中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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近似体腔温度不宜体外培养大鼠A型精原细胞
背景:温度会影响体外培养精原细胞的增殖与凋亡.目的:观察不同体外培养温度对A 型精原细胞细胞周期及增殖相关基因c-kit、CyclinD3 的影响.方法:通过两步酶消化法分离大鼠生精细胞,分别置于32,37 ℃条件下与支持细胞进行体外共培养,观察其形态及细胞数变化等生长特性;培养第8 天采用非连续密度梯度离心、差异性贴壁分离富集A 型精原细胞.结果与结论:体外培养第1 天,32,37 ℃组均可见悬浮的呈圆形或卵圆形的生精细胞和贴壁的呈长梭形或不规则形的支持细胞;从第4 天开始,37 ℃组生精细胞数、生长状态逐渐降低,第8 天时,37 ℃生精细胞数明显低于32 ℃组 (P < 0.05);体外培养第8 天,32 ℃组处于S 期A 型精原细胞所占比例明显高于37 ℃组(P < 0.05),32 ℃组A 型精原细胞c-kit、CyclinD3 mRNA 及蛋白的相对表达量均高于37 ℃组(P < 0.05).说明在37℃这种近似体腔的温度下体外培养生精细胞会抑制精原细胞的增殖.
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川芎嗪可影响肿瘤坏死因子a刺激肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB及相关基因产物的表达
背景:川芎嗪延缓肝纤维化形成的机制尚不清楚.目的:观察川芎嗪对肿瘤坏死因子a 刺激的肝星状细胞增殖及结缔组织生长因子、核因子κB 及其相关基因产物白细胞介素6 表达的影响.方法:体外培养HSC-T6 细胞株,取对数生长期的细胞用于实验.实验分为4 组:对照组仅加入细胞;TNF-a 组加入10 μg/LTNF-a;川芎嗪干预组先加入终浓度为10 μg/L 的TNF-a 作用30 min 后,分别加入川芎嗪50,100,200,400,600,1 000 mg/L;PDTC组先加入终浓度为10 μg/L的TNF-a 作用30 min 后,再加入终浓度18 μmol/L 的核因子κB 阻断剂PDTC.结果与结论:MTT 结果显示100,200,400,600,1 000 mg/L 的川芎嗪均能抑制HSC-T6 增殖,且呈剂量依赖性.免疫细胞化学染色及Western blot 检测发现10 μg/L 的肿瘤坏死因子a 刺激后,HSC-T6 细胞结缔组织生长因子、核因子κB 及白细胞介素6 的表达明显增多(P < 0.01 或P < 0.05),200,400,600 mg/L 的川芎嗪及18 μmol/L 的PDTC均可明显降低肿瘤坏死因子a 刺激后HSC-T6 细胞结缔组织生长因子、核因子κB 及白细胞介素6 的表达(P < 0.01),且随着川芎嗪质量浓度的增加,抑制作用增强,PDTC的抑制作用明显.相关性分析结果显示HSC-T6 细胞结缔组织生长因子和核因子κB 的表达呈正相关(r=0.980,P < 0.01).说明川芎嗪可以抑制肝星状细胞结缔组织生长因子、核因子κB 及白细胞介素6 的表达,抑制肝星状细胞的增殖.
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胆管癌细胞体外三维培养模型建立与二维培养体系中生长代谢的比较
背景二维细胞培养是目前体外研究恶性肿瘤和检测抗肿瘤药物的常用方法,但存在局限性.目的建立胆管癌细胞体外三维培养模型,比较在二维和三维培养体系中胆管癌细胞生长及代谢的差异.方法将胆管癌细胞株QBC939 培养于二维培养体系及Cytodex-3 或Cytopore-2 的三维培养体系中,观察细胞形态和数量,测定培养上清液中葡萄糖、乳酸浓度,计算细胞生长代谢动力学参数.结果与结论与二维和Cytodex-3 三维培养体系相比,由Cytopore-2 构成的三维培养体系中细胞在微载体上贴壁率较高,分布均匀,所达到的细胞密度高,且细胞的葡萄糖比消耗速率和乳酸比生成速率明显低于二维和Cytodex-3 三维培养系统(P < 0.05).结果证实,采用Cytodex-3 或Cytopore-2微载体培养体系均可建立胆管癌细胞的三维培养模型,且Cytopore-2 三维培养体系优于二维和Cytodex-3 三维培养体系.
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葛根素联合雌二醇对去卵巢大鼠骨质疏松症的治疗作用
背景:雌激素治疗绝经后骨质疏松症产生的不良反应较大.目的:观察小剂量葛根素联合雌二醇对去卵巢大鼠骨组织的影响.方法:120 只健康雌性大白鼠等分成只切除卵巢旁的一小块脂肪垫的假手术组和切除双侧卵巢的去卵巢模型组、葛根素组、雌二醇组及葛根素+雌二醇组.1 周后葛根素组、雌二醇组和雌二醇+葛根素组分别皮下注射葛根素(50 mg/kg,1 次/d)、雌二醇(200 μg/kg,2 次/周)和雌二醇(100 μg/kg,2 次/周)+葛根素(25 mg/kg,1 次/d).结果与结论:去卵巢模型组大鼠骨组织稀疏,骨钙、磷水平和骨密度明显低于假手术组(P < 0.01),而经雌二醇和/或葛根素治疗后大鼠骨组织形态明显改善、骨钙、磷水平和骨密度明显升高.其中小剂量的葛根素联合雌二醇治疗与较大剂量的葛根素或雌二醇治疗效果接近.提示较小剂量的雌二醇与葛根素联合治疗也可对去卵巢大鼠骨质疏松症产生良好的治疗效果.
