中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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实验大鼠采血方法的选择
采剧300只SD大鼠进行采血.腹主动脉采血法在腹主动脉分叉处向心端1-3 mm处为佳穿刺点,成功率为93.6%.眼眶后静脉采血法将针垂直插入内眦并向眼底方向转动以便切开静脉丛,成功率为89.9%.心脏穿刺采血法于剑突下以25°-30°斜行向上进针刺入皮下,针尖穿过横膈膜继续斜行刺入2.5～3.0 cm,成功率为83.4%.尾尖采血法以手术剪剪去尾尖5-10 mm,成功率为94.4%.颈静脉法于第4根肋骨水平方向刺入皮肤,向颈静脉进针,与胸部表面成30°-40°向颈静脉刺入,刺入的深度约5 mm,成功率为80.9%.腹主动脉采血法适用于取血量大的实验,不易溶血,不损伤器官,不会出现因操作不当造成的气栓与瘀血,有利于病理组织学检查.几种方法各有优缺点及注意事项,应根据不同的实验设计和要求来选择采血方式.
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Beagle犬牙龈成纤维细胞的体外分离培养
背景: Beagle犬性情温和、遗传背景明确,且牙周结构与人类相似,是研究牙周疾病的常见大型动物模型.目的: 体外分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞.设计、时间及地点: 观察埘比实验,于2006-09/2007-02在福建医科大学附属口腔医院中心实验室和解放军南京军区福州总院比较医学科完成.材料: Beagle犬5只,12月龄,体质量10-13 kg,雄性.方法: 基础麻醉下,切取Beagle犬游离龈.使用半消化+改良组织块法分离、培养、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞;手术及组织学观察确定组织块来源.以经成骨诱导的骨髓基质干细胞作为阳性对照组,试剂盒内标准品作为标准组,蒸馏水作为空白组.主要观察指标: 免疫细胞化学及碱性磷酸酶检测明确细胞来源;四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖状况. 结果: 末经胰酶处理的组织块边缘锐利,组织致密;上皮细胞迅速增殖,呈鹅卵石样占满组织块周边.经胰酶处理过的组织块疏松,其周围上皮细胞少.成纤维样细胞游出迅速.波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性.结果证实所取组织块为Beagle犬游离龈;免疫细胞化学证实细胞源于中胚层.此成纤维样细胞基本不表达碱性磷酸酶,细胞增殖状况良好.结论: 使用半消化+改良组织块法能够分离、纯化Beagle犬牙龈成纤维细胞.
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肝细胞生长因子对自发性高血压大鼠血压的影响
背景: 肝细胞生长因子是一种多功能生长因子,它能促进多种细胞生长与移行及各种组织器官的发生.在心血管系统,它具有抗凋亡、抗纤维化、促进内皮细胞损伤后修复作用,推测其可能具有降压效应.目的: 观察外源件肝细胞生长因子对白发性高血压大鼠血压、血管内皮系统和肾素-血管紧张素系统的影响并探讨其调节血压的可能机制.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,于2007-03/07在安徽医科大学第一附属医院心内科完成.材料: 外源件肝细胞生长因子粉剂购于美国Peprotech公司,成年自发性高血压大鼠组和WKY大鼠,均14周龄,体质量200-250 g.自发性高血压大鼠随机分为实验组和单纯自发性高血压大鼠组,WKY大鼠为正常对照组,每组12只.方法: 实验组每间隔24h从尾静脉依次给予肝细胞生长因子5,10,15,20,25 ug/kg,自发性高血压大鼠组和正常对照组同时给予等量生理盐水.每次注射安抚大鼠5 min后测血压与心率,后一次注射后观察血压降至低值时(约注射后30 min),麻醉后处死,各取右心室血2 mL.主要观察指标: ①观察肝细胞生长因子对自发性高血压大鼠组收缩压及心率的影响.②分别用比色法测血清一氧化氮水平、放射免疫法测血浆内皮素、血管紧张素Ⅱ水平.结果: 实验组注射肝细胞生长因子5 ug/kg血压下降不明显.注射10 ug/kg约5 min后血压开始下降,30 min降至低,1 h后血压开始逐渐回升,5 h后血压基奉回到原先水平.注射20 ug/kg达大降压幅度,收缩压下降达40～50 mm Hg,再增加剂量大降压幅度及持续时间不变.整过程心率无明显变化.两个对照组血压无明显变化.实验组较自发性高血压大鼠组内皮素、血管紧张素Ⅱ含量下降,一氧化氮含量上升(P<0.05).结论: 从静脉给予外源性肝细胞生长因子能快速降低自发性高血压大鼠组的血压,在一定剂量范围内,呈剂量-效应与时间-效应关系.肝细胞生长因子系统、血管内皮系统、肾素-血管紧张素系统可能共同参与血压的调节.
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烧伤创面愈合过程中胶原代谢与针刺作用的影响
背景: 针刺可促进烧伤创而愈合,但对创面组织胶原代谢的影响尚不清楚.目的: 观察针刺对烧伤创面愈合过程中胶原代谢的影响.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,于1997-01/2005-12在广州市创伤外科研究所完成.材料: 雌性新西兰大白兔27只,体质量2.0-2.5 kg,用于制备深Ⅱ度烧伤模型.方法: 每个兔背部脊柱两旁造成10个创面.实验分为3组,正常组(月=3):只背部剃毛备用:常规治疗组:伤后自由进食,创面外用25 g/L的碘伏暴露;针刺组:在常规治疗的基础上,伤后24h内开始针刺治疗,取双侧"足三里(ST36)"穴,针刺后接电针仪,频率20Hz,时间30min,1次/d.伤后3,7,13,21 d常规治疗组和针刺组各取3只动物处死,取组织待测.主要观察指标: 各组动物不同时间点创面组织中羟脯氨酸水平.结果: 27只大白兔均进入结果分析.烧伤后13 d常规治疗组和针刺组创面组织中羟脯氨酸水平均低于正常皮肤组织(P<0.05).伤后21 d常规治疗组创面组织中羟脯氨酸达到正常皮肤组织水平,两组相比差异无显著性意义(P0.05).而针刺组创面组织中羟脯氨酸水甲高于常规治疗组和正常皮肤组织(P<0.05).结论: 针刺可促进烧伤创面胶原的合成.
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人骨形成蛋白2真核表达载体的构建和体外表达
背景: 骨形态发生蛋白2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)是已知的所有生长因子中对骨的形成作用强的生长因子,被认为是具有前途的骨诱导物质.目的: 构建入骨形成蛋白2真核表达载体并观察其体外表达情况.设计、时间及地点: 自身对照实验,于2005-07/2006-05在华中科技大学同济医学院分子生物中心实验室完成.材料;pcDNA3.1(+)载体由华中科技大学同济医学院左石博士惠赠;成骨肉瘤组织由华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科提供.方法: 从人成骨肉瘤细胞中提取细胞总RNA,利用反转录-聚合酶链反应方法扩增获得人BMP-2基因cDNA,将基因片断重组到pGEM-T质粒中构建pGEM-T-hBMP-2重组质粒载体,转化到大肠杆菌DH5α后筛选阳性克隆,利用限制性酶切和DNA序列分析鉴定重组质粒.分别用RcoRI和NotI双酶切pGEM-T-hBMP-2质粒和pcDNA3.1真核表达载体,将克隆载体中人骨形成蛋白2基因重组到pcDNA3.1真核表达载体,提取质粒作酶切电泳、聚合酶链反应鉴定及DNA测序后,用脂质体体外转染小鼠骨髓基质细胞,反转录-聚合酶链反应检测BMP-2的表达.主要观察指标: ①人骨肉瘤细胞总RNA反转录-聚合酶链反应结果.②重组质粒pGEM-T-hBMP-2.和PcDNA3.1-hBMP-2的构建和酶切鉴定.③BMP-2在小鼠骨髓基质细胞内的表达.结果: 人骨肉瘤细胞总RNA经反转录-聚合酶链反应扩增后,获得1.2 kb条带.经酶切电泳、聚合酶链反应鉴定及DNA测序证实实验成功克隆BMP-2基因,重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2构建正确;该重组质粒能在体外培养的小鼠骨髓基质细胞中有效表达BMP-2.结论: 实验成功克隆入骨形成蛋白2基因并构建了此基因的真核表达载体.
