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5-氮胞苷与HGF因子体外联合诱导人骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞实验探讨
目的 探讨5-氮胞苷(5-Aza)与肝细胞生长因子(HGF)作为诱导剂,对人骨髓间充质干细胞(hMSCs)分化为心肌样细胞的影响.方法 采用密度梯度培养法与贴壁培养法相结合分离培养hMSCs,取第3代hMSCs随机分为3组,分别为HGF因子诱导分化组、5-Aza诱导分化组、HGF因子与5-Aza联合诱导分化组,诱导后培养4周,采用免疫细胞化学法对分化的心肌样细胞进行鉴定.结果 结果表明hMSCs贴壁呈集落生长,有成纤维细胞样外观.各组诱导后细胞均呈梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成.免疫细胞化学法检测心肌特异性蛋白结蛋白( Desmin)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达阳性,未经诱导的同培养天数的hMSCs中均未见表达.HGF不能诱导hMSCs向心肌细胞转化,但HGF因子与5-Aza联合诱导分化组心肌样细胞分化率明显高于其他两组.结论 hMSCs体外在HGF诱导下可定向分化为心肌样细胞,5-Aza与HGF体外联合应用可以提高hMSCs的诱导分化效率.
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5-氮胞苷诱导体外培养的胚胎干细胞向心肌样细胞分化
目的 研究5-氮胞苷(5-aza)体外诱导胚胎干细胞分化为心肌细胞的可行性.方法 将P19细胞接种于培养板中或铺有琼脂的培养板中,5μmol/L 5-aza培养7d后用不含5-aza的培养基继续培养.倒置显微镜观察细胞跳动情况,用免疫细胞化学、RT-PCR检测及电镜观察等方法鉴定细胞分化.结果 5-aza暴露结合悬浮培养可诱导P19细胞分化为有节律跳动的心肌细胞.分化的细胞表达心肌特异的GATA-4、α-MHC mRNA及α-sarcomeric actin、cTnT蛋白,同时透射电镜观察到细胞质内有明显的肌丝.结论 5-aza在体外可诱导胚胎干细胞向心肌样细胞分化,悬浮培养有助于细胞的心肌化过程.
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体外不同诱导条件对大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的影响
目的 研究不同方法诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌细胞(CM)的能力及表达心肌细胞特异性标记物的差别.方法 分离培养MSCs及CM,第3代MSCs经DAPI标记后分别进行5-aza诱导、与CM共培养或单独培养.1、2、3和4周观察细胞形态变化及免疫细胞化学鉴定cTnT和Cx43.结果 单独培养未见有细胞收缩,cTnT和Cx43表达阴性;诱导组和共培养组,培养至4周时细胞排列方向一致,成肌性排列,诱导1周时cTnT和Cx43表达阴性,而共培养组第5天cTnT和Cx43即开始表达,随着时间延长,两组cTnT和Cx43表达逐渐增加;相同周数内,共培养组的表达阳性率均高于诱导组(P＜0.01).结论 MSCs经5-aza诱导和与CM共培养,可转化为心肌样细胞并表达cTnT和Cx43,且共培养MSCs分化为心肌细胞的能力比5-aza诱导强.
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应用5-氮胞苷体外诱导P19细胞分化为心肌细胞
目的 探讨P19细胞体外经5-氮胞苷(5-aza)诱导向心肌细胞分化的特征.方法 将P19细胞接种于铺有琼脂的培养皿中,用含不同浓度5-aza的培养基诱导培养7d,细胞悬浮生长形成类胚体(EBs).将EBs用生长培养基黏附培养,观察细胞收缩情况;免疫细胞荧光检测α一横纹肌肌动蛋白(asarcomeric actin)、心肌肌钙蛋白(cTnT)的表达;RT-PCR检测GATA-4、a-MHC基因表达,鉴定细胞分化.结果 将5-aza诱导形成的:EBs黏附培养后,在EBs周围的生长晕中出现自发性节律收缩的细胞团片,α-sarcomeric:actin及cTnT染色阳性,表达GATA-4、αMHC基因.10μmol/L5-aza处理组心肌细胞分化率较高.结论 5-aza暴露结合悬浮培养可诱导P19细胞向心肌细胞分化,其分化与5-aza浓度有关.
