中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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骨髓间充质干细胞移植脑梗死模型后的CT、MRI特征分析
背景：研究表明骨髓间充质干细胞可通过多种途径发挥促进脑组织功能恢复的作用。目的：分析骨髓间充质干细胞移植脑梗死模型大鼠的CT、MRI特征。
方法：将40只脑梗死模型大鼠随机分为2组，梗死组通过尾静脉注射1 mL PBS、移植组通过尾静脉注射1 mL细胞浓度为2.0×109 L-1的细胞悬液。于移植后1，2，3周进行神经功能缺损评分(mNSS)，评价神经功能恢复情况；于移植后的6 h，1，3，5，7 d对各组大鼠行CT及MRI扫描，观察脑梗死区TIWI、T2WI、FLAIR、DWI序列的信号改变特征，梗死体积大小。测量脑梗死区域T1WI、T2WI、FLAIR、DWI序列的信号强度比(SIR)及其相对变化率(?SIR)，并与正常对侧相应解剖区域进行比较。
结果与结论：移植后1，2，3周，移植组的神经功能缺损评分明显低于梗死组(P<0.05)；移植后3，5，7 d时移植组脑梗死体积较梗死组显著减少(P<0.05)，移植组T1WI序列SIR均明显高于梗死组，T2WI、FLAIR序列SIR较梗死组显著降低，差异有显著性意义(P<0.05)；移植后7 d时移植组DWI序列SIR较梗死组明显降低(P<0.05)。移植组T1WI序列?SIR与梗死组比较差异无显著性意义(P>0.05)，移植组T2WI、FLAIR及DWI序列?SIR较梗死组显著增高，差异有显著性意义(P<0.05)。结果显示MRI可显示大脑任意角度的切面像，对骨髓间充质干细胞移植治疗脑梗死的疗效评价起重要作用。 -
中脑神经干细胞和骨髓基质干细胞对帕金森大鼠行为学及脑组织形态学的影响
背景：研究发现神经干细胞或者骨髓基质干细胞可脑内移植治疗中枢神经系统疾病，但是两种干细胞移植治疗效果的比较相对较少。
目的：观察比较中脑神经干细胞和骨髓基质干细胞对帕金森大鼠行为学及脑组织形态学的影响。
方法：58只SD大鼠构建帕金森病模型，随机分为3组，分别为骨髓基质干细胞组(20只)、中脑神经干细胞组(20只)、生理盐水组(18只)。造模成功后3周，选取右侧纹状体2个坐标点注入骨髓基质干细胞悬液、中脑神经干细胞悬液、生理盐水5μL。移植后5个月腹腔注射阿朴吗啡观察大鼠的行为学变化，取纹状体脑组织制备石蜡切片进行免疫组化荧光染色。
结果与结论：治疗后第5个月骨髓基质干细胞组和中脑神经干细胞组大鼠旋转次数较治疗前显著下降(P<0.05)，且明显低于生理盐水组(P<0.05)，骨髓基质干细胞组和神经干细胞组比较差异无显著性意义(P>0.05)。移植后第1周，骨髓基质干细胞组纹状体内有 BrdU 与 Nestin 双重染色细胞；移植后第1个月，脑纹状体内出现BrdU/GFAP双重染色细胞和BrdU/NSE双重染色细胞；纹状体内存在TH阳性细胞，但未出现明显BrdU/TH双重染色细胞；移植1个月之后，BrdU与Nestin双重染色细胞数量逐渐减少，终基本消失，但仍然存在一定的数量的BrdU/GFAP、BrdU/NSE双重染色细胞，BrdU/GFAP阳性细胞数量相对较多。同一时间点，中脑神经干细胞组也存在类似情况，但生理盐水组未发现双标细胞。结果表明，中脑神经干细胞和骨髓基质干细胞移植均可改善帕金森大鼠的行为学，且可分化为神经元、星形胶质细胞、多巴胺能神经元。 -
脐血干细胞对1型糖尿病大鼠血糖及PDX-1、MafA表达水平的影响
背景：1型糖尿病是一种自身免疫性疾病，以胰腺β细胞选择性破坏，导致患者体内胰岛素分泌绝对不足为特征。脐血干细胞具有多分化潜能，在体内外均可以诱导分化为胰岛细胞，发挥出一定的降糖作用。
目的：探讨脐血干细胞对1型糖尿病大鼠血糖水平及胰腺组织PDX-1、MafA表达的影响。
方法：30只SD大鼠随机分为3组，每组10只，治疗组和模型组大鼠建立1型糖尿病模型，造模成功后，治疗组尾静脉一次性注射脐血干细胞，正常组给予相同体积的生理盐水，模型组给予相同体积的脐血干细胞缓冲液。采用口服葡萄糖耐量试验评价大鼠胰岛功能，苏木精-伊红染色观察大鼠胰腺形态，Western blot 和PCR 检测胰腺组织PDX-1、MafA蛋白和mRNA表达。
结果与结论：①模型组和治疗组大鼠0，30，60，90 min的血糖值均显著高于正常组，差异均有显著性意义(P<0.05)；120 min时间点模型组血糖值显著高于正常组(P<0.05)；治疗组则与正常组之间差异无显著性意义(P>0.05)。②模型组胰岛数量出现下降，边界模糊不清，呈不规则形态，治疗组胰岛数量出现一定的减少，但尚维持清晰的结构。③治疗组PDX-1及MafA表达水平与正常组比较差异无显著性意义(P>0.05)，但显著高于模型组(P<0.05)。以上结果表明，脐血干细胞可以显著降低1型糖尿病大鼠的血糖水平，改善胰岛功能及胰腺组织形态，并具有上调PDX-1、MafA表达的作用。 -
