中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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牵张激活离子通道在间充质干细胞机械转导中的作用机制
背景:间充质干细胞因其多向分化潜能以及诸多优点成为组织工程热门的种子细胞之一,如何诱导其定向分化是一大难题.力学刺激是影响间充质干细胞增殖与分化的重要因素,目前很多研究通过体外加载途径模拟体内不同组织器官的力学环境,得出不同力学环境对间充质干细胞的影响,但是间充质干细胞机械转导的具体途径依然是未知的.牵张激活离子通道是机械转导中的重要组分,已有的研究表明其在间充质干细胞的机械转导过程中起着重要作用.目的:总结间充质干细胞力学调控的研究,分析归纳牵张离子通道在间充质干细胞机械转导中的作用及可能机制.方法:检索SCI数据库和PubMed数据库,检索词为“mesenchymal stem cell,stretch-activated channel,mechanical,tension,compression,fluid flow,hydrostatic pressure,piezo,TRP”.检索建库至2018年4月发表的有关间充质干细胞和牵张激活通道相关进展的文章.共检索到相关文献160篇,按照纳入与排除标准,终纳入70篇文献进行总结.结果与讨论:间充质干细胞因为具有自我更新能力及多向分化潜能是组织工程重要的种子细胞,探讨影响其增殖与分化的因素及机制一直是研究的热点.在众多影响因素中,力学因素尤为重要,目前作用在间充质干细胞上的力主要分为牵张、压缩、流动剪切力与静水压力4种,这些力学刺激都可以调控间充质干细胞的命运.牵张激活离子通道感受细胞表面受到的力,被激活后介导特定的离子如钙离子进入细胞,同时可以与其他离子通道、细胞骨架、转录因子等共同成分完成机械信号转导,调控间充质干细胞的命运.
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脐血间充质干细胞联合单倍体造血干细胞移植治疗再生障碍性贫血
背景:目前再生障碍性贫血的主要治疗方案为免疫抑制治疗或造血干细胞移植.近年来随着造血干细胞移植技术的提高,HLA单倍体相合的异基因造血干细胞越来越多的应用于再生障碍性贫血的治疗.间充质干细胞是一种多能干细胞,能够与造血干细胞相互作用,提供造血干细胞生长所需的基质及生长因子.此外,还通过调节机体的免疫功能,抑制免疫排斥反应,促进免疫重建.目的:观察脐血间充质干细胞联合HLA单倍体相合造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血的疗效及安全性.方法:自2015年4月至2017年11月采用HLA单倍体相合的骨髓及外周血造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血患者6例.移植预处理方案采用氟达拉滨+环磷酰胺+兔抗人胸腺细胞球蛋白.移植物采用骨髓联合外周血干细胞,回输骨髓干细胞前6h输注脐血间充质干细胞.移植物抗宿主病预防采用环孢素、短程甲氨蝶呤联合吗替麦考酚酯方案.结果与结论:①6例患者中有1例于移植后+102 d死于重症感染,中性粒细胞于+48 d植活,血小板未植活.余5例无病生存,平均中性粒细胞植活时间为+11 d,平均血小板植活时间为+21 d;②6例患者中2例发生Ⅰ,Ⅱ度的移植物抗宿主病,3例巨细胞病毒血症,1例EB病毒感染;③结果表明,对于难治性、重型再障患者缺乏HLA全相合的亲缘及非亲缘供者时,脐血间充质干细胞联合单倍体造血干细胞移植可作为治疗的另一种选择值得探索.