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大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞
目的 采用骨髓间充质干细胞(MSCs)体外诱导为心肌样细胞,为干细胞移植治疗心衰提供一种新的细胞材料.方法 取SD大鼠四肢骨骨髓,分离培养MSCs,分别用终浓度为5、10、15、20 μmol/L的5-氮胞苷(5-aza)定向诱导,相差显微镜观察细胞形态学变化,应用免疫细胞化学、激光扫描共焦显微镜技术检测结蛋白(desmin),α-横纹肌肌动蛋白(α-sarcomeric actin)、心肌特异性肌钙蛋白(C-TnT)的表达,透射电镜鉴定.在诱导后7d、21 d和28 d,3个时间点以半定量RT-PCR方法检测细胞心肌早期转录因子GATA4和心肌特异性肌凝蛋白重链αMHC的表达.结果 MSCs体外经5-aza诱导后分化的细胞desmin、α-sarcomericactin、C-TnT均表达阳性,5 μmol/L组阳性表达较高,透射电镜下可见到平行排列的肌丝.RT-PCR结果显示,GATA4于诱导后7 d弱表达,21 d表达增强,28 d表达减弱.αMHC在诱导后7 d不表达,21 d弱表达,28 d表达明显.结论 骨髓间充质干细胞能够在体外被诱导分化为心肌样细胞,是自体心肌细胞一种良好的供体来源.
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3种方法诱导猪去分化脂肪细胞成肌分化效果的比较
目的 采用3种方法比较诱导猪去分化脂肪细胞(DA) 成肌分化的效果,旨在筛选诱导猪DA成肌分化的较优方法.方法 采用糖皮质激素、半乳糖凝集素-1(galectin-1) 法、5-氮胞苷(5-aza) 分别诱导猪DA成肌分化,于培养6 d、15 d和21 d后,并分别用倒置显微镜观察分化的细胞形态;诱导21 d后用间接免疫荧光法检测成肌特异蛋白结蛋白(desmin) 和肌球蛋白重链(MyHC) 的表达,用Real-time PCR检测肌细胞生成素(MyoG) mRNA的表达,每种方法诱导3组,每组重复检测3次.结果 诱导细胞的形态学观察显示, galectin-1法诱导的肌管形态佳,多核细胞数量也多;5-aza法次之,但诱导过程中细胞死亡率较高;糖皮质激素法诱导的细胞形态不规则,多形成放射状突起,而且出现较多成脂分化细胞.间接免疫荧光分析显示, galectin-1法和糖皮质激素法诱导的细胞Desmin、MyHC和MyoG mRNA都呈强阳性表达,而在5-aza法诱导的细胞这两种蛋白和基因都呈弱表达.结论 从诱导细胞的肌管形态,分化的纯度,生存能力,特异蛋白和基因的表达量等综合判断,诱导猪DA成肌分化, galectin-1法优于糖皮质激素法和5-aza法.
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去甲基化处理对NK-92MI细胞杀伤活力的影响
为观察DNA去甲基化处理对NK细胞系NK-92MI细胞抑制性KIR表达及细胞杀伤活力的影响,探讨抑制性kir基因去甲基化与NK细胞功能之间的可能联系,采用甲基化抑制剂5-氯胞苷处理NK-92M1细胞,采用流式细胞术检测NK-92MI细胞表面KIR3DL1、KIR2DL2/KIR2D13、K1R2DL1表达及细胞活力,并采用流式细胞仪将NK-92MI细胞分选为KIR3DL1阳性和KIR3DL1阴性细胞群,采用乳酸脱氢酶释放法检测NK-92MI细胞对白血病细胞系K562的杀伤活力.结果显示:应用终浓度为1.0、2.5和5 μmol/L的5-氮胞苷作用72小时可以诱导NK-92MI细胞KIR3DL1、KIR2D12/KIR2DL3、KIR2DL1表达增加,同时NK-92MI对K562细胞的杀伤活力降低,5-氮胞苷在1-5 μmol/L范围内不影响NK-92MI的细胞活力,KIR3DL1阳性NK-92MI细胞的杀伤活力较KIR3DL1阴性细胞的杀伤活力低.结论:去甲基化处理通过诱导抑制性KIR表达增加抑制NK-92MI细胞的杀伤活力.
