中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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锶矿泉水对人肾小管上皮细胞增殖及ATP酶活性的影响
背景:一定浓度的锶对人体健康有益,锶对人体多种细胞的增殖和酶活性有影响.目的:用不同浓度的锶矿泉水配制的培养基在体外培养人肾小管上皮细胞,观察细胞增殖情况及Na+-K+-ATP 酶的活性.方法:体外培养人肾小管上皮细胞,用普通DMEM 液体培养基(高糖)培养24 h 后,分别用含锶质量浓度2,4,6,8 mg/L的矿泉水和双蒸水的条件培养基继续培养,分别于48,72,96 和110 h 行MTT 法观察HK-2 细胞的增殖情况.培养110 h的细胞以比色法测无机磷的量来判断Na+-K+-ATP 酶的活性.结果与结论:MTT 结果表明:质量浓度2 mg/L 锶矿泉水对HK-2 细胞增殖无影响;细胞培养至110 h,双蒸水组出现生长抑制时,质量浓度4,6,8 mg/L 锶矿泉水组却依然能保持旺盛的增殖状态(P < 0.05),生长周期延长,尤以质量浓度4 mg/L锶矿泉水组的效果突出(P < 0.05).Na+-K+-ATP 酶活性测试结果表明:与双蒸水组比较,锶矿泉水组Na+-K+-ATP 酶活性更高(P < 0.05),其中质量浓度6 mg/L 锶矿泉水组的酶活性强(P < 0.05).结果证实,锶矿泉水可延长肾小管细胞的增殖周期,可促进肾小管细胞的转运功能.
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经心包腔途径转染提高大鼠体内心肌细胞转染的效率
背景:如何获得安全、有效、广泛心肌组织的转染一直是国内外学者研究的热点.目的:探讨能够改善动物水平心肌组织非病毒载体的转染效率、增强基因导入靶向性的方法.方法:以β半乳糖苷酶质粒PLacZ 作为报告基因,将Wistar 大鼠随机分为5 组:①空白组.②心包腔内组:心包腔注射质粒+微泡+酶混悬液,超声导入.③心包腔内阴性对照组:以生理盐水代替质粒干预.④舌下静脉组:舌下静脉注射质粒+微泡混悬液,超声导入.⑤舌下静脉阴性对照组:以生理盐水代替质粒干预.注射6 d 后处死,进行心、肺、肝、肾组织的X-gal 染色.结果与结论:转染6 d 后,仅有心包腔内组大鼠的部分心肌细胞在心尖、心室及心房水平可见明显的蓝染,其他各组大鼠心肌X-gal 染色为阴性;各组大鼠肺、肝、肾组织X-gal 染色均为阴性.提示采用心包腔内途径转染、再辅以超声微泡导入以及酶类的使用,可明显改善质粒对在体心肌细胞的转染效率,且不伴有心外组织目的基因的表达,具有较好的靶向性.
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小干扰RNA下调cyclophilin-D蛋白表达对内皮细胞抗氧化损伤的作用
背景:线粒体基质中的Cyclophilin-D 蛋白(CypD)在线粒体损伤过程中起着特殊作用.目前对于CypD 蛋白与血管内皮细胞功能的关系,以及CypD 蛋白在动脉粥样硬化和血管狭窄发生、发展中的作用仍未明确.目的:观察小干扰RNA 基因沉默对内皮细胞CyPD 蛋白表达及氧化应激损伤、凋亡的影响.方法:采用含500 μmol/L H2O2 的PBS 液处理ECV304 细胞,小干扰RNA 沉默ppif 基因以建立CyPD 蛋白缺陷型细胞凋亡模型,空白对照组以单纯PBS 液处理.流式细胞仪检测ECV304 细胞凋亡率,电镜观察细胞超微结构.结果与结论:CyPD 缺陷模型组细胞凋亡率为(32.51±6.6)%,明显低于500 μmol/L H2O2 处理组(52.57±5.84)%,P=0.001.电镜观察结果显示,CyPD 缺陷型细胞模型组细胞凋亡数量明显较500 μmol/L H2O2 处理组减少,形态改变也较轻,多为早期凋亡特征.提示下调CyPD 蛋白水平可明显减轻血管内皮细胞氧化应激损伤和凋亡.
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低能量体外震波对糖尿病慢性创面模型血管新生和血管内皮细胞生长因子表达的影响
背景:体外震波作为一种非侵入性的物理刺激近年来发现具有促进新生血管形成、促进组织修复的功能.目的:观察体外震波对创面内血管内皮细胞生长因子表达和新血管形成的影响及促进创面愈合的作用.方法:72 只SD 大鼠随机均分为治疗组、糖尿病组及对照组.治疗组和糖尿病组制作糖尿病慢性创面模型.建模后1 d 治疗组创面用体外震波处理,糖尿病组和对照组仅涂抹耦合液.观察创面的肉芽组织和新血管形成情况,检测血管内皮细胞生长因子蛋白含量及mRNA 的表达水平.结果与结论:与糖尿病组比较,治疗组创面的闭合率增加.治疗后3 d 开始,治疗组创面内毛细血管数量比糖尿病组增多,肉芽组织相应增加.与对照组比较,糖尿病组血管内皮细胞生长因子蛋白含量和mRNA 表达水平在3 d 和7 d 均降低,在7 d 出现下降.经体外震波治疗后,各时间段表达均增高,在14 d 出现下降.说明糖尿病创面局部血管内皮细胞生长因子分泌量降低和高表达时段缩短是其难愈的重要因素之一,体外震波治疗可增加糖尿病创面组织内血管内皮细胞生长因子的表达强度,延长其高表达的时间,从而促进创面内新血管形成,终加快肉芽组织生长和创面愈合.