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人尿液干细胞移植治疗大鼠心肌损伤
背景:近年来多项研究已经显示骨髓间充质干细胞、脂肪干细胞、心肌干细胞等可以参与心肌修复,但是人尿源性干细胞在心肌梗死方面的研究还非常缺乏.目的:探讨人尿液干细胞移植对急性心肌梗死模型大鼠心功能的影响及其机制.方法:64只SD大鼠,随机取20只为正常对照组,余44只结扎冠状动脉左前降支制备急性心肌梗死模型,终建模成功40只大鼠,随机分为心肌梗死组和人尿液干细胞移植组,每组20只,正常对照组和心肌梗死组尾静脉注射生理盐水,人尿液干细胞移植组尾静脉注射CM-Dil标记的人尿液干细胞,1次/d,连续3d.移植后6周,超声心动图检测大鼠心功能,然后取心肌组织行CD34免疫组化染色、苏木精-伊红染色、TUNEL染色、RT-PCR检测.结果与结论:①与心肌梗死组比较,人尿液干细胞移植组大鼠心功能明显改善(P＜0.05),新生毛细血管密度增多(P＜0.05),细胞凋亡率显著降低(P＜0.05);②正常对照组和心肌梗死组大鼠心肌组织中没有CM-Dil阳性细胞,人尿液干细胞移植组大鼠心肌组织出现大量的CM-Dil阳性细胞;③与心肌梗死组相比,人尿液干细胞移植组心肌组织中Bcl-2基因表达显著增高(P＜0.05),Caspase-3基因表达显著降低(P＜0.05);④结果表明,人尿液干细胞移植对损伤心肌有明显的修复作用,能够减少心肌细胞凋亡,改善心肌梗死大鼠心功能.
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人脐带间充质干细胞移植治疗小鼠皮肤溃疡
背景:人脐带间充质干细胞对于皮肤溃疡的治疗需进行更多方面的评估.目的:探讨人脐带间充质干细胞促进小鼠皮肤溃疡愈合的可能性.方法:取C57小鼠20只,随机分成对照组和实验组,每组10只.用无菌剪刀在小鼠背部建立纵行皮肤创面模型,创面约2.5 cmx2.0 cm大小,深度约5 mm.造模后,实验组创周和创面注射1 mL人脐带间充质干细胞悬液,对照组注射等量生理盐水.每天测量两组小鼠溃疡面积,计算创面愈合率,并于移植0,7,14d取小鼠皮肤溃疡周围组织,免疫组织化学检测血管内皮生长因子的表达,免疫荧光染色检测抗细胞核抗体MAB1281表达用于评估人脐带间充质干细胞在溃疡周围的残留率.结果与结论:①实验组溃疡愈合时间短于对照组(P＜0.05);②实验组创面血管内皮生长因子表达量明显高干对照组(P＜0.05);③移植后0d人脐带间充质干细胞残留多,随着皮肤溃疡的愈合,人脐带间充质干细胞在溃疡周围残留量逐渐减少;④结果表明,人脐带间充质干细胞在小鼠体内可能通过旁分泌血管内皮生长因子的方式促进局部血管新生,进而促进皮肤溃疡愈合.
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三种间充质干细胞向神经元样细胞的诱导与分化
背景:作为采集方便、来源广泛、潜能巨大的细胞来源,干细胞在疾病细胞疗法的研究已发展壮大,其中常见使用的干细胞有骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脐血间充质干细胞.目的:比较骨髓间充质干细胞、胎盘间充质干细胞和脐血间充质干细胞与神经细胞的共培养后的变化.方法:体外分离培养人骨髓间充质干细胞、人胎盘间充质干细胞和人脐血间充质干细胞,通过Transwell平板与神经细胞共培养,观察间充质干细胞分化成神经细胞的形态及神经元特异性烯醇化酶表达的变化.结果与结论:神经共培养系统中3种间充质干细胞均逐渐变为星状,并出现相互连接,且阳性表达神经元特异性烯醇酶.表明神经细胞提供的微环境可以诱导及促进3种间充质干细胞向神经元样细胞分化.
