中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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应用荧光原位杂交技术动态监测化疗与干细胞移植后白血病患者的染色体变化
背景:荧光原位杂交技术被广泛应用于白血病异常基因的检测中,但对于应用此项技术比较化疗与移植后疗效的研究尚未见大量报道.目的:评价荧光原位杂交技术对化疗与移植后白血病患者的监测效果.方法:新疆医科大学第一附属医院血液二科2009-10/2010-10收治的白血病患者44例,收集标本85份.按照各自采取的主要治疗方案,分为治疗前组,普通化疗组,特殊药物治疗组和造血干细胞移植组.特殊药物治疗组包括全反式维甲酸治疗和甲磺酸伊马替尼治疗患者.结果与结论:荧光原位杂交技术在诊断与监测白血病微小残留病灶方面较染色体核型分析更为精确;荧光原位杂交结果显示特殊药物治疗组与造血干细胞移植组阳性细胞百分数均明显低于治疗前组和普通化疗组(P<0.01),但特殊药物治疗组与造血干细胞移植组间差异无显著性意义(P > 0.05);急性移植物抗宿主病发生与移植后1个月荧光原位杂交结果不具有相关性(P > 0.05);移植后1个月、1~6个月、6个月以上荧光原位杂交检测结果差异无显著性意义(P > 0.05).提示荧光原位杂交技术可以准确而有效的动态检测移植后患者的染色体变化情况,评价患者疾病发展趋势.
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嗅鞘细胞移植脊髓损伤大鼠Sema3A及其受体NP-1基因的表达
背景:嗅鞘细胞移植促进脊髓损伤修复机制中对神经生长抑制导向因子的研究较少.目的:观察嗅鞘细胞移植对脊髓半横断损伤后神经生长抑制导向因子Sema3A及其受体NP-1在RNA水平表达的变化.方法:17只SD大鼠随机分为嗅鞘细胞移植组、DMEM/F12 培养液移植组和正常对照组.制作T11~T12水平大鼠脊髓左侧半横断损伤模型,立刻分别注射嗅鞘细胞悬液或等量的DMEM/F12 培养液.结果与结论:6周后取横断水平前后两个脊髓节段,用RT-PCR的方法对Sema3A、NP-1的mRNA进行半定量分析.①嗅鞘细胞在大鼠脊髓内仍有大量存活.②Sema3A及NP-1 mRNA的量,DMEM/F12 培养液移植组明显多于正常对照组(P<0.05),嗅鞘细胞移植组与培养液移植组比较明显下调,且与正常对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05).③提示嗅鞘细胞移植有效减少了神经生长抑制导向因子Sema3A及其受体NP-1 mRNA的表达.
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人参皂苷Rg1干预骨髓间充质干细胞转化为多潜能干细胞关键基因mRNA的表达
背景:将成体细胞重编程为诱导多潜能干细胞方案主要通过反转录病毒将Oct-4,Sox2,c-Myc,Klf4等基因转入成体细胞而实现.目的:观察人参皂苷Rg1作用于骨髓间充质干细胞后,对成体细胞向诱导多潜能干细胞转化的关键性基因Oct4、Sox2、c-Myc、Klf4、Nanog mRNA表达的影响.方法:培养骨髓间充质干细胞,对照组培养基为α-MEM,体积分数5%FBS,1%双抗;用药组培养基为α-MEM,体积分数15%FBS,1 000 U/mL Rat ESGRO(R),1%双抗,并加入6.25 μmol/L和12.5 μmol/L人参皂苷Rg1.检测骨髓间充质干细胞Oct4,Sox2,c-Myc,Klf4,Nanog等mRNA的表达.结果与结论:人参皂苷Rg1 6.25 μmol/L培养30 d,Nanog、c-Myc、Oct、Klf4、Sox2 mRNA表达均有升高,且Nanog、c-Myc与对照组差异有显著性意义.人参皂苷Rg1能促进骨髓间充质干细胞表达c-Myc,Nanog,但Nanog阳性的诱导多潜能干细胞在基因表达谱上很难与胚胎干细胞区分出来,提示人参皂苷Rg1对骨髓间充质干细胞向诱导多潜能干细胞转化可能具有促进作用.
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骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤的旁分泌机制
背景:骨髓间充质干细胞已用于肾缺血再灌注损伤修复的实验动物研究.目的:探讨骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤的旁分泌机制.方法:体外培养、纯化并体外DAPI标记大鼠骨髓间充质干细胞,经下腔静脉移植入肾缺血再灌注损伤模型大鼠体内,观察骨髓间充质干细胞对肾缺血再灌注损伤肾功能的保护作用以及在受体鼠体内的迁移情况,并应用免疫组织化学法检测骨髓间充质干细胞治疗后第2天缺血肾脏组织中血管内皮生长因子、肿瘤坏死因子α细胞因子的表达.结果与结论:与注射生理盐水的对照组比较,细胞移植组大鼠血清肌酐和尿素氮水平在移植后第1、2天明显降低(P<0.05),但细胞移植组移植后第1、2天肾组织中均未见DAPI阳性细胞;第3、4天则逐渐可见DAPI阳性细胞.免疫组织化学染色结果显示,与对照组相比,移植后第2天肾组织中可见较多血管内皮生长因子阳性细胞,而肾组织中肿瘤坏死因子α阳性细胞明显减少.结果显示旁分泌机制参与了骨髓间充质干细胞治疗肾缺血再灌注损伤.
