淫羊藿对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

背景：中药淫羊藿一直以来被用于骨质疏松的治疗和骨缺损的修复。目的：探讨淫羊藿对骨髓间充质干细胞成骨性分化的影响。
　　方法：应用数据库文献检索的方法获取淫羊藿对骨髓间充质干细胞成骨性分化影响研究的文献，对符合研究标准的文献进行深入的分析。通过检测淫羊藿诱导骨髓间充质干细胞成骨性分化过程中碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥蛋白、转化生长因子β、骨形态发生蛋白、骨钙素、骨涎蛋白等，了解淫羊藿对骨髓间充质干细胞的增殖和成骨分化的机制。
　　结果与结论：淫羊藿对骨髓间充质干细胞的影响呈剂量依赖性，在诱导培养的早期淫羊藿苷可以提高细胞的磷酸酶活性，在诱导培养的晚期增加细胞钙化结节数，促进骨钙素分泌量，显著提高转化生长因子β1、骨形成蛋白2、胰岛样生长因子1、骨桥蛋白和骨涎蛋白等的表达水平。淫羊藿对骨髓间充质干细胞的增殖和成骨性分化有促进作用，可作为一种良好的骨诱导活性因子。

脐带间充质干细胞治疗帕金森病的应用

背景：动物实验中已多次验证，脐带干细胞移植可有效改善帕金森大鼠的旋转行为，且免疫排斥反应低。目的：以帕金森病统一评分量表作为观察指标，评估人脐带间充质干细胞移植对帕金森病的治疗效果。方法：纳入帕金森病患者15例，男8例，女7例，年龄52-76岁，帕金森病H&Y分级3-5级。在产妇知情同意情况下，通过医院伦理委员会批准，获取足月妊娠产妇的脐带，无菌收集脐带，培养脐带间充质干细胞。所有患者均住院治疗，自第2周起应用人脐带间充质干细胞进行颈动脉穿刺移植治疗。移植前及移植后1个月采用帕金森病综合评分量表对患者移植前后神经功能进行评定，分值越高表示神经功能缺损越严重。
　　结果与结论：15例患者均进入结果分析。与移植前相比，移植后1个月患者帕金森病综合评分量表分值均明显降低(P<0.05)，主要集中在对震颤、强直的改善，而运动迟缓、姿势不稳等临床症状无明显改善。患者均未出现移植物抗宿主病。提示脐带间充质干细胞移植治疗帕金森病效果显著，可明显改善患者的神经功能。

不同来源间质干细胞移植治疗大鼠肝纤维化

背景：近年来研究表明间充质干细胞可分泌多种生长因子，在肝纤维化的治疗方面有一定的应用前景。目的：探讨不同来源的间充质干细胞对大鼠肝纤维化的治疗作用。
　　方法：四氯化碳腹腔注射构建SD大鼠肝纤维化模型50只，另取10只正常SD大鼠作为正常对照组，将SD模型大鼠随机分为5组，每组10只，根据移植不同来源的间质干细胞命名为模型对照组、生理盐水组、骨髓间充质干细胞组、脐带间充质干细胞组、脐血间充质干细胞组。分离不同来源的间充质干细胞，造模8周后，取不同来源的间质干细胞2×106经尾静脉输注至SD大鼠模型体内，12周后处死各组大鼠，检测血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶和白蛋白水平，荧光定量PCR法检测肝组织中Ⅰ型胶原和胶质纤维酸性蛋白的表达。
　　结果与结论：成功建立了 SD 大鼠肝纤维化模型，骨髓间充质干细胞加重纤维化水平，脐血间充质干细胞与脐带间充质干细胞能降低大鼠的肝纤维化水平，脐带间充质干细胞的作用明显，能明显降低谷丙转氨酶、谷草转氨酶及Ⅰ型胶原和胶质纤维酸性蛋白的表达。结果可见不同来源的间质干细胞对于大鼠纤维化具有不同的作用，骨髓间充质干细胞促进肝纤维化，脐带和脐血间充质干细胞能缓解大鼠的肝纤维化。