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电穿孔介导基因治疗下颌骨牵引过程中血管内皮细胞生长因子的表达
背景:课题组前期实验已证明基因治疗能促进下颌骨牵引区新骨的生成.目的:探索电穿孔介导的基因治疗对兔下颌骨牵引成骨过程中血管内皮细胞生长因子表达的影响.方法:45 只新西兰大白兔双侧下颌骨截骨,建立下颌骨牵引模型.牵引7 d 后将模型兔随机摸球法均分为pIRES-hVEGF165-hBMP2 组、pIRES-hBMP2 组、pIRES-hVEGF165 组、空质粒载体pIRES 组、生理盐水对照组,分别于牵引区注射相应质粒或生理盐水.各组动物均施加电穿孔刺激.结果与结论:血管内皮细胞生长因子主要在骨周围结缔组织成纤维细胞、血管内皮细胞、骨组织成骨细胞和骨细胞表达,也可见炎细胞如单核细胞表达.各组均在固定期第7 天表达强,14 d 下降,28 d 时表达较弱,但在各时点基因治疗组明显强于对照组.说明电穿孔介导的基因治疗能使血管内皮细胞生长因子持续表达,并使其表达时限延长,促进牵引区新生血管生成和新骨形成.
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三种测序DNA模板制备方法的比较
背景:DNA 模板质量对DNA 序列测定起着至关重要的作用.目的:为基因组DNA 或甲基化DNA 测序寻找一种经济,简便的方法.方法:分别采用96 管集合板及96 孔板提取质粒,并且针对质粒设计一对包含目的片段的引物,扩增后纯化PCR 产物,通过以上3 种方法制备DNA 测序模板进行测序.结果与结论:实验所采用的3 种方法对于基因组DNA 测序效果无差异(P > 0.05).对于甲基化DNA 测序效果,96 管集合板法优于其他2 种方法(P < 0.05).说明3 种方法均适用于基因组DNA 的测序,而96 管集合板法更适用于甲基化DNA 的测序.
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靶向血管内皮生长因子基因的微小RNA真核表达载体的构建
背景:有研究表明微小RNA 及潜在靶基因在肝癌中起重要作用,但具体机制仍不清楚.目的:构建靶向血管内皮生长因子基因微小RNA 真核表达载体,评估其转染人肝癌细胞株HepG2 后血管内皮生长因子基因的干扰效果.方法:根据血管内皮生长因子序列设计合成4 对微小RNA 不同干扰片段,克隆到pcDNA6.2-GW/EmGFP-微小RNA 真核表达载体上,测序分析鉴定插入序列的完整性;并将其转染至HepG-2 细胞株中.采用实时荧光定量聚合酶链式反应分析血管内皮生长因子微小RNA 干扰效果,蛋白印迹技术测定重组体对血管内皮生长因子基因蛋白表达情况.结果与结论:构建的4 组重组体插入片段的碱基序列完全正确,重组体能干扰肝癌细胞HepG2 细胞血管内皮因子基因的表达,4 组重组体基因的mRNA 的表达水平和蛋白表达水平与阴性对照组相比明显降低(P < 0.05),其中血管内皮生长因子微小RNA-3 表达水平低,抑制率87%.结果证实,实验成功构建血管内皮生长因子微小RNA 表达载体,在体外能有效抑制HepG2 细胞血管内皮生长因子基因表达.
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两种方法培养人早孕绒毛滋养层细胞的比较
背景:人早孕绒毛滋养层细胞体外培养是研究各种妊娠疾病的基础,如何获得纯度高、数量多的滋养层细胞以及如何简化实验步骤,仍是目前研究的热点.目的:寻求一种培养高纯度人早孕绒毛滋养层细胞方法.方法:取5~10 周正常绒毛组织,胰酶消化和差速贴壁联合应用法与组织块培养法分别进行人早孕绒毛滋养层细胞原代培养,免疫组织化学观察细胞角蛋白7 和波形蛋白的表达,进行滋养层细胞纯度的鉴定.结果与结论:两种方法均能培养出人早孕绒毛滋养层细胞,呈三角形,多边形.抗-细胞角蛋白7 阳性表达,抗-波形蛋白阴性表达.胰酶消化和差速贴壁联合应用法培养细胞纯度高于组织块培养法(P < 0.05).提示胰酶消化和差速贴壁联合应用法是一种培养人早孕绒毛滋养层细胞较好的方法.
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帕金森病模型大鼠丘脑底核及初级运动皮质放电模式的变化
背景:以丘脑底核作为刺激靶点的脑深部刺激在治疗帕金森病上取得了良好的效果,但其治疗机制尚不明确.目的:观察帕金森病病理状态下丘脑底核和初级运动皮质的局部场电位变化.方法:实验组在Wistar 大鼠脑黑质致密部和中脑腹侧被盖区两点注射6-羟基多巴胺建立帕金森病大鼠模型,以在脑黑质致密部和中脑腹侧被盖区两点注射生理盐水的大鼠为对照.通过植入金属电极采集两组大鼠不同状态下丘脑底核和初级运动皮质的局部场电位.结果与结论:实验组丘脑底核放电频率整体上明显高于对照组,且放电能量高于对照组(P < 0.05).与静止状态相比,对照组大鼠抓食运动状态下的初级运动皮质局部场电位在7~12 Hz 及12~30 Hz 内变化显著(P < 0.05),在30~100 Hz 内变化极显著(P < 0.01),抓食过程中信号频率整体变小;实验组大鼠在两种状态下初级运动皮质局部场电位在不同频率范围内的分布变化不大,仅在30~100 Hz 内差异有非常显著性意义(P < 0.01).说明帕金森病大鼠表现为丘脑底核电活动过强,而初级运动皮质电活动受到明显抑制.
