中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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间充质干细胞对系统性红斑狼疮T、B细胞的免疫调节机制
背景:研究表明,干细胞能分泌可溶性因子调节免疫平衡,抑制炎症反应,定向分化为特定组织类型的功能细胞参与组织修复,促进血管再生,改善血液循环、抗氧化应激等,可用于治疗自身免疫性疾病,尤其是系统性红斑狼疮.目的:总结间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮的T、B淋巴细胞免疫调节机制.方法:由第一作者应用计算机检索PubMed,中国期刊全文数据库(CNKI)2006年1月至2016年8月相关文献.以“mesenchymal stem cell,systemic lupus erythematosus,immunoregulation”和“间充质干细胞,系统性红斑狼疮,免疫调节”为检索词进行检索.选择间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮对免疫调节影响的文章,同一领域文献选择近期发表在权威杂志的文章.结果与结论:初检得到207篇文献,纳入53篇文献进行综述.间充质干细胞具有自我更新和多向分化潜能,是免疫替代治疗的理想种子细胞;具有免疫调节能力,可从根本上治疗自身免疫疾病.目前间充质干细胞治疗系统性红斑狼疮的动物实验己证实了其安全性及有效性,并且能避免药物治疗带来的不良反应,具有广阔应用前景,但在临床应用中仍有很多问题亟待解决.
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放射性肠损伤后小肠干细胞再生的研究与进展
背景:放射性肠损伤造成小肠干细胞数量急剧减少和功能减退,导致损伤后的肠上皮修复非常困难,促进小肠干细胞数量和功能的恢复是当前治疗放射性肠损伤、修复受损肠上皮的研究热点.目的:综述放射性肠损伤后小肠干细胞补充来源及调控机制的新研究进展.方法:分别以“小肠干细胞,放射性肠损伤;intestinal stem cell,radiation-induced intestinal injury”为检索词,由第一作者检索2010年1月至2016年6月中国期刊全文数据库、PubMed数据库及万方数据库相关文章,进行归纳总结.结果与结论:小肠干细胞的命运受多种信号通路的调控,研究比较明确的有Wnt/β-catenin、BMP、Notch和EGF信号通路.早期分泌型祖细胞在正常稳态下增殖缓慢,对放射性损伤不敏感,并且在一定条件下可重新逆转分化成为小肠干细胞,是“储备干细胞”的良好来源,而巢在早期分泌型祖细胞逆转分化为小肠干细胞的过程中发挥着重要作用.探究上述逆转分化过程的具体调控机制对于深入理解放射性肠损伤后肠上皮的修复过程,从而确立主动调控肠损伤修复的理念具有重要科学意义.
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人脐带间充质干细胞诱导分化不同阶段的胰岛样细胞移植治疗糖尿病
背景:实验室前期已对人脐带间充质干细胞进行不同时期的体外定向诱导,使其成功分化为胰岛样细胞,并检测到胰岛素表达.目的:观察人脐带间充质干细胞诱导分化不同阶段的胰岛样细胞在糖尿病在大鼠模型体内的治疗效果,探索体外诱导的佳时长.方法:将第3代人脐带间充质干细胞在体外定向诱导7,14,21,28 d使其分化为胰岛样细胞.选用清洁级健康Wistar大鼠80只,取8 只做正常对照组,其余72只造模成功后,随机分为6组,分别为模型型对照组、未诱导组、诱导7d组、诱导14d组、诱导21 d组、诱导28 d组.造模10d后,分别经尾静脉移植相府的细胞悬液2 mL/只(细胞数2x103个).正常对照组和模型对照组经尾静脉注射不含任何细胞的培养液2mL/只.每2周移植1次,共移植2次.治疗过程中检测各组大鼠的血糖、体质量、血清胰岛素水平,第2次细胞移植4周后处死大鼠,观察各脏器组织病理变化.结果与结论:①与模型对照组相比,各治疗组体质量上升,血糖下降,胰岛素水平升高,差异有显著性意义(P＜0.05),且诱导28 d组治疗效果佳:②各治疗组病理切片显示,肝脏和肾脏组织结构清晰,未发生坏死、纤维化等异常改变:⑧实验结果表明,人脐带间充质干细胞诱导不同阶段的胰岛样细胞移植治疗糖尿病安全有效,体外诱导28 d的胰岛样细胞治疗效果为显著.