骨髓间充质干细胞移植抑制肺气肿炎症反应及细胞凋亡

背景：骨髓间充质干细胞移植可以通过旁分泌机制改变周围区微环境，通过促进血管新生、抑制细胞凋亡和维护自主神经功能稳定等作用，可用于治疗肺功能严重损害。
　　目的：通过骨髓间充质干细胞移植，观察其对实验性肺气肿炎症反应及细胞凋亡的抑制作用。
　　方法：24只Wistar雌性大鼠随机分健康对照组、模型组及实验组，后两组烟熏加气管内滴注猪胰弹性蛋白酶法建立肺气肿模型。建模后大鼠尾静脉注射骨髓间充质干细胞，观察细胞移植后大鼠肺组织的病理学变化、检测支气管肺泡灌洗液中细胞数及肿瘤坏死因子水平、肺泡壁细胞凋亡指数。
　　结果与结论：模型组、实验组大鼠的肺组织都存在不同程度的肺气肿病理改变，实验组较轻，差异有显著性意义(P<0.01)；实验组肿瘤坏死因子水平及肺组织细胞凋亡指数均低于模型组，差异有显著性意义(P<0.01)。提示骨髓间充质干细胞通过抑制实验性肺气肿炎症反应及细胞凋亡，改善了肺气肿病理学，对肺气肿有明显的治疗作用。

骨髓动员单个核细胞向血管内皮细胞和心肌样细胞的转化

背景：目前骨髓动员能否归巢到心肌病心衰受损部位，分化成心肌样细胞和血管内皮细胞尚无定论。目的：观察骨髓动员剂粒细胞集落刺激因子对心肌病心衰大鼠心肌和血管的影响。
　　方法：选取阿霉素心肌病心衰模型大鼠50只，分成2组，骨髓动员组30只皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子，心衰组20只给予相同体积的生理盐水。骨髓动员组其中10只在动员第6天处死，留取心肌标本，行CD34免疫荧光检测。各组在治疗前及治疗后第5天剪尾取血，测量白细胞总数及单个核细胞百分比，同时提取外周血中单个核细胞行流式细胞仪检测。治疗第5天，腹腔注射Brdu 50 mg/kg，连续4周直至动物处死。留取心肌组织，通过心肌BrdU单染、BrdU与肌球蛋白重链双染及BrdU与肌动蛋白双染确定单个核细胞的归巢，评价移植的单个核细胞向心肌和血管内皮细胞的生成、分化。采用苏木精-伊红染色评价血管密度。
　　结果与结论：骨髓动员组白细胞数及单个核细胞数较治疗前明显增高(P<0.05)。流式细胞仪证实骨髓动员组外周血单个核细胞CD34阳性率显著高于心衰组(P<0.05)。心肌CD34免疫荧光检测，心衰组阴性，骨髓动员组阳性。骨髓动员组心肌BrdU单染和肌球蛋白重链、肌动蛋白双染均呈阳性，心肌损伤处血管内皮细胞核呈BrdU阳性；心衰组均为阴性。骨髓动员组血管密度显著高于心衰组(P<0.001)。提示骨髓动员出单个核细胞，归巢到心肌受损处，对心肌病心衰大鼠模型心肌和血管有明显修复作用。

脂肪间充质干细胞移植对心肌梗死后炎症反应及心室重构的影响

背景：脂肪间充质干细胞的免疫调节作用是否能够用于心肌梗死的治疗，以及发挥这一作用的佳时机如何，目前研究较少。
　　目的：观察移植的脂肪间充质干细胞对心肌梗死后炎症反应及心室重构的影响，探讨脂肪间充质干细胞治疗心肌梗死的可能机制。
　　方法：酶消化法分离培养大鼠脂肪间充质干细胞，40只大鼠结扎左冠状动脉前降支建立心肌梗死模型后随机数字表法均分为假手术组、对照组(注射 HG-DMEM)、心梗后3 h，7 d 移植脂肪间充质干细胞组。移植后14 d采用ELISA法检测血浆肿瘤坏死因子α和白细胞介素10的水平，移植后28 d行超声心动图检测左室舒张末期内径、收缩末期内径、射血分数和短轴缩短率。
　　结果与结论：细胞移植后第14天，与对照组相比，3 h移植组和7 d移植组血浆促炎细胞因子肿瘤坏死因子α的水平明显降低(P<0.01)，抗炎细胞因子白细胞介素10的水平明显升高(P<0.01)；细胞移植后第28天，与对照组比较，脂肪间充质干细胞移植组左室舒张末期内径和收缩末期内径明显减小，心脏缩小，射血分数和短轴缩短率明显提高，心功能改善，且3h移植组较7d移植组作用更趋明显。说明心肌梗死早期进行脂肪间充质干细胞移植，能够显著抑制梗死后炎症反应，调节炎症细胞因子网络平衡，延缓心室重构，改善心脏功能。

