中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
豚鼠鼻黏膜纤毛细胞的手工显微分离
目的:由于呼吸道纤毛取材困难,并且生长在较厚的黏膜上,透光性较差而难以进行直接观察,因此人们尝试用不同的方法获取纤毛细胞.实验拟将手工显微分离技术应用于豚鼠鼻黏膜纤毛细胞的分离,为进一步实验提供纯净的目的细胞.方法:实验于2007-03/11在解放军总医院耳鼻咽喉头颈外科研究所完成.白色健康豚鼠20只,在显微镜下用显微器械将豚鼠鼻黏膜的纤毛细胞层和黏膜下层进行分离,取手工显微分离的黏膜和未行分离的全层黏膜行苏木精-伊红染色,明确所分离组织层是否为黏膜纤毛细胞层.再将纤毛细胞层酶解,低倍镜下观察单个鼻黏膜纤毛细胞个数,纤毛细胞团大小,杂质细胞多数.高倍镜下观察纤毛细胞的形态.结果:苏木精-伊红染色见手工显微分离的组织层为纤毛细胞和基底细胞层,较薄,不含有黏膜下层.低倍镜下可见手工显微分离后纤毛细胞较密集,单个鼻黏膜纤毛细胞较多,纤毛细胞团较小,每个细胞团平均有7个纤毛细胞左右,且纤毛细胞团下面无其他细胞.高倍镜下可见手工显微分离的单离纤毛细胞膜光滑,折光性好,纤毛摆动活跃,存活时间明显延长,24 h仍有50%存活.与传统分离技术相比,手工显微分离技术在目的细胞纯度和活性上有显著优势(P＜0.05).结论:将手工显微分离技术应用于纤毛细胞分离和纯化降低了杂质细胞干扰,提高了细胞活性,满足了提供纯净目的细胞的实验要求.
-
重组人血小板源性生长因子与胰岛素联合局部应用对老龄糖尿病大鼠烧伤创面的作用
目的:文献报导单一局部应用重组人血小板源性生长因子或胰岛素对糖尿病创面的愈合具有促进作用.拟验证局部联合应用重组人血小板源性生长因子和胰岛素对老龄糖尿病大鼠烧伤创面愈合的作用.方法:实验于2006-10/2007-05在甘肃省中医学院SPF级动物实验室完成.①实验材料及分组:SPF级健康Wistar老龄大鼠88只,年龄1年以上,雌雄不限,体质量300～350 g.随机分为烫伤对照组20只,糖尿病烫伤对照组20只,糖尿病重组人血小板源性生长因子对照组16只,糖尿病胰岛素对照组16只,糖尿病重组人血小板源性生长因子、胰岛素治疗组16只.实验用鱼精蛋向锌胰岛素为上海第一生化药业有限公司产品;重组人血小板源性生长因子凝胶剂为北京金赛狮生物制药技术开发有限公司产品.②实验过程:除烫伤对照组外,其他组大鼠通过高脂、高蛋白、高糖饲养后腹腔注射链尿佐菌素,建立老龄Ⅱ型糖尿病动物模型,并以高脂、高蛋白、高糖饲养.8周后各组给予深Ⅱ度烫伤.③实验评估:于伤后第1,3,7,14,21天时相点测量创面面积,计算创面愈合率:观察组织形态学、检测创面羟脯氨酸含量:采用免疫组织化学检测血管内皮细胞生长因子、CD34的表达:计算微血管密度.实验过程对动物的处理符合动物伦理学标准.结果:与糖尿病烫伤对照组、糖尿病重组人血小板源性生长因子对照组、糖尿病胰岛素对照组相比,糖尿病重组人血小板源性生长因子、胰岛素治疗组老龄大鼠创面愈合率加快(P＜0.05),创面上皮化加速,羟脯氨酸含量增加(P＜0.05),血管内皮细胞生长因子、CD34阳性表达,微血管密度值增加(P＜0.05).结论: 局部联合应用重组人血小板源性生长因子和胰岛素可通过协同作用促创面胶原的合成,增加创面的血管形成,加速老龄性糖尿病大鼠创面愈合.
-
局部注射当归注射液对肌腱断裂愈合及粘连的影响
目的:肌腱断裂缝合术后粘连是常见的难题之一.观察当归注射液对吻合后的家兔肌腱愈合及其周围组织粘连的影响,探索一种防止肌腱粘连同时促进肌腱愈合的方法.方法:实验于2005-1012006-05在湖北中医学院中心实验室完成.①实验分组及方法:选用大耳白兔30只,制备肌腱吻合模型,造模后按随机数字表法分为3组(n=10):当归注射液组每隔5 d于腱周注射当归注射液2.0～2.5 mL/只,连续4次;生理盐水组于腱周给予等量生理盐水;空白对照组不作特殊处理.②实验评估:术后2,4,6周,分别观察肌腱色泽、吻合处的愈合形态、腱内外膜增殖情况及胶原纤维生成和排列情况,并测定羟脯氨酸含量、吻合口抗张力强度、粘连范围及肌腱滑动度.结果:30只白兔均进入结果分析.①肌腱愈合情况:当归注射液组术后肌腱色泽正常,术后2周腱外膜增厚并桥接吻合口两端,腱内膜亦开始增殖;4周后腱内膜明显增厚,胶原纤维增多并与腱长轴基本一致排列;6周后吻合口腱纤维排列整齐,与腱轴方向一致.术后2周各组羟脯氨酸含量、吻合口抗张力强度差异均无显著性意义(P＞0.05);当归注射液组的吻合口抗张力强度、羟脯氨酸含量高于空白对照组、生理盐水组(P＜0.05～0.01),后两组差异无显著性意义(P＞0.05).②肌腱粘连情况:当归注射液组术后2周肌腱开始膨大并渐增大,出现薄膜样粘连;4周膨大为明显,吻合口间隙消失,6周吻合口膨大消失,粘连膜样消失,肌腱滑动度较大,腱外形恢复正常.术后2周各组肌腱滑动度、粘连范围差异均无显著性意义(P＞0.05);术后4,6周当归注射液组的肌腱滑动度大于空白对照组、生理盐水组(P＜0.05～0.01),粘连瘢痕范围小于空白对照组、生理盐水组(P＜0.05～0.01),后两组差异无显著性意义(P＞0.05).结论:当归注射液局部应用可促进肌腱的内源性愈合,加快肌腱的愈合速度,提高愈合质量;同时可通过抑制外源性愈合,减少或防止肌腱的粘连.
-
转化生长因子β1对大鼠肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1表达的影响
目的:已知转化生长因子β1与肾脏组织纤维化形成有密切关系.拟进一步探讨转化生长因子β1对大鼠近端肾小管上皮细胞(NRK52E)中基质细胞衍生因子1表达的影响.方法:实验于2006-03/2007-05在四川大学生物治疗国家重点实验室神经分子生物实验室完成.①实验材料:大鼠近端肾小管上皮细胞株NRK52E,由澳大利亚Monash医学中心肾内科实验室提供;转化生长因子β 1由cytolab公司提供.②实验分组:将大鼠近端肾小管上皮细胞分为正常对照组:无转化生长因子β1干预;实验组:又分为在同一转化生长因子β1浓度(2μ g/L)下,培养6,12,24 h;在不同的转化生长因子β1浓度(2,5,10 μ g/L)下,培养24 h.③利用免疫细胞化学技术对同一转化生长因子β1浓度(2 μ g/L)干预不同时间后的大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1的蛋白表达进行半定量分析,选择出佳的作用时间点;通过反转录-聚合酶链反应、Western-Blotting以检测大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1在不同转化生长冈子β1浓度干预下培养24 h后的mRNA、蛋白表达变化情况.结果:①培养12,24h时,大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1的蛋白表达比0h增高(P＜0.05);24h时表达略高于12h(P＞0.05).提示,基质细胞衍生因子1的表达到达一_甲台期,24h为佳的作用时间点.②从mRNA水平和蛋白水平均证实,2 μ g/L转化生长因子β 1干预24 h后的大鼠近端肾小管上皮细胞中基质细胞衍生因子1的表达高于正常对照组(P＜0.05):随着转化生长因子β1的浓度增大,表达呈下降趋势,10 μ g/L时表达低于2 μ g/L时的表达(P＜0.05).结论:基质细胞衍生因子1在正常的大鼠近端肾小管上皮细胞中呈低表达状态,对转化生长因子β1的干预表现出一定的时间、剂量依赖性,基质细胞衍生因子1可能参与了肾问质纤维化的发生、发展.
-
肾源性细胞因子促红细胞生成素对急性脊髓损伤大鼠细胞凋亡的影响
目的:促红细胞生成素为肾源性细胞因子,在大鼠急性脊髓损伤后对脊髓神经功能具有保护作用.实验拟证明不同时间硬膜外腔注射后其对脊髓神经细胞凋亡的影响.方法:实验于2007-01/04在苏州大学附属第二医院动物实验室完成.①实验材料:清洁级成年雄性SD大鼠48只,体质量(270±10)g;实验用人重组促红细胞牛成素为日木麒麟啤酒株式会社制造,规格3 000 IU/支.②实验分组及处理:将大鼠随机分为正常组6只,假手术组6只(仅切除椎板),生理盐水组18只,实验组18只.按改良Allen打击法建立大鼠脊髓不完全损伤模型.实验组分别于大鼠脊髓损伤后1,6,24 h(每个时间点6只),于硬膜外腔注射重组人促红细胞生成素5 000 u/(kg·bw);生理盐水组于相同时间予以相同体积生理盐水.③实验评估:通过动物神经运动功能BBB评分及斜板试验评价神经损伤程度;苏木精-伊红染色法观察组织学改变,并采用原位末端标记法标记法检测脊髓神经细胞凋亡数.结果:①神经行为学评分:正常组、假手术组大鼠双下肢运动功能正常;与生理盐水组相比,脊髓损伤后实验组1,6及24 h神经运动功能有改善;斜板角度及BBB评分均明显提高,差别有显著性意义(P＜0.05).②组织学苏木精-伊红染色结果:实验组组织学破坏改变明显较生理盐水组轻.③凋亡神经细胞及计数结果:实验组脊髓神经细胞凋亡指数均明显下降,差异有显著性(P＜0.05).结论:早期应用外源性促红细胞生成素对脊髓不完全损伤后引起的神经运动功能损害具有保护作用,能明显改善脊髓损伤后的临床功能表现.此种保护作用与促红细胞生成素能够抑制神经细胞凋亡有关.
