中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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应用密度梯度离心和贴壁筛选法分离免骨髓间充质干细胞
背景:特定条件下,骨髓间充质干细胞可向成骨细胞、成软骨细胞等细胞分化.但骨髓中间充质干细胞含量极低,体外如何获取、纯化并使其高效快速增殖是组织工程技术应用和推广的前提.目的:优化获取兔骨髓间充质干细胞并对其进行纯化、鉴定,同时对其生物学性状进行观察.设计、时间和地点:观察性实验,于2005-09/2006-07在同济医学院实验动物中心完成.材料:兔龄2个月雌性新西兰纯种大耳白兔1只,用于间充质干细胞取材及原代培养.方法:采用密度梯度离心法、贴壁筛选法并结合传代对抽取的骨髓液进行纯化.首先将培养瓶中的培养液吸出,加PBS后再加入2.5 g/L胰酶约3.0 mL,置于37℃培养箱中,两三分钟后在倒置显微镜下观察细胞形态,当细胞胞质回缩,细胞变瘦长,细胞间隙增大,同时有少量脱肇的圆形细胞时可终止消化,加入含血清的L-DMEM完全培养基即可.按1.0X 108L-1的密度接种到一次性塑料培养瓶中进行培养.主要观察指标:间充质干细胞的形态、超微结构和表面标志物的表达;第1,3,5,8,10代细胞的增殖情况,并绘制出生长曲线.结果:①经密度梯度离心法、贴壁筛选法并结合传代方法所得的间充质干细胞很纯,第3代和第5代细胞形态单一,细胞排列具有典型的漩涡状结构.②透射电镜观察显示间充质干细胞核大,以圆形或类圆形为主,胞核比例大,细胞器少,为低分化细胞.③传代培养的间充质干细胞生长曲线呈S型,第1,3,5代细胞增殖能力强,细胞生长旺盛,而第8,10代细胞增殖明显减弱.④所分离培养的细胞表达CD44、CD90,不表达CD34,电镜观察为低分化细胞.结论:分离培养的细胞为间充质干细胞且成分单一,具有干细胞特性,第3代和第5代细胞很纯且其增殖能力强.
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自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死患者心理状态调查分析
目的:当前自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死技术进展很快.但对于患者的心理问题关注不足,无法准确评估患者围手术期的应激程度.文章调查采用自体骨髓干细胞移植治疗心肌梗死患者的心理状况.方法:抽取急性心肌梗死患者41例,均行经皮冠状动脉介入治疗+标准药物治疗+经冠脉注入自体骨髓单个核细胞治疗.对41例患者进行心理问题调查,用症状自评量表SCL-90和社会支持评定量表对患者进行问卷调查,并与国内常模进行比较.SCL-90量表每个症状的评分计1～5级,1级没有症状,5级极严重;社会支持评定量表评分越高,社会支持越高.分析影响患者的心理健康因素、心理健康水平与社会支持的相关性.结果:自体骨髓干细胞移植患者SCL-90量表的9项因子中,躯体化、强迫、焦虑、敌对性、恐怖、精神病性6项指标评分均高于国内常模(P<0.01);人际关系敏感、抑郁评分低于国内常模(P<0.01);惟有偏执评分与常模差异无显著性意义(P>0.05).41例自体骨髓干细胞移植心肌梗死患者的社会支持评分为25.32～45.52分,平均(36.92+8.91)分.将社会支持评分高于36.92分的23例患者设定为高社会支持得分组,低于36.92分的18例设定为低社会支持得分组,低社会支持得分组患者的躯体化、强迫、人际关系、抑郁、焦虑、恐怖、偏执等症状因子评分明显高于高社会支持得分组(P均<0.05).结论:采用干细胞移植的心肌梗死患者常常存在明显的心理问题,表现为不同程度的抑郁、焦虑等身心症状.在进行躯体疾病治疗的同时,应配合以疏导为主的心理治疗,消除不良心理因素的影响.
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大鼠肌源性干细胞植入糖尿病鼠胰腺后的存活能力及血糖调节
背景:肌源性干细胞易于提取、分离及扩增,在特定条件下可分化为骨软骨、肌肉等中胚层组织细胞,还可以跨胚层分化为神经细胞等.目的:观察糖尿病鼠胰腺内植入的肌源性干细胞存活情况,及其调节血糖的效果.设计,时间及地点:细胞学体外观察,于2007-04/09在辽宁医学院科学实验中心完成.材料:SPFNAF级新生5d龄SD大鼠31只,由辽宁医学院实验动物中心提供.造模使用的链脲佐菌素为星隆达公司产品.方法:取5只大鼠的前肢肱三头肌与后肢腓肠肌,采用差速贴壁法纯化扩增大鼠肌源性干细胞,传至第3代用于移植,临用前以携带绿色荧光蛋白的腺病毒悬液进行转染.取20只大鼠,通过尾静脉注射链脲佐菌素建立糖尿病模型,15只成功造模,取12只随机均分为2组:细胞移植组胰腺被膜下移植肌源性干细胞约2×106个,模型对照组同法给予等量不含细胞的培养液.余6只大鼠作为正常对照组.主要观察指标:肌源性干细胞移植至胰腺后的存活情况.移植后大鼠血糖浓度的变化.结果:移植后1周,胰腺组织争网架样结构,表达较强的黄绿色荧光;4周后仍有荧光表达,但强度减弱.与模型对照组比较,移植前2d细胞移植组大鼠血糖浓度无明显差异(P>0.05);移植后4,8d,大鼠血糖浓度一直处于较高水平;至移植后第4,8周大鼠血糖浓度明下降(t=-2.416-8.372,P<0.01).结论:肌源性干细胞移植后能在糖尿病模型鼠的胰腺部位存活,且一定程度上可下调大鼠血糖浓度.
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利多卡因对肿瘤坏死因子α诱导中性粒细胞凋亡的影响
背景:利多卡因被认为有抗炎作用,而其作用机制不清.核转录因子κB是炎症反应的关键环节.目的:观察利多卡因对人体中性粒细胞核转录因子κB激活和中性粒细胞凋亡的影响.设计、时间及地点:对比观察,于2006-10/2007-02在江苏省麻醉学重点实验室完成.材料:肿瘤坏死因子α(O127:B8)购于Sigma公司;外周血标本健康者,受试者知情同意.方法:人体中性粒细胞分为5组:生理盐水对照组、肿瘤坏死因子α组、肿瘤坏死因子α+利多卡因1.0 mmol/L组、肿瘤坏死因子α+利多卡因2.0 mmol/L组、肿瘤坏死因子α+利多卡因4.0 mmol/L组,共同孵育3h.主要观察指标:以反转录聚合酶链反应及免疫印迹法检测利多卡因对核转录因子κBmRNA和I-κB mRNA表达及蛋白含量的影响.孵育12h和24h,以流式细胞术分析对中性粒细胞凋亡的影响.结果:利多卡因组核转录因子κB mRNA表达显著降低,而I-κB mRNA表达显著增加.并凡利多卡因2.0 mmoVL组和4.0 mmol/L组显著优于1.0 mmol/L组(P<0.05),而2.0 mmol/L组和4.0 mmol/L组之间差异不显著(P>0.05).利多卡因在12h和24h都可以显著抑制肿瘤坏死因子α诱导的外周血中性粒细胞凋亡(P<0.05),而4.0 mmol/L组显著优于1.0 mmol/L组(P<0.05).结论:利多卡因1.0,2.0,4.0 mmol/L都可以显著下调肿瘤坏死因子α诱导的外周血中性粒细胞P65mRNA的表达,并且在12和24h可以部分逆转肿瘤坏死因子α诱导的中性粒细胞凋亡.