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淫羊藿对去势雄性大鼠骨密度及骨结构性能的影响
背景: 男性骨质疏松的研究起步较晚,治疗上缺乏公认有效的方法.中药淫羊藿具有补肾壮阳的功效,对免疫系统、骨骼以及生殖系统均有明显的调节作用,用于治疗骨质疏松.目的: 观察淫羊藿对去势雄性大鼠骨密度及骨结构性能的影响.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,于2007-01/2008-04在华中科技大学同济医学院附属同济医院老年病实验室完成.材料: 鼠龄15周健康雄性SD大鼠50只,体质量(340±10)g,用于制备骨质疏松模型.方法: 50只大鼠随机数字表法分为对照组、模型组以及低、中、高剂量淫羊蓿治疗组,每组10只;淫羊藿治疗组大鼠自造模后第2周开始用淫羊藿治疗12周,淫羊藿治疗剂量分别为:1.0,5.0,10.0 g/(kg·d),对照组和模型组采用等量生理盐水.主要观察指标: 12周后,行血尿生化、骨密度检查.对第4腰椎离体椎骨应用自制的SL22000骨疲劳损伤实验机进行疲劳损伤,行骨组织形态计量学检测.结果: 50只大鼠均进入结果分析.①对照组、中、高剂量淫羊藿治疗组全身骨密度均高于模型组(P<0.05):模型组尿钙/肌酐、尿磷/肌酐、血核因子k B受体激活因子配体、尿羟脯氧酸/肌酐均高于其他各组(P<0.05),而血清碱性磷酸酶均低于其他各组(P<0.05);治疗组护骨素高于模型组(P<0.05).②模型组骨小梁单位面积百分率均低于其他各组(P<0.05),其中对照组高;而单位骨小梁面积百分率的微破裂长度均高于其他各组(P<0.05);对照组、中、高剂量淫羊藿治疗组单位骨小梁面积百分率的微破裂数日和椎体体积均高于模型组(P<0.05).结论: 去势后雄性大鼠应用淫羊藿可以防止骨量丢失并提高骨结构性能.
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5-IAF标记兔心肌肌钙蛋白C的荧光特性
背景: 心肌肌钙蛋白在检测心肌梗死的诊断中有极其重要的临床意义.目的: 将荧光标记物5-iodoaccetamidofluorescein(5-IAF)应用于心肌肌钙蛋白,观察其足否可用作与收缩调节蛋白之间相互作用的研究.设计、时间及地点: 随机对照实验,于2002-01/2005-12在广州医学院人体解剖教研室完成.材料: 成年兔,由广州医学院实验动物中心提供.方法: 利用反转录-聚合酶链反应技术制备兔心肌肌钙蛋白C的基因片段,应用基因重组技术将兔心肌肌钙蛋白C基因片段克隆到pET表达载体,根据PCR定点诱变的方法,取得突变型的兔cTnC(C35S),分别将5-IAF和2-(4'-(iodoacetamido)anilino)naphthalene-6sulfonic acid(IAANS)标记在兔肌钙蛋白C(C35S),并进行恒态荧光测定和时间-分辨荧光测定.主要观察指标: 兔cTnC(C35S)-IAF及cTnC(C35S)-IAANS的荧光特性.结果: 5-IAF标记的兔肌钙蛋白C在波长491 nm处进行激发,其发射峰值出现在波长520nm处,加入饱和的镁离子可导致荧光强度减少35%,继续用饱和的钙离子滴定,其荧光强度再减少35%,而且波峰向蓝光方向移动3 nm.IAANS标记的cTnC(C35S)在加进镁离子和钙离子后引起的荧光反射的跃迁,并不出现在用5-IAF标记的cTnC上.然而,不管使用哪一种荧光标记物,钙引起cTnc的构象变化这个作用并没有改变.钙滴定实验表明,两种荧光标记物标记的荧光发射结合参数是一致的.结论: 5-IAF标记可以应用于心肌肌钙蛋白与其他收缩调节蛋白之间相互作用的研究.
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舱内爆炸大鼠血液动力学的早期变化
背景: 已证实冲击波和烟雾均可引起机体显著的血流动力学紊乱,但对冲击波烟雾复合伤时血流动力学特点少有文献报道.目的: 探讨舱室内爆炸复合有害气体对人鼠舡流动力学早期变化的影响,评价脑钠肽做为冲击波烟雾复合伤早期检测损伤指标的可行性.设计、时间及地点: 随机分组,动物实验观察,于2006-08/2007-08在解放军第三军医大学大坪医院野战外科研究所完成.材料: 纳入健康雄性SD大鼠104只,随机分为3组:正常对照组8只,爆炸损伤组48只,复合损伤组48只.方法: 将大鼠按模拟战位固定于模拟舱审内,0.4g黑索金点纸质爆源置于舱室中心爆炸,模拟冲击波烟雾复合伤模型.复合损伤组大鼠在爆炸后放置100 s取出,爆炸损伤组大鼠爆炸后立即取出,正常对照组不做处理.主要观察指标: 大鼠于伤后1,3,6,12,24,72 h再次麻醉后行动脉捅管观察心功能变化,并采血,运用双抗体夹心法检测血浆脑钠素蛋白水平,取心脏病理标本观察心肺组织病理变化.结果: 与正常对照组比较,爆炸损伤组和复合损伤组大鼠心肺病理形态学,均有明显改变,且复合损伤组比爆炸损伤组损伤严重.爆炸损伤组和复合损伤组大鼠血浆脑钠肽在各时相点均高于正常对照组(P<0.05),复合损伤组高于爆炸损伤组(P<0.05).左室内压大下降速率、左室收缩压、平均动脉压与脑钠肽质量浓度的变化一致,而左室内压大上升速率则呈负相关性.结论: 脑钠肽可做为冲击波烟雾复合伤早期检测损伤指标,舱内爆炸烟雾复合伤对心肺损伤较单纯爆炸损伤更加严重.
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邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露致仔鼠睾丸膜联蛋白A5的表达差异
背景: 国内外关于邻苯二甲酸二丁酯导致雄性生殖系统畸形发生机制的探讨多集中于邻苯二甲酸二丁酯干扰胚胎期睾丸睾酮合成途径的研究,对其基因表达调控的因素及功能蛋白质之间相互干扰的网络效应却并不明了.蛋白质组学能够从整体水平反映蛋白质组分,并筛选功能相关蛋白.目的: 探讨邻苯二甲酸二丁酯胚胎期暴露对胎鼠睾丸蛋向表达谱的影响,分离并鉴定差异表达蛋白质.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,实验于2006-08/2007-10在南京医科大学动物实验中心及南京医科大学生殖医学重点实验室完成.材料: 将孕鼠随机分为实验组和对照组,每组5只.妊娠14-18 d.方法: 实验组按800 mg/(kg·d)染毒孕鼠,对照组予大豆油 5 mL/d.妊娠21d取出胚胎大鼠睾丸,提取总蛋白,进行二维凝胶电泳分离和图像分析,筛选出的差异蛋白质点利用质谱技术进行鉴定,并选择关键蛋白进行验证.主要观察指标: ①两组蛋白的电泳差异比较.②酶切,MALDI-TOF分析,数据库检索,生物信息学检索结果.③两组蛋白Western blotting硷测及免疫组织化学染色结果.结果: 共筛选出33个差异表达蛋白(t≥2.831,P<0.05),其中14个通过质谱分析和SwissProt蛋白数据库检索得到鉴定,包括膜联蛋白A5、过氧化物酶6、泛素羧基末端水解酶L1等.运用Western blotting,验证了膜联蛋白A5在实验组表达量明显高于对照组,通过免疫组织化学方法,发现膜联蛋白A5主要定位在胎鼠睾丸Leydig细胞中.结论: 实验运用蛋白质组学方法,建立了邻苯二甲酸二丁酯孕期暴露雄性仔鼠睾丸与正常仔鼠睾丸蛋白质差异表达谱系,鉴定出 14个蛋白点,确定了膜联蛋白A5在胎鼠睾丸的定位.
