中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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卡介菌多糖核酸对肺间质纤维化大鼠超微结构的影响
目的:观察卡介菌多糖核酸对肺间质纤维化大鼠肺组织超微结构的影响.方法:实验于2006-03/06在锦州医学院药理实验室完成.36只大鼠随机分为3组,每组12只:①正常对照组:不干预.②模型组:气管内一次性注入盐酸平阳霉素5 mg/kg,制成肺间质纤维化模型.③卡介菌多糖核酸组:同模型组造模,于造模第2天开始,腹腔注射卡介菌多糖核酸0.5 mg/只(1 g/L),隔日1次.以上各组于实验第7,28天各处死6只,进行支气管肺泡灌洗并收集灌洗液.在透射电镜下观察各组大鼠肺组织超微结构的变化,并通过测定肺泡灌洗液中细胞计数和肺组织中羟脯氨酸水平来评价干预效果.结果:36只大鼠进入结果分析.①超微结构的变化:模型组28 d时Ⅱ型细胞数目较前减少,其内板层小体减少,呈空泡样变,纤维母细胞增生,胶原纤维明显增多,卡介菌多糖核酸组较模型组明显减轻.②羟脯氨酸水平:卡介菌多糖核酸组7,28 d时均低于模型组[7 d:(1.44±0.08),(1.61±0.17)μg/L;28 d:(1.74±0.04),(2.32±0.07)μg/L;P＜0.05],但仍高于正常对照组(P＜0.01).③肺泡灌洗液中细胞总数模型组各期均高于正常对照组(P＜0.01),卡介菌多糖核酸组低于模型组(P＜0.01),两组均显示第7天细胞总数高;模型组及卡介菌多糖核酸组中性粒细胞及淋巴细胞比例均高于正常对照组,但卡介菌多糖核酸组较模型组减少.结论:卡介菌多糖核酸能减轻大鼠肺间质纤维化.
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Toll样受体3介导呼吸道合胞病毒感染人肺上皮细胞的炎性反应及其信号转导通路
目的:观察呼吸道合胞病毒感染肺上皮细胞A549后Toll样受体3表达的变化,探讨Toll样受体3介导呼吸道合胞病毒感染肺上皮细胞的炎性反应及其介导的信号转导通路.方法:实验于2006-05/12在安徽医科大学基础医学院分子生物学实验室完成.用呼吸道合胞病毒感染体外培养的A549细胞,于感染后4,8,16,24 h收集细胞和细胞培养上清.用Trizol提取细胞总RNA,RT-PCR法检测TOLL样受体3mRNA、肿瘤坏死因子α mRNA表达的变化;提取细胞总蛋白和核蛋白,免疫印迹法分别检测TOLL样受体3蛋白、核内活性核因子κB的变化;用ELISA检测细胞培养上清肿瘤坏死因子α的表达.以未感染病毒的细胞为正常对照组.结果:①呼吸道合胞病毒感染A549细胞后,Toll样受体3和肿瘤坏死因子α的mRNA和蛋白的表达量均升高且有时间依赖性,Toll样受体3 mRNA 24 h表达量是基础表达量的5倍多,肿瘤坏死因子α mRNA 24 h表达量是基础表达量的3倍多.②A549细胞中核内活性核因子κB有基础表达,经由呼吸道合胞病毒感染,核内活性核因子κB随感染时间的延长升高;同时呼吸道合胞病毒感染能促进Toll样受体3蛋白的表达,高于正常对照组(P＜0.01).③呼吸道合胞病毒感染能促进A549细胞分泌肿瘤坏死因子α,感染24 h分泌达到高峰.结论:呼吸道合胞病毒感染A549细胞后上调Toll样受体3表达,其诱导的炎性反应与Toll样受体3介导的信号转导途径有关.
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首乌丹参方预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤蛋白激酶C的影响
目的:分析首乌丹参方预处理对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护机制是否通过促进蛋白激酶C m RNA水平表达发挥作用.方法:实验于2003-07/2004-05在天津中医药大学中医药研究中心省部共建教育部方剂学重点实验室完成.SPF级雄性Wistar大鼠,体质量(336±20)g.随机数字表法分为7组:假手术组(取血清作正常对照)、模型组、首乌丹参方高剂量组、(9 g/kg)、首乌丹参方中剂量组(4.5 g/kg)、首乌丹参方低剂量组(2.25 g/kg)、复方丹参滴丸阳性对照组(4.5 g/kg)、消心痛对照组(1.67 mg/kg),每组12只.首乌丹参方浸膏,由天士力药业集团提供,100 g生药出膏15.26g(每克浸膏的生药量为6.55g),批号:20020318,给药剂量分别为9,4.5,2.25 g/kg,实验前称取一定量的浸膏,用0.5%羧甲基纤维素钠分别配成0.9,0.45,0.225 g/mL浓度的混悬液,每克生药加天然冰片5.19 mg.阳性对照药复方丹参滴丸浸膏,黑褐色,由天士力药业集团提供,100 g生药出膏21.47 g(每克浸膏的生药量为4.66 g,批号:20020423).给药剂量以生药计算为4.5 g/kg,每克生药加合成冰片6.15 mg;阳性对照药消心痛(硝酸异山犁酯)片,每片含消心痛5 mg,天津太平洋制药有限公司生产(批号:20040302),药液浓度0.167 mg/mL,配制方法同上.采用结扎大鼠冠状动脉前降支30 min/开放120 min建立心肌缺血再灌注损伤模型.假手术组只穿线不结扎,30 min时将所穿线迅速拎起后再放下,快速关胸.造模后假手术组、模型组给0.5%羧甲基纤维素钠液,余组将药物用0.5%羧甲基纤维素钠配制成混悬液,给药体积皆为1 mL/100 g.通过RT-PCR分子生物学方法观察蛋白激酶CmRNA表达情况以及首乌丹参方预处理对其的影响.结果:84只大鼠均进入结果分析.与假手术组相比,模型组和首乌丹参方各组蛋白激酶C mRNA表达均有所下降;与模型组相比,首乌丹参方中剂量组、复方丹参滴丸阳性对照组和消心痛对照组表达上调,差异均有显著性意义,首乌丹参方高剂量组及低剂量组也能促进蛋白激酶C mRNA的表达,但差异没有显著性意义.结论:首乌丹参方预处理可促进缺血再灌注损伤大鼠心肌蛋白激酶C表达.首乌丹参方可能通过激动蛋白激酶C对缺血再灌注损伤的心肌起保护效应.
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延胡索对未孕大鼠离体子宫平滑肌运动的抑制作用
目的:观察延胡索乙素对未孕大鼠离体子宫平滑肌条运动的抑制作用.方法:实验于2003-11/2004-03在兰州大学医学院生理学教研室进行.①成年未孕Wistar大鼠90只,于实验前72 h皮下注射乙烯雌酚0.5 mg/kg,造成人工动情期以提高子宫对药物的敏感性.②猛击大鼠头部致昏,取卵巢及子宫分叉处之间的中段子宫,制成8 mm×2 mm的肌条,将肌条安置在恒温平滑肌肌槽中,每个肌槽中分别盛有5 mL 37℃Krebs液.③肌条在1 g的前负荷下温育,每20 min更换一次5 mL新鲜的Krebs液(37℃),待肌条的自发活动平稳后加人不同剂量的延胡索乙素(2×10-5,2×10-4,4×10-4,8×10-4,1.6×10-3 kg/L),观察延胡索乙素对大鼠离体子宫平滑肌条收缩活动的影响.④分别加入不同的受体拮抗剂5 min后(2×10-6 mol/L酚妥拉明,2×10-7 mol/L异搏定,2×10-5 mol/吲哚美辛和2×10-6 mol/L苯海拉明),再加入8×10-4延胡索乙素,观察使用拮抗剂后延胡索乙素对大鼠离体子宫平滑肌条作用的影响.⑤计算给药前5 min和给药后5 min子宫平滑肌条的收缩波的频率、平均振幅和收缩波间隔平均持续时间.结果:①不同浓度的延胡索乙素均能抑制子宫平滑肌收缩运动,可使子宫平滑肌收缩波的频率减慢,在延胡索乙素浓度8×10-4 kg/L,1.6×10-3 kg/L时为其抑制作用差异具有显著性(P＜0.01);延胡索乙索各浓度虽可以降低子宫平滑肌收缩波的振幅但差异无显著性(P＞0.05);而当延胡索乙素浓度为4×10-4,8×10-4,1.6×10-3 kg/L时,可显著延长收缩波的间歇时间(P＜0.01).②在加入H1受体阻断剂苯海拉明后延胡索乙素使子宫平滑肌的收缩频率降低(P＜0.05),收缩波间隔的持续时间延长(P＜0.05),而收缩振幅增高(P＜0.05);在加入α受体阻断剂酚妥拉明后,延胡索乙素抑制子宫平滑肌的作用与单独使用延胡索乙素组相比差异无显著性(P＞0.05);在加入吲哚美辛抑制前列腺素合成酶合成和释放后,延胡索乙素抑制子宫平滑肌的作用与延胡索乙素组相比仍然可以使收缩波的频率降低(P＜0.05),振幅减小(P＜0.05),收缩波间隔持续时间延长(P＜0.05).加入L型Ca2+通道阻断剂异搏定后延胡索乙素对未孕大鼠离体子宫平滑肌的运动有抑制作用,收缩间隔时间延长(P＜0.05),但振幅不变(P＜0.05).结论:延胡索乙素抑制大鼠子宫平滑肌收缩运动的部分作用可能与L型电压依从性Ca2+通道使平滑肌细胞内Ca2+浓度降低有关,也可能与前列腺素的合成与释放有关.
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阿尔茨海默病脑内β淀粉样蛋白沉淀与胆固醇和载脂蛋白E基因启动子多态性的相关性
目的:观察胆固醇与载脂蛋白E基因启动子多态性,分析其与阿尔茨海默病患者神经元内β-淀粉状蛋白质沉积的关系.方法:同时选择2000-01/2005-12美国南卡罗莱纳州立大学科学中心阿尔茨海默病尸检患者132例作为病例组,非阿尔茨海默病尸检患者132例作为对照组.病例组存在β-淀粉状蛋白质沉积(+),对照组不存在β-淀粉状蛋白质沉积(-).血浆胆固醇含量为临床病例记录.从阿尔茨海默病病例组及匹配对照组患者尸检肝脏石蜡块中提纯Genomic DNA.采用DNA聚合酶链反应(PCR)扩增载脂蛋白E基因启动子,限制性核酸内切酶酶切消化PCR产物并电泳测定酶切结果.匹配临床记录血浆胆固醇含量指标进行统计分析.结果:两组数据患者全部进入结果.①第1轮DNA聚合酶链反应及电泳结果发现载脂蛋白E基因启动子PCR产物存在包括目的(1 274 bp)在内的多个条带.第2轮DNA聚合酶链反应及电泳结果发现只存在目的带(228 bp)一个条带.②全部病例组和对照组载脂蛋白E基因启动子427基因型均为TT.病例组载脂蛋白E基因启动子491多态性位点基因型AA表达明显多于对照组(107,66例,P＜0.01),对照组基因型AT及TT明显多于病例组,差异有显著性意义(54,20例;12,5例;P＜0.01),基因型AA患者β-淀粉状蛋白在脑内沉积机会增加.③病例组血浆胆固醇含量与对照组之间差异有显著性意义[(6.05±0.17),(5.21±0.15)mmol/L,P＜0.05],高血浆胆固醇含量增加β-淀粉状蛋白在脑内沉积.结论:血浆胆固醇水平与载脂蛋白E基因启动子491多态性位点与阿尔茨海默病患者神经元内β-淀粉状蛋白质沉积相关.
