中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染的分层治疗
背景:巨细胞病毒感染是异基因造血干细胞移植后常见的病毒感染,是影响移植相关死亡率的重要因素.目的:探讨异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染临床分层治疗方法的疗效.方法:选取60例行异基因造血干细胞移植的患者,依据HLA配型及移植后移植物抗宿主病的发生情况分为低危组18例,中危组30例,高危组12例.应用荧光定量聚合酶链反应监测外周血CMV-DNA数值,结合临床表现及相关试验室检查综合分析,各组于不同时机启动抗病毒治疗.结果与结论:①巨细胞病毒感染发生率为63.3％(38/60),发生中位时间为移植后41(14-109)d,经上述分层治疗,巨细胞病毒感染总体转阴率为89.5％(34/38),巨细胞病毒病发生率为2.6％(1/38),巨细胞病毒感染相关死亡率为10.5％(4/38);②单因素分析显示,HLA不全相合或移植物抗宿主病的发生可能增加了巨细胞病毒感染的风险;③对于异基因造血干细胞移植后巨细胞病毒感染患者,按照HLA配型及移植物抗宿主病的发生情况进行危险度分层,并制定干预治疗体系,减少了抗病毒药物应用及药物相关不良反应,且未增加巨细胞病毒病发生率及巨细胞病毒感染相关死亡率.
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骨髓间充质干细胞移植联合川芎嗪膝关节腔注射治疗兔膝关节骨关节炎
背景:单纯应用骨髓间充质干细胞或单纯应用川芎嗪治疗骨关节炎疗效有限.骨髓间充质干细胞移植复合川芎嗪是否能起到更好的效果未见报道.目的:了解川芎嗪对骨髓间充质干细胞成软骨分化及软骨再生的作用.方法:分离出新西兰白兔(1周龄,广西医科大学动物实验中心提供)骨髓间充质干细胞,培养传至第3代.将健康新西兰大白兔(五六个月龄,广西医科大学动物实验中心提供)40只随机分成4组进行实验:除空白对照组外,其余3组应用伸直位石膏固定法建立兔膝关节骨关节炎模型,所有建模部位均为右侧后肢.造模成功后第2天,空白对照组兔膝关节腔注射生理盐水0.3mL,每周1次,共4次;单纯川芎嗪组兔膝关节腔注射川芎嗪0.3 mL,每周1次,共4次;单纯干细胞移植组兔膝关节腔内一次性注射骨髓间充质干细胞0.3 mL(细胞浓度为3×108 L-1),同时膝关节腔内注射生理盐水0.3 mL,每周1次;干细胞移植联合川芎嗪组兔膝关节腔内一次性注射骨髓间充质干细胞0.3 mL(细胞浓度为3×108 L-1),同时膝关节腔内注射川芎嗪0.3 mL,每周1次,共4次;干预后第6,12周采集各组兔膝关节液.结果与结论:①空白对照组膝关节软骨无明显磨损,周围滑膜无明显增生及炎性改变;单纯川芎嗪组膝关节磨损较为严重,软骨破坏达到3级,但并未暴露软骨下骨,周围滑膜增生明显;单纯干细胞移植组、干细胞移植联合川芎嗪组膝关节轻度磨损,1级或2级,周围滑膜增生及炎性改变不明显,两组在大体观下无法辨别磨损严重程度的差异;②单纯川芎嗪组、干细胞移植联合川芎嗪组兔关节液中白细胞介素1β及白细胞介素6水平明显低于单纯干细胞移植组(P＜0.05).在第6周时,也就是兔膝关节骨关节炎初期,软骨破坏不明显的时候,单纯川芎嗪组兔膝关节液炎症因子水平低;在第12周时,干细胞移植联合川芎嗪组兔关节液炎症因子水平低;③结果表明,川芎嗪对骨髓间充质干细胞成软骨分化及软骨再生的促进作用不明显,但是川芎嗪能明显降低膝关节骨关节炎的炎症水平,可以用来缓解膝关节骨关节炎患者的临床症状.
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脂联素基因修饰脂肪干细胞移植治疗大鼠肾病综合征
背景:脂联素基因表达在肾病综合征的发病过程中有着重要的作用,移植脂肪干细胞可以对肾病综合征大鼠起到一定的治疗效果.目的:探讨脂联素基因转染脂肪干细胞移植对肾病综合征大鼠肾功能及凝血功能的改善作用.方法:①在体外复苏培养脂肪干细胞并制备其细胞悬液,采用CM-Dil进行标记,取第3代脂肪干细胞进行脂联素基因电转染,Westem blot检测转染第3天和第28天细胞中脂联素蛋白的相对表达水平;②从80只SD大鼠(北京维通利华动物实验技术有限公司提供)中随机取20只不予任何处理作为正常对照组,其余60只SD大鼠静脉内注射阿霉素建立肾病综合征大鼠模型,随机分为3组:模型组、脂肪干细胞组以及脂联素修饰脂肪干细胞组,正常对照组和模型组大鼠经尾静脉注射20 μL PBS,脂肪干细胞组、脂联素修饰脂肪干细胞组大鼠经尾静脉注射20 μL转染空载质粒的脂肪干细胞悬液或脂联素修饰的脂肪干细胞悬液,1次/d,连续7d;③移植4周后,全自动生化分析仪检测血清生化指标和凝血指标,苏木精-伊红染色观察肾组织病理变化,RT-PCR、Western blot检测肾组织中乙酰肝素酶及脂联素的表达.结果与结论:①Western blot检测显示脂肪干细胞中脂联素高表达可持续28 d;②脂联素修饰脂肪干细胞组的病理改善明显优于脂肪干细胞组,脂肪干细胞组较模型组稍有改善;③脂肪干细胞组及脂联素修饰脂肪干细胞组的24 h尿蛋白定量及血清总胆固醇、三酰甘油、低密度脂蛋白、肌酐、尿素氮水平均明显低于模型组(P＜0.05),而血清总蛋白、白蛋白、高密度脂蛋白水平则明显高于模型组(P＜0.05).脂联素修饰脂肪干细胞组各项生理生化指标均优于脂肪干细胞组,差异有显著性意义(P＜0.05).脂肪干细胞组、脂联素修饰脂肪干细胞组大鼠的血液高凝状态较模型组明显缓解,脂联素修饰脂肪干细胞组缓解更明显,各组间差异有显著性意义(P＜0.05);④与模型组相比,脂肪干细胞组、脂联素修饰脂肪干细胞组大鼠肾组织中乙酰肝素酶的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),而脂联素表达水平明显升高(P＜0.05).脂联素修饰脂肪干细胞组乙酰肝素酶和脂联素mRNA和蛋白表达水平均优于脂肪干细胞组(P＜0.05);⑤结果表明,脂联素基因修饰的脂肪干细胞移植可以显著改善肾病综合征大鼠的肾功能、血液高凝状态及高脂血症,该作用可能与乙酰肝素酶和脂联素的表达水平有关.
