中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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比较非血缘外周血干细胞移植与同胞相合外周血干细胞移植治疗高危急性白血病的疗效
背景:对于高危急性白血病的移植治疗供者的优先选择仍存在争议.目的:比较非血缘外周血干细胞移植与同胞相合外周血干细胞移植治疗高危急性白血病的疗效.方法:纳入2008年1月至2016年1月就诊的高危急性白血病患者65例,根据患者意愿并结合自身情况,其中30例患者选择非血缘外周血干细胞移植,35例选择同胞相合外周血干细胞移植,利用卡方检验、Kaplan-Meier生存分析法等比较分析2组患者的植入、造血重建、移植物抗宿主病、复发死亡和远期生存情况.结果与结论:①两组的植入率,粒系、血小板造血重建时间和急慢性移植物抗宿主病的总发生率及其发生类型差异均无显著性意义(P均>0.05);②非血缘外周血干细胞移植组的复发率、总死亡率和移植相关死亡率分别为10.0%、50.0%和40.0%,与同胞相合外周血干细胞移植组(20.0%、48.6%和25.7%)比较差异均无显著性意义(P均>0.05);③非血缘外周血干细胞移植组的预计2年累积无病生存率和总生存率分别为(49.4±9.2)%和(52.6±9.2)%,与同胞相合外周血干细胞移植组[(53.9±8.5)%和(53.9±8.5)%]比较差异均无显著性意义(P均>0.05);④结果表明,当缺乏同胞相合外周血干细胞移植供者时,非血缘外周血干细胞移植可作为有效替代.
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麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在颅骨缺损大鼠体内迁移的影响
背景:骨髓间充质干细胞是多向分化干细胞,在骨折愈合和中有着重要作用.如何促进其在体内迁移,进而促进骨缺损的修复,有着重要研究意义.目的:研究不同浓度麝香酮对外源性骨髓间充质干细胞在体内迁移的影响,探讨其促进骨折愈合的机制及其引经理论初探.方法:建立大鼠颅骨缺损的大鼠模型;贴壁筛选法提取干细胞,取第3代细胞,利用DAPI进行标记,然后尾静脉回植入颅骨缺损的大鼠体内.分别以0,42,84,168μL/kg麝香酮灌胃1次.结果与结论:与高剂量麝香酮组和空白组相比,低、中剂量麝香酮组骨缺损部分的骨髓间充质干细胞数量增加,干细胞因子和Fractalkine的表达水平明显增加.提示中低剂量麝香酮具有促进外源性干细胞在体内的迁移作用.
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自体骨髓间充质干细胞治疗乙型肝炎失代偿期患者:肝纤维化、肝功能、MELD评分及1年生存率分析
背景:骨髓间充质干细胞在特定环境下可分化成肝干细胞,参与肝功能的修复和重建.目的:分析自体骨髓间充质干细胞移植治疗失代偿期乙型肝炎的效果.方法:将84例乙型肝炎失代偿期患者随机分为2组,常规组(n=42)采用对症治疗,同时口服恩替卡韦、扶正化瘀胶囊;干细胞组(n=42)在常规组治疗的基础上,经肝左右动脉移植自体骨髓间充质干细胞1×106/kg.治疗前及治疗后12,24周,检测肝纤维化、肝功能及终末期肝病模型系统评分,统计患者1年生存率.结果与结论:①肝纤维化:两组治疗后的透明质酸、层粘连蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原蛋白水平均低于治疗前(P<0.05);干细胞组治疗后12,24周的上述指标均低于常规组(P<0.05);②肝功能:两组治疗后的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、总胆红素水平均低于治疗前(P<0.05),白蛋白、胆碱酯酶、凝血酶原活动度水平均高于治疗前(P<0.05);干细胞组治疗后12,24周的丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、总胆红素水平均低于常规组,胆碱酯酶水平高于常规组(P<0.05);③终末期肝病模型系统评分:两组治疗后的终末期肝病模型系统评分均低于治疗前(P<0.05),干细胞组治疗后24周的终末期肝病模型系统评分低于常规组(P<0.05);④1年生存率:干细胞组1年生存率高于常规组(50%,69%,P<0.05);⑤结果表明:采用自体骨髓间充质干细胞移植治疗失代偿期乙型肝炎,能够显著改善肝纤维化状态和肝功能,提高患者1年生存率.