骨髓间充质干细胞移植肝衰竭大鼠CD163和白细胞介素10的表达

背景：研究显示骨髓间充质干细胞具有持久生成肝细胞和胆管细胞的能力，在肝损伤后的修复过程中，参与补充因损伤而减少的肝细胞数量，参与修复因损伤破坏的肝组织结构。
　　目的：探讨骨髓间充质干细胞移植治疗急性肝衰竭大鼠的疗效以及对急性肝衰竭大鼠血清和肝组织CD163、白细胞介素10表达的影响。
　　方法：选取60只SD大鼠，腹腔注射D-氨基半乳糖/脂多糖制备急性肝衰竭模型。随机分为2组，骨髓间充质干细胞移植组尾静脉移植第3代骨髓间充质干细胞，对照组尾静脉注射等体积生理盐水。于移植后24，120，168 h收集血清和肝组织标本。
　　结果与结论：在移植后120，168 h，骨髓间充质干细胞移植组大鼠血清谷丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶活性显著低于对照组(P <0.05)。骨髓间充质干细胞移植组细胞凋亡指数显著低于对照组(P <0.05)。骨髓间充质干细胞移植组大鼠血清及肝组织中 CD163和白细胞介素10水平与对照组比较明显下降(P <0.05)，且二者的表达有明显的相关性(P<0.01)。结果可见骨髓间充质干细胞对急性肝衰竭大鼠有一定的治疗作用，CD163、白细胞介素10的基础水平以及治疗过程中的变化趋势可以在一定程度上反映急性肝衰竭的治疗效果。

不同尿酸浓度对人骨髓间充质干细胞成神经分化的影响

背景：尿酸作为一种内源性的抗氧化剂，其抗氧化、抗 DNA 损害作用及发挥神经元保护作用近年受到关注。
　　目的：观察不同浓度尿酸对骨髓间充质干细胞成神经分化的影响。
　　方法：体外分离、纯化、培养骨髓间充质干细胞，观察细胞形态，取扩增3代的骨髓间充质干细胞，分别用含0(对照组)、0.2，0.4，0.8 mmol/L浓度尿酸的预诱导液诱导24 h，再用含0(对照组)、0.2，0.4，0.8 mmol/L浓度尿酸的诱导液诱导1 h后行尼氏体染色，2 h后，用免疫组织化学法检测细胞内巢蛋白、神经元特异性烯醇化酶的表达。
　　结果与结论：骨髓间充质干细胞经诱导后，细胞胞体收缩，形成突起并形成连接。细胞胞质中存在蓝色颗粒状的尼氏体，含不同浓度尿酸的诱导组神经元特异性烯醇化酶阳性率均较对照组明显升高(P <0.05)，而且随着尿酸浓度增加，神经元特异性烯醇化酶阳性表达率逐渐增加(P <0.05)。含不同浓度尿酸的诱导组巢蛋白阳性表达率较对照组降低(P<0.05)，诱导4 h后，细胞脱落明显。在体外一定时间内，尿酸能够促进骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的分化，且具有一定的浓度依赖性。

两种细胞因子联合诱导骨髓间充质干细胞向神经样细胞分化

背景：骨髓间充质干细胞可被定向诱导分化为神经样细胞，理论上骨髓间充质干细胞可作为种子细胞应用于周围神经组织工程。
　　目的：用2种细胞因子联合诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞，进一步探讨其在周围神经损伤方面的应用。
　　方法：从Wistar大鼠胫骨和股骨提取骨髓间充质干细胞，采用差速贴壁法进行培养和纯化，联合应用碱性成纤维细胞生长因子和表皮生长因子对细胞进行诱导，观察细胞形态变化，并用免疫组织化学方法检测骨髓间充质干细胞中神经元特异性标志物的表达；并研究终止诱导后骨髓间充质干细胞的形态及免疫组织化学方面的变化。
　　结果与结论：骨髓间充质干细胞经诱导后呈典型神经细胞样改变，有两个或多个突起，突起之间相互连接成网状，可见细胞核及核仁，免疫组化检测神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白及突触素蛋白表达阳性。撤除诱导条件后大部分细胞逐渐恢复原来的成纤维细胞样形态，上述3种蛋白的表达量明显下降。表明应用神经营养因子可诱导骨髓间充质干细胞分化为神经样细胞，但其形态及组织学变化仅能维持一段较短的时间。

