中国组织工程研究杂志
Chinese Journal of Tissue Engineering Research 중국조직공정구여림상강복
- 主管单位： 中华人民共和国卫生部
- 主办单位： 中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
- 影响因子： 1.38
- 审稿时间： 1-3个月
- 国际刊号： 2095-4344
- 国内刊号： 21-1581/R
- 论文标题 期刊级别 审稿状态
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C-kit+心脏干细胞治疗缺血性心脏病：研究现状及面临挑战和发展前景
背景：研究发现C-kit+心脏干细胞具有高度自我更新能力，能够特异性分化为心脏结构细胞，是目前被认为有希望以完全心肌再生应用于缺血性心脏病及其他终末期心脏病替代治疗的干细胞类型。目的：就C-kit+心脏干细胞的发现、来源、特性，心脏干细胞治疗缺血性心脏病的历史和现状，目前心脏干细胞治疗缺血性心脏病存在的问题及可能的解决方法作一综述，从而加强对C-kit+心脏干细胞特性的理解，以便更好地预测其生物学行为并解决其修复心肌的相关问题。
方法：应用计算机检索PubMed数据库中2003年1月至2014年6月关于心脏干细胞的文献，在标题和摘要中以“stem cel，C-kit+ cardiac stem cels，cardiac infarction”为检索词进行检索。选择文章内容与C-kit+心脏干细胞有关，同一领域文献则选择近期发表或发表在权威杂志文献，终选择38篇文献进行综述。结果与结论：众多基础实验研究均证明C-kit+心脏干细胞确实能够明显改善动物模型的心功能，改善心室重构，并且有关临床试验也已经证明其能够改善缺血性心脏病患者的心功能和生活质量。虽然试验中发现移植细胞很快流失，并不能发挥修补替代纤维瘢痕的作用，但是其对心脏的有利作用并不随着种子细胞的流失而停止，而是能够长期存在，主要考虑跟各种细胞因子的旁分泌作用有关。目前应用基因修饰种子细胞改善其移植后驻留率和分化相关问题已经取得了一些积极成果，但是仍然有很多问题需要进一步研究。 -
病灶清除植骨联合骨髓单个核细胞治疗早期股骨头坏死：髋关节功能评价
背景：已有多项研究表明骨髓干细胞的数量减少和活力降低与股骨头坏死的发病机制密切相关，因此移植足够数量的骨髓干细胞更有利于解决坏死区的修复重建问题。
目的：分析病灶清除植骨联合骨髓单个核细胞治疗早期股骨头坏死的临床疗效。
方法：2011年3月至2012年7月收治25例33髋股骨头坏死患者，男15例，女10例；年龄18-55岁，平均34.6岁；病程8-20个月，平均14个月。病因：激素性5例7髋，酒精性4例5髋，特发性16例21髋。ARCO分期：ⅡA期8髋，Ⅱ B期15髋，Ⅱ C期9髋，Ⅲ A期1髋，治疗前Harris评分为(55.2±6.5)分，目测类比评分为(6.81±1.19)分，MRI测量股骨头坏死体积为(13.38±5.1) cm3。经过病灶清除植骨及自体骨髓单个核细胞移植，随访观察Harris评分、目测类比评分和MRI测量股骨头坏死体积。
结果与结论：治疗后患者切口均Ⅰ期愈合，所有患者均获随访，随访时间12-18个月，平均15个月。治疗后3，6个月，1年Harris评分明显高于治疗前，目测类比评分和坏死体积值明显低于治疗前，差异有显著性意义(P <0.05)。治疗后1年时Harris评分为(85.6±7.8)分，目测类比评分为(2.38±0.73)分，坏死体积为(7.23±3.3) cm 3。髋关节功能评估：优15髋，良11髋，可4髋，差3髋(终进行全髋关节置换)。结果表明病灶清除植骨联合自体骨髓单个核细胞移植治疗早期股骨头坏死近期疗效肯定，远期效果仍有待进一步观察。 -
玻璃酸钠及胎盘间充质干细胞和诱导的软骨细胞膝关节腔内注射：修复膝骨关节炎
背景：胎盘间充质干细胞已被证实具有较强的增殖能力，能向神经细胞、血管内皮细胞、表皮细胞以及胰岛样细胞等诱导分化，但向软骨细胞诱导分化并修复膝骨关节的研究不多。
目的：人胎盘间充质干细胞体外诱导软骨细胞膝关节腔内注射修复兔膝骨关节炎，并比较璃酸钠和胎盘间充质干细胞膝关节腔内注射的修复效果。