单倍型异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血：回顾性分析
背景：随着国内独生子女家庭的普及，全相合造血干细胞移植受干细胞来源限制，临床应用受到局限，因此单倍型造血干细胞移植越来受到亲睐。
目的：回顾性对比分析单倍型异基因造血干细胞移植和全相合异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血的临床疗效及安全性。
方法：选取解放军北京军区总医院血液科2013年1月至2015年1月接受单倍型异基因造血干细胞移植治疗的15例重型再生障碍性贫血患者(治疗组)病例资料，预处理方案为环磷酰胺、氟达拉滨、白舒非联合抗人淋巴细胞免疫球蛋白，供者接受粒细胞集落刺激因子动员，移植方式应用骨髓联合外周血干细胞移植。采用联合免疫抑制剂包括环孢素 A、甲氨蝶呤、他克莫司等预防移植物抗宿主病。同时选择同期行全相合异基因造血干细胞移植治疗的15例重型再生障碍性贫血患者病例资料作为对照组，统计两组患者移植相关并发症及存活情况。
结果与结论：随访至2015年7月，治疗组中位随访时间20.7个月(6-30个月)，全部患者均获造血重建，4例发生移植物抗宿主病、5例合并肺部感染、3例合并败血症，因肺部感染死亡1例、败血症死亡1例、移植物抗宿主病死亡2例；对照组中位随访时间19.7个月(5-28个月)，全部患者均获造血重建，3例发生移植物抗宿主病、4例合并肺部感染，因移植物抗宿主病死亡2例、肺部感染死亡1例，两组患者总生存率分别为73%和80%，差异无显著性意义(P=0.67)。结果表明单倍型移植治疗重型再生障碍性贫血安全有效，临床疗效与全相合造血干细胞移植相当。 -
神经节苷脂联合骨髓间充质干细胞移植治疗颅脑创伤
背景：骨髓间充质干细胞可以在体内外诱导下分泌神经营养因子，还可向神经元方向转化，从而促进创伤脑组织再生修复，但骨髓间充质干细胞又存在生存周期短的问题而影响其发挥对损伤脑组织的保护作用。
目的：观察骨髓间充质干细胞移植联合神经节苷脂治疗大鼠颅脑创伤的效果。
方法：60只Wistar大鼠采用液压颅脑损伤仪制备大鼠重型颅脑创伤模型，建模24 h后按照随机表法随机分为3组：模型组经尾静脉注入1 mL DMEM培养液，移植组经尾静脉注入1 mL(1×1010 L-1)骨髓间充质干细胞悬液，联合组经尾静脉注入1 mL(1×1010 L-1)骨髓间充质干细胞悬液以及经腹腔注射神经节苷脂水溶液(30 mg/kg)，1次/d，共3 d。伤后24 h，细胞移植后3 d及1，2，3，4周依据Longa 5分法进行神经功能行为学评分；移植后3 d应用RT-PCR、Western blot检测创伤脑组织中水通道蛋白4基因和蛋白的表达；移植后1周，行苏木精-伊红染色观察创伤脑组织病理变化。
结果与结论：移植后3 d及1，2，3，4周，联合组神经行为学功能评分低于移植组(P<0.05)，移植组低于模型组(P <0.05)；移植后3 d，模型组创伤脑周围组织水通道蛋白4蛋白及mRNA的表达高于移植组(P <0.05)，移植组高于联合组(P<0.05)；苏木精-伊红染色观察到联合组脑组织恢复明显优于模型组和移植组(P<0.05)。结果提示骨髓间充质干细胞移植联合神经节苷脂可以明显改善颅脑创伤大鼠的神经行为学功能。 -
端粒酶反转录酶基因电转染人羊膜间充质干细胞移植治疗糖尿病
背景：羊膜是胎儿出生后的废弃物，羊膜间充质干细胞具有取材方便、增殖能力强、无伦理学争议、免疫原性低等优势。
目的：通过端粒酶反转录酶(human telomerase reverse transcriptase，hTERT)基因电转染人羊膜间充质干细胞移植到大鼠糖尿病模型，探讨其对糖尿病大鼠的疗效。
方法：分离培养人羊膜间充质干细胞，经hTERT基因电转染羊膜间充质干细胞，从50只SD大鼠中随机取10只作为对照组，剩余40只按45 mg/kg的剂量注射链脲霉素，建立糖尿病模型后，将建模成功的36只SD大鼠随机分为糖尿病组、人羊膜间充质干细胞移植组和hTERT-人羊膜间充质干细胞移植组，每组各12只；人羊膜间充质干细胞移植组和 hTERT-人羊膜间充质干细胞移植组分别通过大鼠舌下静脉注射移植人羊膜间充质干细胞和经hTERT基因电转染羊膜间充质干细胞。移植后各组进行动态血糖水平监测，于移植后每周检测各组大鼠血浆胰岛素的浓度，胰腺切片苏木精-伊红染色观察病理变化。
