中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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急性脑卒中引发心肌酶谱变化及针刺干预效果
目的:分析急性脑卒中病变性质、部位与心肌酶谱变化的关系,并观察不同针刺方法对脑卒中引发心脏损伤患者心肌酶谱的影响.方法:①于2000-11/2003-02天津中医学院第一附属医院针灸部住院的急性脑卒中患者126例,纳入急性脑卒中引发心脏损伤患者108例,脑梗死患者72例,脑出血患者36例.均对治疗方案知情同意.随机将脑卒中后心脏损伤患者108例分为2组:针刺观察组和针刺对照组,每组54例.另选本院同期健康体检者50人为健康对照组,均对检测项目知情同意.②两组在常规治疗同时配合针刺治疗,针刺观察组以"醒脑开窍、清心通络"针刺为法,取穴以阴经穴、督脉穴为主,取穴:内关、人中、人迎、三阴交、风池、极泉、尺泽、合谷、委中.且针刺操作严格遵循手法量学标准进行;针刺对照组沿用传统"风取三阳"、"治痿独取阳明"的理论,取穴:神门、通里、膻中、间使、血海、肩髑、曲池、环跳、阳陵泉、昆仑,随证补泻.两组均从入院当天至第7天进行针刺干预,1次/d,施术后留针30 min.③采用全自动生化分析仪测定针刺观察组、针刺对照组新发病及治疗1周后及健康对照组的肌酸肌酶及其同工酶、乳酸脱氢酶、α-羟丁酸脱氢酶活力.④计量资料差异比较采用单因素方差分析.结果:脑卒中后心脏损伤患者108例和健康者50人均进入结果分析.①脑出血患者心肌酶活力明显高于健康对照组(P＜0.01);脑梗死患者心肌酶谱中仅肌酸激酶活力明显高于健康对照组(P＜0.01);脑出血患者肌酸肌酶及其同工酶、乳酸脱氢酶活力明显高于脑梗死患者(P＜0.01).②左侧基底核、丘脑卒中患者其肌酸激酶及其同工酶活力明显高于右侧(P＜0.01);脑干卒中患者的肌酸肌酶及其同工酶活力明显高于除右侧基底核、丘脑外的其他部位(P＜0.01).③治疗前针刺观察组和针刺对照组心肌酶活力明显高于健康对照组(P＜0.01).针刺观察组治疗1周后心肌酶活力明显低于治疗前和针刺对照组治疗1周后(P＜0.05,0.01),针刺对照组治疗1周后与治疗前比较,仅肌酸激酶同工酶活力下降(P＜0.01).结论:①急性脑卒中可导致心肌酶谱异常,脑出血患者心肌损伤程度较脑梗死患者严重,脑干及左侧基底核、丘脑的卒中易导致心肌损伤.②针刺对急性脑卒中引发的心肌损伤具有保护作用,且以"醒脑开窍、清心通络"为原则,取穴以阴经穴、督脉穴为主的的针刺方法作用效果优于以传统"风取三阳"、"治痿独取阳明"的理论为指导的针刺方法.
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择时治疗椎基底动脉短暂缺血性眩晕的疗效及对血脂的调节
背景:椎基底动脉短暂缺血性眩晕是脑卒中的预报信号,发病多与动脉粥样硬化有关,可以是脑梗死的前驱症状,任其自然发展约有1/3患者在以后数年内会发生脑梗死,尤其是在第1次短暂缺血发作后1～6个月是发病的高危时期,因此早期治疗甚为重要.目的:观察运用时间治疗学治疗椎基底动脉短暂缺血性眩晕的疗效及对血脂、脂蛋白、载脂蛋白的调节作用.设计:完全随机分组设计,对比观察.单位:青岛大学医学院中医教研室.方法:①选择2003-01/2004-06青岛大学医学院附属松山医院中医科住院椎基底动脉短暂缺血性眩晕患者66例,男47例,女19例.患者均对检测项目知情同意.随机分为2组:择时治疗组38例和不择时治疗组28例.②择时治疗组:选择每日辰时(7:00～9:00)应用足三里穴进行温针灸,每日针灸1次,每次每穴留针20 min,配合中药葛根通络汤,1次/d,辰时一次性温服,10 d为1个疗程.不择时治疗组:除辰时以外,随意选择时间治疗,其治疗方法与择时治疗组相同.治疗前后用酶法测血清总胆固醇、三酰甘油、载脂蛋白A1与载脂蛋白B100;用沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇,低密度脂蛋白胆固醇及极低密度脂蛋白胆固醇.3个疗程结束后评定疗效.③计数和计量资料差异比较采用χ2和t检验.主要观察指标:①两组治疗前后血脂变化.②两组治疗后疗效比较.结果:椎基底动脉短暂缺血性眩晕66例患者均进入结果分析.①3个疗程结束后,择时治疗组显著好转率明显高于非择时治疗组[79%(30/38),43%(12/28),P＜0.01].②择时治疗组治疗后总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B 100水平明显低于治疗前和对照组治疗后(P＜0.05～0.01),高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1水平明显高于治疗前和对照组治疗后(P＜0.05～0.01).对照组治疗后总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白B100明显低于治疗前(P＜0.05～0.01),高密度脂蛋白胆固醇明显高于治疗前(P＜0.01).结论:选择适当的时间针灸并药物治疗椎基底动脉短暂性缺血性眩晕的疗效显著好于非择时治疗,且可更有效地降低血脂水平.
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寒湿痹颗粒治疗寒湿痹阻型风湿病的效果分析
背景:寒湿痹颗粒主治寒湿痹阻证风湿病.目的:观察寒湿痹颗粒对寒湿痹阻症风湿病患者的干预效果及安全性,并以正清风痛宁为对照药物,进行对比观察.设计:病例随机对比观察.单位:河南省洛阳正骨医院.对象:选择2000-05/2002-02在河南省洛阳正骨医院就诊的寒湿痹阻型风湿病患者400例,均自愿参加观察.寒湿痹颗粒由附子、制川乌、黄芪、威灵仙等10多种中药组成,每袋10 g;正清风痛宁片规格为每片20 mg.方法:采用随机化原则,根据就诊顺序将病例按观察组:对照组=3:1的比例分配.观察组给予寒湿痹颗粒,1袋/次,3次/d,冲服.对照组给予正清风痛宁片,口服2片/次,3次/d,1周后无不良反应加至3片/次,3次/d.类风湿关节炎和强直性脊柱炎患者服药2个月为1个疗程;膝关节骨关节炎患者服药1个月为1个疗程.检测并记录血沉、C-反应蛋白、类风湿因子、血尿酸等的变化情况.评估标准:①证候疗效评定:显效:治疗后症状明显好转,症状积分0～1分或下降≥2/3;有效:治疗后症状改善,症状积分下降≥1/3.②症状疗效评定:显效为关节疼痛、肿胀、压痛、晨僵和功能障碍等各项症状经治疗症状计分减至0分或减少2分者;有效为经治疗症状计分减少1分者.③疾病总疗效评定:显效:症状、体征基本消失,实验室主要检查指标明显改善,下降度≥50%;有效:症状、体征减轻,实验室主要检查指标有改善.主要观察指标:①两组患者的总临床疗效、不同症状疗效及不同病种疗效.②寒湿痹颗粒的安全检测结果.结果:纳入病例400例,观察组300例,对照组100例.观察组脱落19例,统计病例281例;对照组脱落6例,统计病例94例.①两组患者的总临床疗效比较:观察组总有效率显著高于对照组(94.31%,84.04%,P＜0.01).②两组患者不同症状疗效比较:两组患者在关节疼痛、肿胀、压痛、功能障碍及晨僵等方面的疗效比较,差异均无显著性意义(P＞0.05).③两组患者不同病种疗效比较:两组患者在类风湿关节炎、强直性脊柱炎、膝骨关节炎等不同病种方面进行疗效比较,差异均无显著性意义(P＞0.05).④寒湿痹颗粒的安全检测结果:治疗前有部分患者尿常规异常,经治疗均得改善;部分患者治疗前心电图呈ST-T波改变,服药后无明显加重.结论:寒湿痹颗粒和对照药物正清风痛宁片均可以显著改善寒湿痹阻型风湿病关节疼痛、肿胀、压痛、功能障碍及晨僵等症状,但寒湿痹颗粒的干预效果优于对照药物,且无明显的不良作用,可作为治疗寒湿痹阻型风湿病的一种安全有效的药物.
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中国汉族男性冠状动脉粥样硬化性心脏病患者中医证型与ABCA1基因R219K多态性的关联性
目的:探讨不同中医证型血瘀证、痰浊证、非痰浊血瘀证汉族男性冠状动脉粥性硬化性心脏病(简称冠心病)患者发病与ABCA1基因多态性相关性.方法:①选择2003-01/2005-07南方医科大学南方医院心血管内科和中医内科就诊的120例男性冠心病患者,选取典型血瘀证22例,痰浊证23例,非痰浊血瘀证22例,均经冠状动脉造影等检查证实.另选本院健康工作人员20名为健康对照组,排除血缘关系,且各组年龄、身高、血压差异不明显(P＞0.05).均签署知情同意书.②用基因组试剂盒提取血液中DNA,采用聚合酶链式反应结合限制性内切酶片段长度多态性方法检测ABCA1基因型.同时检测血清总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇.③组间中医证型、基因型频率和等位基因频率分布使用χ2检验;血脂指标与证型及基因型在的比较分析采用多因素方差分析方法.相关基因、危险因素与冠心病证型的相关性用多项Logistic模型分析,遗传平衡检验采用Hardy-Weinberg平衡定律.结果:冠心病患者67例和健康者20名均进入结果分析.①中国汉族87例受试者中RR,RK,KK基因型频率分别为32.18%,42.53%,25.28%,等位基因R,K的频率分别为0.53和0.47.经检验基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡,达到了遗传平衡,具有群体代表性.②健康对照组与冠心病患者在基因型分布和等位基因频率分布构成比两方面差异明显(P＜0.01).血瘀证、痰浊证冠心病患者219KK基因型及K等位基因频率明显低于非痰浊血瘀证患者、健康对照组(P＜0.05,0.01).血瘀证、痰浊证与基因型相关性分析显示KK基因型OR＜1.③对血瘀证及痰浊证冠心病患者各基因型间总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆固醇分析结果表明,RR和RK基因型高密度脂蛋白胆固醇水平明显低于KK基因型(P＜0.05,0.01),各基因型高密度脂蛋白胆固醇水平呈现RR→RK→KK的递增趋势.进一步多项Logistic分析显示,在α=0.05水平,RR和RK基因型为血瘀证、痰浊证发病的危险因素(P＜0.05或P＜0.01,95%CI不包含1).结论:①ABCA1基因K等位基因可能是中国汉族男性冠心病发病的保护基因.②携带K等位基因的患者高密度脂蛋白胆固醇水平高.③ABCA1基因K等位基因可能是冠心病痰浊证、血瘀证的保护因素.
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石氏脑卒中单元促进脑卒中患者全面康复的效应
目的探讨具有中医特色的石氏脑卒中单元对脑卒中患者进行全面康复的理想程度.方法对石氏脑卒中单元的形成发展、结构构成、诊治程序、单元特色做一简单介绍,列举了针灸、中药、推拿、早期康复相结合的治疗体系对脑卒中及并发症的临床效果.结果以醒脑开窍针刺法为主的石氏脑卒中单元中西医并用,将多学科、多系统的诊疗观有机地溶为一体,在降低病死率,减少并发症,提高康复率及患者生活质量方面具有显著疗效.结论设立中国特色的脑卒中单元是各级医院努力的方向.石氏脑卒中单元疗法作为国家中医药管理局科技成果推广项目向全国推广,进一步完善并探讨其运行模式、实施和效果,将对脑卒中的防治和建立具有中医特色的脑卒中单元产生深远影响.
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一氧化氮在偏头痛发病中的作用
目的:探讨一氧化氮在偏头痛发病中的作用.方法:从一氧化氮为偏头痛发生的关键因子的假说,防治偏头痛的药物与一氧化氮的关系,一氧化氮致头痛发生的临床研究几方面探讨一氧化氮在偏头痛发病中的作用.结果:硝酸甘油的运用引发人类头痛,这种现象头痛与偏头痛自发发作相似,使人们认识到一氧化氮在偏头痛发生中的作用.近年来提出一氧化氮为偏头痛发生的关键因子,并为引发头痛发生的一系列级联反应的始动因子.一些防治偏头痛药物的研究和相关的临床研究表明一氧化氮与偏头痛之间有密切的关系.结论:一氧化氮在偏头痛的发生中起重要作用,它不仅扩张血管,还可引发神经源性炎症,激活伤害感觉神经元的敏感性,介导机体内痛觉信号的传导,从而放大其生物学作用,致使痛觉的发生.
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干细胞与中医基础理论中的先天之精学说
背景:探讨与干细胞相关的中医学基础理论,试图为中医基础理论现代化研究提供一个新的结合点.方法:将干细胞的特性与中医理论中的精学说进行比较分析.结果:干细胞是一类具有自我更新与增殖分化能力的细胞,能产生表现型与基因型和自己完全相同的子细胞.干细胞还具有可塑性,能跨胚层转分化.干细胞在组织工程、治疗组织坏死性疾病及作为基因治疗的载体等方面有巨大的应用价值.根据干细胞的研究进展,发现从精的先天与后天两大来源,以及精的繁衍生殖、生长发育、生髓化血、濡养脏腑四大功能角度看,精与干细胞都有较大的相关性,尤其是先天之精,它与干细胞直接相关.从精的来源角度,先天之精,即禀受于父母的生殖之精.来自父母的精子与卵子结合而成的受精卵,此即全能干细胞,故先天之精内涵包括全能干细胞内的全部遗传物质及其蕴藏的种属特异的发育信息.从功能角度,精的繁衍生殖功能由生殖干细胞完成;生长发育功能,与基因控制为主的成体干细胞的增殖分化机制相关;生髓功能,与骨髓腔内骨髓干细胞及脑髓中神经干细胞相关,主骨功能,与骨髓间充质干细胞相关,化血功能,完全由造血干细胞执行.结论:干细胞与先天之精密切相关,同时新的学术观点被提出:干细胞具先天之精属性,是先天之精在细胞层次的存在形式.
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针刺治疗单纯性肥胖病32例远期效果观察
目的观察针刺治疗单纯性肥胖病的远期疗效,并探讨针刺治疗单纯性肥胖病的隹疗程.方法选择2003-06/2004-03南京中医药大学附属门诊部针灸减肥患者32例.采用毫针和耳针治疗,1个月为1个疗程,3个月为总疗程.观察针刺停止后1年患者各项肥胖指标.结果针灸前后患者的体质量、皮褶厚度、胸围、腰围、髋围、腰髋比值、体质量指数及体脂百分率均明显下降,差异有极显著性(P＜0.001).针刺治疗3个疗程停止1年后疗效佳.结论针刺减肥的远期疗效非常明显,说明针刺是单纯性肥胖病有效的治疗手段之一.
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"手十二井穴"刺络放血对大鼠局灶性脑缺血后一氧化氮合酶活性的干预作用
背景:"手十二井穴"刺络放血疗法是治疗脑卒中的一种有效急救方法,动物实验证明"手十二井穴"刺络放血具有扩张脑血管,增加脑血流量,改善缺血区脑组织的急性缺氧状态,缓解乳酸堆积造成的酸中毒等作用.目的:探讨"手十二井穴"刺络放血对大鼠脑缺血后一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性变化的影响及机制.设计:随机对照动物实验.单位:咸宁学院医学院生理教研室.材料:实验于2003-03/2004-02在咸宁学院医学院生理教研室完成.实验选用84只Wistar大鼠,鼠龄二三个月,雌雄兼用,体质量(230±20)g,由咸宁学院医学院实验动物中心提供.方法:将84只大鼠随机分为假手术组、缺血组、缺血+刺络放血组,每组28只.采用改良Longa法[3]制作大鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血+刺络放血组在脑缺血后立即用三棱针按少商,商阳,中冲,关冲,少冲,少泽的顺序,先左前肢,后右前肢,点刺相当于人的"手十二井穴"解剖位置,使出一滴血,以不下滴为度.各组分别在缺血30 min,1,2,4 h取脑组织,测定一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性.主要观察指标:各组大鼠脑组织一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性.结果:①缺血组大鼠在缺血30 min,1,2,4 h一氧化氮含量分别为(116.16±26.63),(118.94±24.47),(115.65±25.29),(108.87±26.52)μmol/L,一氧化氮合酶活性分别为(507.22±92.52),(502.08±92.52),(510.71±96.63),(495.29±88.41)μkat/L,显著高于假手术组(t=2.474～4.731;P＜0.05～0.001).②缺血+刺络放血组一氧化氮含量分别为(91.8±11.51),(93.55±13.88),(92.52±11.62),(84.3±11.51)μmol/L,一氧化氮合酶活性分别为(337.6±88.41),(340.99±96.63),(344.48±84.3),(337.6±90.46)μkat/L,与缺血组比较差异有显著性意义(t=2,199～3.507,P＜0.05～0.01).结论:"手十二井穴"刺络放血可抑制脑缺血后脑组织一氧化氮含量,一氧化氮合酶活性升高,减轻自由基对脑组织损伤,从而对大鼠局灶性脑缺血有保护作用.
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针刺足三里和关元穴对老年大鼠脑心肾组织中一氧化氮合酶和抗氧化系统的影响
目的:观察针刺足三里、关元穴对老年大鼠脑心肾组织中一氧化氮合酶、抗氧化系统中谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶以及脂褐质变化的影响,探讨针刺的抗氧化作用.方法:实验于2002-06/08在为黑龙江中医药大学实验中心完成.①选用雄性清洁级Wistar老年大鼠20只,20月龄;青年大鼠雄性10只,10月龄.将老年大鼠随机分为2组:老年针刺组和老年对照组,每组10只.设10只青年大鼠为青年对照组.老年针刺组:四肢捆绑,固定在固定架上.采用多能脉冲电疗仪每日针刺双侧足三里穴,通电留针15 min,采用连续波,频率3次/s,强度以针柄颤动,但能使动物不挣扎嘶叫,保持安静为度.关元穴留针15 min.②老年对照组和青年对照组:只做相同捆绑处理15 min.3组连续干预28 d.③于后一次针刺24 h后处死大鼠.迅速取出脑、心、肾组织,制成组织匀浆,按照由南京建成生物工程研究所提供的相应试剂盒操作,通过测量各样品吸光度(A值)计算脑、心、肾组织中一氧化氮合酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶以及脂褐质各项指标含量.④计量资料差异比较采用t检验和方差分析.结果:Wistar老年大鼠20只和青年大鼠10只均进入结果分析.①一氧化氮合酶活性:干预28 d后,各年龄组大鼠心组织中高,其次为脑、肾.老年针刺组脑、心、肾组织中明显高于老年对照组(P＜0.01),老年对照组、老年针刺组脑、心、肾组织中明显低于青年对照组(P＜0.01).②谷胱甘肽过氧化物酶活性:干预28 d后,老年针刺组脑、心、肾组织中明显高于老年对照组(P＜0.01);老年对照组、老年针刺组脑、心、肾组织中明显低于青年对照组(P＜0.01).③过氧化氢酶活性活性:干预28 d后,各组脑组织中高,其次心、肾.老年针刺组脑、心、肾组织中明显高于老年对照组(P＜0.01);老年对照组、老年针刺组脑、心、肾组织中明显低于青年对照组(P＜0.01).④脂褐质含量:干预28 d后,老年针刺组脑、心、肾组织明显低于老年对照组(P＜0.01);老年对照组、老年针刺组脑、心、肾组织明显高于青年对照组(P＜0.01).结论:针刺足三里和关元穴能提高脑、心、肾组织中一氧化氮合酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶的活性,降低脂褐质的含量,能起到抗氧化作用.
