中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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牙周膜干细胞分化、增殖特性与牙周组织再生
背景：牙周膜干细胞是牙周组织再生工程中理想的种子细胞之一，有关牙周膜干细胞的来源、生物学特性及影响因素等研究成为热点问题。目的：就近年来牙周膜干细胞的研究现状、生物学特性、功能影响因素及其在再生医学中的应用等研究进展作一综述，并对其应用前景及目前存在的问题进行讨论，为相关体内研究提供理论和实验依据。方法：由第一作者在PubMed和万方数据库检索2002至2015年有关牙周膜干细胞分化、增殖特性的相关英文和中文文献。中文检索词为“牙周膜干细胞，牙周组织，增殖，分化”，英文检索词为“periodontal ligament stem cel，periodontal tissue，proliferation, differentiation”，终纳入47篇文献。结果与结论：牙周膜干细胞具有成纤维、成脂、成骨、成牙骨质分化的能力，细胞生长因子对牙周膜干细胞的增殖分化起重要作用，成纤维细胞生长因子、血管内皮生长因子和胰岛素样生长因子均可促进牙周膜干细胞增殖。干细胞载体生物膜材料的应用也能有效引导牙周组织再生，牙周膜干细胞的分离培养及其影响因素等还有待进一步完善，将干细胞与生物膜材料、生长因子联合应用达到理想的牙周组织功能性再生是今后的研究重点。
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间充质干细胞在炎症免疫调节中的作用及应用进展
背景：研究表明，间充质干细胞的主要功能有直接参与损伤修复，分泌生长因子，调节免疫和炎症，抗氧化应激等，可用于治疗多种急、慢性疾病。目的：综述间充质干细胞在炎症免疫调节中的研究进展。方法：以“干细胞，间充质干细胞，免疫调节，炎症，免疫细胞，炎症因子，治疗”为中文检索词，以“stem cels，mesenchymal stem cels，immune regulation，inflammation，immune cels，inflammatory factors， treatment”为英文检索词，在万方、中国知网期刊全文数据库和PubMed数据库检索2005年1月至2015年8月有关干细胞参与炎症免疫调节的文献。排除陈旧性和重复性研究，终纳入40篇文献进行综述。结果与结论：间充质干细胞因其具有免疫调节及多向分化的特性，越来越受到临床的重视，同时间充质干细胞易于从不同组织中获取并且具有良好的体外扩增能力，使得其在组织损伤炎症与修复的临床运用中具有广阔的前景。作为有希望进入临床应用阶段的种子细胞，间充质干细胞在许多疾病的治疗中表现出了它的优越性，特别是对于免疫调节失衡导致的炎症性相关疾病的治疗中表现出良好的效果。相信在未来的细胞生物治疗领域，间充质干细胞将占有重要的地位。
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脐带间充质干细胞移植对不同证型系统性红斑狼疮患者的效果分析
背景：系统性红斑狼疮按中医辨证分为热毒炽盛等4个症型，治疗以补肾养阴，清化淤毒为主，但仍有许多患者治疗效果不佳。间充质干细胞具有多向分化、造血支持和免疫调节的功能，目前已有多项研究用于治疗难治性、复发性系统性红斑狼疮，取得良好疗效。目的：探讨脐带间充质干细胞移植对不同证型系统性红斑狼疮患者的疗效。方法：系统性红斑狼疮患者21例，经中医辨证分成热毒炽盛证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证及气滞血瘀证4型，分别统计患者脐带间充质干细胞移植前后各型的临床及实验室指标变化。结果与结论：脐带间充质干细胞移植1，3，6个月均可有效减少系统性红斑狼疮患者实验尿蛋白含量，降低系统性红斑狼疮疾病活动指数评分(P<0.01)。与移植前比较，移植脐带间充质干细胞后1，3，6个月可显著减少肝肾阴虚型患者尿蛋白含量(P <0.01)，移植后1，3个月对热毒炽盛及气滞血瘀型尿蛋白含量为轻度减少(P <0.05)，脾肾阳虚型患者在植后1个月时的尿蛋白含量轻度减少(P <0.05)。脐带间充质干细胞移植可提高所有中医分型患者的血浆白蛋白含量(P <0.01)，其中对热毒炽盛型效果稍差(P <0.05)。脐带间充质干细胞移植后各型患者外周血血小板有上升趋势，但与移植前相比差异无显著性意义。结果说明，脐带间充质干细胞移植治疗系统性红斑狼疮有效，对不同症型的系统性红斑狼疮患者的疗效有一定的差异。
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人脐带源间充质干细胞向急性肾损伤肾脏的归巢及保护作用