结果与结论：移植后4周，与糖尿病组比较，人羊膜间充质干细胞移植组和 hTERT-人羊膜间充质干细胞移植组血糖水平明显下降(P<0.05)，尤其是hTERT-人羊膜间充质干细胞移植组的空腹血糖水平接近于对照组水平(P>0.05)，而糖尿病组空腹血糖维持在较高水平；移植后6周，与糖尿病组比较，人羊膜间充质干细胞移植组和 hTERT-人羊膜间充质干细胞移植组的血浆胰岛素含量增加(P <0.05)，胰腺病损程度减轻(P <0.05)，hTERT-人羊膜间充质干细胞移植组更明显(P <0.05)。结果证实，提示hTERT转染的羊膜间充质干细胞移植能明显降低糖尿病大鼠血糖和减轻胰岛损伤，可以有效治疗大鼠糖尿病。 -
SPIO、DAPI双重标记猕猴骨髓间充质干细胞：对细胞活性及增殖的影响
背景：传统的细胞移植示踪方法均需要在体外状态下进行组织学切片鉴定和分析，这显然限制了干细胞移植进入临床应用，因此，探索无创的、可多次重复应用的活体示踪方法已成为迫切亟待解决的问题。
目的：观察SPIO和DAPI双标记猕猴骨髓间充质干细胞的效果及对干细胞存活、增殖的影响。
方法：全骨髓贴壁法分离培养猕猴骨髓间充质干细胞，并采用流式细胞术对骨髓间充质干细胞进行鉴定。用SPIO和DAPI双标记骨髓间充质干细胞，通过荧光显微镜观察DAPI标记阳性率，普鲁士蓝染色和透射电镜鉴定SPIO标记阳性率，MTT检测标记细胞的活性、增殖能力。
结果与结论：采用全骨髓贴壁法成功获得高纯度猕猴骨髓间充质干细胞，纯度达95.1%。SPIO和DAPI成功标记骨髓间充质干细胞，标记阳性率达95%-98%，且对干细胞的活性、增殖无影响。 -
不同治法中药干预心肌梗死边缘区归巢骨髓间充质干细胞的增殖与分化
背景：明确各种干细胞向心肌细胞分化过程中的表达变化，确定分化后的干细胞在心功能活动中发挥生理作用，并通过某些特定的条件刺激干细胞的增殖潜能，使其直接分化成功能性心肌细胞，补充缺失的心肌细胞，有效地抑制心脏肌成纤维细胞过度增殖，是心血管疾病再生治疗的新方法和思路。
目的：探讨三七总皂苷、红景天苷、黄芪有效组分对心肌梗死大鼠内源性CD105阳性骨髓间充质干细胞归巢及增殖分化的影响。
方法：急性心肌梗死模型大鼠随机分为活血组、益气组、益气活血组、模型组，各组再按1，3，7，14，28 d时间点分为亚组，以未造模的正常大鼠为正常组。根据体表面积剂量换算法计算给药量，活血组给予80 g/L血塞通软胶囊(主要成分为三七总皂苷)、益气组给予0.5 g/mL黄芪颗粒、益气活血组给予70 g/L诺迪康胶囊(主要成分为红景天苷)灌胃，大鼠按每100 g体质量灌胃1 mL药液，正常组和模型组以等量生理盐水灌胃，1次/d，共28 d。免疫组化法检测不同时间点梗死边缘区CD105、CD117、Vimentin(波形蛋白)、cTnT(心肌肌钙蛋白T)、GATA-4(锌指转录因子4)、Ki-67阳性细胞数。
结果与结论：①模型组CD105、CD117、cTnT、GATA-4、Ki-67表达高于正常组，且CD105、CD117、cTnT、GATA-4、Ki-67表达在1-7 d有增多趋势，7 d达到高峰，其后降低；活血组、益气活血组、益气组各时间点CD105、CD117、cTnT、GATA-4、Ki-67阳性细胞数比模型组增多明显(P<0.05)，但活血组增多趋势优于益气活血组、益气组；各组Ki-67与CD105、CD117、cTnT、GATA-4染色结果不完全平行，但增长趋势大致一致。②模型组Vimentin表达高于正常组，Vimentin在1-3 d有增多趋势，3 d达到高峰，其后降低；活血组、益气活血组、益气组各时间点Vimentin阳性细胞数比模型组减少(P<0.05)；活血组Vimentin阳性细胞数少于益气活血组、益气组(P <0.05)；活血化瘀方药对Vimentin降低明显，说明活血组抗纤维化作用效果显著。结果表明三七总皂苷、红景天皂苷、黄芪有效组分均可促进骨髓间充质干细胞增殖分化防治心肌梗死后心肌重塑，但活血化瘀方药效果明显。 -
骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质支架的生物相容性
背景：国内外许多研究者一直寻找理想的种子细胞与合适的支架材料复合，试图模拟接近正常生理功能的组织工程化尿路替代物。
目的：探讨骨髓间充质干细胞与兔膀胱脱细胞基质支架的生物相容性。
方法：采用密度梯度离心法分离培养兔骨髓间充质干细胞，将第3代兔骨髓间充质干细胞接种到兔膀胱脱细胞基质上进行复合培养，每天进行细胞计数，连续12 d，绘制细胞生长曲线，以单独培养骨髓间充质干细胞为对照组。
结果与结论：骨髓间充质干细胞成功种植到膀胱脱细胞基质上，倒置显微镜下可见骨髓间充质干细胞从膀胱脱细胞基质边缘爬出，膀胱脱细胞基质周围有大量长梭形骨髓间充质干细胞生长。接种5d内，两组细胞均呈现出平缓生长的状态，接种6-9 d，生长曲线逐渐变得陡峭，细胞呈倍数状态进行分裂生长，速度较快，接种10-12 d，再次趋于平缓状态。两组细胞生长曲线基本重合，可推断兔骨髓间充质干细胞与膀胱脱细胞基质生物相容性良好。 -
异种骨材料浸提液对骨髓间充质干细胞生物学特性的影响