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丹参注射液对神经干细胞移植治疗颅脑损伤的影响
背景:丹参提取液可显著提高神经干细胞的增殖活性,改善神经干细胞移植的存活.目的:探讨丹参注射液对神经干细胞蛛网膜下腔移植治疗大鼠颅脑损伤的影响.方法:选取87只成年SD大鼠制成重型液压颅脑损伤模型,将建模成功的80只随机分4组干预,脑损伤组蛛网膜下腔注射DMEM培养液,1次/d;丹参注射液组腹腔注射丹参注射液,1次/d;干细胞组蛛网膜下腔注射CM-Dil标记的神经干细胞悬液,1次/d;联合组蛛网膜下腔注射CM-Dil标记神经干细胞细胞悬液的同时腹腔注射丹参注射液,1次/d,各组连续干预3d.干预后3d及1,2,3,4周行神经学缺损评分;干预21-28 d进行为期7d的Morris水迷宫实验;干预后4周进行脑组织病理组织学观察、神经干细胞存活与分布观察、RT-PCR及Western blot检测.结果与结论:①神经学缺损评分:联合组神经学缺损评分始终优于其余3组(P＜0.05);②Morris水迷宫实验:联合组干预后3-5d的平均潜伏时间明显短于其他3组(P＜ 0.05或P＜0.01),穿越平台次数及在目标象限游泳距离与总距离百分比均高于其他3组(P＜ 0.05或P＜0.01);③脑组织病理组织学观察:脑损伤组可见脑损伤区组织空洞明显,丹参注射液组、干细胞组脑损伤区组织空洞较小,联合组脑损伤区组织空洞几乎消失;④神经干细胞存活与分布:联合组CM-Dil标记阳性细胞数多于干细胞组;⑤RT-PCR及Western blot检测:联合组脑组织突触素及生长相关蛋白43表达高于其他3组(P＜0.05),丹参注射液组、干细胞组高于脑损伤组(P＜0.05);⑥结果表明:丹参注射液联合神经干细胞蛛网膜下腔移植可能通过促进大鼠脑损伤区脑组织突触素及生长相关蛋白43的表达,改善重型颅脑损伤模型大鼠的神经功能.
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异基因造血干细胞移植治疗慢性髓细胞性白血病监测染色体核型及融合基因表达
背景:有报告显示,70％的慢性髓细胞性白血病患者异基因造血干细胞移植后1-5个月的细胞遗传学和基因标志检测阴性,但个别病例移植后1-3个月内反复变化,移植3-12个月的阴性率可达89.5％.目的:监测异基因造血干细胞移植治疗慢性髓细胞性白血病后的细胞分子遗传学标志变化,探讨其预后意义.方法:纳入异基因造血干细胞移植治疗慢性髓细胞性白血病患者17例,移植后30d及2,3,4,6,12,24,36,48,60,72个月,采用骨髓细胞短期培养法和直接法G显带分析患者染色体,双色荧光原位杂交检测bcr/abl融合基因,RQ-PCR检测骨髓原代细胞的bcr/abl基因.结果与结论:17例患者中,8例为男患/男供者异基因造血干细胞移植,7例为男患/女供者异基因造血干细胞移植(同胞姐妹),移植后多次复查染色体核型为46XX(女性核型),未见Y染色体及其他畸变染色体核型;1例为女患/女供者异基因造血干细胞移植(其姐妹);1例为女患/无亲缘男供异基因造血干细胞移植,移植后1个月时染色体核型46XY,但bcr/abl阳性,4个月后持续表达46XY,bcr/abl阴性,观察超过96个月,为持续缓解,说明疗效良好;其中1男患/男供(全相合同胞弟)异基因造血干细胞移植后,1-12个月Ph染色体bcr/abl基因持续阳性表达,施行供者淋巴细胞输注,48个月后染色体bcr/abl转阴性表达,为持续缓解.结果表明,慢性髓细胞性白血病患者实施异基因造血干细胞移植后,染色体核型、bcr/abl融合基因监测对后续治疗选择、预后判断有重要参考价值.
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人鼻黏膜间充质干细胞生物学特性与自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤
背景:干细胞应用于脊髓损伤的报道很多,但是这些细胞存在免疫排斥、取材困难、纯化不易等各方面的缺陷,而鼻黏膜间充质干细胞无上述缺点,将其应用于临床脊髓损伤患者疗效分析目前尚无相关报道.目的:观察人鼻黏膜间充质干细胞的生物学特性,同时进行自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗晚期不完全性脊髓损伤的临床疗效观察与评价.方法:①取材、培养鼻中隔偏曲手术患者的鼻黏膜间充质干细胞,扫描及透射电子显微镜观察细胞的超微结构,并在体外对其进行多向诱导分化;②经医学伦理委员会同意后,取材培养脊髓损伤患者的鼻黏膜,通过腰椎穿刺术注射到8例晚期不完全性脊髓损伤患者椎管内,细胞移植1-3次,前后移植间隔时间为5-7 d,每次移植细胞总数约为5x107个.细胞移植治疗前及随访6个月时按照国际截瘫医学会ASIA评分标准进行评分.结果与结论:①鼻黏膜间充质干细胞在光镜下形态以梭形为主,并呈现出放射状排列,细胞免疫荧光表达STRO-1;②流式细胞学检测显示高表达间充质干细胞表面标记物CD73、CD90、CD105,不表达造血干细胞标记物CD34、CD45,且细胞纯度达97％以上;③鼻黏膜间充质干细胞在扫描及透射电子显微镜下可见短粗的微绒毛及不同的细胞生长形态;④鼻黏膜间充质干细胞还具有向骨组织、脂肪组织、干细胞球及神经元分化的潜能;⑤经自体血清培养的鼻黏膜间充质干细胞移植后,除1例患者住院期间无明显神经功能改善外,其余患者均有不同程度的神经功能恢复且无任何不良副反应;⑥结果表明,鼻黏膜间充质干细胞是组织工程细胞修复中一种新型的种子细胞来源;自体鼻黏膜间充质干细胞移植治疗脊髓损伤患者能达到一定的治疗效果,具有临床应用价值.