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体外高浓度葡萄糖培养及黄芪干预人外周血内皮祖细胞的数量和增殖与分化
背景:内皮祖细胞数量及功能受损是糖尿病血管并发症发生发展的重要环节,黄芪对多种原因引起内皮功能障碍具有保护作用,可以有效保护血管内皮功能.目的:观察高浓度葡萄糖及黄芪干预对人外周血内皮祖细胞数量、增殖及分化影响.方法:不同浓度葡萄糖孵育内皮祖细胞24 h以及30 mmol/L葡萄糖孵育内皮祖细胞不同时间;内皮祖细胞经20 g/L黄芪预处理24 h后,再加入30 mmol/L葡萄糖培养24 h.结果与结论:高葡萄糖以浓度及时间依赖方式减少内皮祖细胞的数量,降低内皮祖细胞的增殖及向内皮细胞系分化能力(P<0.05或0.01),给予黄芪预处理后,内皮祖细胞数量明显增加,增殖及向内皮细胞系分化能力明显增强(P<0.05或0.01).提示高葡萄糖以浓度及时间依赖方式减少外周血内皮祖细胞数量,降低内皮祖细胞的增殖及向内皮细胞系分化能力,黄芪可以改善高葡萄糖对内皮祖细胞的损伤作用.
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骨髓间充质干细胞移植大鼠脑缺血区微血管密度和肝细胞生长因子的表达
背景:应用骨髓间充质干细胞移植治疗脑缺血可促进损伤神经功能的恢复,目前其作用机制尚未明确.目的:分析骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血保护作用的机制.方法:采用线栓法复制大鼠大脑中动脉栓塞模型,随机分为假手术组、大脑中动脉栓塞组、溶剂对照组和骨髓间充质干细胞组.骨髓间充质干细胞组于脑梗死1 d后经侧脑室注射入骨髓间充质干细胞,溶剂对照组则注射同等剂量的PBS.结果与结论:大鼠脑缺血后缺血区皮质可见大量的微血管生成,2周达高峰.骨髓间充质干细胞组缺血区微血管密度显著高于大脑中动脉栓塞组和溶剂对照组(P<0.01).治疗后4,7,14 d骨髓间充质干细胞组脑组织中肝细胞生长因子的表达水平显著高于大脑中动脉栓塞组和溶剂对照组(P<0.01).提示骨髓间充质干细胞移植可促进大鼠缺血区微血管生成,改善缺血区血运,从而改善脑缺血大鼠的神经功能.
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骨碎补总黄酮可促进兔骨髓间充质干细胞的增殖和分化
背景:骨碎补促进骨损伤愈合疗效确切,但具体作用机制尚不清楚.目的:观察骨碎补总黄酮对兔骨髓间充质干细胞增殖、分化的影响.方法:冲洗兔股骨和胫骨骨髓腔获取骨髓,采用密度梯度离心法联合贴壁培养法体外纯化扩增兔骨髓间充质干细胞;以四甲基偶氮唑蓝法测定不同浓度骨碎总黄酮对兔骨髓间充质干细胞增殖的影响;经骨碎补总黄酮体外诱导后,行扫描电镜形态学观察,碱性磷酸酶染色、茜素红染色和Von Kossa银染色了解细胞钙化情况.结果与结论:兔骨髓间充质干细胞可以通过密度梯度离心法联合贴壁培养法扩增和纯化;含骨碎补总黄酮血清培养后,四甲基偶氮唑蓝测定结果显示,骨碎补总黄酮浓度为10-6 mmol/L时可明显促进兔骨髓间充质干细胞增殖.经骨碎补总黄酮诱导液诱导,扫描电镜下可见成骨细胞样形态和钙结节形成;细胞碱性磷酸酶染色、钙结节茜素红染色和Von Kossa银染色均呈阳性,提示骨碎补总黄酮可促进兔骨髓间充质干细胞增殖和分化.
