中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
-
造血干细胞移植预处理中静脉马利兰的应用
背景:马利兰常用于骨髓或外周血干细胞移植预处理,其主要在肝脏代谢.目的:评价静脉应用马利兰预处理在造血干细胞移植治疗恶性血液病中的有效性及安全性.方法:纳入43例患者预处理方案采用静脉剂型马利兰,观察其造血干细胞移植预处理中马利兰治疗相关毒性(肝脏、神经系统、口腔黏膜炎)造血干细胞植活时间、急性移植物抗宿主病、总生存率、白血病复发情况.结果与结论:静脉应用马利兰后,谷丙转氨酶升高72%(31/43),发生不典型肝静脉闭塞综合征5%(2/43),有1例发生双手麻木.口腔黏膜炎发生率60%(26/43).中性粒细胞植活时间16 d,血小板植活时间12 d,2例自体造血干细胞移植患者血小板延迟植活.Ⅰ~Ⅱ度急性移植物抗宿主病发生63%(24/38).总生存率72%(31/43).复发率23%(10/43).提示造血干细胞移植预处理方案中应用静脉马利兰给药,患者耐受性好,方法安全有效.
-
SPIO标记脂肪干细胞移植退变椎间盘内的MRI活体示踪
背景:国内外动物实验多是荧光标记骨髓间充质干细胞的移植,以SPIO标记脂肪干细胞移植后活体示踪对退变椎间盘修复作用的研究较少.目的:活体监测SPIO标记的脂肪干细胞在退变椎间盘内的存活、迁移和转归,以及脂肪干细胞对退变椎间盘的修复及延缓退变作用.方法:新西兰大白兔20只,兔椎间盘被分为4组,即正常对照组(L1/2),脂肪干细胞组(L2/3),PBS组(L3/4),SPIO-脂肪干细胞组(L4/5).透视引导下用18G穿刺制作退变模型后2周行SPIO标记的脂肪干细胞移植.结果与结论:SPIO-脂肪干细胞移植后即刻T2WI/FFE序列上可见椎间盘内明显低信号,8周后仍可检测到低信号.脂肪干细胞移植组与同时间点PBS组比较,椎间盘退变程度轻.提示SPIO-脂肪干细胞移植至椎间盘后,可通过MRI进行监测;脂肪干细胞椎间盘内移植有助于修复退变椎间盘和延缓椎间盘退变.
-
超声联合对比剂对内皮祖细胞一氧化氮生成的影响
背景:已有动物实验证实超声联合对比剂能够显著增强骨髓干细胞心肌内归巢治疗心肌梗死,改善心功能.目的:体外观察超声联合对比剂对内皮祖细胞一氧化氮生成及产生途径的影响.方法:体外提取、分离和培养猪骨髓内皮祖细胞,随机分为对照组、超声组、超声对比剂组,干预后分别收集内皮祖细胞和上清液.采用硝酸还原法检测上清液一氧化氮水平,分光光度计检测内皮祖细胞一氧化氮合酶的相对活力.结果与结论:超声对比剂组内皮祖细胞上清液一氧化氮表达、内皮祖细胞诱导型一氧化氮合酶和结构型一氧化氮合酶活力均较对照组显著增加(P < 0.05);超声组一氧化氮水平无明显改变,各型一氧化氮合酶活力较对照组有下降趋势,但差异无显著性意义(P > 0.05);超声联合对比剂作用下,L-精氨酸和双氧水可反应生成一氧化氮,较对照组明显增加,而单纯超声无此促进作用.提示超声联合对比剂作用显著增强内皮祖细胞各亚型一氧化氮合酶活性,并可能同时促进内皮祖细胞一氧化氮非酶合成途径,是其增效骨髓干细胞治疗心肌梗死的机制之一.
-
干细胞移植豚鼠耳蜗形态结构及听力的变化
背景:既往研究证明耳蜗微造孔注射病毒或非病毒载体行基因治疗对耳蜗结构及听功能的影响轻微.目的:观察骨髓间充质干细胞通过耳蜗微造孔术移植到正常豚鼠内耳后对耳蜗结构及听功能的影响.方法:正常豚鼠分3组,空白对照组未予任何干预;单纯耳蜗微造孔术组单纯行耳蜗微造孔术,不注射任何成分;骨髓间充质干细胞组鼓阶微造孔后注射经DAPI荧光标记的骨髓间充质干细胞.结果与结论:单纯耳蜗微造孔术组、骨髓间充质干细胞组经耳蜗微造孔术后7 d的听性脑干诱发电位阈值均较空白对照组提高,术后28 d恢复至正常水平;耳蜗石蜡切片苏木精-伊红染色显示实验动物耳蜗内结构无明显异常改变.骨髓间充质干细胞组耳蜗切片可见荧光信号多分布于耳蜗底周的外淋巴腔(鼓阶和前庭阶),无堆积堵塞管腔情况.结果表明经鼓阶开窗行骨髓间充质干细胞移植对耳蜗形态结构和听力的影响是轻微的,干细胞移植后能在耳蜗内迁移并存活.