方法：①选新西兰大白兔制作骨关节炎模型，左后肢膝关节炎造模后石膏固定5.5周，镜下观察关节软骨情况。②利用Ⅳ型胶原酶消化分离培养人胎盘间充质干细胞，流式细胞仪检测细胞表面标志物，证实为胎盘间充质干细胞。取第3代胎盘间充质干细胞进行实验，将胎盘间充质干细胞加入软骨诱导培养基向软骨细胞分化，倒置显微镜观察结果。③将大白兔随机分成玻璃酸钠膝关节腔内注射组、胎盘来源间充质干细胞膝关节腔内注射组和诱导软骨细胞膝关节腔内注射组，分别给予膝关节腔内注射，连续5周取膝关节软骨镜下观察，比较软骨修复情况。
结果与结论：体外诱导培养的人胎盘间充质干细胞增殖形成大量贴壁细胞，贴壁细胞具有典型的间充质细胞形态；应用软骨诱导培养基培养后，细胞只保持微团，不继续增殖形成贴壁细胞，微团基部无贴壁细胞，显示人胎盘间充质干细胞可以分化为软骨细胞。苏木精-伊红染色镜下观察发现，各组兔膝关节软骨细胞均有修复，诱导软骨细胞膝关节腔内注射后兔膝关节软骨修复情况较好，优于玻璃酸钠和胎盘间充质干细胞膝关节腔内注射组。 -
骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠急性放射性肺损伤
背景：针对放射性肺损伤，临床上除了糖皮质激素及抗生素等对症处理外，尚缺乏有效的治疗手段。近年来研究表明，骨髓间充质干细胞表现出强大的组织修复能力。
目的：观察骨髓间充质干细胞对大鼠放射性肺损伤的治疗作用，并初步探讨其作用机制。
方法：体外分离、培养并鉴定雄性SD大鼠骨髓间充质干细胞。应用直线加速器照射60只雌性SD大鼠胸部，建立大鼠放射性肺损伤模型，随机分为骨髓间充质干细胞治疗组和生理盐水对照组。骨髓间充质干细胞治疗组经大鼠尾静脉输注骨髓间充质干细胞2×109 L-1，生理盐水对照组注射等量生理盐水，分别于照射后1，2，4，6周时进行相关指标检测。
结果与结论：照射后第1，2，4周时，骨髓间充质干细胞治疗组大鼠肺系数明显低于生理盐水对照组(P<0.05)。镜下见骨髓间充质干细胞治疗组大鼠肺组织炎症渗出较少，肺泡、肺泡壁结构基本完整，纤维化程度等均明显轻于生理盐水对照组。照射2周时骨髓间充质干细胞治疗组血清转化生长因子β1、羟脯氨酸水平显著低于生理盐水对照组(P <0.05)。照射2，4，6周时骨髓间充质干细胞治疗组肺组织超氧化物歧化酶活力显著高于生理盐水对照组(P <0.05)，照射4，6周时骨髓间充质干细胞治疗组丙二醛含量显著低于生理盐水对照组(P <0.05)。照射6周时骨髓间充质干细胞治疗组的肺表面活性物质B表达显著高于生理盐水对照组。PCR方法检测肺、肝脏、胰腺、肾脏等器官组织均有不同程度的 Sry 基因表达，尤以肺显著。结果表明骨髓间充质干细胞可以迁移到放射性损伤的肺组织，促进放射性肺损伤组织的修复，其治疗机制可能与抑制炎症反应、抗氧化、减轻肺组织纤维化等有关。 -
骨髓间充质干细胞移植对结肠吻合口愈合的影响
背景：骨髓间充质干细胞具有很大的增殖能力、多向分化潜能、向损伤组织定位修复的功能、低免疫原性和免疫调节作用，其可以用来治疗传统治疗方案难以治愈的疾病，具有广阔临床应用价值，成为细胞移植治疗的新热点。
目的：观察局部注射的骨髓间充质干细胞在缺血性结肠吻合模型大鼠肠黏膜的定植情况及对结肠吻合口愈合的影响。
方法：将40只雌性SD大鼠随机分为4组：对照4 d组和对照7 d组，行左侧结肠缺血性吻合后肠黏膜下局部注射0.5 mL胎牛血清，骨髓间充质干细胞移植4 d组和骨髓间充质干细胞移植7 d组，行左侧结肠缺血性吻合后，取培养至第3代的骨髓间充质干细胞(0.5 mL，1×107个细胞)直接在肠黏膜下注射移植。分别测定各组大
结果与结论：骨髓间充质干细胞移植组吻合口爆破压、羟脯氨酸含量较对照组明显增高，组织病理学评分提示除上皮形成及炎症指标外，黏膜坏死、胶原蛋白沉积量、成纤维细胞活性及新生血管形成指标骨髓间充质干细胞移植组优于对照组。结果表明移植同种异体大鼠骨髓间充质干细胞可在受体缺血性结肠吻合模型肠道内定植，并可加速结肠吻合口的愈合，其发挥疗效主要是通过旁分泌的形式促进机体内源性修复，而骨髓间充质干细胞直接分化为肠黏膜上皮细胞作用较小。
鼠吻合口爆破压，取吻合口处肠管行羟脯氨酸含量测定，苏木精-伊红染色及Masson染色行组织病理学评分， Y 染色体原位杂交检测供鼠来源的细胞迁徙及定植情况。 -
自体外周血干细胞移植与髓芯减压治疗系统性红斑狼疮并股骨头缺血性坏死
背景：自体外周血干细胞移植联合髓芯减压与单纯髓芯减压治疗系统性红斑狼疮合并股骨头缺血坏死的疗效是否不同，相关报道较少。
目的：观察自体外周血干细胞移植联合髓芯减压治疗系统性红斑狼疮合并股骨头缺血性坏的临床疗效。