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降钙素基因相关肽调节滑膜间充质干细胞的增殖与成骨分化
背景:已有研究证实降钙素基因相关肽可促进滑膜间充质干细胞的增殖与成骨分化,但是涉及其具体作用机制的研究较少.目的:观察降钙素基因相关肽干预对滑膜间充质干细胞增殖与成骨分化的影响,同时探讨Wnt/β-catenin信号通路在此过程中的作用.方法:采用胰蛋白酶联合Ⅰ型胶原酶消化法从兔膝关节滑膜组织中分离培养滑膜间充质干细胞.选择第3代滑膜间充质干细胞悬液,分4组培养:空白对照组常规培养,不进行任何干预;实验组加入10s mol/L的降钙素基因相关肽;抑制剂组加入10-8 mol/L的Wnt信号通路抑制剂DKK-1;联合干预组加入10-8 mol/L的Wnt信号通路抑制剂DKK-1与10-8 mol/L的降钙素基因相关肽,干预14d后进行相关指标检测.结果与结论:①抑制剂组β-catenin蛋白表达低于空白对照组(P＜0.05),实验组β-catenin蛋白表达高于空白对照组(P＜0.05),联合干预组β-catenin蛋白表达高于抑制剂组(P＜0.05);②培养第3-9天,抑制剂组细胞增殖慢于其余3组(P＜0.05);培养第5-9天,实验组细胞增殖始终快于空白对照组、联合干预组(P＜0.05);③实验组碱性磷酸酶活性、矿化结节面积以及骨形态发生蛋白2、Runx2、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原基因表达高于其余3组(P＜0.05),抑制剂组碱性磷酸酶活性、矿化结节面积以及骨形态发生蛋白2、Runx2、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原基因表达低于空白对照组(P＜0.05),联合干预组碱性磷酸酶活性、矿化结节面积以及骨形态发生蛋白2、Runx2、碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原基因表达高于抑制剂组(P＜0.05);④实验证实降钙素基因相关肽能促进滑膜间充质干细胞的增殖与成骨分化,且Wnt/β-catenin信号通路与其增殖与成骨分化调控密切相关.
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骨髓间充质干细胞体外成软骨分化的形态学变化
背景:骨髓间充质干细胞在向软骨细胞分化过程中可形成聚合体,但是该形态学特点是否可代表骨髓间充质干细胞已经成软骨分化尚无研究报道.目的:观察骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中聚合体的形成和成软骨分化情况.方法:体外培养大鼠骨髓间充质干细胞,传代至第6代时备用.对照组用无血清LG-DMEM培养基培养14d,诱导组用含转化生长因子β3的成软骨完全诱导培养基培养14d,倒置显微镜观察诱导过程中细胞形态变化;免疫荧光染色、甲苯胺蓝染色、qRT-PCR检测成软骨特异指标Ⅱ型胶原、蛋白多糖和成软骨转录因子SOX9的基因表达及蛋白合成情况.结果与结论:①与对照组相比,诱导组骨髓间充质干细胞在第3天失去典型的成纤维形态,第7天开始形成成簇的单层聚合体,第14天形成直径更大的多层聚合体;②聚合体的免疫荧光染色及甲苯胺蓝染色均阳性,而聚合体外的单个细胞无特异染色;③qRT-PCR亦证实诱导组有成软骨特异基因Ⅱ型胶原、蛋白多糖和SOX9表达;④上述研究结果提示骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中聚合体的形成可作为成软骨分化的一种形态学检测指标.
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生长因子诱导骨髓间充质干细胞肝向分化抑制慢性肝纤维化
背景:骨髓间充质干细胞在改善肝纤维化或肝硬化所致肝损伤中的作用仍存在争议,骨髓间充质干细胞移植对慢性肝纤维化的治疗作用是否与其分化程度相关,尚有待进一步研究.目的:通过体外诱导骨髓间充质干细胞肝向分化并进行体内植入,观察其对肝脏慢性纤维化的治疗作用.方法:分离、培养、纯化大鼠骨髓间充质干细胞,通过体外诱导骨髓间充质干细胞肝向分化,获得肝样细胞.采用四氯化碳构建大鼠慢性肝纤维化模型,将骨髓间充质干细胞或肝样细胞通过尾静脉注射法行体内植入,观察并比较各组间大鼠生存率、肝纤维化程度、肝功能指标.结果与结论:①骨髓间充质干细胞具有体外分化潜能,经诱导成功分化为肝样细胞;②将肝样细胞移植到慢性肝纤维化大鼠体内,大鼠4周生存率提高至66.7％,肝纤维化程度减轻至(14.69±0.37)％,白蛋白水平提高至(29.4±0.7) mg/L,谷草转氨酶水平降低至(347.0±11.3) U/L,优于模型组及骨髓间充质干细胞移植组(P＜0.05);③结果提示,骨髓间充质干细胞经肝向诱导分化后行体内移植,能够改善慢性肝纤维化大鼠的肝脏功能,减轻纤维化程度,并提高生存率.