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脐血间充质干细胞静脉移植治疗新生鼠脑血肿继发脑水肿
背景:脐血间充质干细胞移植治疗新生动物脑血肿继发脑水肿的研究少见报道.目的:探讨脐血间充质干细胞静脉移植治疗新生鼠实验性脑血肿继发脑水肿的可行性.方法:健康新生7 d SD大鼠分为未进行干预的空白对照组、仅制作脑出血模型的脑血肿对照组和制作脑出血模型后给予脐血间充质干细胞治疗的移植组.3组大鼠均于移植后1周处死,提取脑组织进行指标检测.结果与结论:脑血肿形成后,脑系数和脑组织含水量均明显增加,脐血间充质干细胞移植组明显小于脑血肿对照组(P<0.01),与空白对照组比较差异无显著性意义(P > 0.05).移植1周后,各组鼠死亡率无显著差异,均未见植入反应和其他任何负作用.提示,脐血间充质干细胞静脉移植治疗能有效减轻实验性脑血肿继发的脑水肿,对其具有明显的保护作用.其机制可能与脐血间充质干细胞能有效地透过血脑屏障,在病灶脑组织周围迁移、扩散、整合,从而在病灶脑组织存在并分泌大量保护性细胞因子有关.
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骨髓单个核细胞移植结合髓芯减压治疗早期股骨头坏死的三维步态分析
背景:步态分析是骨外科检查中较为客观、精确的定量评定标准.目的:观察骨髓单个核细胞移植结合髓芯减压治疗早期股骨头缺血性坏死患者步态运动学的特点及变化规律.方法:对髓芯减压骨髓单个核细胞回植21例早期股骨头坏死患者行三维运动捕捉步态分析,于治疗前及治疗后3,6,9,12个月测量受试者在0°和15°时运动平板上行走的步长、步宽时空参数,髋关节运动角度、髋关节角加速度运动学数据.同期采集33名健康人步态数据与之比较.结果与结论:21例患者治疗后3个月均出现减痛步态,治疗后3个月0°运动平板的时空参数与正常人比较差别无显著性意义,治疗后6个月15°倾斜运动平板的时空参数与正常人比较差别无显著性意义,治疗后9个月15°倾斜运动平板的运动学指标与正常人比较差别无显著性意义.显示骨髓单个核细胞治疗股骨头坏死能够恢复髋关节正常的步态模式,并表现出一种时间相关趋势.
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羌活鱼含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化的影响
背景:羌活鱼具有促进骨折愈合的作用,但其具体的作用机制和其有效成分的研究目前尚不清楚.目的:观察不同浓度羌活鱼含药血清对体外培养大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.方法:以羌活鱼研粉剂灌服大鼠制得羌活鱼含药血清,灌服等体积生理盐水制得对照血清;采用贴壁筛选法培养大鼠骨髓间充质干细胞,并以不同浓度(2.5%,5%,7.5%,10%)羌活鱼含药血清干预第3代大鼠骨髓间充质干细胞,通过MTT法检测细胞增殖情况;分别测定细胞碱性磷酸酶活性、钙盐沉积量、骨钙素、Ι型胶原表达量以及钙化结节数.结果与结论:5%和7.5%浓度含药血清可促进细胞增殖、成骨性分化,尤以5%含药血清为明显,其碱性磷酸酶活性、钙盐沉积量、Ι型胶原含量、骨钙素含量和钙化结节数均显著高于空白对照组(P<0.01).羌活鱼经口服后的代谢产物可刺激大鼠骨髓间充质干细胞增殖,并能促进其成骨性分化,推测其可能是羌活鱼续断接骨的作用机制之一.
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融合蛋白AML1-ETO对C/EBPα基因表达的影
背景:已有研究显示AML1-ETO可以通过包括抑制C/EBPα的功能在内的机制引起分化的阻滞.目的:观察AML1-ETO对髓系分化相关基因C/EBPα表达的影响,探讨其在白血病发生中的作用.方法:应用流式细胞术检测急性单核细胞白血病细胞株U937、U937-MOCK和U937-A/E1细胞表面抗原CD11b、CD14 的表达;荧光实时定量PCR检测C/EBPα mRNA的表达;免疫印迹法检测C/EBPα蛋白的表达;染色质免疫沉淀技术研究转染细胞中AML1-ETO与C/EBPα基因启动子之间直接的相互作用情况.结果与结论:AML1-ETO转染细胞的细胞表面分化抗原CD11b 和CD14的表达明显下降,且转染了AML1-ETO的U937细胞系中,C/EBPα的mRNA与蛋白水平均下调,转染细胞沉淀富集的DNA中含有C/EBPα基因的启动子序列.结果提示C/EBPα是AML1-ETO 的直接靶基因,AML1-ETO能下调C/EBPα的表达.