-
中医外治法干预运动创伤性膝关节炎模型兔膝关节滑膜中碱性成纤维细胞生长因子的表达
目的:实验拟验证外治法治疗运动创伤性关节炎模型兔膝关节滑膜中碱性成纤维细胞生长因子的表达,探讨中医外治法治疗运动创伤性关节炎的可能机制.方法:实验于2006-01/06在广州体育学院和南方医科大学内分泌实验室完成.①实验分组:普通级健康雄件新西兰大耳白兔24只,体质量2.1-2.6 kg;随机数字表法分为正常组、模型组和外治法组,每组8只.②实验方法:以Hulth模型制备运动创伤性关节炎模型.造模8周后外治法组用中药熏蒸配合手法弹拨以及电刺激治疗4周.③实验评估:4周后每组取部分切片行常规苏木精-伊红染色;另每组取部分石蜡切片行免疫组织化学SABC法观察实验动物膝关节滑膜碱性成纤维细胞生长因子的表达.结果:纳入健康雄性新西兰大耳白兔24只,均进入结果分析.①滑膜组织结构变化:正常组滑膜无增生肥厚,滑膜组织苏木精-伊红染色见纤维细胞排列均匀、规则:关节软骨外观呈蓝白色,无裂纹及溃疡.模型组滑膜充血、部分粘连,苏木精-伊红染色见滑膜绒毛肥厚与纤维样化;关节软骨失去原有的光泽.外治法组的关节软骨皆仍有光泽,略发黄,软骨表面无明显的裂纹、糜烂及溃疡形成.②滑膜组织中细胞因子变化:碱性成纤维细胞生长因子免疫组织化学检测平均吸光度正常组为0.126 1±0.029 0,模型组为0.238 6±0.040 0,与外治法组0.513 5±0.038 0相比较,差异显著(P＜0.01).结论:外治法能够促进实验动物膝关节滑膜细胞碱性成纤维细胞生长因子的表达,以及受损软骨的修复.
-
六分钟步行试验与慢性阻塞性肺疾病患者肺功能的关系
目的:六分钟步行试验是一种简单易行且目前已被公认的评价受试者心肺功能、运动能力、生活质量霞要的研究方法之一.试验旨在评价其在慢性阻塞性肺疾病患者中应用的价值.方法:①对象及分组:选择2001-01/2006-12在暨南人学第二临床医学院呼吸内科就诊慢性阻塞性肺疾病患者50例,男34例,女16例,平均年龄(70.1±8.9)岁;另选同一时期呼吸科其他病种患者62例做对照,男30例,女32例,平均年龄(66.5±10.1)岁.两组患者对试验知情同意.②实验过程及评估:两组均进行六分钟步行试验、肺功能检查及MRC呼吸困难评分,并对结果进行t检验、ROC曲线分析、相关性分析和多元逐步回1月分析,计算Pearson相关系数.结果:两组受试者试验数据全部进入结果分析,实验中无脱落者.①六分钟步行试验结果:与对照组比较,慢性阻塞性肺疾病组步行距离更短,血氧饱和度下降分数更高,差异有显著性(P＜0.05).②ROC曲线分析和直线相关分析:显示六分钟步行试验中血氧饱和度下降分数比步行距离更能有效反映肺功能状态;且与第1秒钟用力呼气量、第1秒钟用力呼气量/用力肺活量存在相关(P＜0.01).③多元逐步回归分析:第1秒钟用力呼气量/用力肺活量是六分钟步行试验有意义的预测指标.结论:六分钟步行试验与第1秒钟用力呼气量、第1秒钟用力呼气量/用力肺活量存在良好的相关性,可较好的反映患者的肺功能,并有操作简单、方便实用等特点,可以作为慢性阻塞性肺疾病患者日常肺功能的监测手段.
-
非绝经期女性2型糖尿病患者50例第2至第4腰椎骨密度变化与血生化指标关系的多元回归分析
目的:大量研究表明2型糖尿病和骨质疏松之间可能存在某种联系,但尚未能有定论.观察非绝经期女性2型糖尿病患者骨密度的变化及其相关影响因素.方法:①试验对象:选取2006-10/2007-07在无锡市第三人民医院内分泌科住院的非绝经期女性2型糖尿病患者50例作为2型糖尿病组,均符合1999年WHO糖尿病诊断标准,平均年龄(41±1)岁.同时选取本院体检中心非绝经期女性健康体检者36名作为健康对照组,平均年龄(41±1)岁.所有受试者均对试验知情同意.所有入选者均排除了甲状腺功能亢进症、Cushing综合征、骨关节疾病、慢性肝肾疾病、酮症酸中毒及长期卧床病史,并否认激素类、维生素D3及钙剂用药史.②试验方法及评估:对所有受试者进行L2～4骨密度、体质量指数、腰臀比、糖化血红蛋白、血钙、磷、三酰甘油、胆固醇、低密度脂蛋白、碱性磷酸酶、尿微白蛋白的测定,并对其结果进行多元回归相关分析.结果:纳入非绝经期女性2型糖尿病患者50例及健康女性36名,均进入结果分析.①2型糖尿病组L2-4骨密度低于健康对照组(P＜0.05);血糖化血红蛋白、尿微白蛋白均高于健康对照组(P＜0.05);而其他指标两组比较,差异无显著性(P＞0.05).②多元逐步回归分析结果显示,2型糖尿病患者L2-4骨密度与血糖化血红蛋白、尿微白蛋白呈负相关.结论:非绝经期女性2型糖尿病患者易发生骨密度下降.
-
激素性股骨头缺血性坏死局部微循环变化与桃红四物汤的干预作用
目的:研究证实桃红四物汤可对抗激素的作用,对早期激素件股骨头缺血性坏死有防治作用.制备兔典型激素性股骨头缺血性坏死模型,拟进一步验证桃红四物汤对激素性股骨头缺血性坏死血液流变学和局部微血管密度的影响.方法:实验于2005-04/2006-10在福建中医学院中心实验室完成,动物实验方法符合动物伦理学要求.①实验材料及分组:选用健康成年新西兰大白兔60只,其中54只采用贺氏造模法制作激素性股骨头缺血性坏死模型,其余6只为正常组.造模6周后麻醉处死6只模型兔,与正常组对比确定造模成功.将42只造模成功兔按随机数字表法分为激素对照组和中药治疗组(n=21).②实验方法及评估:激素对照组以生理盐水7 mL/kg治疗,1次/d;中约治疗组以桃红四物汤7 mL/kg治疗,1次,d.于治疗后第1,2,4周各组分别处死7必动物,检测血液流变学指标及股骨头局部微血管密度.结果:42只兔全部进入结果分析.①治疗后第1,2,4周激素对照组兔全血高切和低切黏度、血浆黏度、红细胞压积、纤维蛋白原含量均高于中药治疗组(P＜0.05～0.01),并且随着中药治疗时间的延长,中药治疗组血液流变学趋于正常,与激素对照组的差异更明显.②治疗后第1,2,4周中药治疗组兔股骨头局部微血管密度均高于激素埘照组(P＜0.05～0.01).结论:桃红叫物汤能降低激素性股骨头缺血性坏死兔血液黏度,促进股骨头局部微血管的再生,改善股骨头局部血运,促进坏死股骨头的修复.
-
不同质量浓度丝裂霉素C干预椎板切除大鼠硬膜外瘢痕组织增生:定性和定量的结合检测
背景:目前较为常用的预防椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连的措施是以各种半流体物质或者膜性材料作为硬膜与瘢痕之问的物理屏障,但效果并不令人满意.抑制作为修复细胞主要成分的成纤维细胞增殖,调节胶原代谢成为当前生物学防治病理性瘢痕的热点.目的:采用定性和定量结合的方法,比较局部应用不同浓度丝裂霉素C预防椎板切除术后硬膜外粘连的效果.设计:完全随机分组,对照动物实验.单位:连云港市第二人民医院骨科材料:选用健康成年SD大鼠40只,雄性,体质量200～220 g,由南京医科大学动物实验中心提供.实验用药丝裂霉素C由日本协和发酵工业株式会社富士工厂生产,批号:425ACI,进口药品注册证号:H20020163.方法:实验于2004-06/10在南京医科大学动物实验中心及江苏大学医学院基础实验中心完成.随机将40只大鼠分为4组:丝裂霉素C高、中、低浓度组和生理盐水组,每组10只.将鼠麻醉后,切除L1椎板,形成0.2 cm×0.5 cm缺损,暴露硬脊膜.对照组以浸透生理盐水棉片,丝裂霉素C高、中、低质量浓度组以浸透质量浓度分别为0.1,0.05,0.01 g/L的丝裂霉素C棉片置于裸露的硬脊膜后方5 min.实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.主要观察指标:手术后4周将每组麻醉后各处死4只动物,切取手术段脊柱硬脊膜外瘢痕组织,计算其中羟脯氨酸含量.其余动物在麻醉后,切取手术段脊柱包括其后侧瘢痕组织及骶棘肌,测不规则形态的瘢痕横切面面积,并计数纤维细胞数.光镜下评估各组标本硬膜外瘢痕粘连的程度.结果:大鼠40只均进入结果分析.对照组标本硬膜外瘢痕组织致密,与硬脊膜形成紧密粘连.丝裂霉素C高质量浓度组组无明显硬膜外粘连,瘢痕组织中羟脯氨酸含量、胶原组织面积及成纤维细胞计数较对照组显著减少(P＜0.05).丝裂霉素C中、低质昔浓度组瘢痕组织中羟脯氨酸含量、胶原组织面积及成纤维细胞计数较对照组有小同程度的减少,其中只有丝裂霉素C中质量浓度组成纤维细胞计数与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.05);丝裂霉素C中、低质量浓度组瘢痕组织与硬膜间有不连续的粘连.结论:局部应用浓度为0.1 g/L的丝裂霉素C能够有效减少硬膜外瘢痕组织增生,避免椎板切除术后硬膜外瘢痕粘连.