方法：选择2004年10月至2014年10月在福建医科大学附属龙岩第一医院住院的系统性红斑狼疮合并股骨头缺血性坏死患者，按治疗方法不同分为移植组(n=22)和对照组(n=26)，分别采用自体外周血干细胞移植联合髓芯减压治疗和单纯髓芯减压治疗。
结果与结论：与治疗前相比，移植组患者治疗后1周白细胞、红细胞沉降率、C-反应蛋白、补体 C3、补体C4水平明显上升，且治疗前后谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、血肌酐、尿酸、IgM、IgG、IgA、ds-DNA水平均在正常范围。与对照组相比，治疗组患者治疗后Harris评分(6，12，24个月)升高，目测类比评分(12，24个月)降低，且MRI T1信号区所占股骨头体积的百分比降低。提示自体外周血干细胞移植联合髓芯减压治疗系统性红斑狼疮合并早中期股骨头缺血性坏死疗效优于单纯髓芯减压，可显著减轻患者关节疼痛，改善股骨头血液供应，明显恢复关节功能，有效防止股骨头进一步塌陷，是安全有效的保头治疗方法。 -
骨髓间充质干细胞膜片复合自体髂骨移植修复牙槽嵴裂
背景：临床上使用自体髂骨移植方法修复牙槽嵴裂，常常不能获得稳定的治疗效果，移植骨吸收率因人而异，受到许多因素的影响。
目的：观察骨髓间充质干细胞膜片复合自体髂骨松质骨块移植修复牙槽嵴裂术后的骨吸收情况。
方法：制备实验犬双侧牙槽嵴裂模型，采用自体对照的办法，在实验犬上颌骨两侧的裂隙分别植入骨髓间充质干细胞膜片复合犬自体髂骨骨块(实验组)和单纯犬自体髂骨骨块(对照组)。通过颌骨CT及micro CT对植骨区的骨吸收率、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁分离度、骨密度进行比较。
结果与结论：术后3，6个月时实验组的骨吸收率明显低于对照组，差异有非常显著性意义(P<0.01)；术后6个月实验组骨体积分数、骨密度均高于对照组，差异有显著性意义(P <0.05)，实验组骨小梁分离度低于对照组，差异有显著性意义(P <0.05)，而骨小梁厚度两组比较差异无显著性意义(P >0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞膜片复合髂骨骨移植可减少植骨术后骨吸收率，同时可以促进新骨的生成。 -
亲缘异基因造血干细胞移植联合甲磺酸伊马替尼治疗Ph阳性白血病
背景：造血干细胞移植是可以治愈Ph+白血病有效方法，甲磺酸伊马替尼是一种高度特异的酪氨酸激酶抑制剂，能抑制BCR/ABL酪氨酸激酶活性，在Ph+白血病中的应用越来越多。
目的：探讨甲磺酸伊马替尼联合亲缘异基因造血干细胞移植治疗Ph+白血病的临床疗效。
方法：回顾性分析2011年1月至2012年10月采用亲缘异基因造血干细胞移植联合甲磺酸伊马替尼治疗12例Ph+白血病的疗效并文献复习。
结果与结论：12例患者移植后均获得造血重建，移植后中性粒细胞和血小板植活的中位时间分别为15 d和18 d；发生Ⅱ度急性移植物抗宿主病7例，Ⅲ度急性移植物抗宿主病1例，局限型慢性移植物抗宿主病7例，广泛型慢性移植物抗宿主病3例；无白血病存活率为67%，移植相关死亡率为25%。行HLA匹配亲缘造血干细胞移植者的总体存活率为75.0%。平均无病生存8.5个月(7-17个月)，BCR/ABL转阴时间2-5个月。亲缘异基因造血干细胞移植前、后联合甲磺酸伊马替尼治疗Ph+白血病，具有降低移植前白血病细胞负荷，抑制残留白血病细胞增殖，促进供者完全嵌合状态的转变，是一种安全有效的治疗方法。 -
向脑海马区移植骨髓间充质干细胞改善阿尔茨海默病大鼠记忆功能
背景：通过药物治疗虽然能在一定程度上减轻和延缓阿尔茨海默病进展，但是效果不明显，因此采用细胞替代治疗是目前治疗该疾病的一种新的尝试和探索。
目的：观察骨髓间充质干细胞移植对阿尔茨海默病大鼠记忆能力改善的影响。
方法：注射β淀粉样蛋白1-40制备阿尔茨海默病动物模型并于双侧海马区移植骨髓间充质干细胞。治疗4周后采用Morris水迷宫检测大鼠空间认知和记忆能力变化，采用BrdU和NF，GFAP的免疫荧光双标技术观察移植的细胞是否存活并分化，免疫印迹和免疫组化技术检测大脑皮质及海马区β淀粉样蛋白表达。