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吸烟大鼠骨折愈合过程中骨痂含量的变化
背景: 骨折愈合过程的完成受众多因素影响,吸烟是否对骨折愈合也有影响?目的: 探讨吸烟与骨折愈合的关系.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,于2006-03/08在兰州大学第一医院骨科中心完成.材料: 健康雄性Wistar大白鼠80只,体质量(280±25)g.香烟(兰州牌,烤烟型,每支含焦汕7 mg,烟碱10 mg,兰州卷烟厂生产).方法: 80只雄性Wistar大白鼠随机分成正常对照组(不吸烟)、吸.朋戒烟组、轻度吸烟组和重度吸烟组,每组20只.除正常对照组外各组大鼠均于手术前1个月开始吸烟.吸烟戒烟组与轻度吸烟组每只大鼠合5支香烟,重度吸烟组每只大鼠合10支香烟,2次/d,1h/次,6 d/周.术日,吸烟戒烟组动物开始戒烟,轻度吸烟组、重度吸烟组继续吸烟.4组大鼠均制作骨折模型.主要观察指标: 分别于术后第1,7,14,21,28天利用X射线摄片与病理切片测量各组大鼠骨痂大商径.结果: 组间相比,在纤维骨痂形成期及骨性骨痂形成期骨痂汽径大,随着骨痂的改造塑形,骨痂直径又趋减少;骨折14,28 d,轻度、重度吸烟组与正常对照组相比,骨痂大直径值差异有显著意义(P<0.01),轻度吸烟组与重度吸烟组间差异也有显著性意义(P<0.05).结论: 吸烟是骨折愈合的不利因素.吸烟影响骨痂含量,使骨痂的形成减少,从而延缓骨折的愈合过程.
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内皮抑素重组腺病毒表达载体构建及对内皮细胞增殖的影响
背景: 烧创伤后创面愈合多伴有瘢痕增生,内皮细胞在瘢痕增生中具有重要作用,抑制内皮细胞的生长可以在一定程度上减轻瘢痕增生.目的: 构建含有人内皮抑索基因的重组腺病毒Ad/hEnd,并观察与感染该病毒的角朊细胞共培养时内皮细胞增殖特性的改变.设计、时间及地点: 观察对照实验,于2006-09/2007-05在解放军第三军医大学西南医院烧伤研究所国家重点实验室完成.材料: pAdTrack-CMV及pAdEasy-1购自美国Stratagene公司:293细胞及大肠杆菌Ecoli.DH5 α由本室保存.方法: 以人胎肝组织mRNA为模板,通过反转录-聚合酶链反应及聚合酶链反应获得内皮抑素基因序列,插入到腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,获得重组质粒pAdTrack-ES.经鉴定后将阳性重组子转化至pAdeasy1受体菌,筛选阳性克隆.脂质体介导转染293细胞,获取Ad/hEnd,经聚合酶链反应鉴定及上清中内皮抑素含量检测后,感染角朊细胞,采用套皿法与内皮细胞共培养.并与未转染的角朊细胞进行对照观察.主要观察指标: pAd/hEnd的同源重组及其鉴定,Ad/hEnd的产生与鉴定,转染293细胞后内皮抑素的表达,Ad/hEnd的纯化与滴度测定,培养液中内皮抑素含量,内皮细胞凋亡百分数及内皮细胞抑制率测定.结果: ①成功获取了Ad/hEnd,病毒滴度可达1.65×1012PFU/L.②感染Ad/hEnd的角朊细胞可有效表达并分泌内皮抑素,连续培养3 d后,培养液中内皮抑素含量可达226 μg/L.③与转基因角朊细胞共培养的内皮细胞凋亡百分数与细胞抑制率均显著高于对照组(P<0.05).结论: 与内皮细胞共培养时.转Ad/hEnd角朊细胞可通过分泌内皮抑素促进内皮细胞凋亡,并抑制其增殖.
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免阴茎海绵体平滑肌细胞的纯化培养及相关鉴定分析
背景;从以往的文献来看,阴茎海绵体平滑肌细胞的原代培养存在着制作时间长,纯度不高以及易被成纤维细胞污染等诸多缺点.目的: 探索兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯化培养技术及纯度鉴定方法.设计、时间及地点: 对照实验,于2007-10/2008 03在上海交通大学附属第六人民医院泌尿外科,上海市组织工程研究与开发中心完成.材料: 成熟的雄性新西兰大白兔5只,体质量2.5-2.8 kg.方法: 取雄性新西兰兔新鲜的阴茎组织,利用高浓度的胶原酶消化法结合差速贴壁技术对海绵体平滑肌细胞进行纯化培养.以同期兔成纤维细胞作为对照参考.主要观察指标: 以四甲基偶氮唑盐分析细胞生长特性:以平滑肌肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白免疫荧光鉴定海绵体平滑肌细胞:以流式细胞仪检测P2及P5代细胞α-肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白阳性率变化情况.结果: 培养细胞四甲基偶氮唑盐显示细胞指数增长期为6d左右,随后进入平台期.α-肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白均呈阳性反应,同期成纤维细胞仪α肌动蛋白显示阳性结果.第2代细胞表达α-肌动蛋白、肌球蛋白、结蛋白阳性率分别65.3%,42.2%,62.3%.经过反复多次的纯化技术至第5代时,上述指标阳性表达率分别上升为92.8%,72.7%,78.1%.结论: 通过高浓度的酶消化法及差速贴壁技术可获得高纯度的阴茎海绵体平滑肌细胞,肌球蛋白、结蛋白相对于α-肌动蛋白可以成为鉴定海绵体平滑肌细胞的特异性指标.
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丹参骨髓腔内注射预防激素性股骨头坏死的可能性
背景: 由于股骨头缺血件坏死的确切发病机制尚不清楚,其治疗方法尚不理想.目的: 观察丹参注射液骨髓腔内注射预防激素件股骨头缺血性坏死的可行性和机制.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,细胞病理学观察,于2005-04/2007-05在遵义医学院完成.材料: 健康家兔30只,雌雄各半,6月龄,体质量(2.5±0.25)kg,随机分为对照组、模型组、预防组,每组10只.丹参注射液.方法: 对照组臀肌注射生理盐水.模型组臀肌注射醋酸泼尼松龙,每次7.5 mg/kg,每周2次,共8周.预防组臀肌注射醋酸泼尼松龙制作糖皮质激素诱导激素件股骨头坏死动物模型,同时采用髂骨穿刺针在股骨第三转子尖下方0.3-0.5 cm处由外向内上方穿入后注入丹参注射液,每侧0.4 mL/kg,每周2次,共8周.主要观察指标: 观察3组家兔血脂、血钙磷、X射线、发射型计算机断层扫描及组织病理学指标的变化.结果: 模型组血清钙和钙磷乘积明显降低,X射线示股骨头密度不均,可见大小不一的囊状透亮区,部分骨小梁模糊不清,但股骨头保持完整,关节间隙正常;发射型计算机断层扫描显示股骨头在血流、血池相放射性分布稀疏,延迟相放射性异常浓聚:组织病理学观察显示,股骨头骨皮质变薄,骨小梁变细,结构紊乱,骨髓明显坏死和脂肪化,空骨陷窝率明显增多.预防组血清钙、血清钙磷乘积升高;X射线示除骨小梁略微不清外,股骨头形态和骨密度均接近正常;发射型计算机断层扫描显示动态与静态图像已接近正常兔核素放射性骨显像结果: 组织病理学观察显示,骨小梁变细不明显,排列较规则,陷窝内骨细胞数量稍有减少,细胞核固缩边聚现象不严重,空骨陷窝数量较模型组明显减少.结论: 复方丹参注射液可通过改善血液流变学、降低空骨陷窝率而产生对股骨头缺血性坏死的预防作用.