-
晶状体上皮细胞凋亡与牛磺酸的抑制效应
背景:牛磺酸是晶状体内重要的非酶系统抗氧化剂,其抗氧化效能的作用机制主要是通过其抗脂质过氧化反应,保护晶状体免受氧化损伤.目的:实验拟进一步观察体外条件下,外源性牛磺酸对过氧化氢所诱发的晶状体上皮细胞凋亡的影响.设计:随机对照动物实验.单位:青岛大学医学院附属医院眼科.材料:实验选用成年新西兰标准兔75只,雌雄不拘,体质量1.5～2.5 kg,由青岛市实验动物中心提供.实验所用的原位细胞凋亡检测试剂盒由美国Sigma公司生产,牛磺酸和过氧化氢由上海光达化学试剂厂生产.方法:实验于2005-05/2007-06在青岛大学医学院附属医院眼科和中心实验事完成.取兔晶状体,并随机分为3组:对照组,无血清无酚红的MEM培养基培养;氧化损伤组,含1 mmol/L过氧化氢溶液的无血清无酚红的MEM培养基培养,每6h再加入62 μL过氧化氢溶液(30 g/L);牛磺酸组,用含1 mmol/L过氧化氢溶液和10 g/L牛磺酸的无血清无酚红的MEM培养基培养.实验中对动物的处置符合动物伦理学标准.主要观察指标:观察培养6,12,24,48和72 h后晶状体混浊情况;采用DNA缺口末端原位法及DNA片段分析法检测各组晶状体上皮细胞凋亡情况.结果:①晶状体混浊情况:氧化损伤组随氧化损伤作用时间延长,晶状体混浊度逐渐加重,而牛磺酸组晶状体混浊情况明显轻于氧化损伤组.②晶状体上皮细胞凋亡情况:对照组在培养的72 h内一直未见有凋亡细胞.而氧化损伤组随氧化损伤作用时间延长,凋亡细胞逐渐增多,72h时全为凋亡细胞.自培养24h开始,牛磺酸组开始有少量凋亡细胞出现,随培养时间延长,凋亡细胞逐渐增多,72 h时接近30%.各培养时间点牛磺酸组凋亡率都明显低于氧化损伤组,差异有显著性意义(q=8.6845,P＜0.01),牛磺酸组和对照组比较,差异无显著性意义(P＞0.05).③DNA片段分析结果:培养24,36,48,72 h氧化损伤组晶状体上皮细胞DNA琼脂糖凝胶电泳可见凋亡细胞典型的梯状条带;培养24 h时对照组和牛磺酸组则不出现此变化而仅呈现正常细胞条带.结论:牛磺酸可抑制氧化损伤诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡,减轻晶状体混浊.
-
免VX2肌肉肿瘤模型的建立及生物学特性
目的:兔VX2肿瘤细胞株可接种在兔的肝、肾、骨及脑等部位制成肿瘤模型,但是接种于肌肉内建立的肿瘤模型很少用于实验研究.建立兔VX2肌肉肿瘤模型并观察其生物学特性.方法:实验于2007-03/08在重庆医科大学医学生物工程研究所完成.①实验材料:两三个月月龄纯种新西兰大白兔33只,雌雄不限,体质量1.5～2.0 kg;VX2肿瘤细胞株由日本京都Funabashi Farm公司馈赠.②实验过程:采用组织块包埋法,将vx2肿瘤组织块移植于33只新西兰大白兔大腿股外侧肌内建立软组织肿痛模型.③评估:随机取15只荷瘤兔,分别在接种肿瘤后7,10,14,21,28 d行B超、彩色多普勒血流成像检查;另18只分别于接种后10,15,20,25,30,35d随机麻醉后处死3只荷瘤兔,进行大体解剖和病理学检查.实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.结果:33只兔均进入结果分析.①建立的兔VX2肌肉肿瘤模型成瘤率高达100%,接种7～10 d,肿瘤生长迅速,生长率为55.9%;接种10～14 d,肿瘤生长减缓,生长率为68.6%;14 d以后,肿瘤再次迅速增长.②B超示21 d后肿瘤内部可见形状不规则,大小不等的小片状无回声区(9/15,60%)或高回声钙化区(4/15,26.7%);彩色多普勒血流成像肿瘤边缘血供丰富.③病理组织学可见肿瘤细胞呈巢状或条索状弥漫分布,瘤细胞体积较大,形态不规则,有较多核分裂相,细胞异型性大.④肿瘤移植后25 d开始出现肺转移,其他部位均无转移.结论:此模型移植成功率高,建模时间短且肿瘤生长迅速,肿瘤血供丰富,转移发生较晚,且只发生肺转移,无其他部位转移,该模型是一种较为理想的用于研究肿瘸局部治疗对肺转移影响的动物模型.
-
肝细胞生长因子基因C57488A多态性与原发性高血压的关系
目的:血管内皮细胞功能不全在高血压患者中普遍存在,肝细胞生长因子在内皮细胞功能不全中起重要作用,与高血压的流行、严重程度、靶器官受损等有关.探讨肝细胞生长因子基因C57488A的多态性在原发性高血压发病机制中的作用.方法:①试验对象:选择2006-06/12在本院保健中心体检或本科室住院的原发性高血压患者共107例作为原发性高血压组,平均年龄(61±9)岁,其中有高血压家族史者共47例;所有对象均为合肥地区居住且无血缘关系的汉族人,患者对试验知情同意,试验经医院医学伦理委员会批准.病例收集按照中华医学会制订的高血压指南标准,收缩压≥140mmHg,或舒张压≥90 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),或明确诊断为高血压而接受药物治疗达1年以上者.1个月内仅服用降压药.同时选择未曾接受高血压药物治疗的健康人共110名作为正常对照组,平均年龄(60±8)岁;纳入标准:收缩压＜140 mm Hg,舒张压＜90 mm Hg,并排除高血压家族史.所有受试对象均详细调查家族史,排除继发性高血压、糖尿病、冠心病、甲状腺疾病、严重的肝肾疾病及心肺功能不全等.②试验方法及评估:所有受试对象均测定血压、身高、体质量,计算出体质量指数,常规生化测定总胆固醇、三酰甘油、极低密度脂蛋白、空腹血糖等.采用单一等位基因特异性引物PCR技术测定两组肝细胞生长因子的基冈型及肝细胞生长因子C57488A基因多态性分布、各基因型和等位基因频率分布.结果:纳入原发性高血压患者107例和健康人110名,均进入结果分析.①原发性高血压组和正常对照组的年龄、性别、体质量指数、三酰甘油、总胆崮醇、极低密度脂蛋白和空腹血糖差异均无显著性(P＞0.05).②所有受试对象基因多态性分布符合Hardy-Weinberg平衡,具有群体代表性.原发性高血压组中有家族史者(47例)和无家族史者(60例)的CC、CA、从基因型频率分别为0.809、0.170、0.021和0.733、0.233、0.033,C、A等位基因频率分别为0.894、0.106和0.850、0.150.正常对照组肝细胞生长因子基冈C57488A的CC、CA、AA基因型频率分别为0.527、0.355、0.060;C、A等位基冈频率分别为0.705、0.295.③原发性高血压组中有家族史和无家族史者基因型CC和等位基因C频率均高于正常对照组(P＜0.01,P＜0.05);有家族史者CC基因型频率和C等位基因频率均高于无家族史者,但差异无显著性(P＞0.05).结论:合肥地区汉族人群原发性高血压的发生与肝细胞生长因子基因C57488A多态性有关,基凶型CC和等位基因C可能是原发性高血压的易感因素.
-
脑性瘫痪儿童的骨代谢生化特点
目的:骨源性碱性磷酸酶与骨钙素在骨的形成过稃中发挥着重要的调节作用,降钙素、甲状旁腺激素是调节体内Ca代谢的重要激素.测定脑性瘫痪患儿血钙、磷、骨源性碱性磷酸酶、骨钙素、降钙素、甲状旁腺激素水平,以了解其骨代谢生化特点及其相关的调控因素.方法:①对象及分组:选择2005-07/2007-07湖南省儿童医院康复中心住院的脑瘫患儿120例为脑瘫组:男82例,女38例;年龄3个月～3岁.按2005年昆明全国脑瘫会议分型标准分为痉挛型印例,不随意运动型印例:按脑瘫程度分为中轻度36例,中度42例,重度42例.同期体检的健康的100名儿童为对照组:男57名,女43名,年龄3个月～3岁.②检测指标及评估:采用全自动分析仪测定两组血清钙、磷水平;用小儿骨源性碱性磷酸酶试剂盒金标法测定骨碱性磷酸酶;用放射免疫吸附法测定骨钙素、降钙素、甲状旁腺激素,并进行两组间、不同程度与类型脑瘫患儿间比较.结果:①脑瘫组忠儿血钙、磷与对照组比较差异无显著性(P＞0.05),骨碱性磷酸酶,骨钙素水平则明显高于对照组(P＜0.01),甲状旁腺激素、降钙素与对照组差异无统计学意义(均P＞0.05).②脑瘫组中痉挛型组血骨钙素与不随意运动型组比较,差异无显著性(P＞0.05),但前者血甲状旁腺激素值高于后者,骨碱性磷酸酶值、降钙素值则低于后者,差异有显著性(均P＜0.05).③重度脑瘫患儿的甲状旁腺激素高于对照组、降钙素低于对照组(均P＜0.01);重度脑瘫患儿骨钙素、甲状旁腺激素值高于轻度和中度(均P＜0.05),降钙素低丁轻度和中度(均P＜0.05).结论:脑瘫患儿血清钙、磷可以通过机体自身血甲状旁腺激素、降钙素调控保持正常,而骨碱性磷酸酶、骨钙素水平升高则提示脑瘫患儿骨矿化不足,骨形成旺盛,骨重建活跃.
-
改良脱钙液制作脱钙骨石蜡切片与传统方法的比较
目的:常规的脱钙骨切片制作方法在脱钙、组织结构完整性等方面存在一定的缺陷.比较用改良后方法制作的脱钙骨组织切片与常规制作的脱钙骨组织切片质量的差异.方法:①实验材料:实验于2004-12/2007-12在广东医学院组织和胚胎学教研室及药理教研室完成.SPF级雌性SD大鼠10只,鼠龄6个月.②实验方法:取大鼠左右股骨和胫骨标本各20个,分为两组,左股骨和右胫骨为实验组,右股骨和左胫骨为对照组.实验组经过常规同定,而后应用改良脱钙液(甲酸10 mL、浓盐酸(相对密度1.19)8 mL、氯化铝3 g、体积分数为0.4的甲醛20mL、冰乙酸3mL,加生理盐水至总体积200mL)脱钙、脱水、氯仿透明、包埋时间延长、染色、封固和切片;对照组进行常规固定、脱钙、脱水、透明、包埋、染色、封固和切片.③实验评估:比较两组切片的质量和效果.结果:①实验组大鼠的脱钙骨切片与对照组比较,标本脱钙时间缩短,脱水时间变化不大,而透明效果明显改善.②与对照组比较,实验组骨组织切片标本薄均匀、平坦完整,脱蜡完整均匀.染色成功的切片,骨与骨周围的组织形态保持完整.结论:改良的脱钙大鼠股骨和胫骨石蜡切片制作方法能使标本脱钙更彻底、结构更清晰、组织完整性更好.