结果与结论：与单纯造模组比较，移植骨髓间充质干细胞治疗后大鼠逃避潜伏期明显缩短(P <0.01)，跨越平台次数明显均多(P <0.05)。免疫荧光双标显示，移植细胞在大鼠海马周围分化为NF或GFAP阳性的细胞。免疫组化和免疫印迹分析显示，经骨髓间充质干细胞移植治疗后，其脑内β淀粉样蛋白表达明显下降(P<0.05)。结果表明骨髓间充质干细胞移植后能在阿尔茨海默病大鼠脑内局部存活并分化，并且能够提高阿尔茨海默病大鼠学习记忆能力。 -
Ad-hBMP-2与Ad-hTGF-β1基因共转染骨髓间充质干细胞后的体外成骨诱导
背景：重组DNA技术的进展为骨组织工程研究的发展提供巨大动力，将其应用于组织工程骨构建可以显著提高骨修复的质量和效率。
目的：拟将Ad-hBMP-2联合Ad-hTGF-β1转染骨髓间充质干细胞体外成骨诱导，观察二者在成骨过程中的相互关系。
方法：以腺病毒AdMax为基因转移载体，将携带转化生长因子β1和骨形态发生蛋白2基因的高滴度腺病毒感染SD大鼠骨髓间充质干细胞，利用外源性基因编码的生长因子诱导其表达，通过RT-PCR、ELISA、MTT实验及碱性磷酸酶水平检测等方法鉴定。
结果与结论：腺病毒感染骨髓间充质干细胞后RT-PCR可检测出外源基因的表达，MTT实验和碱性磷酸酶活性检测双基因共转染的骨髓间充质干细胞增殖能力强，碱性磷酸酶活性高。结果表明联合应用Ad-hTGF-β1和Ad-hBMP-2转染可明显促进骨髓间充质干细胞的成骨化，效果优于单用一种生长因子。 -
许旺细胞培养液诱导NRG1蛋白转染骨髓基质干细胞向类神经元样细胞的转化
背景：国内外研究人员已经利用化学方法或单纯与许旺细胞共培养方法成功将骨髓基质干细胞诱导为许旺细胞样细胞，但仍存在一些弊端，前者对细胞有一定毒性，后者诱导速度慢，耗时较长。
目的：探讨大鼠的许旺细胞培养液诱导NRG1转染的骨髓基质干细胞分化成神经组织细胞的可行性。
方法：利用NRG1转染骨髓基质干细胞，待生长状态稳定后，将培养液更换为许旺细胞的培养液，置于37℃、体积分数为5%CO 2培养箱中培养。
结果与结论：经许旺细胞培养液诱导10 d后，光镜下可观察到NRG1转染的骨髓基质干细胞胞体开始回缩，呈梭形，出现许旺细胞样细胞，呈岛屿状紧密排列，免疫荧光染色鉴定诱导后细胞S-100、NSE和GFAP呈阳性表达，NSE表达阳性率为25.32%，GFAP表达阳性率为38.69%，S-100表达阳性率为35.99%，结果表明许旺细胞分泌的细胞因子和NRG1蛋白共作用可以诱导骨髓基质干细胞高效地向神经组织细胞分化，并表达许旺细胞、神经元和胶质细胞表面抗原。 -
重组9型腺相关病毒转染小鼠骨髓间充质干细胞
背景：重组9型腺相关病毒对心肌细胞具有良好的亲和力，是目前研究基因治疗心肌梗死的理想载体。目的：观察携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组9型腺相关病毒(rAAV9-eGFP)对小鼠骨髓间充质干细胞的转染效率。
方法：将携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组9型腺相关病毒以不同感染复数(1×105，1×106，1×107)转染体外培养的第4代小鼠骨髓间充质干细胞，并在转染后1-7 d连续用荧光倒置显微镜观察骨髓间充质干细胞中增强型绿色荧光蛋白阳性表达情况，寻找佳感染条件；采用流式细胞仪检测佳感染复数下携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组9型腺相关病毒对小鼠骨髓间充质干细胞的转染效率。
结果与结论：转染后第1天，感染复数为1×107组可见增强型绿色荧光蛋白开始表达，转染后第2天，感染复数为1×105、1×106组开始表达；各组增强型绿色荧光蛋白表达强度随感染复数值的增高而增强，同时增强型绿色荧光蛋白的表达强度随着时间延长而逐渐增强；转染后第5天达到高峰，此时感染复数为1×107组转染效率约8%，结果表明携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组9型腺相关病毒对小鼠骨髓间充质干细胞转染效率较低。 -
大鼠骨髓间充质干细胞分离与培养：第3代细胞增殖快纯度高
背景：进行组织工程研究的首要环节是培养出大量生物活性好、增殖速度快、细胞纯度高的种子细胞。目的：分析全骨髓贴壁法培养大鼠骨髓间充质干细胞的生物学特性。
方法：采用全骨髓贴壁法分离、培养大鼠骨髓间充质干细胞，绘制第3代细胞生长曲线，观察各代细胞形态学变化，流式细胞分析法测定第2代、第3代细胞表面标志物(CD29、CD90、CD34、CD45)的表达。