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不同来源嗅鞘细胞移植治疗脑出血的比较
背景:嗅鞘细胞是目前已知用于移植细胞中惟一可以跨越周围神经系统与中枢神经系统边界的细胞.在众多的国内外文献中,大多以嗅球来源嗅鞘细胞作为观察对象;但采用嗅黏膜嗅鞘细胞移植具有来源方便、损伤小、可自体取材等优势.目的:比较嗅球来源嗅鞘细胞和嗅黏膜嗅鞘细胞移植对脑出血后神经功能损伤恢复作用的差异.设计、时间及地点:免疫组织化学水平的随机对照动物实验,于2005-10/2007-10在无锡市第三人民医院细胞实验室完成.材料:选用健康雄性SD大鼠30只,按随机数字表法分为3组,对照组、嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各10只.方法:分别获取人鼻中隔黏膜、人胚嗅球,进行嗅鞘细胞的分离培养纯化,取培养10 d的细胞用作细胞移植.取SD大鼠制备尾状核出血模型.嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组各取10 μL细胞悬液在立体定向下引导微量注射器向大鼠脑组织内匀速注射(1 μL/min),对照组注入等量培养基,注射点为右侧尾状核.主要观察指标:观察两种来源嗅鞘细胞的体外培养情况.嗅鞘细胞移植后对动物行定期行为学评定,功能损伤越重,得分越高;并观察组织切片靶区域免疫细胞化学分析结果.结果:从体外培养结果看,无论在形态上还是表型上,两者无明显区别.嗅球来源嗅鞘细胞移植组及嗅黏膜嗅鞘细胞移植组大鼠的Longa 5分制法及前肢放置试验评分在移植后第14,28,56天显著低于对照组(P<0.05),两移植组差异无显著性意义(P>0.05),移植组各时间段差异无显著性意义(P>0.05).结论:用于移植修复神经功能的两种嗅鞘细胞在细胞特性、移植效果方面均无明显差异.
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NF-κB与基质金属蛋白酶在骨髓单个核细胞心肌移植后的变化
背景:骨髓干细胞能够修复受损心肌,改善不利的心室重构及恶化的心功能,但细胞移植后对梗死心室重构影响的分子机制仍不清楚.目的:观察骨髓单个核细胞心肌移植后,心肌组织NF-κB、基质金属蛋白酶及其抑制因子表达的变化.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-07/2007-05在解放军总医院心血管外科实验动物中心和解放军军事医学科学院病原微生物生物安全国家重点实验室完成.材料:成年健康雄性杂种犬24只,随机分为急性心肌梗死对照组、急性心肌梗死移植组、陈旧心肌梗死对照组、陈旧心肌梗死移植组,6只/组.方法:急性心肌梗死对照组、急性心肌梗死移植组在冠状动脉左前降支主干结扎1h,观察缺血梗死区仍然呈暗红色,确认急性心肌梗死模型建立成功.陈旧心肌梗死对照组、陈旧心肌梗死移植组在移植前行超声心动图检查,证实左室前壁和心尖部可见节段性室壁运动异常,确认陈旧心肌梗死模型建立成功.Ficoll分离法获得犬自体骨髓单个核细胞悬液,急性心肌梗死移植组在造模后1h于梗死区及梗死边缘区分多点注射细胞悬液,每点注射0.5 mL,(1～2)×107个细胞/mL;陈旧心肌梗死移植组于造模后4周开胸确认梗死区,同法行细胞移植.主要观察指标:RT-PCR法检测心肌组织基质金属蛋白酶及其抑制因子mRNA的表达,Western免疫印迹法检测心肌组织NF-κB 的表达.结果:移植后6周与相应对照组比较,急性心肌梗死移植组、陈旧心肌梗死移植组的梗死区、梗死周围区基质金属蛋白酶2,9mRNA及NF-κB 表达均显著降低(P<0.01),基质金属蛋白酶抑制因子1,2 mRNA表达均显著升高(P<0.01).结论:犬自体骨髓单个核细胞心肌移植可能通过抑制NF-κB活化,导致基质金属蛋白酶mRNA表达减少及其抑制因子mRNA表达增加,从而抑制梗死后心室重构过程.
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新诊断2型糖尿病患者二甲双胍治疗后外周血单个核细胞核因子κ活性的变化
背景:IKK/核因子κB通路是巨噬细胞分泌炎症因子的关键调节通路,可启动、放大炎症反应,二甲双胍可能有潜在的抗炎作用.目的:探讨二甲双胍对新诊断2型糖尿病患者外周血单个核细胞核因子κB活性及血清炎症指标的影响.设计:自身前后对照.对象:2004-10/2006-06中山大学附属第二医院内分泌科住院和门诊收治的新诊断2型糖尿病患者29例.二甲双胍为中美上海施贵宝公司产品.方法:29例患者经筛选进入实验后,给予二甲双胍治疗,由1.0 g/d开始,大剂量2.0 g/d.每2周随访1次,根据血糖水平调整药物剂量,血糖控制目标为空腹血糖<6.1 mmol/L,餐后2h血糖<8mmol/L.分别于治疗前及血糖达良好控制0,2,12周时进行各项指标检查.主要观察指标:Western blot法检测外周血单个核细胞磷酸化核因子κB p65(Ser538)水平,高敏ELISA法检测血清炎症指标的变化.结果:与治疗前比较,血糖达标2周时外周血单个核细胞中磷酸化核因子κB p65(Ser536)水平明显降低(P<0.05),至血糖达标12周时降低程度更为显著(P<0.01).与治疗前比较,血糖达标时(0周)及达标后2周,12周，各项炎症指标水平均明降低(P<0.05或0.01),其中血糖达标12周时超敏C反应蛋白降低56％,白细胞介素6降低30％,肿瘤坏死因子α降低24％.结论:二甲双胍可抑制新诊断2型糖尿病患者外周血单个核细胞中磷酸化核因子κB活性,显著改善患者炎症状态.