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自体富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞治疗长骨干骨折术后骨不连
背景:研究显示自体富血小板血浆和骨髓间充质干细胞具有一定的骨修复作用,但临床上少见自体富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞治疗长骨干骨不连的研究.目的:对比自体骨髓间充质干细胞及自体富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞治疗长骨干骨不连的效果.方法:将47例长骨骨干骨折术后骨不连患者随机分为单一治疗组(n=22)和联合治疗组(n=25),单一治疗组骨折端断注射自体骨髓间充质干细胞,联合治疗组骨折端断注射自体富血小板血浆与自体骨髓间充质干细胞.随访观察两组临床骨折愈合时间、治疗后局部并发症发生情况、患侧肢体功能分级及治疗后3个月的骨痂评分.结果与结论:①临床骨折愈合:联合治疗组临床愈合时间短于单一治疗组[(4.2±1.5),(5.6±1.1)个月,P＜0.05]、骨折愈合率高于单一治疗组(92％,86％,P＜0.05),骨痂评分高于单一治疗组(2.74±0.36,2.32±0.53,P＜0.05);②患肢功能恢复:单一治疗组患侧肢体功能恢复优良率低于联合治疗组(77％,84％,P＜0.05);③局部并发症:两组患者骨髓穿刺及治疗局部皮肤无红肿、无感染;④结果表明:自体骨髓间充质干细胞及自体富血小板血浆联合骨髓间充质干细胞移植两种方法治疗长骨干骨折术后骨不连均有一定的疗效,联合治疗的效果更好.
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人脐带间充质干细胞对急性淋巴细胞白血病患儿异基因干细胞移植后免疫重建的影响
背景:人脐带间充质干细胞可分泌多种支持造血的细胞因子和生长因子,可改变造血微环境,具有调节及改善机体免疫功能的作用.目的:探讨人脐带间充质干细胞对儿童急性淋巴细胞白血病异基因造血干细胞移植后免疫重建的影响.方法:选取64例接受异基因造血干细胞移植治疗的急性淋巴细胞白血病患儿,分为非血缘性供者异基因造血干细胞移植组(allo-HSCT组,n=32)及非血缘性供者异基因造血干细胞移植后输注人脐带间充质干细胞组(allo-HSCT+MSCs组,n=32),观察两组治疗效果及并发症发生情况,比较两组患儿预处理前、移植后1,3,6个月时外周血免疫球蛋白及淋巴细胞亚群水平.结果与结论:①allo-HSCT+MSCs组粒细胞植入时间短于allo-HSCT组(P＜0.05),慢性移植物抗宿主病、巨细胞病毒感染生率低于allo-HSCT组(P＜0.05);②两组移植后造血干细胞植入率、血小板重建、累计复发率、1年存活率比较差异无显著性意义(P＞0.05);③allo-HSCT+MSCs组移植后1,3,6个月血清免疫球蛋白IgA、IgG、IgM、IgE水平及外周血T淋巴细胞(CD4+、CD3+CD4+、CD4+CD8+)、B细胞(CD19+)水平均高于allo-HSCT组(P＜0.05);④结果表明,联合人脐带间充质干细胞输注能有效降低急性淋巴细胞白血病患儿异基因造血干细胞移植慢性抗宿主病发生率,有助于粒细胞造血重建及免疫功能重建.
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丹参注射液联合脂肪干细胞移植改善脑梗死模型大鼠的神经功能
背景:研究发现,丹参注射液、脂肪干细胞分别对脑梗死大鼠具有明显的神经保护作用.目的:观察丹参注射液联合脂肪干细胞移植对脑梗死大鼠脑组织及血清中环氧合酶2、β-淀粉样蛋白水平的影响.方法:选取脑梗死模型大鼠63只,随机分为3组:脑梗死组、脂肪干细胞组、联合组,每组21只.造模后24 h,脑梗死组于尾静脉注射30 μL PBS,脂肪干细胞组尾静脉注射30 μL脂肪干细胞悬液(含有3×106 L-1个脂肪干细胞),联合组经尾静脉注射30 μL脂肪干细胞悬液(含有3x106 L-1个脂肪干细胞)+腹腔注射丹参注射液0.5 g/(kg·d),细胞注射1次,丹参注射液连续注射7d.治疗后1,2,3,4周进行神经功能学缺损评分;治疗后3周,采用ELISA法检测血清环氧合酶2及β-淀粉样蛋白水平,TFC染色观察脑梗死范围,RT-PCR和蛋白免疫印迹技术检测脑组织环氧合酶2及β-淀粉样蛋白的mRNA和蛋白表达.结果与结论:①脂肪干细胞组、联合组神经功能缺损评分明显低于脑梗死组(P＜0.05),联合组又明显低于脂肪干细胞移植组(P＜0.05);②与脑梗死组比较,脂肪干细胞组、联合组血清环氧合酶2及β-淀粉样蛋白水平显著降低(P＜0.05);联合组明显低于脂肪干细胞组(P＜0.05);③联合组梗死体积小于脂肪干细胞组(P＜0.05),脂肪干细胞组小于脑梗死组(P＜0.05);④与脑梗死组比较,脂肪干细胞组、联合组脑组织中环氧合酶2及β-淀粉样蛋白mRNA和蛋白表达明显下调(P＜0.05),联合组降低更为显著(P＜0.05);⑤结果表明,丹参注射液联合脂肪干细胞移植可改善脑梗死大鼠的神经功能,可能是通过降低脑组织及血清中环氧合酶2及β-淀粉样蛋白发挥作用.