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兔腓肠肌表面肌电信号与肌肉收缩及运动中枢的关系
背景:以往的验证实验均采用电刺激方法诱发肌肉收缩,施加电流的影响使接收到的表面肌电信号混有外来电流成分,无法有效分析其与肌肉收缩,特别是与高位运动中枢的关系.目的:观察新西兰兔腓肠肌表面肌电信号与肌肉收缩及高位、低位运动中枢的关系.方法:在新西兰兔清醒状态下通过针刺右侧跟腱诱发腓肠肌收缩,局麻清醒状态下离断右侧坐骨神经,分别在针刺跟腱、钳夹离断的坐骨神经远侧断端、针刺腓肠肌和被动活动腓肠肌时,检测腓肠肌表面肌电信号的强弱及类型.局麻下于L3 平面横断脊髓,针刺左侧跟腱诱发腓肠肌收缩,检测腓肠肌表面肌电信号的强弱和类型.结果与结论:正常状态下经针刺跟腱诱发腓肠肌随意收缩时,可接收到400 μV 、持续4 s 的宽底随意波;横断脊髓后针刺跟腱诱发的反射性腓肠肌收缩接收到的信号小于100 μV 、持续时间小于1 s;离断坐骨神经后刺激跟腱、神经和肌肉时,均未引起肌肉收缩,但可接收到强度小于10 μV 、持续时间小于0.5 s 的干扰波;被动活动关节牵拉腓肠肌时未检测到肌电信号活动.说明兔腓肠肌表面肌电信号产生于肌肉收缩之前,是以高位运动中枢为主、低位运动中枢为辅发放到肌肉的驱动电信号的综合,而非肌肉收缩本身产生.
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小鼠睾丸间质细胞体外原代培养方法的建立
背景:组织块培养睾丸生殖细胞对污染不容易控制,胰蛋白酶消化接种培养睾丸生殖细胞可能损伤细胞.目的:建立一种切实可行的小鼠睾丸间质细胞体外原代培养方法.方法:小鼠睾丸间质细胞的分离采用胶原酶消化法,纯化采用Percoll 等密度梯度离心法,活率鉴定采用锥虫蓝拒染法,纯度鉴定采用3.-羟基固醇脱氢酶染色方法.结果与结论:小鼠睾丸间质细胞纯度达可达90%以上;体外培养的细胞形态完整、增殖速度快、贴壁生长状态良好.说明实验成功建立了小鼠睾丸间质细胞的体外原代培养模型.
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反复快速皮肤扩张可促进皮瓣表皮生长因子及增殖细胞核抗原的表达
背景:针对目前临床常用的常规扩张法与快速扩张法的不足,提出了反复快速皮肤扩张法.目的:观察反复快速皮肤扩张对皮瓣表皮生长因子、增殖细胞核抗原表达的影响.方法:雄性新西兰大白兔随机分为3 组:反复快速扩张组、快速扩张组、常规扩张组.结果与结论扩张维持第2,3 周,反复快速扩张组皮瓣表皮生长因子表达显著高于快速扩张组、常规扩张组 (P < 0.05).除扩张维持第3 周外,其余各时间段,反复快速扩张组成纤维细胞增殖细胞核抗原染色阳性率均显著高于其他两组 (P < 0.05).扩张维持第4 周,反复快速扩张组表皮细胞增殖细胞核抗原染色阳性率显著高于其他组(P < 0.05).提示反复快速皮肤扩张可能通过促进组织细胞合成与分泌皮瓣表皮生长因子,促进了扩张皮肤中成纤维细胞及表皮细胞的增殖.
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脑微血管内皮细胞缺氧模型转化生长因子β1表达与脑溢安的干预
背景:临床及动物实验证实脑溢安能促进脑出血急性期血肿吸收及神经功能恢复,提高生活质量.目的:观察脑溢安血清对体外缺氧培养的大鼠脑微血管内皮细胞转化生长因子β1 mRNA 表达的影响.方法:用分离培养的大鼠脑微血管内皮细胞移入厌氧培养箱培养18h 建立缺氧损伤模型,并随机分为正常组、模型组、正常血清组及含脑溢安血清组.正常组为同一批正常培养的脑微血管内皮细胞;模型组将正常培养的细胞放入厌氧培养箱内培养18 h ;正常血清对照组细胞在培养液中加5%正常血清后,放入厌氧培养箱中培养18 h ;脑溢安血清组细胞在培养液中加5%脑溢安血清后,放入厌氧培养箱内培养18 h.结果与结论:缺氧培养使脑微血管内皮细胞存活数量减少,其表达的转化生长因子β1 mRNA 增强,而脑溢安血清能明显增加脑微血管内皮细胞存活数量,降低转化生长因子β1 mRNA 表达水平(P < 0.05).说明脑溢安血清下调转化生长因子β1mRNA 的表达可能是其抑制脑微血管内皮细胞的凋亡对缺氧损伤脑微血管内皮细胞的保护作用机制之一.