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脂肪间充质干细胞移植减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的机制
背景:缺血再灌注引起的急性肾损伤是有较高死亡率的临床常见问题,尚缺乏有效治疗方法.目前,已有一些间充质干细胞移植应用于改善此病情的研究,但可能机制仍不明确.目的:观察脂肪间充质干细胞移植对大鼠肾缺血再灌注损伤的保护作用及其可能机制.方法:实验所用SD大鼠购自北京维通利华实验动物技术有限公司,分离培养SD大鼠腹股沟部位脂肪组织,获得脂肪间充质干细胞并鉴定;将30只大鼠夹闭左肾动脉,45 min后去除动脉夹恢复血流建立肾缺血再灌注大鼠模型,随机分为移植对照组和干细胞移植组,每组15只,另取15只大鼠作为假手术组,其中,移植对照组尾静脉注射生理盐水,干细胞移植组尾静脉注射脂肪间充质干细胞.在移植后5,15和30 d进行下列检测:荧光显微镜观察大鼠肾组织冰冻切片中脂肪间充质干细胞定植情况;ELISA法检测血清肌酐与尿素氮水平;生化法检测肾组织中丙二醛含量;石蜡切片苏木精-伊红染色观察肾组织病理学结构并进行肾小管损伤评分;Western blot法检测肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶4的表达.结果与结论:①分离培养的SD大鼠脂肪间充质干细胞表达CD90和CD44,具有多向分化能力,移植对照组肾组织无绿色荧光,干细胞移植组在移植后5d可见绿色荧光;②与移植对照组比较,干细胞移植组血清肌酐与尿素氮水平、肾组织丙二醛含量及肾小管损伤评分降低(P＜0.05),肾组织谷胱甘肽过氧化物酶4表达升高(P＜ 0.05),肾组织形态结构有明显改善;③以上结果说明,脂肪间充质干细胞移植可减轻大鼠肾缺血再灌注损伤,可能通过促进肾组织中谷胱甘肽过氧化物酶4的表达发挥抗脂质过氧化作用.
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自体来源诱导性多能干细胞移植治疗小鼠慢性乙型肝炎性肝损伤
背景:自体来源诱导性多能干细胞移植改善肝组织结构与功能是慢性乙型肝炎性肝损伤治疗的新研究方向.目的:观察自体皮肤来源诱导性多能干细胞移植治疗HBV转基因小鼠慢性肝损伤的效果.方法:用腹腔注射四氯化碳建立HBV转基因小鼠(购于北京维通达生物技术有限公司)慢性肝损伤模型;造模开始注射四氯化碳第1周后,将模型小鼠皮肤成纤维细胞体外重编程为诱导性多能干细胞并进行鉴定;造模6周结束后第2天,通过门静脉途径将0.1 mL诱导性多能干细胞移植到模型小鼠肝内,对照组注射0.1 mLPBS;移植后7,14 d,冰冻切片观察诱导性多能干细胞定植情况;ELISA法检测小鼠肝功能;石蜡切片苏木精-伊红染色观察肝组织病理学变化.结果与结论:①模型小鼠皮肤成纤维细胞在体外成功重编程为诱导性多能干细胞,具有多向分化潜能;②移植后7d,实验组小鼠肝内可见荧光标记的诱导性多能干细胞;③实验组小鼠血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、谷氨酰转肽酶、总胆红素水平低于对照组,白蛋白水平高于对照组(P＜0.05);④实验组小鼠肝脏中肝细胞变性、坏死及炎细胞浸润较对照组明显改善;⑤结果提示,自体来源诱导性多能干细胞门静脉移植可治疗小鼠慢性乙型肝炎肝损伤.