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动脉粥样化模型大鼠主动脉血管细胞黏附分子1mRNA表达与补阳还五汤的干预
背景:血管细胞黏附分子1 基因表达产物在动脉粥样硬化发生过程中扮演重要角色;补阳还五汤具有改变血液流变学的性质、降低血脂、抗动脉硬化的功效.目的:观察补阳还五汤对动脉粥样硬化模型的治疗作用,并在分子水平探讨其作用机制.方法:高脂饮食加维生素D3 诱导大鼠动脉粥样硬化模型.32 只造模成功的大鼠随机摸球法均分为4 组干预:补阳还五汤组、川芎嗪组、模型组和正常对照组.观察各组血脂水平及主动脉中血管细胞黏附分子1 mRNA 的表达.结果与结论:造模成功率为92%.各组血脂水平比较:补阳还五汤组指标接近正常,与其他两组比较,差异有显著性意义.各组血管细胞黏附分子1 mRNA 表达比较:正常对照组无表达,补阳还五汤组显著低于模型组和川芎嗪组.说明益气活血代表方剂补阳还五汤可以下调主动脉组织血管细胞黏附分子1 mRNA 的表达,降低血脂,具有抗动脉粥样硬化作用,其机制可能与降低主动脉组织血管细胞黏附分子1 mRNA 的表达有关.
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肝细胞生长因子在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下对原代肝星状细胞增殖及凋亡的影响
背景:活化的肝星状细胞是肝纤维化的关键因素,研究表明肝细胞生长因子能促进星状细胞凋亡,其具体机制可能与增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导星状细胞凋亡有关.目的:观察肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用下,肝细胞生长因子对原代肝星状细胞增殖、凋亡的影响并初步探讨其可能机制.方法:将SD 大鼠原代肝星状细胞复苏、传代,细胞增殖明显时用于实验.实验分为4 组:空白对照组为单纯肝星状细胞培养;肝细胞生长因子组:将100 μg/L 肝细胞生长因子作用于肝星状细胞;TRAIL 组:将2 mg/L 的TRAIL 作用于肝星状细胞;肝细胞生长因子+TRAIL 组:将肝细胞生长因子预先刺激肝星状细胞24 h,再加入2 mg/L TRAIL.结果与结论:MTT 检测显示肝细胞生长因子及TRAIL 分别在50~200 μg/L、0.5~1.5 mg/L 各浓度下对肝星状细胞增殖抑制率无影响,TRAIL 在2 mg/L 作用下对肝星状细胞有抑制作用.流式细胞仪检测肝细胞生长因子+TRAIL 组的中晚期凋亡率明显高于空白对照组及肝细胞生长因子组(P < 0.05);肝细胞生长因子+TRAIL组DR5荧光强度明显高于其他3组(P < 0.01).提示在TRAIL 作用下,肝细胞生长因子能促进肝星状细胞的凋亡、抑制其增殖.可能与肝细胞生长因子上调活化肝星状细胞表面DR5 表达有关.
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构建非交通性颈脊髓空洞伴发胸段脊柱侧凸兔模型
背景:基于脊髓空洞常与脊柱侧凸相伴发的特点,构建具有类似临床特征的动物模型,有利于脊柱侧凸发生机制的深入研究.目的:构建具有类似临床特点的颈脊髓空洞伴脊柱侧凸兔模型.方法:将46 只健康日本大耳白兔随机分组:实验组直接于第7 颈椎水平脊髓内注入白陶土构建颈脊髓空洞伴脊柱侧凸模型,假手术组仅予穿刺而不推注,生理盐水组以氯化钠溶液推注.结果与结论:实验组2 周见到脊髓炎症细胞浸润,4 周血管间隙扩大、淋巴细胞浸润,4~6 周时开始形成空洞,MRI 发现颈段脊髓空洞,约67%的动物形成空洞,且随着时间延长逐渐增大,受累节段增多,组织学证实了MRI 发现;X 射线片出现脊柱侧凸.说明该动物模型与临床接近,具有典型的空洞及脊柱侧凸表现,且操作简单,成功率较高.
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尿酸钠致急性痛风性关节炎模型大鼠与槲皮素的抗炎作用
背景:以往研究表明黄酮类化合物槲皮素具有抗氧化、抗炎和凋亡诱导等生物活性,但是对于尿酸钠结晶诱导的痛风性关节炎大鼠的治疗作用未见文献报道.目的:验证槲皮素对尿酸钠结晶诱导的急性痛风性关节炎模型大鼠的治疗作用.方法:将72 只雄性SD 大鼠随机等分为6 组:分别每天灌胃100,200,400 mg/kg 的槲皮素,3.0 mg/kg 的吲哚美辛或等量蒸馏水(模型组和对照组),连续7 d.第5 天给药后1 h 向大鼠右后肢距小腿关节腔内注射3.0 mg 尿酸钠混悬液制备痛风性关节炎模型,对照组不造模.采用缚线法测定大鼠距小腿关节周径来评定炎症反应程度.第7 天给药后1 h 取材.结果与结论:结果表明,槲皮素呈剂量依赖性抑制急性痛风性关节炎模型大鼠的距小腿关节肿胀程度(P < 0.01),并且能够显著改善大鼠距小腿关节的病理改变,减轻尿酸钠结晶诱导的炎症因子白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α、环氧化酶2、一氧化氮的水平(P < 0.05 或P < 0.01),且作用与吲哚美辛相当.说明槲皮素可通过减轻炎症反应治疗急性痛风性关节炎.