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粒细胞刺激因子对白血病细胞趋化因子受体4表达及趋化能力和骨髓微环境的影响
背景:骨髓微环境可通过细胞黏附分子介导白血病细胞耐药和免疫逃逸.这些黏附分子可作为新的作用靶点,通过降低其表达水平和功能,有望打破白血病耐药机制.目的:观察重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony stimulating factor,rhG-CSF)对急性白血病WEHI-3细胞趋化因子受体4表达水平和趋化性的影响,以及在小鼠体内对骨髓基质细胞衍生因子1和外周血Treg细胞的作用.方法:①将急性白血病细胞株WEHI-3与rhG-CSF共同孵育6,12,18,24h后,用流式细胞术检测趋化因子受体4表达水平,微孔细胞转移实验检测其迁移能力;②健康Balb/C小鼠给予rhG-CSF皮下注射,ELISA法检测骨髓及外周血中基质细胞衍生因子1水平,流式细胞术检测脾脏及外周血Treg细胞比例.结果与结论:①rhG-CSF作用后WEHI-3细胞表面趋化因子受体4的表达水平明显下降(P＜0.05),细胞对基质细胞衍生因子1的趋化性显著降低(P＜0.05);②健康小鼠应用rhG-CSF处理后,骨髓中基质细胞衍生因子1水平较生理盐水组明显降低(P＜0.05),外周血及骨髓Treg细胞比例显著升高(P＜0.05);③结果表明,rhG-CSF可以下调白血病细胞表面趋化因子受体4的表达,降低骨髓中基质细胞衍生因子1水平,并可动员Treg细胞进入外周血,从而打破骨髓微环境介导的免疫逃逸和耐药,改善白血病的免疫治疗效果.
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炎症诱导缺血缺氧环境下骨髓间充质干细胞的活性
背景:局部组织缺血缺氧和炎症微环境因素是造成骨髓间充质干细胞生存率低的主要原因.目的:探讨炎症环境下缺血缺氧对骨髓间充质干细胞活性的影响以及细胞活性与炎症因子之间的关系.方法:采用全骨髓培养法提取培养骨髓间充质干细胞,流式细胞仪对细胞进行鉴定,将第3代细胞进行不同时间氧糖剥夺(6,12,24 h)和炎症诱导(氧糖剥夺、氧糖剥夺+20 μg/L肿瘤坏死因子α、氧糖剥夺+100 μg/L脂多糖),倒置显微镜观察细胞生长状况,MTT法和流式细胞仪测定细胞活力,ELISA检测上清液中白细胞介素6、白细胞介素10、肿瘤坏死因子α水平,RT-PCR检测细胞中白细胞介素6、白细胞介素10、肿瘤坏死因子α、NF-KB基因表达水平.结果与结论:①成功分离培养大鼠骨髓间充质干细胞且纯度为95％以上;②氧糖剥夺6h和12h细胞活力明显增强,氧糖剥夺24 h细胞活力明显下降;在肿瘤坏死因子α和脂多糖诱导下氧糖剥夺6,12,24 h后细胞活力下降;③与正常条件比较,氧糖剥夺6,12h后白细胞介素6、白细胞介素10水平和白细胞介素6、白细胞介素10、肿瘤坏死因子α、NF-KB基因表达下降;④与氧糖剥夺条件比较,在肿瘤坏死因子α和脂多糖诱导下氧糖剥夺6,12h后白细胞介素6、肿瘤坏死因子α水平和白细胞介素6、白细胞介素10、肿瘤坏死因子α、NF-KB基因表达显著升高;⑤由此可见,在肿瘤坏死因子α和脂多糖诱导下,骨髓间充质干细胞活力受炎症因子表达和分泌影响,随着炎症因子表达和分泌增加,骨髓间充质干细胞的活力降低.