重组慢病毒载体转染羊骨髓间充质干细胞及成骨基因表达量的变化

背景：碱性成纤维细胞生长因子具有促进骨髓基质细胞分裂增殖作用，而骨形态发生蛋白2在诱导新骨形成方面有重要的研究意义。
　　目的：分析骨形态发生蛋白2和碱性成纤维细胞生长因子基因单独和联合转染对体外培养的骨髓间充质干细胞的增殖和骨向分化的影响，比较Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因于转染前后骨髓间充质干细胞相对表达量的差别，为构建组织工程骨的种子细胞做理论依据。
　　方法：构建碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2慢病毒载体，分别转染羊骨髓间充质干细胞，得到碱性成纤维细胞生长因子组、骨形态发生蛋白2组、联合组、对照组细胞，提取RNA后采用实时定量PCR的方法检测Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因的mRNA水平相对表达量的变化。
　　结果与结论：对照组、碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2及联合组4组间非特异性成骨基因表达量存在明显差异(P <0.05)，且碱性成纤维细胞生长因子和骨形态发生蛋白2具有交互作用(P <0.05)，碱性成纤维细胞生长因子、骨形态发生蛋白2联合组的Ⅰ型胶原蛋白和骨钙蛋白基因表达量明显高于其他3组，且差异有显著性意义(P <0.05)；但是骨桥蛋白基因中差异无显著性意义(P >0.05)。体外实验结果显示联合转染组中的Ⅰ型胶原蛋白、骨钙蛋白、骨桥蛋白等非特异性成骨基因mRNA水平相对表达量较多，该组细胞的成骨功能强，适合作为组织工程骨的种子细胞。

大鼠骨髓间充质干细胞重建表皮细胞及皮肤附件

背景：研究报道用烧伤大鼠血清作为诱导剂可以诱导间充质干细胞分化为表皮细胞。
　　目的：体外诱导骨髓间充质干细胞分化为表皮细胞，单独或与必要的诱导剂组合移植修复皮肤创面缺损与重建表皮。
　　方法：无菌环境取大鼠骨髓，选取贴壁细胞用L-DMEM培养液培养至第4代，通过流式细胞术鉴定骨髓间充质干细胞。用含20%烧伤大鼠血清 DMEM-F12培养液诱导骨髓间充质干细胞分化成表皮细胞，通过免疫组织化学鉴定。将Wistar大鼠制造全层皮肤缺损创面，分为3组，将BrdU标记的自体骨髓间充质干细胞及含有经诱导的骨髓间充质干细胞分别单次涂布到烧伤大鼠模型创面上，以未移植骨髓间充质干细胞做对照，观察再生皮肤创面收缩率及表皮层细胞与皮肤附件再生情况。
　　结果与结论：分离、培养的骨髓间充质干细胞24 h后少部分细胞贴壁生长，形态长梭形，类似成纤维细胞，16 d时细胞贴满瓶底，呈鱼群样或网状排列，经流式细胞仪鉴定后加入20%烧伤大鼠血清的DMEM F-12培养基继续培养，细胞形态渐变为圆形或椭圆形细胞，经免疫组织细胞化学法和流式细胞术分析细胞角蛋白表达阳性，证实已分化为表皮细胞。动物实验结果表明无论是骨髓间充质干细胞单独移植还是与必要的诱导剂组合移植其皮肤的修复与再生情况均超过大鼠皮肤自然愈合，且不仅皮肤再生快，而且皮肤附件如毛囊等的再生也比对照组明显改善。初步推断间充质干细胞参与了表皮和皮肤附件毛囊的重建，从而改善皮肤愈合方式。

人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化中自噬相关基因Beclin-1的表达

背景：骨髓间充质干细胞具有自我更新和多向分化的潜能，但是经过长期体外培养后，骨髓间充质干细胞增殖分化能力逐渐丧失，其机制仍不明确。
　　目的：观察人骨髓间充质干细胞神经元样细胞分化过程中自噬相关基因表达的变化。
　　方法：利用表皮生长因子诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，观察其形态变化及生长情况。免疫细胞化学法检测神经元特异性烯醇化酶、胶质纤维酸性蛋白表达，采用Western blot检测诱导前后人骨髓间充质干细胞自噬相关基因Beclin-1表达的变化。
　　结果与结论：经诱导后，人骨髓间充质干细胞呈典型神经元样细胞分化，神经元特异性烯醇化酶阳性率为78.7%，胶质纤维酸性蛋白阳性率为8.1%。诱导0.5 h后处理组细胞中Beclin-1的表达水平有所增加，但1 h后开始逐渐降低。说明体外可以诱导人骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞，自噬相关基因表达活性在诱导分化早期呈高表达，分化过程中逐渐降低。