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胎盘间充质干细胞修复受损子宫内膜
背景:胎盘间充质干细胞来源丰富,易于获取,可向成骨细胞、神经细胞及肝细胞等方向分化,临床应用不存在免疫排斥、不涉及伦理问题等优点,因此被认为是成体干细胞的理想来源.目的:观察同种异体胎盘间充质干细胞移植修复大鼠子宫内膜损伤的情况.方法:取雌性SD大鼠,通过热损伤法建立子宫内膜损伤模型,造模后第15天,将造模成功的40只大鼠随机分为4组,宫腔移植组于宫腔局部注射同种异体胎盘间充质干细胞悬液1 mL,宫腔对照组于宫腔注射等量的PBS,尾静脉移植组于尾静脉注射同种异体胎盘间充质干细胞悬液1 mL,尾静脉对照组于尾静脉注射等量PBS.于大鼠第3个动情期时将造模雌鼠与雄鼠合笼,观察阴栓,在观察到阴栓的当天处死造模大鼠,游离出子宫组织,进行子宫内腺体计数、免疫组织化学及Western blot检测.结果与结论:①腺体计数:宫腔移植组子宫内膜腺体数量多于其余3组(P<0.05),尾静脉移植组多于宫腔对照组、尾静脉对照组(P<0.05);②子宫内膜整合素αVβ3表达:免疫组织化学及Western blot检测均显示宫腔移植组整合素αVβ3强于其余3组(P<0.05),尾静脉移植组多于宫腔对照组、尾静脉对照组(P<0.05);③结果表明:胎盘间充质干细胞移植可不同程度地修复大鼠子宫内膜损伤组织,增加子宫内膜腺体计数,改善子宫内膜容受性.
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脐带间充质干细胞移植治疗慢性肝衰竭
背景:脐带间充质干细胞来源丰富,取材方便,增殖能力强,可以分化为肝细胞,为肝衰竭治疗开辟了新途径.目的:观察脐带间充质干细胞移植治疗慢性肝衰竭的安全性和疗效.方法:慢性肝衰竭患者50例,按平行对照分组方式分为2组:干细胞组25例,在内科综合治疗的基础上给予脐带间充质干细胞移植,经前臂静脉途径输注脐带间充质干细胞(1.4-2.3)×106/kg,总体积100 mL,对照组25例,给予单纯内科综合治疗,输注等体积的生理盐水,每半个月1次,共输注3次.于治疗前、治疗后2,4,12,24周观察患者的肝功能、凝血酶原活动度、MELD评分、临床症状、生存情况及不良反应.结果与结论:①干细胞组白蛋白、凝血酶原活动度在治疗后12,24周较对照组明显升高,差异有显著性意义(P<0.05);MELD评分在治疗后4,12,24周较对照组明显降低,差异有显著性意义(P<0.05);②两组丙氨酸转氨酶、总胆红素比较差异无显著性意义(P>0.05);③治疗4周后,干细胞组临床症状明显改善,与对照组比较差异有显著性意义(P<0.05);④随访24周,干细胞组生存率高于对照组,差异有显著性意义(P<0.05);⑤未出现与干细胞治疗相关的不良反应,无肝癌发生;⑥结果表明,脐带间充质干细胞移植治疗慢性肝衰竭患者安全有效,可明显提高患者生存率.