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胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的免疫调节
背景:众多研究表明间充质干细胞能发挥免疫调节功能,抑制T细胞增殖.目的:观察胚胎骨髓来源间充质干细胞对人Th17细胞的调节作用.方法:将人胚胎骨髓间充质干细胞与正常人外周血单个核细胞或CD4+ T细胞以1∶10比例共培养4 d,以单个核细胞或CD4+T细胞单独培养为对照.应用实时定量PCR检测细胞白细胞介素17 mRNA表达,酶联免疫吸附试验检测细胞上清中白细胞介素17蛋白水平,流式细胞术检测Th17细胞数量.结果与结论:胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞共培养组白细胞介素17 mRNA表达水平明显高于单个核细胞组(P<0.01).与此一致的是,胚胎骨髓来源间充质干细胞与单个核细胞或CD4+T细胞共培养组细胞上清中白细胞介素17蛋白水平明显高于单个核细胞组、CD4+ T细胞组(P<0.05,P<0.01).胚胎骨髓来源间充质干细胞与CD4+ T细胞共培养组Th17细胞数量明显高于CD4+ T细胞组(P<0.01),但胚胎骨髓来源间充质干细胞本身并不表达白细胞介素17.表明胚胎骨髓来源间充质干细胞可促进人Th17细胞增殖.
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引产儿与正常成人骨髓间充质干细胞的比较
背景:骨髓间充质干细胞是多能干细胞,同时可参与免疫调节反应,而成人及引产胎儿骨髓均是间充质干细胞的重要来源.目的:通过引产儿与正常成人骨髓间充质干细胞的细胞形态、免疫表型、增殖活性及分泌细胞因子的比较,揭示二者生物学特点的差异.方法:采用密度梯度离心法分离引产儿与正常成人骨髓单个核细胞,通过贴壁法培养骨髓间充质干细胞,收集传3代后的骨髓间充质干细胞,流式细胞术鉴定其免疫表型、MTT比色法检测其增殖活性以及用ELISA法检测细胞培养上清液中白细胞介素6、血小板源性生长因子和表皮生长因子的水平.结果与结论:引产儿组和正常成人组骨髓间充质干细胞形态相似、表型相同,分泌细胞因子水平无显著差异,但引产儿细胞增殖活性显著高于正常成人.提示引产儿与正常成人骨髓间充质干细胞除增殖活性有差异外,其余生物学特点相似,引产儿可以为间充质干细胞研究提供新的骨髓来源.
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人脐带间充质干细胞体外分泌的伤口愈合相关因子
背景:目前对人脐带间充质干细胞培养上清液中伤口愈合相关因子定量检测研究的报道较少.目的:检测人脐带间充质干细胞培养上清中伤口愈合相关因子白细胞介素6,白细胞介素8,转化生长因子1,单核细胞趋化蛋白1,血管内皮生长因子,GM-CSF和TIMP-1的分泌水平.方法:以胎牛血清替代物CCS1107为培养基添加物培养人脐带间充质干细胞.将培养获得的P2代细胞以1.1×104/cm2的接种密度接种于直径100 mm无菌培养皿中,培养96 h后,收集上清液并对其中所含伤口愈合相关因子进行ELISA定量检测.结果与结论:10份不同个体间的因子分泌量差异无显著性意义,男女间表达量差异无显著性意义.高表达白细胞介素6,白细胞介素8,单核细胞趋化蛋白1和组织基质金属蛋白酶抑制剂1,其中单核细胞趋化蛋白1和组织基质金属蛋白酶抑制剂1的表达量高.结果证实,人脐带间充质干细胞培养上清液中含有大量伤口愈合相关因子.
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辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖分化的影响
背景:辛伐他汀对正常大鼠骨代谢及骨髓基质干细胞增殖分化影响的报道目前不多.目的:观察辛伐他汀体内给药对大鼠骨量和骨髓基质干细胞增殖、分化的影响,及其在此过程中Smad1,2,7 mRNA表达水平的变化.方法:16只6周龄雌性SD大鼠按体质量随机均分成2组,对照组每天灌胃蒸馏水,实验组灌胃辛伐他汀20 mg/(kg·d),持续9周.于后一次灌胃的第2天取左侧股骨行骨密度和骨组织形态计量学测定;取右侧股骨和胫骨骨髓基质细胞向成骨方向诱导培养,并采用CCK-8法检测定向成骨分化中的骨髓基质干细胞的增殖能力;细胞培养第16,28天检测碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色阳性细胞比;细胞培养第21天,提取总RNA,采用Real-time RT-PCR检测Smad1,2,7的mRNA表达.结果与结论:辛伐他汀体内给药干预9周后,大鼠骨量和骨密度无显著变化,体外培养骨髓基质干细胞所有检测基因mRNA水平、细胞增殖能力、细胞外基质矿化能力、碱性磷酸酶比活性、碱性磷酸酶染色阳性细胞比两组间差异均无显著性意义 (P > 0.05).结果显示20 mg/(kg·d)辛伐他汀体内给药9周对大鼠骨量及骨髓基质干细胞的增殖和分化及Smad1,2,7的表达无显著作用.