-
三维培养条件下胚胎鼠唾液腺上皮细胞的自组装
背景:对唾液腺胚胎细胞在体外自组装及形态发生过程的理解,将有利于在体外构建唾液腺器官样组织的研究.目的:探讨三维培养条件下SD大鼠胚胎鼠下颌下腺上皮细胞的自组装机制.方法:将胚胎期15 d鼠的下颌下腺上皮细胞分为实验组(加入抗E-cadherin及抗β-catenin)和对照组(常规培养),在Matrigel中三维培养.结果与结论:获得的胚胎鼠下颌下腺上皮细胞均表达CK19.实验组细胞未见分枝状及腺泡样结构出现;E-cadherin 和β-catenin荧光表达弱.对照组细胞在12 d出现上述结构;胞浆中E-cadherin、β-catenin荧光表达强表达.MOD值为实验组<对照组(P < 0.01).提示E-cadherin,β-catenin在细胞的自组装过程中有重要作用.
-
纯化取材脂肪提高实验中干细胞培养的纯度
背景:在以往脂肪干细胞原代培养的文献中大多只是剔除脂肪表面的血管组织,而对于脂肪内部的血管,尤其是血管周围淋巴结的剔除很少有文献报道.目的:探讨通过脂肪纯化来提高培养干细胞纯度的可行性.方法:将取材自同一大鼠腹股沟处的脂肪组织分成两份,一份给予纯化处理,剔除表面的血管、皮肤和肌肉组织的同时一并剔除组织内血管及其周围结节样组织.而另一份仅剔除表面血管及可能黏附的皮肤和肌肉组织,分别对两份脂肪行干细胞原代培养.结果与结论:经苏木精-伊红染色显微镜下观察,证实血管周围结节样组织为淋巴结.纯化脂肪组培养的细胞形态一致、呈长梭形.脂肪干细胞相关性抗原CD90的免疫荧光和流式细胞仪检测结果均证明纯化脂肪组培养的细胞纯度较未纯化组高.实验结果提示通过纯化取材可以提高原代培养的脂肪干细胞纯度.
-
低氧环境下胶质源性神经营养因子体外诱导中脑神经干细胞的分化
背景:有效的神经干细胞体外增殖与多巴胺能神经元的定向诱导分化是神经干细胞移植治疗帕金森病的关键所在.目的:观察低氧条件下胶质源性神经营养因子体外诱导中脑源性神经干细胞向多巴胺能神经元的分化.方法:体外分离培养孕12 d胚鼠腹侧中脑组织,制成单细胞悬液,在含碱性成纤维细胞生长因子和B27的无血清培养基中培养并传代,分别置于常氧(体积分数21%O2)或低氧(体积分数3%O2)环境下增殖5~7 d后,接种于含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12培养基,或含体积分数10%胎牛血清的DMEM/F12+1 μg/L胶质源性神经营养因子.结果与结论:低氧环境下分化10~12 d,中脑神经干细胞向多巴胺能神经元分化均高于常氧组,在胶质源性神经营养因子诱导下向多巴胺能神经元分化比例更高,表型更成熟.说明低氧环境下胶质源性神经营养因子可明显促进中脑神经干细胞分化为数量足够、形态及功能成熟的多巴胺能神经元.
-
Notch配体刺激白血病细胞内Cleaved Notch1蛋白及基因的表达
背景:Notch信号系统对干细胞的自身复制与分化有调节的作用.目的:监测Notch配体刺激下白血病细胞蛋白与基因表达的变化,解析Notch信号系统在细胞内的作用.方法:应用被Notch配体包被的培养皿,培养TMD7和THP-1细胞株,进行短期细胞增殖效果的评估.并且在刺激不同时间段后,应用免疫印迹法对Notch蛋白的活性进行检测,应用定量RT-PCR法测定各种基因表达的变化.结果与结论:Notch配体刺激对TMD7细胞株的增殖有促进作用,对THP-1细胞株的增殖有抑制作用.配体刺激下,免疫印记结果显示2种不同相对分子质量的活性化Notch1蛋白片段.配体刺激后,各种基因的发现量的变化是不同的.而同一细胞株对3种Notch配体刺激的反应基本类似.可见Notch信号系统比现在所知道的更为复杂,可能存在着两种正向和负向的影响.
-
结直肠癌组织中CD44+肿瘤细胞与S期标志物增殖细胞核抗原的关系
背景:目前尚未找到结直肠癌干细胞理想的标志物,结合周期蛋白能更精确的找到GO/G1期癌干细胞.目的:了解结直肠癌组织中CD44和增殖细胞核抗原PCNA的表达及CD44+肿瘤细胞与S期标志物增殖细胞核抗原PCNA的关系.方法:采用组织芯片检测、免疫组织化学和双重免疫组织化学染色技术检测61例结直肠癌组织、10例正常肠黏膜组织中增殖细胞核抗原PCNA和CD44表达情况.结果与结论:在结直肠癌组织中,PCNA+细胞数远多于CD44+细胞数,CD44+癌细胞形态有两种,一种核较大,染色质边集,呈空泡状,核膜核仁清晰,这些细胞大多数呈PCNA阳性;另一种核较小,染色质致密,呈小圆形,部分表达PCNA.在大多数病例中,CD44+细胞中90%以上的瘤细胞同时为PCNA阳性,只有(3.38±2.08)%细胞为单纯PCNA阳性.说明结直肠癌组织中大多数CD44+细胞呈现S期标志物PCNA阳性,处于S期;只有极少数CD44+/PCNA-处于G0/G1期的细胞可能为肿瘤干细胞.