关键词： 细胞毒性 NK-92MI细胞 杀伤细胞免疫球蛋白样受体 5-氮胞苷 DNA甲基化 -
体外诱导人骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的基因表达
目的:观察5-氮胞苷(5-aza)在体外诱导人骨髓间充质干细胞转化为心肌样细胞的心钠素(ANP)、脑钠素(BNP)、α-骨骼肌动蛋白(α-skeletal actin)、肌球蛋白轻链-2v(MLC-2v)、锌指结构转录因子(GATA-4)和心脏特异同源转录因子(Nkx2.5)基因表达.方法:取非血液疾病的5例胸科手术患者术中已切除掉的肋骨,抽取骨髓.利用淋巴细胞分离液行密度梯度离心法和差异贴壁法进行分离、提纯骨髓问充质干细胞,并进行培养扩增.用流式细胞仪对第2代的骨髓间充质干细胞细胞表面抗原进行测定.应用10 μmol/L 5-aza对第2代的骨髓间充质干细胞诱导24h,于诱导后1,2,3及4周,用反转录.聚合酶链反应检测ANP、BNP、α-skeletal actin、MLC-2v、GATA-4和Nkx2.5基因表达.结果:3份第2代骨髓间充质干细胞样本重复测定,表达CD29,CD44,不表达CD34,CD45.以5-aza诱导培养24 h后,骨髓间充质干细胞形态和排列方式发生明显变化,诱导1周后,细胞体积增大,多呈长梭行,平行排列;诱导2周后,细胞变为短柱状,突起位于2端,相邻细胞的突起紧密接触;诱导3周后,短柱状细胞的突起相互连接,部分细胞可见类肌管样结构;诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构.诱导组细胞ANP、BNP、α-skeletal aetin、MLC-2v、GATA-4和Nkx2.5的聚合酶链反应产物凝胶电泳呈阳性,对照组为阴性,诱导组基因表达量均随着时间延长逐渐增加.结论:5-aza可诱导骨髓间充质于细胞向心肌样细胞转化,其处于祖心肌细胞和分化的心肌细胞之间,并可能具有心肌细胞的功能.
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5-氮胞苷对培养兔骨髓基质细胞心房利钠肽表达的影响
目的:研究5-氮胞苷(5-azacytidine,5-aza)对体外培养兔骨髓基质细胞中心肌特异性心房利钠肽(atrial natriuretic polypeptide, ANP)表达的影响,探讨骨髓基质细胞向心肌样细胞分化的条件.方法:体外分离培养兔骨髓基质细胞用不同浓度5-aza诱导培养,以RT-PCR方法测定诱导前后ANP的表达.结果:正常培养兔骨髓基质细胞不表达ANP.经5-aza诱导并继续培养24h后,骨髓基质细胞表达ANP,在一定时间、浓度范围内ANP含量逐渐增加.结论:5-aza诱导体外培养兔骨髓基质细胞表达心肌特异性ANP,与诱导时间及浓度呈正相关,提示可诱导兔骨髓基质细胞向心肌样细胞分化.
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大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞诱导分化的体外条件研究
目的研究体外条件下大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)向心肌样细胞分化的影响因素.方法采用免疫细胞化学方法检测rMSCs表面CD71、SH2、CD31、CD34、CD45以及5-氮胞苷诱导后心肌细胞特异性蛋白α-sarcomeric actin、troponin T的表达;细胞计数法计算rMSCs倍增时间;观察不同传代数、不同时间及不同剂量5-氮胞苷、依地酸二钠(ethylenediami-netetraacetic acidtetrasodium salt,EDTA-2Na)及无血清培养液对rMSCs分化潜能的影响.结果rMSCs表达CD71、SH2,而CD31、CD34和CD45呈阴性表达.第3代rMSCs经10 μM 5-氮胞苷诱导后细胞呈现克隆、肌管等结,构,表达α-sarcomeric actin、troponin T等心肌细胞特异蛋白,细胞倍增时间为(100±8)h.第1、12代rMSCs诱导后细胞形态未发现明显改变、未出现上述结构,细胞倍增时间分别为32±4 h、38±3 h.1、15、100μM 5-氮胞苷刺激12～72 h,2周后未发现克隆或肌管结构.5-氮胞苷刺激,以1 mM EDTA处理以及无血清培养液培养rMSCs形成的克隆、肌管结构不典型,α-sarcomeric ac-tin、troponin T表达较弱.结论rMSCs具有体外分化潜能,并且受细胞传代数、细胞倍增时间、诱导浓度和时间、细胞外钙离子浓度及培养条件等因素的影响.