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脂肪间充质干细胞移植治疗脓毒症大鼠急性呼吸窘迫综合征及机制
背景:脓毒症合并急性呼吸窘迫综合征病情凶险,传统治疗以支持为主,虽对预后有所改善,但效果不明显,故急需寻找一种新的有效的治疗手段.间充质干细胞是具有多向分化潜能的干细胞,可用于多种疾病的治疗,且已被多项实验证明有效.目的:探讨脂肪间充质干细胞对脓毒症大鼠急性呼吸窘迫综合征的保护作用及机制.方法:①采用组织细胞贴壁培养法分离大鼠脂肪间充质干细胞;②按照随机数字表法将成年雄性SD大鼠(兰州大学实验动物中心提供)分为生理盐水组(A组)、生理盐水+脂肪间充质干细胞组(B组)、脓毒症+急性呼吸窘迫综合征组(C组)、脓毒症+急性呼吸窘迫综合征+脂肪间充质干细胞组(D组),每组10只;③A组及B组大鼠开腹后,取出盲肠,然后放回腹腔,关腹;12h后经尾静脉注射1.0 mL生理盐水或1.0 mL生理盐水+脂肪间充质干细胞(1.2×106个).C组及D组行盲肠结扎穿刺术,大鼠持续吸纯氧48 h后造成肺损伤形成急性呼吸窘迫综合征模型,12h后经尾静脉注射1.0 mL生理盐水或脂肪间充质干细胞(1.2x106个);④建模24 h后测定动脉血氧饱和度;建模48 h后计算肺湿/干质量比值;ELISA检测肺组织炎症因子水平;苏木精-伊红染色镜下观察肺组织病理学改变;凝胶电泳迁移率分析肺组织核因子κB活性;RT-PCR、Western Blot测定肺部Toll样受体2,4mRNA和蛋白表达.结果与结论:①与A组、B组相比较,C组肺湿/干质量比值、肺损伤评分、炎症因子水平、核因子KB活性、Toll样受体mRNA表达、Toll样受体蛋白表达均明显升高,动脉血氧饱和度明显下降(P＜0.05);②与C组比较,D组肺湿/干质量比值、肺损伤评分、促炎因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β、白细胞介素6水平、核因子KB活性、Toll样受体mRNA表达、Toll样受体蛋白表达均明显降低(P＜0.05);而动脉血氧饱和度、抗炎因子白细胞介素10水平明显升高(P＜0.05);③A组和B组各指标比较差异均无显著性意义(P＞0.05);④光镜下显示A组和B组肺组织病理改变不明显;C组肺组织充血、水肿,肺泡腔内可见水肿液、红细胞,炎性细胞浸润;D组上述肺组织损害减轻;⑤结果表明,脂肪间充质干细胞可有效降低脓毒症大鼠急性呼吸窘迫综合征的炎症水平,改善肺损伤,其机制可能与抑制Toll样受体/核因子κB信号转导有关.
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脂肪间充质干细胞膜片移植促进创面愈合的可行性
背景:脂肪间充质干细胞因其能旁分泌多种生长因子、获取方便、具有免疫调节等作用,常被用于组织修复和功能重建.食管内镜黏膜下剥离后狭窄的预防和治疗是困扰医生和患者的难题.脂肪间充质干细胞结合新型组织工程技术——细胞膜片,具有促进创面修复、预防食管狭窄发生的潜能和应用价值.目的:探讨脂肪间充质干细胞膜片的生物学特征,分析其预防食管内镜黏膜下剥离后狭窄的可行性.方法:①将使用温度敏感培养皿制备的绿色荧光蛋白标记的脂肪间充质干细胞膜片设为实验组,常规贴壁脂肪间充质干细胞为对照组,通过ELISA、反转录实时PCR及Western blot比较2组血管内皮生长因子、转化生长因子β1、肝细胞生长因子含量;②取裸鼠制备皮肤人工溃疡,随机分为贴膜组与模型组,贴膜组立即在皮肤创面处贴附绿色荧光蛋白标记的脂肪间充质干细胞膜片.结果与结论:①脂肪间充质干细胞膜片中细胞含量较高,细胞外基质丰富,细胞与细胞之间连接存在;膜片组血管内皮生长因子、转化生长因子β1、肝细胞生长因子表达水平均高于对照组;②裸鼠背部脂肪间充质干细胞膜片移植成功,且贴膜组愈合速度快于模型组;③实验结果提示脂肪间充质干细胞结合细胞膜片技术预防食管内镜黏膜下剥离后狭窄具有可行性,但仍需大量的基础及临床研究进一步证实.
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骨髓间充质干细胞移植联合龙鳖胶囊修复膝骨关节炎
背景:以往研究证实,龙鳖胶囊与骨髓间充质干细胞单独应用均对膝骨关节炎具有一定的治疗作用.目的:观察龙鳖胶囊联合骨髓间充质干细胞移植修复膝骨关节炎的效果.方法:将96只成年雄性SD大鼠随机分为4组,分别为造模组、药物组、干细胞组与药物+干细胞组,每组24只.4组均采用膝关节腔注射木瓜蛋白酶的方法复制骨关节炎模型,造模后第3天,干细胞组膝关节腔内注射0.1 mL骨髓间充质干细胞悬液,1次/周;药物组灌胃龙鳖胶囊水溶液0.937 5 g/kg,2次/周;药物+干细胞组膝关节腔内注射0.1 mL骨髓间充质干细胞,1次/周,同时灌胃龙鳖胶囊水溶液0.937 5 g/kg,2次/周,各组连续处理4周.造模前、造模后第3天及给药4周后,ELISA法检测血清白细胞介素1β与白细胞介素6水平;给药4周后,取大鼠右侧膝关节软骨标本,进行苏木精-伊红染色病理观察,同时RT-PCR、Western blot检测Ⅱ型胶原、Hur、XIAP基因及蛋白的表达.结果与结论:①造模后第3天,各组白细胞介素1β、白细胞介素6水平均较造模前明显升高;给药4周后,造模组白细胞介素1β、白细胞介素6水平明显高于其他3组(P＜0.05),药物组、干细胞组白细胞介素1β、白细胞介素6水平明显高于药物+干细胞组(P＜0.05);②造模组关节软骨组织表面粗糙且破坏严重,裂隙较多,软骨细胞聚集分布且排列混乱;药物组、干细胞组均可见部分软骨修复,软骨组织表面较造模组平整,软骨细胞增多且分布较均匀,裂隙较造模组减少;药物+干细胞组关节软骨组织表面光滑平整,软骨细胞形态规则且排列均匀,无关节裂隙;③造模组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白和基因表达均低于其余3组(P＜0.05);药物组、干细胞组Ⅱ型胶原、Hur、XIAP蛋白和基因表达明显低于药物+干细胞组(P＜0.05);④结果说明,龙鳖胶囊联合骨髓间充质干细胞移植修复膝骨关节炎的效果更优.