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不同剂量脂肪干细胞移植对早期肾纤维化形成的影响
背景:前期实验发现干细胞对于肾纤维化的早期形成具有一定的干预作用,能够延缓肾间质纤维化的发生.目的:研究外源性脂肪干细胞移植对大鼠早期肾间质纤维化形成的影响,并探讨其量效关系.方法:将50只SD大鼠随机分为5组,假手术组尾静脉注射PBS;模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组结扎左侧输尿管,建立肾纤维化模型,造模成功后,模型组尾静脉注射PBS,低剂量组、中剂量组、高剂量组尾静脉分别注射细胞浓度为1x1010,2x1010,3x1010 L 1的脂肪干细胞悬液0.1 mL.注射后14d取左肾组织,采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察肾小管-间质损伤程度及肾间质相对面积,免疫组织化学法检测α-平滑肌肌动蛋白和转化生长因子β1表达.结果与结论:①苏木精-伊红染色:模型组表现为典型的肾小球及肾小管间质改变;低剂量组、中剂量组、高剂量组均有一定程度的肾小球及肾小管-间质改变,但程度较模型组明显减轻,以高剂量组损伤程度轻;②Masson染色:模型组肾小管间质增宽,胶原纤维沉积;低剂量组、中剂量组、高剂量组肾间质增宽程度低于模型组,中、高剂量组肾间质增宽程度低于低剂量组(P＜0.05);⑧免疫组织化学染色:与假手术组比较,模型组α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1表达升高(P＜0.05);与模型组比较,高剂量组α-平滑肌肌动蛋白表达降低(P＜0.05),低、中、高剂量组转化生长因子β1表达均降低(P＜0.05),以中、高剂量组转化生长因子β1降低更明显;④结果表明:外源性脂肪干细胞移植可延缓早期肾纤维化的形成,并存在剂量-效应关系,其机制可能是通过改变转化生长因子β1诱导的信号通道状态实现的.
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干细胞移植治疗脊髓损伤系统评价及不同移植途径疗效比较的网状Meta分析
背景:干细胞移植已被用于脊髓损伤临床治疗、但其安全性和有效性的研究结论存在争议.干细胞移植途径有多种,何种移植途径疗效更佳,现尚无定论.目的:系统评价干细胞治疗脊髓损伤的安全性和有效性,比较不同干细胞移植途径的疗效差异.方法:应用计算机检索PubMed、The Cochrane Library(2016年第4期)、Embase、CNKI、CBM、VIP及Wan-Fang Data数据库,设置截止日期为2016-05-13,收集所有关于干细胞移植治疗脊髓损伤的临床随机对照试验.筛选文献、提取数据,并行文献质量评价后,运用Stata13.0和Gemtc0.14.3软件进行统计分析.结果与结论:纳入10个临床随机对照试验,合计脊髓损伤患者546例,其中干细胞治疗组294例,康复理疗组252例.Meta分析结果显示,干细胞移植治疗组在增加患者ASIA运动功能评分、ASIA感觉功能评分、生活能力评分及减小膀胱残余尿量方面优于康复理疗组(P ＜ 0.05).干细胞治疗脊髓损伤出现发热、腹胀、头痛、下肢麻木及脑膜刺激征的概率分别为14％、7％、7％、8％、7％.网状Meta分析结果发现:干细胞蛛网膜下腔注射、静脉注射及病灶内注射3种移植途径在ASIA运动功能评分、ASIA感觉功能评分、生活能力评分及并发症率方面差异比较均无显著性意义;与康复理疗组比较,仅干细胞蛛网膜下腔注射可改善ASIA运动及感觉功能评分[MD=9.77,95％CI(0.26,21.46);MD=25.79,95％CI(10.07,45.27)].结果表明,蛛网膜下腔注射可能为较理想的干细胞移植途径.受纳入研究限制,研究结论需开展大量高质量临床随机对照试验予以证实;此外,干细胞治疗脊髓损伤的远期安全性和有效性,以及对不同ASIA病情分级、不同干细胞类型和不同移植时间的疗效有待于进一步研究.
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血管新生对局灶性脑缺血再灌注后脑室下区神经干细胞增殖的影响
背景:血管新生可能与神经干细胞的增殖有相关性,但仍无统一观点.目的:观察血管新生对局灶性缺血再灌注后大鼠脑室下区神经干细胞增殖的影响.方法:成年雄性SD大鼠,随机分为正常组、假手术组、手术组、侧脑室注射血管内皮生长因子+手术组、侧脑室注射生理盐水+手术组,各组再分为缺血再灌注1,3,7,14d组,每组12只.线栓法制作局部脑缺血再灌注模型,给予相应干预措施,利用免疫组化法检测各组大鼠脑室下区Nestin的表达,Real time-PCR法检测各组大鼠脑室下区 vWF mRNA的表达.结果与结论:①缺血再灌注后脑室下区vWF mRNA、Nestin阳性表达增加;在缺血后7d,vWF mRNA、Nestin阳性表达均达高峰,提示局灶性缺血再灌注后大鼠脑室下区神经干细胞的增殖与血管新生存在时间相关性;②侧脑室注射血管内皮生长因子+手术组vWF mRNA、Nestin阳性表达较手术组及侧脑室注射生理盐水+手术组明显增高,提示缺血再灌注后血管新生可促进大鼠脑室下区神经干细胞的增殖.