背景：如何在去抗原等处理基础上保留异种骨材料的生物学性能及成骨诱导活性成为研究热点之一。目的：探讨异种骨材料浸提液对骨髓间充质干细胞增殖迁移及成骨分化能力的影响。
方法：SD 大鼠骨髓间充质干细胞分别用异种骨材料浸提液(实验组)和含体积分数为10%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养(对照组)。MTT法、Transwel 小室法、流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞增殖能力、迁移能力、细胞周期变化。取第3代SD大鼠骨髓间充质干细胞，实验组加入成骨诱导分化浸提液，对照组加入成骨诱导分化培养液，培养至第7，14天进行碱性磷酸酶染色，培养第21天进行茜素红染色，观察钙结节形成情况。
结果与结论：实验组培养1，3，5，7 d的细胞增殖活性与对照组比较差异无显著性意义(P >0.05)，两组细胞周期差异无显著性意义(P>0.05)。对照组迁移细胞数显著少于实验组(P<0.05)。培养第7，14天时实验组碱性磷酸酶水平均显著高于对照组(P<0.05)，成骨诱导第21天进行茜素红染色可见两组均有钙结节形成，实验组钙结节面积更大。结果表明异种骨材料无细胞毒性，具有良好的细胞相容性，可以对骨髓间充质干细胞增殖迁移及定向分化成骨细胞产生有利的促进作用。 -
肝细胞生长因子基因转染缺氧培养骨髓间充质干细胞凋亡相关蛋白的影响
背景：研究已证实肝细胞生长因子基因转染可提高骨髓间充质干细胞移植效果，但其具体机制尚未完全明确。目的：探讨肝细胞生长因子基因转染对缺氧、无血清培养骨髓间充质干细胞c-Met、Bax、Bcl-2、Caspase-3表达及细胞迁移的影响。
方法：①贴壁法体外分离、扩增培养骨髓间充质干细胞。用x-gal染色法检测含肝细胞生长因子基因的重组腺病毒对骨髓间充质干细胞的感染率。②在缺氧、无血清条件下培养0，3，6，9，12 h，采用RT-PCR及Western blot测定骨髓间充质干细胞Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。③骨髓间充质干细胞缺氧、无血清培养6 h，采用RT-PCR及Western blot测定HGF、c-Met、Bax、Bcl-2、Caspase-3的表达。④细胞迁移划痕法观察缺氧、无血清培养6h后肝细胞生长因子转染对骨髓间充质干细胞迁移的影响。
结果与结论：①重组腺病毒对骨髓间充质干细胞的转染率与病毒感染复数具有量效关系，病毒感染复数为150时细胞的感染率达96.4%。②随着缺氧时间的延长骨髓间充质干细胞Bax、Bcl-2表达逐渐升高(P <0.05)，缺氧6 h时Bax/Bcl-2比值、Caspase-3蛋白达到小(P<0.05)。③缺氧及无血清培养6 h后，与对照组及空载体组相比，Ad-HGF组HGF、c-Met、Bcl-2表达增高，而Bax、Caspase-3表达下降(P<0.05)，对照组与空载体组差异无显著性意义(P>0.05)。④Ad-HGF组骨髓间充质干细胞在缺氧培养6 h后，迁移率比对照组及空载体组高(P <0.05)。结果表明肝细胞生长因子基因转染上调缺氧、无血清培养骨髓间充质干细胞c-Met、Bcl-2表达，下调Bax、Caspase-3表达，增强骨髓间充质干细胞迁移能力。 -
芳香化酶和雌激素相关受体在人骨髓间充质干细胞中的表达
背景：骨髓间充质干细胞中可能存在芳香化酶和雌激素受体相互作用的雌激素信号途径，调控骨髓间充质干细胞生物活性。
目的：观察成人骨髓间充质干细胞成骨诱导分化过程中芳香化酶和雌激素相关受体的表达。
方法：将骨髓间充质干细胞分为单纯培养组和成骨诱导组，分别用低糖DMEM完全培养基和成骨诱导分化完全培养基培养，MTT检测细胞增殖能力，茜素红染色观察成骨矿化能力，qPCR和Western blot检测芳香化酶、雌激素受体α、雌激素受体β和雌激素受体相关受体αmRNA和蛋白表达，ELISA检测细胞上清液和裂解液中雌二醇水平。
结果与结论：培养72 h，成骨诱导组增殖能力强；培养21 d，成骨诱导组茜素红染色显示大量钙沉积；qPCR和Western blot结果显示成骨诱导组能促进芳香化酶和雌激素受体αmRNA和蛋白表达，抑制雌激素受体相关受体αmRNA和蛋白表达，成骨诱导组雌激素受体βmRNA和蛋白表达与单纯培养组无差异；ELISA结果显示成骨诱导组上清液中雌二醇水平高于裂解液及单纯培养组上清液中雌二醇水平。结果表明成人骨髓间充质干细胞及成骨诱导分化后能表达芳香化酶、雌激素受体α、雌激素受体β和雌激素受体相关受体α，亦能自身合成和分泌雌激素，由此产生的雌激素可能是通过相关受体对骨髓间充质干细胞成骨分化发挥作用。 -
骨髓间充质干细胞培养上清液治疗支气管哮喘及对肺部炎症的影响