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逆灸关元穴对自然更年期大鼠下丘脑雌激素受体α和促肾上腺激素释放激素及血浆促肾上腺激素的调节
目的:观察逆灸关元穴对更年期大鼠下丘脑和血液中应激激素及下丘脑室旁核雌激素受体的影响,探究逆灸对更年期大鼠应激影响及中枢雌激素受体α调节机制.方法:实验于2003-11/2004-06在北京中医药大学针灸学院针灸机理实验室完成.①选用健康SD雌性大鼠128只.其中,4月龄(年轻)16只为年轻正常组.随机将10月龄大鼠112只分为7组:12,14,16月龄逆灸组;10,12,14,16月龄对照组;每组16只.自然老化鼠.所有逆灸组大鼠均在10月龄开始艾炷灸,将艾炷点燃后,直接放置在关元穴上施灸,每次灸一壮.灸后局部皮肤略潮红.1周灸2次,共灸8周.10,12,14,16月龄对照组及年轻正常组除轻抓仰躺外不做其他处理.②每组取10只采用放射免疫法测定下丘脑促肾上腺激素释放激素、血浆促肾上腺激素水平.每组取其余6只采用免疫组化法测定下丘脑雌激素受体α含量.③组间计量资料差异比较采用单因素方差分析.结果:大鼠128只均进入结果分析.①下丘脑室旁核雌激素受体α表达:各模型对照组随增龄,呈波动上升趋势,14和16月龄对照组明显高于年轻正常组(P＜0.05,0.01).各逆灸组均低于同月龄对照组,其中逆灸16月龄组明显低于16月龄对照组(P＜0.05).②下丘脑促肾上腺激素释放激素含量:模型对照各组随增龄呈波动下降趋势,14和16月龄组明显低于年轻正常组(P＜0.05～0.01).逆灸14月龄组明显低于同龄对照组(P＜0.05).③血浆促肾上腺激素水平:模型对照和逆灸各组随增龄升高,14和16月龄组明显高于年轻正常组(P＜0.01).逆灸12和16月龄与同月龄对照组相近(P＞0.05),逆灸14月龄组明显低于同月龄对照组(P＜0.05).结论:随增龄更年期大鼠处在一种应激紊乱与失调状态,逆灸可使随后12,14,16月龄大鼠紊乱的应激激素得到一定的调整,并这种作用可能与逆灸调节下丘脑雌激素受体α表达有关.
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电针对脑纹状体缺血性神经元细胞凋亡及基因表达的调整
目的:观察电针对脑纹状体缺血性神经元损伤细胞凋亡形态学及基因表达的影响,探索电针对其抗氧应激保护作用可能的分子生物学机制.方法:实验于2003/2004在南京中医药大学针药实验室进行.纳入雄性健康10～12月龄清洁级SD大鼠47只,随机分为6组,即假手术组8只,模型组8只,电针Ⅰ组8只,电针Ⅱ组7只,药物组8只,针药组8只.采用LONGA氏血管线栓法改良,制成脑纹状体缺血性神经元细胞损伤模型.①假手术组:仅作手术血管分离.②模型组:仅右脑动脉丝线栓塞60min.③电针Ⅰ组:造模后,分别电针"百会"、"大椎"穴位.④电针Ⅱ组:造模后,分别电针"百会"、"人中"穴位.⑤药物组:制模手术前30 min,用褪黑素溶解于950 mL/L乙醇,再以生理盐水配制,按3.2 mg/kg腹腔注射.⑥针药组:处理同电针组及药物组.电针治疗中,使用30号0.5寸毫针,接上海G6805电针仪,连续波、频率3 Hz,强度2～4 mA,时间30 min;以针柄轻微颤动、大鼠不嘶叫为宜.全部模型经处理、再灌注24 h后处死.各组模型脑纹状体片(包括尾状核、豆状核等)相同部位,连续切取厚5 μm组织片5套,分别做苏木精-伊红染色、神经元尼氏体染色、形态学分析、Bax及Bcl-2基因蛋白、Tunnel细胞凋亡数等项目研究,并用各组均值分析、比较.结果:大鼠47只进入实验分析.①电针"百会"、"大椎"穴位30 h后形态学观察,梗死灶明显缩小;各病变轻重形态表现较一致,水肿显著减低、纹状体缺血神经元损伤形态学改善显著.②与模型组比较,电针Ⅰ组,电针Ⅱ组,褪黑素组,电针Ⅰ+褪黑素组等治疗组大鼠脑纹状体缺血神经元阳性凋亡细胞数均显著性降低[(7.93±1.97),(12.8±1.44),(9.46±1.69),(11.78±1.44),(15.94±1.81)个/0.5 mm×0.5 mm,P＜0.001～0.01];电针Ⅰ组及褪黑素药物组作用相当,效果显著优于电针Ⅱ组及电针Ⅰ+褪黑素组(P＜0.001～0.05).③电针Ⅰ组、褪黑素药物组、电针Ⅰ+褪黑素组促凋亡基因Bax蛋白表达细胞数和Bax/Bcl-2基因蛋白表达细胞数之比显著低于模型组[(5.63±2.77),(3.5±2.93),(2.25±1.58),(25.75±4.51)个/0.5 mm×0.5 mm;(0.26±2.35),(0.13±2.91),(0.08±4.13),(4.22±1.95)个/0.5mm×0.5mm;P＜0.001～0.05];各组抑凋亡基因Bcl-2蛋白表达细胞数显著高于模型组[(21.75±6.05),(25.77±7.68),(27.04±11.58),(9.37±1.13)个/0.5 mm×0.5 mm;P＜0.001].结论:电针对纹状体缺血性神经元细胞损伤具有良好保护作用,并与强抗氧化药物-褪黑素效应相同,抗氧应激可能是临床针灸治疗缺血性脑病获效的主要机制.
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电针穴位刺激对锂-匹罗卡品诱导致痫大鼠行为及脑电活动的影响
目的:观察电针刺激百会穴对锂-匹罗卡品诱导致痫大鼠的行为及脑电活动的影响,进一步揭示穴位刺激的抑痫机制.方法:实验于2005-06在解放军第四军医大学西京医院神经内科完成.①选用成年雄性SD大鼠30只.利用脑立体定位手段,将电极埋入大鼠脑部双侧额叶皮质、海马和杏仁核.②选取24只大鼠,脑内植入电极1周后,予大鼠腹腔注射锂-匹罗卡品,造成强直-阵挛性发作癫痫持续状态模型.③将癫痫发作程度(依据Ono等分级标准)Ⅳ级(含Ⅳ级)以上存活大鼠18只随机分为3组:电针穴位刺激组(电针刺激致痫大鼠百会穴),电针刺激对照组(电针刺激致痫大鼠百会穴相临的非穴位处),无刺激对照组(造模后不给予其他干预措施),每组6只.均采用G-6805型电针治疗仪于致痫后第2天开始进行电针刺激干预,共刺激3周.电针刺激参数为:频率为80 Hz,电流强度20 mA,时间20 min,2次/d.其余6只大鼠为正常对照组:取脑内植入电极,但未致痫大鼠,腹腔注射与匹罗卡品等量生理盐水.④记录致痫大鼠首次癫痫发作平均潜伏期、注射地西泮前强直-阵挛发作次数和持续时间,以及静默期的长短.此后,每天观察动物的行为学变化4 h,记录其静默期后出现的Ono等分级标准Ⅰ～Ⅲ级的自发反复发作次数.⑤采用太阳公司视频脑电描记系统记录脑电.右海马-右耳连续描记各组大鼠致痫前15 min到注射地西泮终止发作期间的脑电变化,以及致痫后在第2,3,4,6周时大鼠的脑电图改变(时间2 h).⑥计量资料差异比较采用方差分析.结果:造模后存活18只及正常大鼠6只进入结果分析.①各组致痫大鼠首次癫痫发作平均潜伏期、注射地西泮前强直-阵挛发作次数和平均持续时间比较,差异不明显(P＞0.05).电针穴位刺激组大鼠平均每周自发反复发作次数明显少于电针刺激对照组和无刺激对照组大鼠(P＜0.05).②正常大鼠脑电波形频率以5～10 Hz为主,波幅小于200μV.注射后经过潜伏期,大鼠脑电图表现出多种形式的癫痫样波,有单棘波,多棘波,多相棘波,棘慢波,发作性节律波等.频率快可达35 Hz,波幅高约2.5～3.0 mV,发作后可出现抑痫制波.电针穴位刺激组大鼠在第2,3,4,6周时脑区杏仁核内2 h内放电次数明显少于电针刺激对照组和无刺激对照组(P＜0.05).结论:电针刺激百会穴对锂-匹罗卡品诱导致痫大鼠的慢性发作具有明显的抑痫作用,其电生理机制依赖于抑痫信号的穴位-神经传入解剖途径.
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针刀治疗神经根型颈椎病的电生理变化
目的:观察针刀治疗神经根型颈椎病前后电生理指标变化,探讨针刀治疗神经根型颈椎病的可行性和有效性.方法:①选择2002-08/2004-03南京军区福州总医院痛症科就诊的神经根型颈椎病患者10例,男5例,女5例;年龄41～63岁.均对治疗方案及检测项目知情同意.②选4号或3号小针刀,按针刀疗法的四部进针法,刀口线避开神经、血管,针刀垂直于颈项部皮肤进针,用针刀松解棘间韧带和相应的肌肉、韧带筋膜、关节囊.先纵行切开或剥离,再横行剥离,如有结节需切开剥离.出针后压迫针孔片刻,使不出血为止.针刀松解后观察20 min,若无晕针等不良反应时,对患者实施相应的术后推拿治疗.5 d治疗1次,3次为1个疗程,一般治疗3个疗程.③应用意大利百胜公司生产的ESAOTE肌电图/诱发电位仪检测患者正中神经(感觉/运动神经)、尺神经(感觉/运动神经)、桡神经(感觉/运动神经)、肌皮神经(运动神经)、腋神经(运动神经)传导速度、潜伏期、诱发电位波幅.④计量资料差异比较采用t检验.结果:神经根型颈椎病患者10例均进入结果分析.①针刀治疗前后肌电图检测结果显示,10例患者中,共检查肌肉100块(治疗前后各检查50块).治疗前50块肌肉肌电图检查均提示神经源损害.经针刀治疗后,肌电图均有不同程度的修复.②正中、尺、桡、腋、肌皮神经运动传导的潜伏期:治疗后明显短于治疗前(P＜0.05);正中、尺、桡、腋、肌皮神经运动传导的诱发电位波幅:治疗后明显高于治疗前(P＜0.05～0.01);正中、尺、桡神经传导速度:治疗后明显快于治疗前(P＜0.05～0.01).③正中、尺、桡、腋、肌皮神经感觉传导的潜伏期:治疗后明显短于治疗前(P＜0.05～0.01);正中、尺、桡、腋、肌皮神经运动传导的诱发电位波幅和感觉传导速度:治疗后明显高于或快于治疗前(P＜0.05～0.01).结论:针刀治疗可改善神经根型颈椎病患者电生理检查结果,是一种可行的确实有效的方法.
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疾徐捻转泻法针刺足三里对高血压家兔的降压作用
目的:观察疾徐捻转泻法针刺足三里对去甲肾上腺素引起的高血压的效果.方法:实验于2005-05/06在大连大学生物有机化学重点实验室完成.①采用健康家兔18只.随机分为正常对照组、高血压模型组和针刺治疗组,每组6只.②正常对照组滴注生理盐水(1.5 mL/min);高血压模型:耳缘静脉滴注40 mg/L去甲肾上腺素溶液(1.5 mL/min),造成家兔实验性高血压;针刺治疗组保持去甲肾上腺素恒定滴速(1.5 mL/min),同时以疾徐捻转泻法针刺家兔两侧拟足三里穴位,针刺方法:选用28号、1.5毫针,采用疾徐捻转泻法:进针时疾速刺入,快速捻转,徐徐出针.行针法2min,留针10min,再行针法2min,留针10min.③针刺结束后采用颈动脉直接插管法测定各组收缩压、舒张压和平均动脉压.④组间计量资料比较采用q检验.结果:家兔18只均进入结果分析.针刺治疗结束后收缩压、舒张压和平均动脉压:高血压模型组明显高于正常对照组和针刺治疗组[高血压模型组:(146.6±21.0),(115.8±16.5),(126.3±17.3)mmHg(1 mmHg=0.133 kPa);正常对照组:(121.8±14.3),(93.2±12.8),(102.2±12.8)mm Hg;针刺治疗组:(112.0±9.0),(95.5±8.3),(100.8±8.3)mm Hg,P＜0.05];正常对照组与针刺治疗组接近(P＞0.05).结论:疾徐捻转泻法针刺足三里可明显降低高血压家兔血压.
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针刺苍白球内侧部对帕金森病模型大鼠脑内抗氧化酶的调节
目的:观察针刺苍白球内侧部对帕金森病模型大鼠行为学及纹状体抗氧化酶的影响.方法:①实验于2001-07/12在黑龙江中医药大学针灸生理实验室完成.选用健康Wistar大鼠45只.②选取35只大鼠,应用偏侧纹状体立体定位注射6-羟基多巴胺的方法制备帕金森病模型大鼠,将造模成功的帕金森病模型大鼠18只随机分为2组:模型组9只,治疗组9只.治疗组:借助脑立体定位技术将改制的针灸针垂直刺入帕金森病模型大鼠患侧苍白球内侧部进行针刺治疗,1次/d,连续治疗1周;然后再应用G-6805Ⅱ型电针治疗仪进行电针治疗[强度1 mA左右(以大鼠能耐受且不激怒、嘶叫为标准),频率为100 Hz,连续波],持续15 min,1次/d,连续治疗2周.另取10只大鼠为空白对照组,在大鼠左侧纹状体区注射含0.2%的抗坏血酸的生理盐水5 μL.模型组及空白对照组:不再做任何处理,正常饲养3周.③分别于针刺治疗前、针刺后1周、电针后1周、电针后2周后于3组大鼠背部皮下注射阿朴吗啡0.5 mg/kg诱发旋转,记录给药后10～40 min内各组大鼠的旋转次数.④行为学检测完毕后,按照南京建成生物工程研究所试剂盒说明步骤,取组织匀浆上清液,通过722分光光度仪用化学比色法测定各组大鼠纹状体谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶、丙二醛的含量.⑤计量资料差异比较采用t检验.结果:因造模失败脱失17只,进入结果分析28只.①治疗组从治疗后1周开始,旋转次数逐渐减少,针刺治疗后1周,电针治疗后1和2周分别比治疗前减少14.55%,49.50%,67.07%,即随着治疗时间的延长,帕金森病大鼠的行为学改变明显好转.针刺治疗后1周,其旋转次数与治疗前比较,差异不明显(P＞0.05);电针治疗后1和2周,旋转次数明显少于治疗前(P＜0.01).②模型组大鼠纹状体丙二醛含量明显高于空白对照组(P＜0.01).治疗组大鼠纹状体丙二醛含量明显低于模型组(P＜0.01).模型组超氧化物歧化酶含量与空白对照组比较,差异不明显(P＞0.05).模型组大鼠谷胱甘肽、谷胱甘肽过氧化物酶含量明显低于空白对照组和治疗组(P＜0.05～0.01).3组大鼠纹状体超氧化物歧化酶含量差异不显著(P＞0.05).结论:针刺苍白球内侧部可明显改善帕金森病模型大鼠的行为学,同时针刺苍白球内侧部可以减轻多巴胺能神经元的脂质过氧化反应,对氧化应激所引起的神经损伤具有保护作用.
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电针对面神经损伤后再生室中神经生长因子的影响
背景:通过动物实验和临床研究,已获得了电针能促进周围神经再生的证据,但其机制尚没有明确的结论.神经营养因子可以维持损伤神经的神经元存活和促进轴突的再生,观察神经生长因子在电针刺激前后的变化,可能为揭示电针治疗周围神经病变提供新思路.目的:观察电针对面神经损伤后再生微环境中神经生长因子的影响.设计:完全随机分组设计,对照动物实验.单位:四川大学华西医院针灸科.材料:实验于2001-09/12在四川大学华西医院动物实验中心的实验室完成.选用成年健康的新西兰兔50只,随机分为2组:针刺组和对照组,每组25只.方法:①实验动物静脉麻醉后,分离暴露面神经上颊支,在手术放大镜下切断神经,用硅胶管将两断端嵌入并缝合固定,形成再生室.针刺组于术后当天麻醉完全醒后开始接受电针治疗,取穴:翳风,地仓,颊车,合谷.刺灸方法:翳风,直刺1 cm,地仓透颊车1.5 cm,合谷0.5 cm.电针两极分别置于翳风和地仓,选用疏密波,频率18～20 Hz,电压1.5 V,留针30 min,1次/d,干预14 d;对照组不作任何处理.②术后3,5,7,10,14 d分别处死10只动物,实验组与对照组各5只.抽取再生室内液体,采用双抗体夹心酶联免疫吸附法测定再生室内神经生长因子水平.③计量资料差异比较采用t检验.主要观察指标:术后3,5,7,10,14 d两组再生室内神经生长因子水平比较.结果:兔50只均进入结果分析.在术后3～7 d,实验组和对照组再生室内神经生长因子水平差异不明显(P＞0.05),术后10和14 d,实验组再生室内神经生长因子水平明显高于对照组[术后10 d:(2 793.0±163.1),(2 571.1±91.6)ng/L;术后14 d:(2 696.1±147.5),(2 243.7±271.2)ng/L,t=4.45,3.44,P＜0.01].术后第7天,实验组和对照组再生室内神经生长因子水平均达到峰值,但对照组在术后14 d开始降低,实验组仍保持在较高的水平.结论:电针对面神经损伤后再生微环境中神经生长因子水平有提高其水平和维持平稳水平不下降的作用,这可能是电针刺激促进周围神经再生机制的一方面.
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两种双壳贝提取物抗疲劳作用比较
目的:通过观察扇贝提取物与翡翠贻贝提取物喂养的实验小鼠的负重游泳时间、血尿素氮水平和肝糖原含量,比较两种贝类提取物对小鼠的抗疲劳作用.方法:实验于2005-02/06在广东医学院实验动物中心和生物化学与分子生物学研究所完成.①选用SPF级昆明种雄性小鼠240只.实验用扇贝和翡翠贻贝均为市售,两种贝类经提取,过柱,浓缩及干燥得到浅黄色粉末.两种提取物经急性毒性实验证明安全无毒.②小鼠负重游泳试验:选用小鼠80只,随机分为2组:扇贝提取物组和翡翠贻贝提取物组,每组40只;每个处理组再随机分为4个亚组:10,20和40 g/L扇贝提取物和翡翠贻贝提取物组(分别给予10,20和40 g/L扇贝提取物和翡翠贻贝提取物水溶液自由喂养),对照组用白开水作为饮水自由喂构养.喂养30 d后,鼠尾根部负荷5%体质量的铅丝,置小鼠在游泳池中游泳,水温(25±1)℃.记录小鼠自游泳开始至沉入水中的时间,作为小鼠负重游泳时间.③小鼠血尿素测定:动物分组同前,处死小鼠后,采用二乙酰一肟显色法测定小鼠血尿素水平.④小鼠肝糖原测定:动物分组同前,处死小鼠后,采用氧化酶法测定小鼠肝糖原含量.⑤计量资料差异比较采用t检验,方差不齐时采用t'检验.结果:小鼠240只均进入结果分析.①扇贝提取物20和40 g/L组小鼠负重游泳时间明显长于对照组(P＜0.05,0.01).翡翠贻贝提取物20和40 g/L组小鼠负重游泳时间明显长于对照组(P＜0.05,0.01).扇贝提取物40 g/L组小鼠负重游泳时间明显长于翡翠贻贝提取物40 g/L组(P＜0.05).②扇贝提取物40 g/L组和翡翠贻贝提取物20 g/L组小鼠血尿素氮水平明显低于对照组(P＜0.05).扇贝提取物40 g/L组小鼠血尿素氮水平明显低于翡翠贻贝提取物40 g/L组(P＜0.05).③20和40 g/L扇贝取物及翡翠贻贝提取物组小鼠肝糖原含量明显高于对照组(P＜0.05).同样质量浓度的扇贝提取物与翡翠贻贝提取物组小鼠肝糖原含量比较,差异不明显(P＞0.05).结论:扇贝提取物和翡翠贻贝提取物均对小鼠有抗疲劳作用,且扇贝提取物对小鼠的抗疲劳作用稍优于翡翠贻贝提取物.