-
细胞外基质纤维连接蛋白在小鼠肾脏发育中的表达
目的:纤维连接蛋白作为细胞外基质的重要成份,成为肾脏正常组织结构的基本组成部分.实验观察纤维连接蛋白在小鼠肾脏发育中的时空性表达,探讨纤维连接蛋白与肾脏发育的关系.方法:实验于2006-09/2007-07在辽宁医学院组织胚胎学教研室与科学实验中心完成.①实验材料:选取成年健康昆明系小白鼠44只,体质量25～30 g.②实验过程:小白鼠雌雄(1∶1)同窝饲养,以观察到阴道栓脱落的早时间计为胚龄0d,以观察到仔鼠出生的早时间计为生后0d.分别耿胚龄12,14,16,18d胎鼠和生后1,3,7,14,21,28,42d仔鼠肾脏,每时间点4只,常规石蜡标本制备、切片.③实验评估:采用免疫组织化学方法、体视学和Western blot技术测定不同胚龄及生后日龄小鼠肾脏内纤维连接蛋白的表达及其含量变化.实验过程中对动物的处理符合动物伦理学标准.结果:①免疫组织化学结果:显示从胚龄14 d开始,纤维连接蛋白在除逗号小体以外的各期肾小体、肾小管、集合管的基底膜处均有表达.②体视学测量结果:显示纤维连接蛋白在除逗号小体以外的各期肾小体及肾小管、集合管基底膜处的表达量均逐渐增加.③Western blot结果:显示纤维连接蛋白随着肾脏的发育其表达量逐渐增加.结论:纤维连接蛋白对肾脏各结构的发育以及成熟肾脏各结构的维持均起一定的作用.
-
抗心磷脂抗体在狼疮肾炎患者中的临床意义
背景:以往的研究表明,在系统性红斑狼疮及抗磷脂抗体综合征患者中,升高的抗心磷脂抗体滴度与血管血栓形成、血小板减少及反复流产的发生明显相关.但有关抗心磷脂在狼疮性肾炎患者中的临床意义的研究报道却不完全统一.目的:探讨抗心磷脂抗体在中国狼疮性肾炎患者中的阳性率及临床意义.设计:前瞻性单一样本的随访观察.单位:深圳市第四人民医院香蜜湖风湿病分院,广东医学院深圳风湿病研究所.对象:选择2001-03/2003-10于深圳市第四医院香蜜湖风湿病分院风湿科门诊就诊或住院的狼疮性肾炎患者97例.均符合美国风湿病学学会(ACR).1997年修订的狼疮性肾炎的诊断和分类标准.纳入对象均对检测项目知情同意.方法:记录患者入院后的临床资料和辅助检查结果.应用酶联免疫吸收法检测患者血清中的抗心磷脂抗体,阳性判断标准为测定值超过100 U/mL.大剂量口服强的松联合环磷酰胺静脉冲击治疗以诱导缓解,然后逐渐将强的松减量,将环磷酰胺换成硫唑嘌呤以维持疗效.同时使用其它药物控制可能合并的高血压、高血脂与关节痛等症状.每半年对纳入对象进行定期随访,记录狼疮性肾炎患者的临床资料及实验室检查结果,共3年.主要观察指标:患者的性别、年龄、系统性红斑狼疮病情活动指数,血栓形成、病理妊娠等临床表现及肾功能等实验室检查结果.结果:实验共纳入狼疮性肾炎患者97例,83例进入结果分析,14例脱落.在入选的97例患者中,其发病后被确诊时抗心磷脂抗体阳性者有38例(39%),高血压,血小板减少及雷诺现象在伴有抗心磷脂抗体阳性的狼疮性肾炎患者中更为常见.IgG型抗心磷脂抗体阳性狼疮件肾炎患者更易发生血管血栓形成:抗心磷脂抗体阳性狼疮性.肾炎患者更易发生流产、早产和死胎以及慢性肾功能不全恶化.结论:抗心磷脂抗体在狼疮性肾炎患者中的阳性率为39%,抗心磷脂抗体阳性的患者更易出现高血压,血小板减少及雷诺现象,抗心磷脂抗体阳件对预测狼疮性肾炎出现血管血栓形成、病理妊娠及慢性肾功能不全恶化可能有一定作用.
-
骨密度及下肢血管病变与2型糖尿病的相关性
目的:骨质疏松症、糖尿病、动脉粥样硬化均为代谢性疾病,在同一个体常常合并存在.通过分析2型糖尿病患者下肢血管病变不同程度的骨密度变化,可探讨其可能的影响因素.方法:选取2006-03/10河北医科大学第=三医院住院的2型糖尿病患者140例,男性71例,女性69例,年龄≥45岁(女性绝经1年以上).患者对检测指标知情同意.按照下肢血管病变严重性进行评分,将入选病例分为正常组、轻度组、中度组和重度组,每组35例.全部受试者均检测正位腰椎及双侧股骨骨密度,并行双下肢动脉彩超.结果:①年龄、体质量指数,糖尿病病程、绝经年限、血糖水平、胰岛素水平、脂代谢指标控制、尿白蛋白、继发甲状旁腺激素水平、雌激素水平变化越大,腰椎、双侧股骨各部位骨密度差异越明显(P＜0.05).②腰椎、股骨骨密度与糖尿病病程、年龄、空腹血糖、餐后2h血糖、糖化血红蛋白、尿白蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、女性绝经年限呈负相关,与体质量指数、高密度脂蛋白和雌二醇呈正相关,与二酰甘油和极低密度脂蛋白水平无明显相关.腰椎骨密度与甲状旁腺激素水平正相关,股骨骨密度与空腹胰岛素正相关.③下肢动脉彩色超声动脉硬化程度积分与糖尿病病程、年龄、空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、尿白蛋白、胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、继发甲状旁腺激素水,平呈正相关,与雌二醇水平呈负相关,与体质量指数、空腹胰岛素水平、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、极低密度脂蛋白胆同醇和绝经年限无明显相关.2型糖尿病下肢血管病变患者较2型糖尿病非下肢血管病变患者骨密度低,且动脉硬化程度越重,骨密度越低,尤以股骨骨密度为显著.结论:①糖尿病下肢血管病变与骨密度密切相关.②年龄、血糖、血脂、糖尿病病程、糖尿病肾病、女性雌激素、血继发甲状旁腺激素水平是影响糖尿病患者骨密度及下肢血管病变的共同因素.
-
大学生体质状况与伙食费用的相关性
目的:学生的个人生活费用跟随学校地理位置和服务模式的不同及其个人生活方式而有所差别.对两所在校大学生体质进行抽样调查,以了解不同伙食费用消费与学生体质健康的关系.方法:实验于2006-12选取湖南环境生物职业技术学院南校区3个医科系1～4年级89个班级和广西壮族自治区南宁市卫生学校护理、口腔、中西医专业1～3年级66个班级学生作为检测对象.按系和年级分层,以班级为整群随机抽样.考虑到可能的不应答现象,按多20%的样本进行抽样,严格控制抽样误差,共调查794人.体质检查根据中国<学生体质健康标准＞细则执行,伙食费用调查采用问卷形式进行检测.将学生信息、伙食费用和体检数据录入<学生体质健康管理系统(6.02学生版)＞软件,对不同伙食费用的学生身高、体质量、营养、发育及体型、视力状况进行评价.结果:①与伙食费用＜150元,月和＞1300元,月的学生比较,150～299元,月的学生身高上等、中上等比例明显升高(x2=19.73,P＜0.01).②与伙食费用≥250元,月的学生比较,＜250元/月的学生体质量上等、中上等比例明显升高(x2=17.82,P＜0.01),营养不良、较低体质量、超重及肥胖的比例明显降低(x2=9.95,P＜0.05).③与伙食费用≥300元/月的学生比较,＜150元/月、150～199元/月、200～249元/月、250～299元/月的学生发育状况良好+较好合计率均显著升高(x2=23.87,P=0.00).④伙食费用＜200元,月的学生体型粗壮率较高,250～299元,月的学生体型匀称率较高,组间比较差异有显著性意义(x2=15.61,P=0.00).⑤不同伙食费用的学生视力低下率基本相似(x0=0.77,P＞0.05).结论:月伙食费用150～300元的学生体质状况综合评价相对较优,提示过高或过低的伙食费用均不利于学生体质健康发展,应提倡集体生活,同时改善校内学生的就餐环境.
-
电针与西布曲明对肥胖大鼠脂肪细胞产物影响的差异
背景:针灸与药物均是治疗单纯性肥胖病的有效方法,电针与常用减肥药西布曲明影响肥胖机体脂肪细胞产物是否存在差异?目的:观察电针与常用减肥药西布曲明影响肥胖大鼠脂肪细胞产物的差异,以探讨针灸减肥的机制.设计:分层随机对照设计.单位:南京中医药大学针药结合实验室.材料:选用120只生后45 d雄性SD大鼠,由上海实验动物中心提供,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.盐酸西布曲明胶囊由太极集团涪陵制药厂生产,批号为国药准字X20010279;电针仪为韩氏LH402A穴位神经电刺激仪,由北京华卫产业开发公司生产.方法:实验于2004-1012006-11在南京中医药大学针药结合实验室和南京中医药大学实验动物中心完成.①高脂高能量饲料喂养100只SD雄性人鼠,选择食源性肥胖人鼠54只,分为电针组、药物组、肥胖组,每组18只,并以18只正常饲料大鼠为正常组.②电针组大鼠均以2/15 Hz,4 mA的电针治疗,针刺穴位为同侧的"后三里"、"内庭",每次针一侧2个穴位,隔日交替.以自制的束缚装置崮定,治疗时大鼠处于清醒而不剧烈挣扎状态,治疗时间15 min/d,每6天休息1 d,共观察49 d,治疗42次;药物组采用0.2g/L盐酸西布曲明溶液2.0mg/(kg·d)灌胃;正常组及肥胖组与针刺组同样束缚而不针刺.主要观察指标:①肥胖指标:检测各组大鼠体质量、体长、减重率及脂体比,生化比色法测定血清总胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇及三酰甘油.②胰岛素敏感性指标:酶联免疫法测定空腹血清葡萄糖、胰岛素及胰岛素敏感指数.③脂肪细胞分泌调节物质水平:酶联免疫法测定血清抵抗素、瘦素、脂联素、肿瘤坏死因子α、白介素-6及其可溶性受体水平.结果:纳入大鼠120只,食源性肥胖大鼠模型成功54只及正常组18只均进入结果分析.①肥胖组大鼠体质量、体脂量、胆同醇、三酰甘油明显高于正常组,差异有统计学意义(P＜0.01).电针组大鼠体质量、体脂量、脂体比、胆固醇、三酰甘油低于肥胖组,差异有统计学意义(P＜0.01).药物组大鼠三酰甘油低于肥胖组,差异有统计学意义(P＜0.01).电针组减重率高于药物组,脂体比低于药物组,差异有显著性意义(P＜0.01).②肥胖组大鼠血糖、血清胰岛素明显高于正常组,胰岛素敏感指数低于正常组,差异均有统计学意义(P＜0.01).电针组及药物组血糖和胰岛素水平低于肥胖组,胰岛素敏感指数高于肥胖组,差异有统计学意义(P＜0.01).③电针组大鼠脂联素水半高于肥胖组,差异有统计学意义(P＜0.01).抵抗素、肿瘤坏死因子α水平均低于肥胖组,差异有统计学意义(P＜0.01).药物组大鼠抵抗素水平低于肥胖组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:电针在改变肥胖大鼠脂肪组织异常分泌的产物方面的作用较西布曲明更为明显,这可能是针灸减肥和防治肥胖相关疾病的重要机制之一.