背景：多项研究表明间充质干细胞具有治疗急性肾损伤潜能，脐带源间充质干细胞具有干细胞的共性而且优点很多，如容易分离培养、体外扩增快、免疫原性低、不存在伦理问题等，因此越来越受到国内外研究者的重视。目的：观察人脐带源间充质干细胞对急性肾损伤大鼠肾组织的修复作用。方法：将30只大鼠随机分为3组，正常对照组、模型对照组、人脐带源间充质干细胞移植组。正常对照组大鼠仅做暴露肾脏处理，模型对照组、人脐带源间充质干细胞移植组大鼠夹闭双侧肾蒂45 min，细胞移植组手术完成后尾静脉注射经DAPI标记的脐带源间充质干细胞1 mL，模型对照组注射等量的生理盐水。7 d后处死大鼠，全自动生化仪法检测血肌酐、尿素氮水平；取左肾于光镜下观察肾组织病理改变；取右肾于免疫荧光显微镜下观察肾组织上DAPI阳性细胞数。结果与结论：细胞移植组与模型对照组比较血清肌酐、尿素氮水平明显降低(P <0.05)，提示人脐带源间充质干细胞对肾功能有一定改善作用；细胞移植组与模型对照组比较病理情况明显好转，肾小管坏死评分指数明显降低；细胞移植7 d后肾组织冰冻切片上仍可见散在分布的蓝色荧光细胞。结果表明人脐带源间充质干细胞可向损伤的肾小管上皮迁移，对肾组织起到保护和促进修复作用。
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针刺联合神经干细胞移植对脑性瘫痪幼鼠模型的作用机制
背景：针灸治疗脑性瘫痪效果显著，神经干细胞治疗也可以改善脑性瘫痪症状，对于针灸和神经干细胞联合治疗脑性瘫痪的研究较少。目的：观察针刺和神经干细胞联合治疗对脑性瘫痪鼠的影响及其作用机制。方法：建立幼鼠脑性瘫痪模型，分别给与单纯针刺、单纯神经干细胞移植、针刺和神经干细胞联合治疗，同时设正常对照组和模型组作对比。结果与结论：与模型组、单纯针刺组、单纯神经干细胞移植组相比，针刺和神经干细胞联合治疗组的脑性瘫痪幼鼠行为学评分明显改善(P <0.05)，神经细胞数量和Bcl-2蛋白表达增高(P <0.05)，凋亡神经细胞数量和Bax蛋白表达降低(P <0.05)。模型组、单纯针刺组、单纯神经干细胞移植组上述各指标变化差异不显著。结果说明，针刺+神经干细胞联合治疗可以明显改善脑性瘫痪幼鼠的运动学习和记忆能力，减轻神经细胞凋亡，其机制可能与其抑制Bax蛋白表达，上调Bcl-2蛋白表达有关。
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骨髓间充质干细胞移植修复慢性阻塞性肺病气道损伤
背景：间充质干细胞能够分化为肺实质细胞并参与肺部损伤的修复，为间充质干细胞在慢性阻塞性肺病中的应用提供了新的方法。目的：观察骨髓间充质干细胞移植对大鼠慢性阻塞性肺病气道损伤的修复作用。方法：将24只雌性大鼠随机分为4组：①骨髓间充质干细胞移植组(12只)：采用熏烟+脂多糖法建立慢性阻塞性肺病大鼠模型，于造模后第1天经尾静脉输注1 mL CM-Dil标记的骨髓间充质干细胞。②骨髓间充质干细胞对照组(4只)：在第1天和第14天经气管注入生理盐水300μL，经尾静脉输注1 mL CM-Dil标记的骨髓间充质干细胞。③慢性阻塞性肺病模型组(4只)：采用熏烟+脂多糖法建立慢性阻塞性肺病大鼠模型，于造模后第1天经尾静脉输注1 mL PBS。④健康对照组(4只)：在第1天和第14天经气管注入生理盐水300μL，经尾静脉输注1 mL PBS。在各组大鼠注射骨髓间充质干细胞后的第1，7，15，30天，进行病理学和血清学检测。结果与结论：①苏木精-伊红染色结果显示：骨髓间充质干细胞移植组大鼠肺气肿和气道病变较慢性阻塞性肺病模型组轻，但较骨髓间充质干细胞对照组和健康对照组严重。②移植后第1天，骨髓间充质干细胞移植组外周血白细胞总数和中性粒细胞比例高于骨髓间充质干细胞对照组和健康对照组(P <0.05)，随着时间延长，骨髓间充质干细胞移植组白细胞总数和中性粒细胞比例不断降低。③移植后第1天，骨髓间充质干细胞移植组外周血白细胞介素10水平低于骨髓间充质干细胞对照组和健康对照组(P <0.05)，肿瘤坏死因子α和粒细胞集落刺激因子水平高于骨髓间充质干细胞对照组和健康对照组(P <0.05)。随着移植时间的延长，骨髓间充质干细胞移植组外周血肿瘤坏死因子α水平不断降低，白细胞介素10水平不断升高，粒细胞集落刺激因子水平先升高再降低，其中第7天水平高。④CM-Dil染色联合免疫组化检测提示，部分 CM-Dil阳性细胞同时CC16表达阳性。结果显示经尾静脉注射骨髓间充质干细胞能够改善慢性阻塞性肺病大鼠的肺部病理损伤，通过分化为气管黏膜上皮细胞以及参与免疫调节对气道进行修复。
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骨髓间充质干细胞与新型神经导管复合材料修复周围神经缺损