-
白血病抑制因子抑制神经元凋亡及促进内源性神经干细胞的增殖
背景:研究表明白血病抑制因子能提升内源性神经干细胞的增殖及改变其分化方向,但还没有研究证实其是否能影响神经元的凋亡.目的:观察白血病抑制因子干预下神经元的凋亡及内源性神经干细胞的增殖情况,以及二者是否有一定相关性.方法:c57BL小鼠32只,随机分为假手术组,白血病抑制因子组,帕金森病组及正常对照组.除正常对照组外,其他3组均接受三维脑立体定向注射6-羟基多巴胺制备小鼠帕金森病模型.造模后2 h,假手术组只接受ALZET锇药物泵导管植入术,但不植入泵导管;白血病抑制因子组接受ALZET锇药物泵导管植入术,经泵导管将白血病抑制因子直接缓慢释放到脑脊液中,帕金森病组给予生理盐水.结果与结论:与帕金森病组相比,白血病抑制因子组小鼠运动功能明显改善,内源性神经干细胞显著增殖,凋亡细胞数呈显著性下降,二者之间存在相互关系.白血病抑制因子可能是一种能有效重建变性神经系统的神经营养因子.
-
昆明小鼠3.5d和4d囊胚不同分离方法的比较
背景:远交系的昆明小鼠作为中国自然科学研究主要实验动物,其胚胎干细胞建系的成功率一直很低.目的:探讨昆明小鼠胚胎干细胞体外分离培养的佳方法和适合的采胚时间.方法:采集孕3.5 d和4 d的囊胚分别以免疫外科法和全胚培养法在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上分离和克隆昆明小鼠胚胎干细胞集落.结果与结论:免疫外科法和全胚法培养3.5 d囊胚的内细胞团贴壁率和原代克隆形成率差异均不显著(P > 0.05);全胚法培养4 d囊胚的内细胞团贴壁率显著高于免疫外科法(P < 0.05),但原代克隆形成率显著低于免疫外科法(P < 0.05);全胚法培养4 d囊胚的原代克隆形成率显著高于3.5 d囊胚(P < 0.05);免疫外科法分离4 d囊胚内细胞团的贴壁率和原代克隆形成率显著高于以同样方法分离培养的3.5 d囊胚(P < 0.05).结果显示用免疫外科法分离4 d囊胚更适合于昆明小鼠胚胎干细胞的体外分离培养.
-
人脐血间充质干细胞的体外成骨
背景:用免疫细胞阴性筛选法可以排除造血干细胞对于间充质干细胞生长的影响,较快的获得具有表达间充质干细胞的细胞群.目的:探讨人脐静脉血间充质干细胞向成骨样细胞分化的能力.方法:用免疫磁珠阳性筛选法分离脐血间充质干细胞后进行培养.取P2代细胞行成骨诱导分化.结果与结论:人脐血间充质干细胞贴壁生长,长梭形,3周长满瓶底,传代后细胞增殖迅速.细胞表型为高表达CD44+,CD29+和CD166+.在成骨诱导后碱性磷酸酶染色阳性,Von-Kossa染色提示钙化结节形成.提示脐血间充质干细胞能够在体外分化为成骨样细胞.
-
人脐血中分离培养扩增内皮集落形成细胞及其生物相容性
背景:内皮集落形成细胞是内皮祖细胞的一种亚型,体外培养扩增及其在组织工程中的应用尚不明确.目的:探索从人脐血中分离培养扩增内皮集落形成细胞并观察其生物相容性.方法:采用密度梯度离心法从人脐血中分离单个核细胞,接种于Ⅰ型鼠尾胶原包被的培养板上,采用内皮祖细胞专用EGM-2培养基诱导培养,早期传代后扩增,免疫荧光鉴定细胞,并检测其体外成血管和增殖能力,与纳米羟基磷灰石/磷酸三钙材料复合培养后的生物相容性.结果与结论:脐血来源内皮集落形成细胞呈铺路石样集落生长,吞噬Dil-Ac-LDL并结合FITC-UEA-1,表达CD31,vWF,KDR和Tie-2,早期传代后拥有较强增殖潜能,可在体外大量扩增,在体外基质胶上可形成闭合管腔样结构,复合纳米羟基磷灰石/磷酸三钙材料后生物学特性不受影响.提示可从脐血中分离并体外大量扩增内皮集落形成细胞.