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来源于肝纤维化环境内皮祖细胞移植治疗肝纤维化模型大鼠的逆转作用
背景:理论上,从肝纤维化大鼠骨髓中提取经过体内病理环境"筛选"作用后的内皮祖细胞,应更能适应肝纤维化微环境,移植入纤维化肝脏后应更倾向于分化为成熟内皮细胞,参与肝内血管重建.目的:探讨来源于大鼠肝纤维化体内环境的骨髓源性内皮祖细胞移植对大鼠肝纤维化的治疗作用.方法:将28只Wistar大鼠随机分为3组:正常组(n=8)皮下注射橄榄油,2次/周;模型组(n=10)皮下注射四氯化碳3 mL/kg,2次/周,首剂加倍,分别于第2,3,5周末尾静脉输注生理盐水;实验组(n=10)皮下注射四氯化碳3 mL/kg,2次/周,首剂加倍,分别于第2,3,5周末尾静脉输注肝纤维化大鼠骨髓源性内皮祖细胞悬液.注射6周末,进行肝功能、凝血功能、肝组织相关蛋白及肝组织病理检查.结果与结论:①肝组织病理:模型组肝组织呈广泛而严重的肝细胞脂肪变性和坏死,门静脉和中央静脉周围炎症细胞浸润,汇管区扩大及大量纤维组织增生;与模型组相比,实验组肝细胞变性坏死、炎症细胞浸润及纤维组织增生等均有所减轻;②肝组织相关蛋白:与正常组相比,模型组透明质酸、层粘连蛋白和Ⅲ型前胶原、血管内皮生长因子、表皮生长因子水平升高(P<0.05);与模型组相比,实验组透明质酸、层粘连蛋白和Ⅲ型前胶原水平明显下降(P<0.05),血管内皮生长因子、表皮生长因子水平升高(P<0.05);③肝功能、凝血功能:与正常组相比,模型组肝功能、凝血功能严重受损(P<0.05);与模型组相比,实验组肝功能明显改善(P<0.05);④结果表明:来源于肝纤维化体内环境的骨髓源性内皮祖细胞移植能有效治疗大鼠肝纤维化,其作用机制可能是通过促进肝脏血管新生来实现的.
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骨髓间充质干细胞复合Bio-oss修复兔颅骨缺损的组织学变化
背景:目前有一些关于骨髓间充质干细胞复合异体骨、人工合成骨替代材料促进骨缺损修复的研究,但尚未见骨髓间充质干细胞复合Bio-oss用于兔颅骨缺损修复的报道.目的:观察骨髓间充质干细胞复合Bio-oss修复兔颅骨缺损的效果.方法:分离培养雄性兔骨髓间充质干细胞,将其作为种子细胞,在雌兔颅骨采用外直径6 mm的环形骨钻制造全层骨缺损3个.将96只雌性兔随机等分为4组,复合物组植入Bio-oss复合骨髓间充质干细胞,Bio-oss组单纯植入Bio-oss,骨髓间充质干细胞组单纯植入骨髓间充质干细胞,空白组不进行植入修复.每个组表面均覆盖引导组织再生膜.结果与结论:复合物组成骨效果比其他3组更佳,Bio-oss组成骨效果比骨髓间充质干细胞组和空白组更好,骨髓间充质干细胞组与空白组成骨效果接近.说明以骨髓间充质干细胞作为种子细胞,Bio-oss作为支架材料复合植入兔颅骨缺损区有明显的促进成骨作用,为临床治疗骨缺损提供新思路.
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PDX-1基因转染人脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞分化及移植治疗1型糖尿病
背景:近年研究发现脂肪间充质干细胞不仅具有多向分化潜能,在血糖平衡及激素产生方面也具有重要作用.目的:观察PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞向胰岛样细胞的分化能力及移植后对糖尿病大鼠的治疗效果.方法:采用腺病毒转染方法将PDX-1基因转入人脂肪间充质干细胞,双硫腙染色鉴定细胞分化情况,ELISA法检测细胞胰岛素分泌水平.从20只雄性SD大鼠中随机取4只作为对照组,注射生理盐水,其余16只按65 mg/kg的剂量注射链脲霉素建立糖尿病模型,再随机等分为移植组和糖尿病组,移植组大鼠尾静脉注射PDX-1基因转染脂肪间充质干细胞.结果与结论:①转染后15 d,转染组胰岛素阳性细胞数量、胰岛素分泌量均高于未转染组(P<0.05);②移植组大鼠空腹血糖水平显著下降(P<0.05),体质量明显增加(P<0.05),而糖尿病大鼠空腹血糖维持在较高水平,且体质量显著下降;③结果提示,导入PDX-1基因对人脂肪间充质干细胞分化为胰岛样细胞具有促进作用,PDX-1转染脂肪间充质干细胞移植能有效治疗大鼠糖尿病,但具体机制尚待进一步研究.