背景：随着医学模式的不断发展进步，人们对于外周神经缺损的治疗以及后期康复水平提出更高的要求，这就使得以干细胞培养为基础的神经组织工程技术为神经缺损治疗提供了新策略。目的：探讨骨髓间充质干细胞与新型神经导管复合材料修复周围神经缺损的可行性。方法：选取清洁级纯种新西兰大白兔50只，采用随机数字表法分为实验组与对照组，每组25只，于兔前肢桡骨中段约15 mm处造成外周神经损伤，造模后1周，实验组外周神经损伤处移植骨髓间充质干细胞联合新型神经导管复合材料，对照组外周神经损伤处移植骨髓间充质干细胞。移植后4周，取神经损伤处的神经纤维长约5 mm，进行苏木精-伊红染色和扫描电镜观察，对比两组再生神经组织内神经纤维的密度和直径。结果与结论：实验组神经纤维密度明显高于对照组，神经纤维直径明显低于对照组，组间相比差异有显著性意义(P <0.05)；实验组再生神经组织表面细胞数较多，细胞生长状态良好，体积较大，胞体发出多个突起，并且细胞之间相互连接交织成网状，其轴突较长和较粗，呈典型的神经元样细胞表现，且生长密度和状态优于对照组，可见骨髓间充质干细胞与新型神经导管复合材料可以用于修复周围神经缺损，且效果确切。
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人参皂苷诱导骨髓间充质干细胞促进创伤性颅脑损伤的神经再生
背景：以往研究表明骨髓间充质干细胞治疗神经疾病方面已经取得了一定成效，能明显促进神经功能改建，但关于基因及药物调控的相关研究目前尚未取得突破性进展。目的：探讨人参皂苷诱导骨髓间充质干细胞分化对创伤性颅脑损伤后神经再生的影响。方法：采用液压冲击法建立大鼠颅脑创伤模型，随机分为颅脑损伤组、骨髓间充质干细胞组、人参皂苷诱导分化的骨髓间充质干细胞组。移植后2周采用Western blot检测创伤脑组织神经生长因子及脑源性神经营养因子表达水平，免疫组织化学法检测BrdU标记的阳性细胞数量；移植后1，3 d及1，2周进行动物神经学缺损评分。结果与结论：人参皂苷诱导分化的骨髓间充质干细胞组大鼠脑创伤组织神经生长因子及脑源性神经营养因子蛋白表达水平明显高于骨髓间充质干细胞组和颅脑损伤组(P <0.05)；人参皂苷诱导分化的骨髓间充质干细胞组BrdU标记的阳性细胞数量明显多于骨髓间充质干细胞组和颅脑损伤组(P <0.05)；移植后3 d及1，2周，人参皂苷诱导分化的骨髓间充质干细胞组大鼠神经功能障碍评分低于骨髓间充质干细胞组和颅脑损伤组(P <0.05)。结果表明经人参皂苷诱导分化后的骨髓间充质干细胞移植可以促进创伤性颅脑损伤大鼠的神经再生，较单独应用骨髓间充质干细胞移植效果显著。
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神经干细胞移植治疗坐骨神经半切断神经病理性疼痛的佳剂量
背景：有研究表明神经干细胞移植治疗神经病理性疼痛有一定效果，但神经干细胞移植数量对神经病理性疼痛的疗效并不确切。目的：观察不同数量神经干细胞鞘内注射对坐骨神经半切断大鼠神经病理性疼痛及脊髓背角、背根神经节胶质源性神经营养因子表达的影响。方法：选取1只孕14-16 d SD大鼠制备神经干细胞悬液，分别以细胞数1×103，1×104，1×105，1×106，1×107经坐骨神经半切断伤模型大鼠鞘内注入30μL，并设置模型组和假手术组作对照。记录术前1 d，术后1，3，7，14，21 d机械痛及热痛阈；术后7，21 d免疫组织化学与RT-PCR检测同侧脊髓背角及背根神经节胶质源性神经营养因子的表达。结果与结论：与假手术组比较，其他各组术后1 d痛阈下降，术后7，14 d低(P <0.05)；与模型组比较，术后7 d，随着移植神经干细胞的浓度不断增加，神经干细胞1×104，1×105，1×106，1×107组痛阈逐渐升高，脊髓背角及背根神经节胶质源性神经营养因子表达逐渐上调(P <0.05)；术后21 d，神经干细胞1×105，1×106，1×107组痛阈均与术前差异无显著性意义，但其胶质源性神经营养因子表达在神经干细胞1×105组高(P <0.05)。说明鞘内注射神经干细胞能缓解大鼠的神经病理性疼痛，注射剂量以1×105神经干细胞效果佳。
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羊水干细胞诱导肾移植免疫耐受及对氧化应激的影响
背景：干细胞在器官移植中诱导免疫耐受、延长移植物的存活时间、减轻排斥反应的作用已成为国内外众多学者研究的热点。目的：以供体羊水干细胞诱导异基因大鼠肾脏移植免疫耐受，探讨免疫耐受的形成机制。方法：分离培养Wistar大鼠羊水干细胞。选择雄性近交系Wistar大鼠和SD大鼠分别作为肾移植的供、受体，共分4组：假手术组(健康纯系雄性SD大鼠)、同系肾移植组(健康纯系雄性SD大鼠作供受体)、对照组(异系移植组加生理盐水)和实验组(异系移植组加羊水干细胞输注)。建立肾移植模型后，实验组由阴茎静脉缓慢推注3×109 L-1羊水干细胞1 mL，对照组则缓慢推注生理盐水1 mL。术后第5天检测血清中肌酐、尿素氮、白细胞介素2、干扰素γ水平及氧化应激指标，流式细胞术检测外周血CD4和CD8淋巴细胞百分比，观察移植肾的病理变化。结果与结论：实验组大鼠血清中尿素氮、肌酐、白细胞介素2、干扰素γ及氧化应激指标和尿蛋白定量、外周血淋巴细胞亚群CD4+，CD8+百分比及CD4+/CD8+比值显著低于对照组，而肌酐清除率则显著高于对照组，肾脏病理损害程度明显轻于对照组。结果显示羊水干细胞可以诱导大鼠肾移植免疫耐受，同时还可以抑制氧化应激水平，改善肾功能，减轻肾损害。