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成熟树突状细胞和转化生长因子β联合体外扩增小鼠调节性T细胞
背景:目前天然CD4+CD25+Foxp3+调节性T 细胞稀少,远远不能满足临床需求.目的:建立有效的体外培养扩增小鼠CD4+CD25+T 细胞体系.方法:从C57/BL6 小鼠骨髓获得的成熟树突状细胞联合不同剂量转化生长因子β,体外扩增同基因或异基因CD4+CD25+T细胞.结果与结论:经过2 周培养,磁珠分选后的CD4+CD25+T 细胞的扩增倍数为自然调节性T 细胞的(17.3±10.6)倍,0.2,2 μg/L质量浓度对T 细胞的扩增能力强;经扩增后的T 双阳性率为(85.38±1.82)%,CD127 阳性率(78.86±0.91)%;体外扩增的调节性T 细胞高表达FOXP3 为天然调节性T 细胞的1.5 倍;调节性T 细胞体外抑制实验结果表明:调节性T 细胞对自体或异体CD4+T 细胞抑制能力随着效靶比浓度的降低而降低,体外扩增的CD4+CD25+T 细胞对自体CD4+T 细胞抑制率(60.1±0.71)%,对异体CD4+T 抑制率为(35.5±0.57)%(P < 0.05).提示在体外成功扩增了CD4+CD25+T 细胞,并且具有免疫抑制功能,此方法扩增细胞数量多,细胞纯度有很大提高,方法简便.
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β淀粉样蛋白1~42诱导原代皮质神经元损伤过程中的淀粉样前体蛋白信号通路
背景:近年有研究表明纤维状β淀粉样蛋白能够促进细胞表面淀粉样前体蛋白在细胞外的积聚,导致神经损伤.目的:分析淀粉样前体蛋白信号通路在纤维状β淀粉样蛋白1~42 诱导神经元损伤机制中的作用.方法:体外分离培养孕17.0~18.0 d SD 大鼠皮质神经元,培养7 d 后加入0(正常对照),0.05,0.5,5 mol/L 纤维状β淀粉样蛋白1~42,孵育8 h 建立毒性损伤模型,采用生化方法检测神经元细胞培养上清中的Calcein 释放,分别用免疫荧光双标、Western blotting 方法检测淀粉样前体蛋白和Fe65 的表达.结果与结论:与正常对照组比较,加入不同浓度纤维状β淀粉样蛋白1~42 诱导损伤8 h 后,神经元培养上清中Calcein 释放增加(P < 0.05 或P < 0.01),Western blotting 和免疫荧光方法分别检测到淀粉样前体蛋白和Fe65 的表达及共定位增加.说明纤维状β淀粉样蛋白1~42 可诱导原代培养皮质神经元的毒性损伤,淀粉样前体蛋白-Fe65 信号通路可能是其损伤机制之一.
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尾吊影响大鼠比目鱼肌Dystrophin表达分布以及血清乳酸脱氢酶活性
背景:抗肌萎缩蛋白Dystrophin 在肌肉运动性损伤时易发生改变.目的:观察模拟失重效应对大鼠比目鱼肌抗肌萎缩蛋白Dystrophin 表达、分布及血清乳酸脱氢酶活性的影响.方法:采用大鼠后肢尾吊模拟失重效应模型,分别在尾吊1,4,7,10,14 d 分离SD 大鼠比目鱼肌并提取血清进行检测.结果与结论:随着尾吊时间的延长,大鼠肌纤维横截面积减小;肌膜上Dystrophin 呈现弥散性分布的趋势,甚至出现Dystrophin 断裂现象;Dystrophin mRNA 表达下降.同时尾吊7 d,大鼠血清乳酸脱氢酶活性升高.提示失重引起的肌萎缩,伴随着Dystrophin mRNA 的表达下降和蛋白分布弥散性变化,而乳酸脱氢酶活性变化提示失重性肌萎缩可能与肌损伤的发生有关.
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过氧化物酶体增殖物激活受体Y激动剂对大鼠脊髓损伤后细胞自噬的影响
背景:过氧化物酶体增殖物激活受体γ受体激动剂具有抗炎和抑制神经凋亡保护作用,能在一定程度上保护脊髓神经元,对脊髓损伤后细胞自噬应激调控等产生影响.目的:观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ对大鼠脊髓损伤后细胞自噬的影响.方法:将60 只SD 大鼠分为3 组,正常对照组仅做椎板切除,不损伤脊髓,腹腔注射生理盐水;其余大鼠以改良Allen 法制作大鼠脊髓损伤模型,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组腹腔注射罗格列酮;脊髓损伤组不做处理.损伤后1,3,7,14 d 为时间点并取材,对脊髓损伤区分别进行免疫组织化学法检测,并以Western Blot 法检测Beclin 1/Bcl-2 的表达变化,同时采用BBB 评分方法观察神经功能恢复情况.结果与结论:大鼠脊髓损伤后第3~14 天,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组BBB 评分显著高于脊髓损伤组(P < 0.05).脊髓损伤组和过氧化物酶体增殖物激活受体γ组均见自噬相关阳性细胞表达,过氧化物酶体增殖物激活受体γ组细胞自噬程度相对降低,Beclin 1 表达较脊髓损伤组降低(P < 0.05),Bcl-2 表达较脊髓损伤组明显增加(P < 0.05),神经功能增强(P < 0.05).提示过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂在一定程度上降低大鼠脊髓损伤后细胞自噬,对细胞凋亡产生拮抗作用,并在一定程度上可促进神经功能的恢复.
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卵巢切除联合过度运动制作骨性关节炎大鼠模型
背景:骨性关节炎多见于绝经期妇女,因此成功地建立一个动物绝经期骨性关节炎模型将为研究此类疾病提供帮助.目的:建立大鼠绝经期骨性关节炎动物模型.方法:取4 月龄雌性SD 大鼠,随机分为正常对照组与实验组.实验组经背部切口切除双侧卵巢,切口愈合后,每天驱使大鼠在滚轮上运动,10 min/次,2 次/d;正常对照组大鼠不作任何处理.结果与结论:正常对照组大鼠关节软骨中细胞层次清楚,细胞形态正常.实验组关节软骨变薄、退变,软骨面粗糙,表层有缺失,细胞数量减少,软骨细胞层次紊乱,骨小粱稀疏,排列紊乱.实验组大鼠股骨骨密度较正常对照组大鼠明显下降(P < 0.05).说明卵巢切除联合过度运动可成功建立大鼠绝经期骨性关节炎动物模型.