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调理肝脾气机法对更年期大鼠卵巢功能的调控
目的:采用从调理肝脾气机入手,间接滋养先天的方法,观察调理肝脾气机法对更年期大鼠卵巢功能的调控作用.方法:①实验于2002-09/11在四川省中药所药理实验室完成.采用SD健康雌性大白鼠62只,其中14～16月龄52只,3月龄10只,动物购进后适应性喂养3天后进行实验.将52只14～16月龄实验大鼠随机分为4组:更年期组(12只)、尼尔雌醇组(12只)、调理肝脾高剂量组(14只)、调理肝脾低剂量组(14只);另10只3月龄正常大鼠设为青年组.②更年期组、青年组灌胃给予蒸馏水10 mL/(kg·d);尼尔雌醇组灌胃每5 d给予尼尔雌醇[由上海华联制药有限公司生产,批号:010801,批准文号:沪卫药准字(1995)第012090号]混悬液0.5 mg/kg,调理肝脾气机药物(主要成分为柴胡,由四川省中药研究所提供,批号:020318).高、低剂量组灌胃给予调理肝脾气机药物溶液6和3 g/(kg·d),均连续用药15 d.③称取子宫质量,计算子宫湿质量指数(脏器质量/100 g体质量).同时用放射免疫法测定血清促卵泡生成激素、促黄体生成激素、雌二醇水平.采用XSJ-2型光学显微镜观测大鼠卵巢组织态学变化.计数成熟卵泡、生长卵泡的数目、卵巢颗粒细胞层面积、黄体数量.④计量资料差异比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD分析. 结果:实验过程中因部分大鼠取样不合格而脱失,观察大鼠子宫湿重指数和血清雌激素水平时尼尔雌醇组脱失1只,进行卵巢组织态学观察时更年期组,青年组,尼尔雌醇组,调理肝脾气机药物高、低剂量组脱失2,2,3,3,3只.①子宫湿重指数:更年期组与青年组接近(P＞0.05);尼尔雌醇组和调理肝脾气机药物低剂量组明显高于更年期组(P＜0.01,0.05);调理肝脾气机药物高剂量组明显低于尼尔雌醇组(P＜0.01).②青年组大鼠血清促卵泡生成激素水平高于更年期组,但差异不明显(P＞0.05),促黄体生成激素、雌二醇水平明显低于更年期组(P＜0.05).调理肝脾气机药物高、低剂量组大鼠血清促卵泡生成激素水平明显高于更年期组(P＜0.05,0.01),促黄体生成激素水平明显低于更年期组(P＜0.01),雌二醇水平低于更年期组,但差异不明显(P＞0.05).③更年期组大鼠卵巢生长卵泡数量和卵巢颗粒细胞层面积明显少于或小于青年组和调理肝脾气机药物高、低剂量组(P＜0.05～0.01).结论:调理肝脾气机对更年期大鼠血中激素水平影响,不是单纯升高,而是综合性的调节作用.通过改善卵巢衰老,促进卵泡发育、黄体形成,改善体内性激素环境,调整性腺轴功能,使血清性激素水平基本恢复到正常状态.
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石仙桃抗疲劳和耐缺氧作用的动物实验
背景:石仙桃常用于清肺、化痰止咳和抗疲劳等作用,但有关其对心脑缺血缺氧的药理学作用尚未见报道.目的:观察石仙桃提取液对5种缺氧模型小鼠存活时间的影响,探讨其对小鼠的抗疲劳和耐缺氧的保护作用.设计:随机对照实验观察.单位:赣南医学院药理学教研室.材料:实验于2004-03/06在赣南医学院药理教研室完成.取昆明种小鼠170只,雄性25只,雌性95只,体质量(20±2)g,由赣南医学院实验动物中心提供.方法:①常压耐缺氧实验:取40只小鼠随机分为4组,即生理盐水组、盐酸普萘洛尔组(0.02 g/kg)、石仙桃提取液5 g/kg,10 g/kg组,每组10只.给药20min后,将小鼠放置在密封的含钠石灰的广口瓶中,秒表记录存活时间.②特异性心肌缺氧实验:取30只小鼠随机分为3组,即生理盐水+异丙肾上腺素组、盐酸普萘洛尔(0.02 g/kg)+异丙肾上腺素组、石仙桃提取液10 g/kg+异丙肾上腺素组,每组10只.其中各组小鼠均给予异丙肾上腺素0.015 g/kg.给药40 min后,小鼠放置在密封的含钠石灰的广口瓶中,用秒表记录存活时间.③亚硝酸钠引起的缺氧实验:取40只小鼠随机分为4组,即生理盐水组、盐酸普萘洛尔组(0.02 g/kg)、石仙桃提取液5 g/kg,10 g/kg组,每组10只.给药40 min后,腹腔注射200mg/kg亚硝酸钠,分别记录小鼠存活时间.④对抗脑缺血缺氧实验:取30只小鼠,随机分为3组,即生理盐水组、石仙桃提取液5 g/kg,10 g/kg组,每组10只.其中盐酸普萘洛尔组给予盐酸普萘洛尔0.02 g/kg.给药40 min后,麻醉后断头,分别记录小鼠喘息时间.⑤运动耐力实验:取30只小鼠随机分为3组,即生理盐水组、石仙桃提取液5 g/kg,10 g/kg组,每组10只.给药40 min后,在小鼠尾根部负体质量2%的铅皮,放入水深25 cm、直径40 cm、桶高30 cm的水桶中,每桶同时放进1只小鼠,用秒表立即记录自游泳开始至力竭下沉8 s,且不浮出水面为止的时间,计为小鼠游泳时间.主要观察指标:给药后各组小鼠的存活时间和喘息时间.结果:纳入170只小鼠,全部进入结果分析,无脱失.①常压耐缺氧实验:石仙桃提取液5 g/kg,10 g/kg组小鼠的生存时间显著长于生理盐水组和盐酸普萘洛尔组(F=70.52,P＜0.05),石仙桃提取液10 g/kg组显著长于石仙桃提取液5 g/kg组(P＜0.05).②特异性心肌缺氧实验:石仙桃提取液10 g/kg+异丙肾上腺素组和盐酸普萘洛尔+异丙肾上腺素组小鼠的生存时间显著长于生理盐水+异丙肾上腺素组(F=37.29,P＜0.05).③亚硝酸钠所致缺氧实验:盐酸普萘洛尔组、石仙桃提取液5 g/kg,10 g/kg组小鼠的生存时间显著长于生理盐水组(F=34.34,P＜0.05),石仙桃提取液10 g/kg组显著长于石仙桃提取液5 g/kg组(P＜0.05).④对抗脑缺血缺氧实验:石仙桃提取液5 g/kg,10 g/kg组小鼠的喘息时间显著长于生理盐水组(F=41.00,P＜0.05),石仙桃提取液10 g/kg组显著长于石仙桃提取液5 g/kg组(P＜0.05).⑤运动耐力实验:石仙桃提取液5 g/kg,10 g/kg组小鼠的存活时间显著长于生理盐水组(F=33.09,P＜0.05),石仙桃提取液10 g/kg组显著长于石仙桃提取液5 g/kg组(P＜0.05).结论:石仙桃具有抗疲劳及耐缺氧作用,且呈剂量依赖性,这种作用可能与影响Na,K-ATP酶或提高肺泡液清除作用有关.
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枸杞多糖对D-半乳糖致衰老模型大鼠肝脏DNA修复酶8-羟基鸟嘌呤糖苷酶表达的影响
目的:观察不同剂量枸杞多糖对D-半乳糖致衰老模型大鼠8-羟基鸟嘌呤糖苷酶表达的影响.方法:实验于2005-03/08在黑龙江省佳木斯大学生物化学教研室完成.①选用纯系Wistar大鼠40只.随机将大鼠分为4组:衰老组,枸杞多糖大剂量组,枸杞多糖中剂量组,枸杞多糖小剂量组,每组10只.衰老模型对照组:正常饮食,每日上午颈背部皮下按48 mg/kg注射D-半乳糖,同时灌服温开水;枸杞多糖小剂量组、枸杞多糖中剂量组、枸杞多糖大剂量组:每组均正常饮食,除每日上午颈背部皮下按48 mg/kg注射D-半乳糖外,同时分别按10,50,100 mg/kg灌服枸杞多糖(市售枸杞多糖,用双蒸水分别制成10,50,100 g/L溶液),连续给药45 d.②用Trizol法提取肝组织核酸,反转录聚合酶链反应及凝胶成像技术检测8-羟基鸟嘌呤糖苷酶的mRNA表达水平.③计量资料差异比较采用方差分析和q检验.结果:大鼠40只均进入结果分析.大鼠肝脏组织的8-羟基鸟嘌呤糖苷酶mRNA表达水平:枸杞多糖小、中、大剂量组均明显低于衰老模型组(1.129±0.03,0.919±0.044,0.903±0.043,1.233±0.042,P＜0.05),且随剂量的增加,呈下降趋势,枸杞多糖中剂量和大剂量组之间差异不明显.结论:枸杞多糖可以通过降低氧化损伤,减少DNA损伤,继而使修复酶8-羟基鸟嘌呤糖苷酶的表达下降而发挥抗衰老的作用.
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水飞蓟宾对抗大鼠酒精性脂肪肝改善肝功能的作用
背景:水飞蓟宾(素)可产生抗自由基活性、抗脂质过氧化、抗脂氧酶、抗还原性谷胱甘肽排空、抗肿瘤以及降血脂等广泛的药理效应.在临床上,水飞蓟宾也常用于酒精性肝病的治疗.目的:探讨水飞蓟宾对大鼠酒精性脂肪肝作用的药理学机制.设计:随机对照实验.单位:广州市中医医院.材料:实验于2003-08/10在广东省药物研究所无特殊病原菌级动物实验室完成,选用无特殊病原菌级SD大鼠57只,雌雄各半,体质量(150±10)g.益肝灵片主要成份为水飞蓟宾,38.5 mg/片,湖南省株洲市制药三厂生产.方法:在57只SD大鼠中随机选出18只作为正常对照组,给予生理盐水灌胃,饮用蒸馏水代替乙醇,普通饲料喂养10周.其余大鼠自由饮用100 mL/L乙醇,加高脂高热量饲料喂养6周,构建大鼠酒精性脂肪肝模型,经相关指标检测确定模型成立.将剩余大鼠随机分成模型对照组18只和水飞蓟宾组21只,模型对照组给予蒸馏水灌胃,水飞蓟宾组给予水飞蓟宾100 mg/kg.同时继续给予100 mL/L乙醇和高营养饲料,4周后在麻醉状态下处死大鼠,取大鼠肝块进行病理观察,测定三酰甘油、超氧化物歧化酶、还原性谷胱甘肽和丙二醛水平.主要观察指标:大鼠血清中天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶活性和三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白-胆固醇、高密度脂蛋白-胆固醇、大鼠肿瘤坏死因子α、大鼠转化生长因子β1的含量.结果:57只无特殊病原菌级SD大鼠全部纳入结果分析.水飞蓟宾能够抑制病鼠血清天冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶、碱性磷酸酶活性(2 550.5±400.1),(533.4±100.0),(2 217.1±750.2)nkat/L,与模型组比较(3 600.7±666.8),(800.2±100.0),(2 900.6±1 333.6)nkat/L,差异有显著性意义(P＜0.05～0.01);水飞蓟宾组三酰甘油、低密度脂蛋白-胆固醇、大鼠肿瘤坏死因子α和大鼠转化生长因子β1含量(1.8±0.8),(0.17±0.04),(6.66±1.38),(24.1±4.1)mmol/L明显低于模型组(2.8±1.4),(0.20±0.05),(7.81±1.06),(28.8±6.3)mmol/L,两组比较差异有显著性(P＜0.05～0.01);水飞蓟宾能够提高高密度脂蛋白-胆固醇含量;降低肝匀浆三酰甘油和丙二醛含量(P＜0.05～0.01),增强超氧化物歧化酶活性以及改善肝细胞水变性和脂肪变性(P＜0.01),但对还原型谷胱甘肽的含量则未见明显改变(P＞0.05).结论:水飞蓟素阻止大鼠酒精性脂肪肝形成,其作用机制包括抗氧化、清除自由基代谢产物,抑制脂质过氧化反应,调血脂、减少脂肪在肝脏的沉积,抗免疫性炎症和抗增殖.
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乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠组织细胞因子的干预效应
目的:观察中草药乌梅丸对溃疡性结肠炎大鼠组织促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6,8和抗炎细胞因子白细胞介素10的影响,并比较乌梅丸与柳氮磺胺吡啶治疗效果.方法:实验于2002-10/2003-03在湖北中医学院中心实验室完成.①选用健康SD大鼠56只,雌雄各半.按雌雄随机分4组:正常组、乌梅丸组、柳氮磺胺吡啶组、模型组,每组14只(雌雄各半).应用2,4-二硝基氯苯免疫加储酸局部灌肠法建立溃疡性结肠炎大鼠模型,除正常组外,其余组均造模.②乌梅丸组:给予配制的乌梅丸液(中草药乌梅丸为本院自制,成分:乌梅16 g,细辛6 g,干姜10 g,黄连16 g,当归4 g,附子6g,蜀椒4 g,桂枝6 g,生晒参6 g,黄檗6 g.按传统方法配制成含生药浓度分别为515 g/L的水煎剂)3 mL灌胃,1次/d;柳氮磺胺吡啶组:给予柳氮磺胺吡啶混悬液3 mL在造模后灌胃,1次/d;模型组和正常组:均以蒸馏水3 mL灌胃,1次/d.各组均给药15 d.③然后于第16天,采用酶联免疫吸附法检测结肠组织白细胞介素6,8,10,肿瘤坏死因子α含量.④计量结果差异比较采用t检验、方差分析(q检验).结果:由于每组大鼠在灌胃前随机抽取2只进行病理检查以及部分标本采集不合格,正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、乌梅丸组分别脱失2,4,5,3只,终进入结果分析以上各组大鼠分别为12,10,9,11只.①大鼠结肠组织白细胞介素6,8,肿瘤坏死因子α含量:模型组均明显高于正常组(P＜0.01),柳氮磺胺吡啶组和乌梅丸组明显低于模型组(P＜0.01),乌梅丸组明显低于柳氮磺胺吡啶组(P＜0.01).②大鼠结肠组织白细胞介素10含量:模型组明显低于正常组(P＜0.01),柳氮磺胺吡啶组和乌梅丸组明显高于模型组(P＜0.01),乌梅丸组明显高于柳氮磺胺吡啶组(P＜0.05).结论:乌梅丸有上调抗炎细胞因子白细胞介素10,下调促炎细胞因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素6,8的作用,使溃疡性结肠炎大鼠免疫功能恢复正常,达到治疗的目的;乌梅丸对溃疡性结肠炎干预效果优于柳氮磺胺吡啶.
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黄芪丹参复方制剂对大鼠心肌线粒体氧自由基损伤的保护作用
目的:观察黄芪丹参复方制剂(芪丹通脉片)对盐酸异丙肾上腺素所致急性心肌缺血的防治作用.方法:①实验于2001-06在解放军第四军医大学病理生理实验室完成.选用32只SD大鼠,雌雄不拘.芪丹通脉片提取浸膏干粉(由黄芪、丹参、当归、桂枝、红花组成,1 g干粉相当于生药2.86 g),由西京医院提供.②随机将大鼠分为4组:正常对照组、模型组、芪丹通脉片组、硫氮卓酮组,每组8只.正常对照组:予生理盐水3 mL/kg,每日灌服2次,连续14 d.第15天,皮下三四点注射生理盐水,24 h后相同方法、剂量注射生理盐水1次.模型组:用同样方法灌服生理盐水3 mL/kg.第15天,皮下三四点注射盐酸异丙肾上腺素(5 mg/kg),24 h后相同方法、剂量注射盐酸异丙肾上腺素1次.芪丹通脉片组:灌服用蒸馏水配成3 mL/kg的芪丹通脉片溶液2 g/kg,用与模型组同样方法注射盐酸异丙肾上腺素.硫氮卓酮组:灌服用蒸馏水配成3 mL/kg的硫氮卓酮(浙江亚太制药厂出品)5 mg/kg,用与模型组同样方法,注射盐酸异丙肾上腺素.③用差速离心法提取心肌线粒体,考马斯亮蓝法测定蛋白含量.按南京建成生物工程研究所提供试剂盒说明测定线粒体中丙二醛含量,超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力.按上海复星-长征医学有限公司所提供肌酸磷酸激酶试剂盒和上海长征-康仁医学有限公司所提供乳酸脱氢酶活性试剂盒提供的方法测定肌酸磷酸激酶和乳酸脱氢酶活性.④苏木精-伊红染色,光镜下观察心肌病理变化,将病理损伤分为4级,0级:肌纤维排列整齐,横纹清晰,胞核明显,无细胞肿胀;Ⅰ级:心肌出现散在的坏死,主要为凝固性坏死,局限于心内膜下;Ⅱ级:心肌坏死灶呈片状分布,灶间无连接,病变累及心壁全层;Ⅲ级:心肌广泛性坏死,灶间相互连接,病变累及心壁全层;Ⅳ级:遍及整个心脏的融合性损伤,包括梗死样的广泛性坏死,偶有急性动脉瘤或附壁血栓.⑤实验数据采用方差分析,组间采用小显著差数法进行两两比较.病理组织结果进行Ridit检验.结果:大鼠32只均进入结果分析.①在光镜下可以观察到,正常对照组心肌细胞形态正常,无炎细胞浸润;模型组心肌有片状坏死灶;芪丹通脉片组及硫氮卓酮组主要出现散在性点状坏死.②芪丹通脉片组和硫氮卓酮组心肌线粒体丙二醛含量明显低于模型组(P＜0.01),超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活力明显高于模型组(P＜0.01).模型组心肌线粒体丙二醛含量明显高于正常对照组(P＜0.01),超氧化物歧化酶活力明显低于正常对照组(P＜0.01).③芪丹通脉片组和正常对照组心肌组织肌酸激酶、乳酸脱氢酶含量明显高于模型组(P＜0.01),血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶水平明显低于模型组(P＜0.01).④芪丹通脉片组与硫氮卓酮组心肌细胞病理损伤级别差异不明显,两组与模型组差异明显(P＜0.05).结论:芪丹通脉片可能是通过降低心肌线粒体中丙二醛含量,增加超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶活力,减轻氧自由基损伤,以达到保护心肌细胞的目的.