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三七总皂苷对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其线粒体机制
目的:观察三七总皂苷(血栓通注射液的药物成分)对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用,分析其可能的线粒体机制.方法:实验于2006-01/09在广州医学院病理生理学实验室完成.实验分组:取108只SD雄性大鼠,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、三七总皂苷组,每组36只.实验干预:①假手术组:实验前1 h腹腔注射生理盐水,全麻下行右肾摘除,左肾暴露40 min后取下.②缺血再灌注模型组:实验前1 h腹腔注射生理盐水,全麻下行右肾摘除,左肾动脉夹闭缺血45 min后再灌注1 h.③三七总皂苷组:实验前1 h腹腔注射血栓通注射液70 mg/kg,其余方法同缺血再灌注模型组.实验评估:①再灌注后1 h取肾组织匀浆检测肾组织超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量.②测血浆肌酐、尿素氮、血清降钙素基因相关肽含量.③电镜观察肾组织线粒体超微结构的改变.④检测线粒体细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢酶活性,Ca2+含量.结果:108只大鼠均进入结果分析.①三七总皂苷组肾组织超氧化物歧化酶活性高于缺血再灌注模型组;丙二醛含量低于缺血再灌注模型组.②三七总皂苷组血浆肌酐、尿素氮含量低于缺血再灌注模型组;降钙素基因相关肽水平高于缺血再灌注模型组.③电镜观察三七总皂苷组线粒体结构有明显的改善,嵴数目减少不多,且排列较整齐,没有线粒体崩解的情况.④三七总皂苷组肾组织线粒体中细胞色素氧化酶、琥珀酸脱氢酶活性高于缺血再灌注模型组;Ca2+含量低于缺血再灌注模型组.结论:三七总皂苷对肾缺血再灌注损伤有明显保护作用,其保护作用机制与直接清除自由基,提高琥珀酸脱氢酶、细胞色素氧化酶活性、升高血清降钙素基因相关肽水平,降低钙超载,从而减轻线粒体损伤有关.
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兔心肌缺血再灌注损伤中内皮细胞功能变化与参麦复方的干预效应
背景:一氧化氮和内皮素是近年心肌缺血再灌注损伤研究的热点.中药在保护心肌缺血再灌注损伤中有其独特的作用.目的:观察兔心肌缺血再灌注损伤中内皮功能改变及参麦注射液的干预作用.设计:随机对照动物实验.单位:中国医科大学附属第一医院.材料:实验于2002-09/2003-01在中国医科大学实验动物部、基础医学院生化教研室、第二电镜室完成.健康雌性日本大耳白兔21只,体质量1.5～2.5 kg;参麦注射液由雅安三九药业有限公司提供(010110).方法:①分组:实验动物随机分3组,每组7只.假手术对照组:只穿线不结扎冠状动脉.心肌缺血再灌注模型组和心肌缺血再灌注+参麦注射液治疗组:冠状动脉左室支结扎40 min后放开40 min建立心肌缺血再灌注模型.②给药:心肌缺血再灌注模型组耳缘静脉注射生理盐水20 mL(于左室支结扎前10 min注射1/3量,再灌注时注射2/3量).心肌缺血再灌注+参麦注射液治疗组,耳缘静脉注射参麦注射液(按1.5 mL/kg,用生理盐水稀释至20 mL),给药时间同心肌缺血再灌注模型组.③观察指标:于结扎前、缺血40 min、再灌注40 min取静脉血4 mL,其中2 mL分离血清采用硝酸还原酶法检测一氧化氮代谢产物含量;另2 mL采用放免法检测血浆内皮素含量.于实验结束后,取心肌组织检测一氧化氮代谢产物、内皮素,采用黄嘌呤氧化酶法检测总超氧化物歧化酶活性,采用硫代巴比妥酸显色法检测丙二醛含量.透射电镜观察心肌超微结构.主要观察指标:①结扎前、缺血40 min、再灌注40 min血清一氧化氮、血浆内皮素的含量.②心肌组织一氧化氮代谢产物、内皮素、丙二醛的含量和总超氧化物歧化酶活性.③心肌超微结构.结果:21只日本大耳白兔均进入结果分析.①血清一氧化氮代谢产物含量:缺血40 min、再灌注40 min心肌缺血再灌注模型组明显低于假手术对照组(P＜0.01),心肌缺血再灌注+参麦注射液治疗组显著高于心肌缺血再灌注模型组(P＜0.01).②血浆内皮素含量:缺血40 min、再灌注40 min心肌缺血再灌注模型组显著高于假手术对照组(P＜0.01),心肌缺血再灌注+参麦注射液治疗组明显低于心肌缺血再灌注模型组(P＜0.01).③缺血40 min、再灌注40 min一氧化氮代谢产物含量与内皮素含量呈显著负相关(P＜0 05,P＜0.01).④心肌组织一氧化氮代谢产物含量、总超氧化物歧化酶活性:再灌注40 min后心肌缺血再灌注模型组明显低于假手术对照组(P＜0.01),心肌缺血再灌注+参麦注射液治疗组显著高于心肌缺血再灌注模型组(P＜0.01).⑤内皮素,丙二醛含量:心肌缺血再灌注模型组显著高于假手术对照组(P＜0.01),心肌缺血再灌注+参麦注射液治疗组明显低于心肌缺血再灌注模型组(P＜0.01).⑥一氧化氮代谢产物含量与总超氧化物歧化酶活性呈显著正相关(P＜0.05),与丙二醛含量呈显著负相关(P＜0.05),内皮素含量与总超氧化物歧化酶活性呈显著负相关(P＜0.05),与丙二醛含量呈显著正相关(P＜0.05).结论:心肌缺血再灌注导致血管内皮功能紊乱;参麦注射液能够改善缺血再灌注时的内皮功能,减轻心肌缺血再灌注损伤.
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大鼠小肠缺血再灌注后多器官组织基因表达的变化
目的:观察大鼠小肠缺血再灌注后肺、肝、心、肾组织中bax,bcl-2,p53表达的改变,探讨小肠缺血再灌注损伤对多器官所致的次级损伤.方法:实验于2005-04在延安大学医学中心实验室完成.将64只雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组、缺血再灌注0、30 min,1、2 h,1、3、7 d组8组,每组8只.除正常对照组外,其他大鼠均阻断肠系膜上动脉,建立小肠缺血再灌注模型,在再灌注后相应时间点处死大鼠,切取肺、肝、心、肾组织,用免疫组织化学SP法观察各组织中bax,bcl-2,p53的表达情况.结果:64只大鼠进入结果分析.与正常对照组比较,再灌注0 min:肺、肝、心、肾组织中bax,bcl-2、p53阳性细胞逐渐增多;再灌注30 min时,bax,bcl-2,p53阳性细胞升高更为明显,bcl-2阳性细胞率明显高于bax[肺:(78.13±7.04)%,(17.13±4.60)%;肝:(24.75±5.12)%,(11.25±2.55)%;心:(67.88±5.79)%,(53.63±4.69)%;肾:(22.25±4.82)%,(13.38±3.65)%;P均＜0.01];但再灌注至2 h时各指标明显降低,其后持续升高;再灌注7 d时bax阳性细胞率明显高于bcl-2[肺:(94.12±3.18)%,(83.38±3.54)%;肝:(63.25±9.35)%,(41 25±5.17)%;心:(52.38±4.47)%,(31.88±1.96)%;肾:(59.85±8.25)%,(40.75±6.27)%;P＜0.05,0.01].结论:大鼠小肠缺血再灌注后肺、肝、心、肾这些远隔器官组织细胞内bax,bcl-2,p53等凋亡相关基因表达增强,可能导致远隔器官的次级损伤.
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清开灵与利巴韦林治疗小儿呼吸道合胞病毒肺炎的比较:单盲、随机、平行对照试验
目的:比较清开灵与利巴韦林对呼吸道合胞病毒肺炎患儿治疗效果的差异.方法:选择2005-02/2006-04在北京儿童医院分中心治疗的小儿呼吸道合胞病毒肺炎97例,患儿法定监护人知情同意.采用单盲、随机、平行对照试验的原则,按区组随机化方法分为2组,清开灵注射液组49例,利巴韦林组48例.①清开灵注射液组:清开灵注射液静脉滴注加口服中成药.②利巴韦林组:利巴韦林注射液静脉滴注加口服复方愈创木酚磺酸钾口服液.两组疗程均为10 d,比较两组患儿的疗效.结果:清开灵注射液组脱落3例,利巴韦林组脱落1例,进入结果分析清开灵注射液组46例,利巴韦林组47例.①清开灵注射液组发热患儿体温恢复正常时间比利巴韦林组短[(2.72±1.86)d,(6.29±2.41)d(P＜0.01)].②清开灵注射液组患儿咳嗽、痰壅、气促症状积分改善方面优于利巴韦林组(P＜0.05～0.01).③清开灵注射液组的呼吸道合胞病毒转阴时间明显优于利巴韦林组.④咳嗽、痰壅、病毒转阴时间、气促均进入Logistic模型,其中前两个症状的回归系数绝对值较大.结论:清开灵注射液治疗小儿呼吸道合胞病毒肺炎在退热、止咳平喘、呼吸道合胞病毒转阴时间等方面均具有明显优势,咳嗽、痰壅这两个症状更能反映清开灵注射液的疗效优于利巴韦林.
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急性肺损伤大鼠肺组织白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α表达及黄芪的干预效应
目的:观察黄芪注射液对急性肺损伤时肺组织白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α表达的影响,分析黄芪在急性肺损伤中的治疗机制.方法:实验于2005-11/2006-04在南华大学动物实验中心完成.清洁级健康SD雄性大鼠24只,以随机数字表法分3组,即对照组、模型组和黄芪组,各8只.对照组从尾静脉注入1 mL生理盐水;模型组和黄芪组以内毒素5 mg/kg溶解于1 mL生理盐水,从尾静脉注入,制造急性肺损伤模型;45 min后,黄芪组予黄芪注射液(每支10 mL含20 g生药,成都地奥九泓制药厂)0.5 g/kg,加生理盐水稀释成1 mL,并从尾静脉注入.免疫组化法检测各组肺组织白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的表达情况.并做肺组织大体观察和200倍光镜下观察,以胞浆出现棕黄色颗粒为阳性表达.结果:实验大鼠24只全部进入结果分析.①模型组大鼠右下肺湿质量、干质量及湿/干比值较对照组显著增加(P＜0.01);黄芪组大鼠右下肺湿质量、干质量及湿/干比值较模型组明显降低(P＜0.01),但仍明显高于对照组(P＜0 01).②对照组肺组织大体观察可见,表面光滑,呈淡粉红色无充血水肿及梗死灶;模型组肺组织呈现暗红色,肺包膜下明显充血水肿,广泛出血点;黄芪组大体观察同模型组.镜下观察可见,对照组肺组织结构清晰,无充血渗出,未见明显炎性细胞浸润;模型组可见肺微血管充血、出血、微血栓形成,肺间质和肺泡内有水肿液和炎症细胞浸润,部分可见灶状肺不张;黄芪组病理学改变可见肺微血管充血、出血、微血栓形成及炎症细胞浸润,但比模型组稍轻.③模型组和黄芪组白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的表达水平均高于对照组(P＜0.01),但黄芪组白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α的表达水平低于模型组(P＜0.01).④白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α主要表达于肺组织的单核巨噬细胞胞浆中,呈棕黄色颗粒;模型组的表达多,黄芪组的表达次之,对照组几乎不表达.结论:黄芪可能通过抑制白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α等前炎性因子的表达来促进急性肺损伤的修复.