-
脐带结缔组织多潜能干细胞向内皮及心肌方向的分化
背景:脐带结缔组织富含多潜能干细胞,其免疫原性弱、增殖力强.目的:验证体外培养人类脐带结缔组织(wharton's jelly)中多潜能干细胞向内皮细胞及心肌细胞方向的诱导分化.方法:贴块法培养人类脐带结缔组织多潜能干细胞.结果与结论:①流式细胞仪进行表型鉴定,多潜能干细胞CD105、CD73、CD90、CD44、CD54阳性,而CD45、CD34、CD106和CD133阴性.②加入血管内皮生长因子及碱性成纤维细胞诱导后,细胞表现内皮细胞形态,可以吞噬ac-LDL并结合UEA-1.③以5-氮杂胞甘诱导后经免疫组织化学染色显示,心肌细胞标记物肌钙蛋白Ⅰ和β肌球蛋白重链表达阳性.提示在体外培养的条件下,可以从脐带结缔组织中得到大量干细胞,该细胞可以向心肌及内皮方向分化.
-
β-淀粉样蛋白诱导骨髓间充质干细胞向神经元样细胞分化过程中Tau蛋白的过度磷酸化
背景:大多数学者认为β-淀粉样蛋白是阿尔茨海默病发病的始动因素,而Tau蛋白过度磷酸化可能是阿尔茨海默病重要的分子病理变化之一.目的:观察β-淀粉样蛋白25~35对大鼠骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白磷酸化的影响.方法:体外分离纯化大鼠骨髓间充质干细胞,将第4代骨髓间充质干细胞分为两组:实验组中加入预诱导培养基和20 μmol/L β-淀粉样蛋白25~35,24 h后用含2%二甲基亚砜和200 μmol/L丁羟茴醚的DMEM诱导其向神经细胞分化,5 h后收取细胞.对照组诱导方法同实验组,但在诱导过程中未加入β-淀粉样蛋白25~35.结果与结论:光镜下可见纺锤状的骨髓间充质干细胞诱导后出现长突起,呈现神经细胞样形态,但实验组突起数量和长度均少于对照组;免疫细胞化学法检测两组诱导后的神经元样细胞为神经元特异性烯醇化酶阳性;免疫蛋白印记法证明实验组的GSK-3β、Tau[pSer262]和Tau[pSer396]表达均显著高于对照组.结果提示β-淀粉样蛋白25~35能够通过GSK-3β途径诱导骨髓间充质干细胞分化的神经元样细胞Tau蛋白过度磷酸化.
-
乙烯雌酚可诱导骨髓基质干细胞向成骨细胞分化
背景:关于雌激素对骨髓基质干细胞作用的报道尚不多.目的:观察乙烯雌酚对兔骨髓基质干细胞成骨分化的影响.方法:体外培养骨髓基质干细胞,用0,10-7,10-6,10-5 mol/L浓度乙烯雌酚干预,并设地塞米松10-8 mol/L、β-甘油磷酸钠10 mmol/L、维生素C 50 mg/L为阳性对照.结果与结论:乙烯雌酚干预培养24,48,72 h,10-6 mol/L组显著促进了骨髓基质干细胞增殖(P < 0.01).干预48 h 10-5 mol/L组显著抑制细胞增殖,干预72 h 10-7 mol/L组显著抑制细胞增殖(P < 0.01).10-7 mol/L组乙烯雌酚干预25 d后开始出现钙化结节;10-7,10-6 mol/L组干预14,21 d碱性磷酸酶活性显著增加.证实乙烯雌酚能促进兔骨髓基质干细胞的成骨分化.
-
不同浓度5-氮胞苷体外诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞的分化
背景:在体外将人脐带间充质干细胞诱导为心肌样细胞的5-氮胞苷合适浓度的研究较少,且无明确结论.目的:对比不同浓度5-氮胞苷诱导人脐带间充质干细胞转化为心肌细胞的效果,以确定一种合适的诱导浓度.方法:第2代人脐带间充质干细胞中分别加入浓度为2.5,5,10,20,40,80 μmol/L的5-氮胞苷,作用24 h后除去,继续培养4周.于诱导后第2周行免疫组化染色检测肌钙蛋白Ⅰ阳性细胞率.结果与结论:5-氮胞苷诱导后7 d,细胞形态发生变化,细胞多紧密平行排列生长,细胞体积变大,梭形细胞比例下降,40,80 μmol/L组细胞形态变化明显.4周时,40,80 μmol/L组细胞的折光性减低,细胞活性减弱,继续出现死亡的细胞.诱导后2周,2.5 μmol/L组肌钙蛋白Ⅰ染色为阴性,10,20,40,80 μmol/L组细胞肌钙蛋白Ⅰ阳性率均明显高于5 μmol/L组(P < 0.05).提示5-氮胞苷可诱导人脐带间充质干细胞向心肌样细胞转化,10 μmol/L是较佳的诱导浓度.