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脂肪来源干细胞联合胶原蛋白生物工程支架移植干预大鼠慢性难愈合性创面血管内皮生长因子的表达
背景:生物工程支架是临床治疗慢性难愈合性创面的常用方法,具有一定的疗效,但也存在一些问题.脂肪来源干细胞作为新兴的治疗慢性难愈合性创面的方法具有其独特的疗效和优势.但是,脂肪来源干细胞和生物工程支架联合应用治疗慢性难愈合性创面的疗效和机制尚不清楚.目的:研究脂肪来源干细胞联合胶原蛋白生物工程支架移植对慢性难愈性创面血管内皮生长因子表达的影响.方法:实验共选取31只SD大鼠,购自上海斯莱克实验动物责任有限公司.取1只大鼠腹股沟处脂肪,分离培养原代脂肪来源干细胞.将另外30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、支架组、脂肪来源干细胞组和联合组.对照组制备全层皮肤缺损创面(在大鼠腰椎正中偏上部两侧分别制备1处全层皮肤缺损伤口),术后每日常规换药;其余各组制备2处慢性难愈合性创面(同对照组制备全层皮肤缺损伤口,创面局部注射醋酸氢化可的松);模型组术后每日给予常规换药;支架组术后给予生物蛋白工程支架覆盖创面;脂肪来源干细胞组给予自体自体脂肪干细胞移植;联合组在脂肪来源干细胞移植后给予生物工程支架覆盖创面.干预7d后取材,观察创面情况,测量创面面积大小;采用免疫组化法检测血管内皮生长因子表达,采用Western blot检测血管内皮生长因子蛋白表达量,采用qPCR检测血管内皮生长因子mRNA表达情况.结果与结论:①对照组创面面积显著小于其他组创面面积(P＜0.05);联合组创面面积显著小于模型组、支架组和脂肪来源干细胞组(P＜0.05);②对照组血管内皮生长因子表达水平高,血管内皮生长因子蛋白和mRNA表达水平均显著高于其他组(P＜0.05);联合组血管内皮生长因子表达较高,血管内皮生长因子蛋白和mRNA表达水平显著多于模型组、支架组和脂肪来源干细胞组(P＜0.05);③结果提示,脂肪来源干细胞联合胶原蛋白生物工程支架移植上调难愈合性创面血管内皮生长因子表达,促进创面愈合.
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骨形态发生蛋白14成骨诱导脂肪间充质干细胞复合丝素蛋白/羟基磷灰石支架修骨缺损
背景:临床上较大骨缺损往往难以自行修复,而通常采用的自体骨、异体骨移植也逐渐显现出其局限性.目前,组织工程技术的开展可以有望解决这一难题.利用转基因技术对干细胞进行成骨诱导,再将其种植在人工支架材料上体外构建组织工程化骨,为大面积骨缺损的修复带来新的希望.目的:探讨丝素蛋白/羟基磷灰石支架材料与骨形态发生蛋白14转染脂肪间充质干细胞的生物相容性,并检验二者构建的组织工程化骨用于修复骨缺损的效果.方法:胶原酶消化法分离培养大鼠脂肪间充质干细胞,第3代细胞使用携带骨形态发生蛋白14基因的重组慢病毒转染,利用荧光显微镜计算转染效率.制备丝素蛋白/羟基磷灰石支架,将转染成功后的脂肪间充质干细胞与丝素蛋白/羟基磷灰石支架材料体外复合,通过扫描电镜和MTT法评估材料对细胞的生物相容性.后将上述组织工程化骨植入实验组大鼠尾椎缺损处,将空白转染的脂肪间充质干细胞复合支架植入对照组大鼠尾椎缺损处,通过摄片及micro CT检查来评估骨缺损的修复效果.结果与结论:①骨形态发生蛋白14转染的脂肪间充质干细胞在丝素蛋白/羟基磷灰石支架材料上能够良好地黏附、增殖;②术后8周,实验组骨缺损处密度明显增高,可见大量骨痂形成,骨连续性恢复较好.对照组骨缺损处仍可见未完全吸收的支架材料影,周围无明显新生骨组织,未能将骨缺损处连接;③结果表明,丝素蛋白/羟基磷灰石支架材料对骨形态发生蛋白14转染的脂肪间充质干细胞具有良好的生物相容性,二者复合构建的组织工程化骨可促进骨缺损修复,效果良好.