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正常(牙合)青年男性咀嚼肌超声形态与牙弓形态的关系
背景:咀嚼肌形态与颅面形态的密切相关性已经被报道,但是关于咀嚼肌形态与牙弓形态之间的相互作用关系还不明确.目的:探讨咀嚼肌形态功能对牙弓形态的影响和作用机制.方法:应用超声成像技术测量69 位正常牙合青年男性下颌处于姿势位时浅层嚼肌横截面周长、面积、宽度、大厚度、平均厚度、纵截面长度及颞肌前束大厚度、平均厚度,并与牙弓测量指标进行统计学相关分析.结果与结论:浅层嚼肌横截面的面积与上颌牙弓前中段长度,纵截面长度与下颌前段牙弓长度,大厚度与下颌牙弓中段宽度及上颌牙弓周长呈正相关(P < 0.05);颞肌前束大厚度、平均厚度与上颌牙弓前段及前中段长度呈负相关(P < 0.05),提示浅层嚼肌、颞肌形态功能可能是影响牙弓形态的因素之一.
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等动肌力矩的增龄性发育特征
背景:少年时期肌肉力量是否能够得到平衡发育对其生长发育过程中起重要作用.目的:探索少年的肌力发展的生物力学规律.方法:利用Kinitech 等速测力系统对中小学男女生各30 名双侧肩、髋关节屈伸肌群进行等动肌力测试,测试速度为60(°)/s,测试次数为屈伸6 次.结果与结论:所有测试者的髋、肩关节屈伸肌的相对峰力矩随测试速度的增大而逐渐减小;且随年龄增长肩、髋关节屈伸肌的相对峰力矩均同步增大;小学生在不同测试速度状态下男生髋、肩关节相对峰力矩均大于女生(P < 0.05),但中学生髋、肩关节相对峰力矩没有性别差异.
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坐骨神经损伤模型大鼠神经传导速度及损伤运动神经元内生长相关蛋白43表达与磁刺激干预
背景:磁刺激可促进损伤神经的修复.目的:观察磁刺激对大鼠损伤坐骨神经神经传导速度及相应水平脊髓运动神经元内生长相关蛋白43 表达的影响.方法:将60 只SD 大鼠随机分为实验组(n=24)、模型组(n=24)和假手术组(n=12),用一新的长17cm 的止血钳钳夹坐骨神经至第二扣,以21.95×103 Pa 维持10 s 制备损伤模型.造模后24 h,实验组每天给予0.09 T 的磁刺激.结果与结论:造模后第2,4,8,12 周,免疫组织化学染色显示实验组脊髓L4～5 运动神经元生长相关蛋白43 的表达较模型组相应时间点明显增高( P < 0.05);造模后12 周,电生理检测发现,与模型组比较,实验组再生神经传导速度加快,波幅升高,潜伏期缩短(P < 0.05).说明磁刺激能提高损伤坐骨神经的传导速度,增加其对应脊髓节段运动神经元中生长相关蛋白43 的表达,对大鼠损伤坐骨神经的修复起促进作用.
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人外周血内皮祖细胞培养方法的建立
背景:成人外周血来源丰富,但内皮祖细胞含量较少,为使其能够更好的应用于组织工程及细胞治疗,有必要建立外周血内皮祖细胞成熟、稳定的体外扩增体系.目的:建立稳定的人外周血分离、培养和体外扩增血管内皮祖细胞的方法.方法:应用密度梯度离心法,获取外周血单个核细胞,将分选后细胞接种于预先包埋了人纤维连接蛋白的培养板上,加入内皮祖细胞专用培养基中培养3d 后,洗掉非贴壁细胞,培养至第6 天,收集贴壁细胞,应用倒置显微镜和苏木精-伊红染色进行细胞形态学观察;采用MTT 法和细胞计数测定第1,3 代细胞生长曲线;应用流式细胞仪测定祖细胞和内皮细胞系标志,对培养的细胞进行鉴定.结果与结论:细胞生长曲线测定表明接种后第3 天细胞进入指数增生期,至第6 天进入平台期,随着传代次数的增加,细胞增殖速度变慢,同时表达干细胞表面标志CD34、CD133 和内皮细胞表面标志血管性血友病因子、血管内皮生长因子受体2.证明人外周血可以分离培养内皮祖细胞.
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大鼠delta阿片受体短发卡RNA干扰真核表达载体的构建和鉴定
背景:长期应用阿片受体治疗疼痛会导致药物耐受或成瘾,可能与delta 阿片受体密度上调有关.目的:设计及构建大鼠delta 阿片受体短发卡RNA 真核表达载体并鉴定.方法:根据大鼠delta 阿片受体mRNA 序列设计并体外合成短发卡RNA 寡核苷酸片段,退火形成双链,克隆到线性化质粒pGenesil-1,然后进行酶切和测序鉴定.结果与结论:酶切证明delta 阿片受体-短发卡RNA 已经插入到质粒载体pGenesil-1 里,测序结果证明均为插入正确的克隆质粒,而且质量均符合设计标准,证实靶向大鼠delta 阿片受体基因的短发卡RNA 真核表达载体构建成功.