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银杏叶提取物对肾病综合征患者血液流变学及血脂的改善作用
目的:观察具有调节脂质代谢、拮抗血小板活化因子、降低血液黏度、增加红细胞变形能力及清除自由基、抗氧化损伤等作用的银杏叶提取物对肾病综合征患者血液流变学指标、血脂和疗效的影响.方法:①选择2002/2004广东医学院附属医院肾内科住院的原发性肾病综合征患者52例,男24例,女28例,年龄(26±8)岁.均对治疗方案和检测指标知情同意.将患者随机分为2组:治疗组(26例,男14例,女12例)和对照组(26例,男10例,女16例).治疗方案:两组均以强的松1 mg/(kg·d)早晨顿服,治疗组同时给予银杏叶注射液(双鹤高科天然药物有限责任公司生产,批准文号:国药准字Z11021351,5 mL/支,含银杏内酯0.3 mg)20 mL加入50 g/L葡萄糖250 mL,静脉滴注,1次/d,4周为1个疗程,2组均观察1个疗程.②两组分别记录水肿消退时间,判断临床疗效.于治疗前和治疗4周后测定如下指标:采用双缩尿法测定24 h尿蛋白定量;采用全自动生化分析仪测定血浆白蛋白、血肌酐;采用上海科华公司试剂盒酶法测定总胆固醇、三酰甘油;采用日本第一化学株式会试剂盒,以免疫透射比浊法测定高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1、载脂蛋白B,并计算载脂蛋白A1/载脂蛋白B.采用全自动自清洗旋转式黏度计测定全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原、红细胞聚集指数、红细胞压积、血小板聚集率.③计量资料差异比较采用t检验.结果:52例肾病综合征患者均进入结果分析.①治疗4周后,治疗组水肿消退时间明显短于对照组[(6.7±1.4),(11.4±2.3)d,t=1.826,P＜0.05].②两组治疗4周后24 h尿蛋白定量明显低于治疗前,血浆白蛋白明显高于治疗前(t=2.983,2.845,2.762,2.618,P＜0.01).治疗组治疗后24 h尿蛋白定量明显低于对照组,血浆白蛋白明显高于对照组(t=2.014,1.976,P＜0.05).两组治疗后血肌酐虽均较治疗前下降,但差异不明显(P＞0.05).③治疗组治疗4周后全血黏度、血浆黏度、纤维蛋白原、红细胞聚集指数、红细胞压积及血小板聚集率均明显低于治疗前和对照组治疗后(t=1.786～3.012,P＜0.05～0.01).④治疗组治疗4周后血总胆固醇、三酰甘油及低密度脂蛋白胆固醇水平明显低于治疗前和对照组治疗4周后(t=1.835～2.973,P＜0.05～0.01),血高密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1水平和载脂蛋白At/载脂蛋白B明显高于治疗前和对照组治疗4周后(t=1.835～2.726,P＜0.05～0.01).结论:银杏叶提取物治疗肾病综合征具有减轻水肿、降低尿蛋白和提升血浆白蛋白作用.该种治疗作用的发挥可能与其有效改善肾病综合征患者微循环障碍、降低血液黏稠度、改善脂质代谢紊乱有关.
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植物雌激素染料木素对狗体外冠状血管的舒张作用及其机制
目的:以血管张力变化为指标,对染料木素和17β-雌二醇的心血管保护作用及相关机制进行探讨和比较.方法:①实验于2005-04/10在湖南学院机能实验室完成.选用雄性杂交家狗心脏,把狗心放在冰冷的K-H液中从屠宰场取回进行实验.染料木素(存在于大豆的植物雌激素),17β-雌二醇,吲哚美辛,Nω-L-硝基精氨酸,放线菌酮,前列腺素F2α和缓激肽,正矾酸钠,均购自Sigma公司;甲烯蓝由上海润捷化学试剂有限公司提供,用蒸馏水溶解,它莫西酚、染料木素、17β-雌二醇用二甲亚砜溶解配制,吲哚美辛用体积分数0.2乙醇溶解.②制备狗冠状动脉血管环,固定于恒温肌槽内,观察染料木素与17β-雌二醇对KCl预收缩离体冠状血管环的舒张作用:血管环稳定后,向浴槽中加入50 mmoL/L KCl,待血管环收缩张力达坪值后,用K-H液冲洗.然后,20min换液1次,平衡30min后重复上述实验,待血管环张力达高峰并稳定后,分别加入染料木素与17β-雌二醇,累积浓度为1,4,8,40和80 μmoL/L,观察血管环张力变化.观察阻断剂及内皮细胞对染料木素与17β-雌二醇舒血管作用的影响:重复前述实验内容后,用K-H液冲洗,每20 min换液1次,温育1.5 h,血管环稳定后,向浴槽中分别加入Nω-L-硝基精氨酸1×10-4mol/L,它莫西酚10-5 mol/L,吲哚美辛1×10-5mol/L,正矾酸钠1×10-5mol/L或放线菌酮1×10-5mol/L,甲烯蓝1×10-5mol/L,温育15 min或用棉签擦除内皮细胞后,重复前述实验内容.对比染料木素与17β-雌二醇对KCl 50 mmol/L预收缩血管平滑肌的舒张作用的变化,并随时记录张力的变化值.③用线性回归法计算染料木素与17β-雌二醇的使激动剂效应降低50%时所采用的拮抗剂的浓度.两组间计量资料差异比较采用t检验,3组或3组以上资料差异比较采用单因素方差分析.结果:①染料木素与17β-雌二醇作用相似,均可使50 mmol/L KCl预收缩冠状动脉血管环产生剂量依赖性舒张作用(r=0.96,P＜0.01),使激动剂效应降低50%时所采用的拮抗剂的浓度分别为(16.37±5.19)μmol/L和(22.64±8.26)μmol/L.②除内皮细胞或加入一氧化氮合酶抑制剂Nω-L-硝基精氨酸1×10-4mol/L,甲烯蓝1×10-5mol/L或正矾酸钠1×10-5mol/L温育,染料木素对50 mmol/L KCl预收缩动脉血管环产生的量效舒张作用无明显改变(P＞0.05),但17β-雌二醇对50 mmol/L KCl预收缩动脉血管环产生的量效舒张作用有明显改变(P＜0.01),1×10-5mol/L吲哚美辛,它莫西酚与放线菌酮对两者量效舒张血管的作用均无明显影响(P＞0.05).结论:①染料木素和17β-雌二醇对冠状动脉血管的舒张作用与前列腺素类物质的合成和血管壁传统雌激素受体无关,与雌激素经典核内作用途径无关.②17β-雌二醇的作用部分与内皮细胞释放的一氧化氮有关.③酪氨酸蛋白激酶系统可能参与了冠状动脉血管张力的调节.
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几种中药对高原脱适应者自由基代谢的影响
目的:探讨银杏叶片、复方红景天、复方党参和刺五加片对高原脱适应者自由基代谢的影响.方法:①选择2005-06在海拔5 170 m地区守防1年的57名健康男性青年,年龄17～24岁.上高原前体检确认健康,且均对干预方案及检测指标知情同意.将受试者随机分为5组:银杏叶片组(12名)、复方红景天组(12名)、刺五加组(11名)、复方党参组(11名)及对照组(11名).②受试者换防下至海拔3 700 m前5 d开始服用,返回平原第7 d停药.银杏叶片组:口服银杏叶片(主要成分:银杏总黄酮甙,银杏苦内酯;江苏晨牌药业集团生产;生产批号:280604,40 mg/片)2片/次;复方红景天组:复方红景天胶囊(主要成分:红景天,黄芪;青海三普药业公司生产;生产批号:020703,0.5 g/粒)2粒/次;刺五加组:刺五加片(成分:刺五加;安徽仁济药业有限公司生产;生产批号:040112,80 mg/片)3片/次;复方党参组:复方党参胶囊(主要成分:党参,沙参;天津洪福制药厂生产;生产批号:910709,0.4 g/片)2粒/次;对照组:安慰剂(炒面胶囊)2粒/次,每日早晚各服1次.③停药后清晨采静脉血,采用化学比色法检测血中丙二醛、超氧化物歧化酶及一氧化氮合酶的水平,用硝酸还原酶法检测一氧化氮含量.④两组间比较采用独立样本的t检验;多组间比较根据方差齐性检验结果,方差齐时采用LSD单因素方差分析,方差不齐时采用Tamhane方差分析.结果:驻守高原青年57名均进入结果分析.①银杏叶片组、复方红景天组和复方党参组一氧化氮、一氧化氮合酶水平明显高于对照组(P＜0.05～0.01),丙二醛水平明显低于对照组[(4.00±0.24),(4.07±0.22);(4.04±0.18),(4.41±0.35)μmol/LP＜0.05].②复方党参组血清超氧化物歧化酶水平明显高于对照组[(1.980±0.167),(1.809±0.122)μkat/L,P＜0.05].③银杏叶片组、复方红景天组和复方党参组血清丙二醛水平明显低于刺五加组[(4.28±0.23)pmol/L,P＜0.05].④复方红景天组血清一氧化氮、一氧化氮合酶水平明显高于刺五加组[复方红景天组:[(97.4±14.7)μmol/L,(1.165±0.178)μkat/L];刺五加组:[(81.2±12.6)μmol/L,(0.988±0.173)μkat/L,P＜0.05].⑤复方党参组血清一氧化氮水平明显高于刺五加组[(96.5±15.4)μmol/L,(79.9±13.5)μmol/L,P＜0.05].结论:银杏叶片、复方红景天和复方党参均具有明显减轻高原脱适应者机体脂质过氧化反应,降低再供氧损伤的功效,而刺五加此方面的功效不明显.
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荔枝核提取液对糖尿病小鼠模型血糖、血脂等相关指标的干预效应
目的:观察荔枝核提取液对四氧嘧啶糖尿病小鼠血糖、血脂、脑蛋白、脑匀浆谷胱甘肽过氧化物酶、氧自由基含量的影响.方法:实验于2005-04/05在广西右江民族医学院生化教研室实验室完成,本实验室为广西高校重点实验室.①选用健康小白鼠40只,选用10只为正常对照组.对其余30只小鼠进行造模:用四氧嘧啶按200 mg/kg剂量用蒸馏水溶解后作一次性腹腔注射,注射后第3天空腹血糖升高稳定后并达8.10 mmol/L以上为造模成功,随机将造模成功的小鼠24只分为3个组:荔枝核提取液高、低剂量治疗组,模型组,每组8只.高剂量荔枝核提取液治疗组:每只荔枝核提取液0.3 mL灌胃;低剂量荔枝核提取液治疗组用荔枝核提取液0.1 mL荔枝核提取液加0.2 mL蒸馏水灌胃;1次/d,连续4 d.模型组和正常对照组用0.3 mL蒸馏水灌胃,1次/d,连续4 d.②在造模前、造模后3 d,治疗后2,4 d各用邻甲苯胺微量法测定空腹血糖.治疗4 d后采用GPO-POD酶法测定三酰甘油,采用COD-CE-PAP酶法测定总胆固醇,采用沉淀法测定高密度脂蛋白胆固醇,采用双缩脲法测定脑蛋白,用酶促反应的速度表示脑匀浆谷胱甘肽过氧化物酶的活力,采用α-萘胺法测定脑匀浆氧自由基含量.③计量资料差异比较采用方差分析.结果:四氧嘧啶腹腔注射后有2只小鼠死亡,造模失败4只,终34只进入结果分析.①空腹血糖:造模前各组小鼠无明显差异(P＞0.05);治疗4 d后,荔枝核提取液低剂量治疗组和荔枝核提取液高剂量治疗组明显低于模型组(P＜0.05),与正常对照组相近(P＞0.05).②治疗4 d后血脂:各组三酰甘油差异不明显(P＞0.05),荔枝核提取液高剂量治疗组血清高密度脂蛋白胆固醇水平明显高于模型组和荔枝核提取液低剂量治疗组(P＜0.05,0.01).③治疗4 d后脑匀浆生化指标:正常对照组、荔枝核提取液高、低剂量治疗组脑谷胱甘肽过氧化物酶活性明显高于模型组(P＜0.05),脑氧自由基含量低于模型组(P＜0.05).结论:①荔枝核提取液具有降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠血糖水平,调节血脂紊乱状况功能.②荔枝核提取液具有促进氧自由基的清除,增加机体抗氧化能力的作用.
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玉竹提取物A对1型糖尿病小鼠的免疫干预作用
目的:观察百合科黄精属中草药玉竹经水醇法提取而来的玉竹提取物A对链脲佐菌素诱导的1型糖尿病小鼠血糖、T淋巴细胞亚群及外周血细胞因子的影响.方法:①实验于2004-05/2004-12在锦州医学院医学实验中心完成.选用C57BL小鼠60只.随机抽取9只作为正常对照组小鼠(只注射等体积枸橼酸钠缓冲液),其余小鼠应用4 g/L链脲佐菌素溶液,按40mg/kg剂量腹腔注射制备1型糖尿病模型,1次/d,连续5 d,以血糖≥11.4 mmol/L,尿糖卅以上2周,为造模成功,低于此值弃去,造模成功36只.将其随机分为4组,每组9只:模型组,玉竹提取物A 1,2,4 g/kg组.②正常对照组与模型组腹腔注射生理盐水0.5 mL,1次/d,共4周;玉竹提取物A1,2,4 g/kg组,分别按1,2,4 g/kg剂量腹腔注射0.5 mL玉竹提取物A(由锦州医学院免疫教研室潘兴瑜教授提供,玉竹的干燥根茎经水醇法提取而得),1次/d,共4周.③用药4周监测血糖变化,应用流式细胞仪检测用药后1型糖尿病小鼠脾T淋巴细胞亚群含量变化;采用酶联免疫分析法检测用药后1型糖尿病小鼠血清白介素4、白介素10、干扰素γ水平变化.④组间比较采用方差分析.结果:造模失败15只,正常小鼠9只及造模成功小鼠36只进入结果分析.①空腹血糖水平:用药前各组差异不明显(P＞0.05),用药后,玉竹提取物各剂量组明显低于模型组(P＜0.05～0.01).②CD4+T淋巴细胞含量和CD4+与CD8+T淋巴细胞比值:模型组明显高于正常对照组和玉竹提取物各剂量组(P＜0.05～0.01),CD8+F淋巴细胞含量:模型组明显低于正常对照组和玉竹提取物各剂量组(P＜0.05～0.01).③血清白细胞介素4和10水平:模型组明显低于正常对照组和玉竹提取物各剂量组(P＜0.05～0.01),血清干扰素γ水平:模型组明显高于正常对照组和玉竹提取物各剂量组(P＜0.05～0.01).结论:玉竹提取物A经腹腔注射能明显降低1型糖尿病小鼠血糖,其机制与恢复CD4+和CD8+T淋巴细胞亚群平衡,调节发病过程中细胞因子 水平有关.
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通心络胶囊对原发肾病综合征患者血液流变学指标及血管活性物质的调节作用
目的:观察中药复方制剂通心络胶囊对肾小球疾病原发肾病综合征患者的治疗效果,并从血清生化指标、血液流变学指标以及血清一氧化氮、内皮素水平的变化,探讨其可能的治疗机制.方法:随机抽取2004-06/2004-12河北北方学院附属第一医院肾内科住院的40例原发肾病综合征患者,进行通心络胶囊治疗原发肾病综合征疗效观察.通心络胶囊是由8种成分组成的复方中药,主要成分是人参、水蛭、全蝎、蜈蚣、土鳖虫、蝉蜕、赤芍和冰片(石家庄以岭药业股份有限公司生产,040318,040726).所有入选患者常规低盐优质蛋白饮食[0.8～1.0 g/(kg·d)],规律口服强的松,足量期为1 mg/(kg·d),一般在40～60 mg/d,加服通心络胶囊,4粒/次,3次/d.疗程2个月.观察治疗前后24 h尿蛋白、血清血浆白蛋白、胆固醇以及三酰甘油等生化指标、全血黏度、血浆黏度、血浆纤维蛋白原以及血小板聚集率等血液流变学指标以及硝酸还原酶法检测一氧化氮含量、放射免疫方法检测血清内皮素含量的变化.结果:所有入选患者全部完成观察,全部进入结果分析.①治疗2个月后原发肾病综合征患者24 h尿蛋白定量、胆固醇、三酰甘油、内皮素水平均显著低于治疗前[(2.35±2.28),(5.59±2.30)g/d;(4.66±1.03),(5.62±0.96)mmol/L;(2.90±1.07),(4.10±2.51)mmol/L;(77.9±12.6),(119.7±12.3)μg/L,t=6.327,4.312,2.781,15.014,P＜0.01].②治疗2个月后,原发肾病综合征患者血浆黏度及全血黏度(高切、低切)显著低于治疗前[(1.63±0.19),(1.98±0.25)mPa·s;(4.35±1.05),(6.24±1.20)mPa·s;(8.48±2.79),(10.5±3.46)mPa·s;t=7.050,7.496,2.874,P＜0.01];③血浆白蛋白和一氧化氮水显著高于治疗前平[(35.74±4.56),(25.23±8.86)g/L;(65.5±12.4),(43.9±10.8)μmol/L,t=6.671,8.308,P＜0.01].结论:通心络胶囊对原发肾病综合征患者有较好的治疗作用,其机制可能与改善血液黏稠度、降脂、降低内皮素释放、促一氧化氮合成等因素有关.
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加味补肝汤对糖尿病周围神经病变大鼠背根节p38丝裂素活化蛋白激酶表达的干预作用
目的:观察中药加味补肝汤对链脲佐菌素致糖尿病周围神经病变大鼠背根节的保护作用.方法:实验于2005-02/09在湘雅医院中西医结合研究所完成.①选用健康雄性Wistar大鼠40只.随机抽取10只大鼠为正常对照组,给予等体积的枸橼酸缓冲液一次性腹腔注射.其余30只大鼠禁食12 h后腹腔内1次注射1%链脲佐菌素溶液50 mg/kg,3 d后血糖浓度＞16.7 mmol/L者确定为糖尿病模型造模成功.随机其分为3组:模型组、加味补肝汤组、牛磺酸组,每组10只.造模稳定1周后,加味补肝汤组应用加味补肝汤治疗,该方由枸杞15 g,木瓜15 g,当归10 g,川芎10 g,熟地12 g,白芍15 g,桑寄生15 g,麦冬15 g,天花粉15 g等组成,按13.6 g/(kg·d)灌胃,1次/d,连续8周.模型组及正常对照组大鼠自由进食水,牛磺酸组饮含1%牛磺酸的蒸馏水.②8周后应用计算机图像处理分析技术对免疫组化结果进行定量分析,通过Motic Images Advanced彩色图形处理分析系统,测定免疫反应产物p38丝裂素活化蛋白激酶的灰度值,测定结果扣除背底及阴性值,免疫组化产物染色越深,灰度值就越小,抗原物质的含量就越高,表达强度越高.采用免疫组化方法检测各组大鼠背根节内p38丝裂素活化蛋白激酶表达,化学比色法测定血清丙二醛含量.③计量资料差异比较采用t检验.结果:整个观察过程中,正常对照组无动物死亡,加味补肝汤组死亡3只,牛磺酸组、模型组各死亡2只,终进入结果分析正常对照组10只,加味补肝汤组7只,牛磺酸组和模型组各8只.①大鼠背根节内p38丝裂素活化蛋白激酶表达强度及血清丙二醛水平:模型组明显高于正常对照组(P＜0.01),加味补肝汤及牛磺酸组低于模型组(P＜0.05～0.01).②正常对照组未见或者及少量可见p38阳性表达,模型组、牛磺酸组、加味补肝汤组可见p38阳性细胞,以模型组阳性表达细胞多且着色深.结论:中药加味补肝汤具有抗氧化损伤、明显保护链脲佐菌素致糖尿病周围神经病变大鼠背根节的作用,可能与其能抑制p38丝裂素活化蛋白激酶通路、抗脂质过氧化反应有关.