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人骨骼肌来源不同表面标志物间充质干细胞特定亚群的多向分化潜能
背景:骼肌来源的间充质干细胞,在骨形态发生蛋白4等因子的调节下具有多向分化潜能,但具体细胞亚群的分化情况尚不十分明确.目的:观察人骨骼肌来源的不同表面标志物的间充质干细胞特定亚群的多向分化潜能.方法:应用流式细胞分选技术,分选出具有不同细胞表面标志物的人骨骼肌干细胞亚群,根据CD56及CD34/CD144的表达差异,将细胞分成CD56+,CD56+CD34+CD144+,CD34+CD144+及未分选组共4组,对比不同细胞亚群组在骨形态发生蛋白4成骨诱导或骨形态发生蛋白4+转化生长因子β3成软骨诱导后的差异.通过碱性磷酸酶染色后碱性磷酸酶阳性细胞的百分比评估细胞骨代谢情况.将各亚群细胞进行3D培养和细胞因子处理后,通过硝酸银染色评估其成骨分化程度,通过阿尔新蓝染色评价成软骨分化程度.结果与结论:①细胞骨代谢:经骨形态发生蛋白4处理后,4组细胞的碱性磷酸酶阳性细胞的百分比差异无显著性意义(P>0.05);②细胞分化:不同表面标记物的4组细胞成骨及成软骨分化有明显差异,在相同成骨培养条件下,CD56+组成骨能力强;相同成软骨培养条件下,CD56+,CD56+CD34+CD144+组呈阿尔新蓝染色阳性,CD56+CD34+CD144+组的染色更深且区域更大;③结果证实,成骨与成软骨潜能与不同的人骨骼肌间充质干细胞类型有关.人骨骼肌来源的间充质干细胞CD56+亚群和成骨潜能有密切关系.同时CD56+CD34+CD144+亚群分化能力更强,具有更强的成软骨潜能.
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饲养层条件下昆明小鼠胰岛来源胰腺干细胞的建系及鉴定
背景:到目前为止关于胰腺干细胞能建株甚至建系的报道极少,而且建系率较低,纯化出胰腺干细胞仍有一定的困难.目的:探索一套更合理、更有效的胰腺干细胞在体外分离及连续传代的技术和方法,使其有望能建立成细胞株甚至细胞系,为后续胰腺干细胞治疗糖尿病的相关研究奠定基础.方法:实验首先通过Percol不连续密度梯度离心的方法,使小鼠胰腺的内、外分泌部的细胞分布在不同的密度界面,然后获得来源于胰腺内分泌部即胰岛的干细胞,使用经丝裂霉素C作用的小鼠胚胎成纤维细胞作为饲养层,在饲养层条件下对来源于胰岛的胰腺干细胞进行连续传代,使其连续传至第30代,并通过生长特性检测、形态学观察、相关分子标志物鉴定以及分化特性鉴定等一系列的检测完善对该胰岛来源的胰腺干细胞株检测和鉴定.结果与结论:在连续传代过程中胰腺干细胞均体现了活跃的分裂增殖能力,并保持典型的干细胞形态学特征、表达胰腺干细胞分子标志物Nestin,经诱导分化后表达胰岛素基因,体现出了分化潜能.结果说明,实验饲养层条件下成功建立并鉴定了昆明小鼠胰岛来源的胰腺干细胞株.
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持续加力和间歇加力对骨髓基质干细胞增殖和分化的影响
背景:临床运用牵张成骨技术时常用的加力方式有2种:持续加力和间歇加力.但是,哪种方式更有利于新骨形成尚有争议.目的:观察持续加力和间歇加力对骨髓基质干细胞分化及增殖能力的影响.方法:密度梯度离心法分离培养兔骨髓基质干细胞,传至3代接种至6孔细胞培养板进行力学实验.空白组不作离心处理,静态培养;持续加力组每天加载离心4 h(1100 r/min,相对离心力20×g);间歇加力组每次加载离心力24 min(1100 r/min,相对离心力100×g),每天4 h内2次,2 h加力1次.力学刺激3 d停止培养,检测细胞增殖活性、碱性磷酸酶活性、骨钙素水平.结果与结论:①与空白组比较,机械离心力能促进骨髓基质干细胞成骨分化和增殖,增强碱性磷酸酶活性(P<0.05);②持续加力较间歇加力对骨髓基质干细胞分化增殖及碱性磷酸酶活性影响更显著(P<0.05).