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2,4,6-三硝基苯磺酸诱导小鼠炎症性肠病模型的建立
目的:建立2,4,6-三硝基苯磺酸诱导的结肠炎动物模型,并分析其剂量效应.方法:实验于2006-05/09在南方医院消化内科研究所完成,选用SPF级雌性Balb/c小鼠50只,按随机数字表法分为5组,每组10只,对照组予以300 g/L乙醇溶液灌肠1次;其他4组分别给予含25 mg/kg,50 mg/kg,100 mg/kg,150 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸的300 g/L乙醇溶液灌肠1次.各组于造模后3,7,21,28 d各处死1只小鼠,观察结肠的大体形态.造模后21 d观察各组小鼠结肠的病理组织切片,并检测中性粒细胞的髓过氧化物酶活性.结果:造模过程中50,100,150 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸组各死亡2,3,3只小鼠.①各组小鼠造模后的一般情况:对照组及25 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸组小鼠发生一过性的结肠机械损伤表现,出现便血等现象,但3～7 d后开始缓解;而50～150 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸组小鼠出现便血,腹泻.②各组小鼠结肠的大体形态及病理组织学观察结果:对照组和25 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸组小鼠肠道在第7天时表现为无粘连,局部充血,肠壁不增厚,未见溃疡,于第3周时局部充血已好转;结肠病理切片大致正常.50～150 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸组小鼠肠道肉眼可见粘连,肠腔增大,充血水肿,溃疡形成,出现肠道增厚,病理切片见黏膜下层水肿,固有层炎症细胞浸润等现象,以上现象于造模4周后开始缓解.其中当2,4,6-三硝基苯磺酸剂量为100 mg/kg时作用达到高峰.③各组小鼠的中性粒细胞髓过氧化物酶活性比较:50,100,150 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸组均显著高于对照组[(14 17±3.33,18.50±2.33,18.17±1.50,4.83±2.00)nkat/L,(P＜0.01)].结论:应用含100 mg/kg 2,4,6-三硝基苯磺酸的300 g/L乙醇溶液灌肠是诱导小鼠结肠炎较为理想的方法.
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复方麦冬丸的镇痛抗炎作用
目的:观察复方麦冬丸的镇痛抗炎作用.方法:实验于2006-07/10在三峡大学医学实验中心完成.昆明种小鼠240只,雄性SD大鼠120只.各实验中的受试动物均随机分为6组,每组10只.①小鼠实验所分6组为生理盐水组、阿司匹林200mg/kg组、金嗓子喉宝1 800mg/kg组和复方麦冬丸1 350,1 800,2 250 mg/kg组.采用冰醋酸致小鼠扭体反应、热板致痛的方法观察复方麦冬丸的镇痛作用.使用二甲苯致小鼠耳肿胀实验、醋酸引起小鼠腹腔毛细血管通透性增高实验观察复方麦冬丸的抗炎效应.②大鼠实验所分6组为生理盐水组、阿司匹林150 mg/kg组、金嗓子喉宝1 250 mg/kg组、复方麦冬丸937.5,1 250,1 562.5 mg/kg组,慢性肉芽肿实验中以氢化可的松代替阿司匹林.采用蛋清诱发大鼠足肿胀、棉球诱发大鼠肉芽肿的方法及测定蛋清致炎大鼠血清中超氧化物歧化酶活性、丙二醛含量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性、大鼠炎性组织中前列腺素E2含量观察复方麦冬丸的抗炎效应.结果:①复方麦冬丸3个剂量组与生理盐水组比较均能显著减少冰醋酸诱发的小鼠扭体次数,且3个剂量组之间呈现出扭体次数由低到高逐渐下降的趋势.复方麦冬丸3个剂量组的作用均强于金嗓子喉宝组,但仍不及阿司匹林组.②金嗓子喉宝组可显著抑制热板引起的疼痛.阿司匹林和复方麦冬丸对热板引起的疼痛无显著抑制作用.③复方麦冬丸3个剂量组与生理盐水组比较均能显著缓解二甲苯所致的小鼠耳肿胀度,其作用与金嗓子喉宝大体相当但比阿司匹林略差.④复方麦冬丸对醋酸引起小鼠腹腔毛细血管通透性增高有显著抑制作用,其作用与金嗓子喉宝大体相当但远不如阿司匹林.⑤复方麦冬丸对蛋清诱发大鼠足肿胀有显著抑制作用.⑥复方麦冬丸对棉球诱发肉芽肿有显著抑制作用.⑦复方麦冬丸3个剂量组与生理盐水组和金嗓子喉宝1 250 mg/kg组比较均能显著抑制前列腺素E2,复方麦冬丸937 mg/kg组与1 250 mg/kg组抑制前列腺素E2的作用甚至强于阿司匹林.⑧复方麦冬丸3个剂量组与生理盐水组和阿司匹林组分别比较均明显升高超氧化物歧化酶活性,降低丙二醛含量(均为P＜0.01).复方麦冬丸1 562mg/kg组与其他组比较能降低一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性(P＜0.01).结论:复方麦冬丸可能是一个弱镇痛药,但抗炎作用显著.其抗炎机制可能与升高超氧化物歧化酶活性,降低丙二醛含量、一氧化氮含量、一氧化氮合酶活性和炎性组织中前列腺素E2含量有关.除扭体实验中复方麦冬丸表现出量效关系,其余实验并未表现出明显的剂量关系.
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电针对单纯性肥胖大鼠下丘脑组织中瘦素和神经肽Y表达的影响
目的:观察电针对单纯性肥胖大鼠下丘脑瘦素和神经肽Y表达的影响,探索电针减肥的机制.方法:实验于2005-12/2006-06在中南大学湘雅医院中西医结合研究所实验室完成.①取1月龄刚断乳SD雄性大鼠,随机取6只饲以普通饲料为正常对照组,其他大鼠饲以高脂饲料,喂养3个月后,选择体质量超过正常对照组20%的单纯性肥胖大鼠12只,随机分为模型组和电针组2组,每组6只.②电针组大鼠电针双侧足三里、天枢、三阴交穴,采用疏密波,电流强度0.3～0.6 mA,留针20 min,1次/d,共20次;其他2组不电针.实验期间均饲以普通饲料.③观察实验大鼠体质量、体长、Lee's指数及体脂,采用Westem-blot技术检测下丘脑组织中瘦素、神经肽Y表达的变化.结果:18只大鼠进入结果分析.①模型组大鼠体质量和Lee's指数高于正常对照组[(451.8±14.8),(323.6±6.8)g;324.25±1.4,305.14±1.5;P均＜0.01];电针组电针后体质量和Lee's指数低于电针前[(372.2±20.4),(454.7±19.7)g;307.71±1.5,323.56±1.6;P均＜0.01].②模型组大鼠心包、肾周和附睾脂肪量均高于正常对照组(P＜0.01);电针组电针后心包、肾周和附睾脂肪量低于电针前(P＜0.01).③模型组下丘脑组织中瘦素蛋白表达低于正常对照组(0.62±0.11,0.88±0.15,P＜0.01),电针组高于模型组(0.85±0.13,P＜0.01);模型组下丘脑组织中神经肽蛋白表达高于正常对照组(2.42±0.27,1.75±0.24,P＜0.01),电针组高于模型组(1.87±0.21,P＜0.01).结论:电针有良好的减肥效果,其作用可能与电针增强下丘脑组织瘦素蛋白的表达、同时抑制下丘脑组织中的神经肽Y蛋白表达有关.
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藏族人群血尿酸与颈动脉内中膜厚度的关系:阿托伐他汀干预后血尿酸的变化
背景:迄今为止,他汀类药物对藏族这一特定民族的高尿酸血症合并高胆固醇血症患者的疗效尚未得到充分研究.目的:分析血尿酸与颈动脉内中膜厚度的关系,观察阿托伐他汀对高尿酸血症合并高胆固醇血症患者血脂、血尿酸及肝、肾功能指标的影响.设计:前后对照实验.单位:解放军总医院心内科,解放军西藏军区总医院心内科.对象:选择2005-08/2006-08在解放军西藏军区总医院心内科住院的高尿酸血症合并高胆固醇血症患者80例,年龄45～61岁.均来自拉萨市娘热乡;为藏族男性;均对检测项目知情同意.方法:①所有患者每晚口服阿托伐他汀20 mg,连续12周.②在服药前及治疗后12周使用日立7600型全自动生化检测仪测定血尿酸、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、血尿素氮、肌酐、谷丙转氨酶水平.B型超声测量颈动脉内中膜厚度.主要观察指标:①用药前后血脂、血尿酸及肝、肾功能指标比较.②心血管疾病危险因素与颈动脉内中膜厚度的关系.结果:总共80例患者入选本试验.①阿托伐他汀用药后总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白胆固醇和血尿酸水平分别降低33.8%,24.9%,12.2%,12.6%,差异有显著性意义(f=13.153 4,3.837 3,3.220 1,2.788 3,P＜0.01).用药前后高密度脂蛋白胆固醇、尿素氮、肌酐、转氨酶无明显变化(P＞0.05),说明他汀类药物对肝肾功能无损伤.②用药前总胆固醇,三酰甘油,低、高密度脂蛋白胆固醇、血尿酸与内中膜厚度相关(β值=0.178,0.145,0.189,-0.181,0.284,P＜0.05～0.01),其中血尿酸的(β值高,表明血尿酸在颈动脉粥样硬化发生中所起的作用大.结论:①血尿酸在颈动脉粥样硬化发生中起的作用大.②阿托伐他汀可有效凋血脂、降血尿酸,且无肝肾功能损害.
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大鼠脊髓损伤动物模型的建立
目的:建立一个稳定、损伤程度适中的脊髓损伤大鼠模型的技术及方法学特征.方法:实验于2004-09/2005-01在承德医学院临床技能实验室完成.选取30只Wistar大鼠,体质量230～260 g,纵行切开大鼠背部皮肤及皮下组织,剥离棘突旁肌肉,切除T7棘突及椎板,暴露脊髓硬膜.根据打击物(重10 g)调节高度的不同将30只大鼠分为3mm高度组、5mm高度组、8mm高度组,每组10只.高度使重物自然下落,打击T7段脊髓,迅速移开打击重物及打击头,逐层缝合伤口,喂养8周后行病理学检查.选取通过脊髓大径的切片在低倍镜下进行显微摄影,照片上侧量并计算空洞或瘢痕的大直径与同水平脊髓直径的比例.结果:纳入大鼠30只,死亡5只,存活率83.3%;其中3 mm高度组死亡1只,5 mm高度组死亡1只,8 mm高度组死亡3只.3 mm高度组3例标本镜下可见损伤段脊髓中有不规则的空腔,6例标本于脊髓内形成不规则瘢痕,损伤部位瘢痕大直径与同水平脊髓直径比例为(10.0±5.2)%;5 mm高度组9例镜下均可见损伤段脊髓中有一个长圆形或不规则的空腔,损伤部位瘢痕大直径与同水平脊髓直径比例为(46.0±3.8)%;8 mm高度组存活的7例镜下均可见损伤段脊髓全部中断,形成瘢痕与硬膜外组织分界不清.结论:5 mm高度组存活的大鼠的脊髓均产生位于脊髓中央部或近中央部的空洞,损伤的位置和程度较恒定,是较为理想的损伤模型.