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重组人干扰素-λ1的纯化与鉴定
背景: 2003年研究发现一个全新的Ⅲ型干扰素家族,即IFN-λs,包括λ1,2,3 三种亚型.目的;对在毕赤酵母中高效表达重组人干扰素-λ1(rhIFN-λ1)进行产率纯度分析.理化性质、受体表达鉴定以及抗肿瘤活性初步探讨.设计、时间及地点: 单一样本观察,于2006-09/2008-07在中国医学科学院基础所生物化学与分子生物学系完成.材料: 含rhIFNλ1表达质粒的酵母菌种pAO815-4 α F-IFNλ1/GS115,人宫颈癌细胞系Hela细胞和HCT116细胞,为中国医学科学院基础所医学分子生物学国家重点实验室保存.方法: 诱导含rhIFN-λ1表达质粒的甲醇营酵母Pichia pastoris进行表达,表达产物经阳离子交换层析及凝胶层析纯化.主要观察指标: 通过HPLC,质谱,毛细管电泳等鉴定其纯度及理化性质,反转录-聚合酶链反应及real-time荧光定量聚合酶链反应鉴定其在肿瘤细胞中特异受体的表达,应用四甲基偶氮唑盐比色法初步评价其抗肿瘤活性.结果: 毕赤酵母表达的rhIFN-1表达水平约9.23 mg/L,纯化后的纯度近90%.rhIFN-λ1等电点为8.01,相对分子质量为20 960.在Hela和HCT116中均检测到rhIFN-λ1受体小亚基IL-10R2和特片大亚基IL-28RmRNA的表达,但U937细胞中末检测到IL-28RmRNA的表达.rhIFN-λ1具有与IFN-α 2a相似的降低细胞增殖的作用,但在经检测无或极少表达IL-28R的细胞中此作用不明显.结论: rhiFN-λ1可以在毕赤酵母中实现高效表达,表达产物的理化性质与天然IFN-λ1一致,具有与IFN-α 2α相似的抗肿瘤活性,但对其特异受体分布少的骨髓造血系统降低增殖作用相对较弱.
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大鼠动脉硬化闭塞模型两种构建方法的比较
背景: 由于动脉硬化闭塞症的发病机制还不明确,所以建立动脉硬化闭塞症的病理动物模型,对于探明动脉硬化闭塞症的病 因、病理生理、发病机制及防治药物的研究与开发均具有重要的意义.目的: 比较单纯高脂饲料喂养及给予内膜损伤加高脂饲料喂养大鼠动脉硬化闭塞模型复制建立的方法.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,2007-08/2008-03于中国医科大学实验动物中心完成.材料: 清洁级3.0-4.0月龄健康纯种Wistar雄性大白鼠60只,体质量200 g.高脂饲料:62.8%基础饲料+20%猪油+150 g/L胆固醇+20g/L胆酸钠+2g/L丙基硫氧嘧啶.方法: 将60只大鼠随机分成3组,每组20只.普通饲养组给予普通饲料喂养;高脂饲养组给予高脂饲料喂养:高脂饲养加内膜损伤组给予内膜损伤加高脂饲料喂养.后两组同时给予维生素D3,30万u/kg体质量,右后肢肌肉注射,1次/月.主要观察指标: ①于内膜损伤后术后30 d,各组大鼠取血检测血浆总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇浓度变化.②于内膜损伤后术后7,30,90 d时,取大鼠左后肢股一腘动脉,行苏木精-伊红等染色,光镜下观察股-脑动脉的病理变化.结果: 高脂饮食组大鼠与正常饮食组大鼠相比,高脂饮食组大鼠血清胆大醇,三酰甘油和低密度脂蛋白月口固醇均明显升高.病理显示:7 d高脂饲养组内皮细胞少量脱落,高脂饲养加内膜损伤组内皮细胞完全脱落、弹力板松弛,平滑肌细胞排列紊乱.90 d高脂饲养组内皮细胞完全脱落、平滑肌和胶原纤维增多、增厚,为早期硬化改变.高脂饲养加内膜损伤组内膜增厚、大量乔噬脂质、类脂质细胞、管腔闭塞.结论: 单纯给予大鼠高脂、高肌固醇饲料喂养不易形成动脉硬化闭塞症痫变,大鼠股-腘动脉内注入蒸馏水损伤内皮加高脂饲料喂养可较快形成与人动脉硬化闭塞症相似的、较成熟的大鼠动脉硬化闭塞模型.
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糖尿病患者的足底动力学分析
背景: 研究显示糖尿病足底溃疡的好发部位在足底大承重区域.目的: 分析糖尿病患者与正常人足底压力、冲量、时间等改变、分布及影响因素.设计、时间及地点: 对照观察,实验于2006-05/06在首都医科大学生物医学工程学院和首都医科大学宣武医院血管外科完成.对象:选取宣武医院血管外科和内分泌科门老年精尿病患者30例,平均年龄(71±3)岁:同时在首都医科大学退休教职工和家属中选取健康老年人为30名作对照,平均年龄(68.38±6.11)岁.方法: 受试者均脱鞋以平常步态行走,使用footscan平板压力分布测试系统对其行走过程中的6组120个指标进行测定.主要观察指标: 足部10个区域的峰值压力、冲量、区域支撑时间、负载率.结果: 老年糖尿病患者与健康老年人共有包括左右足跖骨3区峰值压力和负载率、左足M1区冲量、左足M3区冲量、右足M3区冲量、左足12-T5区域支撑时间8个指标差异存在显著性意义.结论: 糖尿病患者足母趾和脚前掌部分受力较健康对照组大,行走时缓冲不充分,支撑时间长,是该部分容易发生溃疡的重要原因.
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血管内皮生长因子表达载体的构建及在内皮祖细胞中的表达
背景: 血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)具有很强的促进血管生成作用,但构建其真核表达质粒是否可转染血管内皮祖细胞并完整表达还不清楚.目的: 构建VEGF表达载体,并观察其在内皮祖细胞中的表达情况.设计、时间及地点: 观察性试验,于2007-12/2008-03在上海交通大学医学院附属新华医院科研中心实验室完成.材料: 质粒PDC315-VEGF165自备,质粒pIRES2-EGFP由美国国立卫生研究院Stanko Stojilkovic教授惠赠.方法: 运有DNA重组技术构建VEGF表达载体pIRES2-EGFP-VEGF.应用脂质体包裹的方法将载体转染猪外周血血管内皮祖细胞.主要观察指标: 采用荧光显微镜观察VEGF在内皮祖细胞内的表达,反转录-聚合酶链反应法检测VEGFmRNA表达水平,ELISA检测VEGF165蛋白表达情况.结果: 成功构建VEGF真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF.转染重组质粒pIRES2-EGFP-VEGF后,在内皮祖细胞内有VEGF的表达,VEGFmRNA和VEGF165蛋白表达水平均明显增加.结论: VEGF表达载体转染猪外周血血管内皮祖细胞后能有效增加VEGF基因的表达,能够获得较高水平的VEGF蛋白.
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早期生长反应基因1对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响
背景: 体内外研究已证实肺巨噬细胞合成和分泌肿瘤坏死因子α等参与肺组织局部损伤和炎症反应,但具体发生机制仍不明确.目的: 观察核转录因子早期生长反应基因1对巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α的影响.设计、时间及地点: 随机分组设计,于2004-06/2006-12在湘雅医学院病理学系完成.材料: 标准石英粉尘(SiO2)为Sigma公司产品;早期生长反应基因1抗体为Santa Cruz公司产品;小鼠巨噬细胞系RAW264.7购自中科院上海生物细胞研究所细胞库.方法: 实验将巨噬细胞分为正常对照组、二氧化硅刺激组、Egr-1+二氧化硅组和IgG+二氧化硅组,前两组加无血清培养基,后两组分别加入5,10,20 mg/L不同浓度的Egr-1和IgG抗体干预.主要观察指标: 酶联免疫吸附实验检测各组细胞上清中肿瘤坏死因子α蛋白的水平;反转录-聚合酶链反应检测细胞内肿瘤坏死因予α mRNA的表达.结果: ①与二氧化硅刺激组相比,不同浓度Egr-1+二氧化硅组细胞上清中肿瘤坏死因子α蛋白水平均下降(P<0.01),且10mg/L组与5,20mg/L组相比,差异有显著性意义(P<0.05).不同浓度IgG+二氧化硅组相比,上清液中肿瘤坏死因子α蛋白水平差异无显著性意义(F=1.008,P=0.438).②-二氧化硅刺激组肿瘤坏死因子α mRNA表达高于正常对照组(P<0.01),而Egr-1+二氧化硅组mRNA表达低于二氧化硅刺激组和IgG+二氧化硅组(P<0.01).结论: 二氧化硅致巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α增加可能通过激活核转录因子早期生长反应基因1介导的信号通路而实现.