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补肾健脾方干预去势大鼠骨骼肌caspase-3和caspase-8的表达
背景:骨骼肌与骨质疏松症关系密切,导致其衰退的主要原因是细胞的凋亡,这种凋亡可能是Caspase 家族蛋白所介导的.目的:探讨补肾健脾方对去势大鼠骨骼肌caspase-3 和 caspase-8 调控作用.方法:SD 大鼠48 只等随机分为对照组、模型组、中药组、西药组,后3 组大鼠摘除双侧卵巢建立骨质疏松模型,对照组仅切除周围少量脂肪组织.造模2 周后,中药组给予补肾健脾方(2.979 g/kg)灌胃,西药组给予戊酸雌二醇片(0.104 mg/kg)灌胃,模型组和对照组给予蒸馏水灌胃,1 次/d.结果与结论:①干预12 周后,双能X 线骨密度仪测量发现,相比于对照组,模型组大鼠左侧股骨的骨密度值和骨矿含量均明显降低(P < 0.01);而中药组和西药组的骨密度值均高于模型组(P < 0.05),且2 组骨密度值和骨矿含量接近(P > 0.05).②酶标免疫分析显示,与对照组相比,模型组骨骼肌中Caspase-3 和 Caspase-8 表达水平明显上升(P < 0.05).中药能显著降低大鼠骨骼肌中Caspase-3 的表达水平(P < 0.05),而西药能显著减低Caspase-8 表达水平(P < 0.05).③说明补肾健脾方对卵巢切除所致的骨质疏松症有明显的治疗作用,能明显提高骨密度,而且能显著减低Caspase-3 的水平,但不能显著减低Caspase-8 水平,显示补肾健脾方不是通过死亡受体途径去抑制细胞凋亡的.
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人骨形态发生蛋白4成熟肽cDNA的克隆及测序
背景:研究表明骨形态发生蛋白4 的骨诱导能力强,但在组织中含量甚微.目的:克隆人骨形态发生蛋白4 成熟肽基因.方法:从人胎盘组织中提取信使核糖核酸,根据基因库人骨形态发生蛋白4 基因序列合成两条引物,利用一步法反转录聚合酶链式反应技术扩增出人骨形态发生蛋白4 成熟肽的基因序列,将聚合酶链反应扩增产物基因片段连接克隆载体质粒中转化大肠杆菌DH5a 进行克隆筛选鉴定及测序.结果与结论:琼脂糖凝胶电泳检测反转录聚合酶链式反应产物及阳性克隆质粒经双酶切产物显示一长约370 bp 的条带,脱氧核糖核酸测序结果与基因库中的序列相符.结果证实,利用反转录聚合酶链式反应技术可成功的从人胎盘组织中克隆出人骨形态发生蛋白4 成熟肽基因.
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低强度脉冲超声波促进大鼠胫骨骨折愈合中血小板衍生生长因子和胰岛素样生长因子1的表达
背景:有研究表明低强度脉冲超声波可以促进骨折愈合.目的:观察低强度脉冲超声波对胫骨骨折大鼠血小板衍生生长因子及胰岛素样生长因子1 表达的影响.方法:实验采用单侧大鼠胫骨制作闭合骨折大鼠模型,建模后每日进行低强度脉冲超声波治疗.结果与结论:建模后14,21 d,低强度脉冲超声波治疗的胫骨骨折模型大鼠骨痂量及厚度明显增高(P < 0.05),建模后7,14 d,其骨痂血小板衍生生长因子和胰岛素样生长因子1 表达也明显增高(P < 0.05).说明低强度脉冲超声波促进大鼠胫骨骨折愈合中血小板衍生生长因子和胰岛素样生长因子1 的表达,促进早期软骨细胞成熟和软骨内成骨,从而促进骨折的愈合.
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不同保存方式下嗅鞘细胞的活性
背景:获取和寻找适合的保存方式对嗅鞘细胞实验和临床应用有重要的意义.目的:探索合适的嗅鞘细胞低温保存方式.方法:取对数期生长的嗅鞘细胞,冻存1,3,6 个月进行复苏.结果与结论:MTT 比色法及锥虫蓝染色显示5%二甲基亚砜-6% 羟乙基淀粉处理的细胞活性高,其次是10%二甲基亚砜处理的细胞,5%二甲基亚砜的保护作用差.冰箱降温或程控降温仪降温方式及不同的冻存时间对嗅鞘细胞活性影响不明显.因此,推荐用5%二甲基亚砜-6%羟乙基淀粉作为嗅鞘细胞冻存低温保护剂.
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仓鼠深Ⅱ度烧伤创面愈合过程中糜蛋白酶的表达
背景:肥大细胞糜蛋白酶在烧伤创面表达的研究较少.目的:观察肥大细胞糜蛋白酶是否存在于烫伤创面以及深Ⅱ度烫伤后不同时间点的表达变化.方法:应用75 ℃的水接触仓鼠背部皮肤12 s制备深Ⅱ度烫伤创面(病理组织学证实).分别于烫伤前及烫伤后1,3,7,14 d 取烫伤组织进行试验.结果与结论:实时定量RT-PCR 及放射免疫检测结果显示烫伤后创面组织中糜蛋白酶mRNA 表达量和活性均有所增高,在烫伤后第3 天高.表明肥大细胞糜蛋白酶在烧伤创面有所表达,并可能参与了烧伤损伤愈合过程.
