±1.44)×105个.获得的贴壁细胞呈典型的成纤维细胞形态,呈平行或漩涡状生长,高表达CD90、CD73、CD105,而CD45、CD34、CD14、CD19、HLA-DR为阴性.细胞可向成骨、成脂方向诱导分化.结果表明优化的方法能够简便、快捷地处理人胎盘绒毛膜组织,获得大量的原代间充质干细胞.
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硫化氢通过缺氧诱导因子1α促进张应力下骨髓间充质细胞的成骨
背景:有研究表明当归多糖有补血活血作用,但其如何改善骨髓造血微环境,促进造血功能成为研究问题热点之一.目的:观察当归多糖对小鼠骨髓造血干细胞及基质细胞表面细胞间黏附分子1水平的影响.方法:建立失血性贫血模型小鼠,随机分为3组,当归多糖低、高剂量组连续腹腔注射等量相应浓度的当归多糖4,6 mg/kg,对照组则同样时间内注射等量的生理盐水,共干预6 d.动态观察小鼠一般情况;全自动血细胞分析仪检测不同时间点小鼠外周血中红细胞的数量;采用磁珠分选和流式细胞术检测骨髓中造血干细胞的数量;MTT法检测骨髓基质细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测骨髓基质细胞表面的细胞间黏附分子1的表达.结果与结论:当归多糖对失血性贫血小鼠体质量无明显影响(P>0.05).当归多糖低、高剂量组外周血红细胞数、骨髓CD34+,Sca-1+细胞百分数、骨髓基质细胞数量及其表面细胞间黏附分子1均明显高于对照组(P<0.05),其中高剂量组效果优于低剂量组.结果说明,当归多糖通过促进骨髓基质细胞增殖,增强细胞间黏附分子1的表达,进而促进造血干细胞增殖并影响其功能活动.
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小分子水凝胶对骨髓间充质干细胞增殖、凋亡及向心肌细胞分化的影响
背景:前期研究研制的一种短肽小分子水凝胶,在改善局部微环境、携带生物活性物质及干预干细胞信号转导途径等方面较其他水凝胶有着更明显的优势.目的:探讨小分子水凝胶对骨髓间充质干细胞增殖、凋亡、向心肌细胞分化等的影响.方法:①取第9代SD大鼠骨髓间充质干细胞,分2组培养,实验组加入小分子水凝胶溶液,对照组常规培养,检测培养7 d内的细胞增殖与凋亡;将两组细胞分别置于缺氧环境中孵育12 h,检测细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3的表达;②取第9代骨髓间充质干细胞,分4组干预:5-氮杂胞苷组加入5-氮杂胞苷,凝胶组加入小分子水凝胶,实验组加入小分子水凝胶与5-氮杂胞苷,正常对照组加入L-DMEM基本培养基,诱导4周后,检测cTnT、desmin及Cx-43蛋白的表达,以及心肌早期转录因子NKX2.5、GATA-4的表达.结果与结论:①与对照组相比,实验组骨髓间充质干细胞有更好的增殖能力及更低的凋亡数量;在缺氧环境中,实验组和对照组存活的细胞均有减少,实验组的凋亡或坏死细胞数目明显少于对照组(P<0.05);实验组细胞Bcl-2蛋白表达高于对照组(P<0.01),Bax、Caspase-3蛋白表达低于对照组(P<0.01);②5-氮杂胞苷组和实验组各样本中均出现明确的心肌早期分化基因,实验组NKx2.5和GATA-4 mRNA表达高于5-氮杂胞苷组(P<0.05).正常对照组cTnT表达阴性,desmin及Cx-43蛋白表达很弱;实验组cTnT、desmin及Cx-43蛋白表达强于5-氮杂胞苷组、凝胶组,凝胶组cTnT、desmin及Cx-43蛋白表达与5-氮杂胞苷组相似;③结果表明,小分子水凝胶作为培养基质,更有利于骨髓间充质干细胞的增殖,减少其凋亡并促进其向心肌细胞分化.