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同种异体与自体血清对骨髓基质干细胞的增殖效应
背景：传统的细胞培养方法大多采用胎牛血清作为营养支持，其存在传播疾病的风险和免疫排斥反应。寻找胎牛血清替代物并建立规范、安全、高效的成人骨髓基质干细胞体外培养体系刚刚起步，有待进一步研究。目的：探讨AB血清、自体血清替代胎牛血清体外培养人骨髓基质干细胞的效果。方法：从成人骨髓穿刺液中分离人骨髓基质干细胞，分别用含体积分数10%AB 血清、自体血清和胎牛血清的基础培养基培养人骨髓基质干细胞，取第3代细胞进行相关指标检测。结果与结论：相差显微镜下见 AB 血清组细胞先达到汇合；流式细胞仪检测细胞表面抗原，各组均符合骨髓干细胞表型，纯化程度良好；Alamar Blue法显示AB血清组平均荧光强度高，促增殖效率高；Annexin V-FITC法显示各组细胞凋亡率均在5%以下，生长状态良好；碱性磷酸酶染色、钙结节和油红O染色结果显示，各组细胞均保持了成骨、成脂分化能力。AB血清对人骨髓基质干细胞的增殖作用较胎牛血清、自体血清明显增强。AB 血清有望替代胎牛血清建立符合骨组织工程临床应用要求的体外成人骨髓基质干细胞培养体系。
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不同生长因子诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型转化的机制
背景：关节软骨损伤后，自身修复能力十分有限，以往医学手段无法对其进行再生修复，利用干细胞治疗软骨损伤彻底扭转了这一局面。目的：探讨不同生长因子诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞表型的转化机制。方法：取第5代大鼠骨髓间充质干细胞，利用不同的生长因子及生长因子组合对大鼠骨髓间充质干细胞进行诱导，分别为TGF-β1组、TGF-β1+IGF-1组、BMP-2+IGF-1组、TGF-β1+BMP-2组、TGF-β1+IGF-1+BMP-2组、空白对照组。诱导后21 d进行阿尔新蓝染色和茜素红染色，RT-PCR检测Ⅱ型胶原mRNA表达。结果与结论：阿新蓝染色观察可见细胞胞浆与间质存在异染情况，蛋白多糖呈绿色表达，经茜素红染色未见橘红色钙结节。初步推断，骨髓间充质干细胞已分化形成软骨细胞，不表达骨细胞表型。空白对照组Ⅱ型胶原mRNA表达呈阴性。与TGF-β1组比较，BMP-2+IGF-1组Ⅱ型胶原mRNA表达显著偏低，TGF-β1+BMP-2组和TGF-β1+IGF-1+BMP-2组Ⅱ型胶原mRNA表达显著偏高(P <0.05)；且TGF-β1+IGF-1+BMP-2组Ⅱ型胶原mRNA表达显著高于其他各组(P <0.05)。结果表明，转化生长因子β1具备单独诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化的能力，采用胰岛素样生长因子1、骨形态发生蛋白2、转化生长因子β1在诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化时具有协同作用，可以发挥出大的诱导软骨分化效应。
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骨髓间充质干细胞与壳聚糖复合修复关节软骨损伤
背景：创伤等导致的关节软骨缺损是国内外骨科界面临的难题，组织工程学技术为软骨缺损的修复提供了新方法。目的：探讨壳聚糖-骨髓间充质干细胞复合材料修复兔膝关节软骨缺损的可行性。方法：将培养的兔骨髓间充质干细胞种植到壳聚糖支架上体外构建壳聚糖-骨髓间充质干细胞复合材料，移植到兔关节软骨缺损处为实验组，不予以特殊处理为对照组。术后6，12周，大体观察以及甲苯胺蓝染色评定两组软骨组织修复情况。结果与结论：术后6周，对照组仅有纤维组织增生，实验组关节软骨缺损处有软骨样组织生成。术后12周，对照组软骨缺损边缘可观察到少量类透明软骨组织，实验组缺损区完全覆盖有光滑、透明软骨组织。术后12周，对照组甲苯胺蓝染色较淡，有少量软骨组织生成，实验组甲苯胺蓝染色较明显，缺损完全被透明软骨组织所覆盖，软骨细胞较多。结果表明兔骨髓间充质干细胞-壳聚糖支架复合材料能更好的引导软骨组织的生成，促进软骨缺损修复。
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骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化中黄芪多糖的诱导作用