-
振动应力刺激骨髓间充质干细胞修复兔骨缺损
背景:研究证实,力学因素可调控、诱导骨髓间充质干细胞定向分化为骨细胞,提高分化效率.目的:观察振动应力刺激对兔骨缺损微环境中骨髓间充质干细胞移植修复肱骨骨缺损成骨分化能力的影响.方法:24只兔按随机数字表法分为非振动单纯骨基质明胶组、非振动骨基质明胶+骨髓间充质干细胞复合植入组、振动骨基质明胶+骨髓间充质干细胞复合植入组,每组8只,建立兔肱骨骨缺损模型.振动组兔置于振动平台,以0.3 G的加速度,25 Hz,正弦波型,1次/d,30 min/次,持续4周施加振动刺激.结果与结论:造模4周后,大体观察结果显示,振动组骨痂生长良好,组织学切片显示其新生骨量较多,可见大量成骨细胞,骨缺损与断端形成骨性连接;振动组Ⅰ型胶原蛋白、RUNX2 mRNA表达水平明显高于非振动组.提示振动应力刺激可促进骨缺损微环境中骨髓间充质干细胞的成骨分化能力,提高Ⅰ型胶原蛋白、RUNX2 mRNA表达水平,从而加速骨缺损修复的进程.
-
多聚赖氨酸对脂肪来源干细胞三维立体条件下生物学特性的影响
背景:多聚赖氨酸可促进软骨细胞、表皮细胞的黏附、生长及增殖.目的:观察多聚赖氨酸对脂肪来源干细胞三维立体培养下生物学活性的影响.方法:采用流式细胞仪检测昆明小鼠脂肪来源干细胞表面CD29、CD34、CD44、CD45的表达,将脂肪来源干细胞分别与经多聚赖氨酸表面修饰的珊瑚羟基磷灰石或空白珊瑚羟基磷灰石体外复合培养.结果与结论:与空白珊瑚羟基磷灰石组比较,经多聚赖氨酸修饰的珊瑚羟基磷灰石上黏附的脂肪来源干细胞较空白珊瑚羟基磷灰石组多,并分泌较多细胞基质,复合培养2,4,8 d的A值较明显增高(P < 0.05);但经多聚赖氨酸修饰的珊瑚羟基磷灰石上黏附的脂肪来源干细胞碱性磷酸酶活性值升高不明显(P > 0.05).说明多聚赖氨酸能促进脂肪来源干细胞在珊瑚羟基磷灰石表面的黏附、生长和增殖,不影响脂肪来源干细胞向成骨细胞转化.
-
慢病毒介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞
背景:原代细胞的转染效率低下一直是制约其发展的主要因素之一,慢病毒转染以其独特的优势成为各种干细胞基因修饰良好的转染方法.目的:验证慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因修饰人骨髓基质细胞的可行性.方法:将携带增强型绿色荧光蛋白基因的慢病毒在含血清或无血清条件下按不同的MOI值分别转染人骨髓基质细胞,长期观察荧光蛋白表达情况.将经修饰的细胞通过立体定向移植入大鼠纹状体内,观察移植细胞的存活及目的基因的表达情况.结果与结论:基因转染48 h后,可见人骨髓基质细胞成功表达绿色荧光蛋白,无血清条件下的转染效率高于含血清条件下的转染效率,转染成功的细胞在体外持续培养2个月以上未见明显的荧光消减.转染后的细胞可在大鼠纹状体存活并持续表达绿色荧光蛋白2个月以上.提示慢病毒是一种高效的转染人骨髓基质细胞的载体,慢病毒载体介导增强型绿色荧光蛋白基因转染可以作为人骨髓基质细胞的示踪标志用于体内移植研究.
-
人脂肪间充质干细胞的分离培养与生物学特性
背景:脂肪来源间充质干细胞取材于吸脂手术所获得的脂肪抽吸物,可反复取材,原料来源充足.目的:建立一种体外分离培养人脂肪来源间充质干细胞的方法,并分析其生物学特性.方法:采用胶原酶消化法分离获取人脂肪来源间充质干细胞并进行体外培养,倒置相差显微镜下观察细胞形态;观察分析传代第3,7,10 代细胞生长曲线;采用流式细胞仪检测传代第5 代细胞表面标志表达.取传代第4代细胞行体外成骨细胞诱导和成脂诱导,采用碱性磷酸酶染色及油红O染色鉴定.冻存传代细胞,分别于 2,6 个月后复苏,锥虫蓝染色计数复苏后细胞存活率.结果与结论:原代细胞3 d 贴壁,6 d 后开始快速增长并形成集落,11 d左右达80%~90%融合,多呈纤维样;传代后细胞维持纤维样形态.传代细胞潜伏期24~48 h,对数增殖期三四天,对数增殖期后第五六天进入平台期.间充质干细胞表面CD34、CD14、HLA-DR 呈阴性表达,CD44、CD105、CD13呈阳性表达,HLA-ABC呈弱阳性表达.具有向脂肪细胞、成骨细胞分化的能力,冻存复苏后细胞存活率达 90% 以上,且与未冻存传代细胞具有相同的生长特性.