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神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞的分化及其机制探讨
背景:前期研究发现神经调节蛋白1早期干预能够诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化.目的:进一步观察神经调节蛋白1诱导小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化的途径.方法:分别观察胚胎干细胞自发与在神经调节蛋白1诱导情况下向心肌细胞的分化,RT-PCR检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌特异性早期转录因子GATA-4、Nkx2.5 mRNA的表达,细胞免疫组织化学检测胚胎干细胞自发与诱导分化下心肌肌钙蛋白T及磷酸化蛋白激酶B的表达,Western blot半定量分析自发与诱导分化下心肌细胞磷酸化蛋白激酶B的表达.结果与结论:神经调节蛋白1诱导心肌分化率显著高于自发心肌分化率.神经调节蛋白1呈剂量依赖性上调GATA-4、Nkx2.5 mRNA表达;表皮生长因子样受体拮抗剂及磷脂酰肌醇-3激酶抑制剂阻断了神经调节蛋白1对Nkx2.5 mRNA的表达上调作用.Western blot分析显示神经调节蛋白1诱导组拟胚体中自发性搏动心肌细胞团磷酸化蛋白激酶B的相对表达高于自发心肌分化组.提示神经调节蛋白1可能通过磷脂酰肌醇3激酶/磷酸化蛋白激酶B信号通路诱导胚胎干细胞向心肌细胞分化.
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DNA去甲基化对大鼠骨髓间充质干细胞增殖细胞核抗原的调节
背景:DNA去甲基化是一种重要的表观遗传修饰.目的:观察DNA去甲基化对骨髓间充质干细胞增殖及增殖细胞核抗原蛋白表达的影响.方法:全骨髓贴壁培养法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,免疫组化法鉴定骨髓间充质干细胞CD44和CD45蛋白的表达,MTT法检测5-杂氮胞苷对骨髓间充质干细胞增殖的影响,免疫组化法检测5-杂氮胞苷对骨髓间充质干细胞增殖细胞核抗原蛋白表达的影响.结果与结论:①第3代骨髓间充质干细胞不表达或低表达CD45,高表达CD44.②与未加入5-杂氮胞苷组比较,5-杂氮胞苷干预48 h,6,12,24 μmol/L组显著促进细胞增殖活性(P<0.05),无浓度依赖性.③与未加入5-杂氮胞苷组比较,5-杂氮胞苷干预48 h,6,12,24 μmol/L 组增殖细胞核抗原蛋白积分吸光度值显著增加 (P<0.05),组间差异无显著性意义.结果显示在一定浓度范围内,5-杂氮胞苷发挥去甲基化作用,激活增殖细胞核抗原蛋白表达,从而促进骨髓间充质干细胞增殖.
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脐带间充质干细胞移植治疗终末期肝硬化的疗效及安全性
背景:骨髓间充质干细胞移植已应用于治疗终末期肝病并取得一定疗效.目的:观察脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化患者的疗效及安全性.方法:无菌条件下分离培养脐带间充质干细胞,选择60例肝硬化患者,在内科治疗基础上经肝动脉插管进行脐带间充质干细胞移植.结果与结论:移植2,4,8,12周后,患者血清白蛋白、前白蛋白水平逐渐升高(P<0.05),总胆红素、凝血酶原时间明显低于治疗前水平(P<0.05).移植后患者乏力、腹胀、纳差明显好转,未发生与移植相关的严重并发症.说明脐带间充质干细胞治疗终末期肝硬化安全有效,能改善患者的肝功能、凝血功能及临床症状.
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骨形态发生蛋白2对14d胎鼠端脑神经干细胞分化为胆碱能神经元的影响
背景:骨形态发生蛋白2可能是参与胆碱能神经元前体细胞分化的细胞外调控因子.目的:观察骨形态发生蛋白2在孕14 d胎鼠端脑神经干细胞诱导成胆碱能神经元过程中的作用.方法:取孕14 d胎鼠端脑,用含EDTA的胰酶和Ⅰ型胶原酶消化,无血清培养基培养细胞,种植于涂有多聚赖氨酸的培养板,细胞原代培养24 h后半量换液,加入10 μg/L骨形态发生蛋白2继续培养.结果与结论:胶原酶消化得到的神经干细胞呈单层贴壁生长;Nestin免疫荧光鉴定细胞为阳性,获取的神经干细胞纯度大于99%;ChAT免疫荧光鉴定骨形态发生蛋白2可以将孕14 d胎鼠端脑神经干细胞诱导成胆碱能神经元,细胞纯度大于97%.