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氯倍他索干预鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞向少突胶质样细胞分化及机制
背景:氯倍他索是临床工作中常用的糖皮质激素类药物,鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞在体外具有向少突胶质样细胞分化的潜能,氯倍他索能否促进其向少突胶质样细胞分化及其潜在的机制尚不得知.目的:观察氯倍他索对鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞向少突胶质样细胞分化的影响,探讨其可能的机制.方法:贴壁筛选法分离培养获取SD大鼠鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞,免疫荧光法鉴定其特性和纯度.MTT法检测0-10 μmol/L氯倍他索对鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞增殖能力的影响.取生长良好的第3代鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞,用含氯倍他索的无血清诱导分化培养液使其向少突胶质样细胞分化,氯倍他索浓度为0,2.5和5 μmol/L.倒置显微镜观察细胞形态的变化,免疫荧光和免疫印迹方法检测少突胶质细胞相关蛋白MBP和OLIG2的表达,免疫印迹法检测SHH信号通路相关蛋白SHH表达水平.结果与结论:①体外培养的鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞高表达vimentin和nestin;②低浓度的氯倍他索可促进细胞增殖;高浓度的氯倍他索则抑制细胞增殖,其中5 μmol/L可能为适增殖浓度;③鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞成少突胶质样细胞诱导3d后,氯倍他索组出现多极化形态,少突胶质细胞相关蛋白MBP、OLIG2以及SHH信号通路相关蛋白SHH的表达明显高于对照组;④结果表明,氯倍他索可能通过SHH信号通路促进鼻黏膜来源外胚层间充质干细胞向少突胶质样细胞分化.
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干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨分化能力
背景:foxM1基因被认为参与了干细胞分化命运的调控,但其对间充质干细胞成骨分化的影响尚未见报道,关于foxM1基因的研究也主要集中于肿瘤领域.目的:探索干扰foxM1基因表达水平对骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响.方法:全骨髓贴壁法培养SD大鼠(中山大学实验动物中心提供)骨髓间充质干细胞,构建含嘌呤霉素抗性基因的foxM1 shRNA重组慢病毒载体并转染大鼠骨髓间充质干细胞,经嘌呤霉素筛选建立foxM1稳定敲低细胞株,另设置空病毒载体组以及未转染组.使用骨髓间充质干细胞成骨诱导分化培养基诱导培养并行茜素红染色检测其成骨分化能力,使用定量RT-PCR检测成骨相关基因的表达水平,同时提取胞核蛋白,Western blot检测β-catenin蛋白表达水平.结果与结论:①与空病毒载体组以及未转染组比较,foxM1敲低的大鼠骨髓间充质干细胞经成骨诱导分化后形成的骨结节数量明显增多,成骨相关基因col1a1和runx2表达水平均显著升高,但胞核β-catenin蛋白水平无明显改变;②干扰foxM1基因表达可增强骨髓间充质干细胞的成骨能力.
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心脏转录因子Nkx2.5重组蛋白对人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转分化的作用
背景:大多数研究通过使用小分子物质或病毒等方式诱导获取心肌样细胞,而关于重组蛋白用于细胞重编程获得心肌样细胞的报道较少.目的:探讨Nkx2.5重组蛋白对人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转分化的作用.方法:构建Nkx2.5原核表达载体,不同时间点诱导Nkx2.5重组蛋白表达和分离纯化.使用纳米转导试剂包裹Nkx2.5形成纳米-蛋白复合体,转染人骨髓间充质干细胞,观察蛋白转导效率;蛋白转导成功后,检测心肌细胞特异性标志MHC的表达,观察人骨髓间充质干细胞向心肌样细胞转化情况.结果与结论:①28℃IPTG诱导培养4h获取的蛋白表达量更高;②纳米-Nkx2.5复合体可成功转染人骨髓间充质干细胞并诱导其向心肌样细胞转化;③结果表明,重组蛋白能被高效转导到细胞内,并能促使人骨髓间充质干细胞重编程为心肌样细胞,但细胞转分化效率尚待提高.
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脂多糖干预ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化
背景:肥胖是牙周炎及机体其他疾病的易感因素,因肥胖与瘦素密切相关,目前尚无通过瘦素基因突变小鼠骨髓间充质干细胞的分化情况探索相关机制的研究.目的:通过研究ob/ob遗传性肥胖小鼠骨髓间充质干细胞在脂多糖刺激下的成骨能力及成骨相关分子的表达,从分子及细胞水平探讨肥胖与成骨能力的相关机制.方法:选用8周龄雄性肥胖ob/ob小鼠、8周龄雄性C57小鼠(由中国医学科学院实验动物研究所提供)各8只,取两组小鼠双侧股骨,采用全骨髓法分离培养纯化得到ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞及C57小鼠骨髓间充质干细胞,加入含有100 μg/L脂多糖的成骨诱导液进行成骨诱导分化,通过碱性磷酸酶染色、茜素红染色和碱性磷酸酶活性检测观察比较两组小鼠骨髓间充质干细胞成骨能力.采用RT-PCR检测两组小鼠骨髓间充质干细胞中Alp、Runx2、Ocn、Nf-Kb mRNA表达水平.结果与结论:①成骨诱导1周后,与C57小鼠骨髓间充质干细胞比较,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶染色减弱,碱性磷酸酶活性显著降低(P＜0.01);成骨诱导液中添加脂多糖后,碱性磷酸酶活性较未添加脂多糖组显著下降(P＜ 0.01),ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞碱性磷酸酶活性亦较C57小鼠骨髓间充质干细胞显著降低(P＜0.05);②成骨诱导2周后,与C57小鼠骨髓间充质干细胞比较,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞茜素红染成橘红色的矿化结节减少,而成骨诱导液中添加脂多糖后,两组骨髓间充质干细胞均未见矿化结节形成;③成骨诱导后,与C57小鼠骨髓间充质干细胞比较,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞中Alp、Runx2、Ocn mRNA表达降低(P＜ 0.05);诱导液中加入脂多糖后,Alp、Runx2、Ocn表达较未添加脂多糖组均显著减少(P＜0.05),且在ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞中Ocn、Runx2表达较C57小鼠骨髓间充质干细胞明显降低(P＜0.05);④结果表明,瘦素缺乏的肥胖小鼠骨髓间充质干细胞成骨向分化发生障碍.在低浓度脂多糖刺激下,ob/ob小鼠骨髓间充质干细胞的成骨分化能力较C57小鼠骨髓间充质干细胞下降更明显.