-
人脐血间充质干细胞对T淋巴细胞旁分泌的免疫调节作用
背景:相关研究表明脐血间充质干细胞具有一定的免疫调节作用,但具体机制不详.目的:观察脐血源间充质干细胞通过旁分泌机制对T淋巴细胞增殖的影响.方法:分离正常分娩产妇脐血间充质干细胞和健康志愿者外周血T淋巴细胞,按不同比例建立脐血间充质干细胞与T淋巴细胞非接触共培养体系,以单独培养T淋巴细胞作为对照组.结果与结论:脐血间充质干细胞形态学呈现成纤维梭型细胞样,呈旋涡状团集生长.流式细胞仪检测脐血间充质干细胞表面标记物:CD29(+),CD44(+),CD34(-),CD45(-),HLA-DR(-);与对照组相比,共培养组可明显抑制植物血凝素刺激T淋巴细胞的增殖作用(P < 0.05),且呈剂量依赖性;ElISA法检测共培养组分泌的白细胞介素10水平较对照组明显升高(P < 0.05);中和试验后脐血间充质干细胞对T淋巴细胞增殖的抑制作用明显减弱.结果说明脐血间充质干细胞可明显抑制异体外周血T淋巴细胞的增殖,可能是通过旁分泌白细胞介素10达到负向免疫调节作用.
-
脂质体介导骨保护素基因转染大鼠骨髓基质干细胞及其表达
背景:基因修饰骨组织工程种子细胞,可提高对骨缺损的修复能力.目的:构建含有骨保护素的真核表达载体并检测转染骨髓基质干细胞后的表达.方法:取4周龄SD大鼠胫骨和股骨行骨髓基质干细胞的分离和培养,分为载体组、空载体组、对照组.空载体组转染plRES2-EGFP载体,载体组转染plRES2-EGFP-OPG.结果与结论:转染后激光扫描共聚焦显微镜观察可见骨髓基质干细胞内绿色荧光蛋白表达;RT-PCR检测结果可见质粒载体组在1 200 bp有明显条带,空载体组及对照组未见表达;免疫细胞化学检测骨髓基质干细胞内骨保护素蛋白呈阳性;MTT法检测各组细胞增殖活力无明显改变(P > 0.05).证实应用plRES2-EGFP-骨保护素质粒转染大鼠骨髓基质干细胞,可获得外源性骨保护素的基因及蛋白表达.
-
反转录病毒载体转染小鼠骨髓细胞
背景:为方便、准确检测外源细胞在体内的存活情况,需在外源细胞转移标记基因.目的:观察多种细胞因子联合刺激下反转录病毒载体对BALB/C×C57BL F1代小鼠骨髓细胞基因转移效率的影响.方法:以PA317-GCGPXSN细胞制备病毒上清,NIH3T3细胞测定病毒滴度后,取经过干细胞因子、白细胞介素3、白细胞介素6预培养刺激后的BALB/C×C57BL F1代小鼠骨髓细胞,实验组实施基因转移,流式细胞仪及PCR方法测定基因转移效率.阴性对照组不做基因转移.阳性对照组为PA317-GCGPXSN细胞株.结果与结论:①病毒滴度为1.9×108 CFU/L.②对照组BALB/C×C57BL F1代小鼠骨髓细胞测定的荧光强度数值为0.63%,实验组为76.04%,两组相比差异有显著性意义(P < 0.01).PCR方法扩增到了NeoR基因的特异性片断,结果证实细胞因子预刺激后实施基因转移,可有效地将外源基因转移进入BALB/C×C57BL F1代小鼠骨髓细胞基因组中.
-
骨髓间充质干细胞体外诱导向内皮和上皮细胞的分化
背景:骨髓来源的间充质干细胞在体外具有多系分化潜能,但其在体外向肺组织细胞的分化能力尚存在争议.目的:体外诱导验证小鼠骨髓间充质干细胞向内皮细胞和上皮细胞分化的能力.方法:分离小鼠骨髓来源的间充质干细胞,以内皮诱导液向内皮细胞分化.另外将小鼠骨髓间充质干细胞分别在以下诱导培养基中进行上皮诱导3周:单纯上皮诱导培养液,上皮诱导培养液加10 μg/L 转化生长因子β1,并以未经诱导的小鼠骨髓间充质干细胞作为阴性对照,肺泡上皮作为阳性对照.结果与结论:小鼠骨髓间充质干细胞在上皮诱导培养液中诱导培养3周后,部分细胞由梭形变为典型的卵石样上皮细胞形态,诱导后约60%细胞表达广谱上皮细胞标志pan-CK,RT-PCR结果显示分化后的细胞表达上皮细胞特异标志CK18,未经诱导的间充质干细胞未表达.小鼠骨髓间充质干细胞在内皮诱导24 h后即出现了典型的血管网状结构,vWF免疫荧光染色显示约70%的细胞呈阳性,RT-PCR显示分化后的细胞表达内皮细胞特异性标志CD31、vWF和CD34.提示骨髓来源的间充质干细胞体外诱导培养具有跨胚层多系分化能力.