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腺病毒介导hRAMP1基因转染血管平滑肌细胞的增殖和凋亡
背景:外源性受体活性修饰蛋白1 基因转染可能对血管平滑肌细胞增殖调控具有重要的作用.目的:探讨腺病毒载体介导人受体活性修饰蛋白1 基因对体外培养的兔血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响.方法:分离培养获得兔主动脉血管平滑肌细胞,分别以携带人受体活性修饰蛋白1 基因的腺病毒和空腺病毒转染后,分成人受体活性修饰蛋白1 组、空病毒组和对照组.结果与结论:腺病毒转染细胞后随时间延长,报告基因绿色荧光蛋白表达逐渐增加,72 h 表达强,感染率达80%,96 h时仍有绿色荧光蛋白表达.人受体活性修饰蛋白1 组的受体活性修饰蛋白1 蛋白表达增加,血管平滑肌细胞凋亡率增加,细胞增殖明显抑制,与空病毒组和对照组比较差异有显著性意义(P < 0.05).提示人受体活性修饰蛋白1 基因感染血管平滑肌细胞后明显抑制血管平滑肌细胞增殖,促进细胞凋亡.
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apelin-13下调caveolae可促进血管平滑肌细胞增殖
背景:结合课题组以往研究成果,提出caveolae 可能参与apelin-13 促血管平滑肌细胞增殖的假设.目的:实验观察细胞膜特殊凹陷结构caveolae 参与G蛋白偶联受体APJ 的内源性配体apelin-13 促进大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用.方法:采用组织贴块法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,用MTT 方法观察血管平滑肌细胞增殖,Western Blotting 方法观察信号蛋白表达,免疫共沉淀技术检测信号分子复合物的形成.结果与结论:①caveolae 结构破坏剂β-环糊精(5 mmol/L,25 h)可明显增强apelin-13 诱导的血管平滑肌细胞增殖.②apelin-13(0,1,2,4,8 μmol/L)刺激血管平滑肌细胞,caveolin-1 的表达下调,在1 μmol/L 时下调明显.③β-环糊精(5 mmol/L)破坏caveolae 后,可使apelin-13 下调caveolin-1 表达的作用增强.④对照组(体积分数为0.1%胎牛血清孵育)及处理组(apelin-13 刺激)caveolin-1 与PI3K 及ERK1/2 均有复合物形成,在apelin-13 刺激的情况caveolin-1-PI3K 复合物减少、caveolin-1-ERK1/2 复合物减少,即apelin-13 可能促进caveolin-1 与PI3K 及ERK1/2 解离.结果提示细胞膜特殊凹陷结构caveolae 参与apelin-13 促血管平滑肌细胞增殖作用.
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人脐静脉内皮细胞单层通透性改变的效应因子
背景:外源性刺激引起血管屏障功能损伤的分子机制是血管病理生理学尚未阐明的热点问题之一.目的:探讨炎症递质脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞单层通透性改变的效应分子,寻找有效治疗靶点.方法:应用脂多糖刺激并观察人脐静脉内皮细胞骨架蛋白F-actin 和细胞单层通透性的改变.应用荧光免疫组化和Western blot 方法检测脂多糖刺激前后细胞中RhoA 和SRF 等信号分子的改变.并通过阻断实验证实RhoA-SRF 信号通路的作用.结果与结论:100 μg/L 脂多糖刺激6 h 可引起人脐静脉内皮细胞中F-actin 快速重构并形成大量应力纤维,细胞单层通透性明显增强.细胞中活化RhoA 的表达明显增加,SRF 发生明显的入核转位现象.应用特异性分子抑制剂Y27632 抑制RhoA 的活化后,细胞中F-actin 重构现象消失,细胞单层通透性增加也受到明显抑制,SRF 蛋白发生明显的出现转位.而应用Latrunculin B 抑制脂多糖刺激的人脐静脉内皮细胞中F-actin 应力纤维形成,对抗通透性增加,但RhoA 活化未受到干扰,SRF 入核现象则受到抑制.提示RhoA-SRF 通路的活化介导了脂多糖诱导的人脐静脉内皮细胞中F-actin 重构和内皮单层通透性增加,特异性抑制F-actin 也可以阻断脂多糖引起的血管内皮单层通透性增加,同时反馈抑制SRF 的入核活化现象.
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电针后血清对肿瘤坏死因子α诱导软骨细胞凋亡的影响
背景:电针具有活血化瘀、行气止痛、舒筋通络的作用,能有效缓解骨性关节炎的临床症状.目的:观察电针后血清对肿瘤坏死因子α 诱导软骨细胞凋亡的影响.方法:采用机械-酶消化法分离3 周龄SD大鼠膝关节软骨细胞,用10 μg/L 的肿瘤坏死因子α 诱导体外培养软骨细胞的凋亡,同时给予正常大鼠血清、骨性关节炎大鼠血清、透明质酸钠治疗的骨性关节炎大鼠血清、及电针内、外膝眼5,15,30 min 治疗的骨性关节炎大鼠血清进行干预.结果与结论:电针内、外膝眼15,30 min 治疗的骨性关节炎大鼠血清干预24 h,软骨细胞活力显著增高,凋亡显著减少.说明电针后血清能有效抑制肿瘤坏死因子α 诱导的软骨细胞凋亡.