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人胎盘间充质干细胞4种消化分离方法的效果比较
背景:目前已从多种组织器官中分离出间充质干细胞,如何更高效地获取大批量纯度佳的干细胞仍是研究目标之一.目的:对人胎盘间充质干细胞采取4种不同的消化分离方法,比较其分离效果.设计、时间及地点:细胞学体外对比观察,于2007-07/2008-01在暨南大学医学院血液病研究所完成.材料:胎盘标本来源于足月正常剖宫产胎儿,由暨南大学附属第一医院提供.胶原酶Ⅱ、胶原酶Ⅳ为GIBCO产品,羟乙基淀粉为B.BRAUN产品,淋巴细胞分层液为上海试剂二厂产品.方法:胎舷组织剪碎后甲均分为4组:胶原酶Ⅳ+羟乙基淀粉沉淀组、胶原酶Ⅱ+羟乙基淀粉沉淀组、胶原酶Ⅱ+淋巴细胞分层液分离组、胶原酶Ⅱ+氯化铵裂解红细胞组,5份标本/组.将第1组置于1 g/L胶原酶Ⅳ中,另外3组置于1 g/L胶原酶Ⅱ中,37℃消化45 min.过筛后收集各组细胞悬液,按组别对应施以羟乙基淀粉沉淀法、淋巴细胞分层液分离法、氯化铵裂解红细胞法进行分离.主要观察指标:观察4种方法在获取细胞数、培养成功率、细胞出现伸展时间、原代培养时间方面的差异,并对培养得到的细胞进行表面标志检测.结果:与胶原酶Ⅱ+羟乙基淀粉沉淀组比较,其余3组获取的细胞数均明显减少(t=2.92～8.16,P<0.05).在其他条件相同的情况下,胶原酶Ⅱ+羟乙基淀粉沉淀组培养成功率为100%.其余3组分别为80%,80%,20%.胶原酶Ⅱ+羟乙基淀粉沉淀组细胞出现伸展时间及原代培养时间均短于胶原酶Ⅱ+淋巴细胞分层液分离组(t=5.27～5.37,P<0.05).亦短于胶原酶Ⅳ+羟乙沉淀组(2.46～2.50,P<0.05).流式细胞仪检测示第3代人胎盘间充质干细胞强表达透明质酸受体CD44和整合素家族成员CD29,不表达造血干细胞标志CD34和CD45,也不表达内皮细胞标志CD106及HLA-DR.结论:使用胶原酶Ⅱ消化胎盘组织,结合羟乙基淀粉沉淀法能较好地分离人胎盘间充质干细胞.
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人骨髓CD34+干细胞分离培养及血管内皮生长因子165诱导分化的作用
背景:有研究证实,骨髓中CD34+干细胞在一定条件下具有向内皮细胞分化的潜能.目的:体外分离、纯化、培养和扩增人CD34+造血干细胞,并检测其免疫学表型,观察血管内皮生长因子对其体外诱导分化后细胞免疫表型的变化.设计、时间及地点:细胞学观察实验,于2005-10/2007-10在南方医科大学神经生物学教研室完成.材料:骨髓来源于健康供者.方法:利用Percoll梯度分离、贴壁筛选法及单克隆培养法分离培养、扩增人骨髓CD34+干细胞.采用脂质体介导转染法,选生长良好的传代细胞,以血管内皮生长因子165基因转染人骨髓CD34+干细胞.主要观察指标:采用免疫荧光和流式细胞术检测人骨髓CD34+干细胞免疫学表型.经血管内皮生长因子165基因转染后,人骨髓CD34+干细胞的表型变化以及血管内皮生长因子的分泌情况.结果:体外分离培养出高度同源性的人骨髓CD34+干细胞,细胞形态呈成纤维细胞样.CD44、CD29和c-kit阳性,CD31和CD54阴性;经血管内皮生长因子165诱导后,人骨髓CD34+干细胞表面标志CD44表达降低,CD31升高,呈现典型的内皮细胞表型,并且获得大量分泌血管内皮生长因子的能力.结论:采用Percoll分离液梯度离心继以贴壁筛选法及单克隆培养法联合筛选分离,可培养扩增}H高度同源的CD34+干细胞,经血管内皮生长因子基因转染后,CD34+干细胞呈典型的内皮细胞表型,验证了其具有向内皮细胞分化的潜能.
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国产与进口粒细胞集落刺激因子动员外周血造血干细胞的效果对照
为评估国产重组人粒细胞集落刺激因子在动员外周造血干细胞的效果,选择2001/2005收治的20例自体外周血造血干细胞移植患者,男11例,女9例,其中急性髓细胞白血病11例,急性淋巴细胞白血病5例,恶件淋巴瘤3例,多发性骨髓瘤1例.根据患者对约价承受能力分为2组:国产重组人粒细胞集落刺激因子动员组、进口重组人粒细胞集落刺激因子动员组,每组各10例,除急性髓细胞白血病采用大剂量阿糖胞昔动员外,其他均应用大剂量环磷酰胺动员,当白细胞降全低谷开始回升时加国产与进口重组人粒细胞集落刺激因子,白细胞升至5×109L-1以上开始采集外周血造血干细胞.所有患者均移植成功,两者在给药剂量、用约天数,采集干细胞质量、造血功能重建及药物毒副反应等方面差异均无显著性意义.
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无血清培养条件诱导人脐血间充质干细胞向神经细胞的分化
于2005-06,2007-09在南昌大学第二附属医院江西省分子医学重点实验室拟建立一种在无血清培养条件下诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化的方法.所用无血清培养基血清替代物是将纯化人转铁蛋白直接溶于DMEM培养基金,再将去毒后的BSA、超声波粉碎后的胆固醇、胰岛素及过氧化氢酶直接加入DMEM培养基中稀释至所需浓度.体外分离的脐血单个核细胞以1×109 L-1接种,加入含氢化可的松、纤维连接蛋白的无血清培养基,7d后消化传代.取传至2,5,8代的脐血间充质干细胞,达60%～70%融合时以含β-巯基乙醇、丁化羟基苯甲醚的无血清培养基诱导其向神经细胞分化.结果在无血清条件下能培养扩增出大蕈脐血间充质干细胞,融合后可继续传代扩增;不表达CD34、CD13和CD45,强表达CD166、CD29、CD105.较强表达CD54,80%以上细胞处于G0G1期;脐血间充质干细胞经诱导后,能形成具有典型神经元形态的神经细胞,神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经胶质元纤维酸性蛋白均呈阳性表达.提示在自行研制的无血清培养条件下可成功诱导脐血间充质干细胞向神经细胞分化.