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中药补肾活血方提取物促进SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖作用的佳浓度
背景:目前补肾活血方干预骨髓间充质干细胞增殖分化的实验中,其佳影响质量浓度是多少,尚不明确.目的:探讨补肾活血方提取物诱导骨髓间充质干细胞增殖分化的佳质量浓度和佳时间.方法:采用贴壁筛选培养法分离纯化SD大鼠骨髓间充质干细胞,取第3代细胞用于实验.将补肾活血方提取物按质量浓度梯度(0,10,20,40,100,120,150,200,300,400,500,600 mg/L)干预第3代骨髓间充质干细胞,诱导时间分别为1,3,5,7d.荧光倒置显微镜观察补肾活血方提取物干预后骨髓间充质干细胞的生长情况.用CCK-8法检测不同质量浓度补肾活血方提取物对骨髓间充质干细胞的毒性,筛选佳药物质量浓度和作用时间.结果与结论:与0 mg/L组比较,第5,7天时,100,120,150 mg/L补肾活血方提取物可促进骨髓间充质干细胞增殖(P＜0.05);在第7天时,150 mg/L补肾活血方提取物促增殖作用强(P＜0.01);药物质量浓度在150-200 mg/L时,增殖率下降明显;随着实验时间的延长,大于200 mg/L时,骨髓间充质干细胞增殖不明显.
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炎症激活骨髓间充质干细胞条件培养基对辐射损伤IEC-6细胞的修复
背景:间充质干细胞条件培养基是干细胞移植理想的替代方案,课题组前期研究表明炎症预激活的间充质干细胞条件培养基能促进辐射损伤小肠组织学结构和功能的修复,改善急性辐射损伤大鼠生存状态,但其潜在的细胞机制未进一步探讨.目的:观察炎症预激活的间充质干细胞条件培养基对辐射损伤小肠上皮细胞增殖、凋亡的影响,探讨预激活间充质干细胞条件培养基修复小肠黏膜的细胞机制.方法:小肠隐窝IEC-6细胞分为对照组、辐射损伤组、辐射损伤+MSC-CMIEC-6(NOR)组和辐射损伤+MSC-CMIEC-6(IR)组,后3组以10 GyX射线一次性照射IEC-6细胞建立体外急性小肠辐射损伤模型,对照组及辐射损伤组加入DMEM-F12培养基,辐射损伤+MSC-CMIEC-6(NOR)组加入正常状态间充质干细胞条件培养基,辐射损伤+MSC-CMIEC-6(IR)组加入炎症激活状态间充质干细胞条件培养基.照射后3d收集细胞行免疫荧光PCNA染色观察增殖改变,行TUNEL凋亡染色及Westem blot蛋白免疫印迹法观察凋亡改变.结果与结论:与辐射损伤组相比,辐射损伤+MSC-CMIEC-6(IR)组IEC-6细胞PCNA阳性细胞数明显增加(P＜0.05),TUNEL阳性细胞数下降(P＜0.05),凋亡相关因子Caspases-3蛋白表达明显下降(P＜0.05),而辐射损伤+MSC-CMIECIE(NOR)组的各项指标变化无统计学意义(P＞0.05).上述结果表明,与正常状态的间充质干细胞条件培养基相比,炎症激活的间充质干细胞条件培养基显著促进辐射损伤肠上皮细胞的增殖,并抑制其凋亡,促进辐射损伤小肠上皮修复.
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抑制GATA5蛋白可否促进HELA细胞中癌干细胞因子sox2、c-myc及CD44的表达
背景:GATA5蛋白在多种癌症发生过程中被抑制表达,有研究显示GATA5降低表达或被甲基化后失去功能,不能有效促进干细胞分化,维持细胞的正常功能.宫颈癌HELA细胞表达GATA5蛋白,在宫颈癌中抑制GATA5表达是否可促进其恶性转化还是未知.目的:分析GATA5蛋白在宫颈癌HELA细胞中被进一步抑制表达后,其恶性转化情况及与癌干细胞形成相关因子sox2,c-myc及CD44的表达情况.方法:转入CMV-siRNA-gata5,使GATA5在HELA细胞中被进一步抑制表达后, ①RT-PCR检测c-mycmRNA,sox2 mRNA的表达;②MTT法检测HELA细胞的增殖能力;③检测HELA细胞的集落形成和软琼脂单克隆形成能力;④Western blot检测细胞GATA5、c-myc、sox2蛋白表达变化;⑤激光共聚焦检测细胞的CD44蛋白定位及蛋白表达变化.结果与结论:用CMV-siRNA-gata5抑制HELA细胞中的GATA5表达后,HELA细胞的增殖能力、单克隆形成及集落形成能力均增强;同时发现其癌干细胞因子c-myc,sox2,CD44的表达增强.提示GATA5蛋白被抑制表达后,HELA细胞的恶行性为增加,其机制可能是GATA5被抑制后,促进了癌干细胞因子sox2,c-myc,CD44等的表达.