背景：医学界普遍认为支气管哮喘是一种与Th2相关的免疫反应疾病，目前尚缺乏理想的治疗方法。骨髓间充质干细胞作为一种成体干细胞，不仅具有增殖和多向分化能力，还具有低免疫原性和免疫调节能力。
目的：探讨骨髓间充质干细胞培养上清液对支气管哮喘小鼠肺部炎症的影响。
方法：将20只实验小鼠随机分为对照组和实验组，每组10只，在第0天及第14天小鼠腹腔注射卵清蛋白溶液致敏，并在第24-26天雾化吸入卵清蛋白溶液激发。实验组从第24天开始，在每次激发前2 h，腹腔注射制备好的骨髓间充质干细胞培养上清液2 mL，对照组腹腔注射生理盐水。末次激发后麻醉致小鼠安乐死亡，采取血清、肺泡灌洗液及肺脏组织进行研究。
结果与结论：①对照组小鼠肺组织结构发生异常，黏膜下层和肌层内能够看见大量嗜酸性粒细胞及单核细胞浸润，经骨髓间充质干细胞培养液治疗后，实验组小鼠肺部炎症较轻。②实验组白细胞总数、嗜酸性粒细胞数、嗜酸性粒细胞百分比显著低于对照组(P <0.01)。③实验组肺泡灌洗液以及血清中白细胞介素17水平显著低于对照组(P <0.05)；肺泡灌洗液以及血清中白细胞介素4水平与对照组比较差异无显著性意义(P >0.05)。上述结果提示支气管哮喘小鼠腹腔注入骨髓间充质干细胞培养上清液能够减轻肺部炎性病理反应严重程度，降低肺泡灌洗液以及血清中相关的炎症指标水平。 -
间充质干细胞移植治疗脊髓损伤：系统评价及Meta分析
背景：近年来，已在动物模型上验证了干细胞移植治疗脊髓损伤的有效性，其中间充质干细胞治疗脊髓损伤的研究为广泛，目前也开展了一些临床研究，显示出良好的应用前景。
目的：系统评价间充质干细胞移植治疗人脊髓损伤的安全性和有效性。
方法：计算机检索PubMed、EMBASE、Cochrane Library、ISI Web of knowledge、中国生物医学文献数据库(CBM)、中文科技期刊全文数据库(VIP)、中国期刊全文数据库(CNKI)及万方数据库中间充质干细胞移植治疗人脊髓损伤的随机对照试验，检索时间均从建库至2015年7月。中文检索词为“脊髓损伤、截瘫、间充质干细胞、细胞移植、移植、骨髓移植、随机对照试验”；英文检索词为“spinal cord injury、paraplegia、cel transplantation、transplantation、mesenchymal stem cel、bone marrow transplantaion、stem cel、Randomized control ed trial”。
结果与结论：共计检索到260篇文献，其中6篇为随机对照试验，合计252例脊髓损伤患者。与对照组相比间充质干细胞移植能提高脊髓损伤患者的ASIA触觉评分、Frankel评分总体改善率、日常生活能力训练评分，差异有显著性意义(P<0.05)，也能提高患者的ASIA运动评分、减少膀胱残余尿量，但差异无显著性意义(P>0.05)。与对照组相比间充质干细胞移植有更高的低热反应，差异有显著性意义(P<0.05)，此外，进行蛛网膜下腔穿刺移植也可以引起双下肢麻木，但与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05)。以上结果说明间充质干细胞移植治疗脊髓损伤有一定疗效，未发生严重并发症，但是还需要高质量的随机对照研究来证实间充质干细胞的安全性及有效性。 -
脐带间充质干细胞促血管新生在治疗下肢缺血中的研究与应用
背景：干细胞在一定诱导条件下可分化成为血管性内皮细胞，促进缺血下肢血管新生和有效循环的建立，改善糖尿病远端缺血肢体供血。
目的：概述脐带间充质干细胞生物学特性、促血管新生的机制，探讨脐带间充质干细胞修复神经病变及慢性创面等基础研究和临床研究现状。
方法：检索2000至2015年PubMed 数据库、维普中文科技数据库及万方数据相关文献。英文检索词为“stem cel s transplantation，umbilical Cord Mesenchymal Stem Cel ，diabetic angiopathies”；中文检索词为“干细胞移植，脐带间充质干细胞，糖尿病血管病变”。
结果与结论：与目前外周血干细胞及骨髓间充质干细胞移植相比，脐带间充质干细胞来源更广泛，采集方便，扩增能力强，无免疫原性，不存在伦理学争议，成为促血管新生和基因治疗缺血性疾病的理想靶细胞和种子细胞。脐带间充质干细胞能够分化为血管内皮细胞和成纤维细胞参与创面愈合，也可促进神经营养因子表达，促进缺血组织神经再生，并通过旁分泌与自分泌细胞因子、抗炎及免疫调节等参与受损组织的组织修复，加快溃疡面愈合，对于改善糖尿病下肢缺血、修复糖尿病周围神经病变和促进慢性溃疡创面愈合等治疗中具有广阔的应用前景。与单纯的干细胞移植比较，脐带间充质干细胞联合细胞因子基因治疗可进一步提高干细胞存活率及促进血管新生。 -
滑膜间充质干细胞修复膝关节软骨损伤的应用与进展