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染色体16三体人胚胎干细胞系的建立
背景:研究显示部分人胚胎干细胞系存建系或体外培养过程中出现染色体异常的现象,建立染色体异常的人胚胎干细胞系.可分析染色体对人胚胎干细胞特性的影响.目的:拟建立染色体异常的人胚胎干细胞系.设计、时间及地点:细胞学体内外观察.于2006-10/2008-02在南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心完成.材料:冷冻人胚胎由南京大学医学院附属鼓楼医院生殖医学中心提供,4周龄NOD-scid鼠1只及ICR胎鼠成纤维细胞由南京大学医学院附属鼓楼医院实验动物中心提供.方法:将人冷冻胚胎解冻后,置于囊胚培养基中微滴培养,胚胎发育至扩张囊胚期时分离囊胚中的内细胞团,以ICR胎鼠成纤维细胞作为饲养层,机械法传代,建立的人胚胎干细胞系命名为NJGLChES2.主要观察指标:对10代以后的细胞进行核型分析,选择核型异常的人胚胎干细胞系鉴定其碱性磷酸酶和特异性标记物的表达.通过体外类胚体形成实验及体内畸胎瘤成瘤实验观察其分化能力.结果:NJGLChES2人胚胎干细胞系核型分析结果呈16号染色体三体(47,XX,+16),呈人胚胎干细胞克隆样生长,碱性磷酸酶和胚胎特异性标记物OCT-4,SSEA-3,SSEA-4,TRA-1-60,TRA-1-81的表达均为阳性.体外悬浮培养的NJGLChES2人胚胎干细胞可形成囊状拟胚体,体内接种至NOD-scid鼠腹股沟皮下后在接种部位可形成畸胎瘤,肿瘤组织含有来源于鳞状上皮、横纹肌和呼吸道黏膜上皮3个胚层的多种细胞类型.结论:成功建立16号染色体三体人胚胎干细胞系NJGLChES2,可长期稳定增殖并保持未分化状态,且在体内外具有多向分化潜能.
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非体外去T细胞单倍体外周血干细胞移植治疗恶性血液病
背景:应用亲属人类白细胞抗原单倍体相合供者进行造血干细胞移植,几乎可使所有需要移植治疗的患者都能在亲属间及时找到供?者.但由于人类白细胞抗原不合的免疫学障碍,应用常规方式移植不但排斥率高而且重度移植物抗宿主病发病率显著增高.目的:观察应用清髓性顶处理联合多种免疫抑制方案进行非体外去T细胞的人类白细胞抗原单倍体相合外周血干细胞移植治疗恶性血液病的疗效.设计、时间及地点:病例观察,于2002-07/2008-06在新疆医科大学第一附属医院血液科,血液病研究所完成.对象:恶性血液病患者42例,年龄10～48岁.供受者人类白细胞抗原配型1个位点不合者7例,2～3个位点不合者35例.方法:预处理方案为清髓性的,预防移植物抗宿主病均以环孢素加短程甲氨蝶呤为基础方案,人类白细胞抗原1个位点不合时加用霉酚酸酯,人类白细胞抗原2～3个位点不合时再加用抗胸腺细胞球蛋白及抗CD25单抗.移植物为经粒细胞集落刺激因子动员的未进行体外去除T细胞的外周血干细胞,移植的CD34+细胞11 × 106/kg.主要观察指标:观察患者移植物抗宿主病发生情况及移植后1,3,6,12及18个月供、受者人类白细胞抗原相合及单倍体移植受者T、B亚群变化.结果:42例患者均获得完全、持久供者千细胞植入,发生急性移植物抗宿丰病19例,Ⅰ度16例,Ⅱ度3例,2年累积发病率为50.8%;在随访大于6个月的31例患者中发生慢性移植物抗宿丰病23例,局限型20例,广泛型3例,2年累积发病率为57.1%,无患者死于移植物抗宿主病.人类白细胞抗原单倍体非去T细胞外周血干细胞移植后T、B亚群下降及恢复与人类白细胞抗原相合移植无统计学差片.结论:存小样本临床治疗中.应用清髓性预处理联合多种免疫抑制剂进行非体外去T细胞亲属间人类白细胞抗原单倍体相合外周血干细胞移植治疗恶性血液病安全有效,今后需扩大样奉量进一步证实其临床疗效.
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合成成骨生长肽对人骨髓间充质干细胞成骨转化的促进
背景:成骨生长肽在体内外细胞培养中具有明显的促成骨活性,这种促成骨作用的分子机制还不清楚,现已通过人工方法成功制备了合成成骨生长肽.目的:探讨合成成骨生长肽对体外培养的人骨髓间充质干细胞向成骨方向分化的作用.设计、时间及地点:基因和蛋白水平的细胞学体外观察,于2006-07/2007-12在福建省医学科学研究所基因工程实验室及复旦大学附属中山医院中心实验室完成.材料:骨髓标本来源于福建省立医院骨一科收治的男性髂骨植骨患者,合成成骨生长肽由中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所崔大敖教授惠赠,ERK1/2抑制剂UO126为美国CST公司产品.方法:密度梯度离心法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,单纯矿化液组加入由10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50 mg/L L-抗坏血酸组成的矿化液;10-7,10-9,1011 mol/L合成成骨生长肽组分别加入对应浓度的合成成骨生长肽,再加入矿化液;常规培养组加入含体积分数为0.1胎生血清的低糖DMEM.主要观察指标:倒置显微镜观察细胞形态变化,RT-PCR法和免疫组织化学染色检测成骨标志物的表达,Westem-blot法分析合成成骨生长肽对ERK1/2信号通路的影响,观察UO126对合成成骨生长肽作用的干预.结果:加入合成成骨生长肽后,骨髓间充质干细胞体积增大,突起增多,呈多角形,胞浆含有较多颗粒状物质,出现致密细胞结节.合成成骨生长肽在mRNA和蛋白水平均能促进成骨标志物碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原,骨钙素的表达,定量分析结果显示10-9mol/L合成成骨生长肽促成骨作用强.加入合成成骨生长肽后能够引起ERK1/2信号通路的持续性激活,经UO126预处理后几乎完全阻断了合成成骨生长肽对骨髓间充质干细胞的促成骨作用.结论:合成成骨生长肽可明显促进人骨髓间充质干细胞向成骨方向的转化,在10-9 mol/L浓度下促成骨能力强,其促成骨作用可能是通过激活MAPK家族ERK1/2途径实现的.