结果与结论：经全骨髓贴壁法培养3代以内骨髓间充质干细胞均具有典型成纤维样细胞形态而且贴壁生长；第2代骨髓间充质干细胞表型CD29、 CD90、CD34、CD45表达分别为91.5%，96.2%，1.3%，8.0%，第3代骨髓间充质干细胞分别为98.2%，98.1%，0.6%，2.0%；细胞生长曲线结果表明，以细胞浓度8×107 L-1接种，细胞增殖速度快，获得的细胞总数多。综合形态学及细胞鉴定结果，第3代大鼠骨髓间充质干细胞活性好、增殖速度快、细胞纯度高，适合作为组织工程研究的种子细胞。 -
不同浓度血管紧张素Ⅱ诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞的定向分化
背景：血管紧张素Ⅱ诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞定向分化的实验研究还较少，目前对于这种新的诱导剂在实验应用中没有一个统一的浓度标准，所以诱导结果有一定的差异。
目的：探讨血管紧张素Ⅱ诱导骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的佳浓度。
方法：采用密度梯度离心+贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，将第3代骨髓间充质干细胞分为0.05，0.1，0.2，0.5μmol/L血管紧张素Ⅱ组和对照组，血管紧张素Ⅱ各组接种后24 h加相应的诱导剂诱导24 h后，完全培养液连续培养4周，对照组只用完全培养液培养。采用MTT法检测各组第1，3，5，7天的吸光度值，计算各诱导组的细胞增殖抑制率。不同浓度血管紧张素Ⅱ诱导第1，4周时，免疫荧光细胞化学染色法检测心肌特异蛋白cTnT、β-MHC的表达，RT-PCR检测各组诱导培养4周时心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2-5的表达。
结果与结论：各诱导组间的细胞增殖曲线相似，第5天0.05μmol/L血管紧张素Ⅱ组细胞增殖抑制率开始出现负值，与其他组比较差异有显著性意义(P <0.05)。第5，7天0.1μmol/L血管紧张素Ⅱ组细胞增殖抑制率明显低于0.2，0.5μmol/L血管紧张素Ⅱ组(P <0.05)。经4种浓度血管紧张素Ⅱ诱导的骨髓间充质干细胞均表达心肌特异蛋白cTnT、β-MHC，对照组阴性。诱导培养1周，0.5μmol/L血管紧张素Ⅱ组cTnT、β-MHC蛋白阳性表达率明显高于0.05μmol/L组(P <0.05)。诱导培养4周，0.1μmol/L血管紧张素Ⅱ组的cTnT、β-MHC蛋白阳性表达率与0.2μmol/L血管紧张素Ⅱ组差异无显著性意义(P >0.05)。RT-PCR检测各组骨髓间充质干细胞经不同浓度血管紧张素Ⅱ诱导培养4周后心肌早期转录因子GATA-4、Nkx2-5均有表达，对照组阴性。结果表明经血管紧张素Ⅱ诱导的骨髓间充质干细胞表达心肌特异蛋白 cTnT、β-MHC 及心肌特异转录因子GATA-4、Nkx2-5，诱导分化适宜浓度为0.1μmol/L。 -
sox9和LMP1基因慢病毒载体共转染兔骨髓间充质干细胞后的表达
背景：与传统细胞因子诱导液诱导的方法相比，将基因通过慢病毒转染入宿主细胞，可以得到长期高效的持续表达，采取双/多基因共修饰治疗的策略，较采用单一的因子来诱导骨髓间充质干细胞向类髓核细胞方向转化可获得更好的效果。
目的：构建 sox9基因慢病毒载体以及 LMP1基因慢病毒载体，并共转染兔骨髓间充质干细胞，观察 SOX9和LMP1基因的表达情况。
方法：双酶切从 GeneArt 提供的含 sox9基因序列的质粒13ABIV6C_1366933并克隆到pLenti6.3_MCS_IRES2-EGFP载体，获得含sox9基因的质粒pLMIG-13GS0345-1。通过单链oligo设计及合成LMP1基因序列，并克隆到pLenti6.3_MCS_IRES2-DsRed-Monomer载体，获得含LMP1基因的质粒13GS0318-1。再通过293T细胞包装后获得绿色荧光蛋白标记的sox9基因慢病毒载体(Lenti-SOX9-GFP)，以及红色荧光蛋白的LMP1基因慢病毒载体(Lenti-LMP1-RFP)。将Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP共转染兔骨髓间充质干细胞，观察sox9基因及LMP1基因的表达情况。