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裸鼠肝窦内皮细胞的分离、培养及鉴定
背景:建立裸鼠肝窦内皮细胞的原代分离培养方法,进一步研究其生长特点及生物学特性.目的:建立裸鼠肝窦内皮细胞的原代分离、培养方法,并鉴定其纯度及观察其生物学特性.方法:无菌下摘除裸鼠肝脏,剪成 1 mm3 大小,Ⅳ型胶原酶在 37 ℃恒温下消化,应用CD146 免疫磁珠分选肝窦内皮细胞,在倒置显微镜观察内皮细胞形态及生长特性,用von-Willebrand 因子免疫细胞化学验证分选细胞的表面蛋白表达,鉴定肝窦内皮细胞的纯度,Hochest 33342 测定凋亡.结果与结论:分离的肝窦内皮细胞纯度达95%以上,活力好,光镜下可以看到典型的铺路石样形态,von-Willebrand 因子免疫细胞化学染色阳性.肝窦内皮细胞在体外培养3 周后凋亡.提示Ⅳ型胶原酶消化加CD146 免疫磁珠分选肝窦内皮细胞纯度高,方法可靠.
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互隔交链孢酚对NIH/3T3细胞中DNA聚合酶β的致突变作用
背景:近年来研究发现食管癌细胞中存在DNA 聚合酶β的突变.目的:观察互隔交链孢酚对NIH/3T3 细胞中DNA 聚合酶β基因序列的影响,研究互隔交链孢酚致细胞变异的机制.方法:用不同浓度(2,4,6,8 μmol/L)的互隔交链孢酚作用于NIH/3T3 细胞,并设置对照组.用RT-PCR 法从细胞总RNA中扩增出DNA 聚合酶β基因cDNA 序列,应用T-A 克隆技术,克隆至pGEM-T 载体后进行测序,分析其序列变化.结果与结论:2 μmol/L 互隔交链孢酚处理后的细胞内DNA 聚合酶β基因序列无任何变化.而4 μmol/L 组中DNA 聚合酶β基因有1 个位点发生突变,8 μmol/L 组和16 μmol/L 组中各有2 个位点发生突变,此3 组的突变存在相同的位点.结果证实,互隔交链孢酚可导致NIH/3T3 细胞中的DNA 聚合酶β发生点突变,互隔交链孢酚浓度越高,点突变的数量越多,且存在突变活跃位点.
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六氟化硫微泡介导人脂联素基因兔主动脉内转染及表达
背景:超声微泡载基因传输技术是一种新兴起的定向传输基因技术.目的:构建含人脂联素基因脂联素的真核表达载体,采用六氟化硫微泡介导脂联素基因进行兔主动脉转染及表达,为脂联素用于体内干预动脉粥样硬化的研究奠定基础.方法:人心外膜脂肪组织提取总RNA 构建pcDNA3.1-脂联素重组体,通过瞬时转染人脐静脉内皮细胞验证载体构建是否成功.21 只大白兔随机分成对照组(n=6)和脂联素转基因组(n=15),脂联素转基因组经兔耳缘静脉注射pcDNA3.1-脂联素与六氟化硫微泡的混合物,诊断超声仪照射兔胸腹主动脉区域,于照射后2,7,14 d 取兔主动脉血管及血清,检测主动脉血管壁中脂联素基因的表达及血清中脂联素蛋白水平.结果与结论:pcDNA3.1-脂联素瞬时转染入人脐静脉内皮细胞可有效表达.六氟化硫微泡传输脂联素基因2 d 后即可检测到兔主动脉血管壁脂联素基因高表达,持续至14 d,且兔血清脂联素蛋白水平显著增加(P < 0.01).说明pcDNA3.1-脂联素重组体构建成功,六氟化硫微泡可在快速血流状态下,安全、高效传输脂联素基因入兔主动脉血管壁并有效表达与分泌至血浆.
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股动脉周围骨骼肌多点注射携带肝细胞生长因子基因重组质粒糖尿病大鼠肢体缺血骨骼肌的组织学变化
背景:质粒载体因其较好的生物安全性和较高的体内维持时间,被广泛应用于基因治疗研究领域.目的:观察携带肝细胞生长因子基因重组质粒pUDKH 在糖尿病后肢缺血模型大鼠股动脉周围骨骼肌多点注射15 d 后骨骼肌组织的病理学变化.方法:利用STZ 制备SD 大鼠糖尿病模型.随机分为3 组,建模后24 h 内高浓度组注射pUDKH 200 μg/只,低浓度组注射pUDKH 100 μg/只,对照组注射等体积医用注射用水.15 d 后,取大鼠的骨骼肌组织进行病理学观察.结果与结论:对照组肌浆萎缩变性,纤维化增生并透明变性,浆细胞浸润变性,肌间隙变宽,有局灶性脓肿形成;pUDKH治疗后有丰富的微血管形成,高浓度组肌纤维横纹较低浓度组保持完整.提示携载肝细胞生长因子基因质粒pUDKH 对糖尿病大鼠肢端缺血有治疗作用.
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大鼠背部脊柱两侧全层皮肤圆形创面增生性瘢痕愈合过程中臭氧的作用
背景:预防硬膜外瘢痕的形成,可减少腰椎手术失败综合征的发生.臭氧应用于腰椎间盘突出症的治疗已取得较好的临床效果.目的:观察臭氧对大鼠伤口瘢痕愈合过程的影响.方法:外科切口法制备大鼠背部脊柱两侧圆形全层皮肤创面增生性瘢痕模型,分为3 组,纯氧组及臭氧组分别注射纯氧及30~40 mg/L 臭氧,总量均为5 mL,空白组不注射任何药物,每周2 次,4 周后取瘢痕/肉芽组织标本,利用苏木精-伊红染色及免疫组化方法,对比观察各组标本瘢痕/肉芽组织外观及肿瘤坏死因子α、碱性成纤维细胞生长因子表达的变化.结果与结论:与空白组及纯氧组相比,臭氧组愈后瘢痕面积较小,上皮生成较多,炎性细胞浸润较少,胶原纤维较纤细,且断裂较多;臭氧组肿瘤坏死因子α阳性细胞数较低(P < 0.01),碱性成纤维细胞生长因子阳性细胞数较高(P < 0.01).提示臭氧通过其抗炎作用,减少炎性细胞浸润,并可通过抑制成纤维细胞及巨噬细胞释放的肿瘤坏死因子α以及提高碱性成纤维细胞生长因子的表达,减少胶原的过度合成,从而起到抑制肉芽组织炎症及瘢痕组织增生的作用.