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全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞及其生物学特性
背景:培养出生长状态良好、数量足够多的大鼠骨髓间充质干细胞是其作为种子细胞在组织工程等领域广泛应用的重要前提.目的:寻求快捷有效的大鼠骨髓间充质干细胞体外培养条件,观察培养的间充质干细胞生物学特性.方法:全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,贴壁筛选法进行纯化,倒置相差显微镜下观察细胞形态及生长特征,免疫荧光分析细胞骨架,MTT法绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测其表面标记.结果与结论:分离培养的细胞呈长梭形或多边形;细胞生长曲线呈S形;微丝免疫荧光染色结果显示,培养的骨髓间充质干细胞具有良好的细胞骨架系统.第3代骨髓间充质干细胞CD29、CD44、CD71、CD90均呈阳性表达,而CD13、CD34、CD45、CD133呈阴性.提示,经全骨髓贴壁法体外分离培养的细胞在形态学和细胞表面标志物表达方面具有干细胞生物学特性,经鉴定为骨髓间充质干细胞,其第3代活性佳,可用于后续实验.
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脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞的体外分化能力
背景:脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞具有很多相似的生物学特性.目的:比较脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞与受损PC12细胞分别共培养后定向分化能力的差异.方法:分别分离培养脂肪组织来源和骨髓组织来源的基质干细胞,取第5代细胞进行实验,2种细胞分别与正常或受损PC12细胞培养上清液共培养,或仅单独培养.结果与结论:脂肪基质干细胞和骨髓基质干细胞均表达较高水平的CD44和CD29,而后者表达的CD45、CD56在前者几乎未检测到.单独培养的2种细胞均表达较高水平的Nanog、Oct4、Sox2,不表达神经元特异性烯醇酶.其中经受损PC12细胞干预的2种细胞Nanog、Oct4、Sox2表达水平显著降低,而脂肪基质干细胞中神经元特异性烯醇酶阳性细胞数更多,提示受损PC12细胞对于脂肪基质干细胞可能具有更强的诱导分化作用.
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依达拉奉对脑缺血大鼠内源性神经干细胞的影响
背景:依达拉奉 (MCI-186)是一种新型自由基清除剂,已证实其能减轻急性脑梗死后的脑组织水肿、具有神经保护作用.目的:探讨自由基清除剂MCI-186对大鼠缺血脑组织内源性神经干细胞的作用.方法:Longa法构建SD大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型,分两组在动脉阻塞后立即开始予MCI-186或磷酸盐缓冲液治疗,在术后1,3 d和7 d,动态测定缺血周边脑组织丙二醛的含量以及脑源性神经生长因子蛋白和mRNA的表达,以及缺血脑区域Nestin阳性细胞Caspase-3阳性细胞表达,同时进行神经功能测定.结果与结论:与假手术组相比,磷酸盐缓冲液组脑组织丙二醛水平明显升高,MCI-186治疗后明显降低(P均< 0.01);磷酸盐缓冲液组缺血后1 d,MCI-186组缺血后1,3 d脑源性神经生长因子 mRNA和蛋白的表达明显升高(P<0.01).缺血后 3 d和7 d MCI-186组Nestin阳性细胞明显高于磷酸盐缓冲液组(P<0.05),Caspase-3阳性细胞显著低于磷酸盐缓冲液组 (P<0.05).缺血后7 d MCI-186组神经功能明显优于磷酸盐缓冲液组.结果提示,MCI-186能抑制脂质过氧化,增加缺血脑组织的脑源性神经生长因子分泌,保护神经干细胞,减少细胞凋亡.
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诱导人眼轮匝肌来源肌源干细胞向许旺细胞样细胞的分化
背景:肌源干细胞的优越性引导学者们尝试从人眼轮匝肌中分离该细胞,同时进行许旺细胞方向的诱导分化,为周围神经的修复提供新的种子细胞来源.目的:诱导人肌源干细胞向具有许旺细胞特性的细胞分化.方法:①收集重睑成形术中切除的上睑眼轮匝肌,经酶消化和细胞筛过滤,贴壁培养分离人肌源干细胞,予细胞特异标记物以免疫组织化学染色.②取大鼠坐骨神经分离培养许旺细胞,收集许旺细胞条件培养液.③将人肌源干细胞与许旺细胞条件培养液共培养,观察转化细胞的形态和免疫组织化学染色的变化.结果与结论:①原代培养4周时可见人肌源干细胞,与传代培养之人肌源干细胞同样呈现明显的小圆形形态,折光性强,少量细胞呈现短梭形.所有人肌源干细胞表现为Desmin阳性,Sca-1染色阳性.②分离培养大鼠坐骨神经来源许旺细胞,S100染色阳性率为(97.4±0.7)%.③经与许旺细胞条件培养液共培养,人肌源干细胞分化后细胞表达许旺细胞特异标记物S100,GFAP和p75.结果提示分离获得人肌源干细胞与许旺细胞条件培养液共培养,可以诱导人肌源干细胞表达许旺细胞特异标记物,初步证实了人肌源干细胞可分化为许旺细胞样细胞.