α-玉米赤霉醇影响小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景：骨髓间充质干细胞具有向成骨细胞分化的能力，植物雌激素α-玉米赤霉醇对小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化可能有促进作用。
　　目的：探讨α-玉米赤霉醇对小鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的影响。
　　方法：采用全骨髓培养差速贴壁法体外分离培养小鼠骨髓间充质干细胞，取第3代细胞分为6组：非诱导组加含体积分数为10%胎牛血清、1%双抗的 IMDM 普通培养基；空白诱导组仅加入等量成骨条件培养基(含0.1μmol/L 地塞米松、10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50μmol/L 维生素C)；阳性对照诱导组加入等量成骨条件培养基及10-8 mol/L雌二醇；高、中、低α-玉米赤霉醇组分别加入成骨条件培养基及10-5，10-6，10-7 mol/L梯度浓度的α-玉米赤霉醇。倒置显微镜下观察细胞形态变化，MTT 实验测定细胞增殖状态绘制细胞生长曲线，酶联免疫吸附法测定碱性磷酸酶、骨钙素的表达。
　　结果与结论：非诱导组细胞呈长梭形，生长密集时有接触抑制，各诱导组的细胞增殖受促进，诱导后细胞呈三角形、多角形、不规则形状，细胞可重叠生长；非诱导组低表达碱性磷酸酶、骨钙素，低浓度(10-7 mol/L)α-玉米赤霉醇组和阳性对照诱导组高表达碱性磷酸酶、骨钙素，与空白诱导组相比，差异有非常显著性意义(P<0.01)。结果说明α-玉米赤霉醇可以促进骨髓间充质干细胞的增殖，低浓度α-玉米赤霉醇可显著促进体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化。而上调碱性磷酸酶、骨钙素的表达量可能是α-玉米赤霉醇诱导促进骨髓间充质干细胞骨向分化的作用机制之一。

人骨髓来源细胞外基质对人牙周膜干细胞增殖的影响

背景：研究发现人来源的骨髓细胞外基质能促进人牙周膜干细胞增殖并保持干细胞的特性。目的：初步观察人骨髓来源的细胞外基质对人牙周膜干细胞增殖能力影响。
　　方法：分离人正常牙周膜细胞及颌骨骨髓细胞，制备骨髓细胞外基质膜片。采用有限稀释法克隆培养纯化人牙周膜干细胞，透射电镜观察细胞超微结构。取P2代人牙周膜干细胞与骨髓细胞来源细胞外基质共同培养，以普通培养基对照，采用CCK8法及细胞周期流式技术检测人骨髓细胞来源细胞外基质对人牙周膜干细胞增殖能力的影响。
　　结果与结论：实验组人牙周膜干细胞较对照组相比细胞增殖能力显著增强(P<0.05)，且细胞符合其生物学形态及生物学特性，生长状态良好。说明实验建立起的骨髓细胞外基质能够促进牙周膜干细胞的增殖，是一种扩增干细胞的有效方法。

Toll样受体1对间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用

背景：课题组前期研究表明间充质干细胞具有免疫调节Th17细胞的作用，但内在的调节机制尚待阐明，为此，针对Tol 样受体1在其中的作用进行探讨，为今后潜在的细胞治疗策略提供可能的实验依据。
　　目的：探讨Tol 样受体1对间充质干细胞免疫调节Th17细胞的作用。
　　方法：贴壁法分离人胚胎骨髓来源间充质干细胞，免疫磁珠法分离正常人CD4+T细胞。CD4+T细胞单独培养或与间充质干细胞共培养4 d。实时定量聚合酶链反应测定白细胞介素17、Tol 样受体1相关基因的表达水平；流式细胞仪检测Th17细胞的数量。
　　结果与结论：CD4+ T细胞及间充质干细胞均表达Tol 样受体1。相对于CD4+单独培养组，间充质干细胞共培养组(间充质干细胞+CD4)白细胞介素17明显升高(3.59±0.11，1.14±0.08，P<0.01)；进一步发现Tol 样受体1 mRNA表达水平亦相应升高(6.07±1.79，1.53±0.63，P <0.01)。流式细胞仪检测发现，共培养组(间充质干细胞+CD4)Th17细胞数量明显高于CD4+T细胞组[(4.53±1.27)%，(2.39±0.80)%，P<0.01)。研究结果表明Tol 样受体1可能参与间充质干细胞免疫调节人Th17细胞的作用。