背景：黄芪有效组分的抗氧化作用被认为是诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化的原因。目的：观察黄芪多糖联合碱性成纤维生长因子诱导骨髓间充质干细胞向神经元细胞分化的效果。方法：取第3代人骨髓间充质干细胞用碱性成纤维生长因子进行神经前体细胞诱导分化24 h，随后加入黄芪多糖继续培养1-3 d，同时设空白对照组和单纯碱性成纤维生长因子诱导组。免疫细胞化学及蛋白印迹法检测巢蛋白和神经元特异性烯醇化酶的表达。结果与结论：与单纯碱性成纤维生长因子诱导组相比，碱性成纤维生长因子+黄芪多糖诱导组的神经元特异性烯醇化酶阳性细胞比例较高(P <0.05)；单纯系统碱性成纤维生长因子诱导组和碱性成纤维生长因子+黄芪多糖诱导组皆有巢蛋白条带表达，利用凝胶成像系统分析，碱性成纤维生长因子+黄芪多糖诱导组的灰度值大于单纯碱性成纤维生长因子诱导组(P <0.05)。结果可见黄芪多糖联合碱性成纤维生长因子诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化具有更高的诱导分化效率。
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组织激肽释放酶1转染骨髓间充质干细胞的病毒感染复数选择
背景：血管舒缓素即组织激肽释放酶1，是组织激肽释放酶-激肽系统重要组成部分之一。有研究表明血管舒缓素通过促进血管新生，抑制心肌炎症产生等发挥其对心血管系统的保护作用，但并未从干细胞诱导分化方面进行探讨。目的：实验利用已构建的腺病毒载体，将其携带的血管舒缓素基因转染到大鼠骨髓间充质干细胞上，观察其是否成功转染及转染率如何。方法：以腺病毒作为载体，将目的基因血管舒缓素转染到大鼠骨髓间充质干细胞上，并采用荧光显微镜、四甲基偶氮唑盐法和流式细胞技术观察病毒对细胞的转染效果，以确定佳的病毒感染复数。结果与结论：荧光显微镜下观察到腺病毒携带的血管舒缓素目的基因成功转染到大鼠骨髓间充质干细胞上；流式细胞仪结果显示转染率跟病毒感染复数值的大小有关系，当病毒感染复数为150时，转染率为80.8%；四甲基偶氮唑盐法结果提示，病毒感染复数为200时，细胞生长受到明显的抑制。结果证实，腺病毒介导的血管舒缓素能成功转染到大鼠骨髓间充质干细胞上，且佳的病毒感染复数为150。
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缺氧诱导骨髓间充质干细胞条件培养基体外修复辐射损伤小肠上皮细胞变化
背景：间充质干细胞条件培养基含有丰富的间充质干细胞旁分泌物质，被认为是干细胞移植理想的替代方案。然而，正常状态的间充质干细胞条件培养基可能由于旁分泌活性不足，常无法有效修复损伤组织。目的：观察缺氧诱导的骨髓间充质干细胞条件培养基(MSC-CMHyp)对大鼠小肠隐窝上皮 IEC-6细胞辐射损伤后增殖和凋亡的影响，并进一步探讨其修复小肠上皮细胞的旁分泌机制。方法：IEC-6细胞接受10 Gy X射线照射后分别加入MSC-CMHyp、正常培养的骨髓间充质干细胞条件培养基(MSC-CMNor组)及DMEM-F12培养基(DMEM-F12组)培养。结果与结论：锥虫蓝染色、流式细胞仪、Western blot检测结果显示，与DMEM-F12组相比，MSC-CMHyp组IEC-6细胞存活数和增殖率明显增加(P <0.05)，凋亡率和凋亡相关因子Caspases-3/8表达明显下降(P <0.05)，而MSC-CMNor组的各项指标与DMEM-F12组比较差异无显著性意义(P >0.05)。EILSA检测结果显示，与MSC-CMNor相比，MSC-CMHyp中血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、胰岛素样生长因子1、和白细胞介素10的含量明显升高(P <0.05)。结果表明，缺氧诱导的骨髓间充质干细胞条件培养基中细胞因子含量明显升高，显著促进辐射损伤 IEC-6细胞的增殖，同时下调细胞凋亡信号，从而进一步促进损伤细胞的修复。
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成纤维细胞生长因子修饰骨髓间充质干细胞可促进颅脑损伤后功能的恢复
背景：骨髓间充质干细胞虽然能促进神经再生，但因治疗方式局限，并未取得较好的疗效。应用单纯的骨髓间充质干细胞移植治疗脑损伤还远不能达到治疗和改善病情的目的。目的：探讨成纤维细胞生长因子修饰的骨髓间充质干细胞对颅脑损伤后功能恢复及胶质纤维酸性蛋白表达的影响。方法：采用液压冲击法建立SD大鼠颅脑创伤模型，建模后随机分为对照组(颅脑损伤组)、骨髓间充质干细胞组及成纤维细胞生长因子-骨髓间充质干细胞组。体外分离、培养骨髓间充质干细胞，利用腺病毒载体介导成纤维细胞生长因子基因转染入骨髓间充质干细胞。采用Western-Blot法检测成纤维细胞生长因子基因转染及胶质纤维酸性蛋白的表达情况；应用免疫组化检测BrdU标记的骨髓间充质干细胞在脑内的分布及数量；利用Longa评分法于移植后1 d、3 d、1周、2周对大鼠进行神经功能学评分；TUNEL法检测脑组织细胞的凋亡情况。