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自体骨髓间叶干细胞诱导分化移植重建窦房结起搏功能的实验研究
目的:探索应用骨髓干细胞治疗病态窦房结综合征的生物介入方法.方法:选取犬6只,随机分为实验组和对照组,每组3只.抽取犬自体骨髓,分离培养扩增骨髓间叶干细胞,并在体外应用5-氮胞苷进行诱导分化.应用射频技术损伤犬窦房结,建立动物病态窦房结综合征模型.将溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记的且诱导分化的骨髓间叶干细胞自体移植到窦房结区,应用心电图、组织病理、免疫组化等技术观察干细胞移植治疗效果.结果:在动物病态窦房结综合征模型,自体移植骨髓干细胞后,心电图示窦房结功能明显改善;病理与免疫组化示移植的骨髓干细胞在窦房结区分化为拟窦房结细胞与血管内皮细胞,并与宿主细胞建立缝隙连接.结论:自体移植诱导分化的骨髓间叶干细胞可改善窦房结自律起搏功能.
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5-氮胞苷体外诱导成人脂肪间充质干细胞分化为心肌样细胞的初步研究
目的:探索不同浓度5-氮胞苷(5-aza)在不同诱导时间下对成人脂肪间充质干细胞(ADMSCs)分化为心肌细胞的诱导作用,确定佳诱导条件.方法:体外分离成人脂肪组织来源的间充质干细胞并进行传代培养,流式细胞仪鉴定细胞CD44、CD34的表达,用含不同浓度5-aza(3、5、10、15、20μmol/L)培养基分别诱导12小时、24小时、48小时、72小时,倒置相差显微镜下逐日观察细胞形态变化;于诱导后14、28天时免疫细胞化学染色鉴定心肌特异性肌钙蛋白I(cTn-Ⅰ)的表达,分析细胞转化率.结果:分离培养的ADMSCs表达CD44,不表达CD34;5-aza诱导后14天时免疫细胞化学未见有心肌细胞特异性cTn-Ⅰ表达,诱导28天细胞免疫细胞化学显示cTn-Ⅰ表达阳性,以10 μmol/L 5-aza诱导24小时为佳体外诱导条件.结论:成人脂肪组织间充质干细胞可在体外5-aza诱导下向心肌细胞分化.
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犬骨髓间叶干细胞体外定向诱导分化心肌细胞的实验研究
目的:旨在建立骨髓间叶干细胞(MSCs)体外定向诱导分化心肌细胞的方法,为心肌疾患的移值修复治疗提供成体干细胞来源.方法:利用Percoll密度梯度法及MSCs黏附贴壁生长特性进行分离培养与扩增骨髓MSCs,并予以鉴定证实.应用5-氮胞苷对培养早期的骨髓MSCs进行定向诱导分化心肌细胞.通过细胞形态学、细胞免疫组化、透射电镜等技术观察分化细胞的肌管,心肌细胞特异性蛋白与细胞特异性超微结构以鉴定诱导分化的效果.结果:利用Percoll密度梯度法与细胞黏附贴壁生长特性,可分离培养与扩增足量骨髓MSCs.应用化学诱导剂5-氮胞苷10～20 μmol/L孵育早期培养的骨髓MSCs4～5周,可见细胞形成肌管;肌细胞特异性蛋白α-肌动蛋白,肌球蛋白以及心肌细胞特异性分子标志肌钙蛋白I免疫组化染色阳性;透射电镜可见肌丝与房性颗粒.结论:骨髓MSCs可在体外5-氮胞苷的诱导下定向转化为具有典型结构的心肌细胞.