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骶髂关节损伤与血管的应用解剖学测量
背景: 骶髂关节部位骨折脱位可导致血管的严重损伤.目的: 观察骶髂关节周围血管解剖学特征,明确各血管与周边组织的关系.设计、时间及地点: 单一样本观察.于2007-10/2008 01在南通大学解剖教研室完成.材料: 20具防腐成年尸体骨盆标本(南通大学解削教研室提供),男16具,女4具,年龄在30-60岁.方法: 40侧骨盆标本,依次选用小同的平面,采用前后双侧入路,观察血管的走行特点.主要观察指标: 测量血管直径及到骨盆后壁的垂直距离.结果: ①左侧髂总动脉距骨壁平均距离为(5.31±0.25)mm,右侧髂总动脉距骨壁平均距离N(5.47+0.23)mm.②髂外动脉自骼总动脉发出后于骶骨翼的前方向外下方走行,行程中于距起点(32.30±0.43)mm处斜跨骶髂关节的前方,其跨越骶髂关节处距骶髂关节的距高为(17.28±0.43)mm,于骶岬处距骶骼关节的距高分别为(2.20±0.21)cm和(2.95±0.25)cm.③髂内动脉左右侧口径无显著差别(P0.05).④左侧髂内动脉距骨壁距离大于右侧.⑤髂腰动脉至骨壁距离为(6.97±0.17)mm,小于10 mm,距骨壁较近.结论: 骶髂关节动脉解剖学特点决定了在骶髂关节骨折脱位中损伤的概率.根据测量结果可以得出:①骶髂关节脱位及骨折时,损伤髂总动脉的概率较小.②髂外动脉距骶髂关节的垂直距离较远,髂内动脉距骨壁距离较远,当发生骶髂关节部骨折时,骨折片直接刺伤血管的可能性较小.⑨髂内动脉距骶髂关节水平离较小,故当发生骶骼关节脱位半骨盆移位时,有可能受到牵拉损伤.④骶外侧动脉距骨壁较近,所以骶骨Ⅰ区骨折时易受损伤.⑤髂腰动脉至骨壁距离较近,故当发生骶髂关节脱位时半骨盆移位可能受到牵拉损伤.
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转化生长因子β 1对缺血再灌注损伤肺组织肿瘤坏死因子α及白细胞介素1 β含量的调节
背景: 肺缺血再灌注时,大量聚集在肺内的白细胞被激活.释放多种细胞因子如肿瘤坏死因子α、白细胞介素1 β等,进而介导冉灌注损伤.新近研究发现,转化生长因子α 1对犬移植肺组织缺血再灌注损伤有保护作用.目的: 观察转化生长因子β 1干预后,肺缺血再灌注损伤肺组织肿瘤坏死因子α和白细胞介素1 β的含量变化.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,于2007-08/10在解放军第二军医大学附属长海医院胸心外科实验室完成.材料: 清洁级SD大鼠30只,随机分为假手术组、缺血再灌注组、转化生长因子β 1组,10只/组.转化生长因子β 1为PeprotechINC.公司产品.方法: 缺血再灌注组与转化生长因子β 1组大鼠通过结扎肺门阻断肺循环1 h、再灌注2 h建立原位肺缺血再灌注损伤模型,假手术组大鼠仪以10#丝线绕过肺门后不结扎.肺循环阻断前15 min,各组颈静脉注射肝素抗凝,转化生长因子β 1组同时注射10 ug/kg转化生长因子β 1.主要观察指标: 再灌注2 h后摘取左肺组织,光镜下观察肺组织形态变化,测定湿干重比及肺泡损伤指数,ELISA法检测肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α和白细胞介素1 β的含量. 结果: 30只大鼠均进入结果分析.假手术组肺组织无明显病理改变:缺血再灌注组可见明显的组织水肿及中性粒细胞浸润:转化生长因子β 1组轻微组织水肿,少量中性粒细胞浸润.与假手术组比较,缺血再灌注组湿干重比及肺泡损伤指数均显著升高(P<0.01);与缺血再潜注组比较,转化生长因子β 1组上述两项指标均明显降低(P<0.05).与假手术组比较,缺血再灌注组肿痛坏死因子α及白细胞介素1 β含量均显著升高(P<0.01);与缺血再灌注组比较,转化生长因子β1组上述两项指标均明显降低(P<0.05,P<0.01).结论: 转化生长因子β 1能够明显改善肺缺血再灌注损伤,该作用与其有效抑制肿瘤坏死因子α及白细胞介素1 β的表达密切相关.
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重组胸腺素β 4通过调节血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子促进皮肤创伤愈合
背景: 由于机体自身修复愈合的能力极其有限,一旦发生损伤或者病变很难自愈.近年来,胸腺素β 4促进创伤愈合的作用受到关注,为创伤愈合药物的研究提供了一个新方向.目的: 通过制作大鼠皮肤全层创伤模型,观察局部给予重组胸腺素β 4对创面血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子表达的调节作用,并分析其剂量效应.设计、时间及地点: 细胞因子水平的随机对照动物实验,于2007-03/2008-01在南开大学医学院解剖教研室完成.材料: 胸腺素β 4由北京诺思兰德生物技术有限公司提供.方法: 纳入雄性SD大鼠60只,采用直径8 mm的自制打孔器在大鼠脊柱两侧脊肋角处各制备1个全层皮肤缺损模型.将大鼠随机分为胸腺素β 4 40,120,360 mg/L组及对照组,每组15只.分别于模型制备后即刻,每天早7:00、晚7:00给每个伤口表面滴加相应剂量的胸腺素β 4 50 μL及等量磷酸盐缓冲液.主要观察指标: 于造模后2,4,7 d,每组每时相点取5只大鼠背部全层皮肤标本行苏木精-伊红和三原染色观察组织形态学变化,采用免疫组织化学法检测血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的表达.结果: 创面组织形态观察结果示,与对照组相比,胸腺素β 4各剂量组造模后毛细血管增多,成纤维细胞、胶原纤维、网状纤维增多,排列较规则,以胸腺素β4120mg/L组明显.胸腺素β 4处理后4d血管内皮生长因子表达多,造模后7 d表达减少,胸腺素β 4 120 mg/L组血管内皮生长因子表达强度保持在较高水平,阳性血管面积大于40,360 mg/L组(P<0.05-0.01).胸腺素β 4 120 mg/L组造模后2 d碱性成纤维细胞生长因子表达较强,造模后4,7 d表达逐渐减弱(P<0.01).结论: 实验中120 mg/L胸腺素β 4可使血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子持续稳定较高表达.在愈合早期促进血管再生,促进肉芽组织生长和成纤维细胞的增殖、分化,在愈合晚期,下调血管内皮生长因子的表达,同时抑制碱性成纤维细胞生长因了过度表达.
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正常成人裸足与穿普通运动鞋足底压力的比较
背景: 国内外对正常人群足底压力的研究大多集中在未穿鞋情况下的足底压力分布,真正阐述鞋对足相关运动学与动力学参数的影响还不多见.目的: 探讨正常人自然行走过程中未穿鞋和穿普通运动鞋两种情况大压力值、大压强值、负荷率、冲量等参数特征,比较裸足与穿鞋力学参数的关系.设计、时间及地点: 同体对照分析,实验于2007-10在江苏省南京体育学院运动人体科学实验室完成.对象:采用随机抽样的方法,抽样2005级南京体育学院武术系男大学生10名,年龄(21.00±2.40)岁,体质量(71.53±3.16)kg、身高(176.32±2.62)cm、足长(25.67±0.92)cm,统一穿41码运动鞋.按国务院<医疗机构管理条例规定,受试者知情同意,自愿参加本次实验.方法: 采用Foot scan 7.0平板式足底压测试系统,对10名受试者进行自然行走过程中动态足底压力测试,包括未穿鞋和穿普通运动鞋两种情况.主要观察指标: ①足底各区域大压力值分布、大压强值分布、负载率分布及冲量分布.②裸足与穿鞋力学参数的关系.结果: 未穿鞋情况下:足跟内侧平均峰力值大,其次足第2、3跖骨,足底平均峰力值较小的区域主要分布在第2～5趾和第5跖骨,行走过程中压强较大的区域主要分布存第2～5趾、第2跖骨以及足跟部;负荷率大的区域主要分布存足跟外侧;足底冲量大的区域主要分布在第2、3跖骨和足跟部,冲量较小的区域主要分布在第2-5趾、第5跖骨.穿鞋情况下,足弓部平均峰力值大,其次足第1趾,足底平均峰力值较小的区域主要分布在第5跖骨,其他区域平均峰力值分布较均匀,行走过程中压强较大的区域主要分布在足弓部;负荷率大的区域主要分布在足弓和足跟郎,足底冲量大的区域主要分布在足弓部,冲量较小的区域主要分布在第5跖骨.结论: 行走过程中,穿鞋较末穿鞋前足、足弓和足跟部的各参数均升高,特别是第2-5趾骨、足弓部更加明显.