-
肌酸激酶和心率肺活量等指标在篮球运动前后的变化
目的:检测肌酸激酶和心率等指标评估篮球运动负荷条件下机体生理、生化指标的相关变化.方法:①试验对象:试验于2006-03/2006-05在本校篮球场和生理实验室完成.选择篮球号项男子篮球运动员16名(每队8人,不分首发与替补,以其所上场时间来确定被选队员指标),平均体质量(80.6±8.7)kg,平均身高(187.6±6.2)cm,平均年龄(22±2)岁.所有受试对象在进行正式试验前均进行体质检查,并确定无心、肝、肾、肺等器质性病变和遗传病史.试验前所有受试者均知情同意.②试验方法:所有上场运动员(包括替补队员)在进行正式比赛前1 h采肘静脉血2 mL移入放过肝素抗凝的试管内,于比赛结束后即刻(C-2)、运动2,24 h后对上场超过40 min的队员(每队5人)取静脉血2 mL按照同样的方法进行.③试验评估:测定比赛前后生化指标及生理指标的变化.结果:纳入运动员16名,根据运动员在场上时间不低于40 min为依据,排除6名运动员,10名进入结果分析.①在比赛结束后即刻、结束后2,24h所有受试者血清肌酸激酶活性均比赛前有所升高(P＜0.01,P＜0.05).血清乳酸脱氢酶活性随比赛的进行呈现增加趋势,且赛后即刻达到高值,与赛前相比差异显著(P＜0.05),恢复24h后,与运动后即刻值相比差异具有非常显著性意义(P＜0.01).②赛后即刻心率和肺活量值与其他各时间段相比差异均有非常显著性意义(P＜0.01).结论:①篮球运动前后血肌酸激酶和乳酸脱氢酶活性增高,且随运动负荷加大呈正比.②赛后即刻心率大,而肺活量降低,随时间延长,心率、肺活昔可恢复正常.
-
肘关节屈伸肌群等速肌力测试与分析
目的:通过测量肘关节屈肌、伸肌群在不同收缩方式、不同运动速度、不同关节角度时力矩的变化情况,以期用肘关节等速测试的力矩指标米评定肘关节及其周围肌群的功能状态.方法:实验于2006-09在江苏省级机关医院完成.测量了南京体育学院运动系20名男生肘关节屈、伸肌群在等速向心不同运动速度下的肌力参数,向心收缩各测2个不同速度:60(°)/s、120(°)/s.前者每次重复5次,间歇约1 min;后者每次重复10次,间歇约1 min.取大力矩、大力矩角度及上述角度的力矩.观察不同速度下屈、伸肌肌峰力矩比较;不同速度下屈伸肌肌峰力矩的相关分析;不同速度下肌峰力矩角度的比较分析;等速向心收缩的加速、放松时间.结果:①肘关节屈伸肌群等速向心收缩时随着关节给定运动速度的加快,屈肌峰力矩从34.5 N·m减到28.5 N·m,伸肌峰力矩从43.0减到32.7 N·m.②随速度增快,屈肘峰力矩角度增大,伸肘峰力矩角度减小.③当给定运动速度加快时,肘关节屈伸肌的加速时间均随之增长,伸肌的加速时间比屈肌的加速时间短.④前臂与上臂长的比值和伸60(°)/s的峰力矩角度呈负相关.结论:不同速度下,对于肘关节屈肌群而言,屈伸肌比值、肱二头肌、肱肌、肱桡肌、桡侧腕长伸肌和旋前圆肌的加速时间与肱三头肌、肘肌的放松时间、对于屈肌的肌峰力矩具有重要作用,而肱三头肌、肘肌的加速时间与肱二头肌、肱肌、肱桡肌、桡侧腕长伸肌和旋前圆肌的放松时间对于伸肌的肌峰力矩具有重要作用.
-
不同剂量内毒素联合激素建立免股骨头缺血性坏死模型的影像学评估
目的:目前,国内外有很多制备ANFH动物模型的方法,但都存在建立时间长、成功率低、动物死亡率高的问题.实验旨在建立安全、有效的兔激素性股骨头缺血性坏死模型.方法:实验于2006-05/2007-08在解放军北京军区总医院骨科实验室完成.①实验材料及分组:健康成年日本大白兔30只,雌雄不限,体质量(3.0±0.2)kg.采用随机数字表法将其分为3组,即内毒素100,50,20 u g/kg组,每组10只.②实验过程:3组于兔耳缘静脉分别静推内毒素100,50,20 μ g/kg,1/d,共2次.3组都于第2次注射完内毒素后臀肌注射甲基强的松龙20 mg/kg,1次,d,共3次.③实验评估:分别于注射完后2,4,6周时观察股骨头x射线片、MRI、病理组织以及造模动物死亡情况.结果:30只兔全部进入结果分析.①造模结果:4周后经摄片、MRI、病理组织切片检查后,3组所有存活兔子的股骨头都存在不同程度的坏死.②X射线观察:4周后,3组X射线片人多可见股骨头密度不均一.③MRI观察:4周后,3组MRI可见典型的股骨头坏死表现,T2WI出现不均匀高信号,股骨头出现斑点状、硬化透明区等表现.④病理组织学观察:4周后,3组病理组织切片出现骨小梁稀疏变细,结构紊乱,骨髓腔内造血组织明显减少,脂肪细胞体积增大,有的融合成泡状等表现.⑤死亡率:3组的死亡率分别为70%,50%,20%.结论:小剂量(20 μg/kg)内毒素联合激素4周可以成功诱导股骨头缺血性坏死动物模型,而且明显降低实验动物的死亡率.
-
刺激性G蛋白在病理性瘢痕组织中的表达
目的:比较增生性瘢痕组织和正常皮肤组织刺激性G蛋白的表达差异,以明确刺激性G蛋白病理性瘢痕形成中的作用机制及其在哪些细胞中发挥作用.方法:实验于2005-09/2006-12在南昌大学第一附属医院烧伤研究所实验室完成.取10例18～38岁瘢痕整形手术患者术中剩余的全厚正常皮肤和切除的病理性瘢痕组织,采用PR-PCR法检测刺激性G蛋白的基因表达,免疫组织化学法检测G蛋白的表达,比较病理性瘢痕组织与正常皮肤组织间的差异.结果:①PR-PCR法检测发现两种组织均有刺激性G蛋白基因表达,利用凝胶图像处理系统分析,病理性瘢痕和内参照比值高于正常皮肤和内参照(P＜0.05).②免疫组织化学检测后发现两种组织均有刺激性G蛋白的表达,均分布在表皮的基底细胞内、真皮的成纤维细胞内和毛细血管的内皮细胞内.在细胞内表达的部位符合G蛋白的本身性质(胞浆侧),两种组织的表达分布没有明显差异.③大体观察病理性瘢痕组织和正常皮肤的基底细胞刺激性G蛋白表达均为阳性,但无明显差异;真皮的成纤维细胞内和毛细血管内皮细胞内病理性瘢痕的表达强于正常皮肤.结论:刺激性G蛋白可能参与病理性瘢痕中成纤维细胞和毛细血管内皮细胞的增殖调控.
-
离体人皮肤成纤维细胞热损伤后转归的形态学观察
目的:在以往创面愈合研究中,多注意周围正常组织或血液中成纤维细胞的迁入对伤口治愈作用.实验拟验证成纤维细胞热损伤后形态学的变化,为研究"深Ⅱ度烧伤创面自体薄皮覆盖变性真皮"新手术方式提供理论依据.方法:实验于2006-04/2007-04在解放军第三军医大学创伤,烧伤,复合伤国家重点实验室完成.取门诊手术后废弃的小儿包皮,利用体外细胞培养技术对人真皮成纤维细胞进行传代培养,实验分2组.正常组细胞置于37℃水浴30s,实验组细胞采用不同温度(50,51,52,53℃)及不同时间(30,60,90,180 s)处理,采用四甲基偶氮唑盐法测定细胞生存率;倒置显微镜及透射电镜下观察不同时间(3h,1,2,3,4,5,7d)成纤维细胞损伤后的形态;流式细胞仪技术对烫伤细胞周期进行检测.结果:不同温度以及同一温度不同时间条件下,各实验组成纤维细胞的生存率与正常组比较,差异均有显著性意义(P＜0.05).与正常组相比,52℃ 30 s成纤维细胞的牛存率50%,差异显著(P＜0.05).透射电镜观察热损伤后成纤维细胞变圆钝,体积增大,表面有较多突起,胞浆中有大量的异常疏松透亮区.热损伤后成纤维细胞的形态有明显改变,7 d恢复正常.流式细胞仪检测显示成纤维细胞的S期是其热损伤的敏感期,与正常组比,实验组成纤维细胞S期凋亡明显增多(P＜0.01).结论:热损伤后变性的成纤维细胞活性明显降低,形态学及细胞周期发生显著改变,7 d形态基本恢复正常.