背景：膝关节软骨损伤后很难愈合，是临床上亟需解决的重要课题。目的：总结滑膜间充质干细胞在膝关节软骨损伤治疗上的优越性。
方法：用英文主题词“Knee Joint, Cartilage, Synovial Membrane, Tissues, Injuries, Repair”在PubMed数据库中检索2005年8月至2015年8月文献总共625篇。采纳并分析滑膜间充质干细胞治疗膝关节软骨损伤文献48篇。排除其他非滑膜间充质干细胞及非膝关节软骨损伤治疗的相关文章，保留35篇文章进行综述。结果与结论：应用滑膜间充质干细胞治疗膝关节软骨损伤，能够获得更加理想的治疗效果，损伤组织本身固有的间充质干细胞是修复损伤组织的佳种子细胞。 -
滑膜间充质干细胞关节腔内注射治疗关节软骨损伤
背景：研究显示，在众多的种子细胞中滑膜间充质干细胞对关节软骨损伤再生修复具有许多独特的优势。目的：对滑膜间充质干细胞的研究进展及其关节腔内注射治疗关节软骨损伤的应用进行综述。
方法：第一作者通过计算机检索PubMed和CNKI数据库2004年1月至2014年12月的相关文献，检索关键词为“滑膜间充质干细胞、注射治疗、软骨修复；Synovial mesenchymal stem cel s；Intra-articular injection；Cartilage repair”，纳入57篇文献进行分析。
结果与结论：滑膜间充质干细胞分离培养方法简便，在软骨损伤修复方面具有很大的优势，通过将其注射于关节腔内治疗关节软骨损伤具有一定的可行性和安全性，作为一种潜在的治疗方式，有望给软骨损伤患者带来曙光，但仍然存在诸多问题，还需要进一步深入研究。 -
干细胞诱导心肌细胞增殖与运动促进心肌细胞再生的研究进展
背景：干细胞移植治疗心血管疾病表现出传统方法无可比拟的优越性，但干细胞向心肌细胞自发分化的效率非常低，而且影响干细胞分化的因素很多。
目的：阐明不同来源干细胞治疗心肌梗死的优缺点，探讨提高心肌细胞分化效率的方法，佳诱导分化条件及运动促进干细胞动员、诱导内源性心肌细胞再生的机制。
方法：由第一作者检索1985至2015年PubMed数据库和中国知网收录的与干细胞治疗心肌梗死、干细胞向心肌细胞分化运动影响干细胞增殖及心肌细胞再生的相关文献。英文检索词为“stem cel s，myocardial infarction，myocardial regeneration，cardiac cel ，exercise”，中文检索词为“干细胞，心肌梗死，心肌再生，心肌细胞，运动”，共纳入54篇文章进行综述。
结果与结论：为了提高心肌细胞分化率，近年来多种化学诱导剂和生物成分先后应用于干细胞向心肌细胞分化的研究，模拟心肌微环境和血管细胞生长因子的作用也是诱导心肌细胞分化的主要方法。通过有氧运动促进干细胞动员来诱导缺血心脏血管新生和上调各种血管生长因子表达，可促进心肌细胞增殖和修复。有关干细胞的获取、移植排斥反应、向心肌细胞定向分化的调控机制还需进行深入探讨。 -
氧化压力与干细胞移植
背景：干细胞来源广泛，具有自我分化和更新的潜能，且自体干细胞更能大程度避免移植后的免疫排斥反应，已成为组织器官移植有前途的替代方法之一，但是受移植部位氧化压力等恶劣环境影响，现今干细胞的移植效率还较为低下。
目的：综述氧化压力对干细胞本身及移植效率的影响和机制。
方法：由第一作者检索1990至2015年PubMed数据库收录的与干细胞移植有关的文献。英文检索词为“stem cel transplantation，stem cel ，oxidative stress，molecular mechanisms”。共纳入97篇文章进行综述。结果与结论：内源氧化压力对干细胞移植有直接且重要的影响，各类型干细胞抗氧化压力水平有差异，但高氧化水平能引起干细胞增殖停止、过早衰老、凋亡、癌变，也能引起肿瘤细胞的凋亡。干细胞可通过多条通路调节其内源性抗氧化水平，应用各种方法提高内源抗氧化压力水平可以提高干细胞的移植效率及预防氧化压力导致的干细胞癌变发生，使干细胞移植治疗能更广泛更安全的应用于临床。 -
血管内皮生长因子165转染可促进脂肪间充质干细胞增殖
背景：血管内皮生长因子是目前重要的促血管新生因子之一，在脂肪移植中可促进移植物的血运重建，提高成活率。
目的：探讨血管内皮生长因子165基因转染促进脂肪间充质干细胞增殖的作用。
方法：利用目的片段重组血管内皮生长因子165基因入腺病毒pAdEasy-1系统，包装病毒并测定滴度，同理包装空病毒。将包装成功的两种病毒液分别以100的佳感染复数转染入脂肪间充质干细胞内，以未转染细胞为空白组。采用RT-PCR和Western blot法检测各组转染细胞中血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白的表达，MTT法检测各组细胞的增殖情况。