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大鼠骨髓间充质干细胞成骨诱导分化的超微结构变化
背景:目前对骨髓间充质干细胞成骨诱导分化的超微结构观察的报道甚少.目的:采用全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,成骨诱导并染色鉴定,利用电镜观察诱导前后细胞超微结构变化特点.方法:全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标记物,成骨染色鉴定向成骨方向诱导分化,扫描电镜及透射电镜观察成骨诱导前后细胞超微结构变化.结果与结论:培养的第3代骨髓间充质干细胞纯度高、活力强,成骨诱导后的碱性磷酸酶活性染色、钙化结节染色均呈阳性.扫描电镜及透射电镜观察显示,经向成骨细胞诱导分化后,细胞形态铺展,不规则,其线粒体、粗面内质网、空泡明显增多,表明细胞功能活跃.
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胎儿真皮间充质干细胞中的全能性相关转录因子的表达
背景:人真皮纤维母细胞或间充质干细胞可形成诱导性多能干细胞,但不同研究者所用的转录因子组合却并不相同.目的:分离人胎儿真皮间充质干细胞,检测其全能性相关转录因子的表达.方法:水囊引产5月龄胎儿,按照既往分离培养间充质干细胞的方法,得到胎儿真皮间充质干细胞.结果与结论:胎儿真皮间充质干细胞高表达Oct4和C-myc、中度表达Sox2,是形成诱导性多能干细胞较好的体细胞.
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骨形态发生蛋白9诱导骨骼肌源性干细胞的成骨分化
背景:已有实验报道部分骨形态发生蛋白能够诱导间充质干细胞等向成骨细胞的分化.目的:评估骨形态发生蛋白9定向诱导骨骼肌源性干细胞成骨分化的能力.方法:采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶二步消化法提取兔骨骼肌源性干细胞,用重组腺病毒的方法将骨形态发生蛋白9导入细胞,通过碱性磷酸酶定量测定、钙盐沉积实验观察骨形态发生蛋白9对于骨骼肌源性干细胞成骨分化的定向诱导作用.结果与结论:成功分离培养兔骨骼肌源性干细胞,免疫细胞化学染色80%以上的细胞呈Sca-1 阳性.骨形态发生蛋白9能诱导骨骼肌源性干细胞碱性磷酸酶的表达,且能够促进细胞的钙盐沉积.提示,骨形态发生蛋白9具有定向诱导骨骼肌源性干细胞分化成骨的能力.
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脂肪与骨髓来源间充质干细胞生物学特性的比较
背景:近几年来脂肪来源的间充质干细胞因其取材容易也被广泛研究.目的:比较脂肪来源和骨髓来源间充质干细胞的生物学特性.方法:分离及体外培养人骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞,比较它们的表型、细胞倍增时间及分泌因子水平等.结果与结论:脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞在细胞表型上类似,只有CD106的表达有差异.脂肪来源间充质干细胞增殖速率比骨髓来源的间充质干细胞快.在相同体积的脂肪组织中能够得到的干细胞前体细胞的数量是骨髓的10倍以上.提示脂肪来源和骨髓来源的间充质干细胞具有相同功能,但脂肪组织是一个更有应用前景的干细胞来源.
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人骨髓间充质干细胞分离培养方法的改进
背景:当前分离培养骨髓间充质干细胞方法的有多种,但在外科手术中进行获取的方法仍然较少,而外科分离所得细胞对于相应疾病的具有揭示原因和提供研究线索的价值.目的:在骨科手术中以直接贴壁差速贴壁分离培养纯化与鉴定骨髓间充质干细胞.方法:在骨科关节置换等大手术中吸取少量人骨髓血,采用直接贴壁法分离骨髓间充质干细胞,在贴壁后36~48 h行洗盘处理,并通过长期体外培养,特定培养基自身的筛选作用对细胞进行筛选,当细胞生长达到足量时进行鉴定.结果与结论:采用直接贴壁法能够在长骨髓腔内混合血中分离培养骨髓间充质干细胞并形成集落,其形态学表现和表面分子经鉴定符合骨髓间充质干细胞特点,能够获得符合要求的人骨髓间充质干细胞,从而进行后续实验.
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脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞的生物学特性
背景:脐带Wharton's Jelly中的间充质干细胞免疫原性低,增殖能力优于骨髓间充质干细胞,受到广泛关注.目的:分离、培养人脐带Wharton's Jelly中的间充质干细胞,并观测其生物学特性.方法:利用组织块培养法分离培养脐带Wharton's Jelly中的间充质干细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法测定细胞倍增时间,流式细胞仪检测细胞免疫表型.结果与结论:组织块培养第2天时,开始有细胞从组织块爬出;第7天细胞形态开始发生变化,部分细胞呈梭形.传至第3代的细胞形态均一,呈梭形或成纤维形.传至第7代、第10代的细胞形态无明显变化,仍呈梭形.MTT结果示细胞的倍增时间为三四天,传至10代后细胞倍增时间无明显差别.分离培养的脐带Wharton's Jelly中间充质干细胞表达CD44、CD29、CD105,不表达CD34、CD45、CD14.