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慢性前列腺炎患者前列腺液环氧化酶2细胞表达和炎性因子水平变化与中药前列安栓治疗效果的相关性
目的:观察慢性前列腺炎患者前列腺液环氧化酶2细胞表达和炎性因子水平变化与中药前列安栓临床疗效的关系.方法:①选择2005-05/2006-05川北医学院附属医院泌尿外科住院的慢性前列腺炎男性患者43例,年龄25～67岁.均符合世界卫生组织慢性前列腺炎分类诊断标准,且均对治疗方案和检测指标知情同意.随机将患者分为抗生素组20例(对照组)和前列安栓组23例(治疗组).分组干预:对照组口服罗红霉素胶囊(武汉同济现代医药有限公司)治疗,150mg/次,2次/d;治疗组在此基础上给予前列安栓(丽珠集团丽珠制药厂,国药准字Z10980066,主要成分有黄柏、虎杖、泽兰、栀子、大黄等)局部治疗,1次/d,晚间入睡前纳入肛门内3～5 cm.②治疗前及治疗4周后对临床有关症状尿频、排尿不尽感、尿痛、会阴涨痛进行观察并记录,检查前列腺压痛.于治疗前,治疗1,2,3,4周后应用尿流动力仪进行尿流率检测(大尿流率、平均尿流率),进行前列腺液细胞环氧化酶2免疫组化染色及白细胞介素6、丙二醛、肿瘤坏死因子α含量和超氧化物歧化酶活性检测.400倍视野下计环氧化酶2阳性细胞数及阳性率.疗程结束后评价疗效.③计数资料差异比较采用x2检验,计量资料差异比较采用t检验.结果:因对照组1例患者未能完成第3周的治疗,终进入治疗3周后的结果分析42例.①疗效:治疗组总有效率明显高于对照组[47%(9/19),83%(19/23),x2=5.815,P＜0.05].②治疗后症状和体征改善情况:治疗组尿频、排尿不尽感、尿痛、会阴胀痛及前列腺压痛改善率明显高于对照组(x2=6.617～10.756,P＜0.05～0.01).③尿流率测定结果:对照组治疗2～4周后和治疗组治疗1～4周后大尿流率和平均尿流率明显大于治疗前(t=2.567～6.478,P＜0.05～0.01),治疗组治疗2～4周后明显大于对照组(t=2.368～5.593,P＜0.05～0.01).④前列腺液细胞环氧化酶2阳性细胞数和阳性率:对照组治疗2～4周后和治疗组治疗1～4周后明显少于或低于治疗前(t=2.124～6.372,P＜0.05～0.01),治疗组治疗2～4周后明显少于或低于对照组(t=3.617～5.545,P＜0.01).⑤前列腺液炎性因子、丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性变化:对照组治疗2～4周后和治疗组治疗1～4周后前列腺液白细胞介素6、丙二醛、肿瘤坏死因子α含量明显低于治疗前,超氧化物歧化酶含量明显高于治疗前(t=2.364～5.569,P＜0.05～0.01).治疗组治疗2～4周后前列腺液白细胞介素6、丙二醛、肿瘤坏死因子α含量明显低于对照组,超氧化物歧化酶含量明显高于对照组(t=2.028～6.127,P＜0.05～0.01).结论:环氧化酶2表达和炎性因子及丙二醛、超氧化物歧体酶活性变化在慢性前列腺炎的发生发展中起重要作用,前列安栓应用可通过改善上述指标起到减轻临床症状和体征的作用.
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健胃愈疡颗粒干预下大鼠胃溃疡黏膜乳癌相关肽和血小板活化因子的表达及与胃黏膜疏水性的相关性研究
目的:观察对胃溃疡复发有较好疗效的健胃愈疡颗粒对溃疡黏膜乳腺癌相关肽和血小板活化因子表达的影响,分析其可能的作用机制.方法:实验于2005-07/2006-07在湘雅医院中心实验室完成.SD大鼠110只,雌雄各半,随机抽签法分为5组,即正常对照组、假手术组、雷尼替丁组、健胃愈疡组,各20只;模型组30只.以Okabe改良法复制大鼠实验性胃溃疡,假手术组仅以生理盐水代替乙酸注入玻管内.造模后24 h,雷尼替丁组、健胃愈疡组大鼠分别灌服盐酸雷尼替丁和健胃愈疡颗粒(药物组成为:柴胡、党参、白芍、延胡索、白芨、珍珠层粉、青黛、甘草,湖南湘雅制药有限公司生产)药液10 mL/kg,分别相当于2.70,1.62 g/kg,1次/d.假手术组、模型组灌服蒸馏水10 mL/kg.10 d后各组中随机取出10只大鼠剖腹取胃(处死前大鼠禁食24 h),90 d时将模型组20只大鼠再分为模型复发组和模型非复发组,各10只;除正常对照组、假手术组、模型非复发组大鼠腹腔内注射生理盐水外,其余各组大鼠腹腔内注射白细胞介素1,1μg/kg;在注射48 h,大鼠禁食24 h后,剖腹取胃.观察其对胃溃疡大鼠胃黏膜氨基己糖及磷脂含量、溃疡指数和胃黏膜血流的影响,并用RT-PCR观察乳癌相关肽乳癌相关肽和血小板活化因子表达的变化.结果:实验动物110只,全部进入结果分析.①模型组10,92 d胃黏膜血流均低于正常对照组(P＜0.01);健胃愈疡组同期胃黏膜血流均高于模型组(P＜0.01).②健胃愈疡组和雷尼替丁组10 d溃疡指数均低于模型组(P＜0.01,P＜0.05);模型复发组、健胃愈疡组和雷尼替丁组92 d溃疡指数均高于模型组(P＜0.01);健胃愈疡组10,92 d溃疡指数及复发率均低于雷尼替丁组(P＜0.05,P＜0.01).③模型组10,92 d氨基己糖和磷脂含量均低于正常对照组(P＜0.01).健胃愈疡组10,92 d氨基己糖和磷脂含量均高于模型组和雷尼替丁组(P＜0.01).溃疡指数与氨基已糖、磷脂含量呈负相关(r=-0.957,-0.960,P＜0.01).④健胃愈疡组和雷尼替丁组10 d乳癌相关肽mRNA表达较正常组和假手术组提高,血小板活化因子mRNA的表达下调(P＜0.01),健胃愈疡组两指标表达变化较雷尼替丁组显著(P＜0.01);模型复发组、健胃愈疡组和雷尼替丁组92 d乳癌相关肽mRNA、血小板活化因子mRNA的表达同组10 d比较差异无显著性意义(P＞0.05);模型组乳癌相关肽mRNA、血小板活化因子mRNA的表达同组10 d比较差异有显著性意义(P＜0.01).结论:健胃愈疡颗粒可提高乳癌相关肽mRNA及下调血小板活化因子mRNA的表达,影响胃黏膜氨基己糖及磷脂含量,可能是其促进溃疡愈合的机制之一.
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局部缺血预适应对兔短期缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2和Bax蛋白表达的影响
目的:探讨局部缺血预适应对兔短期缺血再灌注心肌细胞凋亡及Bcl-2,Bax蛋白表达的影响.方法:实验于2006-06/07在石河子大学医学院中心实验室完成.18只新西兰白兔随机分成3组,每组6只:①假手术组:仅开胸暴露心脏,冠脉分支穿线,不结扎.②缺血再灌注组:冠脉分支阻断15 min后开放再灌注30 mjn.③局部缺血预适应组:在缺血再灌注前行冠脉分支阻断5 min后开放再灌注5 min(反复3次).以DNA电泳和TUNEL分析检测兔短期缺血再灌注心肌组织的细胞凋亡情况,免疫组织化学方法检测Bcl-2,Bax蛋白的表达.结果:18只兔全部进入结果分析.①缺血再灌注组缺血区心肌DNA电泳出现200 bp,400 bp 2条条带,呈梯形,而局部缺血预适应组和假手术组未见梯形.②TUNEL检测结果显示局部缺血预适应组心肌细胞凋亡指数显著低于缺血再灌注组[(32.13±6.38)%,(55.7±13.96)%,P＜0.05].③Bcl-2蛋白表达组局部缺血预适应组高于缺血再灌注组(9.33±1.37,7.83±1.47,P＜0.05).④Bax蛋白表达量局部缺血预适应组低于缺血再灌注组(8.00±1.26,9.83±0.98,P＜0.05).结论:局部缺血预适应显著减少了兔短期缺血再灌注诱导的心肌细胞凋亡程度,可能与其上调Bcl-2基因的蛋白表达,下凋Bax基因的蛋白表达有关.
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新生大鼠实验性脑室周围白质软化模型的建立及评价
背景:脑室周围白质软化症由于缺乏公认有效的动物模型,影响了对脑室周围白质软化发病机制和干预的研究,因此建立可靠的动物模型来进行脑室周围白质软化症的研究很有必要.目的:制作2日龄SD大鼠脑室周围白质软化动物模型.设计:随机对照动物实验.单位:四川大学华西第二医院儿科.材料:选用36只生后2 d SD大鼠,清洁级,雌雄不限,体质量6～8 g,由四川大学华西实验动物中心提供,小鼠抗O4由Chemicon公司提供,兔抗胶质纤维酸性蛋白、兔抗β-淀粉样蛋白前体蛋白、兔抗髓鞘碱性蛋白、SABC免疫组化试剂盒和DAB显色试剂盒由武汉博士德生物工程有限公司提供,兔抗小鼠IgG-FITC由北京中杉金桥生物技术有限公司提供.方法:实验于2005-05/12在四川大学华西第二医院妇儿实验室完成.随机摸球法将大鼠分为脑室周围白质软化组和对照组,每组18只.脑室周围白质软化组行右侧颈总动脉结扎手术,体积分数为0.06氧气和体积分数为0.94氮气处理4 h,分别在缺氧72 h,14 d及28 d取6只处死.对照组只进行右侧颈总动脉分离术而不作结扎及缺氧处理,时间段与脑室周围白质软化组配对.①脑组织病理学观察:各组大鼠经心脏灌注固定行常规苏木精-伊红染色及电镜检查.②免疫组织化学检测:造模72 h,采用胶质纤维酸性蛋白、β-淀粉样蛋白前体蛋白、小鼠抗O4免疫组化方法观察脑室周围白质软化组脑组织组织学变化;造模14 d,采用兔抗髓鞘碱性蛋白免疫组化方法观察髓鞘碱性蛋白改变.③神经行为学检测:术后28 d对两组小鼠进行悬吊试验(大鼠前腿抓住水平玻璃棒,离开桌面45 cm记录大鼠掉下的时间,评分标准:1分:＜10 s;2分:10～30 s;3分:30 s～2 min;4分:2～5 min;5分:＞5 min)、倾斜板试验(大鼠倒置于45°斜面上,记录大鼠转为头向上＞135°角度的时间)、旷场试验(无顶方盒箱底用墨线分成9个等分小格,大鼠置于中央小方格内,观察30 s内活动情况,大鼠1/2以上身体从所在方格进入相邻方格记1分;大鼠后肢站立计1分;二者相加为其总分)、圆筒实验(将大鼠放入20 cm×30 cm×5 cm的圆桶内,记录大鼠后腿站立时,前爪初承重触及桶壁次数,以同侧触及次数/总触及次数×100%,对侧触及次数/总触及次数×100%作分析),记录各项评分并进行统计学处理.主要观察指标:①苏木精-伊红染色和电镜观察缺氧缺血后脑组织病理学改变.②免疫组化兔抗胶质纤维酸性蛋白、兔抗β-淀粉样蛋白前体蛋白、兔抗髓鞘碱性蛋白和小鼠抗O4观察缺氧缺血后相应细胞和组织改变情况.③神经行为学评价观察缺氧缺血后大鼠神经行为改变(各实验得分).结果:实验大鼠36只均进入结果分析.①光镜和电镜病理学检查发现脑室周围白质软化组大鼠早期可见显著侧脑室周围脑白质损害,远期可见显著的脑室扩大,髓鞘减少.②脑室周围白质软化组大鼠脑白质胶质纤维酸性蛋白阳性细胞积分吸光度值高于对照组(6 566.93±455.56,1 069.32±791.71,P＜0.05),胶质纤维酸性蛋白阳性细胞平均直径大于对照组[(11.69±0.97),(8.24±0.22)μm,P＜0.05],兔抗β-淀粉样蛋白前体蛋白阳性细胞积分吸光度值高于对照组[(59 304.07±6 864.03),(15 132.29±2455.52),P＜0.05],兔抗髓鞘碱性蛋白阳性细胞积分吸光度值低于对照组[(21 764.29±1 981.63),(69 174.72±3 199.90),P＜0.05],小鼠抗O4阳性标记的异常细胞数大于对照组[(54.08±11.99),(1.25±0.51)个,P＜0.05].③脑室周围白质软化组大鼠悬吊试验玻棒悬吊时间短于对照组[(1.27±0.14),(4.24±0.59)min,P＜0.05],倾斜板试验转头时间长于对照组[(7.17±2.32),(3.27±0.82)s,P＜0.05],旷场试验评分低于对照组[(3.68±0.82),(12.67±1.00)min,P＜0.05],圆筒实验显示脑室周围白质软化组大鼠左侧肢体活动较右侧肢体减少[(19.25±2.77),(64.55±0.36)%,P＜0.05].结论:2日龄SD大鼠单侧颈总动脉结扎-缺氧模型病理组织学观察可见明显的脑白质损害,神经行为明显异常,符合脑室周围白质软化病理及行为改变,模型制作成功.