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间充质干细胞归巢到大鼠肺气肿组织分化为肺血管内皮细胞
背景:间充质干细胞具有独特的归巢、免疫调节及抗炎作用,经静脉注射移植后能归巢到损害的靶器官及组织发挥其功能,修复受损组织.目的:观察间充质干细胞移植后,肺气肿大鼠的肺组织病理改变.方法:将24只雌性Wistar大鼠随机分为实验组、对照组、健康对照组,前两组应用烟熏加气管内滴入猪胰弹生蛋白酶的方法制作肺气肿模型,造模成功后,实验组尾静脉注射BrdU标记骨髓间充质干细胞,对照组注射PBS.14d后,检测观察大鼠肺组织病理学变化,检测肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α水平,肺泡壁细胞凋亡指数、抗CD34及抗BrdU免疫组织化学变化.结果与结论:①与健康对照组比较,对照组肿瘤坏死因子α水平、肺泡壁细胞凋亡指数升高(P＜0.01),抗Brdu及抗CD34相对面积减少(P＜0.01);与对照组比较,实验组肿瘤坏死因子α水平、肺泡壁细胞凋亡指数降低(P＜0.01),抗Brdu及抗CD34相对面积增加(P＜0.01);②肺组织病理学检查显示,对照组及实验组均呈现肺气肿样改变,但实验组轻于对照组;③结果表明,间充质干细胞能抑制实验性肺气肿的炎症反应及细胞凋亡,改善肺气肿病理学变化且骨髓间充质干细胞可分化为肺血管内皮细胞.
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三种携带GFP慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞的效果
背景:研究不同慢病毒对同一骨髓来源间充质干细胞的转染效果,筛选合适的细胞转染工具.目的:探究3种慢病毒对兔骨髓间充质干细胞转染效果的差异.方法:选择2周龄日本大耳白兔,髂骨穿刺抽取骨髓液,采用密度梯度离心法提取骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测细胞表面标志物表达.分别用pTomo-GFP慢病毒、Ad-GFP慢病毒、lenti-GFP慢病毒转染骨髓间充质干细胞,流式细胞仪检测3种慢病毒的转染率.CCK-8法检测转染前后细胞生长活力变化.结果与结论:①培养出的细胞CD44阳性率为75.64％,CD34、CD45阳性率分别为6.14％、9.48％;②pTomo-GFP慢病毒转染后GFP表达率为2.64％、Ad-GFP慢病毒转染后GFP表达率为16.72％、lenti-GFP慢病毒转染后GFP表达率为45.24％;③各慢病毒对细胞生长存在一定影响.pTomo-GFP、Ad-GFP在第1-8天对细胞生长潜伏期和对数生长期存在影响,可能对前期细胞活性造成一定干扰.短期内lenti-GFP对细胞生长影响不大,但第12天时出现了细胞生长情况变化,考虑对细胞远期活力存在影响;④选用lenti-GFP慢病毒转染兔骨髓间充质干细胞能够在保证细胞正常生长的情况下提供大的转染效率,适用于兔骨髓间充质干细胞的示踪及基因转染等相关研究.
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甲状旁腺激素对大鼠骨髓间充质干细胞钙离子的影响
背景:甲状旁腺激素可通过靶器官表面的特异性受体激活一系列生理生化反应,调节钙的动态平衡.目的:观察甲状旁腺激素对骨髓间充质干细胞内钙离子的影响,探讨其维持骨髓间充质干细胞体外增殖的机制.方法:将第4代SD大鼠骨髓间充质干细胞分组培养,实验组加入含甲状旁腺激素的培养基,对照组加入常规培养基,培养10d内,MTT法检测细胞增殖;培养7,14d,通过激光共聚焦显微镜观察实验组及对照组细胞内钙离子荧光峰值.结果与结论:①细胞增殖:培养第一二天,2组细胞生长活性均滞缓,3d后进入快速增长期,在第七八天进入平台期,第10天细胞增殖能力有减弱趋势,其中对照组细胞增殖能力低于实验组(P＜0.05);②激光共聚焦显微镜观察结果:两组于培养第7天可见胞内呈现较强的钙荧光峰值,随着诱导时间延长,14d的细胞内钙荧光峰值出现下降,实验组培养7,14d的细胞内的钙荧光峰值强于对照组(P＜ 0.001),且实验组14d的细胞内钙荧光峰值与对照组7d的细胞内钙荧光峰值无差异;③结果表明:甲状旁腺激素可增加骨髓间充质干细胞内钙离子荧光峰值,维持骨髓间充质干细胞增殖功能.
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骨髓间充质干细胞移植修复皮肤创伤
背景:目前大部分有关间充质干细胞治疗皮肤创伤的实验均使用大鼠、小鼠和兔进行,而应用犬骨髓间充质干细胞治疗皮肤创伤的研究较少.目的:观察犬骨髓间充质干细胞治疗皮肤创面的效果.方法:在4只犬肩胛部、臀部两侧分别做3 cm×3 cm的正方形皮肤创伤,右侧作为实验组,在创面制作后的第1,3天,创口皮下注射异体犬骨髓间充质干细胞悬液;左侧作为对照组,在创面制作后的第1,3天,创口皮下注射间充质干细胞培养基,动态观察创面愈合情况.结果与结论:在第1周时间内,两组创口处都有淡黄色炎性物质存在,炎症反应明显,且对照组炎性物质较实验组多,肉芽组织生长速度慢于实验组;第2周至伤口愈合时间段,创口在形成肉芽组织的基础上开始明显上皮化,主要表现从伤口四周向中央形成新鲜上皮,实验组开始上皮化时间早于对照组,创口面积小于对照组;第3周时,实验组有的创口完全愈合,且愈合后的创面较对照组平整、光滑.实验组细胞移植后8,12d的创口面积略小于对照组,创口愈合速度稍快于对照组,但差异均无统计学意义.结果表明,犬骨髓间充质干细胞移植具有促进皮肤创面愈合的可能或趋势.