结果与结论：Western-Blot 结果显示，成纤维细胞生长因子基因成功转入腺病毒载体，并且能够在骨髓间充质干细胞中表达，且胶质纤维酸性蛋白在成纤维细胞生长因子-骨髓间充质干细胞组的表达明显高于其他两组(P <0.05)。BrdU标记的骨髓间充质干细胞在成纤维细胞生长因子-骨髓间充质干细胞组脑组织中的表达明显高于其他两组(P <0.05)。移植后2周，成纤维细胞生长因子-骨髓间充质干细胞组大鼠的神经功能缺损Longa评分明显低于其他两组(P <0.05)。TUNEL检测到的凋亡细胞数在成纤维细胞生长因子-骨髓间充质干细胞组明显少于其他两组(P <0.05)。提示成纤维细胞生长因子修饰的骨髓间充质干细胞移植能够减轻颅脑损伤模型大鼠的神经功能损伤程度，促进神经功能恢复，效果优于骨髓间充质干细胞单独移植治疗。
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脑外源性神经因子基因修饰神经干细胞对脑卒中的神经保护机制
背景：脑外源性神经因子-胶质源性神经营养因子对大脑神经元具有特异性的营养作用，是脑卒中治疗中重要的神经营养因子。目的：探讨胶质源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞对大鼠脑卒中的神经保护作用机制。方法：构建大鼠胶质源性神经营养因子基因 pAdEasy-l-pAdTrackCMV 重组体，并对新生大鼠皮质神经干细胞进行分离、培养。利用胶质源性神经营养因子基因重组腺病毒对神经干细胞进行转染，再将细胞悬液注射至暂时性(2 h)大脑中动脉缺血模型大鼠右侧脑室中，同时设单纯神经干细胞组和对照组进行对比。结果与结论：与神经干细胞移植组比较，联合移植组再灌注2，3周的神经功能缺损评分，再灌注7 d脑缺血损伤面积均显著减小(P <0.05)；不同再灌注时间点缺血区域的神经干细胞数量神经干细胞移植组均显著少于联合移植组(P <0.05)。再灌注7，14 d，两组Syn，PSD-95蛋白表达均高于对照组(P <0.05)，联合移植组升高较为明显。结果表明，利用经胶质源性神经营养因子基因修饰的神经干细胞治疗大鼠脑卒中可以发挥出较好的神经保护作用，效果略优于单纯神经干细胞治疗。
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促红细胞生成素体外诱导神经干细胞的分化
背景：近年来，神经干细胞被认为是治疗脊髓损伤的理想移植细胞，但其在宿主体内自然分化为神经元的比例较低，严重制约了其修复脊髓损伤的效果。目的：分析促红细胞生成素体外诱导神经干细胞分化的作用。方法：从新生 Wistar大鼠海马组织中无菌条件下分离神经干细胞，进行体外分离、培养及免疫荧光鉴定。然后取第3代的神经干细胞，随机分为0.5，5，50 U/mL促红细胞生成素组和对照组，分别加入0.5，5，50，0 U/mL促红细胞生成素。结果与结论：0.5，5，50 U/mL促红细胞生成素组神经元的转化率较对照组明显提高(P <0.05)，5，50 U/mL促红细胞生成素组神经元的转化率高于0.5 U/mL促红细胞生成素组(P<0.05)，但5，50 U/mL促红细胞生成素组中神经元数量接近(P >0.05)。说明促红细胞生成素在体外能够有效地诱导神经干细胞向神经元的分化，并可明显提高其向神经元的转化率。
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结肠癌干细胞蛋白表达及生物学特性：培养与筛选分析
背景：近年来国内外学者相继分离出 EpCAMhighCD44+结肠癌干细胞，但大多为有关大肠癌细胞系中肿瘤干细胞的分离研究，关于结肠癌干细胞功能的报道相对较少。目的：从结肠癌组织对结肠癌干细胞进行筛选和分离培养，探讨结肠癌干细胞蛋白表达情况以及生物学特性。方法：获得结肠癌组织标本，进行原代细胞分离。分离 EpCAMhighCD44+细胞，利用流式细胞仪进行检测、分选，并利用无血清培养基对细胞进行培养和传代，观察细胞球形成情况。对小鼠进行细胞皮下回植，观察其日常表现以及肿瘤生长情况。待肿瘤生长到直径1 cm以上之后，获得肿瘤组织进行免疫组化检验，观察EpCAMhighCD44+肿瘤细胞流式细胞仪分选情况和不同时间 EpCAMhighCD44+肿瘤细胞在无血清培养基中的生长情况，以及小鼠成瘤情况和移植瘤免疫组化检查中性上皮黏蛋白和结肠特异性分化标志物CK-20表达情况。结果与结论：经检测在获得的结肠癌组织中存在 EpCAMhighCD44+结肠癌干细胞，在结肠癌原代细胞中EpCAMhighCD44+细胞的比例为1.7%-38%。在无血清培养基中对EpCAMhighCD44+肿瘤细胞进行24 h的培养之后进行观察，可以发现产生一定体积较小松散的悬浮细胞球，但数量较少；培养21 d之后进行观察，可以发现形成形态一致的细胞球，且形态致密。经裸鼠皮下回植和观察，可以发现形成移植瘤。对移植瘤进行苏木精-伊红染色和观察，可以发现呈现出典型的结肠癌细胞形态特征。对移植瘤进行免疫祖化检查，所有移植瘤均能表选中性上皮黏蛋白和结肠特异性分化标志物CK-20。经检测发现，经10PPC、1PPC、0.1PPC 5-氟尿嘧啶干预，EpCAMhighCD44+Colo205细胞的增殖均得到促进，且随着药物作用时间的延长促进作用逐渐增强。提示结肠癌组织中存在 EpCAMhighCD44+结肠癌干细胞，其具有一定的增殖、更新、分化以及致瘤能力和耐化疗能力。