结果与结论：测序结果显示质粒 pLMIG-13GS0345-1和13GS0318-1中的插入序列与基因库中sox9(NM_000346)及LMP1(AF345904.1)基因序列完全一致，成功构建Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP慢病毒载体。Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP共转染兔骨髓间充质干细胞后同一视野下可观察到绿色和红色荧光蛋白的共表达，RT-PCR与Western Blot检测结果证明Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP可成功高效共转染目的细胞并可在mRNA及蛋白水平同时表达SOX9及LMP1。结果说明实验成功构建了绿色荧光蛋白标记的携带 sox9基因的 Lenti-SOX9-GFP 慢病毒载体，以及红色荧光蛋白的携带 LMP1基因的Lenti-LMP1-RFP慢病毒载体，为sox9和LMP1基因共修饰组织工程髓核的研究提供前期实验基础。 -
Ficoll密度梯度离心法分离培养纯化猪的骨髓间充质干细胞
背景：研究报道显示猪骨髓间充质干细胞体外分离方法、效率、培养条件各不相同，并且尚无统一的鉴定标准。
目的：建立一种高效、经济的猪骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定方法。
方法：采集健康猪股骨骨髓，Ficol 密度梯度离心法分离单个核细胞，进行原代和传代培养，流式细胞仪检测细胞膜表面抗原表达情况，并观察细胞成骨、成脂及成软骨分化的能力。
结果与结论：分离培养的单个核细胞活力旺盛，体外生长良好，细胞呈梭形、纺锤形和小多角形，具有稳定的增殖分裂能力；细胞膜表面抗原CD29、CD44、CD90呈阳性表达，而CD14、CD34、CD45、CD166、HLA-DR呈阴性表达；在特定诱导条件下，该细胞可分化为成骨细胞、脂肪细胞和软骨细胞。说明采用Ficol密度梯度离心法成功分离培养出纯化的猪骨髓间充质干细胞，其生长状态良好，具有多项分化潜能，可作为组织工程的种子细胞。 -
化疗药物对骨髓间充质干细胞的损伤作用
背景：多种化疗药物在杀灭肿瘤细胞的同时会产生骨髓抑制的不良反应，不仅仅损伤造血细胞，也对骨髓间充质干细胞造成损伤，明确各种化疗药物对骨髓间充质干细胞的作用有利于合理选择、搭配化疗药物，实现高效、低毒的临床疗效。
目的：探讨不同化疗药物对骨髓间充质干细胞增殖、分化和支持造血能力的影响。
方法：获取正常成人骨髓间充质干细胞(n=8)，用不同剂量化疗药物(环磷酰胺、马利兰、阿糖胞苷、柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙、甲氨蝶呤、地塞米松)对骨髓间充质干细胞进行处理。检测化疗药物对骨髓间充质干细胞的增殖、凋亡作用及化疗药物撤除后骨髓间充质干细胞的恢复能力；体外诱导药物处理后骨髓间充质干细胞向脂肪细胞和骨细胞分化，通过油红O和Von Kossa染色鉴定；RT-PCR检测药物处理后骨髓间充质干细胞造血因子的表达；集落形成实验检测药物处理后骨髓间充质干细胞支持造血的功能。
结果与结论：两种剂量的长春新碱、柔红霉素、足叶乙甙、阿糖胞苷和地塞米松不同程度诱导骨髓间充质干细胞凋亡，并且抑制骨髓间充质干细胞的增殖，其中长春新碱和地塞米松的抑制作用可以逆转，而柔红霉素、足叶乙甙和阿糖胞苷对间充质干细胞的抑制作用持续存在。化疗药物处理后骨髓间充质干细胞仍具有多向分化能力，可以在体外分化为脂肪细胞和成骨细胞。化疗药物处理后骨髓间充质干细胞同正常细胞一样表达造血相关因子：干细胞因子、单核细胞集落刺激因子、白细胞介素6和粒细胞集落刺激因子。柔红霉素、长春新碱、足叶乙甙和阿糖胞苷处理后骨髓间充质干细胞支持造血能力明显下降。结果显示临床常用的一些化疗药物(长春新碱、柔红霉素、足叶乙甙、阿糖胞苷)可以影响骨髓间充质干细胞的增殖和支持造血能力，而不影响骨髓间充质干细胞表达造血相关因子和多向分化能力；部分化疗药物(环磷酰胺、甲氨蝶呤和马利兰)在使用浓度下不影响骨髓间充质干细胞的上述生物学特性。 -
超声微泡介导pEGFP-N1转染大鼠牙囊细胞：细胞生物学性质相对稳定