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LncRNA-Braveheart促进骨髓间充质干细胞在体外向心肌样细胞分化
背景:课题组前期研究发现骨髓间充质干细胞移植能够改善大鼠心肌梗死后心功能,但整体效果并不太理想,骨髓间充质干细胞在体内局部梗死微环境中的分化效率低下,其向心肌细胞分化的能力极其有限.目的:采用IncRNA-Bvht体外转染骨髓间充质干细胞,观察其对骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的影响.方法:构建含IncRNA-Bvht的病毒载体pLVX-IRES-ZsGreen1-lncRNA-Bvht,对骨髓间充质干细胞进行IncRNA-Bvht转染并检测转染效率.分离培养C57BL/6小鼠的骨髓间充质干细胞,并将第3代细胞分为3组:骨髓间充质干细胞组、空载体组和IncRNA-Bvht组.各组细胞培养48 h后用5-氮杂胞苷进行诱导分化24 h再进行正常培养2周,荧光显微镜观察骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化情况,免疫荧光染色、Western blot、qRT-PCR检测心肌分化标记物肌钙蛋白T和肌节蛋白的表达.结果与结论:①诱导分化后细胞形态发生改变,细胞之间形成连接,排列方向趋于一致;②免疫荧光检测结果显示IncRNA-Bvht组肌钙蛋白T和肌节蛋白表达呈现强阳性;肌钙蛋白T阳性细胞的比例显著增加;③qRT-PCR和Western blot检测结果显示IncRNA-Bvht组肌钙蛋白T和肌节蛋白的表达较空载体组和骨髓间充质干细胞组均明显升高(P＜0.01);④结果提示,IncRNA-Bvht转染能够有效促进骨髓间充质l细胞在体外向心肌样细胞发生分化.
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恒河猴骨髓间充质干细胞的培养与鉴定
背景:关于恒河猴骨髓间充质干细胞的研究结果很有限,来自幼年恒河猴骨髓间充质干细胞的分化潜力仍然未知.目的:探讨体外分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞生物学特性,对其生长曲线和表型进行初步鉴定.方法:采用密度梯度离心法和全骨髓贴壁培养法提取培养幼年恒河猴骨髓间充质干细胞,利用MTS法绘制第2,7代骨髓间充质干细胞生长曲线,利用流式细胞仪分析法检测第3代骨髓间充质干细胞凋亡及第4代骨髓间充质干细胞表面标志物CD29、CD34、CD45、CD90、CD147表达,检测第3代骨髓间充质干细胞的成骨及成脂分化能力.结果与结论:①第2,7代骨髓间充质干细胞在培养第一二天为潜伏期,第3-7天为对数生长期,第8天后细胞增殖逐渐减慢,进入平台期,第7代细胞增殖能力弱于第2代;②骨髓间充质干细胞表面标志物CD90、CD29、CD147呈阳性表达,CD34、CD45呈阴性表达;③流式细胞仪细胞凋亡检测结果显示,73.83％为活细胞,21.76％为死亡细胞,4.27％为凋亡细胞;④骨髓间充质干细胞可诱导分化为成骨细胞与成脂细胞;⑤结果表明,分离培养的恒河猴骨髓间充质干细胞生长活跃,有较强的增殖及多向分化能力.
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表皮生长因子影响大鼠骨髓间充质干细胞增殖和迁移的信号通路
背景:表皮生长因子作为一种辅助生长因子,但是对于骨髓间充质干细胞的生长是否必须尚无定论.目的:建立大鼠骨髓间充质干细胞分离提取以及鉴定的方法,同时探索表皮生长因子对其增殖能力以及迁移能力的影响,同时探索其潜在机制.方法:①采用全骨髓贴壁法,分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,培养至第3代,使用流式细胞仪检测细胞表面抗原CD29,CD45,CD90表达情况.通过成骨和成脂分化诱导,更进一步鉴定骨髓间充质干细胞;②同时通过CCK-8法和克隆形成实验测量表皮生长因子对骨髓间充质干细胞的第3代细胞的增殖能力的影响.同时通过Transwell小室验证表皮生长因子对骨髓间充质干细胞的第3代细胞迁移能力的影响.通过蛋白印迹实验检测PI3K/Akt和核因子KB信号通路相关蛋白表达水平,探索表皮生长因子的作用机制.结果与结论:①原代骨髓间充质干细胞呈多角形和梭形,随着培养时间增加,逐渐呈梭形为主.流式细胞术检测第3代细胞表面CD29,CD90表达呈阳性,CD45表达成阴性.并且对骨髓间充质干细胞的第3代细胞成功进行了成骨和成脂分化诱导;②表皮生长因子能够促进第3代细胞的增殖,且细胞中PI3K/Akt信号通路关键分子p-Akt表达水平的增加,同时其下游信号分子Bax表达水平降低而Bcl-2表达升高.表皮生长因子能够通过调节核因子κB信号通路分子p 65以及IκB的磷酸化水平,同时也增加了基质金属蛋白酶9的表达水平,从而促进大鼠骨髓间充质干细胞的迁移;③结果表明表皮生长因子促进骨髓间充质干细胞的增殖和迁移.