围术期心血管危险因素对骨髓祖细胞的影响

背景：移植自体骨髓干细胞治疗缺血性心脏病已进行了10余年的临床试验，但试验结果在不同的患者中存在差异。因此，有必要鉴定哪些心血管病患者的危险因素影响骨髓干细胞的水平和功能。
　　目的：观察冠心病患者围术期危险因素对骨髓祖细胞数量及功能的影响。
　　方法：选择44例拟行冠状动脉旁路移植的冠心病患者，采集实验室和临床资料；术中经胸骨穿刺采集骨髓，应用 Ficol 淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞，计数并应用锥虫蓝拒染法检测其活性；应用流式细胞仪分析检测CD34+、CD133+和CD34+CD133+细胞的水平；应用集落形成试验和细胞迁移试验评价骨髓祖细胞功能。
　　结果与结论：术中经胸骨抽取20 mL骨髓可获得(10-89)×106个骨髓单个核细胞，活性在95%以上，等量的骨髓血获得的骨髓单个核细胞的量与患者年龄之间存在明显负相关关系(n=44，r=-0.788，P=0.001)；流式细胞仪检测 CD34+细胞占(0.94±0.39)%，CD133+细胞占(0.46±0.28)%，CD34+CD133+细胞占(0.53±0.26)%；糖尿病患者骨髓 CD34+和 CD133+细胞水平明显低于非糖尿病患者；高龄、女性和心功能较差与骨髓祖细胞集落形成能力降低有关；CD34+细胞水平与骨髓单个核细胞的迁移能力存在明显的正相关。结果表明经胸骨应用密度梯度离心法可获得足够数量的骨髓单个核细胞作为缺血性心脏病治疗的供体细胞，年龄、性别、糖尿病、心功能与骨髓单个核细胞数量和功能有关。

基质细胞衍生因子1对内源性神经干细胞的趋化迁移作用

背景：目前研究表明，基质细胞衍生因子1在参与趋化迁移内源性神经干细胞中起着非常重要的作用，但其具体迁移机制尚不明确。
　　目的：观察外源性基质细胞衍生因子1对大鼠内源性神经干细胞的趋化迁移作用及海马区神经干细胞的激活增殖情况。
　　方法：通过向SD大鼠海马区上大脑皮质内注射外源性基质细胞衍生因子1(注射量为5μL，质量浓度为500μg/L)建立动物模型，于3，7，14，21 d后灌注取脑，通过石蜡切片免疫组织化学检测大鼠皮质内注射区及海马区nestin阳性细胞表达情况，并设实验对照组与空白对照组。
　　结果与结论：石蜡切片免疫组织化学显示：实验组注射区周围及海马区nestin表达阳性细胞的数量随时间推移逐渐增多，3，7 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞少量表达，14 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞进一步增多，并向注射区形成明显的迁移趋势，21 d时注射区及海马区nestin表达阳性细胞更多。实验对照组及空白实验组未见上述表现。结果表明外源性基质细胞衍生因子1可能诱导海马区神经干细胞的增殖分化，参与内源性神经干细胞的趋化迁移过程。

人羊膜间充质干细胞分离培养：胰蛋白酶及胶原酶消化时间及浓度的选择

背景：文献报道人羊膜间充质干细胞提取方法各不一致，得到的细胞数量各不相同。目的：探索人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的适方法。
　　方法：无菌条件下取正常足月剖腹产胎儿的羊膜剪成碎片，分别通过4个实验7种方法体外培养人羊膜间充质干细胞。①实验一：分别采用3种方法：0.05 g/L胰蛋白酶消化10 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min；0.75 g/L胶原酶Ⅰ直接消化120 min；0.05 g/L胰蛋白酶与0.75 g/L胶原酶Ⅰ同时消化60 min。②实验二：采用0.05 g/L的胰蛋白酶消化30 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化30 min。③实验三：分别采用2种方法：0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后，再加入0.75 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min；0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化40 min后，再加0.75 g/L胶原酶Ⅰ消化60 min。④实验四：采用0.05 g/L的胰蛋白酶连续2次消化30 min后，再加1 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60 min。显微镜下观察其形态，研究人羊膜间充质干细胞在体外分离培养的适方法。
　　结果与结论：用0.05 g/L的胰蛋白酶连续消化2次每次消化30 min，然后用1 g/L的胶原酶消化60 min是合适的体外分离培养条件。细胞成细长梭形或星形，胞质丰富，细胞核呈圆形，1-3个核仁。说明实验四采用的胰酶和胶原酶消化的时间合适，而且胶原酶的浓度合适，得到的细胞数量多。