-
1,25-(OH)2VitD3促进组织工程骨的血管化和骨化
目的:观察以1,25-(OH)2VitD,为活性因子,与人骨髓闻质成骨细胞、脐静脉血管内皮细胞、珊瑚羟基磷灰石人工骨联合构建组织工程骨时,1,25-(OHhVitD3在三维支架上对成骨细胞的作用及构建组织工程骨的体内快速血管化能力和异位成骨能力.方法:(1)实验材料及对象:实验于2005-09/2006-03在苏州大学细胞与基因教研室完成.取SPF级6-8周龄BALB/cnu雄性裸鼠18只,体质量27-32 g,骨髓来源于健康成人(志愿者)、新生儿脐带取材时经产妇同意.(2)实验方法及评估:①体外实验:体外分离、培养人骨髓间质成骨细胞和脐静脉内皮细胞.人骨髓间质成骨细胞以5×10s L-1,脐静脉内皮细胞以2.5×108L-1按2∶1比例接种至经1,25-(OH)2VitD3处理过的珊瑚羟基磷灰石人工骨上,作为实验组;相同比例接种于单纯珊瑚羟基磷灰石人工骨上为对照组.体外培养3 d后,检测骨钙素含量及碱性磷酸酶活性并始终行光学显微镜观察.②动物实验:18只裸鼠随机摸球法分为两组,9只植入实验组组织工程骨每侧1块,另9只植入对照组组织工程骨每侧1块.术后4,8,12周后取材,行常规组织学、扫描电镜观察,并行植入物新生血管定量分析和成骨的定量判断.结果:纳入裸鼠18只.均进入结果分析.①倒置显微镜下珊瑚羟基磷灰石人工骨周边人骨髓间质成骨细胞、脐静脉内皮细胞均良好生长.组织工程骨构建3 d后,骨钙素含量和碱性磷酸酶活性实验组明显高于对照组(P＜0.05).②组织学观察可见,4周时,各组原始类骨组织均长入支架材料内部.8周时,骨组织成熟与微血管相伴出现.12周时,各组均有成熟骨组织出现.对照组在各时间点微血管量均少于实验组.扫描电镜观察,4周时,实验组大量细胞外基质将细胞包埋,材料表面可见大量微血管并有部分穿入材料内部.对照组虽然细胞外基质也较丰富,但微血管量少.8周时,实验组部分材料表面出现了束状条索样的类骨质结构,可见大量微血管相伴出现.对照组微血管量少.新生血管定量分析显示,4周及8周时两组比较,差异显著(P＜0.05);植入物成骨的定量判断,8周及12周时两组比较差异均有显著性意义(P＜0.05).结论:1,25-(OH)2VitD3作为活性因子通过加强人骨髓间质成骨细胞与脐静脉内皮细胞之间的相互作用,增强了构建的组织工程骨的快速血管化能力和异位成骨能力.
-
核苷酸结合寡聚结构域受体1作为先天免疫识别受体在血管平滑肌细胞激活中的作用
目的:核苷酸结合的寡聚结构域受体1是新近发现的先天免疫细胞内模式识别受体.实验通过观察细菌细胞壁粘肽对血管平滑肌中细胞内核苷酸结合的寡聚结构域受体1激活和表达的影响,探讨核苷酸结合的寡聚结构域受体1介导的先天免疫信号通路在血管平滑肌激活中的作用.方法:实验于2006-06/2007-03在大连医科大学附属二院中心实验室完成.①实验材料:人冠状动脉血管平滑肌细胞购自Cambrex公司.②实验过程:体外培养人冠状动脉血管平滑肌细胞,用核苷酸结合的寡聚结构域受体1激动剂细菌细胞壁粘肽(10 mg/L)刺激0,3,6和24 h.③实验评估:用实时定量反转录-聚合酶链反应检测平滑肌细胞中核苷酸结合的寡聚结构域受体1 mRNA的表达,用酶联免疫吸附法检测细胞培养物上清液中白细胞介素8和肿瘤坏死因子α的浓度.结果:①血管平滑肌细胞在静息状态F表达低水平的核苷酸结合的寡聚结构域受体1.细菌细胞壁粘肽刺激能够引起血管平滑肌细胞中核苷酸结合的寡聚结构域受体1mRNA表达上调(从0.164±0.005增加到0.231±0.027,P＜0.05).②酶联免疫吸附法显示细胞培养物上清液中自细胞介素8和肿瘤坏死因子α的浓度也显著增加[白细胞介素8从(0.12±0.01)μg/L增加到(2.31±0.11)μg/L,肿瘤坏死因子α从(4.22±0.50)ng/L增加到(143.11±12.58)ng/L,P＜0.01].结论:推测血管平滑肌细胞中的核昔酸结合的寡聚结构域受体1介导的先天免疫信号通路被激活,参与了动脉粥样硬化的发生和发展.
-
沿骨干轴线不同长度皮质骨缺损对骨干生物力学性能的影响
目的:皮质缺损的宽度和长度对骨干的生物力学强度均有影响,既往对缺损宽度的研究较多,对缺损长度的研究很少.实验拟验证皮质缺损长度对骨干生物力学性能的影响.方法:实验于2007-10/12在北京大学人民医院创伤骨科实验室完成.(1)实验材料:新鲜成年山羊股骨标本54个,纳入标准:①外观没有破损.②骨十窄处冠状面直径范围在14～17 mm之间,矢状面直径在14～17 mm之间.骨干长度＞120 mm.(2)实验方法;在骨干张力侧制作矩形单侧骨皮质缺损,缺损的宽度分别为骨干冠状面直径的10%和20%,长度分别为缺损宽度的2,3,4,5倍.没有皮质缺损的正常骨作为对照.对标奉进行三点弯曲测试,力学指标包括大负荷、大功耗和断裂负荷.结果:当矩形缺损的宽度为横径的20%,缺损的长度达到宽度的4倍和5倍时,骨干的抗弯曲负荷较对照组降低,P值分别为0.007和0.014;当矩形的宽度为横径的10%,长度达到宽度的5倍时,骨干的抗弯曲负荷与对照组比较,差异显著(P=0.008).两组标本达到破坏时的大功耗均较正常对照降低(P＜0.05,P＜0.01).结论:①骨干抗弯曲能力随缺损长度的增加降低.②从缺损的宽度和长度两个方面分析缺损对骨干的力学影响更为准确.
-
糖尿病患者血管内皮细胞活性因子变化:接受金芪降糖片干预的效应
目的:细胞因子可作用于血管内皮细胞,在糖尿病的血管病变中起重要作用.通过观察金芪降糖片治疗前后血管内皮细胞损伤相关因子的变化,探讨金芪降糖片对糖尿病患者血管内皮细胞活性因子的影响及临床应用价值.方法:①对象:选择2005-03,2006-09在解放军济南军区总医院内分泌科就诊的2型糖尿病患者63例;金芪降糖片由天津中新药业隆顺榕制药厂生产.②分组:患者随机被分为两组:对照组30例,男19例,女11例,平均年龄(56.6±8.9)岁;金芪组33例,男20例,女13例,平均年龄(58.4±7.7)岁.③给药:对照组用常规两药双胍类等降糖药物治疗:金芪组在西药治疗基础上加服金芪降糖片8片,3次,d,连续治疗3个月.④评估:采用ELISA检测两组患者治疗前后血浆中内皮素1、可溶性细胞间黏附分子1,可溶性P-选择素和肿瘤坏死因子α内皮细胞活性因子水平,以及血糖、血脂、糖基化血红蛋白等各项指标的变化.结果:63例患者全部进入结果分析.①与治疗前比较,治疗后金芪组血糖和血脂、糖基化血红蛋白均有显著变化(P＜0.05),对照组仅血糖有明显变化(P＜0.05):与对照组治疗后比较,金芪组血糖、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇和高密度脂蛋白胆固醇都有明显改善(P＜0.05).②与治疗前比较,金芪组治疗后患者血浆中细胞因子水平均显著降低(P＜0.05或P＜0.01),对照组4项指标水平皆无明显变化(P＞0.05);与对照组治疗后比较,金芪组患者血浆中内皮索1、可溶性细胞间黏附分子1、可溶性P-选择素和肿瘤坏死因子α水平均显著降低(P＜0.01).结论:①金芪降糖片可通过降低糖尿病患者血浆中血管内皮细胞活性因子水平,起到保护血管内皮细胞的作用.②中西医结合治疗糖尿病,能有效地延缓糖尿病合并症的发生和发展.
-
淋巴瘤细胞Raji细胞血管内皮细胞生长因子表达及基质胶中ECV304细胞血管形成与雷公藤内酯醇的干预
目的:观察雷公藤内酯醇对淋巴瘤细胞系Raji细胞血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达、合成分泌以及对基质胶中ECV304细胞血管形成的影响.方法:实验于2005-08/2006-02在华中科技大学同济医学院公共卫生学院分子生物学实验室完成.①MTT法检测3.125,6.25,12.5,25,50nmol/L的雷公藤内酯醇在作用12,24,36,48,60,72h对Raji细胞增殖的影响.②RT-PCR法检测12.5,25,50 nmol/L雷公藤内酯醇处理Raji细胞24 h后,细胞VEGFmRNA表达的变化.③ELISA法检测25 nmol4/L雷公藤内酯醇处理Raji细胞24 h后,细胞培养上清VEGF的分泌鼍.④采用血管形成实验检测雷公藤内酯醇对ECV304细胞在基质胶中血管形成的影响.结果:①雷公藤内酯醇以时间和剂量依赖方式抑制Raji细胞增殖,24 h半数抑制浓度为25 nmol/L.②Raji细胞内VEGFmRNA主要为VEGF 165和VEGF121,雷公藤内酯醇明显抑制其表达,呈剂量依赖方式.③雷公藤内酯醇明显抑制gaji细胞VEGF的分泌量(P＜0.01).④Raji细胞培养上清、10 μg/L VEGF处理的Raji细胞培养上清可促进ECV304细胞在基质胶中形成血管,而25 nmol/L雷公藤内酯醇处理的Raji细胞培养上清加入基质胶则未见血管形成.结论:雷公藤内酯醇以时间和剂量依赖性方式抑制淋巴瘤细胞增殖、VEGF的表达分泌及血管形成.