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盐酸四环素对大鼠骨髓间充质干细胞的成骨诱导分化活性
背景:盐酸四环素不仅具有促进骨髓间充质干细胞增殖的作用,还具有极强的骨亲活性.研究盐酸四环素诱导骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化,可为获得骨组织工程细胞提供新方法.目的:观察体外盐酸四环素对大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的作用.方法:骨髓全血细胞贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,通过细胞形态和骨髓间充质干细胞标志物CD34、CD45、CD90、CD29流式检测对骨髓间充质干细胞进行鉴定;取第3代骨髓间充质干细胞与盐酸四环素共培养,以含体积分数10％FBS的L-DMEM的完全培养基培养做对照组.通过检测碱性磷酸酶活性、Ⅰ型胶原和骨钙素免疫组织化学染色、茜素红矿化钙结节组织化学染色、Ⅰ型胶原蛋白和骨钙素的RT-PCR的基因表达,研究盐酸四环素对骨髓间充质干细胞的成骨诱导分化活性.结果与结论:①盐酸四环素能够持续促进骨髓间充质干细胞的碱性磷酸酶活性增加,与对照组比较具有显著性差异;②盐酸四环素诱导培养骨髓间充质干细胞21 d,Ⅰ型胶原蛋白和骨钙素染色表达阳性,茜素红染色出现红色钙结节,RT-PCR检测Ⅰ型胶原蛋白和骨钙素基因表达;对照组程阴性表达;③结果表明,盐酸四环素具有明显促进骨髓间充质干细胞成骨诱导分化的作用.
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人血红素加氧酶1过表达大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力
背景:骨髓间充质干细胞移植后在宿主恶劣的缺血缺氧微环境中生存率过低,限制了其治疗急性心肌梗死的疗效.目的:探讨人血红素加氧酶1基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力.方法:人血红素加氧酶1重组腺病毒转染大鼠骨髓间充质干细胞,Western blot法确定人血红素加氧酶1蛋白表达的佳时间;以缺氧无血清条件模拟体内缺血缺氧微环境培养人血红素加氧酶1基因修饰的大鼠骨髓间充质干细胞,采用CCK-8试剂盒和锥虫蓝染色法检测缺血缺氧培养12,24,48,72 h的细胞存活率,流式细胞术检测缺血缺氧培养24 h的细胞凋亡情况.结果与结论:①在转染后第4天人血红素加氧酶1蛋白表达量多;②锥虫蓝染色法和CCK-8法检测人血红素加氧酶1组缺血缺氧培养12,24,48,72 h的细胞生存率均高于对照组(P＜0.05);③流式细胞术检测人血红素加氧酶1组缺血缺氧培养24 h的生存率高于对照组(P＜0.05);④结果表明,人血红素加氧酶1修饰的大鼠骨髓间充质干细胞对缺血缺氧环境损伤的耐受能力明显增强.
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抑癌基因WWOX促进卵巢癌干细胞的凋亡及机制
背景:研究表明,WWOX能够影响卵巢癌干细胞的生长,其作用机制是否与Hedgehog信号通路有关则未见相关报道.目的:研究过表达WWOX对卵巢癌干细胞凋亡的作用及机制.方法:转染WWOX过表达载体pcDNA3.1-WWOX(pcDNA3.1-WWOX组)和pcDNA4.0-WWOX(pcDNA4.0-WWOX组)至卵巢癌干细胞中,同时转染空载体pcDNA3.1 (pcDNA3.1组)和pcDNA4.0(pcDNA4.0组),设置未转染组(只加入转染试剂Lipofectamine2000).培养48 h后,Western blot检测细胞中WWOX水平,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中Hedgehog信号通路相关蛋白SHH、PTCH1、Gli-1、SMO和凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-3的表达水平.用Hedgehog信号通路抑制剂环巴胺作用于未转染的卵巢癌干细胞(环巴胺组)和转染WWOX过表达载体的卵巢癌干细胞(WWOX+环巴胺组),培养48 h后,再进行Mlr、流式细胞术、Western blot检测.结果与结论:①pcDNA4.0-WWOX组细胞中WWOX表达水平明显高于pcDNA3.1-WWOX组(卢27.84,P=0.00).后期选用转染pcDNA4.0-WWOX的卵巢癌干细胞过表达WWOX;②过表达WWOX能够抑制卵巢癌干细胞增殖,促进卵巢癌干细胞凋亡;③过表达WWOX能够抑制卵巢癌干细胞中SHH、PTCH1、Gli-1、SMO表达,促进Cleaved Caspase-3表达;④环巴胺能够抑制SHH、PTCH1、Gli-1、SMO表达,促进CleavedCaspase-3表达.环巴胺对Hedgehog信号通路具有明显的抑制作用;⑤环巴胺能够增强过表达WWOX诱导的卵巢癌干细胞凋亡,增强过表达WWOX对卵巢癌干细胞增殖的抑制作用;⑥结果表明,WWOX对卵巢癌干细胞的增殖抑制作用和促凋亡作用可能与抑制Hedgehog信号通路有关.