大肠癌干细胞基因Bmi-1表达与大肠肿瘤组织病理特征的关系

背景：大肠癌干细胞基因Bmi-1(B-cel-specific moloney murineleukemia virus insertion site)在调节人端粒反转录酶的转录状态和活性情况，对细胞的衰老、癌变具有重要意义。
　　目的：观察大肠癌干细胞基因Bmi-1的表达及其与肿瘤组织病理学变化之间的关系。
　　方法：采用实时荧光定量PCR技术对50例大肠癌患者肿瘤组织中Bmi-1 mRNA的表达情况进行检测，采用苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色染色SP法测定患者肿瘤组织中Bmi-1蛋白的表达。
　　结果与结论：大肠癌患者的性别、年龄、肿瘤直径对肿瘤组织中大肠癌干细胞Bmi-1 mRNA的表达差异无显著性意义。在不同性别、年龄、肿瘤直径和Duke分期的大肠癌患者肿瘤组织中大肠癌干细胞Bmi-1蛋白表达差异无显著性意义。肿瘤淋巴结转移和浸润深度超过浆膜层的大肠癌患者Bmi-1 mRNA和蛋白的表达明显高于无转移和浸润深度较低的患者(P<0.05)。大肠癌Duke分期较高的患者体内大肠癌干细胞Bmi-1 mRNA的表达也较高(P<0.05)。结果证实，大肠癌干细胞基因Bmi-1的表达与大肠癌的转移、浸润及Duke分期的病理特征密切相关。

Balb/c裸鼠体内的干细胞致瘤实验

背景：干细胞致瘤性研究是临床应用干细胞安全性所面临的实际问题。因此明确干细胞是否具有致瘤性尤为重要。裸鼠在肿瘤学、免疫学、药品及生物制品的安全性评价领域占据愈来愈重要的地位。
　　目的：将神经干细胞、间充质干细胞移植在Balb/c免疫缺陷裸鼠皮下，检测其是否具有致瘤性。
　　方法：将免疫缺陷Balb/c裸鼠随机分为5组，除空白组外，阳性对照组、阴性对照组、神经干细胞组和间充质干细胞组分别将肝癌细胞HepG2、人视网膜色素上皮细胞、传代至第4代的神经干细胞和间充质干细胞接种于裸鼠皮下，于注射后12周进行解剖检查，观察裸鼠移植部位肿瘤形成情况。同时进行软琼脂克隆形成实验，考察神经干细胞和间充质干细胞在体外软琼脂克隆形成情况。
　　结果与结论：裸鼠致瘤性实验结果显示，空白组、阴性对照组、神经干细胞组、间充质干细胞组在接种12周后，未在裸鼠注射部位形成肿瘤，病理组织学检查未见异常。软琼脂克隆形成实验结果显示，神经干细胞和间充质干细胞在软琼脂阻力介质中未表现出细胞形成克隆的能力。提示短期传代后的神经干细胞、间充质干细胞不具有致瘤性。

脂肪干细胞的三维球形培养

背景：大多哺乳类细胞在正常生理状态下多以三维结构存在，为还原细胞本身在体内的自然状态，很多研究者开始尝试在体外对细胞进行三维培养，球形培养是一种常见的三维培养模式。
　　目的：尝试用3种不同的方法在体外对人脂肪干细胞进行球形培养，并观察其生物学特征。
　　方法：对提取的脂肪来源细胞进行表面 Marker 流式检测以及成脂成骨诱导鉴定后，证实为脂肪干细胞。先后用低黏附培养法、hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法3种方法在体外对脂肪干细胞进行球形培养，对3种方法形成球形的特点进行比较分析，并通过 Imagej 软件计算出3组多细胞球体的平均面积，利用Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live&Dead Cel s试剂盒对3组多细胞球体进行活力检测。
　　结果与结论：①通过流式细胞术鉴定细胞表型标志物，其中CD29，CD44，CD59完全阳性，同时成脂成骨诱导也为阳性，证实提取的细胞为脂肪干细胞。3代以内脂肪干细胞多呈长梭形，并克隆状生长。②低黏附培养法、hanging-drop 培养法、Eppendorf 管培养法均可使脂肪干细胞聚集成球形生长，但所成多细胞球形有所差异。低黏附培养法所形成的细胞球形大小不一，不易控制；而hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法均可使脂肪干细胞形成大小均一的球形，但在大小和形成时间上有所不同。③3种不同方法所形成的球形细胞均保持较好的细胞活力。