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依维莫司增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞的作用
背景:阿霉素能够抑制骨肉瘤细胞的增殖,但是阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用以及依维莫司联合阿霉素对骨肉瘤干细胞的作用未见报道.目的:研究mTOR通路抑制剂依维莫司联合骨肉瘤化疗一线药物阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖及侵袭的影响.方法:用免疫磁珠分选法分离人骨肉瘤细胞株MG63中的CD133+骨肉瘤干细胞.MTT检测0,0.1,0.2,0.4 mg/L阿霉素以及0.2 mg/L阿霉素+20 μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖的影响.Transwell小室检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20 μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞侵袭的影响.Western Blot检测0.2 mg/L阿霉素和0.2 mg/L阿霉素+20 μmol/L依维莫司对骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白表达的影响.结果与结论:①阿霉素能在一定质量浓度下抑制骨肉瘤干细胞的增殖,且依维莫司联合阿霉素较单独使用阿霉素时明显抑制骨肉瘤干细胞的增殖,说明依维莫司能够增强阿霉素对骨肉瘤干细胞增殖的抑制作用;②与单独使用阿霉素比较,依维莫司联合阿霉素作用于骨肉瘤干细胞后侵袭细胞数明显减少;③依维莫司联合阿霉素显著抑制骨肉瘤干细胞增殖细胞核抗原、基质金属蛋白酶蛋白的表达,提示依维莫司能够增强阿霉素抑制骨肉瘤干细胞增殖与侵袭的能力.
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粉防己碱对神经母细胞瘤干细胞增殖和干性基因表达的影响及作用机制
背景:研究发现粉防己碱能通过下调β-catenin表达抑制神经胶质瘤干细胞特性,然而其对神经母细胞瘤干细胞的影响未见报道.目的:探讨粉防己碱对神经母细胞瘤干细胞增殖及干性标志物表达的影响,并探究其分子机制.方法:使用无血清悬浮法从神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中获取肿瘤干细胞,给予粉防己碱干预,通过MTT法检测粉防己碱对神经母细胞瘤干细胞的增殖抑制作用,细胞免疫荧光染色检测粉防己碱干预后Nestin蛋白水平变化,克隆球形成实验检测粉防己碱干预后肿瘤干细胞成球能力变化,qRT-PCR法检测粉防己碱干预后CD133、Oct-4、Nestin mRNA表达,Western blot检测粉防己碱干预后CD133、Oct-4、Nestin、p-GSK3β和β-catenin蛋白表达.结果与结论:与未干预组比较,粉防己碱干预后SK-N-SH干细胞增殖能力降低(P＜0.05),CD133、Oct-4和Nestin mRNA表达降低(P＜0.05),Nestin蛋白荧光强度减弱,克隆球形成能力减弱(P＜0.05),CD133、Oct-4、Nestin、p-GSK3β和β-catenin蛋白减少(P＜0.05).结果表明,粉防己碱抑制神经母细胞瘤干细胞增殖并降低干性标志物表达,可能与其抑制Wnt/β-catenin信号通路有关.
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二甲双胍通过Akt通路调控胃癌干细胞的增殖与凋亡
背景:二甲双胍可抑制包括胃癌干细胞在内的多种肿瘤干细胞的增殖,靶向胃癌干细胞为临床有效治疗胃癌提供新思路,但其对胃癌干细胞增殖中PI3K/Akt信号通路的影响及可能机制尚未见报道.目的:探讨二甲双胍对胃癌干细胞增殖、凋亡及PI3K/Akt信号通路的影响.方法:以人胃癌SGC7901细胞株为亲本细胞分离培养胃癌干细胞并进行鉴定.以不同浓度(1,5,10 mmol/L)二甲双胍分别处理胃癌干细胞24,48,72 h,MTT检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡,RT-qPCR检测细胞中PI3K、Akt mRNA的表达;以8 mmol/L二甲双胍与100 mg/L Akt激活剂胰岛素样生长因子1共同处理胃癌干细胞,Western blot检测细胞中PI3K、Akt和p-Akt蛋白的表达,MTT检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡.结果与结论:①人胃癌SGC7901细胞在添加生长因子的无血清条件培养基中可分离培养出胃癌干细胞;②胃癌干细胞的增殖活力随着二甲双胍作用浓度增高和时间延长而降低(P＜0.05);③胃癌干细胞的凋亡率随着二甲双胍作用浓度增高和时间延长而增高(P＜0.05);④胃癌干细胞中Akt mRNA的表达随着二甲双胍作用浓度增高和时间延长而降低(P＜0.05),PI3K mRNA的表达降低不明显;⑤与二甲双胍相比,Akt激活剂作用后胃癌干细胞增殖活力升高、凋亡率降低、Akt与p-Akt蛋白表达升高(P＜0.05);⑥结果说明,二甲双胍可通过抑制Akt信号通路抑制胃癌干细胞增殖并诱导其凋亡.