-
双能X线骨密度测定仪测定腰椎铝体模、在体及离体腰椎骨矿密度、含量及含量/椎体宽短期精密度及小变化率差异比较
目的:通过DPX-MD双能X射线骨密度仪测量腰椎铝体模、活体腰椎、带软组织死体腰椎骨矿密度、骨矿含量、骨矿含量/椎体宽的短期精密度及其小变化率差异比较,探索双能X线吸收法骨密度测定仪测定诊断骨质疏松症的敏感指标.方法:实验于2004-05/2006-12在川北医学院人体解剖实验室与川北医学院附属医院内分泌科骨密度室完成.①实验材料:铝体模为双能X线骨密度仪(DPX-MD,美国Lunar公司)所配备的自检模块;3个活体椎体分别来源于38岁骨密度正常男性,40岁骨质疏松症男性,62岁轻微骨量减少女性,均为自愿参与实验的川北医学院附属医院医生;1个带软组织的死体椎体,由川北医学院人体解剖实验室提供.②测量方法及评估:采用的双能X射线骨密度仪测量各椎体的骨密度.3次/d,连续测定5 d.铝体模和死体椎体两端均用小木块固定在6.5 cm的高度,放在15 cm的水浴中,为减少误差由一人操作.由不同骨矿含量、骨矿含量/椎体宽、骨矿密度可得到各自的变异系数,由不同的变异系数可得到有临床意义的小骨矿含量、骨矿含量/椎体宽、骨矿密度变化率,由不同的变异系数及不同的小变化率比较来判断诊断骨质疏松的敏感指标.结果:①铝体模和正常男性椎体的骨矿密度、骨矿含量均高于轻微骨量减少女性椎体、骨质疏松症男性椎体和死体椎体,且以死体椎体骨矿含量低.②各椎体或L2-4骨矿密度变异系数均比骨矿含量、骨矿含量,椎体宽变异系数小.③各椎体和L2-4的有临床意义的小骨矿密度变化率值均比各椎体和L2-4的有临床意义的骨矿含量、骨矿含量/椎体宽变化率值小.结论:从短期精密度及有临床意义的小变化率比较可以看出,无论是仪器的自检模块铝体模还是骨密度正常男性椎体、骨质疏松症男性椎体、轻微骨量减少但有骨质增生女性椎体、严重骨质疏松死体椎体,各椎体和L2-4变异系数值与有临床意义的小变化率值骨矿密度的改变均比骨矿含量、骨矿含量/椎体宽的改变小,那么它在质量控制中受到的影响更小.双能X线骨密度测量仪测定中骨矿密度更能较好反应骨矿含量、骨矿含量/椎体宽变化,是诊断骨质疏松症的敏感指标.
-
去细胞同种异体神经种植许旺细胞的体外实验:组织工程化人工神经应用的可行性
目的:许旺细胞作为种子细胞在组织工程化人工神经制备中的作用已被学术界所接受.胎兔的神经系统已发育完善,而免疫系统尚未成熟,探讨将胎兔许旺细胞植入去细胞同种异体神经桥接体制备组织工程化人工神经修复周围神经缺损的可行性.方法:实验于2005-03/2006-03在河北医科大学第三医院完成.①实验材料:SPF级怀孕28 d的新西兰白兔2只、成年新西兰白兔1只.②实验过程:包括胎兔许旺细胞培养、去细胞神经桥接体的制备以及许旺细胞与去细胞神经桥接体的体外种植3个步骤.使用双酶消化法培养许旺细胞并将其种植于经3%TritonX-100作用96 h后的同种异体神经中.③实验评估:分别于培养的1,3,5 d通过石蜡切片苏木精-伊红染色观察许旺细胞在桥接体中的生长情况.结果:①采用双差速贴壁法去除绝大部分成纤维细胞后在细胞培养的初期使用阿糖胞苷抑制成纤维细胞生长,后期培养液中加入神经生长冈子促进许旺细胞牛长能获取大量许旺细胞且纯度可达90%以上.②用3%Triton X-100作用96 h可去除周围神经中的细胞和髓鞘而保留完整的神经基底膜管和纤维支架结构,并且对神经基底膜主要成分一层粘连蛋白无明显影响.③采用胎兔坐骨神经培养的许旺细胞能在用成年兔坐骨神经制备的去细胞桥神经接体中生长良好,并且有迁移成行的特性.结论:种植许旺细胞重新细胞化的去细胞同种异体神经将可能成为一种理想的组织工程化人工神经.
-
雌激素在体外对大鼠成骨细胞的作用
目的:近来研究表明雌激素除抑制骨吸收外,还具有促进成骨的作用.实验拟观察雌激素在体外对大鼠成骨细胞的影响.方法:实验于2007-03在上海复旦大学放射医学研究所骨代谢研究室完成.①实验材料:1日龄SD新生大鼠(红皮鼠)10只,清洁级,体质量约10 g左右.雌雄不拘.②实验方法:取大鼠颅盖骨机械分离加酶消化法体外分离培养成骨细胞,取传一代细胞.以1.25×1066L-1的密度接种于96孔细胞培养板,培养24h后分为两组,分别为空白对照组和10-8mmol/L雌激素组(加入1×10-8 mmol/L雌二醇),继续培养72 h.③实验评估:碱性磷酸酶染色鉴定成骨细胞;四甲基偶氮唑盐法检测成骨细胞的增殖能力;PNPP法测定碱性磷酸酶活性.低倍镜下测量矿化结节面积并计算面积比,观察雌二醇对矿化能力的影响.结果:①体外分离培养的成骨细胞碱性磷酸酶染色成阳性.原代培养的细胞纯率超过90%.②与空白对照组相比,10-3mmol/L雌激素组成骨细胞增殖能力及碱性磷酸酶活性显著提高(P＜0.01);10-8smmol/L雌激素组单位细胞数碱性磷酸酶活性较空白对照组有上升趋势,但差异无显著性(P＞0.05).③与空白对照组相比,10-8mmol/L雌激素组矿化面积及矿化面积比显著增加(P＜0.01).结论:雌二醇在体外可促进大鼠成骨细胞生长和增殖,提高碱性磷酸酶活性,并促进骨矿化物质在骨内沉积.
-
心肌梗死大鼠血管生成过程中血管生成素1及其Tie2受体的表达
目的:通过检测正常心肌组织及心肌梗死后血管生成素1及其受体Tie2受件mRNA的表达水平,探讨其在心肌梗死后的血管新生过程的作用.方法:实验于2006-04/2007-04在北京大学医学部生物化学与分子生物学基因组实验室完成.将40只雄性SD大鼠随机分为急性心肌梗死组和假手术组,急性心肌梗死组通过结扎前降支建立心肌梗死模型,假手术组只穿线不结扎.于术后3,7,14,28d旭个时间点,每组取5只处死,取心脏左室裁壁同一部位,提取总RNA,用RT-PCR的力法,以GAPDH基因为内参,进行半定量分析检测正常心脏及梗死后血管生成素Ⅰ及Tie2 mRNA的表达;同时用免疫组化的方法检测各时间点梗死区域以及梗死周边区域血管数量.实验过程中动物处置符台动物伦理学标准.结果:40只大鼠进入结果分析.血管生成素1及Tie2在正常心肌组织中均有所表达.在心肌梗死后的28d内,血管生成素1维持在相对不变的水平,而ne2的表选在心肌梗死后3 d略有升高,于7 d后达顶峰,14 d后恢复正常;急性心肌梗死后7 d,梗死区及梗死周边区域的血管数量均明显增多,并不随时间的延长而改变,维持在同一水平.结论:心肌梗死后Tie2受体的表达上调,与血管生成的时间相吻合,提示其在心肌梗死后的血管生成和稳定过程中起了一定的作用.
-
血管内皮生长因子C的研究进展
学术背景:不少研究表明血管内皮生长因子C与恶性肿瘤的淋巴道转移密切相关.血管内皮生长因子C可选择性地诱导淋巴管的增生,在调节血管生成方面与血管内皮生长因子有相同的作用.目的:概述血管内皮生长因子C的结构、分布、受体、功能以及在肿瘤淋巴道转移中的可能作用途径,探索肿瘤细胞的生长及转移因素.检索策略:由作者应用计算机检索Medline数据库、PubMed数据库1995-01/2004-12有关血管内皮生长因子C的文献,限定文章语言种类为英文;另外检索中国生物医学文献数据库及中国学术期刊全文数据库1995-01/2004-12有关血管内皮生长因子C的文献,限定文章语言种类为中文.并辅以文献追溯、手工检索等方法共收集到公开发表的文献405篇.文献纳入标准:①研究对象为人类器官肿瘤,样本量≥0.②对于相似内容文献选择新的义献.排除标准:①动物研究.②重复报告、质量较差的文献.文献评价:共32篇满足纳入标准,文献来源于综述、个例报道及专题论著.资料综合:①血管内皮生长因子C及其受体血管内皮生长因子受体3是目前发现的惟一一组调节胚胎组织淋巴管生成和成熟个体淋巴管生理功能的调节因子,它仅在正常成人呼吸道和消化道的内分泌细胞以及内分泌腺细胞有少量表达.②在肿瘤组织中町见肿瘤周边新生淋巴管、扩张的淋巴管、有癌栓的淋巴管和有肿瘤转移淋巴结内淋巴管内皮细胞血管内皮生长因子受体3呈高表达.③血管内皮生长冈子C/血管内皮生长因子受体3调控系统可调节肿瘤间质血管网的形成和淋巴管的生成.结论:①血管内皮生长因子C和(或)血管内皮生长因子受体3在结直肠癌、前列腺癌、胃癌、食道癌、乳腺痛等肿瘤细胞表达均增高,且与肿瘤细胞的转移关系密切.②一些特异作用于淋巴管内皮的生长因子及受体(如血管内皮生长因子C和血管内皮生长因子受体3)为研究淋巴转移开辟了新途径.
-
骶髂关节错位的理论思考
目的:回顾总结和分析骶髂关节错位的临床状况,为临床诊治提供依据.方法:对骶髂关节错位相关文献进行收集、整理、分析和总结.结果:①在病因方面,主要以外力作用、性别和年龄因素等为主.②在病理方面,主要有错位关节局部软组织损伤、错位关节周围无菌性炎症、水肿刺激和压迫神经、血管,以及骶髂关节滑膜嵌顿等相关机制.③在诊断方面,目前主要依据有无使骶髂关节错位的外伤史、症状、体征及X射线摄片检查,并排除具有相似表现的疾病后作出诊断.④存在问题主要有称呼较为混乱、诊断和疗效评价方面缺少客观指标等.结论:对骶髂关节错位的病因、病理、临床表现和诊治,中医有一套比较完整的体系,对该症的治疗手法有特色,但诊疗标准中缺少客观化的指标,需要进一步的完善.