背景：利用超声波和微泡对比剂相互作用，产生空化效应和机械效应，破坏细胞膜的完整性，产生暂时性、可逆性的小孔，增加细胞膜的通透性，增强微泡载体对基因的转移，提高基因转染率。
目的：探讨在超声波辐照下微泡对比剂介导pEGFP-N1质粒转染SD大鼠乳鼠牙囊细胞的效率及安全性。
方法：体外原代培养新生SD大鼠牙囊细胞并传至第4代，在不同条件下采用pEGFP-N1质粒转染乳鼠牙囊细胞。以不同的超声辐照时间(15，30，45，60 s)和辐照强度(0.5，1 W/cm2)两两组合进行辐照，筛选较高转染效率的参数组合并应用于后续实验。实验分组为质粒组、微泡+质粒组、超声+质粒组、超声+微泡+质粒组和脂质体+质粒组。转染48 h后倒置荧光显微镜观察pEGFP表达，MTT法检测转染后的乳鼠牙囊细胞增殖抑制率。
结果与结论：超声强度为0.5 W/cm 2且辐照时间为30 s时转染率明显高于其他超声参数组合。该条件下超声微泡介导pEGFP-N1质粒对乳鼠牙囊细胞的转染率高于传统脂质体介导的转染率，且对细胞活力无明显影响。提示超声微泡能安全、高效介导pEGFP-N1质粒转染大鼠牙囊细胞，其细胞生物学性质相对稳定，可为牙周组织工程提供一种较理想的基因转染方法。 -
人胚胎脑组织蛋白提取物诱导人胎盘间充质干细胞向神经细胞的分化
背景：选择合适的诱导方法诱导人胎盘间充质干细胞分化为神经元样细胞是临床治疗神经损伤的关键。
目的：在人胎盘间充质干细胞中加入商品化的人胚胎脑组织蛋白提取物，观察其诱导分化为神经元样细胞的可行性。
方法：采用酶消化法分离培养人胎盘间充质干细胞，传至第3代，将人早期胚胎脑组织蛋白提取物加入诱导培养基培养6 d，加入浓度为20 nmol/L全反式维甲酸和500μg/L音猬因子培养3 d，换新的培养液，包含体积分数为10%胎牛血清，10μg/L脑源性神经营养因子，20μg/L神经胶质细胞源性神经营养因子，50μg/L胰岛素样生长因子Ⅱ型继续培养3 d。
结果与结论：胎盘组织经酶消化后获得贴壁细胞，传至第2代细胞形态为梭形，成漩涡样生长，传至第3代细胞形态较均一。诱导后细胞经免疫细胞化学法检测均表达神经元特异性烯醇化酶、巢蛋白、胶质纤维酸性蛋白、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43；ELISA法检测细胞培养上清脑源性神经营养因子、神经营养因子3、神经营养因子4为阳性表达；RT-PCR检测细胞微管相关蛋白、神经元特异性烯醇化酶、神经丝蛋白、神经生长相关蛋白43均为阳性表达。结果表明人胚胎脑组织蛋白提取物使人胎盘间充质干细胞诱导分化为神经元样细胞。 -
miR-21促进毛囊神经嵴干细胞分化为许旺细胞
背景：miRNAs是一类长18-25个碱基的非编码单链小RNA分子，可以与mRNA分子的3’UTR上序列互补结合而调节目标基因的蛋白表达水平。大量证据表明，miRNAs 可能起到调节许旺细胞分化、髓鞘形成以及周围神经生长和发育的作用。
目的：观察miR-21在毛囊神经嵴干细胞分化为许旺细胞过程中的表达。
方法：培养毛囊干细胞，通过流式分选法从人毛囊中分离神经嵴干细胞，并定向诱导为许旺细胞，在诱导过程中采用qRT-PCR检测miR-21的表达水平。将毛囊神经嵴干细胞分为对照组、agomir-21组、agomir-NC组、antagomir-21组和antagomir-NC组。对照组无干预，agomir-21组加入miR-21的激动剂，antagomir-21组加入miR-21的抑制剂，agomir-NC组和antagomir-NC组分别为agomir-21和antagomir-21的阴性对照组，加入无活性的microRNA类似物。后，通过数据库寻找miR-21可能的作用靶标。
结果与结论：在毛囊神经嵴干细胞诱导分化为许旺细胞过程中，miR-21表达水平逐渐升高。转染miR-21激动剂agomir-21后，干细胞分化为许旺细胞的能力增强，而转染miR-21抑制剂antagomir-21后可削弱干细胞的分化能力。通过数据库检索发现，SOX2可能是miR-21重要靶基因并参与其调节干细胞分化的作用。结果提示，毛囊神经嵴干细胞可作为许旺细胞的一个重要来源，miR-21可促进此分化过程。 -
脐带来源间充质干细胞治疗异基因造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病
背景：间充质干细胞具有免疫调节作用，在治疗急性移植物抗宿主病中已取得成功，但是在治疗慢性移植物抗宿主病中，特别是肺部慢性移植物抗宿主病的研究报道还很少。