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丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠左心室肥厚心肌细胞凋亡蛋白的作用
目的:观察丹参的脂溶性成分丹参酮ⅡA对自发性高血压大鼠左室肥厚心肌凋亡蛋白的作用.方法:实验于2005-03/2005-07在华中科技大学同济医学院急诊科实验室完成.①选用8周龄自发性高血压大鼠18只.随机将大鼠分为3组:对照组、丹参酮组、高血压组,每组6只.②对照组:饲养至第8周处死;丹参酮组:从饲养至第8周开始,丹参酮ⅡA(中国药品生物制品检定所,批号S02001300,1 kg/包)以1 mL/(kg·d)剂量腹腔注射,持续用药10周,第18周处死;高血压组:以相同容量蒸馏水替代丹参酮ⅡA腹腔注射,余同丹参酮组.③用药结束后用MRS2Ⅲ型大鼠电脑血压心率测量仪测量大鼠清醒状态下尾动脉收缩压.④处死后,迅速取出心脏,称量左心室(包括室间隔)的湿重,计算左室质量指数[左室质量(mg)/体质量(g)].⑤采用免疫印迹法检测心肌细胞Bcl-2,Bax及p53蛋白表达.⑥计量资料差异比较采用单因素方差分析.结果:自发性高血压大鼠18只均进入结果分析.①高血压组大鼠左心室心肌组织Bcl-2蛋白表达明显低于对照组(t=2.405,P＜0.05),而p53和Bax蛋白表达明显高于对照组(t=14.51,10.26,P＜0.01).丹参酮组Bcl-2表达明显高于高血压组(t=2.359,P＜0.05),而p53和Bax蛋白表达明显少于高血压组(t=11.74,7.13,P＜0.01).②高血压组大鼠的收缩压和左室质量指数明显高于对照组(t=6.68,3.84,P＜0.01),左室质量指数明显高手丹参酮组(t=2.80,P＜0.05).结论:长期应用丹参酮ⅡA治疗可预防自发性高血压大鼠左室肥厚的形成,其机制可能与丹参酮ⅡA上调心肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、下调Bax蛋白及抑制p53蛋白的表达有关.
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高脂饲料和高果糖餐分别诱导胰岛素抵抗大鼠模型的胰岛素敏感性
目的:建立高脂饲料和高果糖餐诱导的胰岛素抵抗大鼠模型,分别评定两种动物模型的胰岛素敏感性.方法:实验于2004-03/06在南京中医药大学第一临床医学院中医内科急难症研究所完成,选用Wistar雄性大鼠72只,适应性饲养1周后,随机分为3组,即空白组、果糖模型组和高脂模型组,每组24只.空白组继续以普通标准大鼠饲料喂养,饮用自来水;果糖模型组以100 g/L的果糖水取代自来水喂养;高脂模型组以高脂饲料取代普通标准大鼠饲料喂养,连续6周.每周测量各组大鼠的体质量、血压.6周结束时,分别测定各组大鼠葡萄糖耐量、血清游离脂肪酸、三酰甘油、血浆胰岛素,同时以正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术,结合输注3H-2DG测定股四头肌葡萄糖摄取率评定大鼠的胰岛素敏感性.胰岛素敏感性指数=1n 1/(空腹血糖×空腹胰岛素).结果:纳入72只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①各组大鼠体质量、血压比较:与空白组大鼠比较,高脂模型组体质量显著增加(t=2.819～11.430,P＜0.01),果糖模型组血压显著升高(t=4.743～14.510,P＜0.01).②各组大鼠糖耐量比较:果糖模型组和高脂模型组大鼠的葡萄糖耐量显著低于空白组(t=2.833,4.030,P＜0.05,P＜0.01).③各组大鼠血清三酰甘油、游离脂肪酸、血浆胰岛素含量比较:果糖模型组和高脂模型组大鼠显著高于空白组(t=3.059～10391,P＜0.01).④各组大鼠胰岛素敏感性指数、葡萄糖输注率、葡萄糖摄取率比较:果糖模型组和高脂模型组大鼠显著低于空白组(t=2.212～58.052,P＜0.01).结论:高脂饲料和高果糖餐喂饲均可以诱导胰岛素抵抗大鼠模型.
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金银花复方制剂对异丙肾上腺素诱发小鼠急性心肌缺血的影响
目的:探讨具有抗炎、镇痛、抑菌、解毒、扩张血管、抑制血小板聚集及抗血栓功效的纯中药金银花复方口服制剂对异丙肾上腺素诱发小鼠急性心肌缺血的影响.方法:①实验于2005-04/06在延边大学基础医学院药理学实验室完成.选用6～7周龄昆明种雄性小鼠80只.②观察金银花复方制剂金银冠心口服液对异丙肾上腺素诱发小鼠急性心肌缺血密闭缺氧存活时间的影响:取小鼠40只,随机分为4组:正常组、模型组、金银冠心口服液组、阳性对照组,每组10只.金银冠心口服液组给予金银冠心口服液(金银冠心口服液由延边大学药学院药剂科提供,主要成分为金银花、川芎、三七、丹参、玄参、当归、甘草等,每毫升含生药3 g)含生药78 g/(kg·d),阳性对照组给予0.98%的地奥心血康(成都地奥制药集团有限公司生产,批号0411028,0;1 g/粒,临用前将胶囊去壳,内容物用蒸馏水配成0.98%的地奥心血康溶液)溶液0.195 g/(kg·d),灌胃容量为0.2 mL/10 g,正常组及模型组给予等容量生理盐水灌胃,1次/d,连续给药10 d.给药第8天起,除了正常组外,各组均腹腔注射异丙肾上腺素0.01 g/(kg·d)复制小鼠急性心肌缺血模型.末次给药15 min后,将每只小鼠分别放入250 mL广口瓶内密闭,记录小鼠存活时间.③观察金银冠心口服液对异丙肾上腺素诱发小鼠急性心肌缺血心肌含水量的影响:将其余40只小鼠随机分为4组:正常组、模型组、金银冠心口服液组、阳性对照组,每组10只.金银冠心口服液组给予金银冠心口服液含生药78 g/(kg·d);阳性对照组给予0.98%的地奥心血康溶液0.195 g/(kg·d),灌胃容量为0.2 mL/10 g;正常组及模型组给予等容量生理盐水灌胃,1次/d,连续给药10 d.给药第8天起,除了正常组外,各组均腹腔注射异丙肾上腺素0.01 g/(kg·d)复制小鼠急性心肌缺血模型.末次给药15 min后处死小鼠,迅速取其完整心肌组织,称心肌湿重;110℃干烤8 h后,再称其干重,并计算心肌含水量[(湿重-干重)/湿重×100%].④计量资料差异比较采用单因素方差分析.结果:小鼠80只均进入结果分析.①小鼠存活时间:金银冠心口服液组和阳性对照组及正常组明显长于模型组[(25.73±3.70),(26.05±2.14),(27.34±1.69),(22.47±1.89)min,P＜0.01].②小鼠心肌含水量:模型组明显高于正常组和金银冠心口服液组[(79.09±0.86)%,(77.57±0.75)%,(78.09±1.00)%,P＜0.05].结论:①金银冠心口服液能明显延长异丙肾上腺素诱发小鼠急性心肌缺血密闭缺氧存活时间,提高小鼠耐缺氧能力.②金银冠心口服液能明显抑制异丙肾上腺素诱发急性心肌缺血小鼠心肌含水量的增加.
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黄芪多糖对糖尿病心肌病变仓鼠心肌胶原表达的影响
目的:观察黄芪的有效成分之一黄芪多糖对链脲佐菌素诱导糖尿病心肌病变仓鼠物质代谢及心肌胶原代谢的影响,进而探讨黄芪多糖对糖尿病心肌病变的治疗价值及可能机制.方法:实验于2002-06/2003-06在复旦大学上海医学院病理教研室完成.选用普通级8周龄雄性仓鼠30只.黄芪多糖由原中国科学院上海生理学研究所提供.①选用6只为正常对照组:正常饲养,不予特殊处理.其余24只仓鼠禁食12 h后,腹腔注射10 g/L链脲佐菌素溶液,剂量为40 mg/kg,连续3 d.用血糖仪测定尾尖血血糖,血糖稳定7 d后,选用血糖＞13.5 mmol/L仓鼠12只为糖尿病造模成功者,将其随机分为2组:模型组(每天予1 mL生理盐水灌胃)和黄芪多糖治疗组(按1 g/kg剂量将黄芪多糖稀释成1 mL生理盐水灌胃),每组6只.实验持续10周.(②实验10周后采用全自动生化分析仪测定血清三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和糖化血清蛋白水平.放免法测定血清胰岛素水平.采用亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法检测心肌Ⅰ,Ⅲ型胶原含量,以免疫组化阳性指数(灰度均值×阳性面积百分比).采用放免法测定血浆、心肌局部血管紧张素Ⅱ.③计量资料差异比较采用t检验.结果:造模失败脱失12只,终进入结果分析18只.①造模后模型组和黄芪多糖治疗组仓鼠血糖水平均明显高于正常对照组(P＜0.01).实验10周后黄芪多糖治疗组血糖水平明显低于模型组(P＜0.01);模型组和黄芪多糖治疗组仓鼠血清胰岛素水平均明显低于正常对照组(P＜0.01),且模型组与黄芪多糖治疗组比较,差异不明显(P＞0.05).②实验10周后,模型组仓鼠血清三酰甘油、总胆固醇及低密度脂蛋白胆固醇水平明显高于正常对照组(P＜0.05～0.01),而高密度脂蛋白胆固醇水平差异不明显(P＞0.05).黄芪多糖治疗组血清三酰甘油水平明显低于模型组(P＜0.05).③实验10周后,模型组仓鼠心肌Ⅰ和Ⅲ型胶原表达和Ⅰ/Ⅲ型胶原明显高于正常对照组(P＜0.01).黄芪多糖治疗组仓鼠心肌Ⅰ型胶原表达和Ⅰ/Ⅲ型胶原明显低于模型组(P＜0.05).④实验10周后,模型组仓鼠血浆血管紧张素Ⅱ水平和心肌局部血管紧张素Ⅱ含量明显高于正常对照组(P＜0.01).心肌局部血管紧张素Ⅱ含量明显低于模型组(P＜0.05).结论:黄芪多糖可改善糖尿病心肌病变仓鼠心肌胶原沉积,其对心肌病变的治疗机制可能与改善物质代谢及减少心肌局部血管紧张素Ⅱ的生成有关.
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甘草对抗D-半乳糖诱导大鼠糖耐量减低的作用
目的:观察甘草拮抗D-半乳糖诱导大鼠糖耐量减低作用,分析该作用性别差异性,并与二甲双胍和水飞蓟宾作对照.方法:实验于2003-03/05在广州市中医中药研究所药理研究室的普通级动物室完成.①选用鼠龄6～8周的SD大鼠103只,雌雄不拘,随机分为5组:正常对照组(n=21)、模型组(n=18)、甘草组(n=22)、二甲双胍组(n=20)、水飞蓟宾组(n=22).除正常对照组腹腔注射等量溶媒代替D-半乳糖连续56 d外,其余组大鼠腹腔注射D-半乳糖150 mg/kg,1次/d,连续56 d造成糖耐量减低模型.在后42 d造模同时,甘草组:按0.44 g/(kg·d)剂量灌胃甘草混悬液(主要成分:甘草,由广东一方制药厂生产,批号:020315,5 g/袋,将甘草颗粒剂用蒸馏水配成混悬液);二甲双胍组:以0.25 g/kg剂量灌胃二甲双胍(由深圳中联制药厂生产,生产批号:200212305,0.5 g/片)溶液;水飞蓟宾组:以0.25 g/kg剂量灌胃水飞蓟宾(由江苏中兴药业有限公司生产,批号:20030303,50 mg/片)溶液;均1次/d,连续42 d.②造模成功后,大鼠称体质量,测空腹血糖和口服葡萄糖耐量试验后2 h血糖,计算空腹血糖与餐后2 h血糖差值.③计量资料差异比较采用t检验(方差不齐,用t'检验).结果:大鼠103只均进入结果分析.①模型组大鼠空腹血糖与正常对照组接近,但口服葡萄糖耐量试验后2 h血糖明显高于正常对照组(t=6.521 4,P＜0.01),即糖耐量减低的胰岛素抵抗状态;而甘草组、二甲双胍组、水飞蓟宾组大鼠体质量和空腹血糖与模型组相近(P＞0.05),口服葡萄糖耐量试验后2 h血糖明显低于模型组(t=3.585～5.980,P＜0.01),空腹血糖与口服葡萄糖耐量试验后2 h血糖差值明显低于模型组(t=2.897～6.094,P＜0.01),即改善D-半乳糖诱导胰岛素抵抗大鼠的糖耐量减低.另外,模型组大鼠体质量低于正常对照组,但差异不明显(P＞0.05).雄性大鼠各指标组间差异同前.②模型组雌鼠空腹血糖和口服葡萄糖耐量试验后2 h血糖明显高于正常对照组(t=3.401 4,6.858,P＜0.01),即糖耐量减低的胰岛素抵抗状态.甘草组、二甲双胍组雌鼠空腹血糖明显低于模型组(t=2.288,2.301,P＜0.05),水飞蓟宾组雌鼠空腹血糖与模型组相近(P＞0.05);3个给药组雌鼠口服葡萄糖耐量试验后2 h血糖和空腹血糖与口服葡萄糖耐量试验后2 h血糖间血糖差值明显低于模型组(t=4.1763～6.3716,P＜0.01),即能改善糖耐量减退.另外,各给药组雄鼠体质量与正常对照组和模型组相近(P＞0.05).结论:①D-半乳糖可诱导以糖耐量减低为表现的胰岛素抵抗,以雌性大鼠更为明显.②甘草、二甲双胍和水飞蓟宾均能改善D-半乳糖诱导胰岛素抵抗大鼠的糖耐量.
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红花黄色素对特发性水肿患者血液流变学指标及血清一氧化氮的影响
目的:观察特发性水肿患者经红花注射液干预后,血液流变学指标和血清一氧化氮含量及其合酶活性的变化,探讨红花注射液对特发性水肿的治疗机制.方法:①选择2000-01/2001-12河北北方学院(原张家口医学院)附属第一医院心血管内科门诊就诊的特发性水肿患者50例为特发性水肿组,均为女性,均对治疗方案及检测项目知情同意.选择同期本院接受健康体检的学生及医务人员30人为对照组,均为女性.②应用红花注射液(主要成分为红花黄色素,太原华卫药业有限公司生产,批号:010302,2 mL/支)对特发性水肿组患者进行治疗,将红花注射液6～8 mL溶于500 mL葡萄糖注射液中,静脉滴注,1次/d,15 d为1个疗程.治疗1个疗程.对照组未进行干预.③应用硝酸还原酶法、化学显色法对特发性水肿患者治疗前后及对照组采用由南京建成生物工程研究所提供的一氧化氮定量试剂盒、一氧化氮合酶分型试剂盒检测NO2-/NO3-含量及一氧化氮合酶、诱导型一氧化氮合酶活性;同时在治疗前后,LBY-N6B型全自动模块式血流变仪测定全血黏度的变化,以LBY-F200B型全自动微量血浆黏度计测定血浆黏度.④多组间计量资料差异比较采用单因素方差分析,组内计量资料差异比较采用配对t检验.结果:特发性水肿患者50例和健康体检者30人均进入结果分析.①全血黏度、血浆黏度:特发性水肿组治疗前明显高于对照组(t=1.694～2.067,P＜0.05～0.01);治疗后明显低于治疗前(t=1.811～1.929,P＜0.05).②血清一氧化氮含量及其合酶活性:特发性水肿组治疗前明显低于对照组(t=2.600～3.031,P＜0.01);治疗后明显高于治疗前(t=1.995,1.725,1.939,P＜0.05).结论:红花注射液通过改善特发性水肿患者血液流变学指标及提升一氧化氮含量及其合酶活性起到治疗作用.
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滋肾活血凉斑方加火把花根片对活动期系统性红斑狼疮患者生化指标的影响
目的:观察具有滋补肾阴、凉血活血、清热解毒、通络退斑功效的滋肾活血凉斑方加具有祛风除湿、舒筋活络、清热解毒功效的火把花根片对活动期系统性红斑狼疮患者疾病活动情况、血液流变学指标及阴虚热毒血瘀证候的影响. 方法:①选择1998-01/2005-06重庆医科大学附属一院、重庆医科大学中医药学院附院中西医结合科诊治的中医辨证为"肾阴虚兼热毒血瘀"证的活动期系统性红斑狼疮门诊患者60例.男3例,女57例.患者均知情同意.患者被随机分为2组:治疗组(40例,男2例,女38例)和对照组(20例,男1例,女19例).②治疗组:予滋肾活血凉斑方加火把花根片治疗(滋肾活血凉斑方基本组成:女贞子30 g,旱莲草30 g,知母15 g,蚕砂15 g,千里光30 g,白花蛇舌草30 g,银花藤30 g,丹参30 g,益母草15 g,僵蚕15 g等,火把花根片由重庆市中药研究院制药厂生产,国药准字Z20027411,0.18 g/片).滋肾活血凉斑方水煎服,1剂/d,分3次服用;火把花根片0.9 g,3次/d,2个月后逐渐减量.共干预6个月.对照组:采用强的松标准疗程治疗.③治疗前及治疗6个月后分别对各组进行疾病活动评分(抽搐8分、精神异常8分、脑器质性症状8分、视力下降8分、颅神经受累8分、狼疮头痛8分、脑血管意外8分、血管炎8分、关节炎4分、肌炎4分、管型尿4分、血尿4分、蛋白尿4分、脓尿4分、新出皮疹2分、脱发2分、口腔溃疡2分、发热1分、血小板减少1分、白细胞减少1分.计总分).治疗前和治疗6个月后检测疾病活动指标抗核抗体、抗双链DNA抗体、补体C3、血沉、尿常规、24 h尿蛋白定量、肾功;采用全自动血液流变分析系统检测血液流变学指标.治疗6个月后进行阴虚热毒血瘀证疗效评估(显效:症状、体征明显改善,证候积分减少≥70%;有效:症状、体征均有好转,证候积分减少≥30%;无效:症状、体征无改善,证候积分减少＜30%,甚或加重).④组间计量资料比较采用配对t检验,计数资料比较采用χ2检验进行统计学分析.结果:系统性红斑狼疮疾病活动期患者60例均进入结果分析.①两组治疗6个月后疾病活动评分明显低于治疗前,治疗组治疗后疾病活动评分明显低于对照组(P＜0.01).②两组治疗6个月后疾病活动指标均明显好于治疗前(P＜0.01).治疗组治疗后对血尿、蛋白尿、肾功异常的疗效明显优于对照组(P＜0.01).③系统性红斑狼疮患者有不同程度的血液流变学指标升高,治疗组治疗后全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数、红细胞电泳时间明显低于对照组和治疗前(P＜0.01).④治疗组治疗6个月后疗效明显优于对照组(P＜0.01).结论:滋肾活血凉斑方加火把花根片治疗活动期阴虚热毒血瘀证系统性红斑狼疮患者可控制疾病活动,降低其异常升高的血液流变学指标,改善阴虚热毒血瘀证候,其疗效优于强的松.