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脂肪间充质干细胞复合多孔壳聚糖微球修复大鼠肝损伤
背景:随着干细胞治疗及组织工程的发展,利用生物相容性好的生物高分子材料结合脂肪间充质干细胞构建肝脏组织工程微单元成为治疗肝脏疾病的新策略.目的:探讨脂肪间充质干细胞复合多孔壳聚糖微球对急性肝损伤的修复能力.方法:将SD乳鼠脂肪间充质干细胞与多孔壳聚糖微球在体外复合培养,分别在培养第1,3,5天观察细胞在微球上增殖情况.取36只SD大鼠(北京市维通利华实验技术有限公司提供),随机分为3组(n=12):空白对照组,腹腔注射生理盐水;急性肝损伤组,腹腔注射10％四氯化碳-橄榄油;脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组,腹腔注射10％四氯化碳-橄榄油,于注射后第1天通过手术将脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球平铺于肝脏表面.分别于注射后第1,2,3,7天进行大体、血清学及组织学评价.结果与结论:①脂肪间充质干细胞与多孔壳聚糖微球复合后第1,3,5天,经过活/死染色观察到细胞可在微球上正常生长(死细胞数量远远少于活细胞数量),且细胞在不断增殖;②注射后第1,2,3,7天,脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组的大体形态、肝功能及组织学评价均优于急性肝损伤组,从第3天开始脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球组与空白对照组已无明显差异;③结果表明,将脂肪间充质干细胞-多孔壳聚糖微球移植入肝脏表面可加速肝损伤的修复.
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人脐带间充质干细胞条件培养基脂质体修复大鼠皮肤创面损伤
背景:干细胞条件培养基中含有大量有助于伤口修复的细胞分泌因子,用脂质体包裹有助于细胞因子在伤口处的缓释作用.目的:研究人脐带间充质干细胞条件培养基脂质体对大鼠皮肤创面愈合的影响.方法:采用组织块贴壁法分离培养人脐带间充质干细胞并进行相关因子检测.取20只SD大鼠(购自山西医科大学实验动物中心)用于制备直径1 cm的皮肤创面模型.薄膜分散制备条件培养基脂质体囊泡用于大鼠皮肤缺损伤口,取修复部位皮肤及周围组织进行苏木精-伊红染色病理切片观察,通过组织学评分统计分析判断其对创伤的修复情况.结果与结论:①人脐带间充质干细胞表面标志物CD73、CD90、CD105阳性率分别为99.7％、95.7％、99.4％,CD45、CD34阳性率分别为1.1％、0.1％,且能诱导分化为骨细胞、脂肪细胞;②条件培养基中血管内皮生长因子、白细胞介素8、单核细胞趋化蛋白1的质量浓度分别为558.60 ng/L、5236.48 ng/L、2972.55 ng/L;③用薄膜分散法制备得到人脐带间充质干细胞条件培养基脂质体平均粒径为262.3 nm;④人脐带间充质干细胞条件培养及其脂质体均可促进大鼠皮肤缺损处的毛囊、腺体发生,且表皮层加厚,组织学评分显著升高,第2天的条件培养基与条件培养基脂质体差异无显著性意义(P=0.730),其他各组之间有显著差异(P＜0.05);⑤结果提示,人脐带间充质干细胞条件培养基及其脂质体可以促进大鼠缺损伤口的修复.
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长效、中效、短效3种激素影响miR-672-5p在大鼠成骨细胞的差异表达
背景:前期研究中发现,甲泼尼龙干预后miR-672-5p在大鼠成骨细胞的表达上调,提示miR-672-5p可能在激素性股骨头坏死中发挥作用.目的:分析长效、中效、短效3种激素影响miR-672-5p在大鼠成骨细胞的差异表达.方法:SD大鼠原代成骨细胞体外培养,取第3代大鼠成骨细胞加入DMEM高糖培养基,并分别加入终浓度为1×10-5 mol/L的地塞米松(长效)、甲泼尼龙(中效)及氢化可的松(短效),并设空白对照组;4组分别细胞总RNA提取,反转录反应,定量PCR反应;算出2-ΔΔCt值评估miR-672-5p的表达量.结果与结论:①与空白组相比,3组激素的miR-672-5p在大鼠成骨细胞的表达均显示出上调,其中甲泼尼龙组为2.35倍,提示表达高;甲泼尼龙组miR-672-5p表达显著高于氢化可的松组和地塞米松组(均P＜0.05),但氢化可的松组与地塞米松组比较差异无显著性意义;②结果说明,中效激素的miR-672-5p在大鼠成骨细胞的表达量大,提示甲泼尼龙在激素性股骨头坏死中可能起重要角色.
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基于雌激素受体研究氯化锂干预成骨细胞的分化及自噬
背景:临床应用锂治疗造血系统疾病和双极性疾病已经有数十年,并且发现锂可以直接刺激骨髓间充质干细胞的增殖.目的:研究雌激素受体抑制下氯化锂对大鼠成骨细胞增殖分化及自噬的影响.方法:实验选取10只出生72 h的SPF级SD乳鼠(由黑龙江中医药大学提供).采用酶消化法和茜素红染色法获得和鉴定成骨细胞.取对数生长期成骨细胞,于培养基中加入不同浓度的氯化锂(0,1,2,5 nmol/L)处理24 h,采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况.另取成骨细胞随机分为空白组(正常培养细胞)、抑制剂组(10-7 mol/L ICI 182780)、治疗组(5 nmol/L氯化锂+10-7 mol/L ICI182780).采用钙化结节染色及碱性磷酸酶活性检测各组成骨细胞分化情况;Western blot法测定各组成骨细胞中Beclin1和Runx2蛋白表达情况.结果与结论:①倒置显微镜下观察细胞多为单核、多边形及梭形,局部有细胞密集的细胞团;②CCK-8法检测结果显示不同浓度的氯化锂都能对成骨细胞增殖产生促进作用,呈浓度依赖性;③茜素红染色结果显示与空白组比较,抑制剂组成骨细胞矿化能力明显降低,与抑制剂组比较,治疗组成骨细胞矿化结节能力明显增加(P＜0.05);活性测定结果显示与空白组比较,抑制剂组中碱性磷酸酶活性明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中碱性磷酸酶活性明显增加(P＜0.05);④Westem blot结果显示与空白组比较,抑制剂组中Beclin1和Runx2蛋白表达明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中Beclin1和Runx2蛋白表达显著增加(P＜0.05);⑤结果提示,雌激素受体抑制下氯化锂可以提高大鼠成骨细胞增殖分化及自噬.