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5-氮胞苷浓度对体外骨髓间充质干细胞诱导分化为心肌样细胞的影响
目的探讨不同浓度5-氮胞苷(5-aza)体外诱导小型猪骨髓间充质干细胞(MSCs)向心肌样细胞分化的可能性及其对细胞扩增速度的影响.方法10ml骨髓,1.077g/ml Ficoll密度梯度离心法分离骨髓单个核细胞(MNCs),第2代传代细胞分别加入3,5,10μmol/L浓度5-aza化学诱导24h,与对照组连续培养4周,细胞爬片免疫荧光法鉴定结蛋白desmin及心肌特异性肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)的表达,电镜观察诱导细胞的超微结构变化.结果5-aza化学诱导后MSCs形态变长、增大,排列更加紧密、整齐,5和10 μmol/L组可见较多的多核细胞,部分管状结构,诱导率分别为36%和31%,无显著性差异;3μmol/L组上述变化的细胞极少,3种浓度及对照组4周后细胞扩增数量分别为(3.81±0.40)×106、(3.76±0.62)×106、(3.67±0.80)×106及(2.90±0.21)×106,10μmol/L组增殖速度明显减慢(P＜0.05).各组诱导后的细胞均未见自发搏动.免疫组化提示desmin及cTnI表达阳性,5和10μmol/L组电镜下出现肌丝样结构、心房颗粒及细胞间的缝隙连接.结论小型猪MSCs经5、10 μmol/L 5-aza化学诱导可分化为心肌样细胞,其中5 μmol/L5-aza不仅可以诱导心肌样细胞而且对细胞增殖速度影响小.
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体外诱导骨髓间质干细胞向心肌细胞的分化
目的 研究在体外5-氮胞苷诱导骨髓间质干细胞定向心肌向分化的条件.方法 取成年SD大鼠胫骨/股骨骨髓,分离并培养骨髓间质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs).原代第3天用不同浓度5-氮胞苷作用不同时间.用免疫组化方法鉴定心肌肌钙蛋白(TnT)的表达,并通过RT-PCR鉴定GATA-4和β-MHC的表达.结果 诱导后BMSCs细胞增生趋于停滞,10 d可见细胞变成长梭状,20 d细胞排列出现方向性,有TnT阳性细胞出现,并表达GATA-4和β-MHC.随着诱导药物5-氮胞苷浓度的增加,免疫细胞化学染色TnT阳性细胞增多,且表达更多的GATA-4和β-MHC,至5×10-5 mol/L时基本达到峰值.5-氮胞苷对BMSCs的持续性诱导并不能明显增加免疫细胞化学染色TnT阳性细胞数量和GATA-4、β-MHC的表达.结论 5-氮胞苷诱导后BMSCs可向心肌细胞分化,是临床心肌细胞成形术理想的供体细胞.
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Apelin-13对5-Aza诱导脐带间充质干细胞向心肌细胞分化的影响
目的 探讨apelin-13蛋白在体外对5-氮胞苷(5-Aza)诱导人脐带间充质干细胞(hUC-MSCs)向心肌细胞分化的影响.方法 采用组织块贴壁法培养hUC-MSCs,胰酶消化传代；取P2代细胞置于不同分化条件的培养液中分化培养14d,实验分为A、B、C、D组(apelin-13浓度分别为0、1×10-6、2×10-6和10×10-6mol/L),各组培养基中5-Aza浓度均为10×10-6mol/L.采用流式细胞仪检测hUC-MSCs表面免疫标记,MTT法检测细胞在570nm处的吸光度(A)值,RT-PCR检测肌钙蛋白T(cTnT)、GATA-4 mRNA表达水平,免疫组织化学染色法检测心肌细胞表面标志物cTnT的表达.结果 流式细胞仪鉴定结果表明,hUC-MSCs表达CD44、CD90、CD105、CD73、经典人类白细胞抗原Ⅰ类抗原(HLA-ABC),不表达CD34、CD45、经典人类白细胞抗原Ⅱ类抗原(HLA-DR).MTT检测显示,0、10×10-6mol/L apelin-13处理的hUC-MSCs在570nm处的A值分别为0.841 ±0.290、0.875±0.325,差异无统计学意义(P＞0.05).B、C、D组cTnTmRNA表达水平分别是A组的2.09±1.35、5.24±1.30、1.17±0.63倍,B、C、D组GATA-4 mRNA表达水平分别是A组的2.68±1.18、4.82±0.14、2.14±0.27倍；C组与B、D组比较,cTnT、GATA-4 mRNA表达差异具有统计学意义(P＜0.05).免疫组化染色显示,诱导14d后C组细胞cTnT蛋白表达呈阳性.结论 10×10-6m01/L apelin-13对hUC-MSCs无毒性作用,一定浓度的apelin-13蛋白可增强5-Aza诱导hUC-MSCs向心肌细胞分化的效率,浓度为2×10-6mol/L时增强作用明显.