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Bayes判别分析全血细胞减少的分类诊断
背景:全血细胞减少的病因复杂,如能在骨髓穿刺检查前科学推断出患者病因的归类,显然有利于疾病的早期诊断并减少误诊的发生.目的:构建全血细胞减少分类诊断的判别函数.设计、时间及地点:判别分析,于2004-10/2008-02在解放军总医院第二附属医院血液科完成.对象:纳入107例初诊的全血细胞减少患者.方法:对全血细胞减少患者的临床资料进行回顾性分析,考察变量为伴随症状、体征和各项检验结果共15项指标,应用SAS软件构建定性资料的Bayes判别函数.主要观察指标:考察变量为血常规3项、血沉、乳酸脱氢酶、C反应蛋白、淋巴细胞比例、网织红细胞、平均红细胞体积、发热、出血、骨关节痛、肿大、水肿及皮疹等15项指标.结果:后确诊造血系统疾病92例(86%),其中恶性血液病52例(48.3%),非恶性血液病40例(37.7%),非造血系统疾病共15例(14%).按构成比从高到低顺序排列前6位疾病为骨髓增生异常综合征(28.0%)、再生障碍性贫血(15.7%)、急性白血病(11.1%)、自身免疫病(11.1%)、巨幼细胞性贫血(8.3%)、淋巴瘤及多发性骨髓瘤(6.4%).利用判别得分将已确诊的20例患者资料回代入判别函数.结果总体判别正确率达85%.结论:Bayes判别分析在全血细胞减少类疾病的鉴别诊断中能用于初步筛查,协助早期确诊.
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人羊膜间质细胞转化为膀胱平滑肌细胞
背景:目前国内外寻找膀胱平滑肌细胞替代细胞的研究均处于摸索阶段,间质干细胞移植是比较理想的选择,人羊膜间质细胞不仪有分化心肌细胞样特性,而且还可以分泌神经生长因子等,促进局部结构修复.目的:探讨人羊膜间质细胞植入大鼠冻伤膀胱后向平滑肌细胞的分化情况,及其对膀胱肌层本身修复的影响.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2006 10,2007-04在日本信州大学完成.材料:人羊膜取自健康足月妊娠产妇.清洁级雌性SD大鼠18只,随机分为正常膀胱细胞移植组、冻伤膀胱对照组、冻伤膀胱细胞移植组,6只,组.方法:羊膜剪碎后,与含胰蛋白酶的DMEM培养基混合,去除上皮细胞,加入含胶原蛋白酶、DNA酶的DMEM培养基,分离获取人羊膜间质细胞备用.冻伤膀胱对照组、冻伤膀胱细胞移植组大鼠用-70℃干冰制冷的铁棒冻灼膀胱顶部后侧,3d后膀胱壁冻伤处出现血肿,前者向血肿内.沣射DMEM培养液100μL,后者向血肿内注射等量人羊膜间质细胞悬液(105个细胞).正常膀胱细胞移植组直接将人羊膜间质细胞移植入正常膀胱肌层中.3周后切取含部分尿道的膀胱组织,制备膀胱切片标本.主要观察指标:采用苏木精-伊红染色观察膀胱平滑肌修复情况,荧光免疫组织化学检测膀胱壁中人羊膜间质细胞的分化.结果:与正常膀胱细胞移植组比较,冻伤膀胱细胞移植组膀胱壁肌层结构趋于正常,纤维化少见,平滑肌细胞增殖良好;冻伤膀胱对照组膀胱壁修复缓慢.肌层结构紊乱,出现不同程度的纤维化,呈瘢痕样,且有炎症细胞存在.3周后正常膀胱组织内未找到人羊膜间质细胞,冻伤膀胱细胞移植组膀胱肌层中仍有大量人羊膜间质细胞存活,且少量已分化为膀胱平滑肌细胞.结论:人羊膜间质细胞具有分化为膀胱平滑肌细胞的潜能,同时可以促进损伤膀胱壁肌层自身修复.
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益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞的分化
背景:既往研究证明益气活血方补阳还五汤具有抑制脑缺血及再灌注模型细胞凋亡、抗自由基等作用,但关于本方剂对干细胞分化影响的报道较少.目的:观察益气活血方体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用.设计、时间及地点:以细胞为对象,对比观察实验,于2006-03/2008-02在河南省中医药研究院国家中医管理局三级实验室进行.材料:清洁级一二月龄SD大鼠20只,雌雄各半,体质量100～150g.益气活血方由本院制剂室生产,选用当归60g,桃仁30g,川芎30g加水720mL,提取挥发油,备用.药渣及提取液加入黄芪1 200g,赤芍60g,地龙30 g,红花30g,再加入920mL.水,煎煮1h,滤过,药渣再加入8 640mL.水,煎煮1h,滤过,合并2次煎液,浓缩至600 mL.,加入挥发油及吐温-80 3 mL,混匀,装瓶进行高压高温消毒.每毫升相当于生药2.4 g.方法:采用密度梯度离心法分离获取SD大鼠骨髓单个核细胞层,将细胞经过传代培养使骨髓间充质干细胞得到扩增和纯化.将第10代的细胞悬液接种于直径40 mm塑料培养皿中,细胞生长达80%～90%融合时,加入含体积分数为0.10的FBS、碱性成纤维细胞生长因子的DMEM培养基培养24 h,益气活血方组而后换为含诱导液二甲业砜、丁羟茼醚、β-巯基乙醇、益气活血方诱导5h,对照组换为含诱导液二甲亚砜、丁羟茴醚、β-巯基乙醇诱导5h.主要观察指标:采用流式细胞仪鉴定骨髓间充质干细胞;用免疫细胞化学方法检测诱导后细胞巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋向的表达.结果:经流式细胞仪检测显示,细胞表面标志CD90、CD106阳性,CD45、CD34呈阴性.免疫细胞化学方法检测显示,益气活血方组在诱导1,3h分化巢蛋白细胞与诱导5h分化的神经元特异性烯醇化酶细胞和胶质纤维酸性蛋白细胞,与对照组相比,差异显著(P<0.01).结论:益气活血方具有体外定向诱导骨髓间充质干细胞向神经细胞分化的作用.
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酒精性肝硬化患者血清诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为肝细胞样细胞
背景:肝脏损伤后机体能够分泌一系列细胞因子和化学增活素,重型肝病患者血清中肝细胞生长因子、成纤维细胞生长因子等具有诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化的作用.目的:探讨在酒精性肝硬化患者血清诱导条件下,人骨髓间充质干细胞向肝细胞样细胞的定向分化情况.设计、时间及地点:细胞学体外观察.于2006-07/2007一07在吉林省肝胆病医院科研室完成.材料:创伤患者术后废弃肋骨,由吉林省人民医院胸外科提供.实验血清来源于吉林省肝胆病医院住院的1例40岁男性酒精性肝硬化患者.方法:冲洗骨髓腔,采用密度梯度离心、贴壁培养法体外分离培养人骨髓间充质干细胞,接近融合时按1:4传代扩增.取第3代人骨髓间充质干细胞,按1×107 L-1密度接种,设立2组:诱导组加入含体积分数为0.2酒精性肝硬化患者血清的L-DMEM培养基,对照组仅加入常规L-DMEM培养基.主要观察指标:相差显微镜下观察细胞形态变化,免疫组化法检测甲胎蛋白和白蛋白的表达.结果:诱导组骨髓间充质干细胞在含体积分数为0.2酒精性肝硬化患者血清的L-DMEM培养基中生长状态良好,呈类上皮样细胞形态:对照组细胞未发生形态学改变,呈成纤维细胞样.培养7 d时,诱导组大部分细胞呈甲胎蛋白阳性,随培养时间延长甲胎蛋白表达减弱,而白蛋白阳性表达情况完全相反,呈逐渐增强趋势;整个培养过程对照组细胞始终未出现甲胎蛋白及白蛋白表达.结论:密度梯度离心和贴壁培养法相结合可在体外分离获得纯度较高的人骨髓间充质干细胞,酒精性肝硬化患者血清能够诱导人骨髓间充质干细胞表达甲胎蛋白及白蛋白,向肝细胞样细胞分化.
