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体外急性心肌梗死早期诊断方法的研究
从人心肌中提取心肌肌凝蛋白轻链(CMLC),免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞做常规融合,制备单克隆抗体.通过抗人心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体的相加指数、亲和常数测定和抗体夹心实验,筛选到配对较好的两对单抗,在此基础上建立起轻链夹心ELISA方法,为临床急性心肌梗死早期诊断方法研究提供条件.
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应用转基因小鼠研究心力衰竭的肾上腺素能机制
目前已有20多种与交感神经肾上腺素能信息系统有关的小鼠品系问世(表1)[1~17],这些品系已形成系统,为心力衰竭(heart failure,HF)的研究提供了有力的工具.多数小鼠品系采用a-肌凝蛋白重链(a-myosin heavy chain, a-MHC)的启动基因来实现转入基因在心脏中的超表达,从而提高肾上腺素能信息系统中某种成分的含量.其他小鼠品系包括非特异性基因删除(disruption)和心脏特异性表达某种抑制肽.目前应用这一类小鼠品系的研究已经积累了大量的信息,许多发现已使我们对HF中肾上腺素能机制有了全新的认识.现阶段采用的研究手段主要有三种:(1)探索小鼠品系的心脏表现型;(2)品系间杂交(crossbreed)来实现基因互补(genetic complementation) ;(3)在小鼠品系上复制实验性 HF.
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抗CD4单抗诱导免疫耐受防治自身免疫性心肌炎的研究
目的 探讨体内注射CD4单克隆抗体诱导大鼠对猪心肌肌凝蛋白产生免疫耐受及这种免疫耐受对自身免疫性心肌炎大鼠的治疗作用.方法 分别于第0、7天给予Lewis大鼠体内注射猪心肌肌凝蛋白诱导自身免疫性心肌炎的产生.分别于第-2、-1、0、1天注射CD4单克隆抗体诱导免疫耐受.初次免疫后18 d,检测免疫耐受的诱导情况及其对心肌炎大鼠的作用.结果 同非治疗组鼠相比较,抗体治疗组鼠心功能明显改善;没有明显的心肌变性、坏死、炎症细胞浸润及纤维化;抗原特异性淋巴细胞增殖反应明显下降;血清抗心肌肌凝蛋白自身抗体明显降低;血清TH1细胞因子IFN-γ、IL-2的水平显著下调;TH2细胞因子IL-6、IL-10的水平没有改变或者被上调.结论 CD4单抗能够诱导机体对猪心肌肌凝蛋白产生免疫耐受,通过免疫耐受的诱导阻止了自身免疫性心肌炎大鼠心功能的紊乱和心肌的损伤.
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人类喉肌纤维的肌凝蛋白重链表达
肌凝蛋白重链(MHC)是肌节重丝的主要成分,肌肉的MHC成分决定它的收缩速度,与肌原纤维肌动凝蛋白的ATP酶在不同pH水平的活性有关.Ⅱ型纤维显示肌原纤维ATP酶在碱性pH中的高活性,在酸性pH中的低活性,并且以快ⅡA或快ⅡB MHC的表达为特征,而Ⅰ型纤维则相反(慢收缩)包含慢MHC.成人四肢肌肉主要以快纤维为主(60%),而另一些肌肉如咬肌、膈肌、环杓后肌则主要以Ⅰ型纤维为主,不同的MHC异构型(MHCs)已在发育过程和不同的成人肌肉中得到确认.