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血管钙化大鼠接受阿仑磷酸钠干预后的血管组织学变化
目的: 通过观察阿仑磷酸钠干预后血管钙化模型大鼠血管的组织病理学变化,验证阿仑磷酸钠对血管钙化的治疗作用.方法: 选用SD大鼠30只,适应性喂养1周后,按随机数字表法分成3组(n=10),维生素D3模型组及阿仑磷酸钠组分别在分组即时、分组后24,48 h给予维生素D3 25万U/(kg·d),正常对照组在同一时刻给予等容量生理盐水对照灌胃.实验第4天开始.阿仑磷酸钠组给予阿仑磷酸钠0.9 mg/(kg·d)进行治疗.所有大鼠于实验第6周末麻醉后处死,取主动脉,主动脉弓固定后切片,苏木精-伊红染色后光镜下观察其病理变化:测血管钙含量;行Von Kossa染色,用Image-Pro Plus 6.0病理图像分析软件计算各组大鼠钙化斑块面积百分比;同时检测大鼠血脂含量.结果: 阿仑磷酸钠组大鼠主动脉弓血管壁有乳白色钙化斑块,但数量较维生素D3模型组明显减少;镜下可见血管中层平滑肌有较少部位出现坏死,坏死而积明显少于维生素D3模型组.阿仑磷酸钠组大鼠血管钙含量、钙化面积百分比及血清总胆固醇浓度均较维生素D3模型组下降(P<0.01).结论: 组织病理学观察结果显示,阿仑磷酸钠可明显减少维生素D3造成的血管钙化大鼠模型的血管钙化面积;同时定量结果也证实,阿仑磷酸钠可降低血管钙及血清总胆固醇水平.
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褪黑素对糖尿病周围神经病变大鼠氧化应激及周围神经功能和形态的作用
背景: 课题组前期针对糖尿病肾病的实验显示,褪黑素可以显著提高糖尿病大鼠血浆和肾脏内抗氧化酶的活性,改善肾脏的形态学变化.目的: 在前期实验的基础上,进一步观察褪黑素对糖尿病周围神经病变大鼠氧化应激和周围神经功能和形态的作用.设计、时间及地点: 随机对照动物试验,于2005-04/11在解放军第二军医大学动物实验中心完成.材料: 2月龄健康雄性SD大鼠,单次腹腔注射链脲佐菌素60mg/kg诱导建立糖尿病大鼠模型.方法: 将糖尿病模型大鼠维持饲养8周建立糖尿病周围神经病变大鼠模型,然后按体质量随机分为3组:模型组,褪黑素0.5,10mg/(kg·d)组,以未造模、鼠龄及体质量相匹配的8只大鼠为正常对照组.褪黑素0.5,10mg/(kg·d)组大鼠每日16:00灌胃给予相应剂量的褪黑素,其他2组大鼠予等量体积分数为0.02的乙醇溶液滞胃.持续8周.主要观察指标: 检测各组大鼠坐骨神经内超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧物酶活性和脂质过氧化产物丙二醛含量的变化,大鼠摆尾阈值、坐骨神经神经传导速度和超微结构的变化.结果: 各组糖尿病大鼠坐骨神经传导速度显著低于正常对照组(P<0.01),褪黑素0.5,10mg/(kg·d)治疗后神经传导速度高于模型组(P<0.05,0.01).褪黑素0.5,10 mg/(kg·d)组丙二醛含量低于模型组(P<0.01),血清超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧物酶活性高于模型组(P<0.01).模型组大鼠坐骨神经多数有髓纤维髓鞘板结构破坏严重,出现裂隙、空泡等现象,轴突严重被挤压.轴突变性、萎缩.褪黑素治疗后坐骨神经纤维的髓鞘仍不正常,但较模型组明显减轻,褪黑素10 mg/(kg·d)组改变要好于褪黑素0.5 mg/(kg·d)组.结论: 褪黑素能有效抑制糖尿病周围神经病变大鼠的氧化应激反应,改善神经功能和结构变化.糖尿病时自由基损伤和抗氧化能力的降低可能在糖尿病周围神经病变的发生发展中发挥重要作用.
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游泳训练高脂血症小鼠脂质代谢的变化
背景: 降脂药物都具有一定副作用,故运动改善血脂的作用越来越引起人们的重视.目的: 观察游泳训练对高脂血症小鼠血脂的影响.设计:随机对照动物实验.材料: 雄性5周龄昆明种小鼠48只,随机分为正常对照组、模型对照组、饮食控制组和游泳训练组4组,每组12只.正常对照组喂饲酱通饲料,其余3组饲喂高脂饲料3周建立小鼠高脂血症模型.方法: 造模后处死模型对照组,另3组都转入正常饮食,游泳训练组开始进行6周的游泳训练,水温(30±2)℃,水深35 cm,6 d/周,第1周游30min/d,以后每剧递加10min,至第6周游泳90min/d.主要观察指标: 测定各组腹腔脂肪、肝脏超氧化物歧化酶、丙二醛和胆固醇,血清三酰甘油、胆固醇、高密度脂蛋白胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇.结果: 饮食控制组和游泳训练组小鼠体内脂肪蓄积均减少,但游泳训练的效果更明显.游泳训练组小鼠血浆三酰甘油、低密度脂蛋白胆因醇低于模型对照组,高密度脂蛋白胆固醉高于模型对照组(P<0.05,0.01),且与正常对照组相比无显著差别.饮食控制组和游泳训练组小鼠肝脏的超氧化物歧化酶活性显著高于模型对照组,丙二醛和胆固醇含量显著低于模型对照组(P<0.05,0.01),游泳训练组的效果更显著.游泳训练对由高脂血症所引起的脂质过氧化加剧有抑制作用,还可以降低肝组织的胆固醇水平,其效果好于饮食控制组.结论: 游泳训练加上饮食控制能够减少高脂血症小鼠脂肪蓄积,抑制山高脂血症引起的脂质过氧化加剧,调节血脂代谢,效果优于单纯的饮食控制.
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骨折愈合延迟大鼠在模拟失重状态下的变化
背景: 失重状态是一种特殊物理环境,长期处于该环境易引起机体骨质疏松等改变,而此环境下可影响骨折愈合,但骨折愈合延迟的机制尚不清楚.目的: 通过电子显微镜、免疫组织化学等观察在模拟失霞情况下大鼠后肢骨折的愈合过程,观察其组织形态和细胞因子的变化及其特点.设计、时间及地点: 随机对照动物实验,于2005-08/2007-12在解放军空军总医院中心实验室完成.材料: 动物分组:SD成年清洁级雄性大鼠64只,体质量(170±5)g,随机分为失重组和单纯骨折组,每组32只.方法: 制备64只大鼠后肢腓骨骨折模型.单纯骨折组骨折形成后动物自由活动,失重组采用头低位尾悬吊模拟失重状态.两组大鼠分别于处理7,14,21,28 d各墩8只麻醉后处死取骨折侧腓骨.主要观察指标: 用二步法免疫组织化学检测骨折断端骨形态发生蛋白2表达.透射电镜观察模拟失重后肢骨折断端的愈合特点.结果: 64只大鼠全部进入结果分析.失重7d与单纯骨折相比骨形态发生蛋白表达筹异无显著性意义(x2=1.640,P0.05);失重14 d与单纯骨折相比其骨折愈合较慢和骨形态发生蛋白表达低下(x2=3.000,P<0.05);失重21 d与单纯骨折相比骨折愈合形态学改变延迟,骨形态发生蛋白表达显著降低(x2=4.063,P<0.05);失重28d与单纯骨折相比,病理学显示骨折愈合明显延迟、骨形态发生蛋白2表达降低(x2=4.655,P<0.05).结论: 模拟失重状态对后肢骨折大鼠骨折愈合过程有延迟作用,模拟失重状态持续的时间越长,则对后肢骨折大鼠的延迟愈合越明显.