目的：评价脐带间充质干细胞治疗造血干细胞移植后慢性移植物抗宿主病的效果。
方法：10例接受异基因干细胞移植治疗患者，明确诊断为慢性移植物抗宿主病，常规免疫抑制治疗无效，给予脐带间充质干细胞治疗，每个治疗剂量2×107个细胞，每次1或2个剂量，每2周治疗1次，根据疗效标准评价疗效。
结果与结论：4例肺部慢性移植物抗宿主病患者3例显效，2例皮肤型慢性移植物抗宿主病患者1例进步，1例显效；4例肝脏排斥患者2例显效，2例无效，治疗总有效率70%(7/10)。结果表明脐带间充质干细胞治疗难治性慢性移植物抗宿主病是一个有效的疗法。 -
右美托咪定对脐血间充质干细胞向神经细胞分化的影响
背景：大量研究证实右美托咪定在缺血再灌注损伤中具有显著的神经保护作用，但是其对神经系统的作用机制以及影响神经细胞功能的途径和方式鲜见报道。
目的：探讨右美托咪定对脐血间充质干细胞增殖及向神经细胞分化的影响。
方法：取第3代脐血间充质干细胞分为对照组、低浓度右美托咪定组(1μg/L)和高浓度右美托咪定组(10μg/L)， MTT法检测脐血间充质干细胞活性，Western blot法检测增殖期脐血间充质干细胞中ERK1/2磷酸化水平，免疫荧光法检测NeuN/DAPI、GFAP/DAPI和Nestin/DAPI双染细胞比例，观察细胞分化能力。
结果与结论：低浓度右美托咪定组干细胞活性及EKR1/2磷酸化水平较对照组明显增加(P <0.05)；高浓度右美托咪定组干细胞活性及EKR1/2磷酸化水平较对照组及低浓度右美托咪定组明显降低(P <0.05)；高、低浓度右美托咪定组中NeuN、GFAP阳性细胞数较对照组明显增加(P <0.05)，而Nestin阳性细胞则显著降低(P <0.05)。结果表明低浓度右美托咪定诱导脐血间充质干细胞增殖而高浓度右美托咪则抑制其增殖，其机制可能通过调节EKR1/2磷酸化而实现的；高、低浓度右美托咪定均诱导脐血间充质干细胞向神经细胞的分化。 -
人脐血单个核细胞移植治疗心肌梗死合并心力衰竭
背景：多项基础研究证实人脐血干细胞治疗急性心肌梗死合并心力衰竭安全有效，但目前尚未有该方法用于临床治疗的报道。
目的：观察人脐血单个核细胞移植治疗心肌梗死合并心力衰竭患者的远期疗效。方法：入选2009年1月至2011年6月辽宁中医药大学心血管内科收治的心肌梗死合并心力衰竭患者共25例，其中12例患者冠脉造影后通过微导管将脐血单个核细胞悬液注入到冠状动脉远端，13例患者进行常规治疗。所有患者均规范应用药物治疗，急性期均行冠脉造影及经皮冠状动脉介入治疗。治疗前，治疗后12，24个月观察两组患者心功能改善情况，评价指标为左室射血分数、左室收缩末期容积及左室舒张末期容积。
结果与结论：与治疗前比较，移植组治疗后12，24个月左室射血分数显著增高，左室收缩末期容积、左室舒张末期容积显著降低(P <0.05)。与治疗前比较，对照组治疗后12，24个月左室射血分数、左室收缩末期容积、左室舒张末期容积差异均无显著性意义(P >0.05)。与对照组相比较，移植组各个时间点左室舒张末容积、左室收缩末容积均显著降低，左室射血分数增高(P <0.05)。各随访期间均未发现相关不良事件发生。结果表明利用人脐血单个核细胞移植治疗心肌梗死合并心力衰竭，可显著改善患者心功能及左室重构情况。 -
脐血干细胞移植2型糖尿病下肢血管病变患者内皮依赖性血管舒张的变化
背景：研究表明，干细胞在一定诱导条件下可分化成为血管性内皮细胞，促进局部血管再生，生成新的毛细血管网，建立丰富的侧支循环，以达到改善和治疗下肢缺血的目的。
目的：观察脐血干细胞对2型糖尿病合并血管病变患者内皮依赖性血管舒张功能的影响。
方法：100例2型糖尿病下肢血管病变患者分为两组，试验组60例，对照组40例，试验组静脉输注脐血干细胞，对照组输注生理盐水，4周后比较两组基础指标及内皮依赖性血管舒张功能。
结果与结论：试验组治疗后空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、胆固醇、三酰甘油水平较治疗前均明显下降(P <0.05)，空腹胰岛素、餐后2 h胰岛素、血管内皮舒张功能较治疗前均明显升高(P <0.05)。对照组空腹血糖、餐后2 h血糖、糖化血红蛋白、胆固醇、三酰甘油、血管内皮舒张功能治疗前后差异无显著性意义(P >0.05)。结果表明脐血干细胞移植可以改善2型糖尿病下肢血管病变患者的内皮功能，促进侧支循环，避免糖尿病足的发生。