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大鼠心肌肥厚向充血性心衰转变过程中肌凝蛋白重链异构体基因表达的改变
目的 探索升主动脉缩窄引起的大鼠左心室肥厚(LVH)和充血性心衰(CHF)心肌收缩张力发展速率低抑的分子机制。方法 采用左心室乳头肌测定张力发展大速率(+dT/dtmax);采用Northern blot分析法检测左心室心肌肌凝蛋白重链异构体mRNA水平。结果 1)CHF和LVH组的+dT/dtmax值分别低于假手术对照组(Sham)64.17%和37.15%(P<0.01),CHF组低于LVH组42.99%(P<0.01);2)LVH组与Sham组相比α-MHC的mRNA水平没有显著差异(P>0.05),但CHF组分别较Sham组和LVH组下降了42.3%和56.1%(P<0.01);与Sham组相比LVH组的β-MHC mRNA水平上调了88.3%(P<0.01),而CHF组分别较LVH与Sham组增高1.5和3.7倍(P<0.01);LVH和CHF组α-MHC/β-MHC mRNA的比率分别降至对照组的42.4%和9.8%(P<0.01);3)α-MHC/β-MHC mRNA与+dT/dtmax的相关性分析显示,这些数据存在正相关,其相关系数为0.875(P<0.01)。结论 α-MHC/β-MHC mRNA比率下降是CHF和LVH心肌+dT/dtmax下降的主要分子机制。LVH组α-MHC/β-MHC mRNA比率下降主要是由于β-MHC mRNA的上调;而CHF组比率大幅下降则是α-MHC下降和β-MHC上调的综合效应所致。
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强肌健力口服液与龟板混合血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成肌分化的影响
目的:观察强肌健力口服液与龟板混合血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成肌分化的影响.方法:使用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,5-溴脱氧嘧啶(Brdu)和CD44双重免疫组化鉴定,传3代后的MSCs分为强肌健力口服液与龟板混合血清组和空白血清对照组,免疫组化染色鉴定肌凝蛋白(myosin)、结蛋白(desmin)的表述.结果:诱导后第3、13天,强肌健力口服液与龟板混合血清组部分细胞出现desmin和myosin阳性表达.结论:强肌健力口服液与龟板混合血清能诱导MSCs向成肌细胞定向分化,为中医脾肾相关理论提供依据.
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镁与1.6-二磷酸果糖治疗慢性充血性心力衰竭的疗效分析
慢性充血性心力衰竭,由于常期应用利尿剂和地高辛,醛固酮增高及肠道吸收减少等原因均会导致低镁血症[1].缺镁时可使肌凝蛋白ATP酶活性降低,供给心肌能量下降,导致心肌收缩力减弱[2].在心肌缺血缺氧时,乳酸的堆积抑制了PH值敏感的磷酸果糖激酶(PFK)的活性,从而减少FDP的生成,也就抑制了糖酵解能量的产生;使心肌收缩力进一步下降.这时即使积极地按照常规治疗,亦不能缓解病情.所以笔者在采用强心、利尿、扩血管的基础上加用了硫酸镁及1.6-二磷酸果糖(FDP)收到良好的效果,报道如下.
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心肌肌凝蛋白诱导BALB/c小鼠发生自身免疫性心肌炎
目的:建立BALB/c小鼠实验性自身免疫性心肌炎模型.方法:采用差速离心、分级饱和硫酸铵沉淀和DEAE-Sephadex A-50离子交换层析纯化等方法自猪心中提取并纯化心肌肌凝蛋白,经SDS-PAGE和Western印迹方法鉴定.以此蛋白免疫遗传易感的BALB/c小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型.结果:97%(35/36)小鼠在免疫后第14天出现不同程度的心肌炎病理改变,主要表现为心肌间质单个核细胞浸润、肌纤维排列紊乱和肌浆溶解.免疫鼠血清肌钙蛋白I水平升高,并出现较高滴度的抗肌凝蛋白自身抗体.结论:猪心肌肌凝蛋白可以诱导BALB/c小鼠出现典型的自身免疫性心肌炎.
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猪心肌肌凝蛋白的提取纯化及鉴定
采用超速离心、分级饱和硫酸铵沉淀法等从猪心肌中成功的分离出了肌凝蛋白,并应用DEAE-Sephadex A-50离子交换层析对心肌肌凝蛋白进行了进一步的纯化,Fiske-SubbaRow法测定蛋白质的活性,Bradford法测定蛋白质的浓度.用变性、非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳及质谱分析对蛋白质进行了精确的鉴定.研究表明,蛋白质粗提产量约为15mg/g,经过纯化后的蛋白质中基本不含杂质蛋白,活性为0.22 Piμmol/(mg·min),变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳显示蛋白质为3条带,分子质量约是200 ku,27 ku和20 ku.与标准肌凝蛋白同时进行电泳显示条带相同.非变性的聚丙烯酰胺凝胶电泳显示蛋白质为一条带,此条带经过质谱分析准确的证明为心肌肌凝蛋白.结果表明以上方法成功的从猪心中提取了高纯度高产量心肌肌凝蛋白,为肌凝蛋白在临床和科研中的应用打下了基础.