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无菌回收膝关节镜术后引流液体外培养自体间充质干细胞的可行性
背景:目前间充质干细胞在骨科中的应用前景极为广阔,尤其是对于治疗关节软骨缺损疾病表现出巨大的潜力,骨髓是间充质干细胞的主要来源,但常规髂骨穿刺法抽取骨髓,来源有限,技术要求严格,限制了其应用程度,因此,探寻新的方便有效的细胞来源具有重要意义.目的:探讨膝关节镜术后引流液体外培养自体间充质干细胞的可行性.方法:选取行膝关节镜手术患者8例,在关闭切口前置特制的无菌血袋,收集术后引流液,采用羟乙基淀粉沉淀法及密度梯度离心法分离培养间充质干细胞,观察细胞形态,绘制生长曲线,流式细胞仪鉴定表面标志物,进行三系诱导分化染色鉴定.结果与结论:①细胞呈梭形,贴壁生长,细胞增殖能力好,表面表达CD44、CD90、CD105、CD73,而不表达CD45;②通过标准方法诱导,间充质干细胞能向成骨细胞、脂肪细胞及软骨细胞分化,表明培养的细胞为间充质干细胞;③8例样本均培养出间充质干细胞,其细胞形态、增殖能力、细胞表型等无明显差异;④该结果表明,膝关节镜术后引流液可以培养出间充质干细胞,且细胞质量稳定.
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当归多糖对小鼠骨髓造血干细胞及基质细胞表面细胞间黏附分子1水平的影响
背景:有研究表明当归多糖有补血活血作用,但其如何改善骨髓造血微环境,促进造血功能成为研究问题热点之一.目的:观察当归多糖对小鼠骨髓造血干细胞及基质细胞表面细胞间黏附分子1水平的影响.方法:建立失血性贫血模型小鼠,随机分为3组,当归多糖低、高剂量组连续腹腔注射等量相应浓度的当归多糖4,6 mg/kg,对照组则同样时间内注射等量的生理盐水,共干预6 d.动态观察小鼠一般情况;全自动血细胞分析仪检测不同时间点小鼠外周血中红细胞的数量;采用磁珠分选和流式细胞术检测骨髓中造血干细胞的数量;MTT法检测骨髓基质细胞的增殖情况;采用流式细胞术检测骨髓基质细胞表面的细胞间黏附分子1的表达.结果与结论:当归多糖对失血性贫血小鼠体质量无明显影响(P>0.05).当归多糖低、高剂量组外周血红细胞数、骨髓CD34+,Sca-1+细胞百分数、骨髓基质细胞数量及其表面细胞间黏附分子1均明显高于对照组(P<0.05),其中高剂量组效果优于低剂量组.结果说明,当归多糖通过促进骨髓基质细胞增殖,增强细胞间黏附分子1的表达,进而促进造血干细胞增殖并影响其功能活动.
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miR-21/Sprouty1功能轴调控绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞的成骨能力
背景:成骨分化是一个复杂的网络,包括多种信号通路转录水平和转录后水平的调控,具体机制仍不清楚.研究关键miRNA对骨髓间充质干细胞成骨分化的调控作用对于治疗骨质疏松和骨缺损具有重要意义.目的:探索miR-21/Sprouty1功能轴调控绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞的成骨能力.方法:分离培养正常人和绝经后骨质疏松患者的骨髓间充质干细胞,比较2组细胞的成骨能力.Real time RT-PCR和Western Blot检测2组细胞中miR-21和Spry1的表达.利用转染的方法上调绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞中的miR-21水平,检测其成骨能力及Spry1的表达变化,Real time RT-PCR和Western Blot检测成骨标志性基因Runx2和Osterix的表达.结果与结论:①与正常人骨髓间充质干细胞相比,绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞的成骨能力明显减弱,而且miR-21表达下降,Spry1表达上升,miR-21-Spry1功能轴受到抑制;②通过转染miR-21,下调Spry1,增加Runx2和Osterix的表达,能够部分恢复绝经后骨质疏松患者骨髓间充质干细胞的成骨分化能力.