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组织工程尿道在裸鼠皮下的埋置
背景: 由于创伤、先天畸形、肿瘤或手术继发的尿道缺损、狭窄、憩室等病理状况下,需要采用自体组织修复其缺损.目的: 验证构建组织工程化尿道的可行性.设计、时间及地点: 观察性实验,于2005-01/2006-01在中山大学林百欣医学研究中心完成.材料: 雄性新西兰兔10只,体质量3.0-3.5 kg,用于制备脱细胞尿道;4-6周龄BALB/cA-nude裸鼠20只,体质量18-20g,与细胞外基质材料复合体进行体内培育.方法: 取新西兰兔完整尿道,脱细胞后形成细胞外基质材料,切取成体新西兰兔阴茎头约1/2大小,组织块法培养扩增兔平滑肌细胞;之后将尿道海绵体平滑肌细胞种植到脱细胞尿道基质上,将其植入裸鼠背部皮下进行培育.实验分为2组,实验组埋置细胞材料复合体,对照组埋置未接种细胞的单纯脱细胞尿道基质.主要观察指标: 植入后1,2,4,6,8周取材,行大体和组织学及电镜观察细胞材料复合体的生长情况,免疫组织化学鉴定平滑肌细胞的表达.结果: ①大体观察裸鼠背部切口愈合良好,饮食活动正常.植入后1,2周实验组脱细胞基质表面已有少量的组织膜形成:4周组织膜逐渐增厚,有小血管长入;6,8周脱细胞基质材料逐渐被新的细胞替代.②苏木精-伊红染色可见,随着时间延长,脱细胞材料逐渐被吸收,被各种细胞代替.其中平滑肌细胞多,并可见大小不等的血管长入基质,部分有形成血窦的倾向;提示复合材料在裸鼠体内逐渐形成类似正常尿道的组织结构.⑧电镜观察从第4周有血管长入基质,可见较多的平滑肌细胞和内皮细胞及少量的成纤维细胞和巨噬细胞,并有部分平滑肌细胞凋亡.④a-平滑肌肌动蛋白抗体进行免疫组织化学染色后可见有平滑肌细胞生长.结论: 采用组织工程技术可再造出类似于正常尿道的海绵体组织.
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重组人骨形态发生蛋白2对兔椎间盘成骨作用的诱导
背景: 重组人骨形态发生蛋白2作为一种新约已应用于临床.但在椎间盘内诱导成骨的研究报道很少.目的: 通过动物实验,观察重组人骨形态发生蛋白2埘兔椎体间融合的影响.设计、时间及地点: 随机对照动物实验多水平评估,于2003-02/07在肯岛大学医学院附属医院完成.材料: 24只纯种成年新西兰大白兔,体质量3.5-4.5 kg,分离暴露L4-5、L5-6椎间盘;重组人骨形态发生蛋白2,1 mg/支,纯度≥95%,无菌包装,购自北京市百灵克生物制品有限公司.方法: 24只大白兔随机投币法分为实验组和对照组,每组12只.实验组向L4-5椎间盘的髓核中产射含200 μg重组人骨形态发生蛋白2的生理盐水溶液20uL;向L5-6的髓核中注射等量的生理盐水作为自身对照;对照组动物L4-5椎间盘的髓核中注射生理盐水20 μL.主要观察指标: 术后10,30,60,90 d应用手法检杏、组织学和影像学观察注射节段的形态变化.结果: 纳入新西兰大白兔24只,均进入结果分析.①实验组10 d L4-5节段活动范围无明显变化;30 d活动范围轻度受限:60 d活动范围明显受限:90 d L4-5节段皆固定.作为自身对照的L5-6节段及对照组关节活动范围无明显变化.②实验组10 d L4-5椎体间隙变窄:90dL4-5椎间隙消失,椎体间形成骨性融合.对照组及作为自身对照的L5-6节段椎间隙透光度无明显改变.③实验组10 d髓核细胞逐渐变小,90 d部分软骨终板已转化为成熟的编织骨:纤维环的胶原纤维结构逐渐消失,10 d和30 d均可见大量间充质细胞在纤维环外围聚集;90 d纤维环靠近软骨终板处已形成成熟的编织骨.对照组各时间点组织学形态无明显变化.结论: 重组人骨形态发生蛋白2可诱导椎间盘成骨,达到椎体间融合的目的.
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转化生长因子β 1与软骨源性形态发生蛋白1修复关节软骨缺损
背景: 研究表明,转化生长因子β 1在诱导软骨分化和维持软骨表型上起着重要作用,骨形态发生蛋白具有促进祖母细胞聚集及向软骨细胞的分化,使去分化的软骨细胞重新恢复表型.目的: 验证转化生长因子β 1与软骨源性形态发生蚩白1在修复关节软骨缺损中的作用.设计:分组对照动物实验.材料: 软骨源性形态发生蛋白1、转化生长因子β 1为PEPROTECH公司产品;健康4-6个月青紫蓝兔30只.方法: 选用青紫蓝兔30只,共60个关节,相同方法制备关节软骨直释4 mm的全层软骨缺损模型,随机分成3组,每组20个关节.转化生长因子β 1组、注射软骨源性形态发生蛋白1组、生理盐水对照组,分别于术后2～6周关节腔内相应注射100 μg/L转化生长因子β 1、100 μg/L软骨源性形态发生蛋白1和生理盐水各1 mL,1次/周.主要观察指标: 分别于术后12周,在各组动物软骨缺损区取材,行大体观察、光镜观察及大体评分和组织学评分.结果: 大体及组织学观察显示:转化生长因子β 1组修复组织高度、质地、颜色接近于正常软骨.缺损处被成熟、新生类软骨细胞修复,排列较艳齐,与软骨下骨结合紧密.软骨源性形态发生蛋白1组与转化生长因子β 1组基本一致.生理盐水对照组修复组织覆盖面积、高度不完全,质韧不透明.大体评分和组织学评分表明:转化生长因子β 1组和软骨源性形态发生蛋白1组修复结果良好,两组之间差异显著性意义(P0.05),均优于生理盐水对照组(P<0.05).结论: 转化生长因了β 1、软骨源性形态发生蛋白1都具有较强的修复软骨能力,是修复关节软骨缺损的良好的生长因子,而软骨源性形态发生蛋白1较转化生长因了β 1价格较低,无骨软骨赘和正常关节软骨的退变,在临床应用及基础研究更为理想.
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碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖与分化的影响
背景: 体外培养软骨细胞经历多次传代后,其增殖能力将逐渐退化.实验表明,碱性成纤维细胞生长因子可促进软骨细胞增殖,并可能影响软骨细胞的表型与分化.目的:观察碱性成纤维细胞生长因子对生长板软骨细胞增殖和分化的影响,并筛选其用于体外软骨细胞培养的佳剂量.设计、时间及地点:以细胞为观察对象的观察对比实验,于2004-10/2005-02在暨南大学医学院生化教研室组织工程实验室完成.材料: 选用12只新西兰白兔用于分离软骨细胞,碱性成纤维细胞生长因子由英国Peoro Tech公司生产.方法: 分离并在低血清条件下培养兔生长板软骨细胞.根据实验需要加入0.1,2.5,5,10,25,50及100 μg/L 8个剂量的碱性成纤维细胞生长因子,进行各项指标观察.主要观察指标: 应用改良四甲基偶氮唑比色法检测细胞增殖倍数: 应用羟脯氨酸法测定软骨细胞胶原产量:应用酶动力学方法测定碱性磷酸酶活性.结果: ①碱性成纤维细胞生长因子剂量在5-100 μg/L,范围内可以促进软骨细胞增殖,并以25 μg/L时刺激效果为显著.②当碱性成纤维细胞生长因子剂量高?5 μg/L时,软骨细胞的胶原合成被抑制.③当碱性成纤维细胞生长因子剂量高于1 μg/L时,软骨细胞的碱性磷酸酶活性被抑制.结论: 碱性成纤维细胞生长因子可以刺激生长板软骨细胞增殖.并在剂量高于25μg/L时抑制生长板软骨细胞的分化.