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脂肪间充质干细胞对硬皮病小鼠皮损组织成纤维细胞增殖的影响及其机制
背景:脂肪间充质干细胞在体外长期培养过程中始终保持多向分化潜能,可通过分泌多种抗纤维化细胞因子或生长因子,参与调节成纤维细胞增殖、抑制胶原沉积而发挥抗纤维化作用.目的:观察脂肪间充质干细胞对硬皮病小鼠皮损组织成纤维细胞增殖、凋亡的影响,并初步探讨相关机制.方法:从硬皮病小鼠模型皮损组织分离、纯化出成纤维细胞,经传代培养后,根据处理方式分为5组:空白对照组(A组)、脂肪间充质干细胞干预组(B组)、Wnt抑制剂HY-15597处理组(C组)、Wnt激活剂SB-216763处理组(D组)、脂肪间充质干细胞+SB-216763处理组(E组).MTT法和流式细胞仪检测各组成纤维细胞增殖率和凋亡率;蛋白免疫印迹法检测各组成纤维细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原和Wnt信号通路相关蛋白表达水平.结果与结论:①与A组相比,B组和C组成纤维细胞增殖率均显著降低、凋亡率显著升高,D组增殖率显著增加、凋亡率降低,且呈时间依赖性(P＜0.05).与D组相比,E组成纤维细胞增殖率显著较低,凋亡率较高(P＜0.05);②与A组相比,B组和C组成纤维细胞中羟脯氨酸含量以及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Wnt2、Wnt3a、β-catenin表达水平均显著降低,而D组均显著增加(P＜0.05).E组羟脯氨酸含量和Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Wnt2、Wnt3a、β-catenin水平均显著低于D组(P＜0.05);③结果表明,脂肪间充质干细胞可以抑制硬皮病小鼠皮损组织成纤维细胞的增殖和胶原沉积,且这一过程与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用有关.
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混合人AB血清体外有效扩增脐带间充质干细胞的可行性
背景:目前人脐带间充质干细胞培养多采用体积分数为10％胎牛血清或者多种细胞因子组合或者商品化的无血清间充质干细胞专用培养基进行培养,但还没有一种价格低廉、适用临床和相对安全用于患者的标准化培养体系.目的:探讨混合人AB血清用于培养人脐带间充质干细胞的可行性.方法:采用组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞,分别用含体积分数为10％人AB血清的基础培养基以及无血清间充质干细胞专用培养基进行培养,检测2种培养体系中人脐带间充质干细胞的细胞形态、免疫表型、细胞周期等基础指标.结果与结论:①2种培养体系中的人脐带间充质干细胞形态没有显著差异,均为长梭形,但混合人AB血清培养的人脐带间充质干细胞黏附力更强;②流式细胞检测结果显示,2种培养体系中人脐带间充质干细胞均高表达CD73和CD90,低表达CD45和HLA-DR,且表达量差异无显著性意义(P＞0.05);③细胞周期结果显示,2种培养体系中多数人脐带间充质干细胞处于G0-G1期以及S期,DNA指数、变异系数均在正常范围之内;④实验证实,混合人AB血清可作为临床级别的人源血清添加到基础培养基中安全使用.