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人骨软骨组织体外冷冻保存的效果
背景:异体骨软骨移植是治疗关节软骨缺损的有效方法,然而由于移植物体外有效保存时间短,限制了临床应用以及移植物的利用效率.目的:观察梯度降温冷冻保存同种异体关节软骨的保存效果.方法:将关节软骨块经体积分数10%二甲基亚砜预处理后,应用程序冷冻仪以-1 ℃/min 行梯度降温至-4 ℃,-10 ℃,-20 ℃,-40 ℃各30 min,后至-80 ℃冷冻保存.结果与结论:保存1,3,6 个月及1 年后检测发现,与新鲜组相比,冷冻后软骨细胞存活率、细胞活性以及浅、中、深层的蛋白多糖水平下降(P < 0.05),且软骨细胞存活率、细胞活性以及浅、中、深层的蛋白多糖水平随冷冻保存时间延长而降低(P < 0.05),提示冷冻保存可有效地延长骨软骨移植物存活时间.
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透骨消痛颗粒对关节软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路的调控
背景:由巴戟天、杭白芍、肿节风和川芎等组成的透骨消痛颗粒能有效延缓关节宏观形态、软骨基质及软骨细胞退变.目的:观察透骨消痛颗粒对软骨细胞wnt/β-连环蛋白信号通路中Wnt4、糖原合成酶3.及.-连环蛋白的影响.方法:将SD 大鼠关节软骨细胞分离培养成功后,人白细胞介素 1β诱导软骨细胞退变,取第2 代退变软骨细胞,随机分为对照组和透骨消痛颗粒组,后者加入透骨消痛颗粒醇提物,分别培养4,8 d 后,采用RT-PCR 检测2 组Wnt4、糖原合成酶3β、β-连环蛋白mRNA 表达,采用蛋白印迹法检测Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达.结果与结论:采用人白细胞介素1β可诱导软骨细胞退变,软骨细胞退变早期均有Wnt4、糖原合成酶3β及β-连环蛋白表达,但随着时间推移Wnt4、β-连环蛋白表达下降,而糖原合成酶3β表达增高,采用透骨消痛颗粒醇提物干预后均可逆转上述现象.说明透骨消痛颗粒醇提物能诱导软骨细胞转录合成.-连环蛋白和Wnt4 蛋白,并抑制糖原合成酶3β表达.
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揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax和Fas表达的影响
背景:现代研究证实细胞的过度凋亡加速软骨组织的退变,而手法的力学刺激对关节软骨影响的分子层面研究至今少有报道.目的:观察揉髌手法对兔膝关节软骨细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Fas 表达的作用.方法:50 只新西兰兔随机等分为正常组、假手术组、模型组、手法组和针剂组,后3 组建立右下肢骨内高压型膝关节骨性关节炎模型.造模1 周后,手法组使用揉髌手法隔天治疗1 次,每次10 min,共治疗5 周共17 次;针剂组关节内注射玻璃酸钠液0.6 mL,每周1 次,共5 次.结果与结论:造模后8 周末取兔右膝关节内侧胫骨平台软骨组织,苏木精-伊红染色提示模型组软骨组织退变明显,软骨细胞凋亡率明显增加(P < 0.01),胫骨平台软骨组织中Bcl-2、Bax、Fas 表达率明显升高(P < 0.01),而手法组和针剂组软骨组织退变轻微,软骨细胞凋亡率及Bax、Fas 表达率较模型组降低(P < 0.01),但胫骨平台软骨组织中Bcl-2 表达升高(P < 0.01).说明揉髌手法与关节内注射玻璃酸钠一样可以明显降低兔膝关节软骨细胞的凋亡率,其作用机制与上调Bcl-2表达,下调Bax、Fas 表达有关.
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应用流式细胞术测定CD24表达鉴定人髓核细胞
背景:CD24 是成熟髓核细胞表面表达的特异性分子,测定CD24 的表达是否可以作为鉴定髓核细胞的一种方法?目的:验证流式细胞仪测定髓核细胞CD24 表达鉴定髓核细胞的方法.方法:采用酶消化法分离培养人髓核细胞,取生长旺盛的第2 代人髓核细胞爬片进行Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,RT-PCR测定Ⅱ型胶原及SOX9 的表达,流式细胞仪检测其CD24 阳性表达率,分析来自同一批细胞的免疫组织化学染色、RT-PCR结果与CD24 阳性率的相关性.结果与结论:体外分离培养的7 例第2 代髓核细胞爬片Ⅱ型胶原免疫组织化学染色呈阳性,RT-PCR结果阳性,流式细胞仪测定CD24 其阳性率均为50%以上,髓核细胞分泌胞外基质Ⅱ型胶原与SOX9 的表达与CD24 阳性率结果有相关性.提示采用流式细胞仪测定CD24 表达可以快速、简便地鉴定髓核细胞.