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腺病毒介导骨形态发生蛋白2基因对免软骨细胞的影响
背景: 研究证实骨形态发生蛋白2具有促进软骨细胞增殖、分化的能力.目的: 进一步验证由腺病毒介导的骨形态发生蛋白2对兔软骨细胞增殖的作用.设计、时间及地点: 对比观察,实验于2006-01/2007-12在苏州大学附属第一医院骨科实验室完成.材料: 5.0月龄健康的新西兰白兔4只,体质量3.0-4.0 kg,雄雌不限.携带骨形态发生蛋白2基因的腺病毒载体,由苏州大学附属第一医院骨科实验室保存.方法: 取兔耳郭的弹性软骨进行细胞培养,再以腺病毒为载体转染骨形态发生蛋白2到软骨细胞内作为实验组,未转染的作为对照组.主要观察指标: 采用阿利新蓝染色、四甲基偶氮唑盐比色法和糖胺聚糖定量测定等方法观察软骨细胞增殖和分化.结果: 实验组中的软骨细胞数量多,形态均一,融合率高,酸性黏多糖也较未转染组多.四甲基偶氮唑盐比色法和糖胺聚糖定量检测结果示实验组均高于未转染组.结论: 腺病毒介导的骨形态发生蛋白2能促进软骨细胞增殖、保持软骨细胞的分化表型.
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异位骨化发病机制的研究进展
异位骨化是一种病理性的骨形成,会造成受累关节的失功能,其形成受外因和内因的共同影响,有研究发现与手术及创伤、细胞因子、遗传因素以及围手术期的用药有关,但具体的发病机制日前尚不明了.成熟的异位骨化骨在组织学及影像学上表现与正常骨极其相似,动态的组织形态测定提示相对于正常骨,异化骨化骨代谢活性更高.形成异位骨化的危险因素很多,目前被广泛接受的有:严重的中枢神绎损伤、长时间的昏迷、患肢的痉挛状态、患肢制动以及血清碱性磷酸酶升高.今后应加强在分子水平探讨与异位骨化形成的相关因素,为更好地预防创伤、手术后异位骨化的形成以及治疗提供支持.
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骨折愈合机制的现代研究
随着分子生物学的发展,特别是生长因子及其受体的发现,骨折愈合机制的研究也进入分子水平.研究表明:骨折发生后短期内局部组织即已释放多种生长因子,至修复后期,骨与软骨细胞仍产生多种生长因子,这些生长因子相互作用,共同促进骨折愈合.关于骨折愈合中某些细胞外基质蛋白的表达,部分细胞的迁移、分化及增殖等已有一些研究报道.文章从分子水平归纳总结活性因子及细胞外基质蛋白在骨折愈合过程中的作用.
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椎间盘组织工程化的研究现状
椎间盘组织工程是通过在体外构建完整的椎间盘组织,然后植入原有退行性变的椎间盘以达到治疗的目的.研究主要集中在椎间盘细胞的培养,组织工程支架的选择、椎间盘组织的构建与植入等3方面.目前对细胞培养的常用方式主要有种,而进行微重力三维培养,不仅符合人体的立体结构而且可以减少培养液对细胞产生的机械剪切力,克服重力沉降引起的接触限制,能够更好的促进细胞生长,对椎间盘细胞培养则是一种新的尝试:组织工程支架种类繁多,都有其自身的优缺点.尚无公认的合适的支架材料,在此方面仍需要进一步的研究;构建完整的椎间盘组织并进行体内植入已经取得动物实验的成功,表明组织工程学培养的椎间盘细胞植入退行性变的椎间盘内的确有部分逆转椎间盘退行性变的作用.
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植入异物法构建自发性脑出血实验动物模型
目前对于自发性脑出血的病理生理机制及治疗方法的研究大多基于动物试验.国内外不同实验室已经针对多种动物制作了实验性脑出血模型.根据其脑内移植的组织不同,分为缺血诱发脑出血、外伤导致脑出血、自发性脑出血和颅内植入异物导致脑出血4类.颅内植入异物导致脑出血根据植入异物的不同,又分为植入惰性物质导致的脑出血、植入生物制剂诱导脑出血、植入自体动脉血模拟脑出血3种.文章归纳总结实验性脑出血动物模型总类、制作方法和特点.
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前列地尔和小牛血去蛋白提取物联合应用治疗糖尿病足
目的: 观察前列地尔和小牛血去蛋白提取物注射液联合治疗糖尿病足的效果.方法: 2004-02/2007-02重庆三峡中心医院内分泌科收治的糖尿病足患者44例,均无严重心、肺、肝、肾功能损害并排除其他原因引起的神经病变,随机分为4组:前列地尔组12例,小牛血去蛋白提取物组10例,联合治疗组11例,空白对照组11例.各组患者均给予糖尿病足常规治疗,同时前列地尔组静脉推注前列地尔10 μg+生理盐水10mL,小牛血去蛋向提取物组静脉滴注小牛血去蛋白提取物注射液20 mL,联合治疗组联合使用上述两药,空白对照组不给药,1次/d,2周为1个疗程,共3个疗程.结果: 与治疗前比较,治疗后各组空腹血糖、糖化血红蛋白含量均明显降低(P<0.05),血肌酐、总胆固醇、三酰甘油、谷单转氨酶等指标无明显变化(P0.05).联合治疗组创面愈合率、肉芽成熟程度均优于其他各组(P<0.05),2例患者在前列地尔使用初期出现推注局部血管疼痛,伴有轻度瘙瘁,穿刺部位沿血管走向出现10-15 cm发红的现象,减慢推注速度1周左右该反应完全消失,无其他不良反应.结论: 前列地尔和小牛血去蛋白提取物注射液联合治疗糖尿病足是一种安全有效的方法.
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广东省老年人5663名体质现状及体育行为调查
采集2000年国家及广东省国民体质监测报告中体质监测和问卷调查的数据,对广东省老年人的体质状况及体育锻炼行为进行统计分析.结果显示,广东省老年人各项指标整体变化趋势与全国一致,大多数指标均比全国同龄人群小(P<0,05,0,01):广东省老年人群对参加体育锻炼的意识较强,参加体育锻炼的人数达60,3%,无兴趣和家务繁重是不锻炼的主要原因.参加锻炼人群体育活动频率较高,时间也较长,主要锻炼方式为健身操和长走;主要锻炼场所为公园、空地、体育场馆.
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青年人群腰椎骨密度及标准差对骨质疏松检出率的影响:多中心、大样本分析
背景: 不同地区骨峰值和标准差不同,对骨质疏松诊断率有较大影响.探讨建立一完整数据库为中国人骨质疏松诊断准确性提供依据.目的: 探讨青年人腰椎骨密度和标准差正常参考值影响骨质疏松症检出率的程度.设计、时间及地点: 调查分析,于1997-01/1999-12分别在北京、上海、广州、南京、嘉兴和成都市完成.对象:采用前瞻性及回顾性方法对全国6个中心骨密度参考数据库中11 418人进行调查统计分析;男3 666人,女7 752人:年龄20岁～90岁;分别来自北京(2 385人)、广州(1 178人)、上海(1 404人)、南京(2 938人)、成都(1 425人)、嘉兴(2 088人),受试者来源于社区调查、健康体检和健康志愿者.方法: 用GE-Lunar公司的DXA仪测量骨密度,调查全国6个中心11 418人L2～L4腰椎后前位和髋部骨密度,建立了骨密度参考数据库.6个中心的仪器内部精度0.3%～0.7%,仪器间的精度1.1%.主要观察指标: ①6个中心不同年龄组腰椎骨密度分布.②青年人群骨密度及其标准差值对骨质疏松症检出率的影响.结果: 中国汉族女件以腰椎进行骨质疏松症诊断的青年人群的骨密度和标准差值,6个中心,大差值分别为0.098 g/cm2和0.027 g/cm2.用6个中心及总体各自的青年人平均骨密度和标准差值为参考标准,对同-人群计算T-score和获得的骨质疏松症检出率不相同:发现肯年人平均骨密度每变化0.01 g/cm2,则骨质疏松症检出率变化1.6%(呈正相关),其标准差值每变化0.01 g/cm2,则骨质疏松症检出率变化4%(呈负相关).结论: 青年人平均骨密度和标准差值不同引起骨质疏松症检出率也不相同.为了让不同中心的骨质疏松症检出率有可比性,建议同一个类型的骨密度仪,同一个种族同一个地区用一个设计较完善大样本的参考数据库,以其青年人正常参考值计算T-score.