-
利用有序Probit模型进行健康需求分析
目的:利用有序Probit模型建立健康需求模型,分析社会经济因素对健康需求的影响,为相关的卫生政策制定提供参考.方法:按性别、地区,采用分层抽样方法获得样本,其中男性506人,女性470人,来自城镇和农村的分别为450人和526人.以健康状态为因变量,以年龄、收入、教育、婚姻以及健康行为等因素为自变量,在STATA软件中,利用有序Probit模型进行分析.结果:①在两个模型中,收入、教育、年龄差异都具有显著性意义(P＜0.05).健康需求随着收入和教育程度的增加而增加,年龄增加则卫生需求减少:男性比女性的健康需求更大,因为男性是家庭的主要收入者,供其自由支配的收入较多;家庭孩子数量作为一个增加健康需求有意义的变量可能是由于随着孩子数量的增加,父母的责任心和健康时间增加,导致对健康的需求增加.②常规的吸烟和饮用白酒对健康需求有负的影响,因为这两个变量增强了人们对健康的轻视.③相反,体育锻炼使人们更加重视健康,因而该变量对健康需求有正向影响.结论:制定卫生政策应该考虑社会经济冈素的影响,利用相关模型可以使政策制定更加科学合理.
-
单髋关节炎对髋部骨密度的影响
目的:髋部骨密度可能受到髋关节炎的影响.实验拟验证单髋关节炎对髋部骨密度的影响.方法:选择2005-01/2006-12在本科门诊就诊的单侧髋关节炎患者41例,男19例,女22例,年龄31～77岁;左侧发病者29例,右侧发病者12例.参照1995年美国风湿病协会修订的髋关节骨性关节炎的诊断标准,符合单髋关节炎的诊断,凡是可能影响患者双侧骨密度不均衡的情况被排除.对入选患者进行双侧髋部(股骨颈区、Ward's 三角区和大转子区)骨密度榆查.结果:纳入单侧髋关节炎患者41例,均进入结果分析.①患侧髋部平均骨密度高于健侧(0.019±0.050)g/cm2,差异具有显著性意义(P＜0.05);其中,股骨颈区双侧差别为(0.037±0.072)/g/cm2,Ward's 三角区为(0.024±0.097)g/cm2,大转子区为(0.009±0.049)g/cm2.②左侧发病患者患侧与健侧髋部平均骨密度差值为(0.013±0.048)g/cm2,右侧发病患者患侧与健侧平均骨密度差值为(0.033±0.055)g/cm2,左侧患病或右侧患病的差异无显著性(P=0.262).③线性相关分析显示.双侧骨密度差异与病程无相关性(r=0.063,P=0.069)结论:髋关节炎可能导致局部骨密度增高,其中股骨颈区与健侧差异为明显,Ward's三角区和股骨大转子区与健侧的差别依次缩小.
-
半定量反转录-聚合酶链反应分析大鼠不同组织肌肉生长抑制素基因的表达
目的:有许多实验已证实,肌肉牛长抑制素基因在骨骼肌中有特异性表达,在胚胎成体心脏以及乳腺组织中也检测到表达;但也有报道心脏、肺、脑、肾脏等多种组织中均未检测到肌肉生长抑制素的表达.本实验拟验证肌肉生长抑制素基因在大鼠不同组织中的表达情况.方法:实验于2006-11/2007-05在新乡医学院分子生物学实验室完成.①实验动物:2月龄清洁级SD大鼠,体质量240～280g.②实验方法:采用Trizol试剂从大鼠的肺脏、脑、骨骼肌和心脏组织中提取总RNA.③实验评估:采用半定量反转录-聚合酶链反应技术检测人鼠肿、脑、骨骼肌和心脏组织中肌肉牛长抑制素基因的表达情况.结果:在肺、骨骼肌和心脏组织中均检测到肌肉生长抑制素的表达,以骨骼肌中的表达量高,而在脑中未检测到.结论:肌肉生长抑制素在各个组织中表达情况不一,主要在骨骼肌中进行表达,是组织差异性表达基因.
-
脂质体介导基因转染人精子膜蛋白PH20DNA疫苗质粒向小鼠骨骼肌导入
目的:精子膜蛋白PH-20分布在精子表面,在受精过程中起重要作用,可作为免疫避孕候选疫苗.采用脂质体介导基因转染法将pcDNA3.1(+)-hPH20DNA疫苗质粒导入小鼠骨骼肌中,检测目的基因hPH-20在体内的表达水平.方法:实验于2006-06/2007-02在郑州大学解剖学实验室完成.①清洁级健康BALB/C小鼠12只,随机数字表法分为重组质粒组、空载体组、生理盐水组,4只,组,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.已构建好的pcDNA3.1(+)-hPH20重组质粒由本室保存.②实验方法:质粒提取后,用精胺盐酸去除内毒素,鲎试剂榆测晕阳性代表去除成功.取少量质粒行琼脂糖电泳鉴定纯度,用紫外分光光度计测量质粒DNA的含量.每只小鼠于股四头肌分点注射利多卡因预处理3 d.重组质粒组将脂质体包裹的peDNA3.1(+)-hPH20 DNA缓慢注射于股四头肌内,200μg/只.空载体组单纯将pcDNA3.1(+)缓慢注射到股四头肌内,200 μ g/只.生理盐水组于相同部位缓慢注射等鼍生理盐水.重组质粒组分别于注射后第4,7,11,16天以断颈法各处死1只小鼠,空载体组、生理盐水组小鼠均于注射后第11天同法处死.迅速取股内侧肌肉30mg,研磨成粉末状,RT-PCR法检测目的基因hPH-20 mRNA在体内的表达.结果:①提取质粒琼脂糖凝胶电泳检测结果:提取的质粒成功去除内毒素后,琼脂糖凝胶电泳显示质粒纯度较高,绝大部分处于超螺旋状态,有利于体内转基因的表达.紫外分光光度计测量质粒DNA的含量(A 260/A280)为1.8～2.0.②目的基因hPH-20mRNA体内表达RT-PCR检测:重组质粒组注射后第4天即可检测到1530 bp特异性条带,第7天表达增强,第11天达到高峰,第16天表达下降.空载体组、生理盐水组各时间点均未见特异性条带.结论:脂质体介导基因转染法能够高效将peDNA3.1(+)-hPH20 DNA疫苗质粒导入小鼠骨骼肌中,且hPH-20基因于注射后11 d呈峰值表达.
-
胰岛素样生长因子Ⅰ对豚鼠巩膜成纤维细胞增殖的影响
目的:研究表明,体内一定浓度的生长因子是保证眼球正常发育的必要条件,过少或过量都会引起巩膜的异常改变.实验拟进一步验证胰岛素样生长因子Ⅰ对体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞生长的影响.方法:实验于2006-0912007-03在郑州大学基础医学院省肿瘤病理学重点实验室完成.①实验材料:出生3 d内3色豚鼠后部巩膜组织由郑州大学基础医学院动物实验中心提供;实验用胰岛素样生长因子Ⅰ为Sigma公司产品.②实验过程及评估:采用器官组织块培养法获取原代巩膜成纤维细胞,选取传3,4代的豚鼠巩膜成纤维细胞用于实验;采用倒置相差显微镜下观察细胞形态并采用免疫化学染色法进行细胞鉴定:应用四甲基偶氮唑盐比色法和流式细胞仪分析技术,观察不同质量浓度胰岛素样生长因子Ⅰ(0.1,0.5,5,10,50 μg/L)对体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞生长周期的影响.结果:①巩膜成纤维细胞鉴定:倒置相差显微镜下观察,细胞透亮呈梭形,在细胞密度较低时细胞排列成网状,密度较高时呈束状:波形蛋白染色阳性.胞浆内可见棕黄色阳性反应产物,证实所培养的细胞为巩膜成纤维细胞.②体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞增殖和细胞生长周期:0.5,5,10μg/L的胰岛素样生长因子Ⅰ能促进豚鼠巩膜成纤维细胞增殖,呈剂量依赖性(F=84,510,P=0.000＜0.05),佳质量浓度为10 μg/L.流式细胞仪结果显示,胰岛素样生长因子Ⅰ处理48 h后,与对照组比较,巩膜成纤维细胞G0-G31期百分比降低(78.2%下到64.5%,P＜0.05),而s期百分比显著升高(10.4%上升到16.4%,P＜0.05),增殖指数百分比增高(27.8%增高到56.5%,P＜0.05).结论: 在一定浓度范围内外源性胰岛素样生长因子Ⅰ可以促进体外培养的豚鼠巩膜成纤维细胞增殖.
-
血浆内皮素水平与绝经后骨质疏松症患者骨密度的相关性
目的:绝经后骨质疏松症的发生与内皮素的生理学及病理学作用机制之间可能存在着某些相关性.试验拟揭示血浆内皮素水平的改变与绝经后骨质疏松症患者骨密度水平变化可能存在的相关联系.方法:①试验对象:选择2002-06/2005-09在本院住院的64例绝经后骨质疏松症患者.年龄49～70岁,病程1～15年;患者对试验知情同意.纳入标准:参考世界卫生组织(WHO)制订的骨质疏松症标准.所有纳入病例均排除以下患有引起继发性骨质疏松症的各种内分泌疾病者(如柯兴氏病、甲状腺功能亢进、甲状旁腺功能亢进、甲状腺囊肿或机能低下、糖尿病等);其他严重疾病干扰骨代谢者;测试前3个月内未使用过雌激素、降钙素、一氧化氮、糖皮质激素等干扰骨代谢或对内皮素有影响作用的药品;测试前1年内无骨折;患有严重心脑血管等与内皮素水平相关密切之疾病及肝肾功能异常者.②试验方法及评估:采用单盲法,用同归相关研究方法进行前瞻性临床试验研究,对所有受试对象进行血浆内皮素水平及骨密度等指标的测定,并对其结果进行回归相关分析,同时画出其散点图.结果:纳入64例绝经后骨质疏松症患者,均进入结果分析.骨密度值的变化与血浆内皮素水平呈显著负相关,回归系数r=0.284＜0,P=0.023＜0.05.而散点图显示,两者负相关意义不甚显著,无明显相关曲线.结论:内皮素与骨密度之间存在相互影响的关系,内皮素水平的异常变化可导致骨质疏松症的发生.