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锌转运蛋白1 siRNA转染骨髓间充质干细胞对肿瘤坏死因子α信号成脂通路的影响
背景:课题组前期研究已经证实乙醇能促进骨髓间充质干细胞成脂分化,上调肿瘤坏死因子α成脂通路蛋白PPARγ,aP2的表达.锌转运蛋白1(Zrt/Irt-like Protein 1,ZIP1)作为ZIP蛋白家族的成员与骨代谢和成骨分化有密切的关系.目的:观察ZIP1 siRNA转染的骨髓间充质干细胞对肿瘤坏死因子α信号成脂通路的影响.方法:分离培养兔骨髓间充质干细胞,使用0.03,0.09,0.15,0.21 mol/L乙醇进行培养,再使用ZIP1 siRNA转染骨髓间充质干细胞,同时对兔骨髓间充质干细胞进行ZIP1转染培养.结果与结论:①aP2,PPARγ蛋白的表达:不同浓度乙醇培养aP2,PPARγ蛋白表达均较明显升高(P<0.05);除0.03 mol/L乙醇组之外,其他浓度乙醇组三酰甘油水平明显升高(P<0.05);沉默ZIP1基因转染乙醇培养的骨髓间充质干细胞后,各乙醇浓度组aP2,PPARγ蛋白的表达量及三酰甘油水平均明显升高(P<0.05),而骨髓间充质干细胞经ZIP1表达载体转染后,aP2,PPARγ蛋白表达明显降低(P<0.05);②结果表明:沉默ZIP1表达能激活骨髓间充质干细胞的肿瘤坏死因子α信号成脂通路的表达,从而发挥促进细胞的成脂分化能力.
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骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞相关基因表达与形态结构发生的关联
背景:前期已完成体外定向诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞的实验.目的:观察骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞过程中,细胞形态变化、结构发生规律与GATA-4、Nkx-2.5和a-MHC表达的关联性.方法:采用心肌组织裂解液诱导SD乳鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞,以免疫组织化学染色检测心肌肌钙蛋白T和间隙连接蛋白43表达情况,鉴定心肌细胞;在定向诱导分化过程中,RT-PCR检测GATA-4、Nkx2.5与α-MHC的表达情况.结果与结论:①细胞形态:在定向诱导过程中,细胞形态由长梭形经历短杆状、形成短小突起、网状结构、呈竹节状及肌管样结构;②心肌细胞鉴定:竹节样结构开始出现心肌肌钙蛋白T和间隙连接蛋白43阳性细胞,肌管样结构心肌肌钙蛋白T和间隙连接蛋白43阳性细胞增多;③RT-PCR检测:在定向分化过程中,细胞GATA-4、Nkx2.5与α-MHC基因表达持续增加;细胞交错连接成网状时,GATA-4表达明显增加,之后持续高表达;相邻细胞融合形成肌管样结构时,α-MHC表达达到峰值;Nkx2.5表达随诱导时间的延长逐渐增加;④结果表明:骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞过程中,心肌细胞特异基因的表达与心肌样细胞的形态特征、特殊结构发生密切相关,具有典型的时序性和空间性.
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感觉神经递质降钙素基因相关肽对去势大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨能力的影响
背景:研究发现降钙素基因相关肽能够增强成骨细胞的生物学活性,实验拟进一步检测降钙素基因相关肽对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.目的:探讨外源性降钙素基因相关肽对去势大鼠骨髓间充质干细胞增殖、成骨能力的影响.方法:切除雌性SD大鼠双侧卵巢建立骨质疏松模型,并通过micro-CT验证.从假手术和去势大鼠股骨中提取骨髓间充质干细胞,培养液中添加不同浓度降钙素基因相关肽,MTT法检测细胞增殖能力.对骨髓间充质干细胞进行成骨诱导,在诱导液中添加不同浓度降钙素基因相关肽,成骨诱导7 d,采用Real time RT-PCR和Western blot检测成骨特异性蛋白Runx2,Osterix的表达,成骨诱导21 d进行茜素红染色.结果与结论:①切除雌性大鼠双侧卵巢可成功建立骨质疏松模型;②不同浓度的降钙素基因相关肽可增强去势大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及成骨分化能力,且具有剂量依赖性;③结果表明,降钙素基因相关肽对去势大鼠骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化能力有直接促进作用,从而有利于骨形成.