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体外扩增NK细胞中非克隆性染色体异常的特征及意义
背景:非克隆性染色体异常在干细胞培养中较为常见且研究较多,而在体外扩增的NK细胞中研究甚少.目的:探讨体外扩增NK细胞中非克隆性染色体异常的特征及意义.方法:分离肿瘤患者和健康志愿者外周血单个核细胞,应用人工化抗原递呈细胞刺激NK细胞增殖,流式细胞术鉴定其表型,并测定其产生γ-干扰素的功能.传统G显带法分析NK细胞染色体异常.对两组NK细胞的非克隆性染色体异常发生率、分泌γ-干扰素的功能及两者相关性进行分析.结果与结论:①7例肿瘤患者的NK细胞样本中,6例检测出非克隆性染色体异常,而在12例健康志愿者中,6例存在非克隆性染色体异常;②肿瘤组481个中期分裂相,其中17个含有非克隆性染色体异常;对照组785个中期分裂相,其中7个含有非克隆性染色体异常[3.53％(17/481) vs.0.89％(7/785),Z=-2.212,P=0.028];③4例有放化疗病史的患者,其NK细胞中非克隆性染色体异常频率明显高于对照组(P=0.003)及初诊肿瘤患者(P=0.034),而初诊患者与对照组并无明显差别(P=0.819);④肿瘤组分泌γ-干扰素的NK细胞比例与对照组无明显差别(P=0.371).NK细胞产生Y-干扰素水平与非克隆性染色体异常发生率亦无明显相关性;⑤实验首次探讨了以人工化抗原递呈细胞扩增的NK细胞中非克隆性染色体异常的特征,并初步研究了其与NK细胞功能之间的关系.
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深低温冷冻保存血小板的佳温度及时限
背景:临床对血小板的需求量急剧增加,新鲜液态血小板无法保障临床需求,特别是特殊血型、急诊患者和偏远地区的需求.目的:探讨用5％二甲基亚砜深低温冰冻保存血小板的佳保存温度、时限及复融后的佳使用时间.方法:选择16个机采血小板标本,对冰冻前及在-18℃、-40℃、-80℃冰冻保存1,3,6,12个月、冻融后即刻、冻融后1,2,4h进行相关指标检测,包括血小板计数、平均血小板体积、血小板分布宽度、CD42b和CD62p表达.结果与结论:①-80℃冰冻保存6个月血小板的CD62p表达、冰冻保存12个月血小板的CD42b、CD62p表达分别与冰冻前比较差异有显著性意义(P＜0.05);②-18℃、-40℃冰冻保存6个月血小板的CD42b、CD62p表达与-80℃相比差异均有显著性意义(P＜0.05);③-80℃冰冻保存6个月复融后4 h CD42b、CD62p表达与复融后即刻相比差异有显著性意义(P＜0.05);④结果表明5％二甲基亚砜冰冻保存血小板在越低的温度下保存越好;推荐保存条件为-80℃、6个月内;解冻后的佳使用时间为2h内.
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两种方法培养人胎盘间充质干细胞的生物特性比较
背景:胎盘间充质干细胞能够为细胞治疗提供理想的种子细胞,但其培养未曾使用过胰酶冷消化法,故对此方法进行探索,并与组织块法进行比较,从中筛选出一种方便易行、培养成功率更高的方法.目的:观察胰酶冷消化法与组织块法分离培养的人胎盘间充质干细胞的生物学特性.方法:采用胰酶冷消化法和组织块法从人胎盘中分离、纯化和传代培养人胎盘间充质干细胞(n=6).记录胎盘间充质干细胞首次出现时间及原代培养周期,绘制第3代细胞生长曲线,流式细胞仪分析第3代细胞表面标志,检测其向成神经及成脂方向诱导分化能力.结果与结论:①使用上述2种培养方法均可获得胎盘间充质干细胞,胰酶冷消化法首次出现贴壁细胞时间早于组织块法(P ＜ 0.05),原代培养周期短于组织块法(P＜ 0.05);②生长曲线提示在进入平台期后的各个时间点胰酶冷消化法培养的细胞数量明显多于组织块法(P＜0.05);③2种细胞具有均一的细胞表型,均表达CD29,CD105,不表达CD34,CD45;④2种方法培养的胎盘间充质干细胞经诱导后均具有成神经及成脂分化潜能;⑤上述结果表明,对于胎盘间充质干细胞的培养而言,胰酶冷消化法具有明显优势.