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多发性骨髓瘤U266细胞株中侧群细胞的生物学特性与耐药性的关系
背景:研究表明,肿瘤干细胞是导致肿瘤难以根治,化疗失败和疾病复发的基础和主要原因.因此,针对肿瘤干细胞耐药性的研究成为干细胞领域的研究热点.目的:研究多发性骨髓瘤U266细胞株中侧群细胞的生物学特性及其与耐药性的关系.方法:利用流式细胞仪检测U266细胞株中侧群细胞比例,并采用流式细胞分选方法分离侧群细胞和非侧群细胞,进一步比较2个细胞亚群的细胞周期、耐药蛋白、甲基纤维素克隆生长情况;使用RT-PCR方法检测2个细胞亚群ABCG2、MDR1基因的表达.结果与结论:①U266细胞株中侧群细胞比例为(2.46±0.35)％,绝大多数细胞都处于G0期,GO/G1比例分别达(81.50±5.42)％,高于非侧群细胞(39.85±3.21)％,差异有显著性意义(P＜0.05);②侧群细胞中耐药蛋白P-gp,ABCG2阳性表达率高于非侧群细胞,差异有显著性意义(P＜0.05);③侧群细胞的体外克隆形成能力较强,集落形成率高于非侧群细胞,差异有显著性意义(P＜0.05);④侧群细胞中ABCG2、MDR1基因的表达明显高于非侧群细胞(P＜0.05);⑤结果表明,U266细胞株中存在肿瘤干细胞样侧群细胞亚群,绝大多数侧群细胞处于G0期,其ABCG2、MDR1基因表达明显增强,在骨髓瘤干细胞的耐药性机制形成中发挥重要作用.
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5-氮杂胞苷联合血管紧张素Ⅱ诱导脂肪间充质干细胞向心肌细胞的分化
背景:采取有效措施修复坏死心肌成为临床治疗心肌梗死的新方向.目的:探讨5-氮杂胞苷联合血管紧张素Ⅱ对小鼠脂肪间充质干细胞向心肌细胞分化的影响.方法:取20只4周龄ICR小鼠,利用Ⅰ型胶原酶消化法获得脂肪间充质干细胞,观察细胞的形态学特点,运用MT-T-法检测细胞的增殖情况,运用免疫荧光技术检测细胞表面抗原CD90,CD105,CD73,CD45的表达.第4代脂肪间充质干细胞培养24 h后,更换为含15 μmol/L 5-氮杂胞苷和15 μmol/L 5-氮杂胞苷+0.1 μmol/L血管紧张素Ⅱ的培养基诱导24 h,然后更换为完全培养基,Western Blot检测细胞中cTnT蛋白表达.结果与结论:①原代脂肪间充质干细胞胞核较小,呈梭形、星形,传代后细胞体积增大,形态趋于一致,排列规则;②第3代小鼠脂肪间充质干细胞的生长曲线呈现“S”形,第1-3天为潜伏期,第4天进入对数生长期,第5-7天细胞生长达到峰值,进入平稳期;③第4代脂肪间充质干细胞表面CD90、CD105及CD73呈阳性表达,CD45阴性表达;④5-氮杂胞苷联合血管紧张素Ⅱ组心肌细胞中cTnT蛋白表达量显著高于5-氮杂胞苷(P＜0.05);⑤结果表明,5-氮杂胞苷联合血管紧张素Ⅱ能够显著促进脂肪间充质干细胞向心肌细胞样细胞分化.
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两种方法培养骨质疏松症小鼠脂肪干细胞的比较
背景:获得充足的脂肪干细胞是自体移植修复骨质疏松症骨缺损的前提,因此如何高效、简便、经济的获得自体原代脂肪干细胞是治疗骨质疏松症的关键.目的:采用组织块法和胶原酶消化法体外培养骨质疏松症小鼠脂肪干细胞,并对两种培养方法进行比较分析.方法:切除雌性C57BL/6小鼠双侧卵巢,制作骨质疏松模型,造模成功后取小鼠皮下脂肪组织,分别采用组织块法和胶原酶消化法分离培养脂肪干细胞.应用流式细胞仪检测第3代脂肪干细胞表面特异性抗原;培养7d后,检测细胞产量;检测第3代脂肪干细胞的增殖;检测第4代脂肪干细胞的成脂及成骨分化能力.结果与结论:①组织块法培养第3代细胞CD34、CD146、Sca-1表达率分别为(15.22±1.85)％、(75.55±3.36)％、(83.48±4.22)％,胶原酶消化法第3代细胞CD34、CD146、Sca-1表达率分别为(13.46±2.21)％、(76.62±2.47)％、(84.84±3.56)％;②组织块法每毫克脂肪组织获得的细胞产量高于胶原酶消化法(P＜0.05);③培养24 h后,组织块培养法的细胞增殖率高于胶原酶消化法;④两种方法得到的脂肪干细胞均可向脂肪细胞和成骨细胞方向分化,两组间成脂量及成骨量比较差异无显著性意义(P＞0.05);⑤结果表明,组织块法比胶原酶消化法更适合体外培养脂肪干细胞,可为骨质疏松症患者自体移植脂肪干细胞治疗骨质疏松性骨折和骨缺损研究提供充足的细胞来源.