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参芪脑保含药血清在体外培养PC12细胞抗凋亡作用中的量效分析
目的:观察在经典药方补阳还五汤基础上加减而成的参芪脑保对体外培养的正常PC12细胞增殖和对抗活性氧(100μmol/L过氧化氢)引起的细胞凋亡作用,分析该作用的量效关系.方法:实验于2002-09/2003-04在解放军总医院老年医学研究所老年医学实验室完成.①含药血清制备:选用3月龄SD大鼠,随机分为4组:对照组,参芪脑保6.4,3.2,1.6 g/kg组,每组12只.参芪脑保6.4,3.2,1.6 g/kg组:将参芪脑保颗粒剂(成分:黄芪、丹参、当归尾、桃仁、红花、川芎、赤芍、地龙,10 g/包,由解放军总医院制剂室提供,批号000831)按6.4,3.2,1.6 g/kg剂量溶于2 mL蒸馏水中灌胃;对照组:给予等量蒸馏水.各组连续灌胃7 d后腹主动脉取血分离含药血清.②参芪脑宝对正常细胞增殖的影响:采用大鼠PC12细胞作为体外神经细胞模型.将对数生长期细胞接种于96孔培养板,将细胞随机分为4组:对照组和参芪脑保6.4,3.2,1.6 g/kg组,分别加入含体积分数0.1各组相应含药血清的DMEM培养液,分别于培养24,60和86 h进行细胞计数.③参芪脑保抗活性氧引起的细胞凋亡作用:将对数生长期细胞培养24 h.将细胞随机分为5组:对照组、过氧化氢损伤组和过氧化氢+参芪脑保6.4,3.2,1.6 g/kg组,除对照组外,其余各组均用含过氧化氢(终浓度100μmol/L)和20 g/L B27的无血清DMEM培养基处理30 min,过氧化氢损伤组和氧化损伤组改用含体积分数0.1的对照组血清培养基,参芪脑保各剂量组改用相应的含药血清培养基继续培养48 h.④采用四氮唑蓝比色法测定正常细胞增殖和活性氧损伤后细胞存活数;采用流式细胞仪和DNAladder法观察细胞凋亡及参芪脑保抗凋亡作用及其剂量效应关系.⑤多组间差异采用方差分析,根据方差齐性结果,采用非配对t检验作两组间比较.结果:①参芪脑保对正常细胞增殖的影响:与对照组相比,参芪脑保6.4,3.2,1.6 g/kg组在培养24,48和86 h时均能明显提高正常PC12细胞的存活数(P＜0.01),但无明显剂量效应关系.②参芪脑保对活性氧损伤后细胞存活数的影响:过氧化氢损伤组的细胞存活数明显低于对照组(P＜0.01),除了过氧化氢+参芪脑保1.6 g/kg组外,过氧化氢+参芪脑保6.4,3.2 g/kg组细胞存活数明显高于过氧化氢损伤组(P＜0.01).③参芪脑保对活性氧损伤后细胞凋亡率影响:过氧化氢损伤组的细胞凋亡率明显高于对照组,除过氧化氢+参芪脑保1.6 g/kg组外,过氧化氢+参芪脑保6.4,3.2 g/kg组细胞凋亡率均明显低于过氧化氢损伤组(P＜0.01).④参芪脑保对活性氧损伤后细胞DNA片断化的影响:过氧化氢损伤组细胞的DNA片断化明显增强,过氧化氢+参芪脑保3.2 g/kg组也可见轻度DNAladder现象,但过氧化氢+参芪脑保3.2 g/kg和6.4 g/kg组的DNAladder则明显减弱甚至消失,说明有明显的剂量效应关系.结论:参芪脑保对正常培养PC12细胞具有明显促进增殖作用,并在较高剂量下能显著对抗过氧化氢引起的细胞存活率降低、细胞凋亡率增高和DNA片断化,表明参芪脑保具有明显的神经保护作用,其机制可能与抗氧化反应有关.
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通心络对大鼠脑缺血再灌注模型微血管细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1表达的影响
背景:现代医学发现通心络制剂除了具有抗凝和抑制血小板聚集作用外,对血管内皮细胞有一定的保护作用.目的:观察中药复方制剂通心络是否影响脑缺血再灌注动物模型黏附分子的表达.设计:随机对照实验.单位:解放军第二军医大学长征医院神经内科.材料:实验于2002-10/2003-01在解放军第二军医大学长征医院神经内科实验室完成.选择雄性SD大鼠25只,随机分为假手术组5只、模型组10只和通心络组10只.方法:线栓法制备大鼠大脑中动脉脑局灶性脑缺血再灌注模型,假手术组除将尼龙线插在颈外动脉接近颈内动脉分叉处外,其余同模型组.通心络组大鼠在缺血再灌注前给予通心络粉剂1.0 g/(kg·d),溶在生理盐水中灌胃1周.模型组和假手术组灌胃等剂量生理盐水.各组大鼠麻醉后取脑制备切片,行常规苏木精-伊红染色、免疫组化及原位杂交染色.主要观察指标:①缺血再灌注后细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1阳性微血管表达数目.②缺血再灌注后细胞间黏附分子1 mRNA阳性微血管表达数目.结果:①假手术组手术侧大脑半球皮质和基底节区未见细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子1蛋白和细胞间黏附分子1 mRNA阳性微血管表达.②模型组大鼠缺血2 h再灌注6 h后,缺血侧大脑细胞间黏附分子1、血管细胞黏附分子-1蛋白表达水平和细胞间黏附分子1 mRNA表达水平显著升高.③通心络组缺血侧大脑半球皮质和基底节区蛋白和mRNA阳性微血管数较模型组显著降低[(10.42±1.98),(12.42±2.14)/高倍视野;(8.54±2.00),(11.12±1.56)/高倍视野](P＜0.05),血管细胞黏附分子1蛋白阳性微血管表达数目无显著变化(P＞0.05).结论:通心络可以降低大鼠脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1的转录和翻译过程,有助于减轻脑缺血后的炎症性损伤过程.
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中药川芎、当归有效成分对缺氧后复氧大鼠海马神经元钠、钾电流的作用
背景:中药红景天、人参、当归的有效成分具有抗缺氧损伤的作用.目的:从细胞电生理角度观察中药芎归滴丸对脑海马神经元的保护作用.设计:以细胞为观察对象,自身对照观察.单位:解放军第八十八医院和解放军军事医学科学院.材料:实验于2002-03/08在解放军军事医学科学院毒物药物研究所完成.选择新生清洁级Wistar大鼠1只,取其海马,将其分离培养成海马神经元细胞,然后选取9例海马神经元细胞,将其放入3个培养皿中培养,每个培养皿中3例神经元细胞,将其分为缺氧-复氧前后(对照组)、芎归滴丸(由解放军第八十八医院制剂室提供,主要成分为川芎和当归的挥发油)1×10-6mol/L组和芎归滴丸10×10-6 mol/L组.方法:缺氧-复氧前后组分为两个亚组(即缺氧-复氧前、缺氧-复氧后),均不进行药物干预;芎归滴丸1×10-6 mol/L组分为两个亚组(即芎归滴丸1.0×10-6mol/L+不缺氧组、芎归滴丸1×10-6mol/L+缺氧组);芎归滴丸10×10-6mol/L组分为两个亚组(即芎归滴丸10×10-6 mol/L+不缺氧组、芎归滴丸10×10-6mol/L+缺氧组).采用膜片箝全细胞记录方法检测缺氧-复氧前后体外培养的大鼠海马神经元的电压门控性Na+、K+电流.主要观察指标:体外培养的大鼠海马神经元的电压门控性Na+、K+电流幅度.结果:①海马神经元的电压门控性Na+电流幅度变化:缺氧-复氧后明显低于缺氧-复氧前[(-3.8±1.0,-10.3±0.5)nA,t=3.49,P＜0.01].②海马神经元的电压门控性K+电流幅度变化:缺氧-复氧后K+电流的激活阈值由-40 mV变为-20 mV,电流幅度变化差异无显著性意义.③芎归滴丸预处理后缺氧-复氧前后海马神经元的Na+、K+变化:缺氧-复氧前海马神经元Ⅰ Na Ⅰk在阈值处的幅度很接近,差异无显著性意义.缺氧-复氧后芎归滴丸10×10-6mol/L组高于芎归滴丸1×10-6mol/L组和缺氧-复氧后[(-58.5±1.9,-6.9±1.4,-3.8±1.0)nA,t=7.51,P＜0.05].结论:芎归滴丸对海马神经元的缺氧损伤有抑制作用.
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银杏叶提取物对蛛网膜下腔出血后氧自由基损伤的缓解效应
目的:观察银杏叶提取物对蛛网膜下腔出血后氧自由基代谢的影响及该影响是否存在剂量依赖性.方法:①实验于2003-05/12在泰山医学院脑微循环实验室和附属医院中心实验室完成.选用Wistar大鼠54只.将动物随机分为5组:对照组(6只)、模型组(12只)、溶媒组(12只)、银杏叶提取物100 mg/kg组(12只)和银杏叶提取物200 mg/kg组(12只).②股动脉采血后经冻-溶制备自体动脉血溶血物并注入大鼠枕大池制作蛛网膜下腔出血模型(除对照组外其余4组均造模).③对照组:用0.3 mL生理盐水代替动脉血溶血物行脑池注射;模型组:蛛网膜下腔出血造模后不给予干预;溶媒组:腹腔注射等体积含tween 80的生理盐水;银杏叶提取物100 mg/kg和银杏叶提取物200 mg/kg组:在脑池注入自体动脉血溶血物开始前30 min分别按100 mg/kg和200 mg/kg(首次剂量)腹腔注射银杏叶提取物溶液(为棕黄色粉末,由上海绿源制药有限公司提供,含银杏苦内酯≥6%,银杏黄酮≥24%.银杏叶提取物溶液在临用前新鲜配制,在银杏叶提取物粉剂中加入适量tween 80溶液,研磨后,加入生理盐水使之成3%和6%的溶液),以后每天以上述半量重复2次;以上干预至各标本获取点前12 h为止.④于造模后24 h和72 h按照购于南京建成生物工程研究所试剂盒说明书操作测定各组大鼠脑组织匀浆中超氧化物歧化酶活力和丙二醛含量.⑤计量资料差异比较采用方差分析.结果:大鼠54只均进入结果分析.①脑组织超氧化物歧化酶活性:模型组和溶媒组于造模后24和72 h明显低于对照组(P＜0.01);银杏叶提取物100和200 mg/kg组于造模后24和72 h明显高于模型组(P＜0.01);银杏叶提取物100与200 mg/kg组间差异不明显.②脑组织丙二醛含量:模型组和溶媒组于造模后24和72h明显高于对照组(P＜0.01);银杏叶提取物100和200 mg/kg组于造模后24和72 h明显低于模型组(P＜0.05～0.01);银杏叶提取物100与200 mg/kg组间差异不明显.结论:银杏叶提取物能够有效减轻蛛网膜下腔出血后氧自由基连锁反应所致脑损伤,且不存在明显剂量依赖性.
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人参皂甙对脊髓神经元的作用与一氧化氮水平的关系
背景:众多的实验证实人参皂甙对中枢神经有明显的保护作用,但其对脊髓神经是否具有同样的保护作用,报道较少.目的:探讨人参皂甙保护脊髓神经元的作用与一氧化氮水平的关系及其机制.设计:随机对照动物实验.单位:解放军海军总医院全军高压氧中心.材料:实验于2000年在解放军第一军医大学临床解剖研究所(国家重点实验室)完成.孕期15 d的SD胎鼠40只.方法:实验1:分离提取SD鼠胚脊髓神经细胞,用DMEM/F12培养基,建立培养的脊髓细胞模型,在接种培养的第4天,损伤组采用划痕法损伤脊髓细胞轴突(模拟周围神经损伤),非损伤组不进行处理,分别在损伤后0 h,0.5 h,1 h,1.5 h,2 h,2.5 h,3 h不同时间点取150 μL细胞培养液与等量的100 mg/L Griess液混合,室温下反应10 min,在∑960(入=570 nm)酶标仪上测定吸光度A值.实验2:同样分离提取SD鼠胚脊髓神经细胞,实验组用人参皂甙+DMEM/F12培养基,对照组用DMEM/F12培养基,相同方法测定吸收度.主要观察指标:①脊髓神经元损伤与一氧化氮水平的关系.②人参皂甙保护作用与一氧化氮水平的关系.结果:①脊髓神经元损伤与一氧化氮水平的关系:在损伤组中,脊髓神经细胞损伤后一氧化氮分泌增加,2 h分泌达高峰,3 h渐进下降.其中0.5 h与0 h比较,差异有显著性(P＜0.01);2 h与0 h比较,差异有显著性(P＜0.01).②人参皂甙保护作用与一氧化氮水平的关系:在对照组中,A值随着时间变化而变化增加,2 h达高峰,3 h渐进下降,而实验组A值基本保持不变.其中在2 h时间点,两组比较,差异有显著性(P＜0.01).结论:周围神经损伤后释放一氧化氮增加,人参皂甙通过抑制一氧化氮释放,可能是其保护周围神经的途径之一.
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醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠海马组织碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达的影响
目的:观察醒脑启智胶囊对血管性痴呆小鼠学习和记忆功能及海马组织碱性成纤维细胞生长因子mRNA表达、脑组织病理学改变的影响.方法:实验于2004-12/2005-10在河北医科大学西校区完成.①取健康雄性5周龄昆明小鼠120只.将小鼠随机分为6组:假手术组,模型组,醒脑启智胶囊液高剂量组,醒脑启智胶囊液低剂量组,银杏叶液组,尼莫地平组,每组20只.②采用双侧颈总动脉反复结扎脑缺血再灌注的方法制备血管性痴呆小鼠模型.术后第2天进行分组干预.醒脑启智胶囊液高、低剂量组:灌服醒脑启智胶囊液(河北医科大学生产,由石菖蒲、川芎、橘络、枸杞子组成,为水煎醇沉工艺制作胶囊,每克浸膏相当于中药生药6.24 g,实验时用0.5%羧甲基纤维素钠配成184 g/L和92 g/L溶液)1.84,0.92 g/kg;银杏叶液组:灌服银杏叶液(每片含银杏叶提取物50 mg,广西半宙制药股份有限公司生产,批号为20040902,实验时用0.5%羧甲基纤维素钠配制成浓度为2.5 g/L的混悬液)0.05 g/kg;尼莫地平组:灌服尼莫地平液(石家庄市华龙药业股份有限公司生产,批号为20041017,20 mg/片)0.04 g/kg,假手术组,模型组:均灌服生理盐水10 mL/kg,1次/d,治疗7 d.③采用电子水迷宫测试学习和记忆成绩;采用苏木精-伊红染色法进行脑组织的病理形态学观察,并采用反转录聚合酶链反应检测实验小鼠海马组织碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达.④计量资料差异比较采用方差分析、LSD法检验.结果:造模过程中死亡49只,71只进入结果分析.①光镜下病理形态学显示:模型组小鼠脑组织海马区呈缺血性病理改变,各用药组小鼠病变轻于模型组.②小鼠学习成绩与记忆成绩:模型组明显差于假手术组(P＜0.01);各用药组明显优于模型组(P＜0.05～0.01).各用药组间比较,差异不明显(P＞0.05).③小鼠脑组织海马区碱性成纤维细胞生长因子mRNA的相对表达:模型组明显高于假手术组(P＜0.05);醒脑启智胶囊液高、低剂量组,针杏叶液组和尼莫地平组均明显高于模型组(P＜0.01);醒脑启智胶囊液高剂量组明显高于醒脑启智胶囊液低剂量组、银杏叶液组和尼莫地平组(P＜0.05～0.01),醒脑启智胶囊液低剂量组、银杏叶液组、尼莫地平组之间比较,差异不明显(P＞0.05).结论:醒脑启智胶囊可明显改善血管性痴呆小鼠学习和记忆功能,其作用机制之一是调节海马组织碱性成纤维细胞生长因子mRNA的表达,减轻缺血再灌注损伤.
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丹参提取制剂对耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的影响
目的:观察具有活血化淤,扩张耳蜗血管,改善内耳微循环之功效的丹参提取制剂对豚鼠庆大霉素耳中毒引起的耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶变化的影响.方法:实验于2004-09/12在泰山医学院生理听觉研究室完成.选用耳郭反射正常、体质量为250～300g的健康杂色豚鼠,雌雄不拘,排除耳郭反射的声刺激强度超过正常±2.5dB的实验豚鼠.将动物随机数分成3组:正常对照组动物15只,肌肉注射生理盐水2 mL/(kg·d);庆大霉素组动物15只,肌肉注射庆大霉素80 mg/(kg·d);丹参注射液组动物15只,腹腔注射丹参注射液(含生药量1.5 kg/L)6 mg/(kg·d),然后肌肉注射庆大霉素同庆大霉素组.各组动物连续注射药物均20 d.用脑干听觉诱发电位的方法检测庆大霉素耳中毒豚鼠的听阈变化;用组织化学方法检测耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶的变化.结果:在实验过程中无动物死亡,进入结果分析3组动物共45只.①用药22 d后,庆大霉素组、丹参注射液组豚鼠的脑干听觉诱发电位反应阈值与正常对照组比较,差异有显著性[(71.25±24.730),(41.05±10.930),(34.65±1.321)dB;t=8.097,3.184,P＜0.01];丹参注射液组与庆大霉素组比较,差异有显著性(t=6.118,P＞0.01).②耳蜗铺片毛细胞内琥珀酸脱氢酶染色在光镜下观察,正常豚鼠耳蜗基底膜铺片毛细胞琥珀酸脱氢酶染色呈紫蓝色;显色分布均匀,毛细胞排列整齐;在庆大霉素组耳蜗毛细胞琥珀酸脱氢酶显色出现明显消失,耳蜗毛细胞破坏明显;丹参注射液组琥珀酸脱氢酶染色变化较轻,庆大霉素组与丹参注射液组耳蜗铺片显示有明显差异.结论:丹参注射液能降低庆大霉素对耳蜗毛细胞的损害作用,保护耳蜗线粒体呼吸酶的活性,维持毛细胞的能量代谢以供给细胞需要能量的功能活动,可能是丹参注射液降低庆大霉素耳毒性的机制之一.
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疏解少阳和祛风止痛法对大鼠体外血栓形成及血小板聚集功能的影响
背景:偏头痛病位多在少阳经循经之处,以疏解少阳、祛风止痛法从少阳胆经治疗偏头痛疗效显著,但该两法对体外血栓形成及血小板聚集功能的作用又如何呢?目的:通过大鼠体外血栓形成实验,大鼠血小板聚集功能实验,探讨疏解少阳法与祛风止痛法对两者的影响,并通过拆方配伍实验,探讨疏解少阳法与祛风止痛法的配伍意义.设计:完全随机分组设计,对照实验.单位:黑龙江中医药大学基础医学院方剂学教研室.材料:实验于2000-03/08于黑龙江中医药大学方剂学方药实验室完成.选用健康成年Wistar大鼠60只.随机将大鼠分为6组:正常对照组、阳性对照组,全方高剂量组,全方低剂量组,疏解少阳组,祛风止痛组,每组10只.方法:①阳性对照组:按0.39 g/kg剂量灌胃0.034 g/mL复方羊角片(哈尔滨生物化学制药二厂生产)混悬液;全方(全方剂成分:柴胡20 g,黄芩10 g,半夏15 g,甘草10 g,川芎20 g,天麻15 g,细辛5 g,全蝎5 g,蜈蚣5 g)高、低剂量组:按17.40,8.70 g/kg剂量灌胃1.5,0.75 g/mL全方剂;疏解少阳组(疏解少阳剂成分:柴胡20 g,黄芩10 g,半夏15 g,甘草10 g)和祛风止痛组(祛风止痛剂成分:川芎20 g,天麻15 g,细辛5 g,全蝎5 g,蜈蚣5 g):按8.70 g/kg剂量灌胃0.75 g/mL疏解少阳剂和祛风止痛剂;正常对照组:灌胃等体积生理盐水.各组连续干预12d.②体外血栓形成实验:末次给药后2 h,分离一侧颈总动脉.结扎远心端,并在近心端以动脉夹阻断血流,将动脉插管插入颈总动脉内.松开动脉夹,取1.8 mL血液入一血栓形成仪的旋转环内,以17 r/min旋转15 min.停止转动后,倒出形成的血栓,测量血栓长度、血栓湿重.将湿血栓烘干,测量血栓干重.③血小板聚集功能测定:采用比浊测定法记录富血小板血浆在1,5 min的聚集率,5 min内大聚集率及聚集抑制率.④计量资料比较采用t检验.主要观察指标:疏解少阳法和祛风止痛法对体外血栓形成及血小板聚集功能的影响.结果:进入结果分析大鼠60只.①全方高、低剂量组和阳性对照组及祛风止痛组的体外血栓长度、湿重、干重明显低于正常对照组(P＜0.05～0.01).全方低剂量组的血栓湿重及干重明显低于疏解少阳组(P＜0.05).②各用药组的大鼠血小板1 min聚集率、5 min聚集率、大聚集率均明显低于正常对照组(P＜0.05～0.01).且阳性对照组和全方高、低剂量组及祛风止痛组作用效果强于疏解少阳组.结论:单用疏解少阳方无明显抗体外血栓形成和抑制血小板聚集的作用,祛风止痛方和疏解少阳合用之后作用明显增强.