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补骨脂素逆转谷胱甘肽-S-转移酶π介导的乳腺癌干细胞耐药性
背景:乳腺癌干细胞不仅导致乳腺癌的发生,还可能导致乳腺癌的转移及复发.干细胞与细胞耐药性的关系也受到人们越来越多的重视,把治疗的重点放到对干细胞的治疗上,可能会起到意想不到的结果.目的:探索补骨脂素对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞中谷胱甘肽-S-转移酶π的逆转作用及机制.方法:①无血清培养基悬浮培养富集乳腺癌MCF-7/ADR干细胞群;②以RT-PCR和Western Blot检测0,4,8,12,16 mg/L补骨脂素对MCF-7/ADR干细胞中谷胱甘肽-S-转移酶π基因及蛋白表达水平的影响;③Western Blot技术检测0,8 mg/L补骨脂素处理前后核内核因子κB的活化状态;④RT-PCR技术检测18μmol/L SN50及8 mg/L补骨脂素对谷胱甘肽-S-转移酶π的表达水平;⑤CCK-8实验检测阿霉素对细胞增殖的影响.结果与结论:补骨脂素能显著降低MCF-7/ADR细胞中谷胱甘肽-S-转移酶π基因及蛋白表达水平,且补骨脂素能明显抑制核因子κB的活化.提示补骨脂素通过减少谷胱甘肽-S-转移酶π表达水平进而逆转人乳腺癌MCF-7/ADR干细胞多药耐药,其机制可能是通过抑制核因子κB信号通路来实现.
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重组腺病毒载体介导人乳铁蛋白对宫颈癌干样细胞增殖与凋亡的影响
背景:基因工程在人类治疗恶性肿瘤的过程中起着重要作用,腺病毒是常用的基因工程载体,近年来发现乳铁蛋白在多种肿瘤的发生、发展及转移中有着重要作用,但目前对于乳铁蛋白通过腺病毒载体导入人体内的表达情况的研究报道目前还比较少.目的:观察重组腺病毒载体介导的人乳铁蛋白对宫颈癌干样细胞的增殖及凋亡的影响.方法:通过体外培养小鼠宫颈癌原代细胞,采用SP法分选出宫颈癌干样细胞,将构建好的载有乳铁蛋白的重组腺病毒载体人乳铁蛋白转染于宫颈癌干样细胞,分组为空白对照组、空病毒组和重组腺病毒人乳铁蛋白组.而在人乳铁蛋白感染宫颈癌干样细胞后,通过MTT法检测人乳铁蛋白感染后宫颈癌干样细胞的增殖情况,划痕实验检测宫颈癌干样细胞的迁移,通过Western blot法检测乳铁蛋白在宫颈癌干样细胞内的表达,采用Annexin V-FITC/PI法测定宫颈癌干样细胞的凋亡情况.结果与结论:与其他2组相比,重组腺病毒人乳铁蛋白组宫颈癌干样细胞增殖数量及划痕处细胞的数目减少,凋亡细胞增加(P<0.05或P<0.01).结果证实,载有乳铁蛋白的重组腺病毒载体人乳铁蛋白用于感染体外培养的宫颈癌干样细胞后,能稳定在宫颈癌干样细胞内表达,且能明显抑制宫颈癌干样细胞增殖,减少细胞迁移,并促进细胞凋亡.