-
血红素氧合酶1提高骨髓间充质干细胞在梗死后心脏的存活
背景:移植骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,BMSCs)修复梗死后心功能受到围移植期移植细胞大量死亡的限制.因此寻找一种保护因子对移植细胞提供保护至关重要.目的:观察血红素氧合酶1(heme oxygenase,HO-1)对BMSCs在梗死后心脏生存的影响.方法:体外分离扩增培养大鼠BMSCs,Adv-hHO-1、Adv-GFP分别转染,移植前DAPI标记.结扎左前降支1 h后,分别将DAPI-hHO-1-BMSCs、DAPI-GFP-BMSCs多点注射到大鼠心脏梗死区周边,对照组注射等量PBS.结果与结论:Adv-hHO-1转染BMSCs后获稳定表达.仅hHO-1-BMSCs组稳定表达hHO-1 mRNA;hHO-1-BMSCs组血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子表达均高于其他两组(P < 0.01);存活BMSCs数量在第3,7天均明显高于GFP-BMSCs组(P < 0.05);大鼠心功能各项参数明显优于其他两组(P < 0.01).移植4周后,HO-1-BMSCs组梗死区周边毛细血管密度明显高于GFP-BMSCs组和对照组(P < 0.01),且胶原蛋白沉积减少,心室壁变厚,梗死面积较其他两组明显缩小(P < 0.01).提示HO-1提高移植到梗死心脏BMSCs的存活,HO-1协同BMSCs抑制心室重构,改善心功能.
-
内皮祖细胞生物学特征及其临床应用
背景:内皮祖细胞已经广泛用于研究缺血性疾病,能促进内皮再生、血管修复及组织中新生血管形成.目的:综述内皮祖细胞生物学特征及其临床应用的研究进展.方法:应用计算机检索1997-01/2010-12 PubMed数据库相关文章,检索词为"endothelial progenitor cells,ischemic cerebrovascular disease,early endothelial progenitor cells,late endothelial progenitor cells",共检索到文献219篇,终纳入符合标准的文献28篇.结果与结论:内皮祖细胞定居于成体骨髓,现已证实胎肝、人脐血、成人外周血及骨髓中均存在,且人脐血、外周血中的内皮祖细胞均来源于骨髓.此外在心脏、血管、脂肪组织和骨骼肌等外周组织中也发现内皮祖细胞的存在.内皮祖细胞具有促进内皮再生及血管修复的功能,能促进组织中新生血管形成,在防治血管成形术后再狭窄等血管性疾病中发挥重要作用,其中晚期内皮祖细胞比早期内皮祖细胞更易形成毛细血管,在干细胞移植临床应用于缺血性脑卒中具有广泛的前景.
-
SCI分析工具在干细胞移植研究中的应用
背景:对干细胞移植研究的文献计量分析报告目前较少.目的:通过干细胞移植研究文献的计量分析总结概括目前研究的状况和前沿.方法:以美国科学情报研究所(ISI)开发的Web of Science网络数据库为数据源基础,对2001-01/2010-12 SCI收录的干细胞移植研究论文的情况,从论文的发表时间分布、国家地区分布、机构分布、期刊分布和被引频次分布等方面进行统计与分析.结果与结论:2001-01/2010-12共有干细胞移植研究文献22 437篇,文献呈年度递增.中国2010年在SCI收录期刊上发表的论文数(406篇)少于美国2001年发表的论文数(486篇).以美国发表论文多,有11家核心研究机构和13种核心期刊和12篇经典文献.得出了干细胞移植研究这一领域的研究动态和发展趋势,为中国深入研究干细胞移植提供可供借鉴的参考建议.
-
失巢凋亡与上皮间充质转变和肿瘤干细胞
背景:上皮起源的肿瘤干细胞可能经历上皮到间充质的转变导致间充质特征的癌干细胞的产生,癌干细胞与失巢凋亡抵抗和肿瘤转移性疾病的起始相关.目的:综述癌干细胞的生物学特点及其与上皮间充质的转变、失巢凋亡的关系.方法:由第一作者采用电子检索的方式在PubMed数据及万方数据库中检索1990-01/2010-12有关肿瘤干细胞的研究,关键词为"上皮间充质转变,癌干细胞".结果与结论:上皮细胞到间充质状态转变的诱导作用已经牵涉到肿瘤细胞的迁移和广泛转移的增强,并且可能促成凋亡和失巢凋亡抵抗.癌干细胞与间充质细胞有关联,并且在肿瘤的开始,生长、转移和治疗抵抗方面起一个关键的作用.有效针对靶向癌干细胞的策略对于监测癌症治疗的进展和评估新的治疗因子是很关键的,间充质状态转变在肿瘤发生和转移方面产生和维持癌干细胞,提供治疗干扰这种新途径起到了调控作用,并且治疗干扰具有超越传统抗癌疗法的潜力.