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实验性自身免疫性心肌炎小鼠模型研制
病毒性心肌炎(VCM)和扩张型心肌病(DCM)的发病机制至今仍不是十分明了,目前已有研究表明VCM和DCM的发病与自身免疫机制有关.心肌炎患者体内可以检出多种自身抗体,如抗β1-受体抗体、抗M2受体抗体等.本实验从猪心室肌中分离提纯肌凝蛋白并将其注射到BALB/c小鼠皮下,引发小鼠自身免疫性心肌炎,观察其自身免疫阶段和慢性病变期的病理变化,从而建立实验性自身免疫性心肌炎小鼠模型.
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获得性漏斗胸膈肌肌凝蛋白重链MyHC-Ⅱa表达及其意义
目的 探讨获得性漏斗胸膈肌肌凝蛋白重链MyHC-Ⅱ a表达的变化.方法 4周龄SD大鼠72只,随机分为3组,每组24只.肋软骨组和膈肌组分别从胸骨旁切断下位三对肋软骨和造成膈肌物理损伤复制漏斗胸模型,对照组不做任何干预.分别于术后第二、四和八周处死动物,收集膈肌,通过SDS聚内烯酰胺凝胶电泳结合Western印迹分析检测膈肌MyHC-Ⅱ a的表达.结果 测得两组前胸壁凹陷畸形动物各时间点膈肌MyHC-Ⅱa在组间比较差异有显著性,两组MyHC-Ⅱ a表达均较对照组减少(P<(1.05),而两实验处理组间比较,仅2周时膈肌组MyHC-Ⅱ a表达减少(P<0.05),4周和8周时MyHC-Ⅱa表达在组问的差异均无统计学意义(K>0.05).结论 获得性漏斗胸大鼠膈肌肌凝蛋白重链MyHC-Ⅱ a表达减少,提示在漏斗胸形成过程中发生了膈肌功能的改变.
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强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成肌分化的影响
目的 观察强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)成肌分化的影响.方法 用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,5-溴脱氧嘧啶(Brdu)和CD44双重免疫组化鉴定,传3代后的MSCs分为强肌健力口服液含药血清组和空白对照组,免疫组化染色鉴定肌凝蛋白(Myosin)、结蛋白(Desmin)的表达.结果 诱导后第3 d,部分细胞出现Desmin和Myosin.结论 强肌健力口服液含药血清诱导MSCs向成肌细胞定向分化.
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应用转基因小鼠研究心力衰竭的进展
近十年来,随着小鼠基因库的破译,小鼠胚胎干细胞的研究和基因干预技术的进展,已有大量转基因(TG)小鼠品系问世.通过对某一靶基因的干预(如利用α-心肌凝蛋白启动子介导的过度表达、剔除、诱变等),目前已建立了140多种具有各种心脏表现型的小鼠品系.
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肥厚型心肌病的诊断和治疗进展
1 引言本病的确切病因迄今仍未十分明确,有报道是遗传性疾病,亦有报道本病人群中人类白细胞抗原(DW4、B4、A9、B5、B40)的基因频率增加,故提出基因缺陷的假说.还有人提出本病与原位癌基因表达异常、钙调节异常等有关.研究取得较大进展的为家族性肥厚型心肌病,运用分子生物学和基因诊断方法,现已明确家族性肥厚型心肌病是一种常染色体显性遗传,其致病基因为14号染色体长臂上的β-肌凝蛋白重链的缺陷,至少有两个β-肌凝蛋白重链的基因位点突变与家族性肥厚型心肌病发病有关.