结果与结论：实验组血管内皮生长因子165 mRNA和蛋白表达量高于对照组和空白组(P <0.05)；实验组转染脂肪间充质干细胞后分裂增殖程度显著增加，与对照组和空白组比较差异有显著性意义(P<0.05)，结果表明腺病毒介导的血管内皮生长因子165基因转染脂肪间充质干细胞后可以持续表达目的蛋白，同时也能促进脂肪间充质干细胞的显著增殖。 -
乙型肝炎病毒感染者脂肪间充质干细胞分离培养及生物学特性
背景：慢性乙型肝炎病毒感染影响骨髓间充质干细胞的生物学特性，而脂肪来源间充质干细胞因其取材安全、创伤小、易纯化、增殖快等优点而备受关注。
目的：建立乙型肝炎病毒感染者脂肪间充质干细胞的体外分离培养方法，观察其生物学特性。
方法：胶原酶消化结合贴壁培养法分离培养乙型肝炎肝硬化患者皮下脂肪组织间充质干细胞， MTT 法检测细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞表型，体外检测其诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞的能力。
结果与结论：①10例乙型肝炎病毒感染者脂肪间充质干细胞全部培养成功，脂肪间充质干细胞的原代培养时间为(8.3±1.2) d，生长曲线均呈“S”形，培养三四天进入对数生长期，第7天进入平台期。②第3代脂肪间充质干细胞高表达CD29，CD166，HLA-ABC和CD44，不表达或低表达CD34和HLA-DR。③脂肪间充质干细胞在成脂肪诱导培养基培养下分化为脂肪细胞，油红O染色阳性，在成骨诱导培养基培养下分化为成骨细胞，碱性磷酸酶染色阳性。以上结果显示胶原酶消化结合贴壁培养法可以高效分离乙型肝炎病毒感染者脂肪间充质干细胞，其增殖迅速，在短期内即可获得大量的细胞。 -
不同周期新辅助化疗后乳腺癌干细胞的分离培养和体外增殖特性
背景：接受不同周期新辅助化疗的乳腺癌组织中是否都存在乳腺癌化疗微球体以及其对乳腺癌干细胞分离培养的影响尚不清楚。
目的：探讨不同周期新辅助化疗后乳腺癌组织乳腺癌干细胞的体外增殖特性。
方法：从不同周期新辅助化疗后的乳腺癌组织中分离微球体，绘制细胞生长曲线，免疫细胞化学检测乳腺癌干细胞标记物ALDH1表达情况。
结果与结论：从新辅助化疗1个周期的标本中无法获得微球体，化疗2，3，4个周期的部分标本中可以培养出微球体。在培养的前3 d，化疗3个周期和化疗2个周期细胞数差异无显著性意义，但在3 d 之后，化疗3个周期的细胞增殖速度显著快于化疗2个周期，6 d 之后，化疗2个周期的细胞生长曲线呈现出平缓的状态，化疗3个周期则呈现出迅速上升的状态。化疗3个周期标本的乳腺癌干细胞微球体中ALDH1阳性细胞比例大于化疗2个周期。结果表明化疗2、3个周期的乳腺癌干细胞均具有一定的增殖和分化能力，从化疗后的乳腺癌组织中分离乳腺癌干细胞宜选取化疗3个周期及以上的标本。 -
非小细胞肺癌肿瘤组织干细胞标志物CD133的表达
背景：非小细胞肺癌肿瘤组织中干细胞标志物CD133表达会呈现出一定的变化，并与疾病的发生和发展存在一定的联系。
目的：探讨非小细胞肺癌肿瘤组织干细胞标志物CD133的表达情况，分析其与临床病理因素以及预后之间的关系。
方法：收集135例非小细胞肺癌组织标本和60例正常肺组织标本。采用免疫组织化学染色法检测两组标本CD133的表达，并分析非小细胞肺癌肿瘤组织中CD133蛋白的表达与临床病理因素之间的关系。
结果与结论：①非小细胞肺癌组CD133蛋白阳性表达率显著高于正常对照组(P<0.05)。②CD133蛋白阳性表达与非小细胞肺癌患者年龄、性别以及肿瘤大小、肿瘤位置、组织学类型无关(P>0.05)；随着非小细胞肺癌肿瘤组织分化越差，CD133蛋白阳性表达呈现出不断上升趋势(P<0.05)；CD133蛋白阳性表达率在不同临床分期以及淋巴结有无转移之间差异也有显著性意义(P<0.05)。③CD133以及TNM分期是非小细胞肺癌患者预后独立影响因素(P<0.05)，CD133蛋白表达阳性组中位生存时间显著短于阴性组(P<0.05)。以上结果表明CD133参与非小细胞肺癌的发生和发展以及浸润和转移，对疾病的进展以及预后判断有重要的临床意义。 -
干扰素抗MGMT阳性胶质瘤干细胞替莫唑胺的耐药机制
背景：临床对胶质瘤患者进行治疗的过程中容易出现耐药现象，研究发现，MGMT是胶质瘤表达的一种多药耐药基因。
目的：探讨干扰素增加替莫唑胺对MGMT阳性胶质瘤干细胞的增敏作用。
方法：采用“悬浮克隆球形成法”对胶质瘤细胞株U251、SKMG-4进行诱导，获得MGMT阳性的胶质瘤干细胞U251G、SKMG-4G。应用CCK-8法检测干扰素α/β联合替莫唑胺对MGMT阳性胶质瘤干细胞的杀伤效应；RT-PCR和Western blot检测预用干扰素α/β后MGMT阳性胶质瘤干细胞MGMT、NF-κB表达情况。结果与结论：经Western blot检测，胶质瘤干细胞U251G、SKMG-4G中MGMT蛋白呈阳性表达。采用预用干扰素α/β，然后添加替莫唑胺方式，提高了替莫唑胺的化疗敏感性，杀伤效应显著提高。使用干扰素α/β之后，SKMG-4G和U251G MGMT、NF-κB mRNA和蛋白表达均显著降低，联合替莫唑胺之后下降情况更明显。结果表明对于MGMT阳性胶质瘤干细胞，干扰素α/β可以显著增强替莫唑胺的杀伤效应，逆转替莫唑胺的耐药性。 -