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大黄苷元联合溶栓对血栓栓塞性脑缺血大鼠肺胃损伤的保护作用
目的:观察大黄苷元联合溶栓治疗对大鼠脑缺血损伤肺胃组织的保护作用.方法:实验于2005-08/2006-07在河南中医学院老年医学研究所实验室完成.①260只SD大鼠采用随机数字法分为假手术组20只、模型组60只、尿激酶组60只、大黄苷元组60只、大黄苷元+尿激酶组60只;除假手术组外,其余各组根据缺血后动脉用药时间又各分为3,6,9 h 3个时间点,每个时间点20只.②自体血栓结合线栓阻塞大鼠大脑中动脉制备局灶性脑缺血动物模型.③各组大鼠均于术前4 d灌胃用药,大黄苷元组、大黄苷元+尿激酶组用大黄苷元灌胃(灌胃体积为每100 g大鼠1 mL),假手术组、模型组和尿激酶组用等体积的生理盐水灌胃;动脉用药除假手术组外,其余各组分别于造模后3,6,9 h经导管由区域动脉给药,尿激酶组与大黄苷元+尿激酶组用尿激酶(用药体积为20μL),模型组和大黄苷元组区域动脉用同等体积的生理盐水.④动脉给药后24 h,观察大鼠脑组织病理损伤、颅内和胃出血率、脑和肺组织含水量、肺和胃病理损伤变化.结果:实验过程中因麻醉、操作等原因死亡及剔除大鼠156只,进入结果分析104只.①颅内和胃出血率:尿激酶组9 h大鼠颅内出血率较模型组高(66.67%,28.57%,P＜0.05);尿激酶组9 h脑和胃出血率较3 h高(脑:66.67%,18.75%;胃:41.18%,17.65,P＜0.05);大黄苷元+尿激酶组9 h颅内出血率较尿激酶组9 h低(P＜0.05).②脑和肺及胃组织病理改变:各模型组大鼠脑、胃和肺组织病理损伤均较假手术组明显;各用药组脑和肺组织分别较相应时间模型组减轻;各组脑、胃和肺组织损伤9 h均较其3 h明显;大黄苷元+尿激酶组9 h较相应时间点尿激酶组和大黄苷元组损伤减轻(P＜0.05).③脑和肺组织含水量:各模型组脑和肺组织含水量均较假手术组增高(P＜0.01);尿激酶组和大黄苷元+尿激酶组各时间点均较模型组降低(P＜0.01);各组9 h分别较其3 h脑和肺含水量增加(P＜0.01,P＜0.05);大黄苷元+尿激酶组6 h脑组织和9 h肺含水量分别较尿激酶组降低(P＜0.05).结论:脑缺血后延迟溶栓治疗可引起大鼠脑和胃出血率增高、脑组织和肺组织水肿加重,脑和肺及胃组织病理损伤明显;大黄苷元联合溶栓可降低脑出血率,改善神经细胞超微结构,降低脑和肺组织含水量,对脑缺血肺和胃组织损伤具有保护作用.
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阻断局部肾素-血管紧张素-醛固酮系统不同环节对大鼠肺间质纤维化肿瘤坏死因子α表达的影响
目的:观察阻断肾素-血管紧张素-醛固酮系统不同环节对实验性肺纤维化大鼠肺组织肿瘤坏死因子α的影响.方法:实验于2005-08/2006-08在南华大学附属第一医院临床研究所及南华大学医学院组胚、生理实验室完成.取6周龄SD大鼠50只,随机分为正常对照组、模型组、卡托普利组、螺内酯组和氯沙坦组,每组10只.正常对照组气管内注入生理盐水,其他40只SD大鼠气管内注入博莱霉素5 mg/kg复制肺纤维化模型.次日胃管内灌注血管紧张素转换酶抑制剂卡托普利60 mg/kg(卡托普利组)、血管紧张素Ⅱ的Ⅰ型受体阻断剂氯沙坦10 mg/kg(氯沙坦组)、醛固酮受体拮抗剂螺内酯100 mg/kg(螺内酯组)、等量生理盐水(模型组和正常对照组),1次/d.各组动物均于给药后第28天处死,通过苏木精-伊红染色和Mallory染色观察肺组织病理变化,用免疫组织化学法和图像分析系统定量检测肺组织肿瘤坏死因子α的表达.结果:41只大鼠进入结果分析.①肿瘤坏死因子α蛋白表达:模型组高于正常对照组(166.82±4.14,61.44±1.94,P＜0.01),卡托普利组、氯沙坦组、螺内酯组低于模型组(107.50±4.60,113.64±8.47,118.00±7.14,P＜0.01),各用药组间无差异.②模型组肺泡炎程度、肺纤维化程度显著高于正常对照组(P＜0.01,0.05),卡托普利组、氯沙坦组、螺内酯组较模型组好转(P＜0.01),各用药组间无差异.结论:肺局部肾素-血管紧张素-醛固酮不同环节可能通过刺激肺部肿瘤坏死因子α表达而发挥致纤维化作用,阻断其不同环节可阻止肿瘤坏死因子α水平升高,抑制肺纤维化形成.
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IgA肾病患者β1,3-半乳糖基转移酶特异性伴侣蛋白Cosmc基因编码区的序列分析
背景:IgA肾病发病机制迄今不明,目前研究证实IgA肾病患者IgA1分子铰链区β1,3-半乳糖基转移酶的活性降低引起IgA1分子O-糖基化异常是该病发生的重要途径.作者前期研究推测IgA肾病患者外周血B淋巴细胞β1,3-半乳糖基转移酶特性伴侣蛋白Cosmc表达降低可能是IgA肾病糖基化异常原因的中心环节.目的:检测IgA肾病患者β1,3-半乳糖基转移酶特异性伴侣蛋白Cosmc基因编码区的DNA序列,并与Gene Bank公布的序列比对.设计:病例-对照观察.单位:四川大学华西医院肾内科.对象:选择2005-11/2006-08四川大学华西医院肾内科收治的肾病患者37例,包括IgA肾病患者27例和非IgA肾病患者10例,另选择5例健康自愿者,所有观察对象均知情同意.方法:实验于四川大学生物治疗国家重点实验室完成.采集所有观察对象的肝素钠抗凝外周静脉血2 mL,采用经典酚氯仿法提取外周血基因组DNA,应用紫外分光光度仪定量DNA的含量,应用聚合酶链反应扩增所有观察对象的β1,3-半乳糖基转移酶特异性伴侣蛋白Cosmc基因编码区,并对每个观察对象的聚合酶链反应产物进行直接测序,将所有测序结果分别与Gene Bank公布序列一一进行比对.主要观察指标:β1,3-半乳糖基转移酶特异性伴侣蛋白Cosmc基因编码区的聚合酶链式反应产物扩增结果及测序序列.结果:①Cosmc基因的编码区位于Cosmc基因的257-1 213位,扩增后的Cosmc基因大小为1 247 bp.②IgA肾病患者、非IgA肾病患者以及健康自愿者之间的β1,3-半乳糖基转移酶特异性伴侣蛋白Cosmc基因编码区序列均一致,并与Gene Bank公布的序列无差异.结论:未发现IgA肾病患者有Cosmc基因编码区序列异常,提示Cosmc基因编码区序列与IgA肾病IgA1分子的糖基化异常可能无关.
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亚低温复合缺血预处理对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用
目的:观察复合预处理对肠缺血再灌注大鼠模型肝组织细胞凋亡相关基因BCl-2和Bax蛋白表达的影响,分析复合预处理防治缺血再灌注肝损伤的作用途径.方法:实验于2002-05/12在咸宁学院医学院中心实验室完成.选用Wistar健康雄性大鼠30只,由咸宁学院医学院动物室提供[实验动物机构许可证号:SCXK(鄂)2004-007].将30只大鼠按随机数字表法分为3组,即假手术组、缺血再灌注组、复合预处理组,每组10只.肠缺血再灌注模型制备:麻醉后暴露大鼠肠系膜上动脉用无损伤动脉夹夹闭其根部导致缺血,松夹即为再灌注.①假手术组:仅暴露肠系膜上动脉而不夹闭,共2 h结束实验后取材.②缺血再灌注组:夹闭肠系膜上动脉60min后,松夹60 min再取材.③复合预处理组:在小肠周围充填碎冰造成小肠亚低温(33～35℃),再夹闭肠系膜上动脉5 min和松夹5 min作为预处理,余同缺血再灌注组.动物模型制备后,在各时段处死大鼠,同时取少许肝左中叶组织,一部分常规切片,采用SABC法进行免疫组化染色,胞浆出现棕黄色颗粒为Bcl-2,Bax蛋白染色阳性细胞,计算Bcl-2,Bax蛋白的阳性表达指数;另一部分行光、电镜观察,观察各组大鼠的肝脏组织学改变.结果:30只大鼠全部进入结果分析,无脱失.①各组大鼠肝组织Bcl-2,Bax蛋白的阳性表达指数比较:缺血再灌注组大鼠肝组织Bcl-2,Bax蛋白的阳性表达指数显著高于假手术组(5.31±1.15)%,(15.16±1.35)%;(1.01±0.09)%,(0.98±0.07)%(P＜0.01);复合预处理组大鼠的肝组织Bcl-2蛋白阳性表达指数(12.21±1.17)%显著高于缺血再灌注组(P＜0,01),Bax蛋白的阳性表达指数(7.45±1.61)%显著低于缺血再灌注组(P＜0.01).②各组大鼠肝脏组织学改变:光镜下缺血再灌注组肝细胞水肿,肝窦淤血变窄;复合预处理组肝细胞索及肝窦排列整齐,未见肝细胞水肿.电镜下缺血再灌注组肝细胞有空泡形成,线粒体肿胀,胞浆疏松化,部分肝细胞核固缩、变小;复合预处理组肝细胞损伤减轻,内未见空泡,线粒体稍肿胀.结论:亚低温复合缺血预处理可通过上调Bcl-2蛋白与下调Bax蛋白表达以保护缺血再灌注肝损伤,这可能是复合预处理保护肠缺血再灌注肝损伤的作用途径之一.