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富血小板血浆对人骨髓间充质干细胞成骨诱导的影响
背景:富血小板血浆足经过特殊方法提取的血小板含量丰富的血浆,相较普通血清含有更丰富的细胞因子,如血小板衍生因子、转化生长因子β、血管内皮生长因子等.目的:观察富血小板血浆对成骨诱导人骨髓间充质干细胞生物学特性的影响,拟探讨促进人骨髓间充质干细胞的增殖与诱导成骨细胞的培养方法.设计、时间及地点:配对样本对比观察,于2007-03/2008-03在中山大学组织工程实验室完成.对象:18名健康志愿者,男12名,女6名,平均年龄27.5岁.随机分为3组:富血小板血浆组、胎生血清组、无血清对照组,每组6人.方法:抽取18名健康志愿者自体外周静脉血获取富血小板血浆.采用密度梯度离心法获取健康志愿者骨髓间充质干细胞,常规原代培养,传代诱导培养时根据分组情况,分别采用10%AB型血清、10%自体富血小板血浆与无血清,配比高糖DMEM培养基、50mg/L抗坏血酸、1008mol/L地塞米松、103mol/L-β甘油磷酸钠.主要观察指标:倒置相差显微镜、扫描电镜观察各组细胞彤态,MTT法检测细胞增殖情况,细胞碱性磷酸酶活性、骨钙素水平.结果:3组细胞均存接种后12～24 h开始贴壁,并由圆形逐步变化为梭型、多角形、有多个突起的不规则形状等.细胞传代诱导培养后,富血小板血浆组与胎生血清组细胞生长迅速,明显快于无血清对照组(P<0.05).从传代培养第2、4、6代的细胞生长看,随着培养时间的延长富血小板血浆组细胞增殖明显快于胎生血清组.3组细胞碱性磷酸酶活性与骨钙素随诱导时间的延长而增高,培养第3,6,9,12天胎生血清组碱性磷酸酶活性较富血小板血浆组低,培养第15天两组无明显差异.培养第3,6,9天富血小板血浆组细胞内骨钙素含量与胎生血清组无明显差别,12 d后明显高于胎生血清组.无血清对照组碱性磷酸酶活性及骨钙索含量较富血小板血浆组变化程度明显减小.并且各时间点碱性磷酸酶活性与骨钙素含量均低于富血小板血浆组(P<0.01).结论:自体富血小板血浆能够有效加快人骨髓间充质干细胞的增殖,并能有效促进诱导培养的人骨髓间充质干细胞成骨特性表达.
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当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠CD34+细胞及其Fas抗原表达的影响
背景:前期实验已证实当归注射液能改善再生障碍性贫血小鼠骨髓微环境,促进造血细胞增生.能增加细胞周期蛋白D2表达,促进细胞从G1→S期的转换.目的:拟证实当归注射液对免疫诱导再生障碍性贫血小鼠CD34+细胞及其Fas抗原表达的影响.设计、时间和单位:完全随机区组设计的细胞分子学实验,于2005-11/2006-04在武汉大学人民医院儿科研究所进行.材料:选用8～12周龄雌性(H-2a、MLSbBalb/c小鼠作为受体,制作再生障碍性贫血模型.选用DBN2小鼠(H-2a、MLsa)8～10周龄作为供体.方法:将雌性Balb/c小鼠随机分为3组:对照组、模型组和治疗组,每组8只.模型组和治疗组动物建立再生障碍性贫血模型.对照组不经照射.于造模当天开始.模型组和对照组腹腔注射无菌生理盐水10 mL(kg·d),治疗组腹腔注射当归沣射液10mL/(kg·d),1次/d,连续12d.主要观察指标:于第12天每只小鼠采集尾静脉血测外周血自细胞计数,取出股骨,计数骨髓单个核细胞.酶联免疫法检测肿瘤坏死因子α表达水平,经流式细胞仪检测骨髓单个核细胞CD34+细胞及CD34+细胞Fas抗原表达.结果:模犁组和治疗组小鼠外周血白细胞及骨髓单个核细胞计数均明显低于对照组.治疗组明显高于模型组(P<0.01).模型组CD34+抗原表达水平明显低于对照组,治疗组CD34+抗原表达水平明显高于模型组(P<0.01).已接近对照组水平.对照组CD34+细胞Fas抗原表达低,模型组Fas抗原表达明显升高,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.01),表明细胞增殖受影响.治疗组Fas抗原的表达低于模型组(P<0.01).模型组小鼠肿瘤坏死因子α表达明显高于对照组,治疗组明显低于模型组(P<0.01).结论:当归注射液可能通过降低负调控因子肿瘤坏死因子α水平,减少细胞凋亡,促进再生障碍性贫血小鼠造血细胞的增殖.
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人脐带血和骨髓来源间充质干细胞的体外分离、培养、分化及生物学特性比较
背景:间充质干细胞由于具有自我更新能力且在适宜微环境下具有多向分化潜能,近年来已成为细胞领域的研究热点.目的:对比观察脐带血与骨髓来源的间充质干细胞其体外分离、纯化及培养条件,并对其进行生物学特性比较.设计:体外细胞学对比观察.材料:新鲜脐带血在征得产妇同意后采集.骨髓由健康的成年志愿者捐赠.方法:取脐带血和成人骨髓分离、培养并纯化间充质干细胞,对获得的间充质干细胞进行形态学观察.主要观察指标:两种来源间充质干细胞的形态和生长特性;流式细胞仪检测脐带血间充质干细胞表面抗原的表达情况;对脐带血间充质干细胞多向分化的能力进行鉴定.结果:两种来源的单个核细胞经体外培养贴壁后均出现间充质样细胞,原代骨髓间充质干细胞的贴壁时间和培养时间均短于脐带血间充质干细胞,两种细胞传代生长呈共同特性:传代培养潜伏期为24～36h,传代培养对数增殖期为接种后3～7d,接种后八九天,生长进入平台期:脐带血来源的间充质干细胞表达相关抗原CD29、CD44、CD105;但不表达造血细胞抗原CD34、CD45:脐带血间充质干细胞可诱导分化为脂肪细胞、成骨细胞.结论:人脐带血和骨髓来源间充质干细胞均可在体外分离培养、扩增:脐带血的间充质干细胞原代贴肇时间、形成细胞克隆的时间、集落交错融合的时间均较骨髓间充质干细胞晚,传代培养的细胞形态,生长速度均无明显差异;两种来源的间充质干细胞具有相同的表面标志物;脐带血间充质干细胞有多项分化潜能,可诱导为脂肪细胞、成骨细胞.