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金乌骨通胶囊对成骨细胞分泌白细胞介素1,6的影响
背景:课题组以往研究发现,金乌骨通胶囊对绝经后骨质疏松症具有明显的治疗作用,但其具体的机制尚不十分清楚.目的:观察金乌骨通胶囊含药血清对成骨细胞分泌白细胞介素1,6 的影响.方法:切除雌性SD 大鼠双侧卵巢制备去卵巢血清,灌胃给予去卵巢大鼠金乌骨通胶囊制备去卵巢含药血清.取第3 代生长状况良好的出生24 h 内SD 大鼠的成骨细胞,分别加入正常雌性SD 大鼠血清、去卵巢血清和去卵巢含药血清培养72 h.结果与结论:酶联免疫吸附法检测显示,与正常血清组比较,去卵巢血清组成骨细胞白细胞介素1、白细胞介素6 的表达明显升高(P < 0.01);与去卵巢血清组比较,去卵巢含药血清组白细胞介素1 和白细胞介素6 的表达明显降低(P < 0.05),与正常血清组比较,则无明显差异.提示金乌骨通胶囊可能通过抑制成骨细胞骨白细胞介素1 和白细胞介素6 的表达来实现治防治骨质疏松症的目的.
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低氧条件下成骨细胞的增殖与分化
背景:低氧可通过多种途径作用于成骨细胞影响骨代谢,对骨生成、骨愈合等产生负面影响.目的:观察低氧对体外培养大鼠成骨细胞增殖、分化的影响,并探讨其分子机制.方法:分离培养新生Wistar 大鼠颅盖骨成骨细胞,取第2 代细胞分别在常氧(体积分数20%O2)与低氧(体积分数3%O2)条件下培养.结果与结论:低氧组成骨细胞增殖、碱性磷酸酶活性、骨钙素水平及茜素红结节形成数量均明显低于常氧组(P < 0.05 或P < 0.01),说明缺氧条件对成骨细胞的增殖、分化及功能有抑制作用;低氧组骨形成发生蛋白2 及Runx2表达低于常氧组(P < 0.05 或P < 0.01),说明低氧条件下大鼠成骨细胞Runx2、骨形成发生蛋白2 的表达受抑制.结果表明低氧可通过抑制大鼠成骨细胞的Runx2、骨形成发生蛋白2 的表达进一步抑制成骨细胞的增殖与分化.
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原代培养差速贴壁法分离纯化大鼠腰椎间盘髓核细胞
背景:髓核细胞在体外培养过程中存在表型丢失问题,包括Ⅱ型胶原、aggrecan、Sox-9 等表达的下降,由类软骨细胞向类纤维样细胞转化.目的:体外原代培养差速贴壁法分离纯化大鼠腰椎间盘髓核细胞.方法:经胰蛋白酶、Ⅱ型胶原酶先后消化Wistar 大鼠椎间盘髓核组织,第1,2 代细胞传代时采用差速贴壁法分离纯化髓核细胞.结果与结论:分离纯化后的第3 代髓核细胞呈圆形或多角形,活力强,苏木精-伊红染色细胞核染成均一蓝黑色,胞浆呈现淡粉色;Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性细胞比例为97%;aggrecan 免疫组织化学染色阳性细胞比例为95%;扫描电镜可见细胞内有高尔基体、粗面内质网和游离核糖体,未见线粒体,可见少量板层小体;CCK-8 生长曲线显示细胞经过2d 的生长潜伏期,3d 的指数生长期,进入生长停滞期.说明原代培养、两次差速贴壁法分离纯化的大鼠髓核细胞代谢旺盛、表型一致.
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软骨形成过程中的转化生长因子
背景:转化生长因子β2 是一族多肽类生长因子,具有多重生物学效应,对骨髓间充质干细胞增殖分化功能有一定促进作用,是调节骨髓间充质干细胞增殖和向软骨细胞方向分化的主要因子之一.目的:探讨转化生长因子β2 的分子结构特点及其在软骨形成方面的作用.方法:应用计算机检索中国期刊全文数据CNKI、中国期刊全文数据维普中文科技期刊数据库(VIP)和PubMed 数据库(1995-01/2011-08)与骨组织工程中转化生长因子β2 诱导软骨形成有关的文章,检索词分别为"转化生长因子β2;软骨细胞分化;骨组织工程"和"TGF-β2;cartilage formation;tissue engineering".纳入所述内容与转化生长因子β2 分子结构特点,转化生长因子β2 信号转导通路,软骨细胞的诱导性分化,软骨性疾病的生物性治疗进展有关.排除综述文献、重复研究、观点陈旧的文章.结果与结论:初检得到302 篇文献,排除262 篇不符合标准的文献,共纳入40 篇符合标准的文献.经分析得出转化生长因子β2 通过促进骨髓间充质干细胞分化为软骨细胞促进软骨特异性基质如Ⅱ型胶原及蛋白多糖的合成,从而发挥软骨诱导作用.转化生长因子β2 与其他因子共同作用调节软骨细胞生长分化,使临床上永久性修复软骨组织缺损的治疗变为可能.