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桑叶黄酮对α-糖苷酶活性的影响
目的:观察桑叶提取物桑叶黄酮对α-糖苷酶活性的影响及其对小鼠餐后血糖的影响.方法:实验于2005-07/10在解放军总医院营养科实验室和动物中心实验室进行.在体外实验中,设立空白组、阿卡波糖不同含量组和桑叶黄酮不同含量组(终浓度为0,7.81,15.63,31.25,62.50,125.00,250.00 mg/L).以阿卡波糖为阳性对照、以无抑制剂时α-糖苷酶活性为100%,检测桑叶总黄酮、HP-20树脂吸附黄酮和非吸附黄酮对α-糖苷酶活性的影响.在体内实验中,将昆明小鼠40只,按血糖水平随机分为4组,即淀粉组、淀粉+HP-20吸附黄酮组、蔗糖组、蔗糖+HP-20吸附黄酮组,每组10只,分别给予淀粉(3 g/kg)、淀粉(3 g/kg)+HP-20吸附黄酮(500 mg/kg)、蔗糖(1.5 g/kg)以及蔗糖(1.5 g/kg)+HP-20吸附黄酮(500 mg/kg).检测并比较1 h、2 h血糖水平.结果:①当阿卡波糖、桑叶总黄酮含量为0,7.81,15.63,31.25,62.50,125.00,250.00 mg/L时,α-糖苷酶/C50=70.43,82.11 mg/L.②在相同HP-20树脂吸附黄酮浓度条件下,α-糖苷酶活性分别为100.00%,94.61%,84.90%,63.04%,26.27%,11.37%和6.76%,其/C50=59.25mg/L;在相同HP-20树脂非吸附黄酮浓度条件下,α-糖苷酶活性分别为100.00%,90.55%,88.55%,85.91%,78.00%,69.91%和56.36%,其/IC50=82.86 mg/L.③在给予淀粉的糖耐量实验中,HP-20树脂吸附黄酮组1 h后血糖水平明显低于其淀粉对照组[(9.06±1.10),(11.13±1.45)mmol/L,t=2.100 9,P=α.002 09];在给予蔗糖的糖耐量实验中,HP-20树脂吸附黄酮组1 h后血糖水平也明显低于其蔗糖对照组[(9.88±1.01),(12.75±1.17)mmol/L,t=2.100 9,P=α.000 014].结论:体外实验提示桑叶总黄酮、HP-20树脂吸附和非吸附黄酮均具有抑制α-糖苷酶活性的作用,其中HP-20吸附黄酮对糖苷酶的抑制作用强于阿卡波糖;体内实验也证实HP-20吸附黄酮能够抑制给予淀粉和蔗糖后1 h血糖的升高.
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内固定基础上应用骨形态发生蛋白人工骨与自体髂骨植骨治疗骨质疏松性髋骨折的效果比较
目的:比较采用骨形态发生蛋白人工骨植骨加骨折内固定与自体髂骨植入加骨折内固定治疗骨质疏松性转子间骨折的效果.方法:选择2003-10/2005-10桂林医学院附属医院骨科收治的Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型骨质疏松性转子间骨折患者51例,均知情同意.实验分组:随机将病例分为2组,骨形态发生蛋白人工骨植入组26例,自体髂骨植入组25例.实验干预:采用股骨上段外侧切口,DHS或加防旋钉内固定,骨形态发生蛋白人工骨由处理后的牛松质骨与成品重组人骨形态发生蛋白2按一定比例复合而成,骨折固定后在骨折缺损处、内侧及骨折周围植骨,骨形态发生蛋白人工骨组采用骨形态发生蛋白人工骨植入,自体髂骨组取自体髂骨植入.实验评估:术后定期随访,比较二组患者的基本情况、临床效果和影像学结果(骨折愈合情况和颈干角的变化).随访时关节功能评定参照采用黄公怡等提出的标准,分为优、良、可、差4级.髋内翻分类标准为颈干角＜100°.结果:术后随访1年,51例患者全部进人结果分析.①术后X射线片观察:骨形态发生蛋白人工骨组临床愈合时间短于自体髂骨组[(94.50±22.45),(116.96±15.90)d,P＜0.01];骨形态发生蛋白人工骨组术后1年颈干角大于自体髂骨组[(127.19±3.23)°,(120.4±5.22)°,P＜0.01].②髋关节功能及不良事件和副反应:骨形态发生蛋白人工骨组术后以1年髋关节功能优良率优于自体髂骨组(P＜0.05);骨形态发生蛋白人工骨组髋内翻、下肢短缩(＞2 cm)的发生率均低于自体髂骨组[髋内翻(n):4,7;下肢短缩(n):3,5,P均＜0.01];钉退出二组差异均无显著性意义(P＞0.05).结论:伴有骨质疏松的转子间骨折患者,采用骨形态发生蛋白人工骨植骨优于自体髂骨植骨,可缩短骨折愈合期,减少髋内翻等并发症的发生率,提高术后髋关节功能优良率,提示骨形态发生蛋白人工骨能替代自体髂骨植骨治疗骨质疏松性转子间骨折.
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带血管自体腓骨移植修复胫骨良性骨肿瘤致骨缺损
目的:观察带血管自体腓骨移植修复胫骨中上段良性骨肿瘤致骨缺损的临床应用结果.方法:选择2001-10/2006-12在南京医科大学附属南京第一医院骨科应用带血管腓骨移植修复因良性肿瘤所致胫骨长段骨缺损患者12例,患者均知情同意.肿瘤清除后,采用健侧带血管腓骨皮瓣移植重建患侧胫骨,切取健侧腓骨长度为8～23 cm,平均长度13 cm.术后定期随访,根据Enneking评分结果、移植腓骨转归的影像学评价结果和腓骨供区的随访结果进行效果评定,Enneking系统评分根据患者肢体疼痛、功能活动、自我感受、旋转活动度、精细操作、工作能力等6个方面对患肢进行评分,满分30分,26～30分评为优,21～25分评为良,16～20分评为中,11～15分评为差.结果:全部12例患者均获随访,随访时间6个月～3年,其中6～12个月3例,17～26个月7例,27～36个月2例,平均19个月.Enneking评分26～30分7例,20～25分4例,15～20分1例.11例关节功能良好,可完成正常生活功能,仅1例因靠近膝关节至关节功能受限,经康复治疗后改善.×射线片均呈现理想的替代形态,无胫骨下端的成角畸形,腓骨均有不同程度的增粗,仅1例胫骨内侧平台塌陷约3.5 mm,另11例无明显塌陷.12例患者无供区踝关节外翻畸形及腓总神经支配区感觉异常,腓骨长、短肌肌力四五级,踝关节活动不受限.结论:带血管腓骨移植用于修复胫骨良性骨肿瘤致骨缺损是可行的,但仍需要积累更多的病例数及更长期的随访以观察远期效果.
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绵羊二尖瓣置换动物模型的制作
目的:探索人工二尖瓣置换绵羊动物模型制作的外科技术.方法:实验于2006-01/04在南方医科大学动物实验中心完成.①选用健康雄性绵羊6只,制作人工机械心脏瓣膜置换动物模型;另外取6只羊每只采血1 500 mL后处死.②人工机械心脏瓣膜由兰州飞控医疗仪器厂生产,为C-LⅠ型短柱人工机械心脏瓣膜,瓣架为高强度耐酸铬镍合金,瓣片的内部为石墨基体,表面为沉积热解碳,瓣环为涤纶长丝织物.③二尖瓣置换模型制备:术中右颈静脉建立通路用于测静脉压、输液等;右股动脉置管连续监测动脉压;连续监测心电图、血氧饱和度;检测血气分析、血钾和全血激活凝血时间;监测鼻咽及肛温,计尿量.麻醉后气管内插管接麻醉机.降主动脉插供血管,右心耳或者上、下腔静脉插引流管,升主动脉根部插灌注管和左肺静脉插左心引流管,建立体外循环.主动脉阻断,灌注心肌保护液;阻断上下腔静脉.体外循环为新鲜羊血预充,转流降温至鼻咽温度27～30℃.经左心耳切口显露二尖瓣,切除瓣叶、腱索及部分乳头肌.放置人工瓣膜,连续缝合二尖瓣环.开放循环,心脏自动复跳,循环稳定后脱离体外循环并拔管,放置左胸引流后常规关胸.术后常规使用血管活性药,麻醉清醒后拔除气管插管,青霉素预防感染,华法令口服抗凝治疗.结果:6只羊手术过程均顺利,心脏全部自动复跳,术后全部存活且超过1个月.术中体外循环过程平稳,监测血气分析无大的波动;平均手术时间为(129±11)min,平均转流时间为(61±7)min,平均主动脉阻断时间为(30±6)min,预充血量为(700±89)mL,转流中鼻咽温为(28.7±1.3)℃.术后呼吸机辅助时间12～30 h,术后血管活性药使用时间6～37 h,均在24 h内拔除胸腔引流管.3只羊并发肺部感染经抗炎治疗后治愈.术后口服华法令抗凝治疗,剂量6.0～12 mg,国际标准化比值控制在2.1～3.2之间.结论:经左心耳入路行二尖瓣置换制作绵羊动物模型是可行的.采用同种新鲜羊血预充、术中保持良好的引流和组织灌注、术后加强呼吸道管理以及抗凝治疗是提高手术成功率的重要保证.
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大鼠心脏移植急性排斥反应与心肌细胞凋亡的相关性
目的:观察并分析大鼠心脏移植急性排斥反应与心肌细胞凋亡及心脏组织Fas及FasL表达的相关性.方法:实验于2006-01/07在南方医科大学南方医院动物实验中心完成.选用SPF级健康雄性SD,Wistar大鼠各36只,制作Wistar至SD大鼠Ono心脏移植模型,将36只SD受体大鼠按随机数字表法分为4组,即术后1,3,5,7 d组,每组9只.①用QRT-PCR法检测大鼠术后1,3,5,7天心脏组织Fas,FasLmRNA的表达量,其中Fas蛋白表达于心脏组织中,FasL蛋白表达在活化的T细胞上.②应用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记技术检测心肌细胞的凋亡细胞,阳性细胞胞核呈现棕黄色.凋亡指数=凋亡细胞数/总细胞数×100%.③根据常规病理切片进行急性排斥反应分级,计0～4级,0级:无排斥,心肌组织正常,心肌间质无炎细胞浸润;4级:弥漫性多类型细胞浸润,明显心肌间质水肿、出血和心肌坏死.结果:36只心脏移植模型大鼠全部进入结果分析,无脱失.①大鼠心脏移植术后随时间推移排斥反应逐渐加重,术后第7天排斥反应重.②随急性排斥反应的加重,凋亡指数、FasL的表达均逐渐增高(0级:1.626±0.677,0.198±0.023;4级:11.404±1.274,0.408±0.051),发生4级排斥反应大鼠的心肌细胞凋亡指数、心脏组织FasLmRNA的表达量高;而FasmRNA的表达量保持不变.③心脏移植术后受体大鼠发生急性排斥反应的程度与心肌细胞凋亡指数及心脏组织FasLmRNA的表达成正相关(r=0.863,0.880,P＜0.01);急性排斥反应程度与FasmRNA表达不相关(r=0.032,P＞0.05).结论:心脏移植术后受体大鼠发生急性排斥反应的程度与心肌细胞凋亡指数及心脏组织FasLmRNA的表达成正相关,与FasmRNA表达不相关,提示可能是FasL阳性浸润细胞-活化的T细胞诱导Fas阳性心肌细胞凋亡从而介导移植排斥反应.