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依达拉奉体外定向诱导人间充质干细胞向神经元样细胞的分化
背景:依达拉奉作为新型氧自由基清除剂,一般用于抑制脂质过氧化反应,减轻脑水肿,保护神经细胞.目的:观察依达拉奉体外定向诱导人骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的可行性.设计、时间及地点;细胞学体外观察,于2007-12/2008-09广东医学院附属医院中心实验室完成.材料;骨髓来源于创伤所致闭合性股骨骨折的成年患者.由广东医学院附属医院骨科提供.依达拉奉由南京先声药业生产,批号P2007123144254453.方法:无菌抽取的骨髓经肝素化后,采用密度梯度离心法及贴壁筛选法分离获得人骨髓间充质干细胞,传至第5代按1×108L-1接种于6孔板内,设立2组,依达拉奉组细胞达50%融合时用含碱性成纤维生长因子、胎生血清的L-DMEM预诱导24 h,PBS洗涤后再用20 mg/L依达拉奉无血清L-DMEM诱导24 h;空白对照组始终用含体积分数为10%胎生血清的L-DMEM培养,不加任何预诱导剂和诱导剂.主要观察指标:诱导分化后细胞形态变化,SP法免疫细胞化学鉴定神经元烯醇化酶、巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白及微管相关蛋白2的表达.结果:体外诱导1h后,依达拉奉组胞体收缩,2h后形成较长突起,5h后呈典型神经元样细胞;空白对照组细胞仍呈对称的梭形,无突起形成.免疫组化结果显示,诱导6 h后依达拉奉组神经元样细胞的胞体及部分突起呈棕黄色,强表达神经元烯醇化酶,弱表达胶质纤维酸性蛋白和巢蛋白,不表达微管相关蛋白2:空白对照组上述4种特异性抗原均呈阴性表达.结论:人骨髓间充质干细胞经依达拉奉体外诱导后,所分化的细胞具有神经元表型,但还不够成熟,处于向成熟神经元分化的中间阶段.
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pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ载体构建及在兔骨髓间充质干细胞中的表达
背景:过氧化物酶体增殖物激活受体γ是细胞分化重要的调控因子,通过调节其他转录因子的表达,参与调节骨髓间充质干细胞的分化.目的:构建pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ真核表达载体,体外转染兔骨髓间充质干细胞,为过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体功能和基于过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体靶点的药物筛选提供分子研究平台.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-09/2008-07在南华大学附属一医院临床研究所完成.材料:选择雄性2-5月龄新两兰大白兔,用丁分离培养骨髓间充质干细胞.方法:应用密度梯度离心法分离骨髓间充质干细胞,贴壁法不断纯化.从正常小鼠的肝组织中提取总RNA,反转录-聚合酶链反应法获得过氧化物酶体增殖物激活受体γcDNA.经Xho Ⅰ,Apa Ⅰ双酶切,定向克隆到真核表达载体pEGFP-N1,构建重组质粒pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ.主要观察指标:经酶切分析和测序鉴定重组质粒中过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因的完整性和真实性,脂质体介导下体外转染骨髓间充质干细胞,荧光倒置显微镜下观察瞬时表达及转染效率,提取总RNA和总蛋白,进行反转录-聚合酶链反应和Western blot检测.结果:获得的过氧化物酶体增殖物激活受体γ基因片段经酶切和测序鉴定正确,重组质粒经酶切和测序鉴定证实构建正确,成功转染骨髓间充质干细胞,在其中检测到目的基因及蛋白表达.结论:实验成功构建了pEGFP-N1-过氧化物酶体增殖物激活受体γ重组质粒,同时在转染的骨髓间充质干细胞中获得了过氧化物酶体增殖物激活受体γ的高效表达.
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自体外周血干细胞和骨髓干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症52例效果比较
背景:无论是骨髓干细胞移植还是外周血干细胞移植治疗肢体缺血的疗效在动物实验和临床上均得到证实.然而,二者疗效谁更优秀?目的:多指标客观对比评估自体骨髓干细胞和外周血干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症的临床效果.设计、时间及地点:对比观察,临床病例分析,于2003-09/2008-01在河南省人民医院完成.对象:52例糖尿病下肢闭塞症患者,男27例,女25例,平均(69±6)岁.随机分为2组,自体骨髓干细胞移植组(n=30)和外周血干细胞移植组(n=22),方法:自体骨髓干细胞移植组(n=30)和外周血干细胞移植组(n=22),2组均接受内科综合治疗,在此基础上分别进行自体骨干细胞移植和外周血干细胞移植.主要观察指标:移植前后疼痛、冷感、间歇性跛行、踝肱指数变化.结果:移植2周后,2组患者下肢疼痛症状明显缓解率、好转率、无效率2组比较,差异均无统计学意义(P>0.01),冷感明显缓解率、好转率、无效率比较,差异均无统计学意义(P>0.01).间歇性跛行明显缓解率、好转率、无效率2组比较,差异均无统计学意义(P>0.01).踝肱指数变化2组比较,差异亦无统计学意义(P>0.01).所有患者未出现并发症和不良反应.结论:自体骨髓干细胞和外周血干细胞移植治疗糖尿病下肢动脉闭塞症都是一种简便、安全、有效的治疗方法,疗效基本相当.