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维生素C促进高糖环境下人脂肪干细胞的增殖及相关机制
背景:研究证实,维生素C除了具有抗氧化作用外,还具有促进细胞增殖的重要作用,但至今为止,有关维生素C对高糖环境下人脂肪干细胞的增殖作用及相关分子机制尚不明确.目的:研究维生素C促进高糖环境下人脂肪干细胞增殖的作用及相关分子机制.方法:取高塘环境中培养的第3代人脂肪干细胞,分别以0,100,150,200,250,300μmol/L维生素C处理,以低糖环境中培养的细胞为对照,MTT法筛选佳维生素C干预浓度及处理时间,进行Western Blot检测.EdU检测:将高糖环境中培养的人脂肪干细胞分4组培养,空白对照组不进行任何干预,维生素C组加入佳浓度维生素C,LY294002组加入PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002与佳浓度维生素C,U0126组加入ERK/MAPK信号通路抑制剂U0126与佳浓度维生素C,以低糖环境中培养的细胞为对照,干预48 h后,检测EdU标记阳性细胞数.结果与结论:①CCK-8法检测:200μmol/L维生素C促进高糖环境下人脂肪干细胞的增殖作用强,所以此为佳干预浓度,佳处理时间为48 h;②Western Blot检测:对照组、0μmol/L维生素C处理组、200μmol/L维生素C处理组p-AKT蛋白表达无差异,200μmol/L维生素C处理组p-ERK蛋白表达高于0μmol/L维生素C处理组(P<0.01);③EdU检测:维生素C组、LY294002组、对照组EdU标记阳性细胞数高于空白对照组(P<0.01),维生素C组EdU标记阳性细胞数高于U0126组(P<0.01);④结果表明:维生素C通过ERK/MAPK信号通路促进高糖环境下人脂肪干细胞的增殖.
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培养体系对维持人脐带间充质干细胞特性及其体外扩增效率的影响
背景:前期数据显示,应用人血小板裂解液培养体系对人脐带间充质干细胞进行体外培养时,较无血清培养体系能更好地维持干细胞特性,而无血清培养体系相较于人血小板裂解液培养体系能一定程度上提高间充质干细胞的体外增殖能力.目的:筛选能大限度维持人脐带间充质干细胞特性及扩增效率高的培养体系.方法:将6份人脐带标本分别接种于6种培养体系中,进行脐带间充质干细胞原代培养,6种培养体系分别为MesenCult无血清完全培养基中添加2%人血小板裂解液(A组)、StemPro无血清完全培养基中添加2%人血小板裂解液(B组)、MesenCult无血清完全培养基(C组)、StemPro无血清完全培养基(D组)、低糖DMEM中添加体积分数10%胎牛血清(E组)、低糖DMEM中添加10%人血小板裂解液(F组),14 d后进行消化传代培养,比较各培养体系对人脐带间充质干细胞形态、表面标记物、分化及增殖能力的影响.结果与结论:①D组第3代细胞细长,大小不均;E、F组第3代细胞扁平,其余组第3代细胞为长梭形且大小较均一.A、B组第5代细胞形态及大小较第3代时无明显变化,C组第5代细胞趋于扁平且大小不均一,D组第5代细胞形态较第3代时细长,E组第5代细胞形态较第3代时扁平,F组第5代细胞形态较第3代时无明显变化;②各组细胞表面标志物检测结果无明显区别;③A、B组成脂、成骨诱导率较高,E、F组次之,C、D组低;④A组各代次细胞扩增数量显著高于C组,B组各代次细胞扩增数量显著高于D组,E、F组扩增数量显著低于培养组A、B组;⑤结果表明,无血清和人血小板裂解液相结合的培养基能较好地维持间充质干细胞的特性及扩增效率.
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不同代次人脐带间充质干细胞的生物学特性及分化
背景:人脐带间充质干细胞作为组织工程及再生医学领域的新兴种子细胞,其应用价值有赖于能否在长期体外传代扩增后仍保持稳定生物学特性和多向分化能力,需要进一步的实验研究.目的:研究不同培养代次人脐带间充质干细胞重要生物学属性的差异.方法:采用组织块法分离培养人脐带间充质干细胞,分别采用细胞计数法与MTT法检测第3-6代细胞增殖活性;流式细胞仪检测第1-9代细胞表面标志物;细胞染色法分析第3-6代细胞核型.取第3代人脐带间充质干细胞,检测其分化为神经细胞、成骨细胞及肝样细胞的能力.结果与结论:①细胞计数法与MTT方法检测结果一致,第3-6代脐带间充质干细胞的增殖曲线均呈"S"型,在一二天时处于缓慢增长期,2-4 d时处于对数增长期,四五天时处于平台期,五六天时处于衰退期;②第1-9代脐带间充质干细胞表面高表达CD90、CD44、CD73,不或低表达CD11b、CD18、CD34、CD43及HLA-DR;③第3-6代脐带间充质干细胞核型均为正常人体核型;④脐带间充质干细胞可分化为神经细胞、成骨细胞及肝样细胞;⑤结果表明,人脐带间充质干细胞具有高度增殖活性和多向分化特性.