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大鼠骨髓间充质干细胞培养的首次换液模式
背景:细胞的培养时间、数量及纯度是影响干细胞移植的关键因素,优化体外细胞培养模式可以提高移植的成效.目的:观察不同的首次换液模式、相同的后期换液条件对大鼠骨髓间充质干细胞培养时间及生物学特性的影响.方法:全骨髓贴壁法培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,按首次换液方式分为以下6组:24 h半量换液组、24 h全量换液组、48 h半量换液组、48 h全量换液组、72 h半量换液组、72 h全量换液组,以后每4 h全量换液.记录各组第0~3代培养时间及细胞纯度.结果与结论:各组培养总时间比较差异有显著性意义(F=46.455,P<0.05),48 h全量换液组短,24 h全量换液组长,与其他组比较差异均有显著性意义(P<0.05).24 h全量换液组各代细胞纯度均高,72 h半量换液组各代细胞纯度均低,与其他组比较差异均有显著性意义(P<0.05).所获细胞CD29、CD90阳性,CD34、CD45阴性,可以向成骨、成脂诱导分化.结果显示首次换液方式能影响大鼠骨髓间充质干细胞的培养周期及其纯度,48 h半量换液为佳首次换液方式.
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神经干细胞转基因移植治疗帕金森病的可能与可行
背景:神经干细胞分化为何种类型的神经细胞,不仅取决于细胞自身基因调控,更受所处环境中外来信号的影响.目的:就神经干细胞生物学特性、分化以及转基因移植治疗帕金森病的研究进展进行综述.方法:由第一作者应用计算机检索PubMed数据库1992-01/2009-12及中国期刊网全文数据库2003-01/2010-12有关神经干细胞生物学特性、分化以及转基因移植治疗帕金森病的文章,英文检索词为"neural stem cell(NSCs),neural stem cell transplant,Parkinson's disease(PD)",中文检索词为"神经干细胞,干细胞移植,帕金森病".排除重复性研究及Meta分析,共保留30篇文献进行综述.结果与结论:转基因神经干细胞移植治疗帕金森病是目前公认的有前景的治疗方案.在低氧条件下转基因培养的神经干细胞,能高效地诱导分化为多巴胺能神经元,为移植治疗帕金森病提供细胞源.但神经干细胞的生物学特性、诱导分化等还有待进一步分析.同时应用于人体治疗的生物安全性问题也逐渐引起人们的重视,如致瘤性等问题均在进一步探索中.
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下肢严重缺血的干细胞移植治疗
背景:近年来研究发现干细胞移植疗法由于能增加新血管生成,促进侧支循环的建立,故有望成为严重下肢缺血的有效治疗措施,但少有文献就此方面进行综述和概括.目的:综述近年关于干细胞移植治疗下肢严重缺血的新进展.方法:应用计算机检索2010-10/2011-01 CNKI、PubMed数据库相关文章,检索词"肢体缺血,干细胞移植,血管新生,peripheral arterial disease,stem cells transplantation,neovascularzation".共检索到文献68篇,终纳入符合标准的文献24篇.结果与结论:严重下肢缺血是外周动脉疾病的终末期,对患者的生活质量产生很大影响,其中一部分患者已经失去血管重建的机会.干细胞移植疗法由于能增加新血管生成,促进侧支循环建立,从而成为严重下肢缺血患者保肢的新选择而备受关注.但其潜在的新血管生成机制尚需通过基础研究和临床大宗随机对照研究来进一步完善,以期使更多的下肢严重缺血患者受益.
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种子细胞及支架材料在组织工程角膜构建中的应用
背景:在眼科角膜移植在组织工程中有很好的应用前景,但理想的支架材料一直制约组织工程角膜发展.目的:分析各种子细胞、支架材料的应用,总结近年来组织工程角膜构建所取得的进展.方法:由第一作者用计算机检索中国期刊全文数据库(CNKI:2000/2010-10)和PubMed数据库(2000/2010-10),检索词分别为"组织工程,角膜移植"和"tissue engineering,corneal transplantation".经计算机初检得到223篇文献,纳入与组织工程角膜研究进展、应用和体外构建的相关实验研究和综述,排除重复研究类文献,对33篇汇总分析.从种子细胞、支架材料、器官构建、临床应用等方面进行总结,对组织工程角膜的研究进展和未来发展进行探讨.结果与结论:结果表明,种子细胞和支架材料仍为组织工程研究的重点,由于眼免疫赦免现象和角膜的无血管特性,组织工程角膜移植将优于其他器官和组织的移植,成为能大量构建且易于移植的组织工程器官.目前,组织工程角膜构建已获得初步成功,但各类支架材料均存在一定缺点,寻找理想的支架材料是下一步的研究方向.