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8-溴-7-甲氧基白杨素和索拉非尼对肝癌干细胞样细胞凋亡的影响
背景：拟尝试结合8-溴-7-甲氧基白杨素和索拉非尼的优点扬长避短，弥补肝细胞癌肿瘤干细胞对索拉非尼的耐药，综合提高肝细胞癌的治疗效果。目的：观察8-溴-7-甲氧基白杨素和索拉非尼单用及二者联用对体外培养的 SMMC-7721细胞系肝癌干细胞样细胞凋亡的影响，并分析其作用机制。方法：8-溴-7-甲氧基白杨素、索拉非尼单用作为对照组，二者合用作为实验组，分别作用于 SMMC-7721细胞系球形细胞24 h，流式细胞术检测细胞凋亡情况，Western blot分析NF-κB(p65)蛋白表达水平。结果与结论：与8-溴-7-甲氧基白杨素单用和不同浓度索拉非尼单用对照组比较，8-溴-7-甲氧基白杨素与索拉非尼(2.5，5，10，50μmol/L)二者合用实验组明显提高了SMMC-7721细胞系球形细胞的凋亡率，且明显下调了NF-κB(p65)蛋白的表达。结果表明8-溴-7-甲氧基白杨素可增强索拉非尼对肝癌干细胞样细胞凋亡的诱导作用，作用机制与NF-κB(p65)蛋白表达下调可能相关。
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人脐带间充质干细胞对宫颈癌Hela细胞增殖特性的影响
背景：间充质干细胞具有向炎症损伤部位和肿瘤组织特异性趋化的特性，深入研究间充质干细胞对肿瘤细胞生长增殖的影响成为亟需解决的问题。目的：探讨人脐带间充质干细胞对宫颈癌Hela细胞增殖特性的影响。方法：将不同细胞数的人脐带间充质干细胞或不同质量浓度的人脐带间充质干细胞条件培养基与宫颈癌Hela细胞共培养3 d，CCK-8检测Hela细胞的增殖抑制情况。结果与结论：Hela细胞与人脐带间充质干细胞比例分别为1︰3、1︰2、1︰1、2︰1、4︰1、8︰1的情况下，相对应的细胞增殖抑制率分别为67.12%、47.18%、31.15%、27.61%、15.55%、15.95%；利用5，10，20，40，60，100 mg/L人脐带间充质干细胞条件培养基对Hela细胞进行培养，相对应的细胞增殖抑制率分别为0.61%、40.1%、63.47%、80.61%、93.56%、90.65%，说明人脐带间充质干细胞和条件培养基呈一定的浓度依赖性抑制Hela细胞的增殖。
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氯化钴模拟低氧环境下人脐带间充质干细胞增殖及基因蛋白的表达
背景：氯化钴可促进人脐带源性间充质干细胞的增殖，具有时间和浓度依赖性，并对其基因蛋白表达具有调控作用。目的：研究氯化钴模拟的低氧环境对人脐带源性间充质干细胞的增殖及基因蛋白表达的影响，旨在建立高效的间充质干细胞体外培养扩增体系。方法：采用组织块法提取人脐带间充质干细胞，氯化钴模拟化学低氧环境，在不同浓度(0，100，150，200，250μmol/L)和不同时间(0，1，2，3，4 d)条件下，用流式细胞仪进行细胞表面相关抗原的鉴定及细胞周期检测；CCK-8法测定细胞增殖情况；RT-PCR测定缺氧诱导因子1α、诱导型一氧化氮合酶、基质细胞衍生因子1、白细胞介素6、转化生长因子β mRNA的表达；Western blot测定缺氧诱导因子1α蛋白的表达。结果与结论：人脐带间充质干细胞表面相关抗原CD29、CD73、CD90、CD105表达阳性，CD31、CD14、CD34、CD45、CD11b、HLA-DR呈阴性表达，且不受氯化钴模拟的低氧环境影响。氯化钴模拟的化学性低氧可促进人脐带间充质干细胞增殖，且具有一定时间及浓度依赖性。RT-PCR检测到低氧组缺氧诱导因子1α、诱导型一氧化氮合酶、基质细胞衍生因子1 mRNA表达上调，而白细胞介素6及转化生长因子β mRNA表达下调，差异有显著性意义(P <0.05)。低氧组中缺氧诱导因子1α蛋白表达增高。结果表明氯化钴模拟的体外低氧环境能促进人脐带间充质干细胞增殖，佳浓度为200μmol/L，但过高浓度(250μmol/L)时反而抑制其增殖，机制可能与缺氧诱导因子1α基因与蛋白表达增加相关。
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胰岛素样生长因子Ⅰ转染对脂肪干细胞TWEAK/Fn14信号通路的影响