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金属对金属髋关节表面置换假体的临床应用及其效果
目的:总结采用金属对金属假体行全髋关节表面置换术治疗成人髋关节疾病的疗效.方法:①解放军总医院骨科于2004-03/2006-01对17例患者,23个髋关节进行了全髋关节表面置换术,男6例,女11例;平均年龄41岁(20～55岁).②假体类型为Wright公司Conserve plus金属对金属全髋假体,髋臼为非骨水泥型,壁厚3 mm,股骨头为骨水泥型.假体规格为;髋臼48～52 mm,股骨头相应减小6 mm,中心柄长度59～65 mm.③手术方法按照Amstutz和Nelson提出的标准方法进行.④术后患者均进行定期临床与放射学随访,平均随访12个月.手术前后的髋关节功能按Harris标准评定,即优:90～100分;良:80～90分;尚可:70～79分;差:＜70分.将Hungerford标准作为判断手术是否成功的标准,即Harris评分＞80分定为成功,＜80分定为失败.每例患者拍摄骨盆前后位片、髋关节侧位片.结果:所有患者切口均一期愈合,临床效果满意,无股骨颈骨折、感染、关节脱位、假体松动、神经血管损伤等并发症.术后Harris评分83～97分,平均为91.2分.评价:优20髋,良3髋,优良率100%.影像学分析假体位置良好.结论:金属对金属髋关节表面置换假体治疗年轻成人髋关节疾病,近期随访结果满意.
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大鼠小肠移植急性排斥反应中血清白细胞介素2及干扰素γ的变化
目的:分析血清白细胞介素2、干扰素γ的水平在大鼠小肠移植急性排斥反应过程中的意义及其评估价值.方法:实验于2005-11/2006-06在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成.实验方法:小肠移植模型动物选用封闭群SD和Wistar大鼠42只,按随机数字表法分为3组:①对照组(n=6):SD大鼠仅作腹部开关及左肾切除术.②同基因移植组(n=18):供受体均为SD大鼠.③异基因移植组(n=18):供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠.同基因移植组和异基因移植组分别于术后3,5,7天处死大鼠取移植肠段行病理组织学检查,每次6只;同时取血清应用ELISA法检测血清白细胞介素2、干扰素γ水平,对照组大鼠于术后第3天取血清检测.实验评估:排斥程度评估标准分为轻、中、重3度:①轻度:肠黏膜绒毛数目减少,轻度增粗,变短,少量淋巴细胞和粒细胞浸润,少量凋亡上皮细胞.②中度:肠黏膜绒毛明显变矮增宽,黏膜上皮开始脱落,细胞浸润加重,上皮细胞凋亡数目明显增多.③重度:肠绒毛结构消失,上皮脱落,间质大量炎细胞浸润,肌层结构破坏,血管炎.结果:42只大鼠均进入结果分析,无脱失.①异基因移植组大鼠术后第3,5,7天的病理组织学检测结果分别符合轻、中、重度排斥反应,对照组和同基因移植组无明显排斥征象.②异基因移植组大鼠血清白细胞介素2、干扰素γ的表达水平在术后第3,5,7天均显著高于其他2组(P＜0.01),白细胞介素2水平升高以第3天明显,第5天达到高峰,第7天即有所下降;干扰素γ水平升高较为缓慢,第7天明显升高.同基因移植组大鼠血清白细胞介素2、干扰素γ水平也高于对照组,但差异无显著性意义(P＞0.05).结论:白细胞介素2、干扰素γ在大鼠小肠移植急性排斥反应过程中发挥重要作用,血清白细胞介素2、干扰素γ水平监测可作为预测及早期诊断大鼠小肠移植急性排斥反应的重要指标.
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大鼠移植心脏组织中血小板衍生生长因子A mRNA表达及雷帕霉素的干预效应
目的:血小板衍生生长因子在平滑肌细胞的表型转化过程中起重要作用.观察大鼠移植心脏组织中血小板衍生生长因子A mRNA表达的变化及雷帕霉素的干预效应.方法:实验于2005-10/2006-01在中南大学湘雅二医院胸心外科实验室完成.将60只SD大鼠、24只Wistar大鼠按随机数字表法分为3组:①同系移植组:供、受体各12只,均为SD大鼠.②异系移植组:供体为Wistar大鼠(n=24),受体为SD大鼠(n=24),受体大鼠随机分为雷帕霉素组(n=12)和环孢霉素组(n=12),术后分别给予雷帕霉素1.25 mg/(kg·d)灌胃及环孢霉素A 10 mg/(kg·d)皮下注射,给药60 d,给药结束后留取移植心脏待检.③另12只SD大鼠直接取心脏组织作为正常对照组.指标检测:①对移植心脏组织行Van Gieson染色后采用Mias system 4.1医学图像分析管理系统分析血管狭窄程度.②应用反转录-聚合酶链反应检测血小板衍生生长因子A mRNA在移植心脏组织中的表达情况.结果:36只受体SD大鼠及12只正常SD大鼠全部进入结果分析,无脱失.①同系移植组、环孢霉素组及雷帕霉素组大鼠的冠状动脉狭窄指数均显著高于正常对照组[(13.12±0.72)%,(62.45±8.12)%,(28.91±3.24)%,(0.09±0.02)%(P＜0.01)],环孢霉素组及雷帕霉素组高于同系移植组(P＜0.05),环孢霉素组高于雷帕霉素组(P＜0.01).②正常对照组、同系移植组、环孢霉素组及雷帕霉素组大鼠的血小板衍生生长因子A mRNA相对含量分别为0.19±0.06,0.21±0.08,1.12±0.22及0.47±0.11,环孢霉素组、雷帕霉素组显著高于同系移植组(P＜0.01),环孢霉素组高于雷帕霉素组(P＜0.05).结论:血小板衍生生长因子A mRNA的高表达与移植心脏的血管硬化有关;雷帕霉素具有预防大鼠心脏移植物血管病变的作用,其作用可能与抑制心脏组织中血小板衍生生长因子A mRNA的表达有关.
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猪小肠黏膜下层移植修复兔膝关节内侧副韧带缺损
目的:观察猪小肠黏膜下层修复兔膝关节内侧副韧带缺损的作用效果.方法:实验于2006-01/08在上海交通大学医学院附属第三人民医院动物房及中心实验室完成.选用新西兰大白兔24只,动物左右两膝分别作为猪小肠黏膜下层移植组及自体韧带移植组,分别制作兔膝关节内侧副韧带缺损模型.猪小肠黏膜下层移植组植入猪小肠黏膜下层,猪小肠黏膜下层作为细胞外基质,无免疫原性;自体韧带移植组植入对侧副韧带.分别于术后2,4,8和12周取白兔膝关节内侧副韧带,行大体形态观察及组织学和力学检查,两组间进行对比观察.结果:24只白兔均进入结果分析,无脱失.①内侧副韧带移植段大体形态观察结果:术后4周,猪小肠黏膜下层移植组有大量的肉芽增生,与周围粘连;自体韧带移植组肉芽组织与周围粘连相对少.术后8周,猪小肠黏膜下层移植组组织梭形增生;自体韧带移植组组织平行增生,直径略小于猪小肠黏膜下层移植组.术后12周,猪小肠黏膜下层移植组增生组织平行于自体韧带,大小一致;自体韧带移植组增生组织直径与猪小肠黏膜下层移植组相一致.②内侧副韧带移植段光镜检查结果:术后2周,猪小肠黏膜下层移植组少量炎性细胞浸润,成纤维细胞数目不多,血管增生明显;自体韧带移植组炎性细胞稀少.术后4周,猪小肠黏膜下层移植组有大量的成纤维细胞,胶原增多;自体韧带移植组成纤维细胞和胶原比猪小肠黏膜下层移植组多.术后8周,猪小肠黏膜下层移植组纤维细胞为主,纤维纵向排列;自体韧带移植组也以成纤维细胞为主.术后12周,两组均有大量的胶原,排列整齐,细胞和纤维密度相一致.③内侧副韧带力学检查结果:术后4周猪小肠黏膜下层移植组白兔内侧副韧带的大拉伸负荷大于自体韧带移植组[(36.8±8.9,25.3±7.3)N(P＜0.05)],术后2,8,12周,两组差异无显著性意义(P＞0.05).结论:猪小肠黏膜下层是一种良好的生物材料,可以用来移植修复膝关节内侧副韧带缺损和损伤,移植后期具有与自体韧带相似的替代修复作用.
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骨髓间质干细胞在原位肝移植受体鼠体内分布及对肝功能和生存期的影响
目的:观察受体SD大鼠骨髓间质干细胞在原位肝移植术后受体内的分布情况,及其对肝功能与生存期的影响.方法:实验于2005-06/2006-06在珠江医院中心实验室完成.①选取30只Wistar大鼠作为供体,30只SD大鼠作为受体,随机数字表法分为假手术组、模型对照组、细胞移植组,10对/组.②另取30只SD大鼠用于骨髓间质干细胞的获取,麻醉后处死,取股骨内骨髓,采用密度梯度离心法与贴壁法分离培养骨髓间质干细胞,3 d后全量换液,第10天传代.取第3代骨髓间质干细胞1 mL(含干细胞约1×107个),用5μmol/L羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记10 s,以体积分数为0.1的胎牛血清终止染色.③模型对照组、细胞移植组采用双袖套法建立Wistar→SD大鼠肝移植模型,移植后SD大鼠存活时间大于72 h为造模成功标志.假手术组单纯行腹部切开缝合术.术毕关腹前,假手术组、细胞移植组SD大鼠分别经门静脉注入骨髓间质干细胞悬液1 mL(约1×107个干细胞),模型对照组给予等量DMEM.④各组分别于术后1周、2周、1个月,荧光显微镜下观测经羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记的骨髓间质干细胞分布情况;取尾静脉血1 mL,检测谷丙转氨酶及总胆红素含量;免疫组化法检测肝组织免疫排斥反应.同时观测1个月内各组接受肝移植的SD大鼠的存活时间.结果:各组接受肝移植的10只SD大鼠均进入结果分析.①骨髓间质干细胞的原代培养与羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记结果:骨髓间质于细胞原代培养48～72 h以圆形和短梭形为主,体外分离培养扩增至第3代较为纯化,经羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂标记后细胞膜呈绿色.②肝组织骨髓间质干细胞的分布:假手术组、模型对照组术后1,2周及1个月肝组织内均未见骨髓间质干细胞分布.细胞移植组各时间点骨髓间质于细胞主要聚集在肝脏.③术后肝功能检测:与模型对照组比较,术后1周、2周、1个月细胞移植组谷丙转氨酶与总胆红素含量均显著降低(F=63.179,P＜0.01).④术后肝组织免疫排斥变化:模型对照组呈重度急性排斥反应,表现为肝细胞索状排列紊乱,汇管区大量炎性细胞浸润.细胞移植组呈轻度急性排斥反应,术后1周可见汇管区中等量单核细胞浸润,术后2周细胞浸润减少,术后1个月肝细胞索状排列整齐,小叶结构清晰,基本恢复正常.⑤术后生存时间观测:与模型对照组比较,细胞移植组植入骨髓间质干细胞后生存时间明显延长,Log-Rank检验差异有显著性意义(F=4.85,P＜0.01).结论:大鼠受体骨髓间质干细胞植入原位肝移植受体内后主要聚集于肝组织,能够较为迅速地恢复受体肝功能,减轻肝组织免疫排斥反应,并有效延长其生存期.