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丁酸钠联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌干细胞生物学行为的影响
背景:丁酸钠是一种组蛋白去乙酰化酶抑制剂,能够抑制多种肿瘤细胞的增殖、诱导细胞凋亡及分化,但其联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌干细胞的影响尚未见报道.目的:研究丁酸钠单独或联合给药对肺癌干细胞生物学行为的影响.方法:利用免疫磁珠细胞分选技术从人肺腺癌A549细胞中分选CD133+肺癌干细胞,将CD133+肺癌干细胞分4组培养,对照组以DMEM/F12培养基培养,丁酸钠组以含5 mmol/L丁酸钠的DMEM/F12培养基培养,TRAIL组以含50μg/L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的DMEM/F12培养基培养,联合组以含5 mmol/L丁酸钠+50μg/L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的DMEM/F12培养基培养.检测培养96 h内的细胞增殖、培养24 h后的细胞凋亡、培养48 h内的细胞迁移能力,以及培养48 h后的多能性转录因子Oct4、Sox2及Nanog蛋白表达.结果与结论:①细胞增殖:联合组培养不同时间点的细胞增殖抑制率显著高于丁酸钠组、TRAIL组(P<0.05);②细胞凋亡:丁酸钠组、TRAIL组、联合组细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),联合组高于丁酸钠组、TRAIL组(P<0.05);③细胞迁移能力:丁酸钠组、TRAIL组、联合组细胞划痕距离大于对照组(P<0.05),联合组大于丁酸钠组、TRAIL组(P<0.05);④多能性转录因子表达:丁酸钠组、TRAIL组、联合组多能性转录因子Oct4、Sox2及Nanog蛋白表低于对照组(P<0.05),联合组低于丁酸钠组、TRAIL组(P<0.05);⑤结果表明:丁酸钠与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合用药,对肺癌干细胞有协同抑制作用.
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残耳软骨细胞诱导脂肪来源干细胞体内软骨的形成
背景:先天性小耳畸形残耳软骨细胞从细胞数量和质量上难以作为种子细胞构建出正常人耳郭大小的同质耳软骨支架.目的:探讨残耳软骨细胞能否在裸鼠体内非软骨环境下模拟软骨诱导微环境,促进脂肪来源的干细胞向软骨分化并形成组织工程软骨,从而为解决组织工程化人耳郭软骨支架制备做基础准备工作.方法:①实验分为4组:第2代残耳软骨细胞与第3代脂肪来源的干细胞以3:7比例混合作为共移植组,单纯残耳软骨细胞作为阳性对照组(残耳软骨细胞组),单纯脂肪来源的干细胞作为阴性对照组(脂肪干细胞组),以上3组接种细胞终浓度为5.0×1010 L-1,低浓度残耳软骨细胞对照组细胞终浓度为1.5×1010 L-1;②按照实验分组将0.2 mL细胞-Pluronic-F127复合物注射到裸鼠背部皮下,体内培养8周后对新生组织进行大体观察、湿质量测量、糖胺多糖含量测定、组织学及免疫组化染色检测.结果与结论:①共移植组平均湿质量达到残耳软骨细胞组的80%以上;低浓度残耳软骨细胞对照组平均湿质量低于残耳软骨细胞组的30%;②共移植组和残耳软骨细胞组的平均湿质量和糖胺多糖平均含量均显著高脂肪干细胞组和低浓度残耳软骨细胞对照组(P<0.05);③组织学染色:共移植组、残耳软骨细胞组与低浓度残耳软骨细胞对照组标本均有成熟的软骨陷窝形成,低浓度残耳软骨细胞对照组软骨陷窝松散排列不均,胞外基质着色淡;脂肪干细胞组为纤维样组织,未见软骨陷窝形成;④Ⅱ型胶原免疫组化染色:共移植组、残耳软骨细胞组与低浓度残耳软骨细胞对照组可见成熟软骨陷窝周围有不同程度的棕黄色沉淀即Ⅱ型胶原表达;脂肪干细胞组未见Ⅱ型胶原表达;⑤结果提示,残耳软骨细胞能够在裸鼠体内非软骨环境下模拟软骨诱导微环境,促进脂肪干细胞向软骨分化并生成组织工程软骨.