人心包外脂肪干细胞诱导转化为心肌细胞

背景：成体干细胞具有自我更新和分化为多种组织的能力，是组织工程学的重要组成部分。近来研究表明吸脂后人脂肪源性干细胞具有间充质干细胞的特点，能体外诱导分化为心肌细胞，但尚无对人心包外脂肪干细胞特点及诱导分化为心肌细胞的报道。
　　目的：探讨人心包外脂肪干细胞体外培养及向心肌诱导分化的时期。
　　方法：取人心包外脂肪组织，体外分离培养传代后，细胞免疫学检测不同时期细胞表面特异性抗原 CD44， CD90的表达，并比较荧光强度，选择佳诱导时期利用心肌培养基诱导培养后，免疫细胞化学检测心肌特异性抗α-actin、cTnT的表达，进行表型鉴定。
　　结果与结论：人心包外脂肪干细胞体外培养过程中贴壁生长，增殖能力强，形态呈长梭形，旋涡状排列；其表面标记物CD44，CD90表达阳性，并在3、4代细胞中荧光强度达峰值，CD34，CD45表达阴性。经心肌诱导培养基体外诱导培养后，分化的细胞大多呈肌细胞样，细胞免疫化学检测证实心肌特异性抗α-actin、cTnT表达阳性，且在3、4代细胞数量达峰值，结果表明人心包外脂肪干细胞具有间充质干细胞的形态特征及细胞免疫学特征，能体外诱导分化为心肌细胞，存在佳诱导时期。

CJTER杂志对骨科植入物稿件提出的标准与要求

按照我国卫生行业的标准定义，骨科植入物就是在骨科手术过程中放置于疾病所造成的或者人体生理存在的体腔中，留存时间超过30 d，起到替代、修复、补充及充填人体骨骼，或用于人体骨骼的维持、支撑和修补作用的可植入型物品。
　　目前，在临床应用的骨科植入物主要有骨科内外固定器，如骨接合植入物（主要有接骨板、接骨螺钉、髓内针、矫形棒、矫形钉、带锁髓内针、脊柱内固定植入物等）和骨关节植入物（主要有人工髋关节、人工膝关节、人工肘关节等）。

持续Wnt信号通路激活促进胚胎干细胞源造血干细胞的增殖

背景：如何提高胚胎干细胞诱导效率、促进胚胎干细胞源造血干细胞体外增殖成为目前急需解决的课题。
　　目的：以外源性Wnt3a作为诱导剂，激活培养中的小鼠胚胎干细胞Wnt/β-catenin信号通路，观察该通路的激活是否促进胚胎干细胞向造血祖细胞的定向分化。
　　方法：用外源性wnt3a(100μg/L)持续作用ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞21 d，通过细胞免疫荧光及蛋白免疫印迹检测细胞内β-catenin蛋白含量，QRT-PCR检测Wnt下游靶标基因的表达量来确定经典Wnt/β-catenin信号通路是否被激活，然后采用单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化，流式细胞仪检测造血发育相关表面标志CD34+/Sca-1+，同时以QRT-PCR法检测造血相关基因的表达情况。
　　结果与结论：ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞经wnt3a(100μg/L)连续培养21 d后发现β-catenin蛋白在细胞内积累；Wnt信号通路的下游靶标基因Pitx2、Frizzled、Sox17、Oct4的表达量均出现不同程度的增加，可见经典 Wnt/β-catenin 信号通路有被激活；单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化的过程中检测到CD34+/Sca-1+细胞含量在14 d时占总细胞量高达20.2%，而对照组的仅占11.9%。造血相关基因骨形态发生蛋白4、FLK2及CD34的表达量均增加，而Smad5的表达则明显受到抑制。说明Wnt3a持续作用可激活Wnt/β-catenin信号通路，并促进ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞向造血干细胞的定向分化。

《中国组织工程研究》杂志2014年稿约