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同种异体血清体外培养兔膝关节软骨细胞的增殖
背景:兔关节软骨细胞体外单层培养采用胎牛血清培养基易去分化,有必要寻找合适培养基来提高兔关节软骨细胞培养质量.目的:观察同种异体兔血清对体外培养的兔膝关节软骨细胞增殖能力的影响.方法:以0.4%链霉蛋白酶和0.025%Ⅱ型胶原酶分离成年兔膝关节软骨细胞,将获得的软骨细胞随机分为实验组和对照组.实验组以体积分数10%异体兔血清+DMEM/F12 培养;对照组以体积分数10%胎牛血清+DMEM/F12 培养,传代培养至4代.结果与结论:实验组前4 代软骨细胞增殖较对照组慢,但软骨细胞形态未发生明显改变而对照组软骨细胞出现去分化现象.提示体积分数10%异体兔血清培养利于维持软骨细胞增殖和形态的稳定,是较好的获取大量优良软骨细胞的体外培养方式.
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胰蛋白酶消化法体外培养和鉴定人脐静脉血管内皮细胞
背景:体外建立稳定可靠的人脐静脉血管内皮细胞模型,目前培养方法缺乏统一的标准.目的:探索脐静脉内皮细胞的体外培养的方法.方法:采用2.5 g/L 胰蛋白酶和0.02%EDTA 消化、分离、体外原代培养及消化传代脐静脉内皮细胞,简化完全培养液组分(不添加血管内皮细胞生长因子、肝素等辅助因子),当原代培养细胞80%以上汇合,根据细胞特有的形态学特征和Ⅷ因子进行内皮细胞的鉴定.结果与结论:种植在培养瓶中的内皮细胞2 h 贴壁生长,24 h 换液后内皮细胞80%融合,细胞状态好,内皮细胞呈单层铺路石样外观,经过镜下观察和Ⅷ因子相关抗原鉴定证明是脐静脉内皮细胞.证实用胰蛋白酶灌注脐静脉是一种简单、实用的获得人脐静脉血管内皮细胞的方法,可靠性大,成功率高,可以构建体外研究血管内皮细胞的模型.
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中药补肾活骨方对去势骨质疏松大鼠骨代谢的影响
背景:中药补肾活骨方可有效防治骨质疏松症,但其具体的药理学机制仍不是很清楚.25-羟基维生素D3 和1,25-二羟基维生素D3 是调节骨吸收与骨形成的重要的偶联因子.目的:观察补肾中药对去势骨质疏松大鼠骨密度、骨生物力学、血清及肝肾组织中25-羟基维生素D3 和1,25-二羟基维生素D3水平的影响.方法:健康雌性SD 大鼠108 只随机等分为假手术组、模型组和治疗组.后2 组摘除双侧卵巢,导致雌激素缺失,从而诱导骨质疏松症模型.治疗组大鼠造模后以中药补肾活骨方2 mL 灌胃,2 次/d.结果与结论:与模型组相比,治疗组股骨头骨密度明显提高(P < 0.05),大应力和大负荷指数明显增强(P < 0.05),血液、肝脏和肾脏组织中25-羟基维生素D3 和1,25 二羟基维生素D3 水平明显提高(P < 0.05);且接近于假手术组(P < 0.05).提示补肾中药在雌激素缺失早期即可在分子水平上调节25-羟基维生素D3 和1,25-二羟基维生素D3的表达水平,激活骨代谢提高骨密度增强骨质量达到预防骨质疏松的作用.
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透骨消痛胶囊干预膝骨性关节炎软骨下骨重塑的分子机制
背景:前期研究表明透骨消痛胶囊能有效治疗膝骨性关节炎,且对膝关节软骨有保护作用,软骨下骨重塑在骨性关节炎病理进程中起重要作用.目的:观察透骨消痛胶囊干预骨性关节炎软骨下骨重塑的作用及并探讨其作用机制.方法:新西兰大白兔分为正常组、模型组、壮骨关节丸组、透骨消痛胶囊组4 组.除正常组外动物均按改良Hulth 法造模.正常组、模型组兔每天给予生理盐水灌胃;壮骨关节丸组兔每天给予壮骨关节丸水溶液灌胃;透骨消痛胶囊组兔每天给予透骨消痛胶囊水溶液灌胃.结果与结论:造模后6,9,12 周,透骨消痛胶囊组软骨下骨Cyclin D1 基因、胰岛素样生长因子1、细胞核因子κB 受体活化因子配体mRNA 表达均显著高于正常组(P < 0.05).与模型组比较,造模后1 周,透骨消痛胶囊组Cyclin D1 mRNA表达较低(P < 0.05);造模后6 周,透骨消痛胶囊组细胞核因子κB 受体活化因子配体表达较低(P < 0.05);造模后9,12 周,透骨消痛胶囊组各项指标表达均较低(P < 0.05).与壮骨关节丸组比较,造模1 周后,透消痛胶囊组Cyclin D1 mRNA 表达较低(P < 0.05);6 周时透骨消痛胶囊组细胞核因子κB 受体活化因子配体表达较低(P < 0.05);9,12 周后,透骨消痛胶囊组胰岛素样生长因子1 mRNA 表达较低(P < 0.05).提示透骨消痛胶囊可改变软骨下骨重塑的速率和模式,终减轻软骨下骨硬化.