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体外诱导脐血单核细胞向破骨样细胞的分化
背景:正畸牙齿移动的基础是牙周组织的改建,其中破骨细胞性骨吸收是牙齿移动的第一步,应力作用下有关破骨细胞分化和功能成熟的信号转导通路,以及牙周膜细胞和破骨细胞之间的关系是目前国内外研究的热点之一.目的:拟建立人破骨样细胞体外培养的简便方法,观察骨吸收刺激因子对破骨样细胞分化、增殖和功能的影响.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-10/2008-05在西安交大口腔医院中心实验室完成.材料:脐带血来源于非高危妊娠的健康产妇,新鲜牛股骨由西安交通大学动物实验中心提供,用于制备100～200μm厚的骨片,1α,25-(OH)2D3、巨噬细胞集落刺激因子、前列腺素E2等骨吸收刺激因子均为Sigma公司产品.方法:无菌条件下收集脐带血,Ficoll液分离后吸取呈云雾状的白膜层,离心弃上清,加入α-MEM培养液重悬,调整脐血单核细胞浓度为1×109L-1,接种于预置盖玻片和骨片的24孔培养板中,1.0 mL/孔,设立空白对照组、10-8mol/L及107mol/L1α,25-(OH)2D3组、巨噬细胞集落刺激因子组、1α,25-(OH)2D3+前列腺素E2组,培养7d.主要观察指标:倒置显微镜观察细胞生长形态,TRAP染色法观察破骨样细胞的形成,甲苯胺蓝色观察骨吸收陷窝情况,以TRAP染色(+)、细胞核≥2个的细胞为破骨样细胞进行计数.结果:培养3d后,空白对照组细胞形态及数量无明显变化,各诱导组单核细胞出现融合趋势;7d时空白对照组出现少量的破骨样细胞,核的数目2～3个,各诱导组可见大量多核破骨样细胞,核的数日3～20个不等.诱导后光镜下可见胞浆呈红色、胞核呈淡黄色的TRAP(+)破骨样细胞,尤其是108mol/L 1α,25-(oH)2D3组可见含14个核的强阳性破骨样细胞,且胞体较大.各组均尚未形成骨吸收陷窝.与空白对照组比较,各诱导组破骨样细胞数量均明显增多(F=9.78,P<0.01);与10-8mol/L1α,25-(OH)2D3组比较,107mol/L1α,25-(OH)2D3组破骨样细胞数量无明显变化(P>0.05),巨噬细胞集落刺激因子组及1α,25-(OH)2D3+前列腺素E2组破骨样细胞数量均明显减少(F=7.46,P<0.01).结论:脐血单核细胞经骨吸收刺激因子体外诱导培养后,可分化为TRAP(+)的多核破骨样细胞,其中10-8mol/L 1α,25-(OH)2D具有强的生物学效应.
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疏密波佳波段组合诱导大鼠骨髓间充质干细胞向软骨细胞的分化
背景:已证实疏密波对病变组织有兴奋作用,能够促进病变组织的新陈代谢,课题组前期研究发现其对骨关节炎具有良好的治疗作用.目的:探讨疏密波诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的佳波段组合,并从分子生物学水平阐明疏密波调控骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化的机制.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2006-10/2008-03在福建中医学院中两医结合研究院完成.材料:清洁级健康4周龄SD人鼠45只,由上海斯莱克实验动物有限责任公司提供.疏密波发射仪由福州大学生物医学仪器研究所提供.根据同一周期疏密波比例的不同,分为以下3种工作模式:模式Ⅰ为疏波:密波=1:1,模式Ⅱ为疏波:密波=2:1,模式Ⅲ为疏波:密波=1:2.方法:抽取大鼠骨髓液,用全骨髓贴壁培养法体外分离纯化培养大鼠骨髓间充质干细胞.取传至第3代细胞,接种后加入含体积分数为0.15胎生血清的DMEM培养液,根据仪器T作模式的不同分为:疏密波1:1组、疏密波2:1组、疏密波1:2组、空白对照组.各诱导组按干预时间的不同又分为2个亚组:诱导30 min和诱导60 min,每天诱导1次,共14d.主要观察指标:RT-PCR半定量分析Cbfa1 mRNA及Sox9mRNA的表达,甲苯胺蓝染色检测糖胺聚糖的表达,免疫组化染色检测Ⅱ型胶原基质的表达.结果:体外培养14d可获得均质性较好的骨髓间充质干细胞,传至第3代CD45阳性率为1.91%,CD90阳性率为98.22%.诱导14d后,各疏密波诱导组Cbfa1 mRNA,Sox9 mRNA均呈阳性表达,而空白对照组未表达.甲苯胺蓝染色可见诱导后细胞胞质和细胞外基质异染,空白对照组无明显异染:免疫组化染色可见各诱导组多数细胞的胞浆呈棕黄色阳性表达,且疏密波1:2组Ⅱ型胶原的表达优于疏密波2:1组,疏密波2:1组优于疏密波1:1组,空白对照组细胞为阴性表达.结论:疏密波能诱导大鼠骨髓间充质干细胞体外分化为软骨细胞表型,且疏波:密波=1:2的波段组合效果佳,其作用主要足通过上调Cbfa1 mRNA和Sox9 mRNA的表达进而促进糖胺聚糖和Ⅱ型胶原基质的表达来实现的.
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间充质干细胞在眼科领域的研究与应用
目前间充质干细胞治疗主要应用于局部移植、系统移植、结合干细胞的基因治疗以及组织工程领域.基于间充质干细胞易于分离培养、扩增,易于外源基因的导入和表达,在体外长期培养的过程中始终保持多向分化潜能,遗传背景相当稳定,在眼组织上程中具有广泛的应用前景.目前国内外已有大量研究证实间充质干细胞可分化为角膜及视网膜细胞,间充质干细胞在眼前节的应用多借助于某种载体,如羊膜、纤维凝胶膜等,另外温度敏感培养皿实现了无载体的眼表干细胞移植;在眼后节的应用重点集中于寻找治疗视嘲膜色素变性可行的治疗方法上.间充质干细胞作为种子细胞参与眼部受损组织修复与再生的研究趋于成熟,但其致瘤性及安全性还有待进一步解决.
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骨髓间充质干细胞在多学科领域的临床应用
组织工程允许获取患者自已的细胞,并将其种植在生物可降解的支架上,从而获得一个特定的组织或器官,比如骨骼、软骨、肌腱甚至心脏,这些组织或器官可以用来修复由于疾病或创伤所致的组织或器官缺损.大量动物实验已证明骨髓间充质干细胞在治疗神经系统疾病、肝脏疾病、呼吸系统疾病和肾脏疾病等方面具有显著效果,治疗的主要途径是局部植入和全身移植.骨髓间充质干细胞比体细胞具有更高的增殖活性,因此将基因修饰的干细胞用于基因治疗前景广阔,可以很好的将基因和蛋白输送到那些需要的器官或组织中.
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人胎盘来源干/祖细胞的研究进展
胎盘组织含有一些具有干/祖细胞潜能和免疫调节功能的细胞,并且胎盘组织容易得到,不需要侵入性操作,对其研究不会涉及伦理道德问题,目前已成为寻找人类干/祖细胞新来源的研究热点.日前研究丰要集中在胎盘不同部位分离的间充质基质细胞和从羊膜分离的上皮细胞.由于胎盘结构的复杂性,迫切需要尽可能明晰地确定这些细胞的来源区域和分离方法.
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神经干细胞工程化的研究进展
神经干细胞具有自我更新能力和多分化潜能,随着神经干细胞分离培养技术日渐成熟和深入,许多研究者对神经干细胞进行人工改造,产生了工程化的神经干细胞,如可示踪的神经干细胞、有治疗基因的神经干细胞、把神经干细胞改造成永生化的神经干细胞.文章对神经干细胞的基本特性及近年来神经干细胞工程化的研究进展做一综述.