背景：胰岛素样生长因子Ⅰ具有诱导间充质干细胞向软骨细胞分化的能力，通过基因转染的方式将胰岛素生长因子Ⅰ转染入脂肪干细胞或许能够更好的促进脂肪干细胞向软骨细胞分化。目的：探讨胰岛素样生长因子Ⅰ基因对脂肪间充质干细胞体外定向成软骨分化能力以及对TWEAK/Fn14信号通路的影响。方法：构建慢病毒载体pLVX-IGF-I-IRES-ZsGreenl基因并转染第3代人脂肪间充质干细胞，诱导细胞向软骨分化。同时将pLV X-IRES-ZsGreenl转染的脂肪间充质干细胞设为绿色荧光蛋白/脂肪间充质干细胞组，单纯脂肪间充质干细胞设为对照组。结果与结论：与绿色荧光蛋白/脂肪间充质干细胞组和对照组相比，胰岛素样生长因子Ⅰ/脂肪间充质干细胞组细胞中TWEAK mRNA表达水平降低，而胰岛素样生长因子Ⅰ，Col2al和Sox9 mRNA的表达水平增加， Col2a1表达水平增加，基质金属蛋白酶3以及TWEAK的表达降低。提示pLVX-IGF-I-IRES-ZsGreenl慢病毒转染脂肪间充质干细胞后可获得胰岛素样生长因子Ⅰ的高效表达，且能下调细胞TWEAK基因及蛋白表达，可促进体外培养的脂肪间充质干细胞转化为软骨细胞。
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丝素蛋白/羟基磷灰石支架对成骨诱导脂肪干细胞活性及成骨性能的影响
背景：成骨诱导后的脂肪干细胞与可降解丝素蛋白/羟基磷灰石支架复合，可望研制出一种具有良好生物相容性及成骨性能的新型骨融合材料。目的：探讨丝素蛋白/羟基磷灰石支架对成骨诱导脂肪干细胞增殖活性及成骨性能的影响。方法：获取大鼠脂肪干细胞后体外贴壁培养、扩增，将第3代细胞用条件培养液进行成骨方向的定向诱导培养、扩增，然后接种到预湿的丝素蛋白/羟基磷灰石材料上作为实验组，以相同条件下置入盖玻片和脂肪干细胞培养作为对照组。倒置相差显微镜观察细胞在材料中的生长情况，MTT法检测材料对细胞增殖活性的影响，碱性磷酸酶活性测定评价其成骨能力。结果与结论：成骨诱导后的脂肪干细胞在丝素蛋白/羟基磷灰石材料上能够良好地黏附和增殖。实验组和对照组细胞增殖活性及碱性磷酸酶活性比较，差异无显著性意义(P >0.05)，证实脂肪干细胞活性及成骨性能不受材料影响，说明丝素蛋白/羟基磷灰石复合材料具有良好的细胞相容性。
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针对细胞高加速度离心式加载机的研制
背景：随着科技和现代航空航天事业的发展，极端力学环境高加速度的力学生物学影响越来越受到重视，研究表明高加速度对细胞有一定的影响。目的：以离心机为基础，设计离心式加载机用于高加速度加载下细胞的力学生物学研究。方法：对于离心式加载机，培养板或/和培养瓶加入培养液进行恒加速度或变速度加载，探索实验可行性；另外，根据其转子结构和性能，利用 ANSYS 有限元分析软件建立其有限元模型，分别在平衡状态下和危险工况下的转子系统进行仿真计算，分析转子系统的应力和变形分布情况。对危险工况下的主轴进行强度校核，并将ANSYS 分析结果与强度校核结果进行对比。结果与结论：通过实验表明培养板或/和培养瓶可以用于(0-40)×g的恒加速度或变加速度加载；模拟对比分析证明了细胞离心式加载机的可靠性，该加载机实现了一般生物学实验室在高加速度下力学生物学的研究，也为未来细胞离心加载机广泛应用提供了基础。
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过敏性紫癜患儿外周血单核细胞TLR2表达及与免疫应答的相关性
背景：Tol 样受体及其信号通路在自身免疫性疾病、超敏反应、炎症反应、细胞凋亡及移植排斥反应中发挥重要的作用，其在过敏性紫癜患儿免疫发病机制中的地位尚未完全阐明。目的：探讨过敏性紫癜患儿外周血单核细胞TLR2的表达及其与免疫应答的相关性。方法：64例过敏性紫癜患儿分为2组，即过敏性紫癜无肾损害组(36例)、过敏性紫癜肾损害组(28例)，选择同期入院的30例健康体检儿童设置为对照组，采用流式细胞术检测外周血单核细胞 TLR2表达，荧光定量PCR技术检测外周血单核细胞TLR2 mRNA相对表达量， ELISA检测血浆干扰素γ、白细胞介素4水平， ELISA法测定Treg细胞分泌的转化生长因子β、白细胞介素10水平。结果与结论：过敏性紫癜组干扰素γ、干扰素γ/白细胞介素4水平均显著低于对照组(P <0.05)，白细胞介素4水平显著高于对照组(P <0.05)；过敏性紫癜组TLR2 mRNA和蛋白表达显著高于对照组(P <0.05)；过敏性紫癜肾损害组TLR2 mRNA和蛋白表达显著高于过敏性紫癜无肾损害组(P <0.05)；过敏性紫癜组患者白细胞介素10和转化生长因子β表达显著高于对照组(P <0.05)。结果表明过敏性紫癜患儿外周单核细胞TLR2 mRNA及蛋白表达增高，且患儿存在免疫表达失衡现象，TLR2参与过敏性紫癜免疫发病机制，转化生长因子β表达量能够评估Treg的免疫应答，可作为过敏性紫癜患儿诊断、治疗及预后参考依据。