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骨关节炎时内源性细胞因子及基质金属蛋白酶抑制因子1对关节软骨的影响
背景:研究发现,细胞因子通过影响关节软骨基质的分解代谢和合成代谢的平衡来参与骨关节炎的形成,其中白细胞介素1β、基质金属蛋白酶抑制因子1 在其中起重要作用.目的:观察内源性细胞因子白细胞介素1β及基质金属蛋白酶抑制因子1 与骨关节炎关节软骨退变的关系.方法:纳入2006-06/2009-09 于哈尔滨医科大学附属第五医院就诊的原发性骨关节炎患者37 例,在患者行关节镜检时抽取关节液及分离平滑光亮的滑膜组织.另取10 例正常关节液标本及平滑光亮的滑膜组织标本作为对照.结果与结论:ELISA 法检测结果显示骨关节炎患者关节液和滑膜组织中白细胞介素1β、基质金属蛋白酶抑制因子1 水平均显著高于正常水平,且患者骨关节炎越严重,关节液和滑膜组织中白细胞介素1β、基质金属蛋白酶抑制因子1 的水平越高.说明关节液中白细胞介素1β、基质金属蛋白酶抑制因子1 水平与骨关节炎、关节软骨退变有关.
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带蒂筋膜瓣促非细胞型组织工程化骨血管化及其成骨的组织学变化
背景:目前关于带蒂筋膜瓣促组织工程骨成骨是否以早期促血管化为核心的成骨修复方式的对比研究还缺少相关报道.目的:通过带蒂筋膜瓣在修复骨缺损各时间段中促非细胞型组织工程化骨血管化及其对成骨作用影响组织学观察,论证带蒂筋膜瓣具有较好的促血管化作用及促成骨能力.方法:制作兔尺骨长段骨-骨膜完全缺损模型及带蒂筋膜瓣,随机分为单纯植入组、无蒂膜瓣包裹组、血管内皮生长因子组、膜瓣包裹组4 组,分别于骨缺损处植入相应材料.结果与结论:组织学显示,在各时间点无论新生血管数量,还是新生骨小梁质与量,膜瓣包裹组均明显优其他3 组.血管再生面积和新生骨小梁面积测定显示,第4 周血管内皮生长因子组、膜瓣包裹组明显多于单纯植入组、无蒂膜瓣包裹组(P < 0.05);植入后第8,12,16 周膜瓣包裹组骨修复区血管再生面积及对应的再生骨小梁面积明显多于其他3 组(P < 0.05).提示带蒂筋膜瓣具有显著促非细胞型组织工程化骨血管化作用,血管化增强有利于成骨作用,且可有效提高成骨质和量、缩短骨修复时间.
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改良贴壁法结合内皮细胞培养基培养小鼠肺微血管内皮细胞
背景:肺微血管内皮细胞是研究微循环的重要内皮细胞模型之一,众多培养方法中单纯贴壁法操作相对简便,但耗时长,杂质细胞多,是批量培养细胞的大障碍.目的:建立优化的小鼠肺微血管内皮细胞体外培养方案,观察细胞生长状态并鉴定细胞性质.方法:无菌状态下快速剪碎5 日龄C57BL/6J 小鼠的肺叶外周组织,肺组织颗粒贴壁法获得肺微血管内皮细胞,并用内皮细胞培养基培养.倒置显微镜观察培养细胞生长和行为状态,Ⅷ因子相关抗原免疫组化和免疫荧光进行细胞鉴定.结果与结论:肺组织块培养24 h 内可见梭形细胞爬出,传代后细胞生长迅速,形态规则呈鹅卵石状,纯度高达98%以上,结合Ⅷ因子相关抗原检测证实其为内皮细胞.结果可见联合运用肺组织颗粒贴壁和内皮细胞培养基可高效获得原代小鼠肺微血管内皮细胞.
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热休克蛋白90和凋亡抑制蛋白Livin在病理性瘢痕中的表达
背景:近年来研究表明热休克蛋白90 和凋亡抑制蛋白Livin 在细胞的凋亡过程中扮演着非常重要的角色,而两者在病理性瘢痕形成过程中的作用研究至今鲜有报道.目的:从基因和蛋白水平分别检测热休克蛋白90 和凋亡抑制蛋白Livin 在病理性瘢痕中的表达情况及两者之间的关系.方法:分别采用RT-PCR 方法和免疫组织化学方法检测热休克蛋白90 和Livin 在24 例瘢痕疙瘩、26 例增生性瘢痕、22例非病理性瘢痕和20 例正常皮肤组织中的表达水平.结果与结论:瘢痕疙瘩,增生性瘢痕中热休克蛋白90 和Livin的阳性表达水平高于非病理性瘢痕及正常皮肤组织(P < 0.05).病理性瘢痕中热休克蛋白90 和Livin表达呈正相关(rs
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三七总皂苷对L6大鼠成肌细胞抗化学损伤模型的保护作用
背景:三七总皂苷具有活血祛瘀,通脉活络等多重药理作用,但其具体机制尚不明确.目的:观察三七总皂苷对L6大鼠成肌细胞H2O2方法:建立L损伤的保护作用及其对Bax和Bcl-2 蛋白表达的影响.6大鼠成肌细胞H2O2损伤模型,应用MTT法、DAPI化学荧光法和流式细胞仪分析检测各种剂量三七总皂苷(0.5,0.1,0.02 g/L)对L6大鼠成肌细胞存活率的影响;通过免疫荧光抗体细胞化学法研究各种剂量三七总皂苷(0.5,0.1,0.02 g/L)对L6结果与结论:L大鼠成肌细胞Bax和Bcl-2 蛋白表达的影响.6大鼠成肌细胞经H2O2损伤后细胞存活率降低、凋亡率增加,三七总皂苷能明显提高经H2O2损伤后细胞的存活率,降低凋亡率;免疫荧光抗体细胞化学法表明三七总皂苷能促进Bcl-2 表达,抑制Bax表达.结果可见三七总皂苷对L6大鼠成肌细胞H2O2
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miR-3960对成骨细胞分化的影响
背景:成骨细胞的分化成熟过程涉及多种激素和细胞因子对成骨细胞分化相关基因表达的调控,近来发现多个微小RNAs也参与了这一调控过程.目的:观察miR-3960 在小鼠骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中的作用.方法:将miR-3960 表达载体pSilencer4.1-miR-3960 转染骨髓基质细胞,构建miR-3960 过表达细胞模型,随后予300 μg/L骨形态发生蛋白2 诱导分化,观察成骨细胞分化指标变化.结果与结论:转染pSilencer4.1-miR-3960 能够在细胞中稳定地高表达miR-3960.miR-3960 过表达促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中的碱性磷酸酶活性增高和骨钙素分泌,增加细胞中的钙沉积量.抑制miR-3960 降低骨髓基质细胞向成骨细胞分化过程中的碱性磷酸酶活性,减少骨钙素分泌,降低钙沉积量.表明miR-3960 可以促进成骨细胞分化.