帕金森病模型大鼠损毁侧纹状体内移植神经干细胞的增殖与分化
背景：近年来，细胞移植治疗在帕金森病患者中广为使用，且效果理想。
目的：探索帕金森病大鼠移植的神经干细胞的增殖及分化，为帕金森病治疗提供新的理论依据。
方法：采用胶原酶消化法体外分离培养大鼠中脑组织中的神经干细胞，诱导第3代神经干细胞。采用6-羟基多巴胺单侧法制作帕金森病大鼠模型，将造模成功大鼠分为模型组和神经干细胞组，各7只。模型组大鼠在损毁侧纹状体内注入4 mL生理盐水，神经干细胞组大鼠在损毁侧纹状体内注射5μL绿色荧光蛋白标记的神经干细胞(1×109 L-1)。
结果与结论：神经干细胞组大鼠移植神经干细胞后酪氨酸羟化酶阳性区域面积显著低于模型组，移植神经干细胞后7，14，28 d时Ptx3 mRNA的表达水平显著高于模型组，14，28 d SHH mRNA显著高于模型组，而Nurrl mRNA的表达水平与模型组接近。结果提示神经干细胞移植模型大鼠损毁侧纹状体内可分化为多巴胺能神经元，为治疗帕金森病带来突破性进展。 -
一定强度静磁场可促进许旺细胞快速分泌神经生长因子
背景：国内外对静磁场加载许旺细胞的研究较少，对其产生的生物学效应尚不清楚。目的：探索静磁场对许旺细胞分泌神经生长因子水平的影响。
方法：将传代良好的许旺细胞随机分为3组，分别为0.05 mT静磁场组、0.1 mT静磁场组、空白对照组。从接种第2天即开始静磁场加载，每天曝磁12 h，空白对照组不进行静磁场加载。加载6 d后利用RT-PCR技术检测许旺细胞中神经生长因子mRNA的表达，ELISA技术检测许旺细胞分泌神经生长因子水平。
结果与结论：静磁场组培养上清中神经生长因子mRNA的表达和分泌神经生长因子水平显著高于空白对照组(P<0.05)；0.1 mT静磁场组神经生长因子mRNA的表达和分泌神经生长因子水平虽高于0.05 mT静磁场组，但是差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明一定强度的静磁场可以促进许旺细胞快速分泌神经生长因子。 -
腺相关病毒介导β-神经生长因子基因转染内皮祖细胞
背景：基因疗法为许多难治性疾病的治疗带来了新思路，选择合适的细胞、基因及载体是基因治疗的关键。目的：利用重组腺相关病毒载体介导β-神经生长因子基因转染大鼠骨髓源内皮祖细胞，观察目的基因β-神经生长因子的表达情况及对内皮祖细胞增殖的影响。
方法：分离、培养、鉴定大鼠骨髓源内皮祖细胞，使用携带β-神经生长因子基因的重组腺相关病毒(rAAV-GFP-β-NGF)转染内皮祖细胞，根据绿色荧光蛋白荧光表达情况检测转染效率。利用 ELISA法在蛋白水平检测β-神经生长因子的表达情况，MTT法检测目的基因对内皮祖细胞增殖活性的影响。
结果与结论：成功从大鼠骨髓中分离培养出内皮祖细胞，经鉴定符合内皮祖细胞特征。β-神经生长因子基因成功转染内皮祖细胞，转染率为65.3%。基因转染组细胞培养上清中检测到β-神经生长因子蛋白的表达，且可持续10 d，空白组和空载病毒转染组未检测到β-神经生长因子的表达。重腺相关病毒转染后内皮祖细胞增殖活性增高，与空载病毒转染组和空白组相比差异有显著性意义(P<0.05)，空白组和空载病毒转染组之间增殖活性差异无显著性意义(P>0.05)。结果表明，经重组腺相关病毒介导可成功将β-神经生长因子基因转染入大鼠骨髓源内皮祖细胞，使其持续表达β-神经生长因子蛋白并促进内皮祖细胞增殖。 -
过表达吲哚-2，3双加氧酶慢病毒载体的构建
背景：器官移植后的免疫排斥反应或免疫抑制药物严重不良反应使患者得不到有效治疗、治疗效果不佳。基于此背景下，结合新免疫调节研究结果，试图寻找到一种有效的生物免疫抑制方法。
目的：构建过表达吲哚胺2，3-双加氧酶(indoleamine 2，3-dioxygenase，IDO)慢病毒载体。
方法：①将已构建成功的IDO基因插入慢病毒包装质粒GV308中，构建GV308-IDO重组慢病毒包装质粒。②用慢病毒包装辅助元件Psi、 cPPT、3FLAG、TetR、IRES、WRPE、TetIIP、Ubiquitin Promoter、SV40 origin及HIV的基本元件5’LTR 和3’LTR，共培养法转染80%融合的293T细胞。
结果与结论：Western blot检测经10 g/L 琼脂糖凝胶电泳可见在 Mr 48000处有一目的片段，该值与IDO蛋白大小一致。RT-PCR检测可见293T细胞中有IDO基因表达。说明IDO融合基因已经成功重组于慢病毒包装质粒内。