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肺癌组织中干细胞转录因子Sox2和Oct4表达与微血管密度的相关性
背景:研究已证实干细胞转录因子Sox2和Oct4的高表达与肺癌的发生密切相关.目的:探讨肺癌组织中Sox2和Oct4表达与肿瘤微血管生成、临床病理指标的相关性.方法:应用免疫组织化学染色法检测60例肺癌组织和60例正常组织中Sox2和Oct4的表达,以及CD34标记的微血管密度.分析Sox2,Oct4的表达和微血管密度值与临床病理参数关系.结果与结论:①Sox2和Oct4在肺癌组织中阳性表达率为46.67%(28/60)、71.67%(43/60),而在正常肺组织中表达均为阴性,差异有显著性意义(P<0.001);②肺癌组织中微血管密度值为16.22±2.18,明显高于正常组织4.36±2.07,差异有显著性意义(P<0.001);③Sox2、Oct4和微血管密度均与肿瘤TNM分期、分化程度、脉管浸润、淋巴结转移及肝转移相关(P均<0.05),而与年龄、性别无关(P均>0.05);④肺癌组织Sox2和Oct4阳性表达组微血管密度值显著高于阴性组(P<0.001);⑤Spearmen相关分析显示:肺癌组织中Sox2与Oct4无明显相关性(r=2.752,P>0.05);⑥结果表明,Sox2和Oct4表达上调可作为肺癌发生的早期预警事件,并与微血管密度呈正相关,二者可能共同参与了肿瘤微血管的生成、浸润及血行转移.
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外周血CD34+细胞自体移植促进老年动脉粥样性缺血肢体的血管新生:前瞻性、单中心、开放性、随机对照临床试验方案
背景:老年动脉硬化闭塞症的主要临床表现为下肢缺血,目前治疗较为困难.自体干细胞移植可将干细胞移植到缺血的肢体肌肉中,使其分化形成新生毛细血管,改善和恢复下肢血流,达到治疗下肢缺血的目的.目前已有研究证实,内皮祖细胞标记物CD34+细胞移植可促进动物的缺血肢体的血管新生.目的:试验假设采用老年动脉粥样性缺血患者外周血的CD34+细胞自体移植,可有效促进血管新生.方法:研究为前瞻性、单中心、开放性、随机对照临床试验,在中国山东省,青岛大学附属医院完成.纳入老年动脉粥样性下肢缺血患者20例,随机分为2组,细胞移植组10例采用促血管生长因子-血管内皮生长因子165基因转染并纯化老年下肢动脉粥样硬化性缺血患者外周血的CD34+细胞,自体移植至缺血侧肢体肌肉组织;对照组10例于缺血肌肉组织内注射生理盐水,随访6个月.试验的主要观察指标为两组移植前和移植后6个月踝肱指数的变化以评估下肢缺血情况.试验的次要观察指标为移植前和移植后6个月下肢肌肉组织微血管数量变化,CT血管成像显示的新生血管形态;移植后6个月患者血管内皮生长因子免疫阳性细胞数及不良反应发生率.试验在北美临床试验注册中心注册(NCT03098771).试验经中国山东省青岛大学附属医院伦理委员会批准.研究符合世界医学会制定的《赫尔辛基宣言》的要求.参与者本人对治疗方案和过程均知情同意,并签署知情同意书.讨论:试验拟2018年1月开始,2019年12月完成,希望证实血管内皮生长因子165基因转染修饰的CD34+细胞移植治疗老年动脉粥样性缺血肢体的确切疗效,研究结果有助于开拓下肢缺血性疾病治疗的新模式.