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血管内皮生长因子与骨折愈合:SCI数据库10年资料检索分析
背景:血管内皮生长因子在骨折愈合过程中起着重要的作用.目的:利用SCI 数据库文献检索和深度分析功能,对于血管内皮生长因子对骨折愈合的干预作用近10 年文献资料趋势进行多角度的探讨分析.设计:文献计量学分析.资料提取:由第一作者以vascular endothelial growth factor/VEGF(血管内皮生长因子);fracture(骨折);及healing(愈合)为关键词检索SCI 数据库2002-01/2011-12 的相关文献,并将分析结果及资料导出,以文字和图表的形式进行统计和计量分析,描述其分布特征.主要数据的判定指标:①检索结果数量.②发表文章年份分布.③国家地区分布.④机构信息.⑤文献类型分析.⑥来源期刊分析.⑦高被引频次文献分析.入选标准:纳入标准:检索血管内皮生长因子对骨折愈合的干预作用相关研究的文献.文献类型包括研究原著、综述、会议记录及摘要、快报文章、编辑素材.排除标准:与文章目的无关的文献,大于10 年较陈旧的文献,未发表的文章以及需电话追踪和手工检索逐一分析的文献.主要数据判定指标:以文献的类型、出版时间、发表文献的作者分布、学科类别、机构分布、国家地区分布、来源期刊、文献被引情况进行相关分析.结果:SCI 数据库2002/2011 收录的文献中共检索到180 篇血管内皮生长因子对骨折愈合的干预作用研究相关的文献,研究原著以158 篇位居首位,其中有9 篇文献总被引次数超过50 次,被确定为经典文献.在时间分布上,文献数量2002/2011总体呈上升趋势,来源出版物呈分散情况,其中Bone<骨>发表文献量21 篇,占全部文献的11.67%.其次为Journal ofBone and Mineral Research<骨及矿物质研究>13 篇.结论:血管内皮生长因子对骨折愈合的干预作用是近几年的研究热点,中国在该领域的研究趋于成熟,并在国际数据库收录文献数量上占有重要位置.
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脑缺血再灌注动物模型的血脑屏障损伤
背景:脑缺血再灌注后血脑屏障遭到破坏,引起脑水肿和脑出血,组织损伤程度加重.目的:总结分析脑缺血再灌注动物模型血脑屏障相关分子,在脑缺血再灌注后血脑屏障损伤中的作用.方法:以"Cerebral ischemia-reperfusion injury,blood brain barrier permeability,"为检索词,检索近十年PubMed 数据库,文献检索语种限制为英文.以"脑缺血再灌注,血脑屏障"为检索词,检索5 年内中国期刊全文数据库,文献检索语种限制为中文.纳入与脑缺血再灌注及血脑屏障损伤密切相关的研究;排除重复性研究.选取17 篇总结分析.结果与结论:从炎症因子的浸润,基质金属蛋白酶的水解以及水通道蛋白的开放等方面总结脑缺血再灌注损伤后血脑屏障相关分子,提出多因素多环节调控血脑屏障功能.CIR 后血脑屏障开放的3 h 时间窗为急性期抢救缺血半暗带关键点,基质金属蛋白酶的后期修复作用也可为新药研发提供依据.
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双膦酸盐类药物相关性颌骨坏死病例报告及新进展文献复习
背景:双膦酸盐能抑制破骨细胞介导的骨吸收,广泛用于预防和治疗由于破骨细胞活性增强所致的骨骼疾病.目的:探讨双膦酸盐类药物致颌骨坏死的临床诊断和治疗方法.方法:检索中国生物医学文献数据库和Medline 数据库2003/2011 收录的双膦酸盐类药物致颌骨坏死的相关综述和论文报告,并分析和探讨其发病机制、临床表现及其预防和治疗.同时根据患者的病史、辅助检查和专科查体确诊1 例乳腺癌骨转移患者应用双膦酸盐类药物致颌骨坏死的个案,采用手术为主的综合治疗手段对患者进行了治疗,临床治愈,疗效满意.结果与结论:共纳入双膦酸盐类药物致颌骨坏死的相关文献15 篇.双膦酸盐类药物可以抑制破骨细胞,降低肿瘤细胞引起的骨转移灶的溶骨性破坏.由于在正常骨组织中,成骨细胞和破骨细胞维持动态平衡,但在口腔治疗过程中,双膦酸盐抑制了颌骨在病损后的破骨细胞的活动,使骨改建的病理生理过程无法完成;造成颌骨尤其是牙槽骨在牙槽手术后骨的修复不能进行,引起经久不愈的感染.