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牛蒡子复方制剂对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用
目的:探讨牛蒡子复方制剂(阿克亭)对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及其可能的机制.方法:①实验于2004-09/2005-01在哈尔滨医科大学动物实验中心及病理实验室完成.选用健康雄性Wistar大鼠84只.将大鼠随机分为6组:假手术组,模型组,神经节苷脂组及牛蒡子复方制剂大、中、小剂量组,每组14只,每组又随机分为再灌注1,24 h 2个时相点,每个时相点7只进行观察.②采用改良线栓法制作大脑中动脉缺血再灌注模型,每组模型均缺血30 min,随机使其中的7只再灌注1 h,另外7只再灌注24 h.神经节苷脂组在缺血即刻腹腔注射神经节苷脂(购自TRB Pharma S.A,2 mL/支,生产批号20037)30 mg/kg,牛蒡子复方制剂(牛蒡子生药,3 g/mL,生产批号20050618,由乌苏里江制药责任有限公司提供)大、中、小剂量组在缺血即刻分别腹腔注射牛蒡子复方制剂100,50,10mg/kg,模型组给予等量生理盐水.③于大鼠缺血30min再灌注1,24 h进行神经病学评分(0分:无神经功能缺失症状,活动正常者;1分:不能伸展对侧前爪者;2分:爬行时出现向左转圈者;3分:行走时身体向偏瘫侧倾倒者;4分:不能自发行走,意识丧失者).④采用苏木精-伊红染色,光镜下观察脑组织变性坏死程度.⑤采用免疫组化分析方法观察Caspase-3蛋白的表达变化.⑥多组间比较采用单因素方差分析,同一时间点两组间比较采用Dunnett-t检验,不同时间点的比较采用两样本t检验.结果:进入结果分析大鼠保持为84只.①神经病学评分:神经节苷脂组和牛蒡子复方制剂各剂量组明显低于模型组(t=-2.951～-5.477,P＜0.05),牛蒡子复方制剂各剂量组与神经节苷脂组比较,差异不明显(P＞0.05).②病理形态改变:模型组再灌注1 h可见部分神经细胞核浆分界不清,细胞水肿;模型组再灌注24 h病灶中心区神经细胞脱失范围增大,梗死血管周围出现大片空泡区.神经节苷脂组及牛蒡子复方制剂各剂量组与模型组比较,坏死区缩小,神经元受损减轻.③脑组织Caspase-3阳性细胞数:模型组再灌注1和24 h明显多于假手术组(t=23.221,25.025,P＜0.01),模型组、神经节苷脂组、牛蒡子复方制剂各剂量组再灌注24 h时明显多于再灌注1 h(t=2.298～4.322,P＜0.05);神经节苷脂组、牛蒡子复方制剂各剂量组再灌注1和24 h明显少于模型组(t=-6.823～-15.917,P＜0.01);牛蒡子复方制剂小剂量组明显多于神经节苷脂组和牛蒡子复方制剂大、中剂量组(t=6.080,6.336,P＜0.01).结论:Caspase-3在局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中活性显著增高;神经节苷脂及牛蒡子复方制剂均能降低神经功能缺失评分、抑制Caspase-3的激活,提示其脑保护作用可能与抑制缺血区Caspase-3激活从而抑制细胞凋亡有关,牛蒡子复方制剂大中剂量抑制Caspase-3激活的作用强于小剂量,与神经节苷脂作用差异不明显.
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黄芪对老龄小鼠脑神经细胞凋亡及相关基因表达的影响
背景:衰老的细胞死亡的实质就是细胞凋亡,凋亡从某种程度上可理解为一系列基因活动的结果.因此抑制癌基因的表达即可延长细胞的寿命,延缓脑组织衰老.目的:观察老年小鼠脑神经细胞凋亡和相关基因表达的变化及黄芪的干预效应.设计:完全随机分组设计,对照实验.单位:佳木斯大学基础医学院生物化学教研室.材料:实验于2003-12/2004-05佳木斯大学实验动物中心及生物化学实验室完成.选用健康昆明种小鼠24只.其中2月龄小鼠8只(青年组),12月龄小鼠16只.将16只12月龄小鼠随机分为2组:黄芪治疗组和老年对照组,各8只.方法:①黄芪治疗组:灌胃10.8 g/(kg·d)黄芪水煎剂(黄芪购于佳木斯大学第一附属医院中药局,由佳木斯市药品检验所鉴定,制成含生药浓度为2 kg/L的水煎剂);老年对照组和青年组:灌服与黄芪水煎剂体积相等的温开水.均连续干预30 d.②各组小鼠连续干预30 d后断头处死,立即取出脑组织,取大脑中部中性甲醛固定.余脑组织制成制成线粒体悬液,采用黄嘌呤氧化酶法及TBA化学比色法测定脑线粒体锰超氧化物歧化酶活性及丙二醛含量.用原位末端标记法观察老年小鼠神经细胞凋亡率(凋亡的细胞核呈黄色,为阳性细胞),并用免疫组织化学法检测相关基因bcl-2的表达.细胞液染成棕色者为基因表达阳性细胞,400倍显微镜下计数400个细胞,-:阳性细胞所占百分比＜5%;+:阳性细胞所占百分比5%～10%;H:阳性细胞所占百分比11%～50%;卅:阳性细胞所占百分比＞51%.③等级和计量资料差异比较要用秩和检验和t检验.主要观察指标:黄芪对老龄小鼠脑线粒体锰超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、脑细胞凋亡率、脑组织bcl-2基因表达强度的影响.结果:小鼠24只均进入结果分析.①脑线粒体锰超氧化物歧化酶含量:青年组和黄芪治疗组明显高于老年对照组(P＜0.05).②脑线粒体丙二醛含量和脑细胞凋亡率:青年组和黄芪治疗组明显低于老年对照组(P＜0.01).③脑组织bcl-2基因表达:青年组和黄芪治疗组与老年对照组比较,差异明显(P＜0.01).结论:黄芪通过影响锰超氧化物歧化酶活性和丙二醛含量及bcl-2基因表达对老年小鼠脑神经细胞凋亡有明显的抑制作用.
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补肾中药对青春期大鼠下丘脑生长抑素基因及其蛋白表达的影响
背景:性早熟患儿在下丘脑-垂体-性腺轴提前启动的同时伴有骨骼生长加速,骨骺提前融合,临床上在发病时采用滋阴泻火中药可延缓骨龄提前融合,到性发育年龄时改用益肾填精中药,可促进性发育及促进骨骼生长加速,性早熟患者性发育及骨生长过程与正常青春期发育相同,只是时间的提前.中药改变骨生长的机制及对影响骨生长的生长抑素的作用尚不明确.目的:探讨补肾中药对下丘脑室周核生长抑素的调节作用.设计:完全随机分组设计,对照实验.单位:上海交通大学附属儿童医院内分泌科.材料:实验于2001-10/2002-04在上海复旦大学附属儿科医院儿科研究所完成.采用清洁级纯种雌性SD大白鼠共24只.随机分为4组:对照Ⅰ组,滋阴泻火药组,对照Ⅱ组,滋阴泻火+益肾填精药组,每组6只.方法:①对照Ⅰ组:灌胃生理盐水5 mL/次,1次/d,共1个月;滋阴泻火药组:灌胃滋阴泻火中药合剂(生地黄、炙龟板、黄柏、知母等),5 mL/次,1次/d,共1个月;对照Ⅱ组:灌胃生理盐水5 mL/次,1次/d,共2个月;滋阴泻火+益肾填精药组:先灌胃滋阴泻火中药5 mL/次,1次/d,1个月,再喂饲益肾填精中药合剂(熟地黄、龟板胶、仙灵脾、鹿角胶等),5 mL/次,1次/d,1个月.②采用漂浮法原位杂交、常规免疫组化技术.以医学图像分析软件,作各组大鼠下丘脑室周核生长抑素mRNA、生长抑素免疫反应阳性神经元计数并检测其阳性细胞面积吸光度(A值)反映其基因表达及蛋白表达的水平.单位面积阳性神经元数即每平方毫米面积中所含阳性神经元数量.③计量资料比较采用单因素方差分析处理,组间差异采用F检验.主要观察指标:滋阴泻火及益肾填精中药对下丘脑室周核生长抑素基因和蛋白表达水平的影响.结果:大鼠24只均进入结果分析.①下丘脑室周核生长抑素mRNA阳性神经元数、单位面积阳性神经元数和阳性细胞面积A值:滋阴泻火药组明显高于对照Ⅰ组(P＜0.05),滋阴泻火+益肾填精药组明显低于滋阴泻火药组(P＜0.05).②滋阴泻火药组下丘脑室周核生长抑素阳性神经元数、单位面积阳性神经元数、阳性细胞面积A值:滋阴泻火药组明显高于对照Ⅰ组(P＜0.05),滋阴泻火+益肾填精药组明显低于滋阴泻火药组(P＜0.05).结论:滋阴泻火与益肾填精中药可通过对下丘脑生长抑素基因表达与蛋白表达的调控,调节垂体生长激素的合成及释放.
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黄芪对新生鼠乏氧缺血脑损伤后海马区神经的保护及学习记忆能力的干预
背景:黄芪可通过减轻兴奋性氨基酸的释放及在细胞间的堆积、缓解Ca2+超载、抗氧化等途径抑制凋亡的发生.目的:将黄芪用于未成熟脑缺氧缺血脑损伤的治疗,一方面检测其对海马缺氧缺血后半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA表达水平的影响,另一方面通过迷宫实验观察黄芪对缺氧缺血脑损伤的成熟鼠学习记忆能力的干预.设计:随机对照实验.单位:东南大学临床医学院/附属中大医院儿科,基础医学院病理科.材料:实验于2002-10/2003-06在东南大学临床医学院实验中心完成.选取出生7 d的同窝SD大鼠114只,随机分成3组:假手术组18只,模型组48只,黄芪治疗组48只.黄芪注射液由成都地奥九泓制药厂生产,规格为10 mL/支,含生药20 g.方法:模型组与黄芪治疗组建立缺氧缺血脑损伤模型,假手术组不造模.黄芪治疗组于造模后即刻及每天同一时间腹腔注射0.08 mL黄芪注射液,7 d后停药,模型组于同时间腹腔注射等量生理盐水,假手术组不给药.黄芪治疗组及模型组在缺氧缺血后24 h,5 d断头取脑,假手术组于假手术后24 h断头取脑.各组海马区脑损伤行组织病理学检测,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA的表达采用半定量反转录-聚合酶反应方法进行检查,成年90 d龄的大鼠进行三等分迷宫测试其学习记忆能力,3个实验各自独立.主要观察指标:①各组海马区脑损伤组织病理学检测.②各组结扎侧海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA的表达.③三等分迷宫试验结果.结果:实验纳入大鼠114只,全部进入结果分析.①各组海马区脑损伤组织病理学检测:假手术组双侧海马区组织无水肿、坏死,神经细胞形态正常,神经细胞数为(87.7±0.6)×103/高倍视野.模型组24 h时结扎侧海马区水肿,细胞周围间隙增宽,神经细胞数减少为(68.8±3.0)×103/高倍视野,与假手术组比较差异显著(P＜0.01);5 d时结扎侧海马体积缩小,锥状细胞层紊乱,神经细胞稀少至(48.7±2.2)×103/高倍视野,与假手术组及同侧24 h时比较均有显著差异(P＜0.01).黄芪治疗组24 h时结扎侧海马区组织水肿较模型组明显减轻,5 d时可观察到完整的海马形态,此两时间点神经细胞死亡率均较模型组明显减低(P＜0.01).②各组结扎侧海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3 mRNA的表达:假手术组以低水平表达,吸光度值为0.220±0.009.模型组于缺氧缺血后逐渐升高,6 h时比假手术组升高11%,至24 h时mRNA水平达高峰,较假手术组约升高260%(P＜0.01),高峰持续至48 h后下降,5 d和7 d时恢复基础水平.黄芪治疗组变化趋势与模型组相似,但在24,48 h两时间点时峰值降低了44%～46%,与模型组比较差异显著(P＜0.01).③三等分迷宫试验结果:与模型组比较,黄芪治疗组达到学会标准所需训练次数明显减少[(45.7±2.7),(16.1±2.5)次,P＜0.01],缺氧缺血24 h后记忆保持率显著提高[(48.3±11.7),(80.0±9.0)%,P＜0.01].结论:黄芪可以有效抑制未成熟脑缺氧缺血损伤后海马区神经细胞的凋亡,提高神经细胞存活率,此种保护作用与抑制半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3的表达有关.同时黄芪能够明显改善未成熟脑缺氧缺血损伤后的学习记忆能力.
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黄芪对大鼠实验性脊髓损伤的神经保护作用
目的:观察黄芪对脊髓损伤后脂质过氧化的抑制作用,探讨黄芪对大鼠脊髓损伤的影响.方法:实验于2004-03/2004-05在吉林大学第二医院中心实验室完成.采用改良Allen's法制作脊髓损伤模型,40只SD大鼠随机分为两组:对照组(n=20)为单纯脊髓损伤,术后腹腔注入适量生理盐水;实验组(n=20)为脊髓损伤加黄芪注射液(成都地奥九鸿制药厂产品,黄芪含量为2 g/mL)腹腔注射,注射后4 h、8 h、24 h每组随机取3只动物切取损伤区1 cm脊髓节段,分别采用黄嘌呤氧化法和硫代巴比妥酸化学发光法测定线粒体超氧化物歧化酶活性和丙二醛浓度;于损伤后4周,将动物麻醉后处死,以40 g/L多聚甲醛行心室-主动脉灌注,取脊髓损伤区7 μm标本,光镜观察损伤脊髓的组织病理学改变;同时进行神经功能评分(神经功能恢复率=评分/正常分×100%)和斜板实验评估用药后黄芪对运动功能的影响.结果:40只SD大鼠,均进入结果分析.①对照组大鼠脊髓内丙二醛的浓度不断升高,超氧化物歧化酶活性急剧下降,实验组腹腔注射黄芪注射液后脊髓内丙二醛浓度降低,超氧化物歧化酶活性升高.实验组与对照组之间在伤后各时相点(4,8,24 h)的丙二醛浓度和超氧化物歧化酶活性均存在显著性差异(t=6.256,8.212,9.254;3.215,8.721,10.324;P＜0.01).②脊髓损伤后两组大鼠神经功能恢复率逐渐升高,到3周末实验组和对照组之间神经功能恢复率具有显著性差异[(42.2±18.5)%,(18.5±6.3)%,t=12.243,P＜0.05].③脊髓损伤3周后,实验组同对照组之间的斜板试验结果差异存在显著性[(58.6±5.2)°,(50.5±6.8)°,t=5.872,P＜0.05].④实验组和对照组损伤脊髓的组织病理切片均可见神经细胞坏死,炎性细胞浸润,微小空腔形成.但实验组较对照组的水肿减轻,坏死区范围减小.结论:黄芪可以抑制脊髓损伤后的脂质过氧化反应,减轻脊髓继发性损害,促进脊髓损伤后的神经功能恢复,从而发挥神经保护作用.
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滋阴泻火中药合剂对青春期大鼠垂体生长激素和长骨干骺端胰岛素生长因子1基因表达的调节
目的:观察滋阴泻火中药合剂对青春期大鼠垂体生长激素、长骨干骺端胰岛素样生长因子1基因表达的影响,探讨中药对垂体、长骨干骺端促生长机能的调节作用.方法:实验于2002-09/2003-03在上海瑞金医院完成.将青春期SD雌性大白鼠共22只分为对照组和实验组,每组11只.对照组:喂饲生理盐水1个月,5 mL/次,1次/d;实验组:喂饲滋阴泻火中药合剂(由生地12 g,炙龟板12 g,黄柏9 g,知母9 g等组成;均由上海复旦大学附属儿科医院中药制剂室煎制成浓缩合剂,每毫升约含生药3 g.)1个月,5 mL/次,1次/d.疗程结束后,动物处死,取出垂体及左后肢骨干骺端,提取总mRNA.采用实时荧光RT-PCR定量检测技术,检测垂体生长激素mRNA,长骨干骺端胰岛素样生长因子1 mRNA表达水平.实时荧光RT-PCR定量检测方法:①垂体、长骨干骺端总RNA提取采用一步法.并逆转录合成cDNA,PCR扩增产物经15 g/L琼脂糖电泳后,纯化,制备标准曲线,并扩增.②垂体生长激素扩增条件:先94℃2 min,然后94℃变性10 s,58℃退火30 s,72℃延长20 s,3个步骤作为1个循环,共扩增40个循环.长骨干骺端胰岛素样生长因子1扩增条件:先94℃3 min,然后94℃变性10 s,60℃退火20 s,72℃延长20 s,3个步骤作为1个循环,共扩增40个循环.经过t检验处理,比较两组间垂体生长激素及长骨干骺端胰岛素样生长因子1基因表达水平的变化,观察滋阴泻火中药合剂对上述指标基因表达的影响.结果:实验动物22只,生理盐水和中药灌胃时误灌入气管窒息而死,各1只,进入结果分析20只.①实验组生长激素cDNA的复制数明显低于对照组[(7.08±1.20)×107,(19.38±6.69)×107;t=5.728,P＜0.05],且扩增片段为1条长度为533 bp的条带,未见其他非特异性条带.②实验组干骺端胰岛素样生长因子1 cDNA复制数明显低于对照组[(2.28±0.65×102),(21.41±5.85×102);t=10.268,P＜0.05];电泳图显示干骺端胰岛素样生长因子1 cDNA扩增片段为一条长度为202 bp的条带,未见其他非特异性条带.结论:滋阴泻火中药合剂可在转录水平调节腺垂体生长激素及长骨干骺端软骨细胞胰岛素样生长因子1的基因表达,从而调整生长激素-胰岛素样生长因子1轴的功能活动.
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雷公藤对豚鼠表皮c-fos基因表达及表皮再生能力的调节
目的:观察雷公藤甲素对豚鼠皮肤原癌基因c-fos表达的影响,探讨雷公藤甲素的有效作用浓度.方法:实验于2004-01/08在泸州医学院组织学与胚胎学实验室进行.将20只雄性豚鼠随机分成为4个实验组,分别为对照组、雷公藤甲素5 mg/L组、雷公藤甲素10 mg/L组和雷公藤甲素20 mg/L组,每组5只.使用雷公藤甲素5,10,20 mg/L 3种浓度对局部皮肤真皮注射处理,免疫组织化学方法显示c-fos阳性细胞,用光学显微镜和图像分析仪对结果进行观察和分析.结果:20只豚鼠均进入结果分析.与对照组比较,雷公藤甲素5,10,20 mg/L组豚鼠表皮角质细胞c-fos表达明显增强(149,162,144,87个/视野,P＜0.05),吸光度明显增高(0.142±0.025,0.157±0.066,0.159±0.079,0.107±0.076,P＜0.05).不同浓度药物之间作用差异无显著性意义(P＞0.05).结论:雷公藤甲素对豚鼠皮肤原癌基因c-fos表达具有调节作用,其有效作用浓度范围较实验采用的5～20 mg/L大.