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构建腹膜透析动物模型的相关研究
目的:阐述各种不同的腹膜透析动物模型的优缺点,为腹膜透析及其后的肾移植研究奠定相关实验基础.资料来源:应用计算机检索Medline数据1995/2006期间与腹膜透析动物模型相关的文章,检索词为"animal,peritoneal dialysis",并限定文章语言种类为English.资料选择:对资料进行初审,选取包括腹膜透析和动物模型的文献,然后筛出明显不相关的文献,对余下的文献开始查找全文.纳入标准:①基础研究.②动物实验.资料提炼:共检索到172篇与腹膜透析动物研究相关的文章.急性腹膜透析模型22篇,慢性腹膜透析动物模型150篇,包含腹膜纤维化动物模型34篇.资料综合:不同的研究团体所采用的动物模型及研究方法存在很大的差异性,从实验动物的品系到入腹腔途径、观察时间、溶质转运与超滤测定和组织样本都没有一致标准.急性腹膜透析动物模型用来观察腹膜的结构和功能,慢性腹膜透析动物模型用来研究腹膜长期接触腹透液后的结构和功能的变化.结论:目前没有各种研究团体所公认的腹膜透析动物模型,这种情况妨碍实验结果的比较,因此系统评价各种模型的优缺点,在不同研究团体间达成共识十分必要.
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胰岛移植过程中胰岛培养的研究现状
目的:总结胰岛移植过程中胰岛培养的研究现状,为利用胰岛培养准备更多更好的胰岛提供理论依据和技术支持.资料来源:以计算机检索Medline和Pumed数据库1994-01994 007-01与胰岛培养相关的文章,检索词为"islet,culture",限定文章语言种类为English.同时计算机检索CNKI中国全文数据库1994-010/2007-01与胰岛培养相关的文章,检索词为"胰岛,培养",限定文章语言种类为中文.资料选择:对资料进行初审,纳入标准:①与胰岛培养相关的文章.②1994年以后发表的文章.排除标准:Meta分析类文章.资料提炼:共检索到1 384篇与胰岛培养相关的文章,入选33篇.对所检索文章的相关信息加以综合概括,其中关于胰岛培养中基础培养基、培养添加物、培养温度、密度等方面的文章18篇,关于胰岛培养新尝试的文章12篇.资料综合:将胰岛培养后再行移植有一定优势,包括降低免疫原性和为术前准备赢得时间等.目前对于挑选合适培养基及其添加物,调整合适培养温度、培养密度以及保护胰岛的活性等都有了比较深入细致的研究;同时很多学者开始尝试一些新的方法延长胰岛培养时间,改善胰岛功能,包括加入细胞外基质、与其他细胞共培养、选用微重力系统培养以及利用胶囊包裹培养等均显示良好的效果.结论:虽然胰岛培养可能会影响胰岛的活性和功能,但随着对胰岛生理和病理生理特性研究的深入,新的技术方法可将这些影响降到低.胰岛培养给临床实践带来的便利是其大的优势,加强胰岛培养的研究与应用有着重要的意义.
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血浆脂联素水平与原发性高血压的关系
目的:查明原发性高血压及降压药物对血浆脂联素水平的影响,揭示升高血浆脂联素水平的临床意义.资料来源:应用计算机检索Medline1996-01/2006-12与脂联素及高血压相关的文献,检索词为"adiponectin,hypertension",并限定文章语种为English.同时检索中国期刊全文数据库1996-01/2006-12有关脂联素的文章,检索词为"脂联素,高血压",限定文章语种为中文.资料选择:对资料进行初审,选取包括脂联素基因、蛋白、受体及与高血压研究密切相关的文献.涉及到影响血浆脂联素的治疗药物,优先选择临床随机对照试验.排除标准:重复性研究.资料提炼:共收集210篇关于脂联素与高血压的研究文献,其中综述类文献20篇,选择2篇,英文随机对照试验8篇,全部选入.排除与选择标准关系不大的177篇.资料综合:符合标准文章33篇.脂联素是近年发现的脂肪细胞因子之一,具有重要的生理功能影响体内代谢和某些疾病的发生发展.原发性高血压患者血浆脂联素水平降低日益受到重视.已有的研究结果表明,脂联素及其受体可能成为防治高血压等心血管病的新靶点.结论:原发性高血压患者的血浆脂联素水平是降低的,但原发性高血压致血浆脂联素水平降低的确切机制尚未完全阐明.人们正在研究降压药物对血浆脂联素水平的影响,所取得的一些初步结果有待于进一步验证和评价.
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组织瓣移植修复治疗胸骨骨髓炎
目的:归纳总结组织瓣移植修复胸骨骨髓炎的方法,并对其有效性、安全性及优缺点作出比较.资料来源:共收集中英文两种文献资料.中文检索资料来源于中国医院知识仓库,检索词为"胸骨,骨髓炎",选择摘要为检索项,检索时间为1994～2004年.同时应用Pubmed检索外文文献,检索时限为近10年,检索词为"sternal osteomyelitis flap surgery",并限定文章语言种类为English.资料选择:对检索到的所有文献进行整理,挑选治疗手段为各种组织瓣移植方法的信息.选取针对性强的文章,对不同类别的组织瓣移植方法予以归类、总结、精炼.资料提炼:共检索到中文文献14篇,其中9篇符合要求,排除5篇,英文相关文献检索到24篇,其中13篇符合要求,排除11篇.此外,根据各文献所列参考文献中再次收集选取针对性强的文章,后选定32篇.资料综合:胸骨骨髓炎一直是临床面临的难题之一,其治疗包括保守治疗和积极的手术治疗.其中,保守治疗费时费力,且通常不能奏效.组织瓣移植已是目前胸骨骨髓炎的主要手术治疗手段,根据各种组织瓣的不同,可分为腹直肌肌皮瓣、背阔肌肌皮瓣、胸大肌肌皮瓣、大网膜移植等.各种方法均有其治疗特点,针对合适的病患,都能取得满意的治疗效果.结论:组织瓣移植是治疗胸骨骨髓炎的一种可靠方法,但清创的作用也不容低估.由于各种组织瓣各具优缺点,因此,具体手术方案的选择应当根据患者的具体条件来确定.只有充分考虑到病变的特点、受区、供区的状况,选择相应的组织瓣,手术才能获得成功.
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人工耳蜗植入技术的应用及手术相关解剖特点
目的:介绍人工耳蜗植入术临床应用进展以及手术相关部位的解剖特点.资料来源:应用计算机检索Medline 1986-01/2006-12与人工耳蜗植入相关的文章,检索词为"cochlear implantation,indication,complication,dissection,electrically evoked compound action potential",限定文献语种为"English";同时检索万方数据库2000-01/2006-12相关文章,检索词为"人工耳蜗,适应证,并发症,解剖,电诱发的前庭蜗神经复合动作电位",限定文献语种为中文.同时手工查找相关书籍.资料选择:共检索到相关文献300余条,进一步查找全文,选择与人工耳蜗植入术相关应用解剖、人工耳蜗植入术适应证、并发症及术后效果相关文章,纳入观察对象为人的临床研究,无论有无对照均纳入,筛除明显重复文献以及综述类文章,后纳入40条文献进行综述.资料提炼:40条文献中研究人工耳蜗植入的解剖学文章有16篇,介绍人工耳蜗植入应用进展的文章有17篇,总结人工耳蜗植入术后调试及效果的文章有8篇.资料综合:①人工耳蜗植人术经面神经隐窝入路较理想,距圆窗龛较近,有利于电极插入,但该入路靠近面神经管,手术操作时应注意保护面神经.②随着科技进步和临床经验的积累,人工耳蜗植入的病例选择标准已放宽.耳聋的发病的原因和植入耳蜗的年龄对语后聋患者的术后听力效果影响并不明显,但对语前聋患者的人工耳蜗植入越早其疗效越好,而且在人工耳蜗植入手术前残余听力较好的患者,人工耳蜗植入手术后的效果比残余听力差者疗效要好.③内耳结构的异常影响人工耳蜗植入手术进行,但术前影像学的检查能够帮助医生做出正确判断.④人工耳蜗植入术的术后效果在很大程度上要依赖于手术后对电刺激动态范围的准确调试.结论:目前,人工耳蜗植入手术已经成为重度以上感音神经性耳聋的常规治疗手段,术前评估和术后正确调试是保证手术效果的重要措施.
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OsteoSet骨移植替代品修复骨肿瘤性骨缺损22例
目的:观察应用OsteoSet骨移植替代品修复骨肿瘤性骨缺损的临床疗效.方法:选择2004-06/2006-09吉林大学第一医院采用OsteoSet骨移植替代品修复骨肿瘤性骨缺损患者22例,患者及家属均知情同意.将肿瘤彻底刮除或切除,残腔刮除干净,干纱布填塞止血,灭活,然后将OsteoSet骨移植替代品(由美国Wright公司研究生产,以医用硫酸钙为基质,具有高纯度的α晶体结构,不透X射线,可以使血管和骨生成细胞长入,同时可被生物降解)放入要填充骨骼的治疗部位,所有骨缺损需填满.修复术后定期复查X射线片,计算颗粒吸收率和新骨生长率,颗粒吸收率=颗粒吸收区域面积/骨缺损总面积×100%;新骨生长率=新骨生成区域/骨缺损总面积×100%.同时对患者进行随访,了解其肢体功能恢复情况及并发症发生情况.结果:①22例患者均得到随访,随访6～9个月,其中随访6,7,8,9个月者分别为8,6,3及5例.术后所有患者OsteoSet骨移植替代品吸收良好,没有出现不良反应;缺损区新骨长入良好;患者肢体功能恢复良好,其中1例患者发生骨折.②术后12周97.1%的OsteoSet骨移植替代品颗粒被吸收,95.3%的新骨长入缺损区;术后6个月99.1%的OsteoSet骨移植替代品颗粒被吸收,98.6%的新骨长入缺损区.结论:OsteoSet骨移植替代品自然吸收率与新骨生长率基本一致,是一种理想的骨缺损充填材料.
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低温人工肾透析过程的低血压现象
目的:观察低温对人工肾透析中低血压的预防作用.方法:实验于2006-08/12在承德医学院附属医院血液透析室完成.选择2004-11/2006-12于承德医学院附属医院进行人工肾透析的患者20例,患者均采用两种不同温度的透析液进行透析,即低温透析(35.0℃)与常温透析(37.0℃),透析后达干体质量.透析前患者休息15 min后测量血压、心率,透析进行过程中每30 min测血压、心率及超滤量.采用自身对照的方法比较透析前及透析过程中的血压、心率及超滤量,并观察患者低血压时有无不适症状.透析剂量3次/周,4 h/次.结果:20例患者全部进入结果分析,共行低温透析160次,常温透析160次.①低温透析前后患者的心率无明显改变,常温透析时心率较透析前略升高(86.5±6.9,75.6±8.2)次/min,收缩压、舒张压及平均动脉压均有所降低;与常温透析相比,低温透析时患者的心率明显下降[(78.4±7.1)次/min(P＜0.05)],收缩压、舒张压及平均动脉压均明显升高(P＜0.05),超滤量明显升高(P＜0.05).②低温透析时低血压相关并发症的发生率显著低于常温透析(10%,91%,P＜0.05).结论:与常温透析相比,低温透析时低血压的发生率明显降低,心血管功能比较稳定.低温是降低人工肾透析中低血压及相关并发症发生率的有效方法.