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颅颌面部骨缺损修复中的相关因子
背景:以组织工程骨为骨源修复颅颌部骨缺损不仅解决临床骨源缺乏的问题,还促进组织工程骨的培养及基因导入疗法修复骨缺损等方面的研究.目的:总结归纳有关颅颌面部骨缺损修复中的相关因子,介绍目前此类因子的研究进展与方向.为组织工程骨及基因治疗修复颅颌面部骨缺损提供依据及参考.方法:以"tissue engineering,bone defect,gene therapy,growth factor"为检索词,检索Pubmed数据库(2000-01/2011-01),以"组织工程学,骨缺损,基因治疗,生长因子"为检索词,检索CBM 数据库(2000-01/2011-01).文献检索语种为英文和中文.纳入颅颌面部骨缺损修复过程中有关因子的文献,排除重复文献.结果与结论:计算机初检得到670 篇文献,根据纳入排除标准,对其中33 篇文献进行分析.由于各种原因引起的颅颌部骨缺损在临床上逐渐增多,而骨源缺乏是制约颅颌部骨缺损的主要问题.体外构建组织工程骨是解决这一问题的主要途径.颅颌面骨形成和发生的过程涉及因子的选取,组织工程骨的构建等方面,多基因联合治疗是目前的发展趋势.
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半月板运动损伤的组织工程修复
背景:半月板损伤后较难自我恢复,组织工程学手段为其功能恢复提供了可能.目的:全面综述半月板损伤的治疗方法,着重阐述了半月板的组织工程修复情况.方法:应用计算机检索PubMed 和万方数据库中1980-01/2011-03 关于半损伤及医用材料的文章,在标题和摘要中以"半月板、治疗、措施、材料"或"meniscus,treatment,the measure,materials"为检索词进行检索.选择研究内容与半月板治疗措施及材料学选择相关的文章,同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志上的文章.结果与结论:初检得到174 篇文献,根据纳入标准选择35 篇文章进行综述.研究发现软骨组织周边区域具有一定的自我修复功能,对于规则性裂伤应进行保留组织进行传统疗法治疗,后期效果较好,对于较严重的损伤传统疗法却无能为力,运用组织工程学手段对其进行治疗的材料学条件日趋多元与成熟,理想材料的研制与选择是制约其康复效果的重要因素.
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组织工程化前交叉韧带在运动损伤修复中应用
背景:运动员前交叉韧带的损伤极难彻底恢复,降低运动寿命.目的:总结组织工程化前交叉韧带在运动损伤修复中的研究现状和新进展.方法:采用计算机检索维普数据库和PubMed 数据库1994-01/2010-12 相关文章,纳入28 篇与运动性前交叉韧带损伤及组织工程韧带相关的文章,重点对组织工程前交叉韧带重建的研究进展、前交叉韧带种子细胞的来源、细胞因子在前交叉韧带重建中的应用及组织工程前交叉韧带附丽的基础研究4 个方面进行探讨.结果与结论:运动中前交叉韧带损伤后自体愈合能力极差,对于运动员伤后痊愈造成极大困难.组织工程前交叉韧带近些年来飞速发展,具有良好的应用和发展前景.但在实际应用过程中,组织工程化种子细胞的选择、支架材料的构建和组织工程前交叉韧带附丽的基础研究三者有机相互融合,并合理应用生长因子,才能在临床上起到佳治疗效果,终达到修复和重建前交叉韧带的目的.
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骨面型Ⅲ类错(牙合)正畸治疗前后颏部软组织侧貌形态变化
背景:以往有关探讨颏部形态变化的研究主要是对正畸治疗前后牙齿、颌面部软硬组织进行测量分析.目的:观察青少年安氏Ⅲ类错牙合治疗前后颏部软组织侧貌的形态结构特征.方法:选取符合骨面型Ⅲ类,ANB <0°,同时符合安氏Ⅲ类,轻中度骨性畸形48 例青少年,对矫治前、后X 射线头颅侧位定位片进行测量,比较分析治疗前后颏部软组织形态结构变化.结果与结论:骨性Ⅲ类治疗后患者颏唇沟深度增加(P < 0.01),颏部长度、颏唇沟弧度、颏部弧度较治疗前均有所减小(P < 0.01),而反映颏部突度的各项测量值如下唇突点、颏部软组织之凹点、软组织颏下点到E 线的垂直距离均比治疗前有所减小(P < 0.01 或P < 0.05).证实安氏Ⅲ类错牙合在正畸治疗后较治疗前颏部形态有所改善.
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护骨素基因A163G多态性与北京地区老年人群骨密度的关系
背景:护骨素基因是骨质疏松症的候选基因,其基因多态性存在种族差异.目的:探讨北京地区老年人群中护骨素基因启动子区域A163G 位点多态性与骨密度的关系.方法:选取307 名老年受试者,采用双能X 射线骨密度吸收仪测定股骨近端、腰椎及前臂骨密度,取其外周血提取DNA,采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性方法测定护骨素基因A163G 多态性,并进行基因测序.采用单因素方差分析比较不同基因型对应的骨密度变化,逐步回归法分析骨密度的相关因素.结果与结论:在绝经后老年女性受试者中,腰椎、股骨Inter 区,AA 型骨密度高于AG 或GG 型,老年男性受试者中,各基因型所对应的骨密度,没有明显差异.提示护骨素基因启动区域A613G 多态性与绝经后老年女性骨密度有一定关联.