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关键词：
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骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞
目的 观察大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs) 体外培养、定向诱导分化为心肌样细胞的条件.方法 抽取大鼠骨髓,采用贴壁培养法分离MSCs进行培养、传代,在第4代MSCs中添加诱导剂5-氮胞苷(5-aza)对其进行诱导分化,观察细胞形态学的变化, 应用荧光免疫组织化学方法进行鉴定.结果 大鼠MSCs贴壁呈集落生长,有成纤维细胞样外观.诱导后细胞呈梭形,排列方向渐趋一致,有肌管样结构形成,肌钙蛋白及Connexin43 表达强阳性.结论 大鼠MSCs体外在5-氮胞苷作用下可定向分化为心肌样细胞.
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加味丹参饮体外诱导骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究
目的：探讨加味丹参饮体外诱导骨髓间充质干细胞（ bone marrow mesenchymal stem cells BMSCs ）向心肌样细胞分化的实验研究。方法采用贴壁法获取大鼠BMSCs ，流式细胞术检测细胞表面抗原。 MTT法检测加味丹参饮对BMSCs大无毒浓度，用第3代细胞分组诱导：正常对照组，加味丹参饮组，5－氮胞苷组，加味丹参饮＋5－氮胞苷组，应用western blot检测各组细胞结合蛋白（Desmin），α－肌球蛋白重链（α－MHC），心肌肌钙蛋白T（cTnT）蛋白表达，RT－PCR法检测各组细胞GATA－4，缝隙连接蛋白43（CX43）及Nkx2－5 mRNA表达。结果大鼠BMSCs表面CD90阳性率高于95％，CD34及CD45阳性率低于5％。加味丹参饮对BMSCs大无毒浓度为0．625 g／L。与正常对照组比较，加味丹参饮组，5－氮胞苷组，加味丹参饮＋5－氮胞苷组中Desmin，α－MHC及cTnT蛋白表达量上调，GATA－4，CX43及Nkx2－5 mRNA表达量上调，差异有统计学意义（P＜0．01）。与加味丹参饮组或5－氮胞苷组比较，加味丹参饮＋5－氮胞苷组中Desmin，α－MHC及cTnT蛋白表达量上调，GATA－4，CX43及Nkx2－5 mRNA表达量上调，差异有统计学意义（ P＜0．01）。结论加味丹参饮能够诱导BMSCs向心肌样细胞转化，与5－氮胞苷联合给药具有协同作用。
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丹酚酸B对大鼠骨髓间充质干细胞分化过程中Desmin、α-actin mRNA表达的影响
[目的]探讨丹参单体丹酚酸B(SalB)在体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为心肌样细胞的情况及Desmin和α-actin mRNA的表达,确定大鼠MSCs体外诱导为心肌样细胞的条件、规律及转化细胞的特点.[方法]选用成年近交系Wistar大鼠,利用percoll分离液进行密度梯度离心法和直接贴壁法进行分离、提纯MSCs,并进行培养扩增.免疫组化方法对第9代MSCs表面抗原进行鉴定.分别应用10μmol/L5-氮胞苷(5-azaeytidine,5-aza)及250μg/L SalB联合5-aza(5-aza+SalB)对第9代的MSCs进行联合诱导24 h,于诱导后第4周,用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PcR)法检测Desmin、α-actin mRNA的表达.[结果] 1)第9代MSCs免疫组化染色CD44呈阳性表达,CD34呈阴性表达.2)诱导4周后,细胞体积变小,可见由几个细胞连接形成的多核肌管样结构.5-aza组、5-aza+SalB组均出现明确的心肌早期分化基因与5-aza组相比,5-aza+SalB组的Desmin和α-actin mRNA表达明显增强.[结论] SalB具有促进5-aza诱导的MSCs向心肌样细胞分化的作用.