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附子汤合用芍药甘草汤镇痛作用效果及其途径
背景:现有镇痛药物均有不同类型及程度的不良作用,一定程度上制约了疼痛的治疗.中药镇痛作用的多靶点、多层次机制,对于疼痛治疗有一定优势.目的:观察附子汤与芍药甘草汤合用,对疼痛动物模型的镇痛作用及其可能的作用途径.设计:随机对照观察.单位:山西医科大学汾阳学院中心实验室.材料:实验于2004-10/2004-12在山西医科大学汾阳学院中心实验室完成.选择SD大鼠50只;昆明种小鼠60只.经过痛域预筛,选择痛域相近的动物用于实验.方法:①附子汤合芍药甘草汤制备:附子先煎1 h,芍药、白芍(酒炒)、甘草(蜜灸)750 mL/L乙醇提取,0.5 h/次,共3次回收乙醇.合并各提取液浓缩至含生药4 g/mL.②附子汤合芍药甘草汤对甲醛溶液致痛模型大鼠的镇痛作用:SD大鼠50只分为5组,即模型组、阿司匹林组、附子汤合芍药甘草汤40 g/kg,20 g/kg,10 g/kg组,每组10只.模型组和阿司匹林组分别给予25 mL/L甲醛溶液10 mL/kg和阿司匹林0.2 g/kg,各组均灌胃给药.各组给药前在大鼠左后肢足趾部皮下注射25 mL/L甲醛溶液50μL,分别记录注射甲醛溶液1～5 min(Ⅰ相)和15～40 min(Ⅱ相)内疼痛反应的累积时间进行评分.疼痛累积分值=(抬起注射脚时间×1+咬和抖动注射脚时间×2)/300.实验动物饲养1周后,灌胃给药连续3 d,第3天给药1 h后左后肢足趾部皮下注射25 mL/L甲醛溶液50 mL,按上述方法计算疼痛累积分值.计算镇痛评分值,即给药后累积分值/给药前累积分值×100%.③冰醋酸致痛小鼠血清、脊髓中一氧化氮、前列腺素和超氧化物歧化酶的测定:昆明种小鼠60只分为6组,设空白对照组、模型组、阿司匹林组、附子汤合芍药甘草汤40 g/kg,20 g/kg,10 g/kg组,每组10只.空白对照组和模型组分别腹腔注射生理盐水10 mL/kg和6 g/L冰醋酸溶液10 mL/kg,阿司匹林组、附子汤合芍药甘草汤40 g/kg,20 g/kg,10 g/kg组于给药第3天给药1 h后,腹腔注射6 g/L冰醋酸溶液10 mL/kg.注射冰醋酸10 min后,小鼠眼后静脉丛采血,分离血清,测定一氧化氮浓度(催化光度法)、前列腺素含量(紫外分光光度法)、超氧化物歧化酶活性.主要观察指标:①各组大鼠的镇痛评分值.②各组小鼠血清、脊髓中一氧化氮、前列腺素含量和超氧化物歧化酶活性.结果:SD大鼠50只及昆明种小鼠60只,全部进入结果分析,无脱失.①各组大鼠的镇痛评分值比较:附子汤合芍药甘草汤40 g/kg组大鼠的Ⅰ相镇痛评分值显著低于模型组[82.1±9.8,95.3±8.7(t=3.17,P＜0.05)].附子汤合芍药甘草汤40 g/kg,20 g/kg组大鼠的Ⅱ相镇痛评分值均显著低于模型组[69.7±10.4,73.2±7.5,98.9±6.7(t=6.64,6.08,P＜0.01)].②各组小鼠血清、脊髓中一氧化氮、前列腺素含量和超氧化物歧化酶活性比较:阿司匹林组、附子汤合芍药甘草汤40 g/kg,20 g/kg,10 g/kg组与模型组相比,一氧化氮、前列腺素含量均显著减少,超氧化物歧化酶活性显著增高(t=3.21～19.30,P＜0.05～0.01).附子汤合芍药甘草汤40 g/kg,20 g/kg组与阿司匹林组相比,一氧化氮、前列腺素含量均显著减少,超氧化物歧化酶活性显著增高(t=2.82～7.43,P＜0.05).结论:附子汤与芍药甘草汤提取物合用,能抑制甲醛溶液引起的Ⅰ相及Ⅱ相疼痛,显著降低冰醋酸疼痛模型小鼠血清中和脊髓中的一氧化氮、前列腺索的含量,增加超氧化物歧化酶的活性.提示二方合用对中枢及外周神经末梢均有镇痛作用,其镇痛作用可能与一氧化氮、前列腺素、超氧化物歧化酶改变有关.
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补肾方药不同给药途径对实验性骨质疏松骨细胞"阳杀阴藏"的影响
背景:根据"体表穴位-经络-内脏-靶器官"相关,采用外贴穴位和口服药物两种不同的给药途径治疗骨质疏松,按照中医传统理论推测均会"归入肾经"而发挥调节作用,但实际上是否会有"靶向给药"的特异性呢?目的:本实验将补肾方药分别制成"外贴剂"和"口服剂",检测"下丘脑-垂体-靶腺"系统的激素,进一步分析肾、骨、子宫、甲状腺、睾丸等靶器官的雌、雄激素受体,观察"归经与受体"的相关性,探讨补肾方药对实验性骨质疏松骨细胞"阳杀阴藏"的影响.设计:以骨质疏松大鼠为观察对象,完全随机,补肾方药不同给药途径的对照实验.单位:河北医科大学中医学院方剂教研室和生化教研室,石家庄市桥东区医院中医科.材料:实验于2004-06/2005-05在河北医科大学中西医结合基础实验室完成.选择3月龄清洁级SD大鼠120只,随机分成6组:正常对照组、病理模型组、补肾方药口服组、外贴膀胱经组、外贴肾经组、外贴非经非穴位组,每组雌雄各10只.补肾方药主要含有骨碎补总黄酮、淫羊藿甙,每克流浸膏含生药量为9.543 g.抗骨松穴位贴剂由熟地、丹皮、淫羊藿等组成.方法:除正常对照组外,其余5组均注射地塞米松建立骨质疏松模型.正常对照组和病理模型组不给药;补肾方药口服组将补肾方药总成分按0.8 g/100 g体质量灌喂给药;外贴膀胱经组大鼠在膀胱经选肾俞、飞扬穴贴敷抗骨松穴位贴剂;外贴肾经组大鼠在肾经选太溪、大钟穴贴敷抗骨松穴位贴剂;外贴非经非穴位组大鼠在大腿内侧肌肉丰厚处选非经非穴位贴敷抗骨松穴位贴剂.给药13周后处死大鼠,放射免疫分析法检测各组大鼠血清雌二醇、睾酮、降钙素、甲状旁腺素的浓度以及骨组织形态计量动、静态参数的变化.主要观察指标:①给药后各组大鼠雌二醇、睾酮、雌二醇/睾酮、骨密度、降钙素、甲状旁腺素、降钙素/甲状旁腺素的测定结果.③给药后各组大鼠骨组织静、动态参数的测定结果.结果:实验选用120只大鼠,全部进入结果分析.①给药后各组大鼠生化指标的测定结果:与正常对照组比较,病理模型组、外贴非经非穴位组雌二醇、睾酮、雌二醇/睾酮、骨密度、降钙素、降钙素/甲状旁腺素均显著降低(P＜0.01),甲状旁腺素均显著升高(P＜0.01);补肾方药口服组、外贴膀胱经组、外贴肾经组以上各项指标均无明显变化(P均＞0.05).②给药后各组大鼠骨组织静、动态参数的测定结果:与正常对照组比较,病理模型组、外贴非经非穴位组骨小梁体积百分比、骨小梁表面百分比、骨小梁形成表面百分比、活性生成面百分比、骨小梁矿化沉积率、纵向骨生长率、骨小梁骨生成速率均显著降低(P＜0.01),骨小梁吸收表面百分比均显著升高(P＜0.01);补肾方药口服组、外贴膀胱经组、外贴肾经组以上各项指标均无明显变化(P均＞0.05).结论:抗骨松穴位贴剂可抑制骨吸收、促进骨形成,有效控制进入血液循环的药量,与口服给药途径取得了同等的药效,拮抗实验性骨质疏松"破骨大于成骨",逆转"阳杀阴藏"的过程,使破骨细胞的骨吸收减弱,成骨细胞的骨形成能力增强,增加骨密度,实现"穴位经络通道的放大效应".
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防治瘢痕外用复方中药对兔耳增生性瘢痕微血管及血流的影响
目的:观察一种防治瘢痕的外用复方中药对兔耳增生性瘢痕微循环的影响.方法:实验于2005-07/10在解放军第四军医大学西京医院整形外科中心实验室完成.①选用新西兰大耳白兔8只.进行兔耳增生性瘢痕动物模型的复制.实验分为2组:随机将每只兔子2只耳朵分别设为瘢痕膏组和对照组,每组8只兔耳,48个创面.瘢痕膏组和对照组于创面上皮化时即开始用药.瘢痕膏组涂抹瘢痕膏(本院自行研制的外用复方中药制剂.其主要成分为丹参酮、积雪甙、黄芩甙、甘草酸、苦参碱等,按3:3:2:2:1的比例加基质制作而成),对照组涂抹基质(制作瘢痕膏的基质).将瘢痕膏及基质涂在瘢痕部位,并轻揉直到药物吸收,3次/d,连续用药28 d.②第14天根据兔耳创面修复的颜色、质地等统计瘢痕块发生率;第28天观察两组瘢痕组织的外观形态(颜色、质地等);用PeriFlux5000激光多普勒血流仪测瘢痕组织微循环血流灌注;常规ABC免疫组织化学法染色,200倍光镜下微血管计数.③计量和计数资料差异比较分别采用t检验和χ2检验.结果:兔8只(16耳)均进入结果分析.①创面上皮化后14 d,瘢痕膏组瘢痕块发生率明显低于对照组[67%(32/48),85%(41/48),P＜0.05].②用药28 d后瘢痕膏组瘢痕略高出兔耳皮肤表面,颜色稍白,接近兔耳正常肤色,触之质软;对照组瘢痕明显高出兔耳皮肤表面,红色,质地硬.③用药28 d后,瘢痕膏组兔耳瘢痕组织微循环血流灌注值明显低于对照组[(20.78±2.47),(36.79±3.12)PU,P＜0.05].④用药28 d后,瘢痕膏组兔耳瘢痕组织微血管计数明显低于对照组[(26.8±5.4),(42.7±7.2)个/mm2,P＜0.05].结论:此外用复方中药对兔耳增生性瘢痕微血管形成、微循环血流有抑制作用,对增生性瘢痕有防治作用.
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大豆苷元和葛根素对去卵巢大鼠骨代谢生化指标的影响
目的:植物雌激素对骨改善的作用已经得诸多实验验证,通过观察大豆苷元和葛根素对去卵巢模型大鼠骨代谢的影响,探讨生化指标与骨钙代谢的关系.方法:2003-06/2004-10在南京师范大学金陵女子学院营养学实验室和东南大学公共卫生学院动物实验室进行动物实验,将60只3月龄清洁级SD大鼠建立去卵巢模型,随机分为青年组、假手术组、去卵巢模型对照组、雌激素对照组、大豆苷元组和葛根素组共6组,每组10只.无菌条件下,对模型对照组、雌激素对照组、大豆苷元组、葛根素组大鼠进行骨代谢去卵巢模型的制备,假手术组不切除卵巢,只切除少许脂肪.术后青霉素抗感染3 d,自由饮水、摄食,5 d后进行喂养试验.青年组未去卵巢,饲养条件同其他组.每日清晨以10μg/kg体质量剂量己烯雌酚溶液给予雌激素对照组灌胃;以100 mg/kg体质量剂量大豆苷元[纯度为98%的结晶体(安徽农业大学实验室提供)]给予大豆苷元组大鼠灌胃;以20 mg/kg体质量剂量葛根素给予葛根素组大鼠灌胃;模型对照组去卵巢后、假手术组手术后灌胃蒸馏水;青年组不予灌胃.将青年组大鼠3月龄时处死,将其余大鼠置于无菌室动物房中饲养3个月,6月龄时处死,股动脉放血收集血样,分离血清,4 000 r/min,离心15 min,-20℃保存待测.利用Olympuls全自动生化分析仪,偶氮胂Ⅲ法测定血清钙;钼蓝比色法测定血清磷,碱性磷酸酶试剂盒测定血清碱性磷酸酶;采用放免试剂盒,SN-695B型智能放免仪γ测量仪计数大鼠血清雌激素和骨钙素.结果:动物实验60只,在饲养过程中,由于动物去卵巢手术或灌胃操作不当死亡6只,共54只动物进入结果分析.①大豆苷元组、雌激素对照组、葛根素组钙磷比明显高于去卵巢模型组(1.18±0.1,1.3±0.16,1.13±0.13,0.87±0.2,P＜0.01),且钙磷比均保持在1.1～1.2左右的较佳状态.②大豆苷元和葛根素组的碱性磷酸酶相对于假手术组明显增高[(87.5±20.5),(90±10.13),(47.5±22.17)U/L;P＜0.05];③大豆苷元组和葛根素组的骨钙素相对于假手术组显著增高[(8.39±0.84),(6.69±2.34),(3.42±0.93)ng/L;P＜0.05,0.01].结论:去卵巢大鼠属于高转换型骨代谢,补充大豆苷元与葛根素使骨转换持续活跃,可能通过与雌激素受体结合抑制骨的重吸收达到骨改善;雌激素和植物雌激素对骨钙改善的影响在一定程度上受雌激素受体活性的介导.
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中药消痤霜对兔耳痤疮实验模型的干预效果
目的:建立兔耳痤疮动物实验模型,用中药制剂消痤霜外涂,观察其疗效.方法:①实验于2003-07/08在北华大学医学院实验动物中心实验室完成.选用成年家兔20只.②建立兔耳痤疮动物模型:于每只家兔左右耳内侧耳管开口处2 cm×2 cm范围,每日涂煤焦油1次,每次0.5 mL,连续2周.③将20只家兔随机分为2组:实验组与对照组,各10只,实验组右耳痤疮模型用消痤霜擦剂(主要成分为大黄、黄连、金银花、龙葵、积雪草等,由本院中药制剂室制备成外涂水剂,呈淡黄色),2次/d,每次约1 mL擦涂,连续2周.对照组涂抹生理盐水.④14 d后对两组兔右耳及实验组兔左耳痤疮模型处皮肤做肉眼观察及病理活检,进行组织学观察.痤疮模型组织学判定分级标准:0级为无痤疮表现;1级为毛囊漏斗部可见少量致密角化物质;2级为毛囊漏斗部可见中等致密角化物质,并向皮脂腺延伸;3级为扩张的毛囊内有广泛的角化物质,人类痤疮相似.⑤计量资料差异比较采用t检验.结果:实验过程中对照组死亡1只,终进入结果分析19只.①实验组涂抹消痤霜2周后,肉眼见:局部毛囊角栓减少,部分角栓脱落后遗留点状凹陷的毛囊,丘疹变平减少;组织学观察见:表皮增厚明显减轻,真皮炎症细胞明显减少,但仍见毛囊口轻度扩张,有少量疏松角化物质充填.②对照组实验2周后肉眼仍可见明显的毛囊角栓,但丘疹减轻或变平;组织学观察见:角化过度,真皮内仍见较多的炎症细胞浸润,毛囊口及漏斗部仍见角化物质堆积,漏斗部扩大如壶状.③实验组治疗后痤疮模型组织学级别明显低于对照组[(0.6±0.52),(2.5±0.53)级,P＜0.01].结论:中药制剂消痤霜对兔耳痤疮实验模型具有减少毛囊的角栓、减轻真皮炎症和抑制瘢痕形成的作用.
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中药猫眼草抑癌作用的动物实验
目的:探讨中药猫眼草对Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长、免疫调节、血液系统的影响,及其对肿瘤细胞周期的作用.方法:①实验于2004-11/2005-01在青岛海洋大学食品与药物研究所实验室(山东省重点实验室)完成.选用C57BL/6J纯系小鼠70只.将70只小鼠随机分为7组:空白对照组,模型组,猫眼草水提物7.5,15,30,60 g/kg组及顺铂1 mg/kg组,每组10只.②除空白对照组外,其他各组小鼠均于右腋部皮下注射传代后14 d的Lewis肺癌瘤源小鼠瘤细胞悬液0.2 mL以建立荷瘤小鼠模型.③从接种肿瘤次日开始猫眼草水提物[猫眼草全草:购自青岛同仁堂大药房,产地江苏,产品批号:040901;北京京兴中药饮片厂生产(生产许可证号:冀Y20040006);猫眼草水提物:猫眼草生药500 g加水煮沸,过滤,浓缩,制成口服液,每1 mL含生药1.0 gl7.5,15,30,60 g/kg组按每日7.5,15,30,60 g/kg灌胃给予猫眼草水提物,连续12 d;顺铂1 mg/kg组每日按1 mg/kg剂量腹腔注射给药1次,连续7 d.每天观察小鼠饮食及肿瘤生长情况.④末次灌胃给药后24 h,小鼠称重,处死,剥取瘤块称重,并计算抑瘤率[(模型组平均瘤重-治疗组瘤重)/模型组平均瘤重×100%].小鼠连续灌胃给药12 d后,处死,取胸腺及脾脏称重,计算脾指数[脾质量/体质量(mg/g)]及胸腺指数[胸腺重量/体质量(mg/g)(体质量为小鼠体质量减去肿瘤质量后的差值)].⑤小鼠连续灌胃给药12 d后,取眼球血,应用血细胞分析仪进行血细胞分析.⑥采用流式细胞仪FACSort检测瘤组织细胞周期及凋亡率.⑦组内计量资料差异比较采用方差分析,组间差异比较采用配对t检验.结果:小鼠70只均进入结果分析.①结果显示猫眼草水提物30和60 g/kg组及顺铂1 mg/kg组瘤重明显小于模型组(P＜0.05～0.01),且猫眼草水提物7.5,15,30,60 g/kg组抑瘤率分别为0.608%,16.931%,32.806%和58.255%,即随药物剂量的增加而增加.②猫眼草水提物各剂量组对荷瘤小鼠胸腺指数无明显影响,猫眼草水提物30和60 g/kg组荷瘤小鼠脾指数明显低于模型组(P＜0.05).③猫眼草水提物各剂量组白细胞数、红细胞数、血小板数、血红蛋白与模型组比较,差异不明显(P＞0.05);顺铂1 mg/kg组白细胞数明显低于模型组(P＜0.01).④猫眼草30和60 g/kg组和顺铂组的细胞在DNA合成期的比例高于模型组,静止期～DNA合成前期的比例低于模型组,猫眼草30和60 g/kg组和顺铂1 mg/kg组细胞凋亡率明显高于模型组(P＜0.05).结论:猫眼草水提物对Lewis肺癌有明显的抑制作用,且该种作用随剂量的增加而增高,有一定的免疫调节作用,并对小鼠血液系统无明显毒副作用,其抗肿瘤作用与诱导细胞凋亡有关.