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α-硫辛酸改善初诊2型糖尿病患者循环内皮祖细胞水平
背景:前期研究表明,初诊2型糖尿病患者已存在血管内皮功能障碍,α-硫辛酸作为一种抗氧化剂,广泛应用于糖尿病神经病变患者,而其能否改善初诊2型糖尿病患者循环内皮祖细胞的数量与功能,目前尚无这方面的研究.目的:探讨α-硫辛酸对初诊2型糖尿病患者循环内皮祖细胞水平的影响.方法:将50例初诊2型糖尿病患者在基础治疗的前提下,随机分为对照组20例和α-硫辛酸组30例,治疗前和治疗2周检测超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧物酶、丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇水平及内皮祖细胞数量,分析各指标在两组间的差异及相关性.结果与结论:①与治疗前比较,α-硫辛酸组治疗后内皮祖细胞数量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧物酶活性显著增加(P＜0.05),丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷、三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇显著降低(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇显著升高(P＜0.05);②与治疗前比较,对照组治疗后三酰甘油、总胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇显著下降(P＜0.05),高密度脂蛋白胆固醇显著升高(P＜0.05);③两组治疗前后的差值比较:α-硫辛酸组较对照组内皮祖细胞数量、超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧物酶活性显著增加(P＜0.05),丙二醛、8-羟基脱氧鸟苷含量显著降低(P＜0.05);④以α-硫辛酸组治疗前后各指标的差值进行多元线性回归分析显示,谷胱甘肽过氧物酶、丙二醛是内皮祖细胞水平的影响因素;⑤结果表明,α-硫辛酸能够通过抗氧化应激增加初诊2型糖尿病患者循环内皮祖细胞水平.
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同源性磷酸酶-张力蛋白经PI3K/AKT通路调控关节纤维化肌成纤维细胞增殖
背景:研究显示大鼠关节纤维化中相关调控肌成纤维细胞表达的基因目前报导较少,对抑癌基因同源性磷酸酶-张力蛋白(phosphatase and tensin homolog,PTEN)在关节纤维化组织的表达目前尚未见报道.目的:探讨关节纤维化大鼠关节囊组织中PTEN基因的表达变化及下游PI3K/AKT信号通路在大鼠关节纤维化中的作用.方法:膝关节固定法建立大鼠膝关节纤维化模型,取膝关节后关节囊,组织块培养法分离培养肌成纤维细胞.采用定量实时PCR检测PTEN mRNA的表达,采用蛋白质印迹Westem Blot方法检测肌成纤维细胞中胶原蛋白1-A1、PTEN蛋白的表达情况及下游PI3K,AKT通路的信号分子改变情况.再使用PI3K/AKT通路阻滞剂LY294002对肌成纤维细胞进行处理,观察肌成纤维细胞的增殖改变情况.结果与结论:关节纤维化中PTEN mRNA及蛋白表达水平较对照侧下调(P＜0.05).PTEN表达下调后,下游PI3K/AKT通路的信号分子PI3K,p-AKT的表达水平出现上调(P＜0.05),肌成纤维细胞的细胞增殖活跃,使用PI3K/AKT通路阻滞剂LY294002后细胞增殖受到抑制.提示纤维化关节中PTEN表达发生下调,并经由PI3K/AKT通路调控关节纤维化的发展.
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小鼠心脏Telocyte间质细胞的存在与特点
背景:有研究发现Telocyte间质细胞可能在急性心肌梗死、房颤、心脏瓣膜病及心肌淀粉样变性等心脏疾病发挥作用,但其机制尚不清楚,相关心脏Telocyte间质细胞的基础研究具有重要的临床价值.目的:多种技术探讨小鼠心脏Telocyte间质细胞的存在与特点.方法:选择10 d-10周龄昆明小鼠59只(由福州吴氏实验动物中心提供),以胃肠道Cajal间质细胞及膀胱Telocyte间质细胞为对照组进行对比研究.ACK2(c-kit单克隆抗体)作为指标,进行心肌组织免疫组化染色(n=13);体外心脏Telocyte间质细胞分离与培养(n=41),之后进行细胞免疫荧光激光共聚焦显微镜以观察细胞形态及突起情况;透射电镜(n=5)观察细胞超微结构.结果与结论:①免疫组化染色显示在小鼠胃肠道、膀胱组织发现c-kit阳性表达产物,心脏组织未发现c-kit阳性表达,体外原代培养发现c-kit阳性表达:②免疫荧光激光共聚焦显微镜和透射电镜观察均发现心脏Telocyte间质细胞,镜下心脏Telocyte间质细胞嵌插于心肌纤维束间及毛细血管周围,胞体呈梭形或不规则形,心室Telocyte间质细胞突起与毛细血管间发现长条形“致密物质”.与对照组比较胞体大小、突起数量无显著性差异(P＞0.05),但细胞突起长度有显著性差异(P＜0.05);③结果提示,利用原代培养、免疫荧光及透射电镜技术确定小鼠心脏存在c-kit阳性表达的Telocyte间质细胞,其胞体大小、突起数量与胃肠道Cajal间质细胞或膀胱Telocyte间质细胞类似:心室Telocyte间质细胞突起长,心房Telocyte间质细胞突起短,心室Telocyte间质细胞突起与毛细血管间存在紧密连接.