-
干细胞及组织移植治疗甲状腺功能减退症
背景:干细胞及甲状腺组织移植治疗甲状腺功能减退症已经取得了一定的成果.目的:回顾分析干细胞与组织移植治疗甲状腺功能减退症的基础和临床研究进展.方法:由作者检索1980/2010 PubMed 数据库及万方数据库有关干细胞与甲状腺移植治疗甲状腺功能减退症的基础和临床研究.结果与结论:自体甲状腺组织移植治疗不可逆性甲状腺功能减退症的作用是肯定的,但存在不足之处,比如需要移植多少甲状腺组织才能使甲状腺功能保持在正常状态,移植后的长期效果还需要更多样本、更长期的跟踪随访来评价.胚胎干细胞在体外环境下可诱导分化为甲状腺细胞,但受伦理学和细胞移植排斥反应等原因困扰.脐血间充质干细胞具有来源丰富、易于采集、保存和运输、无异体排斥、避免伦理争议等诸多优点,在不同诱导条件下能够向不同谱系分化,已被广泛用于治疗各种疾病,但能否通过多种途径诱导其分化为甲状腺细胞,并通过移植方法来治疗甲状腺功能减退症仍需深入研究.
-
糖尿病足的发病机制及干细胞移植治疗
背景:干细胞移植治疗糖尿病足主要是根据干细胞可以在体内分化为血管内皮细胞和平滑肌细胞,分泌大量的促血管生成因子,形成新生血管的原理,改善和恢复下肢血流,达到治疗下肢缺血的目的.目的:总结近年来在糖尿病足发病机制和干细胞治疗方面取得的研究进展.方法:应用计算机检索1997-01/2011-01 PubMed、Sciencedirect数据库相关文章,检索词为"diabetic foot,lower limb ischemia,neuropathy,microangiopathy,macroangiopathy,stem cell therapy",并限定文章语言种类为English.分类筛选符合研究目的文献进行评价,终纳入32篇文献.结果与结论:通过对不同来源干细胞生物学特性及移植效果的比较,得出脐带、脂肪组织、羊水来源间充质干细胞,取材方便,分离容易,增殖能力强,具有与骨髓干细胞相似的生物学特性,有望成为干细胞移植的理想选择.还需要对干细胞的生物学特性、移植剂量、时机、疗程和致瘤性等方面进行研究.
-
自体骨髓间充质干细胞回输对脑性瘫痪儿童运动功能发育的影响
背景:自体骨髓干细胞对神经系统疾病具有一定的治疗作用,但对脑瘫治疗缺乏系统有对照的临床研究.目的:分析自体骨髓间充质干细胞移植对脑性瘫痪儿童运动功能发育的影响.方法:将34例脑性瘫痪者按其家长是否同意使用自体骨髓干细胞移植治疗分为治疗组和对照组,治疗组采取自体骨髓间充质干细胞移植结合康复训练,对照组只采用康复训练,分别在治疗前和治疗后3个月做粗大运动功能测试量表(GMFM)评估并进行对比.结果与结论:与治疗前比较,2组治疗后3个月GMFM评分均增高,而GMFM评分增加量均降低,差异均有显著性意义 (P < 0.05).治疗组GMFM评分增加量高于对照组(P < 0.05).提示自体骨髓间充质干细胞移植治疗脑性瘫痪是有效的,对促进脑性瘫痪患儿运动功能发育有积极作用.
-
ABO血型不合外周血造血干细胞移植10例
背景:ABO血型不合供受者之间进行外周血造血干细胞移植,面临受者血型的转变、移植后输血的选择等问题.目的:观察ABO血型不合外周血造血干细胞移植治疗血液病的临床疗效和近远期并发症.方法:回顾性分析了2005/2008武警总医院收治的10例ABO血型不合异基因外周血同胞供者造血干细胞移植患者的资料.总结植入效果,血型转变,移植物抗宿主病以及不良反应.结果与结论:9例患者恢复造血功能,血型转变为完全供者型,1例患者白细胞血小板恢复,但红细胞植入延迟.所有患者在输注移植物时未出现短暂的血红蛋白尿,无严重急性溶血和迟发型溶血的发生,1例出现严重的移植物抗宿主病.可见ABO血型不合外周血造血干细胞移植对移植疗效无明显影响,红细胞植入延迟的预防和处理十分重要.
-
大肠癌患者外周血细胞CD133的表达
背景:近期有报道称在肿瘤患者外周血中检测出了高于正常值的CD133阳性细胞.目的:观察CD133 mRNA和蛋白在大肠癌患者外周血中的表达并探讨其临床意义.方法:应用流式细胞技术与RT-PCR反应检测29例大肠癌患者和20例正常对照外周血中CD133 抗原与mRNA的表达.结果与结论:发生转移的大肠癌患者外周血中CD133阳性细胞比例显著高于正常对照及无转移的大肠癌患者(P < 0.01).正常健康人群和无转移大肠癌患者外周血中CD133mRNA表达为阴性,发生转移的部分大肠癌患者外周血中CD133mRNA表达阳性,阳性率为35.7%(5/14),在超过38个以上循环时表达为弱阳性.结果表明,无转移大肠癌患者外周血中CD133 mRNA和蛋白表达与正常对照无区别,发生转移的大肠癌患者外周血中CD133 mRNA和蛋白高于正常对照和未发生转移者.