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荧光定量PCR检测恶性转化人脐带间充质干细胞中DNA甲基化转移酶的改变
背景:根据体外培养的成体干细胞自发恶性转化现象及肿瘤干细胞理论,人脐带间充质干细胞在体外培养过程中可能产生变异,体内移植后可能存在致瘤性风险.因此,建立健全的体外安全性检测程序,将在干细胞临床应用上起积极推动作用.目的:探讨人脐带间充质干细胞致瘤性机制及DNA甲基化转移酶的表达水平.方法:采用组织块贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞,利用3-甲基胆蒽促使人脐带间充质干细胞发生恶性转化,通过形态学观察,裸鼠成瘤实验进行验证,成瘤组织进行病理学鉴定、原代细胞培养,荧光定量PCR检测人脐带间充质干细胞与肿瘤细胞DNA甲基化转移酶表达水平的差异.结果与结论:①人脐带间充质干细胞经3-甲基胆蒽处理后形成恶性转化细胞,呈恶性生长,细胞核型呈非整数倍体改变,注入裸鼠体内后能形成恶性肿物;②经荧光定量PCR检测,恶性转化后肿瘤细胞(实验组)相比二甲基亚砜培养人脐带间充质干细胞(对照组),其DNA甲基化转移酶的基因表达量明显增高;③结果表明,人脐带间充质干细胞在一定条件下能发生恶性转化,包括形态学变化及表观遗传学层面改变,DNA甲基化转移酶可作为预防干细胞移植后成瘤的进一步研究方向.
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青藤碱对大鼠骨髓来源树突状细胞分化成熟的影响
背景:利用未成熟树突状细胞诱导供体特异性免疫耐受有可能成为防治器官移植排斥反应的重要途径.目的:探讨青藤碱对大鼠来源骨髓树突状细胞体外分化及成熟的影响.方法:取大鼠股骨、胫骨骨髓来源树突状细胞的前体细胞,经粒-巨噬细胞集落刺激因子及白细胞介素4作用诱导出未成熟树突状细胞,第7天加入脂多糖刺激成熟,在刺激未成熟树突状细胞成熟时,分为对照组和低、中、高不同剂量的青藤碱处理组,作用48 h后收获树突状细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态学特征,流式细胞仪检测细胞表型CD80、RT1B的表达,ELISA检测培养上清白细胞介素12水平,混合淋巴细胞反应检测树突状细胞刺激同种异体T淋巴细胞活化的能力.结果与结论:①倒置显微镜下观察,对照组可见细胞符合成熟树突状细胞形态特性;青藤碱低剂量组可见绝大部分树突状细胞成熟;青藤碱中剂量组细胞部分悬浮,成熟度差;青藤碱高剂量组大部分细胞尚未成熟;②与对照组相比,青藤碱低、中、高剂量组CD80表达显著降低(P<0.05);与对照组相比,青藤碱中、高剂量组RT1B表达显著降低(P<0.05);③与对照组相比,青藤碱中、高剂量组培养上清中IL-12p70水平显著降低(P<0.01);④与对照组相比,青藤碱中、高剂量组刺激T淋巴细胞增殖的能力显著降低(P<0.05);⑤结果表明,青藤碱能抑制树突状细胞进一步成熟.
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甘草苷对小鼠胚胎脑神经干细胞增殖的影响
背景:甘草苷对神经细胞有保护和营养作用,但甘草苷对小鼠胚胎脑神经干细胞增殖的影响尚未见报道.目的:研究不同质量浓度甘草苷对小鼠胚胎脑神经干细胞增殖的影响.方法:从孕14 d昆明白小鼠胚胎脑组织中分离出神经干细胞并培养,采用免疫细胞化学方法鉴定神经干细胞,利用qRT-PCR检测神经干细胞特异性基因表达,MTT法绘制神经干细胞生长曲线.取生长旺盛的神经干细胞,分别以0(对照),1,2,4,8 g/L的甘草苷干预,干预48 h后,MTT法检测细胞增殖.结果与结论:①培养第5天时,所有单个的神经干细胞全部聚集成球,随着时间的延长,细胞球体积越来越大,细胞球融合成更大的细胞团;②免疫细胞化学鉴定显示,100%的神经干细胞球呈巢蛋白阳性表达;③qRT-PCR检测显示,神经干细胞巢蛋白阳性表达较强,不表达神经元特异性烯醇化酶及胶质纤维酸性蛋白;④神经干细胞刚开始生长缓慢,处于生长缓慢期,第二三天起,细胞增殖迅速,进入指数生长期;第4天后,细胞增殖逐步减缓,细胞整体进入生长平台期;⑤2,4,8 g/L甘草苷组细胞增殖明显高于对照组(P<0.05),并且随着甘草苷质量浓度的升高,神经干细胞增殖速度逐渐升高;⑥结果表明,2-8 g/L甘草苷能促进小鼠胚胎脑神经干细胞的增殖.
